Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-10T16:20:01Z No. of bitstreams: 1 2016_LubhandwaSebastianBiswaro.pdf: 2616385 bytes, checksum: 2795a754581f3627c2de38ff8b29cb3c (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-11T11:21:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LubhandwaSebastianBiswaro.pdf: 2616385 bytes, checksum: 2795a754581f3627c2de38ff8b29cb3c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-11T11:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LubhandwaSebastianBiswaro.pdf: 2616385 bytes, checksum: 2795a754581f3627c2de38ff8b29cb3c (MD5) / A leishmaniose é uma doença negligenciada causada por um protozoário leishmania e é transmitida por flebotomíneos. Está doença acomete mais de 350 milhões de pessoas em todo o mundo. Os medicamentos de primeira linha utilizados para tratar esta doença foram os antimoniais, os quais possuem resistência e apresentam efeitos colaterais severos. O Itraconazol é um antimicótico que também é usado no tratamento de leishmaniose. No presente estudo, o Itraconazol foi encapsulado em nanopartículas utilizando o co-polímero láctico co-ácido glicólico (PLGA) e recobertas com manose. Estas nanopartículas foram caracterizadas e testadas em ensaios de citotoxicidade e atividade anti-leishmania. As nanopartículas de PLGA vazias apresentaram um diâmetro hidrodinâmico médio de 220 nm ± 27 e um potencial zeta de -1,1 mV ± 0,7, enquanto nanopartículas de PLGA com itraconazol recobertas com manose (PLGA ITZ manose) apresentaram 263 nm ± 12,6 e -1,9 mV ± 0,5. Por meio do ensaio de MTT, a citotoxicidade das nanopartículas vazias foi de 13,7% e 12,6% para as células THP-1 e J774, respectivamente, enquanto PLGA ITZ manose foram de 1% e 20,7% para as células THP-1 e J774, respectivamente. A análise da atividade anti-leishmaniose foi avaliada pela redução do número de células que continham mais de 20 amastigotas intracelulares e observou-se que PLGA ITZ manose a 0,1 mM e de PLGA ITZ a 0,2 mM reduziram o percentual de amastigotas intracelulares de 34,6% para 13,7 % ± 2,8 e 5,7 % ± 2,1 (p<0,05), respectivamente, para L (V.) panamensis. Já para L (L.) infantum, a atividade leishmanicida de PLGA ITZ manose e nanopartículas de PLGA ITZ conseguiu reduzir os amastigotas de 16,7% para 4,8% ± 2,8 e 8,3% ± 0,3, respectivamente. Para L (L.) braziliensis, a atividade leishmanicida de PLGA e PLGA ITZ manose houve uma redução dos amastigotas com diferença estatistíca significativa (p <0,05) de 68,6% para 28 ± 2,4% e 21,1% ± 4,6, respectivamente. As três cepas testadas responderam de forma diferente para as nanoformualções de PLGA contendo itraconazol com ou sem manose. As nanopartículas de PLGA carregadas com itraconazol revestidas com manose conseguiu reduzir mais amastigotas de L (L.) infantum, enquanto que nanopartículas de PLGA com itraconazol sem manose conseguiu reduzir mais amastigotas intracelulares de L (V.) Panamensis e L. (L.) braziliensis. O fato das nanopartículas de PLGA contendo itraconazol revestidas com manose terem apresentado uma maior eficácia na redução das formas amastigotas de L (L.) infantum, foi possivelmente devido à adição de manose a nanoformulação. Como recomendação sugere-se que sejam realizados estudos in vivo das nanopartículas de itraconazol revestidas com manose para investigar e/ou confirmar o potencial dessas nanopartículas. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leishmaniasis is a neglected disease caused by the protozoa Leishmania and is transmitted by sand flies. This disease affects over 350 million people worldwide. The first-line drugs used to treat this disease were antimonials, which resistance and severe side effects have been associated with. Itraconazole is an antifungal which is also used in the treatment of leishmaniasis. In the present study, Itraconazole was encapsulated in nanoparticles using the copolymer lactic co-glycolic acid (PLGA) and coated with mannose. These nanoparticles were characterized and tested in cytotoxicity assays and anti-leishmania activity. The empty PLGA nanoparticles had a mean hydrodynamic diameter of 220 nm ± 27 and a zeta potential of -1.1 mV ± 0.7, while PLGA nanoparticles coated with mannose itraconazole (ITZ mannose PLGA) were 263 nm ± 12, 6 and -1.9 ± 0.5 mV. By means of the MTT assay, cytotoxicity of empty nanoparticles was 13.7% and 12.6% for THP-1 cells and J774, respectively, while PLGA ITZ mannose were 1% and 20.7% for the cells THP-1 and J774, respectively. The analysis of anti-leishmanial activity was evaluated by the reduction in the number of cells containing intracellular amastigotes more than 20 and it was noted that the PLGA ITZ 0.1 mM mannose and PLGA ITZ 0.2 mM reduced the percentage of intracellular amastigotes 34.6% to 13.7% ± 2.8 and 5.7 ± 2.1% (p <0.05), respectively, to L (V.) panamensis. As for L (L.) infantum, the leishmanicide activity of PLGA nanoparticles ITZ mannose and PLGA ITZ could reduce amastigotes from 16.7% to 4.8% ± 2.8 and 8.3 ± 0.3%, respectively. For L (L.) braziliensis, the anti-leishmanial activity of PLGA and PLGA ITZ mannose there was a reduction of amastigotes with statistically significant difference (p <0.05) from 68.6% to 28 ± 2.4% and 21.1% ± 4.6, respectively. The three strains tested responded differently to nanoformulation of PLGA containing itraconazole with and without mannose. The PLGA nanoparticles loaded with itraconazole coated with mannose could further reduce amastigotes L (L.) infantum, while PLGA nanoparticles with itraconazole without mannose could further reduce intracellular amastigotes L (V.) panamensis, and L. (L.) braziliensis. The fact that PLGA nanoparticles containing itraconazole coated with mannose have shown greater effectiveness in reducing amastigotes of L (L.) infantum, was possibly due to the addition of mannose to nanoformulação. As a recommendation is suggested that in vivo studies of itraconazole nanoparticles coated with mannose are carried out to investigate and / or confirm the potential of these nanoparticles.

OLIVEIRA, Michelle Jacintha Cavalcante. Estudo da função túbulo-glomerular e inflamação renal em pacientes com leishmaniose visceral. 2014. 104 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-01-21T12:15:42Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-01-23T11:45:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-23T11:45:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) Previous issue date: 2010 / Background. The aim of this study is to investigate abnormalities in glomerular and tubular function in VL patients. Methods. This is a prospective study with 16 VL patients before treatment with pentavalent antimonium, in hospital monitoring, in Fortaleza, Ceará, Brazil. Urinary concentration and acidification tests were performed after a 12h period of water and food deprivation using desmopressin and calcium chloride (CaCl2). Glomerular filtration rate (GFR) Fractional excretion of sodium (FENa), transtubular potassium gradient (TTKG) and solute free water reabsorption (TcH2O) were calculated. Microalbuminúria and proteinúria were measured. The VL group pre-treatment was compared to a group of 13 healthy volunteers (control group) and 5 VL patients were revalued after treatment. Aquaporin 2 (AQP2), renal outer medullary K+ channels (ROMK) and pendrin were quantified trough exosomes search in urine. Monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) and malondialdehyde (MDA) were quantified in urine. Results. Urinary concentration deficit was found in all VL patients before (100%) and 4 in 5 cases (80%) after treatment. Urinary osmolality was significantly lower in VL patients pre-treatment compared to control group (516±113 vs. 743±189 mOsm/L, p<0,001, after 12h period water deprivation and desmopressin). There was no difference after treatment revaluation. Urinary acidification deficit was found in 9 cases before (56,22%) and 2 (40%) after treatment, considering urinary pH > 5.5 after CaCl2 test. GRF was similar between the groups. Proteinuria was significantly higher in VL patients pré-treatment (250,6±375,5 vs. 83,7±49,2 mg/24h, p=0,022) and presented important regression after revaluation (268,1±259,4 vs. 113,3±50,1, p=0,043). FENa was higher in VL group when compared to control group. The search for AQP2 (128±88 vs.100±40%, p=0,41), ROMK (122±42 vs. 100±27%, p=0,34) and pendrin (105±7,5 vs. 100±13% p=0,48) were not significant. Urinary MCP-1 showed significant difference between VL patients before treatment and control group (374±359 vs. 42±29 pg/mg-Cr, p=0.002) well as urinary MDA (5.4±2.6 vs. 2.0±0.8 μmol/mL). Conclusion. VL patients present persistent urinary concentration and acidification deficit in 90 days period after treatment and present inflammation and incipient renal damage although other classical markers such as creatinine are not cha / Introdução. O objetivo desse estudo é investigar as alterações túbulo-glomerulares e avaliar marcadores urinários nos pacientes com LV. Métodos. Foi realizado estudo prospectivo com 16 pacientes com LV antes do tratamento com antimonial pentavalente, em acompanhamento na cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil. Testes de concentração e acidificação urinárias foram realizados. Foram calculadas taxa de filtração glomerular (TFG), fração de excreção de sódio (FENa), transporte transtubular de potássio (TTKG) e transporte de água livre de solutos (TCH2O). Avaliou-se a proteinúria. O grupo LV pré-tratamento foi comparado com 13 voluntários sadios (grupo controle) e cinco pacientes foram reavaliados no pós-tratamento. Os transportadores aquaporina 2 (AQP2), canal de K+ apical (ROMK) e pendrina foram quantificados pela pesquisa de exossomas na urina. A proteína quimiotática de monócitos (MCP-1) e o malondialdeído (MDA) foram quantificados na urina. Resultados. Déficit de concentração urinária foi encontrado em todos os pacientes antes (100%) e em cinco dos quatro casos reavaliados (80%) depois do tratamento. A osmolaridade urinária média foi significativamente menor nos pacientes LV pré-tratamento quando comparado ao controle (516±113 vs. 743±189 mOsm/L, p<0,001) e não houve diferença entre os pacientes reavaliados no pós-tratamento. Déficit de acidificação foi detectado em nove casos (56,2%) antes e 2 (40%) após o tratamento, considerando o pH urinário > 5,5 após sobrecarga de CaCl2. A proteinúria mostrou-se significantemente maior no grupo LV pré-tratamento (250,6±375,5 vs. 83,7±49,2 mg/24h, p=0,022) regredindo após o tratamento (268,1±259,4 vs. 113,3±50,1mg/24h, p=0,043). FENa foi mais elevada no grupo LV pré-tratamento. A pesquisa dos exossomas urinários AQP2 não mostrou diferença significativa em relação ao grupo controle (128±88 vs.100±40, p=0,41), assim como a do canal ROMK (122±42 vs. 100±27, p=0,34) e da pendrina (105±7,5 vs. 100±13% p=0,48). A dosagem de MCP-1 e MDA urinários foram mais elevadas nos pacientes pré-tratamento quando comparado aos controles (374±359 vs. 42±29 pg/mg-Cr, p=0.002 e 5.4±2.6 vs. 2.0±0.8 μmol/mL, respectivamente). Conclusão. Pacientes com LV apresentam déficit de concentração e acidificação urinárias antes e 90 dias após o tratamento e evidências de inflamação renal incipiente.

OLIVEIRA, Michelle Jacintha Cavalcante. Manifestações clínicas e fatores de risco relacionados à lesão renal aguda na Leishmaniose visceral e aplicação do critério rifle. 2010. 103 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-07T16:43:54Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-10T16:42:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-10T16:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) Previous issue date: 2010 / Background. There are few studies of renal function evaluation in visceral leishmaniasis (Kala-azar). The aim of this study was to investigate the clinical manifest and the risk factors associated with acute kidney injury (AKI) based on RIFLE criteria in patients with visceral leishmaniasis (VL). Methods. A retrospective study of medical records from patients over 14 years old, without previous kidney disease, with VL, treated at São José Infectious Diseases Hospital, from 2002 to 2008. Clinical manifestations and risk factors for AKI (defined by using RIFLE criteria) were studied. A multivariate analysis was performed to analyze the risk factors for AKI. Results. A total of 224 patients were included. The mean age was 36±15 years and 76.8% were males. AKI was observed in 76 patients (33.9% of cases) and % 52.6 (40) were class F on RIFLE criteria. The main clinical symptoms were dyspnea, edema and jaundice in patients with VL and AKI (p<0.05). Oliguria was observed in 6.5% of patients with AKI. Risk factors associated with AKI were male gender (OR=2.2, 95% CI= 1.0-4.7, p=0.03), age > 40 years (OR = 1.05, 95% CI= 1.02-1.08, p < 0.001) and jaundice (OR=2.9, 95% CI= 1.5-5.8 p=0.002). There was an strong association between amphotericin B use and AKI (OR=18.4, 95% CI=7.9-42.8, p<0.0001), whereas glucantime® use was associated with a lower incidence of AKI when compared to amphotericin B users (OR=0.05, 95% CI=0.02-0.12, p<0.0001). Mortality was 13.3% and it was higher in AKI patients (30.2% vs. 4.7%, p<0.0001). RIFLE criteria presented mortality 40%, 20.8% e 35% in R, I and F respective class. Conclusions. The risk factors associated with AKI in patients with VL were male gender, advanced age, jaundice and amphotericin B. The last one was the most important factor of AKI in VL. / Introdução. Há poucos dados na literatura que relacionam a Leishmaniose visceral (LV) à lesão renal aguda (LRA). O objetivo deste estudo é avaliar as manifestações clínicas e fatores de risco associados à LRA em pacientes com LV e aplicar o critério RIFLE. Método. Estudo retrospectivo, incluindo pacientes acima de 14 anos, sem doença renal prévia, com diagnóstico de LV, internados no HSJ entre 2002 e 2008. Foram avaliadas manifestações clínicas e os fatores de risco relacionados à LRA (avaliada através do critério RIFLE) nesses pacientes, aplicando regressão logística multivariada. Resultados. Foram incluídos 224 pacientes com idade média de 36±15 anos sendo 76,8% do gênero masculino. LRA foi observada em 76 pacientes (33,9%) sendo que 52,6% (40) estavam na classe F do critério RIFLE. Dispneia, edema e icterícia foram os principais sinais e sintomas associados à LRA (p<0,05). Oligúria foi observada em 6,5% dos pacientes com LRA. Os fatores de risco associados à LRA foram gênero masculino (OR=2,2, 95% IC=1,0-4,7, p=0,03), idade acima de 40 anos (OR = 1,05, 95% IC = 1,02-1,08, p<0,001) e icterícia (OR=2,9, 95% IC=1,5-5,8, p=0,002). Foi verificada considerável associação entre o emprego de anfotericina B e LRA (OR=18,4, 95% IC=7,9-42,8, p<0,0001), contudo o uso de glucantime® foi associado a menor ocorrência de LRA (OR=0,05, 95% IC=0,02-0,12, p<0,0001). A mortalidade geral foi 13,3% e foi mais alta nos pacientes que desenvolveram LRA (30,2% vs. 4,7%, p<0,0001). Os percentuais de mortalidade nas classes R, I e F foram respectivamente 40%, 20,8% e 35%. Conclusões. Os fatores de risco preditores de LRA em pacientes com LV foram sexo masculino, anfotericina B, idade acima de 40 anos e icterícia. Anfotericina B foi o fator mais importante de LRA na LV.

GONÇALVES, Ronaldo Pinheiro. Epidemia de Leishmaniose visceral americana em Fortaleza, Ceará : dinâmica espacial e temporal. 2010. 117 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-12T16:51:16Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_rpgonçalves.pdf: 2432117 bytes, checksum: 0288700698dcc24eab6133bce5afdfcf (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-08-12T16:51:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_rpgonçalves.pdf: 2432117 bytes, checksum: 0288700698dcc24eab6133bce5afdfcf (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-12T16:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_rpgonçalves.pdf: 2432117 bytes, checksum: 0288700698dcc24eab6133bce5afdfcf (MD5) Previous issue date: 2010 / The American Visceral Leishmaniasis (AVL) is endemic in tropical and subtropical regions of Latin America. In Brazil, in recent years has been expanding and building up. Historically, the state of Ceara has been presented in several cities a high prevalence of the disease, however, the city of Fortaleza, escaping this epidemiological pattern always reported low incidence of the disease, however, from 2005, showed an increase in the number of cases and spatial distribution, showing an expanding epidemic of the disease. The aim of this study was to evaluate the spatial and temporal distribution of disease incidence in the period 1995 to 2008. We analyzed the cases of AVL reported in SINAN and SIM, considering only patients in Fortaleza, who met the criteria adopted by the Ministry of Health for confirmation of diagnosis and the site of infection. The cases were georeferenced and analyzed based on the indicators: incidence and mortality and the following variables: dependent - confirmed cases of the disease and independent - age, age group, sex, place of residence, clinical manifestation, clinical course and type of diagnosis. We used spatial analysis techniques to analyze the cases. During the study period were recorded human cases of AVL 1267, of which 50% were younger than 4 years and 74 deaths. The year 2007 was presented the highest incidence of the disease. The highest incidence of cases were in males (64.3%). The average age of cases of AVL increased in epidemic period. The disease is clinically expressed differently in the epidemic phase, compared with the endemic phase. The risk of infection was higher in males than in females. Mortality was high only in the age group above 60 years. There was a significant increase in disease incidence in the elderly. Diagnostic tests showed high sensitivity and specificity. Over 70% of cases were confirmed through laboratory tests. We observed a decrease in cure rate and an increase in cases of co-infection with HIV. In the epidemic phase, spatial diffusion of disease was the kind of contagion. The diffusion process was linked to environmental factors and socioeconomic factors. We identified areas of high risk for the disease occurrence based on spatial analysis techniques. The study revealed the establishment of a new epidemiological pattern for kala-azar in Fortaleza, mainly characterized by the appearance of an emerging problem: the increase of cases of co-infection with HIV. Also revealed that environmental factors and socioeconomic factors were crucial in the processes of urbanization and expansion of the disease in the city. / A Leishmaniose Visceral Americana (LVA) é uma doença endêmica nas regiões tropicais e subtropicais da America Latina. No Brasil, nos últimos anos, vem se expandindo e urbanizando-se. Historicamente, o Estado do Ceará tem apresentado, em diversos municípios, altas prevalências da enfermidade; entretanto, a cidade de Fortaleza, fugindo desse padrão epidemiológico sempre registrou baixa ocorrência da doença, no entanto, a partir de 2005, apresentou incremento significativo no número de casos e na distribuição espacial, evidenciando uma expansão epidêmica da doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a distribuição espacial e temporal da incidência da doença, no período de 1995 a 2008. Foram analisados os casos de LVA notificados no SINAN e no SIM, considerando-se apenas os pacientes residentes em Fortaleza, que preenchiam os critérios adotados pelo Ministério da Saúde para confirmação diagnóstica e do local da infecção. Os casos foram georreferenciados e analisados com base nos indicadores: taxa de incidência e letalidade e nas seguintes variáveis: dependente – casos confirmados da doença e independentes – sexo,faixa etária, grupo etário, local de residência, manifestação clínica, evolução clínica, tipo de diagnóstico, tipo de tratament e escolaridade. Foram utilizadas técnicas de análise espacial para analisar os casos. No período do estudo foram registrados 1.267 casos humanos de LVA, dos quais 50% eram menores de 4 anos, e 74 óbitos. O ano de 2007 foi o que apresentou a maior taxa de incidência da doença. A maior ocorrência de casos foi em indivíduos do sexo masculino (64,3%). Houve mudança de perfil da idade e da forma de expressão clínica da doença na fase epidêmica, comparada com a fase endêmica. O risco de adoecer no sexo masculino foi maior do que no sexo feminino. A letalidade foi alta apenas na faixa etária acima dos 60 anos. Houve um crescimento significativo na incidência da doença em pessoas idosas. Os exames diagnósticos apresentaram alta sensibilidade e especificidade. Mais de 70% dos casos foram confirmados por critério laboratorial. Foi observada uma queda na taxa de cura e um aumento dos casos de co-infecção por HIV. Na fase epidêmica, a difusão espacial da doença foi do tipo por contágio. O processo de difusão esteve associado aos fatores ambientais e socioeconômicos. Foram identificadas as áreas de alto risco para a ocorrência da doença com base nas técnicas de análise espacial. O estudo revelou o estabelecimento de um novo padrão epidemiológico para o calazar em Fortaleza, caracterizado principalmente pelo surgimento de um problema emergente: o incremento de casos de co-infecção por HIV. Revelou, ainda, que os fatores ambientais e socioeconômicos foram determinantes nos processos de urbanização e expansão da doença na cidade.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000025.pdf: 1746054 bytes, checksum: ff11c2930e3432607f90b86478febbfb (MD5) Previous issue date: 2007 / As leishmanioses são doenças antigas prevalentes em vários países, inclusive no Brasil. Dentre estas se destaca a leishmaniose visceral (LV), por se tratar da forma com maior potencial de letalidade. Visando facilitar o controle e o diagnóstico da LV, inúmeros antígenos isolados de diferentes espécies de Leishmania são estudados. As proteínas de choque térmico (HSPs), particularmente as de 70 kDa (HSPs70) e suas homólogas mitocondriais (HSP70mts), são abundantes proteínas intracelulares com homólogos presentes em procariotos e eucariotos. A síntese das HSPs, bem como das HSP70mts, está aumentada em situações de estresse, como quando as Leishmania spp. estão no interior do hospedeiro vertebrado, tornando as HSP70mts proeminentes indutores de resposta imunológica. A triagem em uma biblioteca de DNA complementar (cDNA) de Leishmania (Leishmania) chagasi, identificou dois clones, denominados de Lc2.1 e Lc2.2, cujos cDNAs são semelhantes aos genes hsp70mts já descritos em L. (L.) major e Trypanosoma cruzi, mas que codificam HSP70mts em L. (L.) chagasi. No presente trabalho se analisou a organização cromossômica dos genes hsp70mts em L. (L.) infantum/L. (L.) chagasi e L. (L.) major. Verificou-se também a existência de homólogos em diferentes protozoários da família Trypanosomatidae. Em espécies do gênero Leishmnaia, identificaram-se vários genes semelhantes ao clone Lc2.2, enquanto se encontrou apenas um gene semelhante ao clone Lc2.1. Não se encontrou gene semelhante ao clone Lc2.1 no gênero Trypanosoma, o que pode indicar uma evolução recente deste tipo de proteína em Leishmania spp. Um fragmento do clone Lc2.2, denominado FP2, foi subclonado, e a proteína codificada foi produzida e purificada. Purificaram-se anticorpos anti-proteína FP2, e se analisou a expressão das HSP70mts nativas em extratos de espécies de Leishmania, de Trypanosoma e em formas representativas do ciclo de vida de L. (L.) amazonensis e L. (L.) chagasi. Apenas na espécie L. (L.) amazonensis observaram-se duas bandas, sendo a menor delas mais expressa nas formas amastigotas. Por fim, examinou-se a distribuição das HSP70mts nativas em células de L. (L.) chagasi e se ratificou a distribuição ao longo de toda a mitocôndria

Made available in DSpace on 2012-05-07T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000004.pdf: 2428917 bytes, checksum: 67c2e37d0c711d05795c8b9532bbba9f (MD5) Previous issue date: 2006 / [...] Nesse trabalho analisamos características imunofenotípicas de leucócitos do sangue periférico de indivíduos portadores de LV clássica, indivíduos portadores de LV assintomática e indivíduos curados da LV, com ênfase em células envolvidas na resposta imune inata e adaptativa. [...] mecanismos imunológicos que acompanham a infecção humana por Leishmania e a cura após tratamento etiológico são constituídos de eventos complexos, multifatoriais que envolvem o estabelecimento concomitante de ativação e imunorregulação do compartimento da imunidade celular inata bem como aspectos fenotípicos sugestivos da ativação e co-estimulação paralela da imunidade adaptativa celular e humoral. Esse perfil complexo e, a princípio controverso, de alterações fenotípicas pode ser parcialmente esclarecido, quando consideramos a importância da análise das diversas formas clínicas da LV e o impacto da terapêutica específica. Nesse contexto, observamos um predomínio de alterações fenotípicas associadas a mecanismos de ativação e co-estimulação celular, tanto na imunidade inata quanto na imunidade adaptativa, favorecendo o estabelecimento e manutenção de doença ativa em indivíduos portadores de LV clássica. Destaca-se nestes indivíduos o papel de linfócitos T CD8 citotóxicos na manutenção e progressão da infecção, associado à presença de linfócitos B. [...], observamos que a terapêutica etiológica da LV, favorece à restauração, para níveis semelhantes aos observados em indivíduos não infectados, do número de células ativadas e expressando moléculas coestimuladoras no âmbito da imunidade inata e adaptativa, associada à presença de mecanismos imunorreguladores efetivos. Já na infecção assintomática, observamos a presença de um perfil fenotípico preservado. No compartimento da imunidade inata, observou-se um padrão fenotípico semelhante ao observado em indíviduos não infectados e uma diminuição no número de monócitos pró-inflamatórios. No âmbito da resposta imune adaptativa, observou-se a preservação de sinais fenotípicos de ativação celular em linfócitos T em associação à redução na participação de linfócitos B, compatível com a hipotese de ausência de manifestação sistêmica na infecção assintomática por L. (L.) chagasi. Em conjunto, nossos resultados demonstram a importância do estudo de aspectos imunológicos envolvidos às diversas formas clínicas da LV para melhor caracterização de eventos da resposta imune associados à progressão e à resistência da doença

PRAZERES, Jean Lima. Avaliação das alterações hematológicas periféricas em pacientes com leishamaniose visceral. 2008. 68 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-21T13:18:00Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_jlprazeres.pdf: 2241775 bytes, checksum: cc77e64fa21d02951ded03514f6eed88 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T14:06:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_jlprazeres.pdf: 2241775 bytes, checksum: cc77e64fa21d02951ded03514f6eed88 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T14:06:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_jlprazeres.pdf: 2241775 bytes, checksum: cc77e64fa21d02951ded03514f6eed88 (MD5) Previous issue date: 2008 / According to World Health Organization (WHO) data there are some 12 million people worldwide with leishmaniasis. In Brazil the etiological agent of visceral leishmaniasis (VL) is Leishmania chagasi, and is the main means of transmission from the parasite to human beings and other hosts mammals is through the biting of the female mosquito of the order diptera insects belonging to the Psychodidae family, whose main vector is the Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva). The visceral leishmaniasis or kala azar is a tropical disease that is characterized by the presence of fever, anemia, hepatosplenomegaly, hemorrhagic manifestations, and linfoadenomegaly, weight loss, tachycardia, dry cough, diarrhea, fever, pancytopenia and hypergammaglobulinemia. The hematological involvement is common in patients with VL, with anemia the most frequent abnormality due to its multifactor nature and prevalence varies depending on the population being studied. It is meant to evaluate the pattern of peripheral alterations of patients with hematological Visceral Leishmaniasis. Blood samples were collected after the diagnosis of researches seeking ways of amastigotes Leishmania sp in bone marrow aspirate in patients (n = 30), Hospital of Infectious Diseases São José, in Fortaleza, in the state of Ceará, in the period from January 2007 to July 2008 and a control group (n = 30) consists of blood donors from HEMOCE. Laboratory tests were performed at the Clinical Analysis Laboratory of the General Hospital of Fortaleza and the Louis Pasteur Medical Diagnosis Laboratory. The counting of blood elements were measured with an ABX blood Pentre 60 gauge, followed by cytomorphology assessment. The biochemical measurements were made in a HITACHI biochemical analyzer Module P800 and Roche ® Modular I. The comparison between the groups, for the average of quantitative variables was performed by Student t-test, for the normal distribution and Mann – Whitney hypothesis data, in case of non-normality of the data. We have statistically considered meaningful values of 0.05. The analysis (n = 30) patients, the study showed that 63% (19) of the patients are from within the State of Ceará and 37% (11)of the patients are from the capital of the state of Ceará, Fortaleza. That 80% (24) of patients are male and 20 (8%) were females. Most of the patients, 57% were aged between 31 to 45 years old. In what concerns the period of time of the disease until the date of laboratory diagnosis, 47% (14) of the patients already had signs of clinical disease with 30 to 90 days. We have to count the male of red blood cells, an average of 3.69 ± 0.6644 (x106/mm3), hemoglobin of 9383 ± 1.3002 (g/dL), Hematocrit of 28.6708 ± 4.0687 (%) for the female count of red blood cells, an average of 3525 ± 0.6233 (x106/mm3), hemoglobin from 8.5666 ± 1.6561 (g/dL), Hematocrit of 26.9666 ± 3.9026 (%) . With regard to RBC indices observed for both sex, cell volume Medium (MCV) of 78.1 ± 7.0 (fL), mean corpuscular hemoglobin (MCH) of 25.42 ± 2.51 (pg), mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) of 32 ± 2.15 (%), distribution of amplitude of red blood cells (RDW) of 15,337 ± 2435 (%), reticulocyte count of 20.636.63 ± 20.300.39 (/ mm3). Of the morphological analysis showed up a laboratory profile characteristic of the type of anemia and microcytic normocytic and hypochromic followed by normochromic and 65% of the samples found the presence of "rouleax". For the determinations of serum iron had a average of 32.53 ± 17.31 (µg/dL), Transferrin of 146.83 ± 42.19 (mg/dL), Ferritin of 1.339.47 ± 599.05 (ng /ml), Vitamin B12 from 573.5 ± 253.94 (pg/mL), Folic Acid, 10 ± 3.47 (ng/mL). For the average counts of leukocytes observed was 2802.33 ± 2322.16 (n°/mm3), of neutrophils 1426.33 ± 1348.88 (n°/mm3), lymphocytes from 982.60 ± 576.47 (n°/ mm3); monocytes of 350.13 ± 283.47 (n°/mm3), platelet count 120.233.33 ± 90640.89 (n °/mm3). For the determinations of the VHS diagnosis, the patients had an average of 81.77 mm in the first hours of observation. The determination of TAP showed us that the diagnosis of the patients showed an average of 67.87% of activity prothrombin. The analysis it was observed that there is an impairment in VL hematopoese in translating in peripheral blood by a pancytopenia mainly in favor of the erythroid lineage, and the anemia in patients with chronic nature probably / De acordo com dado da Organização Mundial de Saúde (OMS) existem cerca de 12 milhões de pessoas no mundo com leishmaniose. No Brasil o agente etiológico da Leishmaniose visceral (LV) é a Leishmania chagasi, e a principal forma de transmissão do parasita ao homem e outros hospedeiros mamíferos é por meio da picada do mosquito fêmea de insetos dípteros da família Psychodidae, cujo vetor principal é o Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva). O calazar ou leishmaniose visceral é uma doença tropical que se caracteriza pela presença de febre, anemia, hepatoesplenomegalia, manifestações hemorrágicas, além de linfoadenomegalia, perda de peso, taquicardia, tosse seca, diarréia, febre, pancitopenia e hipergamaglobulinemia. O envolvimento hematológico é comum nos pacientes com LV, sendo a anemia a anormalidade mais freqüente decorrente de natureza multifatorial e com prevalência variável conforme a população analisada. Consiste em avaliar o padrão das alterações hematológicas periféricas dos pacientes com Leishmaniose Visceral. As amostras de sangue foram colhidas após o diagnóstico laboratorial de pesquisa de formas amastigotas de Leishmania sp em aspirado medular nos pacientes (n=30) do Hospital São José de Doenças Infecciosas, em Fortaleza, Ceará, no período de Janeiro de 2007 a Julho de 2008 e de um grupo controle (n=30) constituído de doadores de sangue do HEMOCE. As análises laboratoriais foram realizadas no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital Geral de Fortaleza e no Laboratório Louis Pasteur Medicina Diagnóstica. As contagens dos elementos sanguüíneos foram realizadas em contador hematológico Pentra 120 ABX, seguido de avaliação citomorfológica. As dosagens bioquímicas foram realizadas em Analisador bioquímico HITACHI Modular P800 e Modulo E/Roche®. A comparação entre os grupos, em relação à média das variáveis quantitativas foi realizada através do Teste t de Student, para os dados com hipótese de distribuição normal e Mann-Whitney, no caso de não normalidade dos dados. Foram considerados estatisticamente significantes valores de p < 0,05. Das análises (n=30) pacientes, observou-se que 63%(19) dos pacientes são do interior do Estado do Ceará e 37%(11) pacientes são da capital, Fortaleza. Que 80%(24) dos pacientes são do sexo masculino e 20(8%) do sexo feminino. A maioria dos pacientes, 57% apresentavam-se na faixa etária entre 31 a 45 anos de idade. Com relação ao tempo da doença até a data do diagnóstico laboratorial, 47%(14) dos pacientes já apresentavam sinais clínicos da doença com 30 a 90 dias. Obtivemos para o sexo masculino contagem das Hemácias, uma média de 3,69± 0,6644 (x106/mm3), Hemoglobina de 9,383±1,3002 (g/dL), Hematócrito de 28,6708±4,0687(%),para o sexo feminino contagem das Hemácias, uma média de 3,525± 0,6233(x106/mm3), Hemoglobina de 8,5666±1,6561(g/dL), Hematócrito de 26,9666±3,9026(%). Com relação aos índices hematiméticros observamos para ambos os sexo, um Volume Corpuscular Médio(VCM) de 78,1±7,0 (fL), Hemoglobina Corpuscular Média(HCM) de 25,42±2,51 (pg), Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média(CHCM) de 32± 2,15 (%), Distribuição de amplitude das hemácias(RDW) de 15,337±2,435 (%), Contagem de reticulócitos de 20.636,63±20.300,39 (/mm3). Das análises citomorfológica, Das análises morfológicas evidenciou-se um perfil laboratorial característico de anemia do tipo microcítica e hipocrômica seguido de normocítica e normocrômica e em 65% das amostras observamos a presença de “rouleaux”. Para as determinações do Ferro sérico obtivemos uma média de 32,53±17,31 (µg/dL), Transferrina de 146,83±42,19 (mg/dL), Ferritina de 1339,47±599,05 (ng/mL), Vitamina B12 de 573,5±253,94 (pg/mL). Ácido Fólico de 10±3,47 (ng/mL). Para as contagens dos leucócitos a média observada foi de 2802,33 ±2322,16 (n°/mm3), neutrófilos de 1.426,33±1.348,88(n°/mm3), linfócitos de 982,60±576,47x(n°/mm3), monócitos de 350,13±283,47(n°/mm3), plaquetas de 120,233,33±90.640,89 (n°/mm3). Para as determinações do VHS ao diagnóstico, os pacientes apresentaram uma média de 81,77 mm na primeira hora de observação. As determinações do TAP nos mostrou que ao diagnóstico os pacientes apresentaram uma média de 67,87% de atividade de protrombina. Das análises observou-se que na LV existe um comprometimento na hematopoese traduzindo no sangue periférico por uma pancitopenia a favor principalmente da linhagem eritróide, sendo a anemia nestes pacientes de natureza provavelmente crônica

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9730_Dissertacao Estevão Barcelos. pdf.pdf: 1406331 bytes, checksum: 7e6b1b06aa09689055107d02d115cdf7 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania, e encontram-se distribuídas por 98 paises incluindo o Brasil, que possui uma grande importância epidemiológia e clínica, considerando o número de casos registrados. Embora os atuais tratamentos disponíveis sejam eficazes, importantes considerações acerca da toxicidade e alto custo têm sido levantados pela OMS, o que torna urgente a busca por novas drogas. O Resveratrol, um polifenol encontrado em diversas plantas, dentre elas uva, amendoim e eucalipto, tem sido amplamente pesquisado nas últimas décadas. Suas características farmacológicas e ações biológicas incluem: capacidade antiinflamatória; antitumoral; antioxidante; antiagregação plaquetária; fungicida; antiviral e antibacteriana. Além disso, o resveratrol já demonstrou ação anti-promastigotas e anti-amastigotas de Leishmania in vitro. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos do tratamento oral com resveratrol contra a leishmaniose visceral murina. Camundongos BALB/c infectados com L. infantum chagasi foram tratados resveratrol (50mg/kg/dia) por via oral durante 10 dias. O tratamento com resveratrol não induziu toxicidez sistêmica, demonstrado pelas dosagens de transaminases (TGO, TGP) e creatinina. Além disso, o tratamento com resveratrol foi capaz de induzir redução no parasitismo do baço e fígado, quando comparado ao grupo não tratado, e compatíveis ao aumento do infiltrado linfocitário observado no fígado destes animais. A avaliação de citocinas mostrou redução significativa da produção de IL-4, IL-6 e IL-17, bem como o aumento de TNF-&#945; e TGF-&#946; no sobrenadante do fígado. Significante redução da produção de TNF-&#945; e IL-10 foi observada nos sobrenadantes de macerado do baço de animais tratados com resveratrol. Este mesmo grupo apresentou uma significativa redução da apoptose de esplenócitos quando comparado com os controles experimentais. Juntos, nossos dados demonstraram pela primeira vez viabilidade da utilização do resveratrol como uma eficiente e segura droga anti-Leishmania, o que o torna um promissor candidato a utilização contra as leishmanioses humanas.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-10-23T19:57:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImunogenicidadeVacinaLBSapSal.pdf: 2635494 bytes, checksum: 1830fd9d23022df936dfb3d499086d6b (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-18T15:29:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImunogenicidadeVacinaLBSapSal.pdf: 2635494 bytes, checksum: 1830fd9d23022df936dfb3d499086d6b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T15:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImunogenicidadeVacinaLBSapSal.pdf: 2635494 bytes, checksum: 1830fd9d23022df936dfb3d499086d6b (MD5) Previous issue date: 2010 / Leishmaniose visceral humana (LVH) e leishmaniose visceral canina (LVC) são as mais importantes doenças emergentes causadas por Leishmania (L.) chagasi com elevada prevalência nos países latino-americanos, principalmente no Brasil. Durante um século de investigação, depois da descoberta do agente etiológico da leishmaniose, poucos avanços têm ocorrido na pesquisa do tratamento e até mesmo de vacinas e as medidas de controle têm sido decepcionantes. O desenvolvimento de uma vacina protetora contra a LVC é uma abordagem alternativa para interromper o ciclo da LV doméstica. Considerando a importância das proteínas salivares de flebotomíneos sendo potentes imunógenos, obrigatoriamente co-depositados com o parasito de Leishmania durante a transmissão, a sua inclusão em uma vacina anti-Leishmania iria explorar a imunidade anti-saliva após uma picada de flebotomíneo infectado e preparar uma resposta imune protetora anti-Leishmania. Assim, neste trabalho foi investigada a imunogenicidade e efeito protetor da vacina LBSapSal em cães após o desafio. Vinte cães foram classificados em quatro grupos: i) controle (n = 5) receberam 1 mL de solução salina estéril 0,9%; ii) grupo Sal (n = 5) receberam extrato de glândula salivar (SGE), elaborado a partir de 5 ácinos das glândulas salivares de Lutzomyia longipalpis em 1 ml de solução salina estéril 0,9%; iii) Grupo LBSal (n = 5) receberam 600 μg de proteína de promastigotas de L. braziliensis mais SGE em 1 mL de solução salina estéril 0,9%, (iv) o grupo LBSapSal (n = 5 ) recebeu 600 μg de proteína de promastigotas de L. braziliensis e 1 mg de saponina em conjunto com a SGE em 1 mL de solução salina estéril 0,9%. O protocolo de imunização constou de três injeções subcutâneas em intervalos de 4 semanas. Posteriormente, os cães foram inoculados por via intradérmica com 1 × 107 promastigotas em fase estacionária de L. (L.) chagasi na presença de glândula salivar de L. longipalpis e acompanhado por um período de 435 dias após o desafio (435dpd). Análise da resposta imune humoral mostrou que antes e durante o acompanhamento longitudinal após o desafio, o grupo LBSapSal mostrou aumento dos níveis de IgG total, IgG1 e IgG2, sugerindo uma possível resposta imune mista (tipo I e II) após a vacinação. A investigação da resposta imune celular com base no perfil imunofenotípico de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) mostrou um aumento no número absoluto de linfócitos T CD5+ circulantes, refletida pela maior contagem de linfócitos T CD4+ e T CD8+, em 435dpc. Interessantemente, a vacina induziu um aumento de linfócitos T CD8+ circulantes durante todo o período após o desafio, possivelmente indicando o estabelecimento de imunidade protetora contra a infecção por Leishmania como tem sido sugerido previamente para a LVC. Consistente com essa hipótese, o grupo LBSapSal apresentou aumento da atividade linfoproliferativa in vitro sobre a estímulação antigênica com SLcA (antígeno solúvel L. chagasi) em 90 e 435 dpc, bem como aumento da freqüência (índice de estimulação) de linfócitos T CD5+ e CD8+ SLcA-específico em 435dpc. Estes resultados suportam a hipótese de que a indução de células T CD8+ podem desempenhar um papel de proteção no mecanismo de controle do parasitismo por Leishmania após a vacinação com LBSapSal, associado com a resposta imune antígeno-específica para antígenos do agente etiológico da LVC. A avaliação clínica sobre sinais sugestivos de LVC mostrou que todos os animais permaneceram assintomáticos durante todo o acompanhamento. O estudo da proteção realizado pela análise de amostras do aspirado de medula óssea através de abordagens parasitológicas (cultura em meio NNN / LIT e inquérito microscópico) e moleculares (PCR) de todos os grupos não revelou a presença de parasitas. Estes resultados mostraram que a via intradérmica de infecção experimental tem um curso longo para iniciar as manifestações clínicas e, assim, a detecção do parasita, e por isso necessitam de um período maior de acompanhamento, que poderão fornecer informações importantes que conduzirão a uma melhor compreensão sobre a imunogenicidade da vacina e sua eficácia. ____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Human visceral leishmaniasis and canine visceral leishmaniasis (CVL) are the most important emerging diseases caused by Leishmania (L.) chagasi with high prevalence in Latin American countries mainly in Brazil. During a century of research after the discovery of the etiologic agent of leishmaniasis few advances have occurred in research on treatment and even vaccines and measures control have been disappointing. The development of a protective vaccine against CVL is an alternative approach for interrupting the VL domestic cycle. Considering the importance of sand fly salivary proteins are potent immunogens obligatorily co-deposited with Leishmania parasites during transmission, their inclusion in an anti-Leishmania vaccine would exploit anti-saliva immunity following an infective sand fly bite and set the stage for a protective anti-Leishmania immune response. Thus, in this work it was investigated the immunogenicity and protective effect of LBSapSal vaccination in dogs after challenge. Twenty mongrel dogs were categorized into four groups: i) control (n = 5) received 1 mL of sterile saline 0.9%; ii) Sal group (n = 5) received sand fly gland extract (SGE) prepared from 5 acini of salivary glands of Lutzomyia longipalpis in 1 mL of sterile saline 0.9%; iii) LBSal group (n = 5) received 600 μg of L. braziliensis promastigote protein plus SGE in 1 mL sterile 0.9% saline; (iv) the LBSapSal group (n = 5) received 600 μg of L. braziliensis promastigote protein plus 1 mg of saponin together with SGE in 1 mL sterile 0.9% saline. The immunization protocol consisted of three subcutaneous injections at intervals of 4 weeks. Afterwards, the dogs were intradermally infected with 1×107 late-log-phase promastigotes of L. (L.) chagasi in the presence of sand fly saliva of L. longipalpis and accompanied by a follow-up of 435 days post challenge (435dpc). Analysis of the humoral immune response showed that before and during the longitudinal follow-up after the challenge, the LBSapSal group showed increased levels of total IgG, IgG1 and IgG2, suggesting a possible mixed immune response (type I and II) after vaccination. The investigation of the cellular immune response based on the immunophenotypic profile of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) showed an augment absolute number of circulating CD5+ T lymphocytes, reflected by higher counts of T CD4+ and T CD8+ lymphocytes, in 435dpc. Interestingly, the vaccine induced an increase circulating T CD8+ lymphocytes throughout the period after challenge, possibly indicating the establishment of protective immunity against Leishmania infection as has been suggested previously for CVL. Consistent with this hypothesis, the LBSapSal group exhibited increased lymphoproliferative activity upon in vitro antigenic stimuli with SLcA (soluble L. chagasi antigen) in 90 and 435 dpc as well as increased frequency (stimulation index) of SLcA-specific CD5+ and CD8+ T-lymphocytes in 435dpc. These results support the hypothesis that induction of CD8+ T-cells may play a protective role in the mechanism of control of parasitism by Leishmania after LBSapSal treatment associated with the antigen-specific immune response to antigens from the etiological agent of CVL. The clinical evaluation regarding suggestive signs of CVL showed that all animals remained asymptomatic during the all follow-up. The protection study performed by analysis in aspirates of bone marrow samples through parasitological (culture in NNN/LIT medium and microscopical investigation) and molecular approaches (PCR) of all groups did not reveal the presence of parasites. These results showed that the intradermal route of experimental infection has a long course to start the clinical manifestations and therefore the detection of the parasite, and so needing a longer period of follow-up, that may provide important information that will lead to a better understanding on vaccine immunogenicity and efficacy.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-08T18:45:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1777763 bytes, checksum: 1347cc7fa324c78fad571d41feebe9c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-16T15:45:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1777763 bytes, checksum: 1347cc7fa324c78fad571d41feebe9c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T15:57:17Z (GMT). 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Resultados demonstraram que as formulações de F127 são formadas por micelas/partículas de tamanho entre 100-150 nm e que o sistema micelar que as constitui não apenas estabilizou a AnB pelo período de 360 dias, como também liberou o fármaco da formulação no estado gel de forma controlada. Camundongos BALB/c foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de L. infantum por via endovenosa e tratados por via subcutânea com as formulações de F127 contendo 150 e 300 μg/mL de AnB, após seis semanas da infecção. Observou-se redução significativa na carga parasitária do fígado e baço dos animais tratados com F127 + AnB 150μg/mL, porém o mesmo não ocorreu na medula óssea. No entanto, a formulação contendo 300μg/mL de AnB não exerceu nenhum efeito significativo sobre a carga parasitária de nenhum desses órgãos, assim como a AnB livre. As análises bioquímicas mostraram que os grupos tratados com as formulações de F127 contendo AnB não apresentaram efeito nefrotóxico ou hepatotóxico. Os resultados deste trabalho mostram que a solução de F127 a 16% + AnB 150μg/mL administradas por via subcutânea podem representar uma alternativa terapêutica eficaz na redução da carga parasitária em diferentes órgãos alvo da leishmaniose visceral. Com a possibilidade do uso de vias de administração menos invasivas e redução dos efeitos colaterais, o presente trabalho lança uma luz sobre novas alternativas de tratamento da leishmaniose visceral __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Leishmaniasis is a chronic debilitating class of diseases, and it is endemic in topical and subtropical areas. The medication available for the treatment of this disease resent high toxicity and very complex dosing regimens. The use of polymers as nanocarriers for drug delivery brings new possibilities to therapy and aims to reduce side effects, reduce the number of doses and prolong the intervals between administrations. In this paper, were developed and evaluated formulations of Pluronic® F-127 (F127) to deliver amphotericin B (AmB) in the treatment of murine visceral leishmaniasis. Results showed that F127 formulations are formed by micelles / particles of size between 100-150 nm and the and that micellar system that constitute it not only stabilized AmB for the period of 360- day, but also released the drug formulation in the gel state in a controlled manner. BALB/c mice were inoculated with 1 x 107 promastigotes of L. infantum intravenously and treated subcutaneously with F127 formulations containing 150 and 300 μg / ml of AmB after six weeks of the infection. A significant reduction in parasite load of the liver and spleen of animals treated with AmB F127 + 150μg/mL, however, this did not occur in the bone marrow. However, the formulation containing 300μg / ml AmB had no significant effect on the parasite load of any of these organs, as well as free AmB. Biochemical analyzes showed that the groups treated with F127 formulations containing AmB did not present any nephrotoxicity or hepatotoxicity effects. The results of this paper shows that F127 at 16% solution + AmB at 150μg/ml administered subcutaneously can represent an effective therapeutic option in the reduction of the parasitic load on different target organs of visceral leishmaniasis. With the possibility of using less invasive routes of administration and reduction of side effects, this study sheds light on new alternatives for treatment of visceral leishmaniasis.