Using intact Leishmania donovani promastigotes or purified L. donovani lipophosphoglycan (LPG) as immunogens, four LPG-specific monoclonal antibodies (mAbs) were derived. Two of these mAbs (CA7AE and BF9CC) specifically bound to an epitope consisting of the repeating phosphorylated Gal-(β1,4)-Man disaccharide portion of the LPG molecule. MAb CA7AE also bound antigens in L. donovani promastigoteconditioned culture medium; specifically, the secreted forms of LPG (phosphoglycan) and acid phosphatase, demonstrating that major secreted glycoconjugates of L. donovani share phosphorylated carbohydrate epitope(s). The two other mAbs (L157 and L98) bound to a parasite-derived protein component that was discovered to be tightly associated with the phosphocarbohydrate core region of the LPG molecule (LPG-associated protein; LPGAP). These are the first defined epitopes of LPG. Immunochemical assays were used to analyze the distribution of the LPG repeat and LPGAP epitopes over a wide sampling of Leishmania species and strains. MAb CA7AE recognized, to varying extents, epitopes from most of the Leishmania species examined; both as parasite surface-exposed, membrane-bound molecules and as antigens released into parasite-conditioned culture medium. The anti-LPGAP mAbs bound to all twenty Leishmania and Trypanosoma strains assayed but not to the surface of living parasites. None of the anti-LPG mAbs bound the amastigote form of the parasites. Experiments involving amastigote-to-promastigote in vitro transformation showed that the CA7AE epitope was expressed on the surface of transforming cells within 5 hours of culture at 26°C. The epitope was excreted into the culture supernatant within 15 hours. In addition, the mAb CA7AE “epitope was detected in 50% of sera tested from L. donovani infected (Kala-azar-positive) patients. Murine macrophages, infected with L. donovani promastigotes, were examined by immunofluorescence for the expression of LPG epitopes. The CA7AE epitope, detected as early as 5-10 minutes post infection (p.i.), was initially localized to the immediate area of internalization of the promastigote into the macrophage with even distribution over the entire macrophage surface by 25 minutes p.i. These epitopes remained on the macrophage surface until approximately 88 hours p.i Acetone permeabilization of the macrophages, prior to mAb probing, exposed LPG epitopes present within the macrophages to at least 160 hours p.i. Treatments which inhibited macrophage phagolysosomal degradation processes had no effect on epitope expression whereas reagents that affected macrophage membrane flow, and thus phagocytosis, drastically reduced or abolished expression. Purified LPG or de-lipidated LPG were also shown to bind to a variety of different cell types but in a temperature-independent manner. The early and continued expression of LPG epitopes on the macrophage surface suggests the possibility that LPG epitopes may be involved in the immune response which is directed to Leishmania-infected macrophages. Lymph node cells from mice primed with L. donovani LPG or LPGAP or with living, virulent L. donovani promastigotes were specifically stimulated to proliferate in vitro by the LPGAP moiety of the LPG molecule. The T cell response was antigen-specific, dose-dependent, and non-mitogenic. In addition, purified T lymphocytes primed with purified LPG or LPGAP were not stimulated by LPG or LPGAP in vitro unless promastigote-infected or LPG-pulsed or LPGAP-pulsed macrophages were added. Recognition of LPGAP epitopes was an MHC-restricted event. LPGAP epitopes specifically stimulated CD4+CD8-, IL-2 secreting T lymphocytes and that active antigen processing by macrophages was required for T cell stimulation. Both L. donovani LPG and L. tropica LPG which have antigenically different repeat epitopes but which share LPGAP epitopes stimulated lymphocyte proliferation independent of the LPG source used for priming. The T cell stimulation caused by LPGAP was not species-specific and since the responding T cells were of the Th 1 phenotype and recognized epitopes in amastigotes, the LPGAP epitopes are very likely of considerable importance in Leisimania-specific immunity. The data suggests that Leishmania LPGAP is a potential vaccine candidate for leishmaniasis. / Graduate

BARBOSA, Juliana Montezuma. Aglutinação de Leishmania amazonensis induzida por lectinas como método para purificação de promastigotas metacíclicas. 2012. 82 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-11-01T13:53:22Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_jmbarbosa.pdf: 1028724 bytes, checksum: 9a305a90c70d8b44a2af3f39bc4f24c6 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2012-11-06T13:53:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_jmbarbosa.pdf: 1028724 bytes, checksum: 9a305a90c70d8b44a2af3f39bc4f24c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-06T13:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_jmbarbosa.pdf: 1028724 bytes, checksum: 9a305a90c70d8b44a2af3f39bc4f24c6 (MD5) Previous issue date: 2012 / In experimental leishmaniasis infections, the use of metacyclic enriched inoculum is very important because it can simulate the natural infection and avoids the inflamatory response induced by the high density parasite inoculum. The surface of different evolutionary forms of Leishmania is coated by several glycoconjugates that can be recognized specifically and reversibly by lectins, proteins that have affinity with carbohydrates. This being the case, one could use lectins in order to purify metacyclic Leishmania. The aim of the current study was to evaluate whether lectins of different specificities would agglutinate L. amazonensis promastigotes of different evolutionary forms. A panel of 7 lectins were used. The binding specificity was analyzed by agglutination tests. DVL agglutinated 78% of L. amazonensis promastigotes from logarithmic phase culture and 52% from stationary phase, and therefore was selected for in vivo tests. Stationary phase promastigotes were incubated with DVL to evaluate if the agglutination was stage-specific and it was purified the agglutinated and non agglutinated fractions. Golden hamsters were infected with 106 promastigotes and grouped as: Agglutinated fraction (FA) (n=8); Non agglutinated fraction (FNA) (n=9); Control (CT) (n=8). The lesion size was measured over the course of 6 weeks. The parasite load of regional lymph node was quantified by limiting dilution and histopathological analysis of the lesions were performed on their paws. The lesions began at the third week in all groups. The lesion’s size was similar in all of them, except at the fourth and fifth weeks that FNA presented a transitory reduction (p<0,01). There were no significant differences concerning the parasite load and histopathologic changes among the groups. These data suggest that DVL did not select effectivelly infective forms of L. amazonensis, although it agglutinates promastigotes from the two culture growth phases. / Nas infecções experimentais, estudos utilizando inóculo purificado de Leishmania, com populações metacíclicas mais homogêneas, tem sido importantes por se aproximarem mais da condição de infecção natural e por eliminar uma possível resposta inflamatória induzida por restos parasitários. A superfície dos vários parasitos reveste-se por diversos glicoconjugados. Estes, por sua vez, podem ser reconhecidos especifica e reversivelmente por lectinas, proteínas que possuem afinidade a carboidratos. Por conta disso, tem-se tentado purificar promastigotas metacíclicas de culturas de Leishmania através de aglutinação mediada por lectinas. Com esse intuito, buscou-se avaliar se lectinas de diferentes especificidades seriam capazes de aglutinar promastigotas de L. amazonensis em diferentes estágios evolutivos. Para isso, foi utilizado um painel de 7 lectinas, e a especificidade de ligação aos carboidratos de superfície foi analisada através de ensaios de aglutinação, sendo a lectina de Dioclea violacea (DVL) selecionada para a realização dos ensaios in vivo. A DVL foi capaz de aglutinar L. amazonensis num percentual de 78% em cultura de fase logarítmica e 52% em fase estacionária. Em seguida, promastigotas de fase estacionária foram incubadas com DVL para avaliar se a aglutinação era estágio-especifica. Posteriormente, realizou-se infecção experimental em hamsters dourados (106 promastigotas/animal) para avaliar a infectividade das frações purificadas. Os animais foram divididos em 3 grupos: Fração aglutinada (FA) (n=8); Fração não aglutinada (FNA) (n=9); Controle positivo (CT) (n=8). A evolução da infecção foi acompanhada pelo tamanho da lesão, nas 6 semanas pós-infecção e pela quantificação da carga parasitária no linfonodo regional, por diluição limitante, bem como pela análise anatomopatológica das lesões. Em todos os grupos as lesões iniciaram na 3ª semana. O tamanho da lesão foi muito semelhante em todos os grupos, com exceção da 4ª e 5ª semanas, onde FNA apresentou uma variação transitória (p<0,01). Quanto à carga parasitária e às alterações histopatológicas não houve diferença entre os grupos avaliados. Esses dados sugerem que, embora a DVL seja capaz de se ligar especificamente aos glicoconjugados de superfície das promastigotas, induzindo importante poder de aglutinação nas duas fases de crescimento, ela não foi capaz de selecionar formas infectantes de L. amazonensis.

VIANA, Sayonara de Melo. Persistência da infecção por Leishmania braziliensis em camundongos BALB/c mediada por citocinas e quimiocinas. 2013. 63 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-09T11:31:11Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_smviana.pdf: 993841 bytes, checksum: 334429f92171ab2195fc74d23d724801 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-10T10:49:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_smviana.pdf: 993841 bytes, checksum: 334429f92171ab2195fc74d23d724801 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-10T10:49:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_smviana.pdf: 993841 bytes, checksum: 334429f92171ab2195fc74d23d724801 (MD5) Previous issue date: 2013 / Leishmania braziliensis is the main causative agent of American cutaneous leishmaniasis in Brazil. Altough L. braziliensis infection is self-limited it is distinguished by its latency and chronicity and can persist in mice and patients even after spontaneous clinical cure or treatment. Little is known about the persistence feature in L. braziliensis’ infection in humans and mice. Thereby, the aim of this study was to characterize the parasite’s persistence in the murine model. The parasite load, lesion thickness and pattern of cytokines and chemokines involved in persistence were evaluated through BALB/c mice infection with a L. braziliensis strain and observation for 90 days after infection. The results showed that parasites gradually disappear in the footpad, while the parasite load was sustained in the draining lymph node until 90 days post-infection (p.i). In the footpad, TNF-α expression was higher at 30 days p.i, followed by the decrease in parasite load and lesion thickness in the site. IL-10 and TGF-β were more expressed at first and decreased after 30 days of infection. A higher concentration of TNF-α and IFN-γ was observed at 15 and 30 days post-infection in the draining lymph node, while IL-4 was significantly increased at 15 days post-infection, and IL-10 and TGF-β were the predominant cytokines after 90 days of infection. CCL2, CCL3, CXCL1 e CXCL10 were expressed in the footpad, with a peak at 30 days p.i. and reduction at 60 days. In the draining lymph node, CCL2 and CXCL10 presented a low expression at first, increasing to a peak at 45 days p.i., while CCL3 was more expressed at 30 days p.i., the same period of the maximum lesion thickness. In our work, we observed that Leishmania persists in draining lymph nodes, while CCL2, CXCL10, IL-10 and TGF- are significantly expressed/produced. These results indicate that these citokynes act synergistically, which can determinate parasite persistence in the draining lymph node. / A infecção por Leishmania braziliensis se distingue por sua latência e cronicidade, podendo persistir em camundongos e nos pacientes após a cura clínica espontânea ou após o tratamento. A persistência da infecção por L. braziliensis ainda tem sido pouco estudada, seja em humanos, seja em modelos experimentais. O objetivo deste trabalho, portanto, foi caracterizar a persistência da infecção por L. braziliensis utilizando o modelo murino. Foram avaliados em diferentes tempos a espessura da lesão, a carga parasitária e o padrão de citocinas e quimiocinas envolvidas no processo. Para isso, camundongos BALB/c foram infectados com uma cepa de L. braziliensis e acompanhados por 90 dias. Os resultados mostraram que os parasitos desapareceram gradativamente da pata, enquanto nos linfonodos a carga parasitária se manteve, mesmo 90 dias pós-infecção (p.i.). Houve pouca expressão de IFN-γ nas patas durante os períodos analisados, enquanto a expressão de TNF-α apresentou-se alta aos 30 dias de infecção. IL-10 e TGF-β apresentaram maior expressão inicialmente e regrediram a partir de 30 dias p.i. Quanto às quimiocinas, observou-se expressão de CCL2, CCL3, CXCL1 e CXCL10 nas patas; aos 30 dias todas as quimiocinas apresentaram máxima expressão, e diminuíram no 60o dia p.i. Através de detecção por ELISA no linfonodo de drenagem, observou-se um pico de concentração de TNF-α aos 15 dias e de IFN-γ aos 30 dias pós-infecção, o que precedeu a redução na espessura da lesão e diminuição da carga parasitária na pata. IL-4 foi predominante aos 15 dias p.i., tendo sua concentração muito diminuída aos 30 dias; a partir desse período a citocina foi pouco detectada. Já a concentração de IL-10 e TGF-β manteve-se alta e estável, a partir dos 30 dias p.i. Nos linfonodos, a expressão de CCL2 e CXCL10 aumentou gradativamente, atingindo pico aos 45 dias p.i., enquanto a expressão de CCL3 apresentou pico aos 30 dias p.i., regredindo depois. Em conclusão, os parasitos persistem no linfonodo de drenagem em períodos crônicos de infecção, quando CCL2, CXCL10, IL-10 e TGF- continuam sendo expressos/produzidos em quantidade. O quadro observado sugere um equilíbrio entre essas citocinas, o que pode ser determinante para a persistência do parasito no linfonodo.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000025.pdf: 1746054 bytes, checksum: ff11c2930e3432607f90b86478febbfb (MD5) Previous issue date: 2007 / As leishmanioses são doenças antigas prevalentes em vários países, inclusive no Brasil. Dentre estas se destaca a leishmaniose visceral (LV), por se tratar da forma com maior potencial de letalidade. Visando facilitar o controle e o diagnóstico da LV, inúmeros antígenos isolados de diferentes espécies de Leishmania são estudados. As proteínas de choque térmico (HSPs), particularmente as de 70 kDa (HSPs70) e suas homólogas mitocondriais (HSP70mts), são abundantes proteínas intracelulares com homólogos presentes em procariotos e eucariotos. A síntese das HSPs, bem como das HSP70mts, está aumentada em situações de estresse, como quando as Leishmania spp. estão no interior do hospedeiro vertebrado, tornando as HSP70mts proeminentes indutores de resposta imunológica. A triagem em uma biblioteca de DNA complementar (cDNA) de Leishmania (Leishmania) chagasi, identificou dois clones, denominados de Lc2.1 e Lc2.2, cujos cDNAs são semelhantes aos genes hsp70mts já descritos em L. (L.) major e Trypanosoma cruzi, mas que codificam HSP70mts em L. (L.) chagasi. No presente trabalho se analisou a organização cromossômica dos genes hsp70mts em L. (L.) infantum/L. (L.) chagasi e L. (L.) major. Verificou-se também a existência de homólogos em diferentes protozoários da família Trypanosomatidae. Em espécies do gênero Leishmnaia, identificaram-se vários genes semelhantes ao clone Lc2.2, enquanto se encontrou apenas um gene semelhante ao clone Lc2.1. Não se encontrou gene semelhante ao clone Lc2.1 no gênero Trypanosoma, o que pode indicar uma evolução recente deste tipo de proteína em Leishmania spp. Um fragmento do clone Lc2.2, denominado FP2, foi subclonado, e a proteína codificada foi produzida e purificada. Purificaram-se anticorpos anti-proteína FP2, e se analisou a expressão das HSP70mts nativas em extratos de espécies de Leishmania, de Trypanosoma e em formas representativas do ciclo de vida de L. (L.) amazonensis e L. (L.) chagasi. Apenas na espécie L. (L.) amazonensis observaram-se duas bandas, sendo a menor delas mais expressa nas formas amastigotas. Por fim, examinou-se a distribuição das HSP70mts nativas em células de L. (L.) chagasi e se ratificou a distribuição ao longo de toda a mitocôndria

Made available in DSpace on 2012-05-07T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000004.pdf: 2428917 bytes, checksum: 67c2e37d0c711d05795c8b9532bbba9f (MD5) Previous issue date: 2006 / [...] Nesse trabalho analisamos características imunofenotípicas de leucócitos do sangue periférico de indivíduos portadores de LV clássica, indivíduos portadores de LV assintomática e indivíduos curados da LV, com ênfase em células envolvidas na resposta imune inata e adaptativa. [...] mecanismos imunológicos que acompanham a infecção humana por Leishmania e a cura após tratamento etiológico são constituídos de eventos complexos, multifatoriais que envolvem o estabelecimento concomitante de ativação e imunorregulação do compartimento da imunidade celular inata bem como aspectos fenotípicos sugestivos da ativação e co-estimulação paralela da imunidade adaptativa celular e humoral. Esse perfil complexo e, a princípio controverso, de alterações fenotípicas pode ser parcialmente esclarecido, quando consideramos a importância da análise das diversas formas clínicas da LV e o impacto da terapêutica específica. Nesse contexto, observamos um predomínio de alterações fenotípicas associadas a mecanismos de ativação e co-estimulação celular, tanto na imunidade inata quanto na imunidade adaptativa, favorecendo o estabelecimento e manutenção de doença ativa em indivíduos portadores de LV clássica. Destaca-se nestes indivíduos o papel de linfócitos T CD8 citotóxicos na manutenção e progressão da infecção, associado à presença de linfócitos B. [...], observamos que a terapêutica etiológica da LV, favorece à restauração, para níveis semelhantes aos observados em indivíduos não infectados, do número de células ativadas e expressando moléculas coestimuladoras no âmbito da imunidade inata e adaptativa, associada à presença de mecanismos imunorreguladores efetivos. Já na infecção assintomática, observamos a presença de um perfil fenotípico preservado. No compartimento da imunidade inata, observou-se um padrão fenotípico semelhante ao observado em indíviduos não infectados e uma diminuição no número de monócitos pró-inflamatórios. No âmbito da resposta imune adaptativa, observou-se a preservação de sinais fenotípicos de ativação celular em linfócitos T em associação à redução na participação de linfócitos B, compatível com a hipotese de ausência de manifestação sistêmica na infecção assintomática por L. (L.) chagasi. Em conjunto, nossos resultados demonstram a importância do estudo de aspectos imunológicos envolvidos às diversas formas clínicas da LV para melhor caracterização de eventos da resposta imune associados à progressão e à resistência da doença

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-16T21:03:45Z No. of bitstreams: 1 Ebenézer de Mello Cruz Inibição da arginase de Leishmania 2009.pdf: 2063950 bytes, checksum: 15d7234f96fe97bc8cfe6618e9985787 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-16T21:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ebenézer de Mello Cruz Inibição da arginase de Leishmania 2009.pdf: 2063950 bytes, checksum: 15d7234f96fe97bc8cfe6618e9985787 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose atinge cerca de 12 milhões de pessoas no mundo com aproximadamente 60 mil mortes por ano. Os fármacos utilizados são ineficazes e apresentam graves efeitos colaterais, tornado necessária a busca por novos fármacos. A busca por princípios bioativos torna-se mais eficaz quando direcionada pelo fracionamento guiado por bioensaios específicos. Um alvo promissor para busca por novos fármacos é a enzima arginase, pois a Leishmania deficiente em arginase é incapaz de produzir poliaminas, que são essenciais para a proliferação, diferenciação e síntese de macromoléculas, sendo assim o alvo selecionado para direcionar o fracionamento do extrato etanólico de Cecropia pachystachya, visto que já foi relatada a inibição da arginase de Leishmania (L.) amazonensis por extratos desta espécie vegetal. Neste trabalho foi demonstrado que o extrato acetato de etila apresentou uma forte inibição da arginase de L. (L.) amazonensis, uma leve inibição da arginase de Rattus norvegicus e não apresentou toxicidade em esplenócitos. Com a análise ultraestrutural foi possível inferir que a inibição da arginase poderia estar provocando estresse oxidativo, visível com a formação de concreção eletrondensa na matriz mitocondrial e desorganização do k- DNA, possivelmente devido à inibição da arginase e conseqüente diminuição da biossíntese de poliaminas e tripanotiona. Em análise computacional, as prováveis substâncias presentes no extrato acetato de etila (catequina, ácido clorogênico, epicatequina, isoorientina, isoquercetrina, isovitexina, orientina e procianidina B2) interagem com os aminoácidos ao redor do sítio ativo da arginase de L. (L.) amazonensis impedindo a entrada do substrato ou a saída dos produtos resultantes da reação o que acarretaria diminuição na velocidade máxima da reação. As frações da CLC03 parecem interferir em um outro mecanismo que promova a morte do parasito além da inibição da arginase. Após os fracionamentos realizados, as amostras analisadas ainda se mostravam como misturas quando analisadas por CLAE e RMN de 1H. A diminuição do crescimento das formas promastigotas de L. (L.) amazonensis pode também promover a diminuição da infecção em macrófagos, mediado pela produção de NO. / Leishmaniasis affects approximately 12 million people worldwide with approximately 60,000 deaths per year. The drugs used are ineffective and have severe side effects, creating to need of the search for new drugs. The search for bioactive principles becomes more effective when directed by fractionation guided by specific bioassays. A promising target to search for new drugs is the enzyme arginase, because a arginase deficient Leishmania is unable to produce polyamines, which are essential for the proliferation, differentiation and synthesis of macromolecules, thus becoming the target used to direct fractionation of the extract of Cecropia pachyatachya, as it has been reported on the inhibition of arginase L. (L.) amazonensis. The ethyl acetate extract showed a strong inhibition of arginase L. (L.) amazonensis, a low inhibition of arginase Rattus novergicus and didn’t show toxicity to splenocytes. By ultrastructural analysis was possible to infer that the inhibition of arginase could be causing an oxidative stress, visible with the formation of electrondense deposits in the mitochondrial matrix and disorganization of k-DNA, possibly due to inhibition of arginase and consequent decrease of polyamines and trypanothione biosynthesis. In computer analysis, the possible compounds present in the ethyl acetate extract (catechin, chlorogenic acid, epicatechin, isoorientin, isoquercetrin, isovitexin, orientin and procyanidin B2) interact with the amino acids surrounding the active site of L. (L.) amazonensis arginase preventing the entry of the substrate or the release of the reaction products which would result in a decrease in of velocity reaction. The fractions of CLC03 seem to interfere with another mechanism that promotes the death of the parasite besides the arginase inhibition. After the fractionations performed, the samples were still mixtures when as determined by HPLC and 1H NMR. The reduced growth of promastigotes of L. (L.) amazonensis may be associated to the reduction of infection in macrophages, mediated by NO production.

Made available in DSpace on 2016-04-15T13:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cristian_souza_ioc_dout_2015.pdf: 3397984 bytes, checksum: 18ee9469d3c1b75bff5879e83a9dfdc1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O presente trabalho se caracterizou como estudo descritivo comparando duas áreas: uma área silvestre onde se encontra o Parque Estadual do Rio Doce (PERD) e outra área urbana, situadas no município de Timóteo-MG. Objetivando estudar o ciclo de transmissão dos agentes das leishmanioses nas duas áreas, verificando possíveis alterações no seu padrão de transmissão. Foram realizadas coletas de flebotomíneos com armadilhas luminosas HP, coleta de amostras biológicas de animais silvestres, sinantrópicos e cães, o período de coletas foi entre setembro de 2012 a fevereiro de 2014. Foram realizados estudos de infecção natural por Leishmania spp., utilizando o gene ITS1, em todas as amostras coletas. E por fim um estudo de fonte alimentar em fêmeas alimentadas naturalmente. As análises foram realizadas com técnicas moleculares (PCR/Sequenciamento). Ficou claro que no município de Timóteo há pelo menos três espécies de Leishmania: Leishmania braziliensis, Leishmania amazonensis e Leishmania infantum. Dando evidência a grande presença de Leishmania braziliensis, identificada em amostras biológica de flebotomíneos, roedores, marsupiais e cães. A participação de flebotomíneos e animais, possíveis reservatório, no ciclo da Leishmania spp. no município de Timóteo ficou mais evidente após as observações da presença infecção natural por Leishmania braziliensis. Nyssomyia whitmani foi a espécie mais capturada na área urbana, enquanto no PERD foi Pressatia choti ambas as espécies foram identificadas com infecção natural por Leishmania braziliensis. A presença de Rattus rattus e Mus musculus, com infecção natural, sugerem que sejam possíveis reservatórios de Leishmania spp. no município Preocupante também e a possibilidade da participação de cães, uma vez que tiveram amostras de sangue com infecção natural. E por fim, e não menos importante foi o registro da participação de Gallus gallus (galinha) e Sus scrofa (porco) enquanto fonte alimentar de flebotomíneos, o que ajuda a manter o ciclo de vida dos vetores na área urbana do município / This work was characterized as a descriptive study comparing two areas: a wild area where is located the Parque Estadual do Rio Doce (PERD) and other urban area, located in municipality of Timóteo-MG, in order to study the transmission\2019 agents of cycle of leishmaniasis in both areas suggested checking possible changes in their transmission\2019s pattern. Sandfly captures were conducted with HP light traps, collecting biologies samples of wild animals, synanthropic and dogs, the period of collections were between September 2012 to February 2014. A study of natural infection of Leishmania spp were performed using the ITS1 gene in all collected samples. And a food meals for the study in females fed naturally. Analyses were performed using molecular techniques (PCR/ Sequencing). It was clear that in Timóteo\2019s municipality exist at least three species of Leishmania: Leishmania braziliensis, Leishmania amazonensis and Leishmania infantum. Giving evidence of the strong presence of Leishmania braziliensis, identified in biological samples of sandflies, rodents, marsupials and dogs. Participation of sand flies and animals, possible reservoirs of the Leishmania spp cycle. In Timóteo became more evident after the observations with the presence of Leishmania braziliensis natural infection. Nyssomyia whitmani was the most captured species in urban areas, while in the PERD was Pressatia choti, both species were identified with Leishmania braziliensis natural infection

RODRIGUES, Naya Lúcia de Castro. Efeito imunomodulador de CXCL10 na infecção de macrófagos murinos por cepa de Leishmania braziliensis isolada de paciente refratário ao tratamento com antimônio. 2015. 70 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-06-09T13:06:29Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_nlcrodrigues.pdf: 1639310 bytes, checksum: 2551a905c5b85238b0070f3202c8c5ab (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-06-09T13:11:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_nlcrodrigues.pdf: 1639310 bytes, checksum: 2551a905c5b85238b0070f3202c8c5ab (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-09T13:11:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_nlcrodrigues.pdf: 1639310 bytes, checksum: 2551a905c5b85238b0070f3202c8c5ab (MD5) Previous issue date: 2015 / Chemotherapy available for leishmaniasis is effective in many cases, however is still not satisfactory, presenting several inconveniences, one of them, resistance to antimony, which is a major current problems. Few studies using treatment with recombinant chemokines for leishmaniasis have been reported. The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory effect in vitro of CXCL10 and its association with Glucantime for the infection of macrophages by Leishmania braziliensis strain refractory to treatment with antimony. For this, murine macrophages were infected with L. braziliensis and treated or not with CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL), and CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. After 24 and 48h of infection were evaluated: parasitic load (macrophages infected count on coverslips stained), nitric oxide concentration (NO) and the pattern of the cytokines TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10, and TGF-β in the culture supernatant. The results showed that the treatment with CXCL10 and CXCL10+Glucantime combination resulted in a significant reduction of the parasitic load, ranging from 70.5% to 95% and 92.4% and 95.0%, respectively, compared with the control untreated, while treatment with Glucantime decreased infection of macrophages to 74.0%. The reduction of the parasitic load was correlated with the increase of NO in all concentrations of CXCL10 (p <0.001). However, it was not observed the same dynamic when it was used to CXCL10+Glucantime association. TNF-α and IL-12 levels increased as a function of the concentration of CXCL10 in the first 24h, however, was inhibited when the infected macrophages were treated with Glucantime (p <0.05). The concentration of TNF-α was lower in cells treated with CXCL10+Glucantime than in those treated only with CXCL10 in both time periods. To the association CXCL10+Glucantime the IL-12 only induced a significant production within 24h when CXCL10 was used at a concentration of 100ng/ml (p <0.01). CXCL10 and association CXCL10+Glucantime treated cells showed a decrease of IL-4 concentration decreasing as the chemokine concentrations were higher (p <0.01) while treatment with Glucantime had a high production of this cytokine. In both times evaluated, treatment with CXCL10 induced IL-10 production at concentrations of 50ng/ml, and 100ng/ml, induced a 3-fold more IL-10 (p <0.001) when compared with antimony or with association CXCL10+Glucantime. TGF-β showed different behavior in the two time periods, an increase in the early hours, and fall in the past 48h. Glucantime induced TGF-β concentration higher than that induced by CXCL10. The association CXCL10+Glucantime showed increased production of TGF-β inverse of the concentration of CXCL10 used. In conclusion, in vitro treatment with CXCL10 induced a Th1 response profile (increase of TNF-α, and IL-12), controlling the intracellular parasitemia and modulation of the inflammatory response mediated by IL-10, in macrophages infected with L. braziliensis refractory to antimony. The Glucantime+CXCL10 association, although it has reduced parasitic load, not inducing a significant increase in nitric oxide, and showing a induction of TNF-α, IL-12 and reduction IL-4,. / A quimioterapia disponível para as leishmanioses é eficaz em muitos casos, contudo ainda não é satisfatória, apresentando várias inconveniências, uma delas, a resistência aos antimoniais, que é um dos grandes problemas atuais. Poucos estudos utilizando tratamento com quimiocinas recombinantes para as leishmanioses têm sido relatados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador in vitro de CXCL10 e sua associação com Glucantime na infecção de macrófagos por cepa de Leishmania braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. Para isso, macrófagos murinos foram infectados com L. braziliensis e tratados ou não com CXCL10 (25, 50 e 100ng/mL), Glucantime (32mg/mL) e CXCL10+Glucantime [(25, 50 e 100ng/mL) + (32mg/mL)]. Após 24 e 48h de infecção, avaliou-se: carga parasitária (contagem de macrófagos infectados em lamínulas coradas), concentração de óxido nítrico (NO) e o padrão da citocinas TNF-α, IL-12, IL-4, IL-10 e TGF-β nos sobrenadantes das culturas. Os resultados mostraram que os tratamentos com CXCL10 e a associação CXCL10+Glucantime resultaram em uma significante redução da carga parasitária, variando entre 70,5% a 95% e 92,4% a 95,0%, respectivamente, quando comparado com o controle não tratado, enquanto o tratamento com Glucantime apresentou redução da infecção dos macrófagos de 74,0%. A redução da carga parasitária foi correlacionada com o aumento de NO em todas as concentrações de CXCL10 (p< 0,001). No entanto, não foi observada a mesma dinâmica quando utilizado a associação CXCL10+Glucantime. Os níveis de TNF-α e IL-12 aumentaram em função da concentração de CXCL10 nas primeiras 24h, no entanto, foi inibida quando os macrófagos parasitados foram tratados com Glucantime (p<0,05). A concentração de TNF-α foi menor nas células tratadas com CXCL10 + Glucantime do que naquelas tratadas somente com CXCL10 em ambos os tempos avaliados. Para IL-12 a assosciação CXCL10+Glucantime só induziu uma produção significante nas primeiras 24 h quando CXCL10 foi utilizado na concentração de 100ng/ml (p<0,01). As células tratadas com CXCL10 e associação CXCL10+Glucantime apresentaram uma redução da concentração de IL-4, diminuindo à medida que as concentrações da quimiocina foram maiores (p<0,01), enquanto o tratamento com Glucantime apresentou uma elevada produção desta citocina. Em ambos os tempos avaliados, o tratamento com CXCL10 induziu a produção de IL-10 nas concentrações de 50ng/mL e 100ng/mL, uma indução 3 vezes mais de IL-10 (p<0,001), quando comparado ao antimônio ou com a associação CXCL10+Glucantime. TGF-β mostrou comportamento diferente nos dois tempos avaliados, com aumento nas primeiras horas e queda nas últimas 48h. Glucantime induziu concentração de TGF-β superior àquela induzida por CXCL10. A associação CXCL10+ Glucantime apresentou produção elevada de TGF-β inversa à concentração de CXCL10 utilizada. Em conclusão, o tratamento in vitro com CXCL10 induziu um perfil de resposta Th1 (aumento de TNF-α e IL-12), com controle da parasitemia intracelular, e modulação da resposta inflamatória mediada por IL-10, em macrófagos infectados por L. braziliensis refratária ao antimônio. A associação Glucantime+CXCL10, embora tenha reduzido carga parasitária, não induzindo aumento significante de óxido nítrico, mostrando uma indução de TNF-α, IL-12 e reduzindo IL-4.

VASCONCELOS, Camila Oliveira de. Cinética e recrutamento celular induzidos por Leishmania chagasi no modelo da bolsa de ar subcutânea em hamsters. 2009. 68 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-20T15:57:48Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_covasconcelos.pdf: 704165 bytes, checksum: 0a4441060ac500e3a40362580a6fab37 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-01T16:04:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_covasconcelos.pdf: 704165 bytes, checksum: 0a4441060ac500e3a40362580a6fab37 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-01T16:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_covasconcelos.pdf: 704165 bytes, checksum: 0a4441060ac500e3a40362580a6fab37 (MD5) Previous issue date: 2009 / Quando fazem o repasto sanguíneo, fêmeas do flebotomíneo inoculam promastigotas de Leishmania junto com a saliva no lago sanguíneo formado pelo traumatismo da probóscida do inseto, na derme do hospedeiro mamífero. O sistema imunológico do hospedeiro, na tentativa de controlar a infecção, recruta leucócitos para o sítio inflamatório da inoculação. Neste trabalho foi avaliada a cinética e o recrutamento celular induzidos por Leishmania chagasi, principal agente etiológico da leishmaniose visceral nas Américas, e sua associação com a saliva do vetor específico, Lutzomyia longipalpis, além do sangue do próprio hospedeiro, com o objetivo de entender melhor os eventos iniciais da infecção por Leishmania. Foi utilizado o modelo da bolsa de ar subcutânea em hamsters para analisar o recrutamento e o fenótipo das células que migraram para o sítio da inflamação induzida por L. chagasi, associada ou não a sangue do hospedeiro e a saliva do vetor. Foram estudados também os tipos celulares e as alterações histopatológicas observados no tecido da bolsa de ar. Os dados mostraram que L. chagasi, quando inoculada sozinha, foi capaz de recrutar uma população mista de células, entretanto, grande parte destas células não migrou para o exsudato inflamatório, permanecendo no tecido da bolsa de ar. Por outro lado, a associação de L. chagasi com o sangue do hospedeiro e a saliva do vetor resultou na exacerbação da resposta inflamatória, influenciando também o perfil celular recrutado para o sítio de inoculação, indicando que o sangue e a saliva apresentam um efeito sinérgico com a Leishmania na modulação da resposta inflamatória inicial. Os dados sugerem ainda que Leishmania e os componentes sanguíneos do hospedeiro por si só têm potencial para induzir um processo inflamatório que pode favorecer ou não o estabelecimento do parasito, e que a saliva é um fator a mais que, quando acrescentado ao microambiente, pode exacerbar esta resposta inflamatória. Em suma, a associação de L. chagasi com o sangue do hospedeiro e a saliva do vetor induz uma importante resposta inflamatória, caracterizada pela presença de neutrófilos, eosinófilos, macrófagos e linfócitos, sendo os neutrófilos e macrófagos os tipos celulares predominantes. O efeito sinérgico do sangue e da saliva provavelmente facilita a entrada dos parasitos nas células recrutadas e a consequente progressão da doença.

LIMA, Lia Fernandes Alves de. A Influência do gênero e da infecção materna na resposta à Leishmania braziliensis em filhotes de hamster. 2008. 52 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T15:47:36Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_lfalima.pdf: 507257 bytes, checksum: 3db7cc6756cd0c2b03e85bf9b92ab83b (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:14:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_lfalima.pdf: 507257 bytes, checksum: 3db7cc6756cd0c2b03e85bf9b92ab83b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:14:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_lfalima.pdf: 507257 bytes, checksum: 3db7cc6756cd0c2b03e85bf9b92ab83b (MD5) Previous issue date: 2008 / Immunoglobulins, soluble parasite circulating antigens, immune cells, citokines and other cell-related products can be transferred from infected mothers to their young, leading to suppression or stimulation of the immune response to a homologous antigen. Several studies demonstrated an increased susceptibility to leishmania infection in males, however, a relation between gender and susceptibility on the subgenus Viannia is rarely described. The influence of gender and maternal infection to the Leishmania braziliensis response in hamster offspring were evaluated. Thirty-nine hamster offspring of infected mothers and non-infected mothers from both genders, with 04 weeks-old, similar weights and infected with the Leishmania braziliensis strain MHOM/BR/94/H-3227 were analyzed. Studies on footpad lesion size, parasite load on footpad and draining lymph nodes, ELISA and histopathology were conducted. After analyzing the data, we concluded that the male offspring had higher susceptibility to infection by L. braziliensis, regardless if they were born from an infected mother or a non-infected mother, and had presented a more indolent pattern of response than the females. The maternal infection by L. braziliensis in hamsters did not influence the course of the disease in the infection rate of the offspring. The more intense inflammatory response in the offspring born from an infected mother can possibly be correlated to a greater induction of inflammatory molecules, cytokines and chemokines, although this has not been evaluated in this study. / A passagem de imunoglobulinas, antígenos parasitários solúveis circulantes, células imunes, citocinas ou outros fatores solúveis através da placenta, podem induzir no feto uma resposta imunológica frente a uma infecção homóloga à materna, resultando em supressão ou em estimulação da resposta imune. Estudos demonstram uma maior susceptibilidade dos machos à infecção por leishmania, porém a relação entre o sexo e a susceptibilidade à leishmaniose no subgênero Viannia raramente é descrita. Foi avaliada a influência do gênero e da infecção materna na resposta à Leishmania braziliensis em filhotes de hamster. Foram utilizados trinta e nove filhotes de hamster de mães infectadas e de mães não-infectadas, de ambos os sexos, com 04 semanas de vida e pesos aproximados, infectados com L. braziliensis (MHOM/BR/94/H-3227). Foram estudados o tamanho da lesão da pata, a carga parasitária em patas e linfonodos de drenagem, ELISA e histopatológico. Após a análise dos dados, concluímos que os filhotes machos apresentaram maior susceptibilidade à infecção por L. braziliensis, independente se nasceram de mãe infectada ou de mãe não infectada, apresentando um padrão de resposta mais indolente do que as fêmeas. A infecção materna por L. braziliensis em hamsters não influenciou o curso da doença na infecção homóloga dos filhotes. A resposta inflamatória mais intensa nos filhotes nascidos de mãe infectada possivelmente pode ser correlacionada a uma maior indução de moléculas inflamatórias, citocinas e quimiocinas, embora isso não tenha sido avaliado no presente trabalho.