Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-12-13T10:19:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1665204 bytes, checksum: 468a1926ff3e57bd4350a547188e5abd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T10:19:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1665204 bytes, checksum: 468a1926ff3e57bd4350a547188e5abd (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo avaliou a resposta pós-prandial de marcadores do metabolismo lipídico referente ao consumo de uma refeição com alto conteúdo de ácidos graxos saturados (RS) ou de ácidos graxos monoinsaturados (RM), em mulheres adultas saudáveis, com peso normal ou excesso de peso. Tratou-se de um estudo de intervenção aguda, aleatório e controlado, realizado no Laboratório de Metabolismo Energético e de Composição Corporal e no Laboratório de Bioquímica Nutricional do Departamento de Nutrição e Saúde da Universidade Federal de Viçosa, previamente aprovado pelo Comitê de Ética e Pesquisa com Seres Humanos da Universidade Federal de Viçosa (Of. Ref. no 184/2011 e CAAE 542.585/2014). Participaram do estudo 63 mulheres adultas (26,9 ± 6,1 anos), sendo 35 mulheres normopeso (NP, <30% de gordura corporal total – GCT) e 28 com excesso de peso (EP, ≥30% GCT), residentes na cidade de Viçosa – MG. No dia da intervenção, 37 voluntárias (21 NP e 16 EP) receberam RS (14,6% do valor calórico total – VCT – em carboidratos, 6,2% em proteínas e 88,7% em lipídios, sendo 47% desses em ácidos graxos saturados – AGS) e 26 voluntárias (14 NP e 12 EP) receberam RM (17,5% do VCT em carboidratos, 4,3% em proteínas e 78,2% em lipídios, sendo 72% desses em ácidos graxos monoinsaturados – AGMI). As refeições testes eram compostas de dois muffins à base de bacon e queijo (RS) ou à base de azeite de oliva e castanhas (RM), com VCT de 1008 kcal, acompanhados de 500 ml de água. Foram realizadas extrações de sangue nos tempos T0, T2, T3 e T5 que correspondem ao jejum e 2, 3 e 5 horas pós-prandiais, respectivamente. As concentrações de triacilgliceróis, complemento C3, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e perfil de ácidos graxos foram determinados em todos os tempos, mediante protocolo padronizado. Com base em revisão de literatura, após a intervenção com ácidos graxos monoinsaturados (AGMI), os autores têm encontrado um efeito benéfico em curto e em longo prazo como aumento das concentrações das frações de colesterol HDL e diminuição da fração LDL-C, amplamente conhecidos como fatores de proteção e risco, respectivamente para as doenças cardiovasculares. Como resultados do presente estudo, o aumento das concentrações do complemento C3 foi superior após RS, comparado a RM (área incremental abaixo da curva - iAUC = 4.365,5 ± 5.477,4 vs. 1.215,2 ± 882,4; p=0,006), sem diferenças entre os grupos NP e EP. Após o consumo de RM, a iAUC do complemento C3 foi maior no grupo com valores basais mais baixos de apolipoproteína A1, mostrando assim uma associação negativa entre eles (p=0,041). De modo interessante, após as 5 horas pós-prandiais os valores de ácido oleico plasmático continuaram elevados em relação ao valor de jejum no grupo NP (26,0 ± 4,2%), mas não em EP (23,7 ± 3,9%; p<0,001). Ademais, as mulheres que apresentaram alta porcentagem de AGS totais no plasma ao início da intervenção tiveram uma iAUC maior para os AG palmítico, esteárico e totais (p<0,05), enquanto que aquelas mulheres com alta porcentagem de AGMI apresentaram menor iAUC para o mesmo perfil de AG (p<0,05). Após RS, os valores de TBARS foram superiores nas voluntárias que iniciaram a intervenção com valores maiores de Apo B100 (p=0,018). Em conclusão, o presente estudo demonstrou, aparentemente pela primeira vez, o efeito de RS no aumento pós-prandial de 5 h das concentrações do complemento C3, comparado a RM. Ademais, o valor de ácido oleico permaneceu elevado em NP após 5 h do consumo RM, em relação ao grupo EP, sugerindo uma proteção das voluntárias com peso normal frente ao excesso de peso. Por sua vez, a resposta pós-prandial após consumo de RS parece ser mediada pelo perfil de ácidos graxos basais dos indivíduos, indicando um efeito acumulativo da resposta aguda a um perfil lipídico já estabelecido. Finalmente, os estudos pós-prandiais podem fornecer informações relevantes sobre o comportamento fisiológico frente ao consumo de diferentes componentes específicos da dieta, como são os ácidos graxos, e como esse comportamento pode ser modulado de acordo com características basais dos indivíduos (estado nutricional e metabólico). / This study evaluated the postprandial response to markers of lipid metabolism after the consumption of a high-saturated fatty acid meal (HSM) or high-monounsaturated fatty acid meal (HMM) by healthy women with normal weight or overweight. This acute, randomized, and controlled intervention study was performed at the Laboratory of Energy Metabolism and Body Composition and Laboratory of Nutritional Biochemistry, at the Department of Nutrition and Health of the Universidade Federal de Viçosa. The study was previously approved by the Ethics Committee and Human Research of the Universidade Federal de Viçosa (Of. Ref. No. 184/2011 and CAAE 542,585/2014). Were included in the study 63 adult women (26.9 ± 6.1 years), which were 35 normal-weight women (NW, <30% of total body fat - TBF) and 28 overweight (OW, ≥30% TBF), residents in Viçosa city - MG. In the day of the intervention, 37 volunteers (NW 21 and 16 OW) received HSM (14.6% caloric intake – CI – from carbohydrate, 6.2% from protein and 88.7% from fat, being 47% from saturated fatty acids- SFA) and 26 volunteers (NW 14 and 12 OW) received HMM (17.5% of CI from carbohydrate, 4.3% from protein and 78.2% from fat, being 72% from monounsaturated fatty acids - MUFA). The test meals were composed of two muffins based on bacon and cheese (HSM) or olive oil and nuts (HMM), with total caloric content of 1008 Kcal, taken together with 500 ml of water. Blood samples were collected at the times T0, T2, T3 and T5 corresponding to the fasting state and 2, 3 and 5 postprandial hours, respectively. The triacylglyceride and C3 complement concentrations, TBARS and fatty acid profile were determined at all times using standardized protocol. Based on the literature review, after the intervention with MUFA, the author have found a beneficial effect in the short and the long term as the increment in HDL concentration and lowering LDL concentration, recognized as protective and risk factors, respectively, for cardiovascular disease. As results of this study, the increment in the complement C3 concentration was higher after HSM, compared to HMM (iAUC 4365.5 ± 5477.4 vs. 1215.2 ± 882.4; p = 0.006) without difference between NW and OW groups. After consumption of HMM, the complement C3 iAUC was higher in group with lower levels of apolipoprotein A1, showing a negative association between them. Interestingly, after 5 hours the postprandial plasma oleic acid values remained high compared to fasting value in the NW group (26,0 ± 4,2%) but not in OW (23,7 ± 3,9 p <0.001). Furthermore, women who had a high percentage of total SFA plasma to earlier intervention had a greater iAUC for FA palmitic, stearic and total, while those women with high percentage of MUFA showed shorter iAUC for the same profile FA. After HSM, TBARS values were higher in volunteers who began the intervention with higher values of Apo B100. In conclusion, the present study demonstrated apparently for the first time, the effect of HSM postprandial increasing in concentrations of complement C3, compared to HMM. In addition, the increase in the oleic acid value remained after 5h consumption of NW, compared to the group OW, suggesting a protection of the volunteers with normal weight front overweight. In turn, the postprandial response after HSM consumption appears to be mediated by the baseline profile of volunteers, indicating a cumulative effect of acute response to a lipid already established. Finally, postprandial studies can provide relevant information on the physiological behavior front to the consumption of specific components of the diet, such as fatty acids, and how this behavior can be modulated for baseline characteristics of individuals (nutritional status and metabolic features).

PAULA, Stelamaris de Oliveira. Aspectos citoquímicos e bioquímicos da germinação e crescimento de plântulas de gergelim sob estresse salino. 2014. 89 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T19:49:49Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_sopaula.pdf: 2812710 bytes, checksum: cabc7bda844d929487573d29ec73f043 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-09T21:17:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_sopaula.pdf: 2812710 bytes, checksum: cabc7bda844d929487573d29ec73f043 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T21:17:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_sopaula.pdf: 2812710 bytes, checksum: cabc7bda844d929487573d29ec73f043 (MD5) Previous issue date: 2014 / Salinity is one of the abiotic stresses that most limit the growth and crop productivity. Sesame (Sesamum indicum L.) is one of the oldest oilseeds used by the man, with high adaptability to different conditions, and has been cultivated in many countries. The objective of this work is evaluate the effects of salinity on germination, reserves mobilization and seedling growth of sesame, cv. BRS SEDA. Seeds were sown in gerbox over germitest paper moistened with a solution of distilled water (NaCl 0 mM) or saline whater (NaCL 50 or 100 mM), been maintained in B.O.D at 25ºC under the 12h light photoperiod. The parameters of germination and growth were determined and proceeded the cytochemical analysis and determination of levels of lipids, total protein, soluble carbohydrates, free amino acids, Na+, Cl- and K+, as well as the activity of isocitrate lyase (ICL) and malate synthase (MLS) enzymes, in quiescent seeds [developmental stage (DS 0)], and obtained from seedlings with radicle protusion (DS 1), seedlings with radicle between 3-5 mm long (DS 2) and seedlings with radicle greater than 1.0 cm and evident hypocotyl (DS 3). Salinity increased the average time of germination and reduced germination percentage and seedling growth. In relation to reserve compounds, lipids were the most abundant totaling 52.7% of the dry weight of the quiescent seed. During the growth, the contents of lipids only varied in saline conditions (NaCl 50 and 100 mM) without significantly differ from those on DS 0. In the quiescent seed, there was predominance of oleic (59.6%) and linoleic (30.3%) acids among the fatty acids detected. At higher NaCl concentration, the contents of palmitic, oleic and stearic acids remained significantly lower than shown in the treatment with 0 mM NaCl, while the oleic acid was superior at all developmental stages analyzed. The protein levels, the second most abundant reserve on the quiescent seed (25.4%), did not significantly change in the course of development neither in function of salinity. However, levels of free aminoacids increased during the observed period accompanied by a strong reduction on the amount of protein bodies in cotyledons and endosperm cells in the DS 3, compared to DS 0. Soluble carbohydrates constituted 2.8% of the dry mass of the quiescent seed, and gradually accumulated according the NaCl concentration increased in all DS, composed mostly by non-reducing carbohydrates. The content of Na+ and Cl- increased with salinity in all DS, whereas the K+ was significantly reduced only in DS 3. Consequently, the Na+/K+ ratio was increased with salinity, especially in DS 3. The activity of both enzymes of the glyoxylate cycle increased progressively in the course of development. In DS 2 and DS 3, the ICL activity in the salt conditions was significantly higher than the control treatment (0 mM NaCl), however, in all ED, there was low or no variation in the activity of MLS in function of salinity. Based on these results, can conclude that salinity had a greater effect on seedling growth than on germination. Furthermore, significant changes in cell morphology and composition of reserves observed from the cytochemical analysis according to development or salinity did not correlate well with the changes detected by the analytical methods employed, making necessary further studies to evaluate how the catabolic pathways and transport of compounds to the embryonic axis are affected by salinity in sesame. / A salinidade é um dos estresses abióticos que mais limitam o crescimento e a produtividade agrícola. O gergelim (Sesamum indicum L.), uma das plantas oleaginosas mais antigas e usadas pela humanidade, possui alta adaptabilidade a diferentes condições, e vem sendo cultivado em muitos países. Objetivou-se neste estudo avaliar os efeitos da salinidade sobre a germinação, a mobilização das reservas e o crescimento das plântulas de gergelim, cv. BRS Seda. As sementes foram semeadas em caixas gerbox sobre papel germitest umedecido com água destilada (controle) ou solução de NaCl a 50 e 100 mM, sendo mantidas em B.O.D a 25°C e sob fotoperíodo de 12 h claro/12 h escuro. A germinação e o crescimento das plântulas foram avaliadas, e se procedeu à análise citoquímica e à determinação dos teores de lipídeos, proteína total, carboidratos solúveis, aminoácidos livres, Na+, Cl- e K+, bem como da atividade das enzimas liase do isocitrato (ICL) e sintase do malato (MLS), em sementes quiescentes [estádio de desenvolvimento (ED) 0] ou oriundas de plântulas no ED 1 (semente com protrusão da radícula), ED 2 (plântula com radícula com 3 a 5 mm de comprimento) e ED 3 (plântula com radícula maior que 1,0 cm e hipocótilo evidente). A salinidade aumentou o tempo médio de germinação e reduziu a porcentagem de germinação e o crescimento das plântulas. Com relação aos compostos de reserva, os lipídeos foram os mais abundantes, totalizando 52,7% da massa seca da semente quiescente; ao longo do desenvolvimento, os teores dessa reserva variaram somente nas condições salinas (NaCl a 50 e 100 mM), sem diferir significativamente daqueles do ED 0. Na semente quiescente, houve predominância dos ácidos oleico (59,6%) e linoleico (30,3%), entre os ácidos graxos detectados. Na maior concentração de NaCl, os teores dos ácidos palmítico, oleico e esteárico mantiveram-se significativamente inferiores aos apresentados no tratamento com NaCl a 0 mM, enquanto que os de ácido oleico foram superiores, em todos os ED analisados. Os teores de proteínas, segunda reserva mais abundante na semente quiescente (25,4%), não variaram significativamente ao longo do desenvolvimento, nem em função da salinidade. No entanto, os teores de aminoácidos livres aumentaram ao longo do período observado, sendo acompanhados por forte redução da quantidade de corpos proteicos nas células do endosperma e dos cotilédones no ED 3, em comparação ao ED 0. Os carboidratos solúveis totalizaram 2,8% da massa seca da semente quiescente, e se acumularam gradualmente à medida que a concentração de NaCl aumentou, em todos os ED, sendo compreendidos, em sua maioria, por carboidratos não redutores. Os teores dos íons Na+ e Cl- aumentaram com a salinidade, em todos os ED, enquanto que os de K+ foram reduzidos significativamente apenas no ED 3. Como consequência, a relação Na+/K+ foi aumentada com a salinidade, especialmente no ED 3. A atividade de ambas as enzimas do ciclo do glioxilato aumentou progressivamente ao longo do desenvolvimento. No ED 2 e no ED 3, a atividade da ICL nas condições salinas foi significativamente maior que a do tratamento controle (NaCl a 0 mM), no entanto, em todos os ED, houve pouca ou nenhuma variação na atividade da MLS, em razão da salinidade. Com base nesses resultados, pode-se concluir que a salinidade teve maior efeito sobre o desenvolvimento das plântulas do que na germinação. Além disso, as alterações significantes na morfologia celular e na composição das reservas, observadas a partir da análise citoquímica, tanto em função do desenvolvimento, quanto da salinidade, não se correlacionaram bem com as variações detectadas pelos métodos analíticos empregados, fazendo-se necessário, portanto, mais estudos, a fim de avaliar de que forma as vias catabólicas e o transporte de compostos para o eixo embrionário são afetados pela salinidade em gergelim.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29 / Objetivos: Este trabalho teve como objetivos determinar as frequencias alelicas e genotipicas de SNPs dos genes APOA1 (rs670, rs5069, ENSSNP498814 e rs12721026), APOC3 (rs5128, rs4520 e rs2854117), APOA4 (rs5110 e rs675), APOA5 (rs1729408, rs662899 e rs315506), LPL (rs328 e rs327) e PPARƒÑ (rs180026 e rs4553778), e verificar as associacoes desses polimorfismos e de seus haplotipos com doencas complexas, bem como com niveis sericos lipidicos e proteicos na populacao de idosos do Estudo Longitudinal do Envelhecimento. Metodos: As doencas estudadas foram: doenca cardiovascular, hipertensao arterial, obesidade, diabetes tipo 2, depressao, demencia e neoplasia. Os niveis sericos analisados foram: triglicerides, colesterol total, HDL, LDL, VLDL, glicemia em jejum e hemoglobina glicosilada. A genotipagem foi realizada por meio da tecnica de PCR-RFLP. Os programas SPSS, Haploview e SNPSTATS foram utilizados para as analises estatisticas. Resultados: Nossos achados mostraram associacao do alelo -75G (rs670) a hipertensao; do alelo +83C (rs5069) a hipertensao na presenca de DCV e a obesidade; do alelo His (rs5110) a obesidade e a depressao; do alelo SNP4T (rs1729408) a neoplasia; e do alelo H+ (rs327) a DCV. Alem disso, tambem foi verificada a associacao do haplotipo 7 a obesidade e a depressao; . do haplotipo 5 a obesidade; do haplotipo 16 a depressao; e do haplotipo 17 e neoplasia. Nossos resultados mostraram associacao entre niveis sericos de HDL e os haplotipos 11, 12 e 14. O haplotipo 4 foi associado a elevados niveis sericos de glicemia em jejum. Conclusoes: A populacao estudada possui frequencias alelicas semelhantes as de populacoes Europeias. Nossos resultados sugerem que polimorfismos e haplotipos de genes envolvidos no metabolismo lipidico sao biomarcadores de alteracoes nesses niveis sericos, que podem ser fatores de risco para essas doencas complexas. RESUMO . Parte B Objetivos: Este trabalho teve como objetivos avaliar o efeito da trimetilacao do residuo 27 de lisina da cauda da histona H3 (H3K27me3) no promotor IV do gene BDNF sobre o controle de sua expressao em pacientes suicidas em relacao ao uso de drogas antidepressivas. Metodos: Amostras de cortex prefrontal de cerebros provenientes do Brain Bank da McGill University foram classificados em tres grupos: controle (N=9), suicidio com toxicologia negativa para drogas . SSD (N=12) e suicidio com toxicologia positiva para drogas . SCD (N=8). A expressao do transcrito IV do gene BDNF foi avaliada por meio de qRT-PCR. Alem disso, as amostras foram submetidas ao procedimento de imunoprecipitacao da cromatina (ChIP), com anticorpo especifico para H3k27me3, e, em seguida, foi quantificado o nivel de H3K27me3 no promotor IV do gene BDNF por meio de qRT-PCR. ANOVA (post hoc Tukey.s) e teste t-Student¡¯s foram utilizados na analise estatistica, por meio do pacote SPSS 16.0. Resultados: Nao houve diferenca significante no nivel de expressao do transcrito IV do gene BDNF entre os grupos SCD e controle (p=0,133). Nossos achados mostraram que o grupo SCD apresentava maiores niveis de H3K27me3 em relacao ao grupo SSD (p=0,004) e ao grupo controle (p=0,009). Alem disso, foi observado que os niveis de H3K27me3 do grupo SSD nao diferiram do grupo controle (p=0,995). Conclusoes: O aumento do nivel de H3K27me3 no promotor IV do gene BDNF associado ao uso de antidepressivos nao esta associado a sua expressao em cortex prefrontal de pacientes suicidas, sugerindo que deve haver outros mecanismos epigeneticos envolvidos na depressao maior e suicidio que regulem a expressao do gene BDNF. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-03-10T13:16:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 jose_correa_ioc_dout_2007.pdf: 7604915 bytes, checksum: 254c899732de570995b8f8b6f7061ca5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Endocitose em células eucarióticas é o processo de internalização de macromoléculas por diferentes vias, com diversas proteínas associadas, através do brotamento de vesículas na membrana plasmática e endereçamento destas vesículas a compartimentos endosomais no citoplasma. Os tripanosomatídeos são protozoários flagelados patogênicos de grande importância médica e veterinária que apresentam diferentes formas adaptativas ao longo de seu ciclo de vida. Estes parasitas estão estruturalmente organizados dentro de um arcabouço de microtúbulos subpeliculares, o que dificulta invaginações de membrana na maior parte do corpo celular. Entretanto, este arcabouço é descontinuado na região da bolsa flagelar, de onde o flagelo emerge do corpo. Formas epimastigotas do Trypanosoma cruzi apresentam além da bolsa flagelar uma segunda invaginação de membrana, o citóstoma/citofaringe, uma estrutura sustentada por microtúbulos especializados que participa ativamente no processo de endocitose. Esta tese teve por objetivo investigar as vias endocíticas presentes nos dois sítios competentes para a captação de nutrientes (bolsa flagelar e citóstoma) de epimastigotas de T. cruzi. Após incubação dos parasitas a 4oC ou 28oC com albumina, transferrina e LDL conjugadas a ouro coloidal e posterior processamento para microscopia eletrônica de transmissão (MET), foram observadas vesículas endocíticas revestidas brotando da bolsa flagelar. Análise do conteúdo protéico dos protozoários detectou a expressão de clatrina, confirmada por citometria de fluxo e análise in silico da base de dados genômicos do T. cruzi. Por microscopia confocal localizou-se a expressão de clatrina na bolsa flagelar dos parasitas... (...) Como transferrina foi visualizada em vesículas sem revestimento localizadas majoritariamente no citóstoma, frações de membrana detergente-resistentes foram purificadas por fracionamento celular e o conteúdo lipídico foi analizado por cromatografia, sendo também obtidas as concentrações de proteína e colesterol destas frações de membrana. \201CDot blots\201D das frações foram positivos para marcadores universais de jangadas de lipídios (flotilina-1 e toxina B do cólera). Por imunofluorescência co-localizou-se marcação de transferrina e de anticorpos anti-flotilina no citóstoma. Assim, propomos que a endocitose de transferrina ocorre principalmente pelo citóstoma através de um domínio de membrana detergente-resistente. Epimastigotas foram também pré-tratadas para impedir especificamente endocitose mediada por clatrina e a endocitose por cavéolas, usando-se drogas que interferem com o citoesqueleto celular, seguindo-se incubação com transferrina. Dados de MET e citometria de fluxo mostraram que a endocitose de transferrina ocorreu normalmente nas amostras onde o brotamento de vesículas revestidas com clatrina foi impedido, não sendo porém observada nas amostras onde a endocitose por cavéolas foi inibida. Análise da curva de crescimento de parasitas tratados demonstrou uma relação positiva entre interferência nos domínios de membrana detergente-resistentes e sobrevivência das células. Este conjunto de dados permitiu elaborar um modelo dos mecanismos de endocitose em epimastigotas de T. cruzi. / Endocytosis in eukaryotic cells is the in corporation process o f macromolecules, t hrough different pathways with different associated proteins, through vesicles budding at the plasma membrane and addressing of these vesicles to cytoplasmic endosomal compartments. Trypanosomatids are pathogenic flagellate protozoa of great medical and ve terinary importance that present different evolutive forms along their life cycle. These parasites are structurally organized inside a cage of subpelicular microtubules, what makes it difficult to form membrane invagination along most part of the cell body . However, this cage is missing at the flagellar pocket region, where the flagellum emerges from the cell. Epimastigote forms of Trypanosoma cruzi present besides the flagellar pocket a second membrane invagination, the cytostome/cytopharynx . This structur e is sustained by specialized microtubules that actively participate in the endocytic process. This thesis has investigated the endocytic pathways at the two competent sites for nutrient uptake (flagellar pocket and cytostome) of T. cruzi epimastigotes. Af ter parasites incubation at 28 o C with gold - conjugated albumin e , transferrin or LDL, followed by processing for transmission electron microscopy (TEM), it was possible to observe coated endocytic vesicles loaded with albumin, budding off from the flagellar pocket. Analysis of the proteic content of epimastigote forms detected the expression of clathrin, confirmed by flow cytometry and in silico analysis of the T. cruzi genomic database. Confocal microscopy allowed the visualization of the clathrin expression at the flagellar pocket. As transferrin was seen in uncoated vesicles located mainly in the cytostome, detergent - resistant membrane fractions were purified by cell fractioning and the lipidic contents was analyzed by chromatography, as well as the protein and cholesterol contents in the fractions. Dot blots of such membrane fractions were positive for lipid raft universal labels (flotillin - 1 and cholera B toxin). By immunofluorescence microscopy , transferrin and flotillin were co - localized at the cytostome . Thus we propose that endocytosis of transferrin occurs mainly through the cytostome via detergent - resistant membrane domains. Epimastigote forms were pre - treated to specifically hinder clathrin - mediated and caveolae - mediated endocytosis, by using drugs t hat impair these pathways and interfere with the cell cytoskeleton, followed by incubation with transferrin. Data from TEM and flow cytometry showed that the endocytosis of transferrin occurred normally in samples where budding of clathrin - coated vesicles was hindered, but it was not observed in samples where caveolae - mediated endocytosis was inhibited. Analysis of growth curves of treated parasites showed a relation between interference with detergent - resistant membrane domains and cell surviving. Our data allowed to elaborate a model depicting the endocytic mechanisms in Trypanosoma cruzi epimastigotes

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Resumo: Os ácidos graxos poliinsaturados (AGPs) são integrantes da membrana celular espermática, e embora favoreçam sua fluidez, são extremamente susceptíveis ao estresse oxidativo. Nesse contexto, o presente estudo objetivou avaliar a influência da catalase no meio de congelação para criopreservação do sêmen de machos da raça Nelore suplementados com gordura protegida, a fim de evitar a produção das espécies reativas de oxigênio (EROs). Foram utilizados 12 machos da raça Nelore mantidos em pastagem de capim-marandu em lotação contínua e taxa de lotação fixa. Os animais foram divididos em dois grupos: suplementados dos 14 aos 24 meses de idade (S+), ou não suplementados (S-). A colheita de sêmen foi realizada aos 24 meses, e as amostras de sêmen a fresco foram submetidas a analise computadorizada de cinética espermática (CASA). Posteriormente, as amostras foram divididas em duas frações e foram criopreservadas após a adição de meio de congelação, de igual composição, contendo catalase (C+) ou não (C-). Após o descongelamento do sêmen foram realizadas: avaliações de CASA; teste de termorresistência rápido (TTR); integridade das membranas plasmática e acrossomal; potencial mitocondrial, desestabilização da membrana e produção da ERO ânion superóxido (O2 -); produção da EROs; produção in vitro de embriões (PIVE) e quantificação intracitoplasmática de lipídio dos embriões. O delineamento experimental utilizado foi um esquema fatorial 2X2 (suplementação x catalase), totalizando 4 tratamen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

A microalga marinha Dunaliella tertiolecta é um microrganismo unicelular fotossintético capaz de fixar dióxido de carbono da atmosfera e proveniente de gases de exaustão industrial e utilizá-lo como única fonte de carbono para o aumento da biomassa. Enquanto isso, além de biomassa, também é capaz de produzir quantidades consideráveis de carotenoides e lipídios, entre outras substâncias de grande interesse para indústrias alimentícias e farmacêuticas que buscam a utilização cada vez maior de compostos de fontes naturais em suas formulações. Neste trabalho foram estudados os efeitos da salinidade do meio (em concentração molar de NaCl), da temperatura, da intensidade de luz, da fonte e concentração de nitrogênio no cultivo da D. tertiolecta em fotobiorreator airlift, buscando o aumento na produção de biomassa, carotenoides e lipídios, bem como representar matematicamente este bioprocesso. Inicialmente, a influência da temperatura e da concentração salina foi estudada através de experimentos com meio de cultura f/2 padrão, com diferentes concentrações salinas. A temperatura e a concentração salina influenciaram de forma diferente os resultados obtidos. A temperatura teve forte influência na produção de biomassa, na biofixação de dióxido de carbono e na produção de lipídios pelas células. Por outro lado, a salinidade teve forte influência na produção dos carotenoides. A partir da avaliação e combinação dos resultados, foram determinadas as condições apropriadas de temperatura e salinidade do meio para maior produção de biomassa, lipídios e carotenoides simultaneamente: 28 °C e 0,715 M de NaCl. Seis carotenoides foram identificados por CLAE no extrato de D. tertiolecta: transluteína, trans-β-caroteno, trans-zeaxantina, trans-anteraxantina, trans-neoxantina e 9-cis-β-caroteno. Os carotenoides trans-luteína, trans-β-caroteno e trans-zeaxantina foram quantificados. As maiores quantidades de luteína, β-caroteno e zeaxantina obtidas nos experimentos foram, respectivamente, 1315 ± 36 μg g-1, 732 ± 51 μg g-1 e 244 ± 76 μg g-1. A partir destes resultados, cultivos foram realizados variando-se intensidade de luz e fonte e concentração de nitrogênio a fim de determinar a influência destes parâmetros. A intensidade de luz de 17,5 klx e concentração inicial de nitrato de sódio de 300 mg L-1 resultou nas maiores produtividades de biomassa (0,176 ± 0,005 g L-1 d-1), carotenoides (0,738 ± 0,038 mg L-1 d-1) e lipídios (16,68 ± 1,50 mg L-1 d-1). Os dados experimentais desses cultivos foram utilizados na etapa de estimação de parâmetros. Em comparação com modelos relatados na literatura, os modelos propostos apresentaram melhor ajuste para diferentes concentrações de nitrato de sódio testadas, com reduzido número de parâmetros. / The marine microalgae Dunaliella tertiolecta is a unicellular photosynthetic microorganism that can fix carbon dioxide from the atmosphere and from industrial exhaust gases, using it as the solely carbon source to increase biomass. Meanwhile, more than biomass, this microorganism also can produce great amounts of carotenoids, lipids and other substances of interest to pharmaceutical and food industries that seek to increase the use of compounds derived from natural sources in their formulations. In this work, the effects of medium salinity (in molar concentration of NaCl), temperature, light intensity and nitrogen source and concentration over the cultivation of D. tertiolecta in an airlift photobioreactor were studied aiming the increase of biomass, carotenoids and lipids production, as well the development of a mathematical model for this bioprocess. Initially, the influence of temperature and salt concentration was studied by experiments with standard f/2 culture medium, with different salt concentrations. Temperature and salt concentration differently affected the results. Temperature had a strong effect on biomass production, carbon dioxide biofixation and lipid production by the cells. On the other hand, salinity showed strong effect on carotenoid production. The appropriate temperature and medium salinity to increase simultaneously biomass, lipids and carotenoids was 28 °C and 0.715 M NaCl. Six carotenoids were identified in the extract of D. tertiolecta by HPLC: all-trans-lutein, all-trans-β-carotene, alltrans- zeaxanthin, all-trans-antheraxanthin, all-trans-neoxanthin and 9-cis-β-carotene. The carotenoids all-trans-lutein, all-trans-β-carotene and all-trans-zeaxanthin were quantified. The highest amount of lutein, β-carotene and zeaxanthin reached in the experiments were 1315 ± 36 μg g-1, 732 ± 51 μg g-1 and 244 ± 76 μg g-1, respectively. From these results, cultures were performed by varying light intensity and nitrogen source and concentration to determine the influence of these parameters. A light intensity of 17.5 klx and initial sodium nitrate concentration of 300 mg L-1 resulted in the highest biomass (0.176 ± 0.005 g L-1 d-1), carotenoid (0.738 ± 0.038 g L-1 d-1) and lipid (16.68 ± 1.50 g L-1 d-1) productivities. The experimental data of these cultures were used for parameter estimation. Compared to earlier models reported in the literature, the proposed models showed better fitting for different sodium nitrate concentrations tested with reduced number of parameters.

A doença de Ménière (DM) já foi descrita há mais de 150 anos1, sendo ainda controversos sua fisiopatogenia, diagnóstico e tratamento. Em algumas situações, é possível identificar uma etiologia definida, sendo então denominada síndrome de Ménière (SM). Entre as etiologias, os distúrbios metabólicos são conhecidos como agentes participantes na patogênese, especialmente os distúrbios da homeostase da insulina e da glicose2. Distúrbios metabólicos, mesmo em estágios precoces, como a resistência à insulina (RI) e a consequente hiperinsulinemia, já poderiam repercutir em um comprometimento energético funcional da bomba de sódio/potássio ATPase na orelha interna. Sabe-se que a bomba sódio/potássio ATPase é a responsável pela manutenção da alta concentração de potássio e baixa de sódio na endolinfa, a exemplo do que acontece no espaço intracelular. A manutenção desse equilíbrio iônico ocorre com gasto de energia. Pacientes hiperinsulinêmicos, por exibirem comprometimento funcional da bomba sódio/potássio ATPase, podem apresentar aumento da concentração de sódio e diminuição de potássio no nível da endolinfa, com consequente aumento da pressão osmótica a esse nível, resultando em hidropsia endolinfática. Foram demonstradas, por Angeli et al.3, as alterações dos potenciais evocados auditivos por eletrococleografia (ECoG) durante o hiperinsulinismo agudo induzido, em um estudo utilizando um modelo animal (ovelha). Houve progressiva supressão da amplitude do potencial de ação quando comparado ao grupo controle (p = 0,001). Já Maia et al.4 avaliaram, através da monitorização das emissões otoacústicas (OEA), o registro dos limiares dos produtos de distorção em estudo com delineamento semelhante. Houve diminuição estatisticamente significativa nos limiares dos produtos 12 de distorção no grupo intervenção (p < 0,001). Ambos os estudos são parte da mesma linha de pesquisa dessa investigação. A hiperinsulinemia é consequência de um distúrbio metabólico, a RI, em que ocorre uma redução da resposta biológica da insulina em nível celular. A hiperinsulinemia representa a primeira etapa do processo que gera a hiperglicemia e o diabetes melito (DM2)5. Na presença de hiperinsulinemia isolada (hiperinsulinemia com euglicemia) já pode existir manifestação cocleovestibular6. Por isso, a identificação precoce desse distúrbio apresenta importância na prevenção do DM2 e também no manejo das doenças cocleovestibulares de etiologia metabólica. Embora exista consenso sobre o diagnóstico laboratorial do DM2, é ainda controversa a forma de estabelecer o diagnóstico de RI. Existem diversos testes diagnósticos, sendo o padrão-ouro (clamp euglicêmico hiperinsulinêmico) altamente complexo e impraticável em estudos populacionais7. Na prática clínica, o diagnóstico de RI pode ser realizado através do teste de tolerância oral à glicose (TTGO), sendo avaliada a resposta insulinêmica e glicêmica. Também são utilizados os valores basais da insulina e glicemia em jejum, porém apresentam baixa sensibilidade8. Existe uma tendência em estudos populacionais de utilizar modelos matemáticos, como o Homeostasis Model Assessment (HOMA) e o Quantitative Insulin Sensitivity Check Index (QUICKI), que utilizam esses valores em jejum na fórmula para traduzir a sensibilidade à insulina e a capacidade secretória das células beta do pâncreas. Em séries de pacientes com diagnóstico de DM, foi demonstrada alteração na curva insulinêmica em 67,7%9 até 86%10 dos casos. Estudo prévio realizado por D’Avila e Lavinsky11 identificou que 72% dos pacientes com DM apresentam algum grau de hiperinsulinismo. 13 Portanto, já existe evidência experimental de que alterações no metabolismo da insulina repercutem no potencial endococlear em modelos animais. Além disso, os estudos clínicos demonstram que a maioria dos pacientes com DM apresentam hiperinsulinismo. Entretanto, não existem estudos comparados que avaliem o impacto clínico do hiperinsulinismo na DM.

Resumo não disponível

A busca por fontes renováveis de energia é uma das prioridades nas pesquisas na área de engenharia na atualidade, dando-se preferência principalmente para uma alternativa aos derivados de petróleo. A produção de biodiesel com lipídeos extraídos de microalgas é um assunto muito promissor, visto as inúmeras vantagens deste processo. Pesquisas apontam que a diminuição da concentração de nitrogênio presente no meio de cultivo aumenta o acúmulo de lipídeos pelas microalgas, mas a produção de biomassa fica prejudicada. Para mensurar a importância desse nutriente e melhorar a eficiência da extração de óleos, no presente trabalho, foi proposta a avaliação da influência do íon nitrato no cultivo de Chlorella sp., focando o estudo na concentração de biomassa e no acúmulo de lipídeos. Para tal, foram testadas diferentes concentrações iniciais de NaNO3; o melhor perfil de adição de NaNO3 no meio de cultivo (em etapas ou em uma dose única); o desempenho da microalga em um cultivo semicontínuo; e quatro tipos de tratamentos para a quebra da parede celular das microalgas Chorella minutissima e Chlorella sp., a fim de realizar uma extração de lipídeos mais efetiva. A concentração inicial de 300 mg L-1 de NaNO3 apresentou melhores resultados em relação à concentração final de biomassa (2,48 g L-1) e acúmulo de lipídeos totais (12,0 % em peso seco). A adição de NaNO3 em apenas uma etapa obteve os resultados mais satisfatórios, com concentração final de biomassa de 1,92 g L-1 e 6,02 % de lipídeos totais em peso seco de biomassa. No cultivo semicontínuo, o melhor resultado para a o acúmulo de lipídeos foi volume de corte de 1/6 a cada 24 h, resultando em 9,02 % de lipídeos em biomassa seca e produtividade lipídica de 214 mg L-1d-1. Como pré-tratamento para quebra da parede celular da microalga Chlorella minutissima, não houve diferença significativa entre os métodos testados; para a Chlorella sp., as técnicas com resultados mais satisfatórios foram autoclave e micro-ondas. / Nowadays, the search for renewable energy sources is a high priority topic in engineer research, with preference to an alternative to petroleum derived energy spurces. Biodiesel production from microalga lipid is very promising, since the several advantages of this process. Many studies have shown that, to increase the microalga lipid accumulation, low nitrogen concentration is necessary; however, this condition has an opposite effect on biomass production. To measure the effect of this nutrient and improve oil extraction efficiency, in the present work, the nitrate ion influence was evaluated over the microalga Chlorella sp. cultive, measuring biomass concentration and lipid accumulation. This work tested the effect of the initial NaNO3 concentration and different NaNO3 pulse feeding profiles along the culture. A semicontinuous culture was carried out with renewal rate of 1/3 and 1/6 (v/v) in 24 h and 48 h, to improve biomass nad lipid productivity. It was also tested four pre-treatments in order to break the microalga (Chlorella minutissima and Chlorella sp.) cell wall: microwave, autoclave, bead beating and sonication. The highest biomass and lipid concentration were found when used initial NaNO3 concentration of 300 mg L-1, with 2,48 g L-1 and 12,04 %, respectively. Adding NaNO3 all at once (one time at the culture start off ) showed the best results for biomass concentration (1,92 g L-1) and lipid accumulation (6,02 %). In semicontinuous culture, the microalga Chlorella sp. presented good results for lipid production (9,02 %) and lipid productivity (214 mg L-1d-1) at 1/6 renewal rate every 24 h, however. The best pre-treatment for cell wall tested for Chlorella sp were microwave and autoclave; for Chlorella minutissima, there was no difference between the tested pre-treatments and the ones without it.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321641.pdf: 1204977 bytes, checksum: 837a840ff8cd329282755f3d0fe3061c (MD5) / Neoplasias hematológicas são cânceres que se iniciam em tecidos produtores de células sanguíneas e no sistema linfático. São principalmente representadas por leucemias e linfomas, sendo que as primeiras podem ser divididas em aguda e crônica dependendo do tempo do desenvolvimento da doença e os segundos por linfoma de Hodgkin e Não-Hodgkin. Ambos os diagnósticos são caracterizados por células sanguíneas anormais que podem desempenhar funções alteradas. Algumas dessas funções celulares desempenham papéis importantes na defesa do organismo contra infecções e podem ser implicadas na investigação de intervenções que busquem melhorar a resposta desses indivíduos ao tratamento. Esse estudo teve como objetivo avaliar parâmetros de funcionalidade de células mononucleares de indivíduos portadores de neoplasias hematológicas (adesão, capacidade fagocítica, volume de vesículas catiônicas, produção de ânion superóxido), atividade da enzima catalase e peroxidação lipídica no plasma, proteínas de fase aguda e indicadores do estado nutricional. Amostras de sangue, dados clínicos e antropométricos foram coletados de dezesseis indivíduos com dezesseis anos ou mais portadores de neoplasias hematológicas atendidos no Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina, sem terem iniciado o tratamento quimioterápico. Ensaios espectrofotométricos de adesão, capacidade fagocítica, volume de vesículas catiônicas e produção de ânion superóxido, foram realizados com as células mononucleares do sangue periférico dos participantes, atividade da catalase e peroxidação lipídica com o plasma, albumina e proteína C-reativa (pCr) foram avaliados pelos métodos de vermelho de bromocresol e nefelometria, respectivamente e indicadores do estado nutricional por antropometria. O principal diagnóstico foi leucemia aguda (n=9). A mediana de IMC dos indivíduos indicou excesso de peso (25,6 kg/m2), os valores de albumina (3,20 g/dL), hematócrito (25,40%), hemoglobina (8,30 g/dL), hemácias (2,50 106/mm3) e plaquetas (58000 unidades/mm3), também na mediana, foram menores que os valores de referência. A mediana da proteína C-reativa encontrou-se elevada (37,45 mg/L), também quando comparada aos valores de referência. Albumina sérica foi correlacionada inversamente com o IMC (r=-0.53), referente aos parâmetros de funcionalidade das mononucleares, a adesão celular e a produção de ânion superóxido foram maiores nas leucemias do que nos linfomas, enquanto a capacidade fagocítica e o volume de vesículas catiônicas foi menor, porém essas diferenças não foram significativas (p>0,05). A produção de ânion superóxido em neoplasias hematológicas não teve correlação com a peroxidação lipídica (r=0,26) e atividade da enzima catalase no plasma(r-0,13), entretanto foi encontrada forte correlação positiva entre essas duas últimas variáveis (r=0,75), volume de vesículas catiônicas também foi correlacionado positivamente com a capacidade fagocítica (r=0,42). Esses resultados indicam mudanças nas funcionalidade celulares dos indivíduos com neoplasias hematológicas e em variáveis do estresse oxidativo, com distinção entre os diagnósticos principais e conferem subsídios para realização de estudos futuros que visem avaliar a influência de intervenções nesses parâmetros <br> / Hematological malignancies are cancers that begin in blood-forming tissues and in the lymphatic system. They are mainly represented by leukemias and lymphomas, whereas the first can be divided into acute and chronic depending on disease development and the latter into Hodgkin's lymphoma and Non-Hodgkin's lymphoma. Both diagnoses are characterized by abnormal blood cells that may have altered functions. Some of these cellular functions play important roles in host defense against infection and may be involved in the investigation of interventions that seek to improve the response to treatment of these individuals. This study aimed to evaluate functionality parameters of mononuclear cells from patients with hematological malignancies (adhesion, phagocytic capacity, volume of cationic vesicles, superoxide anion production), lipid peroxidation and catalase activity in the plasma of these individuals, acute phase proteins and indicators of nutritional status. Blood samples, anthropometric and clinical data were collected from sixteen individuals with sixteen or more years of age with hematologic malignancies treated at the University Hospital of Federal University of Santa Catarina, without having initiated chemotherapy. Spectrophotometric adhesion, phagocytic capacity, volume of cationic vesicles and superoxide anion production assays were performed with peripheral blood mononuclear cells of participants, lipid peroxidation and catalase activity with the plasma, albumin and C-reactive protein (CRP) were assessed by bromocresol red and nephelometry, respectively and indicators of nutritional status by anthropometry. The main diagnosis was acute leukemia (n = 9), median body mass index (BMI) indicated excess body weight (25.6 kg/m2) among the individuals, the median values of albumin (3.20 g/dL), hematocrit (25.40%), hemoglobin (8.30 g/dL), red blood cells (2.50 106/mm3) and platelets (58000 units/mm3) were lower than the reference values, median Creactive protein was high (37.45 mg/L), also when compared to the reference value. Serum albumin was inversely correlated with BMI (r=- 0.53); regarding functionality parameters of mononuclear cells, adhesion and superoxide anion production was higher in leukemias than in lymphomas, whereas phagocytic capacity and the volume of cationic vesicles was lower, but these differences were not significant (p>0.05). The production of superoxide anion in hematological malignancies had no correlation with lipid peroxidation (r=0.26) and catalase activity in plasma (r-0.13), however we found a strong positive correlation between these two variables (r=0.75), volume of cationic vesicles was also positively correlated with phagocytic capacity (r=0.42). These results indicate changes in cell function and oxidative stress variables in individuals with hematological malignancies, distinguishing between the main diagnoses and providing subsidies for future studies aiming to evaluate the influence of interventions on these parameters.