O vírus da leucose enzoótica bovina (VLEB) pode interferir na proporção e na funcionalidade dos linfócitos B e das demais células sanguíneas. Acreditando-se que essas alterações pudessem interferir nos mecanismos de defesa da glândula mamária, o presente estudo avaliou funcionalmente os fagócitos sanguíneos e lácteos de vacas naturalmente infectadas pelo VLEB, por meio da expressão de diferentes receptores de superfície celular de fagócitos e linfócitos; da morte celular dos fagócitos e do linfócito B; pelo potencial de fagocitose e produção intracelular de peróxido de hidrogênio pelas células CD14+ e CH138+. Foram selecionadas nove vacas negativas para a LEB (grupo negativo), dez positivas sem linfocitose (grupo AL) e seis positivas com linfocitose persistente (grupo LP). Independente do perfil hematológico das vacas positivas para a LEB, nas amostras de sangue foram observadas menor expressão de células mononucleares CD14+, de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B CD21+ CD11b+ e maior expressão de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T auxiliares (CD3+ CD4+) e de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b- e maiores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+. Menores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ foram observados nas vacas do grupo AL do que nas vacas do grupo negativo. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelas células mononucleares CD14+, menor produção de peróxido de hidrogênio e menores índices de fagocitose por Staphylococcus aureus pelas células polimorfonucleares CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de necrose, de apoptose e/ou necrose e maior viabilidade das células mononucleares CD14+, das células polimorfonucleares CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Apenas os linfócitos B (CD21+) das vacas do grupo LP apresentaram menores índices de morte por apoptose, e as células mononucleares CD14+ das vacas do grupo AL manifestaram maiores índices de apoptose e/ou necrose do que as vacas negativas. Independente do perfil hematológico das vacas, nas amostras de leite foram observadas maiores quantidades de macrófagos e maiores expressões de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo AL apresentaram maior quantidade de linfócitos B (CD21+) do que as vacas negativas. As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T citotóxicos (CD3+ CD8+), de linfócitos B CD21+ CD11b+ e de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+ e maior quantidade de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b-. As vacas do grupo AL apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelos macrófagos CD14+ e pelos leucócitos CH138+ e as vacas do grupo LP apresentaram maior produção de peróxido de hidrogênio intracelular. As vacas positivas para LEB apresentaram maiores índices de morte por necrose dos macrófagos CD14+ e dos linfócitos B (CD21+) e menores índices de morte por apoptose dos macrófagos CD14+, dos leucócitos CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Estas vacas também apresentaram maior viabilidade dos macrófagos CD14+ e dos leucócitos CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram maiores índices de apoptose e/ou necrose dos macrófagos CD14+, de necrose de leucócitos CH138+ e de viabilidade de linfócitos B (CD21+). Resultados permitem concluir que a o VLEB altera a resposta imune da glândula mamária. / The enzootic bovine leukemia virus (BLV) can influence the amount of lymphocytes B and other blood cells and their functions. Believing that these changes could interfere in the defense mechanisms of the mammary gland, this study evaluated blood and milk phagocytes functions from cows naturally infected VLEB through the expression of different cell surface receptors of phagocytes and lymphocytes; from death cell of phagocytes and B lymphocytes; the phagocytosis and intracellular production of hydrogen peroxide by CD14+ and CH138+ cells. We chose nine cows negative for the LEB (negative group), ten positive without lymphocytosis (LA group) and six positive with persistent lymphocytosis (LP group). In blood samples of positive cows for BLV, it was observed smaller expression of CD14+ mononuclear, T lymphocytes (CD3+) and CD21+ CD11b+ B lymphocytes, along with increased expression of B lymphocytes (CD21+). Cows of the LP group had lower amounts of T helper lymphocytes (CD3+ CD4+) and CD21+ CD5- CD11b- B lymphocytes and higher amounts of CD21+ CD5+ CD11b+ B lymphocytes. In cows of AL group it was observed lower amounts of CD21+ CD5+ B lymphocytes than in cows of negative group. Cows of LP group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ mononuclear cells, lower intracellular production of hydrogen peroxide and lower rates of phagocytosis of Staphylococcus aureus by CH138+ polymorphonuclear cells. Cows of LP group showed less necrosis, apoptosis and/or necrosis and increased viability of CD14+ mononuclear cells, CH138+ polymorphonuclear cells and B lymphocytes (CD21+). Only the B-lymphocytes (CD21+) of the cows in the LP group showed less apoptosis, and CD14 + mononuclear cells from cows in the AL group showed higher rates of apoptosis and/or necrosis than the ones from negative cows. In the milk sample, the positive cows showed higher amounts of macrophages and increased expression of T lymphocytes (CD3+) and B lymphocytes (CD21+). Cows of AL group showed a higher amount of B lymphocytes (CD21+) than negative cows. Cows of LP group had lower amounts of T cytotoxic lymphocytes (CD3+, CD8+), CD21+ CD11b+ B lymphocytes and CD21+, CD5+, CD11b+, B lymphocytes and increased amount of CD21 + CD5- CD11b- B lymphocytes. Cows of the AL group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes and cows of group LP had higher production of intracellular hydrogen peroxide. The positive cows for LEB had higher rates of death by necrosis of CD14+ macrophages and B lymphocytes (CD21+) and lower rates of apoptosis of CD14+ macrophages, CH138+ leukocytes and B lymphocytes (CD21+). These cows also had higher viability of CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes. Cows on the LP group had higher rates of apoptosis and/or necrosis of CD14+ macrophages, necrosis of CH138+ leukocytes and viability of B lymphocytes (CD21+). Results suggested that the VLEB influence the immune response of the mammary gland.

A Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB) é uma enfermidade neoplásica, infectocontagiosa, pluri-sintomática, de evolução crônica, que compromete os órgãos linfopoiéticos e está associada ao desenvolvimento de linfocitose persistente (LP) e linfossarcoma. Acarreta diminuição na produção, quer por seus efeitos danosos diretos, quer pelos indiretos. No entanto, seu efeito na função e na quantidade das diferentes subpopulações de linfócitos, assim como seu papel no estabelecimento de outras doenças oportunistas, ainda não está claro. O presente estudo avaliou a resposta imunitária de bovinos da raça Holandês Preto e Branco naturalmente infectados pelo vírus da LEB (VLB), após desafio antigênico fornecido por vacinação contra o vírus da febre aftosa. Para tal, foram coletadas amostras sanguíneas antes do desafio e, após o desafio, semanalmente, por sete semanas, de dez vacas soropositivas, sem LP; de dez vacas soropositivas, manifestando LP; e de dez vacas soronegativas. Foram avaliadas as alterações quantitativas das diferentes subpopulações de leucócitos circulantes; a função dos linfócitos B, por meio da quantificação de diferentes isotipos de imunoglobulinas (Ig) séricas; os índices de proliferação linfocitária; os índices de morte celular por apoptose ou por necrose; e as concentrações séricas de interleucina-10 (IL-10), IL-12, inteferon- (IFN-&gamma;) e fator de necrose tumoral-&alpha; (TNF-&alpha;). Foi verificada a normalidade da distribuição dos resultados obtidos, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F (para dados que apresentaram distribuição normal) ou do teste de Lavene (para dados que não apresentaram distribuição normal). Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, de acordo, respectivamente, com a ocorrência ou não de homoscedasticidade, foram feitos, para dados com distribuição normal, os testes de análise de variância (One-way ANOVA), seguida do teste de Tukey-Kramer ou o teste t; e, para dados que não apresentaram distribuição normal, o teste de Mann-Whitney ou o teste de Kruskal-Wallis. Para todos os resultados, foram consideradas significantes as análises que apresentaram p&le;0,05. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações séricas de IgG1, de IgM e de IgA, tanto entre os tempos de coleta, quanto, a cada tempo, entre animais pertencentes aos diferentes grupos. As concentrações séricas de IgG2 aumentaram, após a vacinação, em todos os animais (p<0,05). Todavia, 17 dias após o desafio antigênico, as concentrações séricas de IgG2, em animais manifestando LP foram, a cada tempo de coleta, menores (p<0,01) que aquelas verificadas nos animais pertencentes aos demais grupos, indicando que animais com LP apresentam resposta humoral menos intensa e menos duradoura. Observou-se que ocorreu um aumento no índice de proliferação de linfócitos sanguíneos (p<0,01), 24 dias após a vacinação contra o vírus da febre aftosa, independente da presença de infecção pelo VLB. A partir deste momento, ocorre um aumento na porcentagem de linfócitos &gamma;&sigma; circulantes (p<0,05) e posterior diminuição nas concentrações séricas de IgG2 (p<0,05), indicando regulação desta resposta humoral por linfócitos &gamma;&sigma;. Em bovinos com LP, o aumento na porcentagem de linfócitos circulantes foi maior (p<0,05), ocasionando diminuição mais intensa e mais precoce nas concentrações séricas de IgG2. Constatou-se que a LP ocorre em decorrência de menor índice de apoptose, posto que as porcentagens de leucócitos sofrendo processo de apoptose foram menores (p&le;0,001) entre as células obtidas de animais manifestando LP, do naquelas coletadas dos animais pertencentes aos demais grupos. Verificou-se que as concentrações séricas das citocinas de perfil Th1, IL-12 e IFN-&gamma;, são maiores em amostras sangüíneas de animais infectados pelo VLB, alinfocitóticos (p<0,01), ao passo que as concentrações séricas das citocinas de perfil Th2, IL-10 e TNF-&alpha;, são maiores em amostras sangüíneas de animais infectados manifestando LP (p<0,01), indicando que alterações no perfil sérico de citocinas podem ser causa ou consequência da LP. Em resposta ao desafio vacinal, ocorre uma elevação nas concentrações séricas de IL-10 (p<0,01), de TNF-&alpha; (p=0,005) e de IFN-&gamma; (p<0,01), três dias após o desafio, e de IL-12 (p<0,001), dez dias após o desafio. A elevação na concentração sérica de IL-10 perdura até 31 dias após o desafio e pode ser responsável pelo maior índice de proliferação de linfócitos &gamma;&sigma; verificado a partir de 31 dias após a vacinação. Foi observado que a maioria dos linfócitos B circulantes, em bovinos, consiste de linfócitos B1 e, em animais infectados pelo VLB, a LP ocorre em decorrência de um aumento na porcentagem de linfócitos B1a (p<0,05). Além disso, em animais infectados pelo VLB, apresentando LP, as relações entre linfócitos T auxiliares e citotóxicos são menores (p<0,01) e a porcentagem de linfócitos &gamma;&sigma; é maior (p<0,01), indicando atividade viral nas células infectadas. Assim, os resultados permitem-nos concluir que animais infectados pelo VLB, manifestando LP, apresentam alterações na resposta imunitária frente vacinação contra o vírus da febre aftosa. / Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is an infectious, multi-symptomatic, chronic, neoplastic disease, which undermines the lymphopoietic organs and is associated with the development of persistent lymphocytosis (PL) and lymphosarcoma. Infected animals present a decrease of production, either by its direct or its indirect harmful effects. However, its effect on the function and quantity of different lymphocyte subpopulations, as well as its role in the establishment of other opportunistic diseases, are unclear. This study evaluated the immune response of Holstein dairy cattle naturally infected with Bovine Leukosis Virus BLV, after antigen challenge provided by vaccination against foot and mouth disease (FMD) virus. To this end, blood samples were collected before challenge and after challenge, weekly, for seven weeks, from ten seropositive cows without PL, from ten seropositive cows expressing PL, and from ten seronegative cows. We evaluated the quantitative changes of different subpopulations of leukocytes; the function of B lymphocytes, through the quantification of different isotypes of immunoglobulins (Ig) serum concentration; the rate of lymphocyte proliferation; the rate of cell death by apoptosis or necrosis; and the serum concentrations of interleukin-10 (IL-10), IL-12, inteferon-&gamma; (IFN-&gamma;), and tumor necrosis factor-&alpha; (TNF-&alpha;). It was verified the normality of distribution of the results using the Anderson-Darling test, and their homoscedasticity, using the F test (for data with normal distribution) or the Levene test (for data without normal distribution). For the evaluation of differences between the average results, according respectively to the presence or absence of homoscedasticity, we used, for data with normal distribution, One-way ANOVA test, followed by the Tukey-Kramer test or the t test, and, for data without normal distribution, the Mann-Whitney test or the Kruskal-Wallis test. Results with p&le;0.05 were considered statistically significant. There were no differences related to serum IgG1, IgM, and IgA concentrations, both among sampling time and, every time, among animals belonging to different groups. IgG2 serum concentrations increased after vaccination in all animals (p<0.05). However, in animals expressing PL, each collection time, 17 days after antigen challenge, IgG2 serum concentration was lower (p<0.01) than those observed in animals belonging to other groups, indicating that animals with PL present less intense and less enduring humoral response. It was observed that there was an increase in the rate of lymphocyte proliferation (p<0.01) 24 days after vaccination against FMD virus, irrespective of the presence of infection by BLV. From this moment, there was an increase in the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes (p<0.05) and a subsequent decrease in serum IgG2 (p<0.05), indicating regulation of this humoral response by &gamma;&sigma;-lymphocytes. In cattle with PL, the increase in the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes was higher (p<0.05), leading to more intense and earlier decrease in IgG2 serum concentration. It was found that PL is due to a lower rate of apoptosis, since the percentage of leukocytes undergoing apoptosis was lower (p&le;0.001) among cells obtained from animals expressing PL, when compared to those collected from animals from the other groups. It was found that serum concentrations of Th1 cytokines, specifically IL-12 and IFN-&gamma;, were higher in blood samples from nonlymphocytotic infected animals (p<0.01), whereas serum concentrations of Th2 cytokines, particularly IL-10 and TNF-&alpha;, were higher in blood samples from infected animals expressing LP (p<0.01), indicating that changes in serum cytokines profile may be a cause or a consequence of PL. IL-10 (p<0.01), TNF-&alpha; (p=0.005), and IFN-&gamma; (p<0.01) serum concentrations increased three days after the challenge, and IL-12 serum concentration increased (p<0.001), ten days after the challenge. The increase in IL-10 serum concentration lasts until 31 days after the challenge and may account for the higher rate of &gamma;&sigma;-lymphocyte proliferation found from 31 days after vaccination. It was observed that the majority of circulating B lymphocytes in cattle consists of B1 lymphocytes and that, in BLV-infected animals, PL occurs due to an increase in the percentage of B1a lymphocytes (p<0.05). Moreover, in lymphocytotic BLV-infected animals, the rate between helper and cytotoxic Tlymphocytes are smaller (p<0.01) and the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes is greater (p<0.01), indicating viral activity in infected cells. Thus, results allow us to conclude that lymphocytotic BLV-infected animals show changes in the immune response after vaccination against FMD virus.

O vírus da leucose enzoótica bovina (VLEB) pode interferir na proporção e na funcionalidade dos linfócitos B e das demais células sanguíneas. Acreditando-se que essas alterações pudessem interferir nos mecanismos de defesa da glândula mamária, o presente estudo avaliou funcionalmente os fagócitos sanguíneos e lácteos de vacas naturalmente infectadas pelo VLEB, por meio da expressão de diferentes receptores de superfície celular de fagócitos e linfócitos; da morte celular dos fagócitos e do linfócito B; pelo potencial de fagocitose e produção intracelular de peróxido de hidrogênio pelas células CD14+ e CH138+. Foram selecionadas nove vacas negativas para a LEB (grupo negativo), dez positivas sem linfocitose (grupo AL) e seis positivas com linfocitose persistente (grupo LP). Independente do perfil hematológico das vacas positivas para a LEB, nas amostras de sangue foram observadas menor expressão de células mononucleares CD14+, de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B CD21+ CD11b+ e maior expressão de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T auxiliares (CD3+ CD4+) e de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b- e maiores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+. Menores quantidades de linfócitos B CD21+ CD5+ foram observados nas vacas do grupo AL do que nas vacas do grupo negativo. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelas células mononucleares CD14+, menor produção de peróxido de hidrogênio e menores índices de fagocitose por Staphylococcus aureus pelas células polimorfonucleares CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram menores índices de necrose, de apoptose e/ou necrose e maior viabilidade das células mononucleares CD14+, das células polimorfonucleares CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Apenas os linfócitos B (CD21+) das vacas do grupo LP apresentaram menores índices de morte por apoptose, e as células mononucleares CD14+ das vacas do grupo AL manifestaram maiores índices de apoptose e/ou necrose do que as vacas negativas. Independente do perfil hematológico das vacas, nas amostras de leite foram observadas maiores quantidades de macrófagos e maiores expressões de linfócitos T (CD3+) e de linfócitos B (CD21+). As vacas do grupo AL apresentaram maior quantidade de linfócitos B (CD21+) do que as vacas negativas. As vacas do grupo LP apresentaram menores quantidades de linfócitos T citotóxicos (CD3+ CD8+), de linfócitos B CD21+ CD11b+ e de linfócitos B CD21+ CD5+ CD11b+ e maior quantidade de linfócitos B CD21+ CD5- CD11b-. As vacas do grupo AL apresentaram menores índices de fagocitose por Escherichia coli pelos macrófagos CD14+ e pelos leucócitos CH138+ e as vacas do grupo LP apresentaram maior produção de peróxido de hidrogênio intracelular. As vacas positivas para LEB apresentaram maiores índices de morte por necrose dos macrófagos CD14+ e dos linfócitos B (CD21+) e menores índices de morte por apoptose dos macrófagos CD14+, dos leucócitos CH138+ e dos linfócitos B (CD21+). Estas vacas também apresentaram maior viabilidade dos macrófagos CD14+ e dos leucócitos CH138+. As vacas do grupo LP apresentaram maiores índices de apoptose e/ou necrose dos macrófagos CD14+, de necrose de leucócitos CH138+ e de viabilidade de linfócitos B (CD21+). Resultados permitem concluir que a o VLEB altera a resposta imune da glândula mamária. / The enzootic bovine leukemia virus (BLV) can influence the amount of lymphocytes B and other blood cells and their functions. Believing that these changes could interfere in the defense mechanisms of the mammary gland, this study evaluated blood and milk phagocytes functions from cows naturally infected VLEB through the expression of different cell surface receptors of phagocytes and lymphocytes; from death cell of phagocytes and B lymphocytes; the phagocytosis and intracellular production of hydrogen peroxide by CD14+ and CH138+ cells. We chose nine cows negative for the LEB (negative group), ten positive without lymphocytosis (LA group) and six positive with persistent lymphocytosis (LP group). In blood samples of positive cows for BLV, it was observed smaller expression of CD14+ mononuclear, T lymphocytes (CD3+) and CD21+ CD11b+ B lymphocytes, along with increased expression of B lymphocytes (CD21+). Cows of the LP group had lower amounts of T helper lymphocytes (CD3+ CD4+) and CD21+ CD5- CD11b- B lymphocytes and higher amounts of CD21+ CD5+ CD11b+ B lymphocytes. In cows of AL group it was observed lower amounts of CD21+ CD5+ B lymphocytes than in cows of negative group. Cows of LP group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ mononuclear cells, lower intracellular production of hydrogen peroxide and lower rates of phagocytosis of Staphylococcus aureus by CH138+ polymorphonuclear cells. Cows of LP group showed less necrosis, apoptosis and/or necrosis and increased viability of CD14+ mononuclear cells, CH138+ polymorphonuclear cells and B lymphocytes (CD21+). Only the B-lymphocytes (CD21+) of the cows in the LP group showed less apoptosis, and CD14 + mononuclear cells from cows in the AL group showed higher rates of apoptosis and/or necrosis than the ones from negative cows. In the milk sample, the positive cows showed higher amounts of macrophages and increased expression of T lymphocytes (CD3+) and B lymphocytes (CD21+). Cows of AL group showed a higher amount of B lymphocytes (CD21+) than negative cows. Cows of LP group had lower amounts of T cytotoxic lymphocytes (CD3+, CD8+), CD21+ CD11b+ B lymphocytes and CD21+, CD5+, CD11b+, B lymphocytes and increased amount of CD21 + CD5- CD11b- B lymphocytes. Cows of the AL group had lower rates of Escherichia coli phagocytosis by CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes and cows of group LP had higher production of intracellular hydrogen peroxide. The positive cows for LEB had higher rates of death by necrosis of CD14+ macrophages and B lymphocytes (CD21+) and lower rates of apoptosis of CD14+ macrophages, CH138+ leukocytes and B lymphocytes (CD21+). These cows also had higher viability of CD14+ macrophages and CH138+ leukocytes. Cows on the LP group had higher rates of apoptosis and/or necrosis of CD14+ macrophages, necrosis of CH138+ leukocytes and viability of B lymphocytes (CD21+). Results suggested that the VLEB influence the immune response of the mammary gland.

A Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB) é uma enfermidade neoplásica, infectocontagiosa, pluri-sintomática, de evolução crônica, que compromete os órgãos linfopoiéticos e está associada ao desenvolvimento de linfocitose persistente (LP) e linfossarcoma. Acarreta diminuição na produção, quer por seus efeitos danosos diretos, quer pelos indiretos. No entanto, seu efeito na função e na quantidade das diferentes subpopulações de linfócitos, assim como seu papel no estabelecimento de outras doenças oportunistas, ainda não está claro. O presente estudo avaliou a resposta imunitária de bovinos da raça Holandês Preto e Branco naturalmente infectados pelo vírus da LEB (VLB), após desafio antigênico fornecido por vacinação contra o vírus da febre aftosa. Para tal, foram coletadas amostras sanguíneas antes do desafio e, após o desafio, semanalmente, por sete semanas, de dez vacas soropositivas, sem LP; de dez vacas soropositivas, manifestando LP; e de dez vacas soronegativas. Foram avaliadas as alterações quantitativas das diferentes subpopulações de leucócitos circulantes; a função dos linfócitos B, por meio da quantificação de diferentes isotipos de imunoglobulinas (Ig) séricas; os índices de proliferação linfocitária; os índices de morte celular por apoptose ou por necrose; e as concentrações séricas de interleucina-10 (IL-10), IL-12, inteferon- (IFN-&gamma;) e fator de necrose tumoral-&alpha; (TNF-&alpha;). Foi verificada a normalidade da distribuição dos resultados obtidos, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F (para dados que apresentaram distribuição normal) ou do teste de Lavene (para dados que não apresentaram distribuição normal). Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, de acordo, respectivamente, com a ocorrência ou não de homoscedasticidade, foram feitos, para dados com distribuição normal, os testes de análise de variância (One-way ANOVA), seguida do teste de Tukey-Kramer ou o teste t; e, para dados que não apresentaram distribuição normal, o teste de Mann-Whitney ou o teste de Kruskal-Wallis. Para todos os resultados, foram consideradas significantes as análises que apresentaram p&le;0,05. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações séricas de IgG1, de IgM e de IgA, tanto entre os tempos de coleta, quanto, a cada tempo, entre animais pertencentes aos diferentes grupos. As concentrações séricas de IgG2 aumentaram, após a vacinação, em todos os animais (p<0,05). Todavia, 17 dias após o desafio antigênico, as concentrações séricas de IgG2, em animais manifestando LP foram, a cada tempo de coleta, menores (p<0,01) que aquelas verificadas nos animais pertencentes aos demais grupos, indicando que animais com LP apresentam resposta humoral menos intensa e menos duradoura. Observou-se que ocorreu um aumento no índice de proliferação de linfócitos sanguíneos (p<0,01), 24 dias após a vacinação contra o vírus da febre aftosa, independente da presença de infecção pelo VLB. A partir deste momento, ocorre um aumento na porcentagem de linfócitos &gamma;&sigma; circulantes (p<0,05) e posterior diminuição nas concentrações séricas de IgG2 (p<0,05), indicando regulação desta resposta humoral por linfócitos &gamma;&sigma;. Em bovinos com LP, o aumento na porcentagem de linfócitos circulantes foi maior (p<0,05), ocasionando diminuição mais intensa e mais precoce nas concentrações séricas de IgG2. Constatou-se que a LP ocorre em decorrência de menor índice de apoptose, posto que as porcentagens de leucócitos sofrendo processo de apoptose foram menores (p&le;0,001) entre as células obtidas de animais manifestando LP, do naquelas coletadas dos animais pertencentes aos demais grupos. Verificou-se que as concentrações séricas das citocinas de perfil Th1, IL-12 e IFN-&gamma;, são maiores em amostras sangüíneas de animais infectados pelo VLB, alinfocitóticos (p<0,01), ao passo que as concentrações séricas das citocinas de perfil Th2, IL-10 e TNF-&alpha;, são maiores em amostras sangüíneas de animais infectados manifestando LP (p<0,01), indicando que alterações no perfil sérico de citocinas podem ser causa ou consequência da LP. Em resposta ao desafio vacinal, ocorre uma elevação nas concentrações séricas de IL-10 (p<0,01), de TNF-&alpha; (p=0,005) e de IFN-&gamma; (p<0,01), três dias após o desafio, e de IL-12 (p<0,001), dez dias após o desafio. A elevação na concentração sérica de IL-10 perdura até 31 dias após o desafio e pode ser responsável pelo maior índice de proliferação de linfócitos &gamma;&sigma; verificado a partir de 31 dias após a vacinação. Foi observado que a maioria dos linfócitos B circulantes, em bovinos, consiste de linfócitos B1 e, em animais infectados pelo VLB, a LP ocorre em decorrência de um aumento na porcentagem de linfócitos B1a (p<0,05). Além disso, em animais infectados pelo VLB, apresentando LP, as relações entre linfócitos T auxiliares e citotóxicos são menores (p<0,01) e a porcentagem de linfócitos &gamma;&sigma; é maior (p<0,01), indicando atividade viral nas células infectadas. Assim, os resultados permitem-nos concluir que animais infectados pelo VLB, manifestando LP, apresentam alterações na resposta imunitária frente vacinação contra o vírus da febre aftosa. / Enzootic Bovine Leukosis (EBL) is an infectious, multi-symptomatic, chronic, neoplastic disease, which undermines the lymphopoietic organs and is associated with the development of persistent lymphocytosis (PL) and lymphosarcoma. Infected animals present a decrease of production, either by its direct or its indirect harmful effects. However, its effect on the function and quantity of different lymphocyte subpopulations, as well as its role in the establishment of other opportunistic diseases, are unclear. This study evaluated the immune response of Holstein dairy cattle naturally infected with Bovine Leukosis Virus BLV, after antigen challenge provided by vaccination against foot and mouth disease (FMD) virus. To this end, blood samples were collected before challenge and after challenge, weekly, for seven weeks, from ten seropositive cows without PL, from ten seropositive cows expressing PL, and from ten seronegative cows. We evaluated the quantitative changes of different subpopulations of leukocytes; the function of B lymphocytes, through the quantification of different isotypes of immunoglobulins (Ig) serum concentration; the rate of lymphocyte proliferation; the rate of cell death by apoptosis or necrosis; and the serum concentrations of interleukin-10 (IL-10), IL-12, inteferon-&gamma; (IFN-&gamma;), and tumor necrosis factor-&alpha; (TNF-&alpha;). It was verified the normality of distribution of the results using the Anderson-Darling test, and their homoscedasticity, using the F test (for data with normal distribution) or the Levene test (for data without normal distribution). For the evaluation of differences between the average results, according respectively to the presence or absence of homoscedasticity, we used, for data with normal distribution, One-way ANOVA test, followed by the Tukey-Kramer test or the t test, and, for data without normal distribution, the Mann-Whitney test or the Kruskal-Wallis test. Results with p&le;0.05 were considered statistically significant. There were no differences related to serum IgG1, IgM, and IgA concentrations, both among sampling time and, every time, among animals belonging to different groups. IgG2 serum concentrations increased after vaccination in all animals (p<0.05). However, in animals expressing PL, each collection time, 17 days after antigen challenge, IgG2 serum concentration was lower (p<0.01) than those observed in animals belonging to other groups, indicating that animals with PL present less intense and less enduring humoral response. It was observed that there was an increase in the rate of lymphocyte proliferation (p<0.01) 24 days after vaccination against FMD virus, irrespective of the presence of infection by BLV. From this moment, there was an increase in the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes (p<0.05) and a subsequent decrease in serum IgG2 (p<0.05), indicating regulation of this humoral response by &gamma;&sigma;-lymphocytes. In cattle with PL, the increase in the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes was higher (p<0.05), leading to more intense and earlier decrease in IgG2 serum concentration. It was found that PL is due to a lower rate of apoptosis, since the percentage of leukocytes undergoing apoptosis was lower (p&le;0.001) among cells obtained from animals expressing PL, when compared to those collected from animals from the other groups. It was found that serum concentrations of Th1 cytokines, specifically IL-12 and IFN-&gamma;, were higher in blood samples from nonlymphocytotic infected animals (p<0.01), whereas serum concentrations of Th2 cytokines, particularly IL-10 and TNF-&alpha;, were higher in blood samples from infected animals expressing LP (p<0.01), indicating that changes in serum cytokines profile may be a cause or a consequence of PL. IL-10 (p<0.01), TNF-&alpha; (p=0.005), and IFN-&gamma; (p<0.01) serum concentrations increased three days after the challenge, and IL-12 serum concentration increased (p<0.001), ten days after the challenge. The increase in IL-10 serum concentration lasts until 31 days after the challenge and may account for the higher rate of &gamma;&sigma;-lymphocyte proliferation found from 31 days after vaccination. It was observed that the majority of circulating B lymphocytes in cattle consists of B1 lymphocytes and that, in BLV-infected animals, PL occurs due to an increase in the percentage of B1a lymphocytes (p<0.05). Moreover, in lymphocytotic BLV-infected animals, the rate between helper and cytotoxic Tlymphocytes are smaller (p<0.01) and the percentage of &gamma;&sigma;-lymphocytes is greater (p<0.01), indicating viral activity in infected cells. Thus, results allow us to conclude that lymphocytotic BLV-infected animals show changes in the immune response after vaccination against FMD virus.

Diferentes populações de leucócitos desempenham papeis fundamentais na eliminação de agentes invasores através da sua fagocitose e destruição, utilizando-se de mecanismos dependentes (metabolismo oxidativo) e independentes de oxigênio. Baseando-se na hipótese de que o vírus da Leucose Enzoótica Bovina, uma enfermidade crônica, que afeta, particularmente, os órgãos ricos em tecido linfóide destes animais, altera quantitativa e qualitativamente as subpopulações de leucócitos circulantes dos bovinos, influenciando na qualidade da resposta imunológica inata destes animais, o presente estudo avaliou a produção intracelular de peróxido de hidrogênio (H2O2) por leucócitos circulantes, frente estímulo in vitro com forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), lipopolissacarídeos de Escherichia coil (LPS) e após fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (Sa-PI). Para tal, células foram obtidas de cinco vacas negativas no diagnóstico para LEB, de cinco vacas naturalmente infectadas pelo vírus da leucose bovina (VLB), alinfocitóticas, e de cinco vacas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP), e analisadas por citometria de fluxo. Foi averiguada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F ou do teste de Lavene. Para a análise das freqüências observadas, foi utilizado o teste Qui-quadrado. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram feitos os testes de análise de variância (One-way ANOVA), de Tukey-Kramer, teste t de Student, de Mann-Whitney ou de Kruskal-Wallis. A porcentagem média total de células produzindo H2O2, caracterizada pela intensidade de fluorescência da 2,7-diclorofluoresceína, no ensaio sem estímulo in vitro, de 30,60%, foi menor (p=0,005) que aquela observada no ensaio com adição in vitro de LPS, de 52,00%, e que aquela obtida no ensaio com adição in vitro de PMA, de 63,13%. A porcentagem média total de células produzindo H2O2 no ensaio com estímulo por fagocitose in vitro de SaPI, de 47,47%, não diferiu da observada no ensaio sem estímulo. As porcentagens médias totais de células produzindo H2O2 não diferiram entre os ensaios em que houve prévio estímulo in vitro. Não houve diferença na porcentagem de leucócitos que estavam produzindo H2O2, entre os grupos experimentais, todavia, a produção intracelular média de H2O2, sem estímulo in vitro (p=0,007), após adição in vitro de PMA (p<0,001), de LPS (p=0,001) ou após fagocitose (p=0,002), de leucócitos obtidos de animais apresentando LP, foi menor que aquela verificada em células provenientes de animais soronegativos e de animais soropositivos alinfocitóticos. A porcentagem de leucócitos realizando fagocitose, caracterizada pela intensidade de fluorescência do iodeto de propídio, entre as células obtidas de animais com LP, de 7,20%, foi menor que aquela verificada nas amostras coletadas de animais soronegativos, de 12,90%, e soropositivos alinfocitóticos, de 14,70% (p=0,047). Além disso, as células provenientes de animais com LP apresentaram uma menor intensidade de fagocitose que aquela observada em leucócitos de animais soronegativos e soropositivos alinfocitóticos (p<0,001). Assim, os resultados obtidos demonstram uma vulnerabilidade funcional em leucócitos sangüíneos obtidos de animais infectados pelo VLB, manifestando LP. / Different leukocyte populations play key roles on the elimination of foreign antigens through phagocytosis and killing by oxygen-independent and -dependent (respiratory burst) mechanisms. Assuming that Enzootic Bovine Leukosis virus (BLV), that causes a chronic disease, and affects, mainly, lymphoid tissues, alters bovine circulating leukocyte subpopulations quantitatively and qualitatively, and influences the innate immune response, this study evaluated the intracellular production of hydrogen peroxide (H2O2) of circulating leukocytes after in vitro stimuli with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS), or phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa). Cells were obtained from five BLV-negative cows, five naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows, and five BLV-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), and analyzed by flow cytometry. Normality was tested using the Anderson-Darling test, followed by an F test or a Lavene\'s test to analyze the equality of variances. Differences among frequencies were tested using the Qui-square test. Differences among means were verified by a one way analysis of variance (ANOVA), followed by a Turkey-Kramer test, or a Student t-test, a Mann-Whitney U-test, or a Kruskal-Wallis test. Mean total percentage of H2O2-producing cells, characterized by the intensity of 2,7-dichlorofluorescein fluorescence, in the assay without in vitro stimulus (30.60%) was smaller (p=0.005) than that verified in the assay after in vitro addition of LPS (52.00%), and after addition of PMA (63.13%). Mean total percentage of H2O2-producing cells in the assay with stimulus by in vitro phagocytosis of PI-Sa (47.47%) was not different from that verified in the assay without in vitro stimulus. Mean total percentages of H2O2-producing leukocytes did not differ among assays with previous in vitro stimuli. There was no difference in the percentages of H2O2-producing leukocytes, among cells obtained from cows that belonged to different groups. However, mean intracellular H2O2-production of leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, without in vitro stimulus (p=0.007), after in vitro addition of PMA (p<0.001), or LPS (p=0.001), or after phagocytosis (p=0.002) was smaller than that verified in leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. The percentage of leukocytes that were carrying out phagocytosis, characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence, among cells obtained from BLV-infected cows, presenting PL (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected and from BLV-infected (12.90%), non-lymphocytotic (14.70%), cows. Furthermore, leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (p<0.001) than leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. Therefore, results show a functional vulnerability of circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows.

Foi demonstrado o envolvimento das espécies reativas de oxigênio (ERO) na patogênese de algumas retroviroses, levando muitas vezes à progressão e/ou persistência das mesmas. No entanto, o papel das espécies reativas de oxigênio resultante da modulação do sistema antioxidante, e seu envolvimento na infecção de bovinos naturalmente infectados pelo VLEB, até o presente trabalho, não tinha sido ainda investigado. Desta forma, o presente estudo objetivou-se avaliar o envolvimento do estresse oxidativo na infecção pelo VLEB em bovinos naturalmente infectados, associado ou não ao estabelecimento da linfocitose persistente (LP). Assim, a avaliação do estresse oxidativo se deu pelo teor de malondialdeído, concentração de glutationa reduzida, atividade da glutationa peroxidase e da superóxido dismutase, e pela atividade antioxidante total; e a resposta imune pela quantificação das subpopulações de linfócitos, função fagocítica e produção intracelular de peróxido de hidrogênio de leuccitos polimorfonucleares, morte celular e proliferação linfocitária, além da avaliação hematológica e sorodiagnóstico da leucose enzoótica bovina (LEB). Os resultados do presente estudo apontaram para o envolvimento do estresse oxidativo na infecção pelo vírus da leucose enzoótica bovina, dado pela menor concentração de glutationa peroxidase e a tendência a menor atividade da superxido dismutase eritrocitárias nos animais infectados pelo VLEB, não podendo, contudo, ser associado à fase da infecção. Ademais, os marcadores de estresse oxidativo não apresentaram alterados nem sequer a atividade antioxidante total destes animais. Além disso, o presente trabalho apontou para menor proliferação de linfócitos e redução da apoptose de células CD5+ nos animais infectados pelo VLEB manifestando LP, corroborados pelo significante aumento da população de linfcitos B (CD21+), e dos principais co-marcadores das células infectadas, no caso células CD5+ e CD11b+, nestes animais. No entanto, não observou diferenças significativas na população de linfócitos T destes animais, nem sequer alteração da capacidade fagocítica e produção intracelular de peróxido de hidrogênio pela população de leucócitos polimorfonucleares nos animais infectados. / Abundant observations of multiple pathogenic interactions between reactive oxygen species (ROS) and the pathogenesis of some retroviruses have drawn attention to role of ROS on disease progression and/or persistence of infection. Therefore, the role of the oxidative stress resulted from the modulation of the antioxidant system in dairy cows naturally infected with BLV has not been studied yet. So, the present study tries to investigate the involvement of oxidative stress in dairy cows naturally infected with BLV associated or not with the persistent lymphocytosis (PL). Thus, the oxidative stress was evaluated by the malondialdehyde, reduced glutathione content, and by the activity of glutathione peroxidase and superoxide dismutase, and also total antioxidant activity. The immune response was also evaluated by the quantification of lymphocyte subsets, lymphocyte proliferation, polymorfonuclear leukocytes phagocytosis and intracellular hydrogen peroxide production, and cell death. The results of the present work point out to an involvement of oxidative stress in dairy cows naturally infected with BLV, given by a lower glutathione peroxidase activity and also a tendency towards lower superoxide dismutase activity, but it can be not associated with PL. Futhermore, the oxidative stress markers and also the total antioxidant status was not altered in infected animals. The present study also showed a lower lymphocyte proliferarion and apoptosis rates of CD5+ cells, strengthen by a higher B cells (CD21+) counts and also by a significant augment of CD5+ and CD11b+ positive cells that are often co-expressed by the infected cells. Although, no significant difference was observed in T cells counts. Moreover, the phagocytosis rates and the intracellular hydrogen peroxide production by the polymorphonuclear leukocytes are not altered in BLV infected dairy cows.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_clarissa_castro.pdf: 569054 bytes, checksum: b9876922c1664dec56ef9c9d4ff5cb3a (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / The enzootic bovine leukosis is an illness caused by the bovine leukosis virus (BLV) which provokes a persistent infection in cattle and is responsible for significant economical losses to the bovines, mainly dairy cattle. It is widely spread in Brazilian cattle and it can come up in three forms: asymptomatic infection, persistent lymphocytosis and lymphosarcoma. The animals that have antibodies against the BLV must be eliminated or separated from the rest of the cattle, because they are carriers and disseminators of the virus during all their lifetimes. The diagnosis of this disease is essential for control and eradication strategies based on the segregation of infected animals in order to avoid or attenuate the transmission of the virus, and consequently, minimize the economical losses caused by the disease. During the BLV infection antibodies are produced against the main viral proteins, gp 51, gp 30 (envelope glicoproteins) and p24 (capsid protein). The agar gel immunodiffusion (AGID) and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) tests are the most used for diagnosis. In this report the immunoperoxidase technique (peroxidase linked assay - PLA) was evaluated in order to detect antibodies against the BLV. The results obtained in the PLA were compared with the AGID test and the specificity of the positive ones was confirmed by the Western blotting (WB) technique. Two hundred and one bovine serum samples of cattle coming from the city of Pelotas were tested: 59% (119) were positive in PLA and 26% (53) were positive in AGID. All the AGID positive samples were also PLA positive. From the 32,8% (66) of the conflicting serum results just eight were confirmed as positive in WB, indicating that the rest of the results were false-positive and showing that AGID failed in identifying 4% of the BLV positive animals. The PLA technique for the diagnosis of the BLV infection demonstrated to be very useful to use in control programs because it was more sensitive when compared to the AGID technique. However, the occurrence of false-positive results by the PLA makes its use unviable in eradication programs that involve the sacrifice of seropositive animals. / A leucose enzoótica dos bovinos (EBL) é uma enfermidade causada pelo vírus da leucose bovina (BLV), que ocasiona uma infecção persistente em bovinos, e é responsável por perdas econômicas significativas à pecuária, principalmente a leiteira. Amplamente disseminada no rebanho brasileiro, pode ser manifestada de três formas: aleucêmica, linfocitose persistente e linfossarcoma. Os animais com anticorpos contra o BLV deverão ser eliminados ou separados do restante do rebanho, pois significa que são portadores e disseminadores do vírus por toda a vida. O diagnóstico desta doença é essencial para estratégias de controle e erradicação baseadas na segregação de animais infectados no intuito de evitar ou amenizar a transmissão do vírus e, consequentemente, minimizar as perdas econômicas causadas pela doença. Durante a infecção pelo BLV são produzidos anticorpos contra as principais proteínas virais, gp51, gp30 (glicoproteínas do envelope) e p24 (proteína do capsídeo). O teste de imunodifusão em gel de ágar (agar gel immunodiffusion AGID) e o ensaio imunoenzimático (enzyme-linked immunosorbent assay ELISA) são os mais utilizados para diagnóstico. No presente trabalho foi avaliada a técnica de imunoperoxidase (peroxidase linked assay PLA) na detecção de anticorpos contra o BLV. Os resultados obtidos na PLA foram comparados com o teste de AGID e a especificidade dos positivos confirmada pela técnica de Western blotting (WB). Foram testadas 201 amostras de soro de bovinos provenientes de propriedades localizadas no município de Pelotas: 59% (119) foram positivos por PLA e 26% (53) positivos por AGID. Todas as amostras positivas na AGID foram também positivas na PLA. Dos 32,8% (66) dos soros com resultados conflitantes apenas oito foram confirmados como positivos no WB, indicando serem falso-positivos os demais resultados e constatando que a AGID falhou em identificar 4% de animais positivos para EBL. A técnica de PLA para diagnóstico de infecção pelo BLV se mostrou muito útil para uso em programas de controle devido à maior sensibilidade da técnica quando comparada com o teste de AGID. Contudo, a ocorrência de resultados falso-positivos pela PLA inviabiliza o seu uso em programas de erradicação que envolva o sacrifício do animal soropositivo.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The epidemiological, clinical and pathological aspects of 128 cases of bovine lymphoma are retrospectively described in this study (1965-2014).Out of the cases were the gender was informed (n=111), 84.7% of affected animals were females and 15.3% were males. Out of the cases were breed was informed (n=108), 63% of affected animals were Holstein cows. The age of affected cows (n=107) varied from 1 to 14 years, with most animals being adults (80.4%) with 5 to 8 years of age (57.9%). The most common clinical sign (n=89) was lymphadenomegaly (74.1%). Gross findings (n=125) included enlargement of lymph nodes in 71.2% of the cases; this finding was classified as localized in 89.6% of the cases and generalized in 10.3% of the cases. A retrospective study of 86 cases of bovine lymphoma classified as with diffuse pattern of distribution and verified by phenotypic (histology) and immunophenotypic (immunohistochemistry [IHC]) is presented. Based on these results, the lymphoma cases were classified by the Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin s Lymphomas for Clinical Usage as: diffuse large non-cleaved cell (46.5%), diffuse large cleaved cell (33.7%), diffuse mixed small and large cell (4.6%), diffuse small cell plasmacytoid (7%), immunoblastic (3.5%), diffuse small cell intermediate (2.3%), diffuse small non-cleaved cell (1.2%), and diffuse small non-cleaved cell Burkitt s (1.2%). According to the IHC, 27 out of 86 (31.4%) lymphomas were positive to monoclonal antibody CD79αcy, used to detect B cells, and none were positive for polyclonal antibody CD3, used to detect T cells. Based on this, the B-cell type lymphomas were distributed as follows: diffuse large B-cell lymphoma (81.5%), large cell immunoblastic lymphoma (11.1%), and lymphoplasmacytoid lymphoma (7.4%), according the Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL). The results of this retrospective study, similar to what has been described in other parts of the world, allow us to conclude that bovine lymphomas are basically diffuse and predominantly made of intermediate-grade, large cells, with cleaved or non-cleaved nuclei. These lymphomas are due to neoplastic proliferation of B cells and correspond to almost all (92.6%) to what is currently classified as diffuse large B-cell lymphoma by REAL. / Foi realizado um estudo retrospectivo dos arquivos do Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM) com base nos casos de necropsia e materiais de necropsia de bovinos dos últimos 50 anos (1965-2014). Foram incluídos nesse estudo somente os laudos que possuíam o diagnóstico de linfoma (n=128). Dos laudos que informavam o sexo (n=111), 84,7% correspondiam a fêmeas e 15,3% a machos. Dos laudos em que constava a raça (n=108), a mais prevalente foi a holandesa (63%). Em relação à idade (n=107), houve uma variação entre um e 14 anos. A maioria dos bovinos era adulta (80,4%) e a maior concentração dos casos ocorreu entre 5-8 anos (57,9%). Clinicamente (n=89), linfadenomegalia foi o achado mais frequentemente observado (74,1%). Na necropsia (n=125), 71,2% dos bovinos apresentavam aumento de volume dos linfonodos; essa linfadenomegalia foi classificada como localizada em 89,6% dos casos e generalizada em 10,3% dos casos. Realizou-se também a avaliação fenotípica (histologia) e imunofenotípica (imuno-histoquímica [IHQ]) de 86 casos de linfoma bovino. Com base nestes resultados, os linfomas foram assim distribuídos utilizando-se a classificação proposta pela Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin s Lymphomas for Clinical Usage: difuso de grandes células não clivadas (46,5%), difuso de grandes células clivadas (33,7%), difuso de pequenas e grandes células (4,6%), difuso de pequenas células tipo plasmocitoide (7%), imunoblástico (3,5%), difuso de pequenas células tipo intermediário (2,3%), difuso de pequenas células não clivadas (1,2%) e difuso de pequenas células não clivadas tipo Burkitt (1,2%). Na IHQ, 27 dos 86 (31,4%) linfomas foram positivos para o anticorpo monoclonal CD79αcy, utilizado para detecção de linfócitos B, e nenhum caso foi positivo para o anticorpo policlonal CD3, utilizado para detecção de linfócitos T. Com base nestes resultados, os linfomas B foram assim distribuídos utilizando-se a Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL): linfoma difuso de grandes células B (81,5%), linfomas imunoblásticos de grandes células (11,1%) e linfomas linfoplasmocíticos (7,4%). Os resultados aqui apresentados permitem concluir que à semelhança do que vem sendo descrito em outras partes do mundo, os linfomas bovinos são basicamente difusos e predominantemente de grau intermediário, de grandes células, com núcleos clivados ou não clivados. Esses linfomas são decorrentes da proliferação neoplásica de linfócitos B e correspondem, em sua quase totalidade (92,6%), ao que atualmente é incluído na REAL como linfoma difuso de grandes células B.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-05-11T15:29:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Marilia_Carvalho.pdf: 854756 bytes, checksum: 8b327668b2ab1f2615a6a8f3f2dd9304 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-12T12:17:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Marilia_Carvalho.pdf: 854756 bytes, checksum: 8b327668b2ab1f2615a6a8f3f2dd9304 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T12:17:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Marilia_Carvalho.pdf: 854756 bytes, checksum: 8b327668b2ab1f2615a6a8f3f2dd9304 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-05-20 / Sem bolsa / Esta dissertação está apresentada na forma de um artigo científico cujo o objetivo de estudo foi determinar a prevalência e incidência de Leucose Enzoótica Bovina (LEB) e Diarréia Viral Bovina (DVB), avaliando a dinâmica de transmissão de enfermidades virais em um centro de recria de novilhas leiteiras submetidas a Pastoreio Racional Voisin (PRV). Estas doenças virais têm grande impacto econômico na criação de bovinos leiteiros levando a queda na produção leiteira e imunossupressão pré-dispondo as novilhas a outras infecções. Para detecção de anticorpos contra Leucose Enzoótica Bovina foi realizado um teste de Imunodifusão em Agar Gel (IDGA) comercial. Nos animais soropositivos, foi realizado o leucograma pareado para a determinação de linfocitose persistente (LP). Para a determinação da prevalência do vírus da Diarréia Viral Bovina, foi realizado o teste de vírus neutralização(VN) com cepa citopática NADL (BVDV-1). A detecção de possíveis animais persistentemente infectados (PI) foi utilizada a técnica de RT-PCR. O lote experimental era composto por 179 animais de raças leiteiras e cruzas, divididos em cinco lotes por faixa etária e peso, não fixos, submetidos ao manejo pelo método do Pastoreio Racional Voisin (PRV). As taxas de prevalência iniciais para LEB e DVB foram de 3,91% e 51,98% respectivamente. Foram calculadas taxas de incidência para as duas doenças resultando em 21,51% para LEB e 11,77% para DVB. A dinâmica de transmissão da Diarréia viral Bovina foi relativamente, lenta justificada pela ausência de animais PI dentro do lote experimental. Constatou-se que dos 39 animais positivos para LEB ao final do período experimental, dez apresentaram linfocitose persistente (LP), ou seja, uma prevalência de 25,64%, considerada alta, elevando os riscos de transmissão do vírus para outros animais dentro do centro de recria. A intensificação do manejo das novilhas dentro do centro de recria aumenta os riscos de disseminação de destas doenças. Como formas de controle destas enfermidades no rebanho, sugeriu-se a identificação de animais LEB positivos com estratégias de manejo e utensílios separados dos animais negativos; quanto a DVB como não foram encontrados animais persistentemente infectados no rebanho a vacinação das novilhas na idade reprodutiva deve ser preconizada reduzindo o risco da ocorrência de animais PI nas unidades de produção após o retorno dos animais e evitando problemas reprodutivos. / This work is presented in the form of a scientific paper whose objective of the study was to determine the prevalence and incidence of Bovine Leukosis (LEB) and bovine viral diarrhea (DVB), evaluating the dynamics of transmission of viral diseases in a center for rearing dairy heifers Pastoreio Racional Voisin (PRV). These viral diseases have a significant economic impact on the creation of dairy cattle leading to reduced milk production and pre-arranging the heifers to other infections immunosuppression. For antibodies against Bovine Leukosis was carried out immunodiffusion test Agar Gel (AGID) commercial. In seropositive animals, was held the WBC paired for the determination of persistent lymphocytosis (PL). To determine the prevalence of bovine viral diarrhea virus, we performed the virus neutralization test (VN) with cytopathic strain NADL (BVDV-1). The detection of possible persistently infected (PI) animals was used for RT-PCR. The experimental plot consisted of 179 animals of dairy breeds and crosses, divided into five lots by age and weight, not fixed, subject to management by the method of grazing Rational Voisin (PRV). The initial prevalence rates for LEB and DVB were 3.91% and 51.98% respectively. Incidence rates were calculated for the two conditions resulting in LEB 21.51% and 11.77% for DVB. The dynamic transmission of bovine viral diarrhea was relatively slow explained by the absence of PI animals within the test batchIt was found that out of 39 animals positive for LEB the end of the trial, ten presented persistent lymphocytosis (LP), or a prevalence of 25.64%, which is considered high, increasing the risk of virus transmission to other animals within the center recreates. Intensified management of heifers in the center of growing increases the risk of spread of these diseases As ways to control these diseases in the herd, suggested the identification of positive LEB animals with separate management strategies and tools of negative animals; as the DVB as vaccination of heifers in the reproductive age persistently infected animals in the herd were not found to be recommended, reducing the risk of occurrence of animal IP in production units after the return of animals and avoiding reproductive problems.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T17:54:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaAnticorposContra.PDF: 1109270 bytes, checksum: c6ad182dbe76da3e60b8512f01c5f05a (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-22T13:59:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaAnticorposContra.PDF: 1109270 bytes, checksum: c6ad182dbe76da3e60b8512f01c5f05a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-22T13:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaAnticorposContra.PDF: 1109270 bytes, checksum: c6ad182dbe76da3e60b8512f01c5f05a (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A leucose bovina, a diarréia viral bovina e a rinotraqueite infecciosa bovina estão entre as principais viroses que levam a perdas na produtividade e no desempenho reprodutivo de ruminantes. Embora bovinos e bubalinos sejam frequentemente criados em conjunto e apesar da comprovada ocorrência dessas enfermidades em bubalinos, trabalhos sobre ocorrência natural dessas viroses nessa espécie ainda são escassos. Deste modo, objetivou-se verificar a ocorrência de anticorpos contra os vírus da Leucose enzoótica bovina (LEB), Diarreia viral bovina (BVD) e Rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) em bubalinos de criações localizadas nas Mesorregiões Nordeste Paraense, Metropolitana de Belém e do Marajó, no Estado do Pará, além de identificar os fatores de risco para a BVD em criações das Mesorregiões Nordeste Paraense e Metropolitana de Belém. No presente estudo foram avaliados 350 soros de bubalinos (Bubalus bubalis) procedentes de propriedades agropecuárias localizadas nas respectivas mesorregiões, que foram submetidos às técnicas de sorologia: imunodifusão para LEB e soroneutralização para BVD e IBR. A frequência para as respectivas doenças na população de estudo foram: 0% (0/350), 53,71% (188/350) e 91,71% (321/350). Bubalinos machos e animais com idade mais avançada apresentaram maior soropositividade para BVD. A frequência de bubalinos sororreagentes para BVD foi maior na Mesorregião do Marajó, em relação às Mesorregiões Nordeste Paraense e Metropolitana de Belém, enquanto para IBR foi maior nas Mesorregiões Nordeste Paraense e Metropolitana de Belém. Dentre as variáveis investigadas, o tipo de ordenha foi o único identificado como fator de risco para a ocorrência da BVD em bubalinos. / Bovine Leukosis, Bovine Viral Diarrhea and Infectious Bovine Rhinotracheitis are among the main viruses that lead to losses in productivity and reproductive performance of ruminants. Although cattle and buffalo are often created together, and despite the proven occurrence of these diseases in buffalo, papers about natural occurrence of these infections in this species are scarce. Thus, the objective of this study was to verify the occurrence of antibodies against the Bovine Leukosis Virus (BLV), Bovine Viral Diarrhea (BVD) and Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) in buffalo creations located in the “Paraense” Northeast Mesoregion, Greater Metropolitan Belém and Marajó Mesoregion, Pará, in addition to identify the risk factors for BVD in creations located in “Paraense” Northeast Mesoregion and Greater Metropolitan Belém. In this study 350 buffaloes (Bubalus bubalis) sera were evaluated, coming from farms located in each mesoregion, that were subjected to serological techniques: immunodiffusion for (BLV) and serum neutralizing for BVD and IBR. Frequency of the respective diseases in the study population were: 0% (0/350), 53,71% (188/350) and 91,71% (321/350). Male buffaloes and older animals had higher seropositivity for BVD. The frequency of BVD seroreagents buffaloes was higher in Marajó Mesoregion compared to “Paraense” Northeast Mesoregion and Greater Metropolitan Belém, whereas for IBR the opposite occurred. Among the variables investigated, the type of milking was the only identified as a risk factor for the occurrence of BVD in buffaloes.