Leishmanioses são um complexo de doenças infecciosas causadas por protozoários intramacrofágicos do gênero Leishmania, fatal se não tratadas adequadamente. Os antimoniais pentavalentes são os medicamentos de primeira escolha para o tratamento, apesar de sua toxicidade e seu mecanismo de ação pouco esclarecido. Uma terapia mais eficaz pode ser conseguida pelo direcionamento de fármacos antileishmania para os locais de infecção. Os lipossomas são vesículas lipídicas que promovem melhora na eficácia e na ação de fármacos na célula alvo. Os lipossomas são capturados preferencialmente pelas células do sistema mononuclear fagocitário (SMF). O objetivo deste estudo foi desenvolver uma formulação de antimoniato de meglumina lipossomal, constituído por fosfatidilserina e estudar sua farmacocinética em animais sadios para esclarecer seu metabolismo e distribuição. As análises quantitativas de antimônio em lipossomas demonstram que Análise por Ativação Neutrônica foi a técnica mais sensível com cerca de 100 % de precisão. Todas as formulações de lipossomas apresentaram um tamanho de diâmetro médio de 150 nm. A determinação da CE50 em macrófagos infectados mostrou que as formulações de antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas foram entre 10 - 63 vezes mais eficazes do que a fármaco livre, indicando maior índice de seletividade. Por microscopia de fluorescência, foi verificada uma maior internalização de lipossomas fluorescentes em macrófagos infectados durante um curto tempo de incubação em comparação com macrófagos não infectados. A biodistribuição do antimoniato de meglumina irradiado encapsulado em lipossomas contendo fosfatidilserina mostrou que a formulação lipossomal promoveu um direcionamento seletivo do antimônio para tecidos do SMF, além do que manteve as doses elevadas nos órgãos por um período prolongado. Em conclusão, estes dados sugerem que o antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas apresentou maior eficácia do que a fármaco não lipossomal contra a infecção por Leishmania. O desenvolvimento de formulações lipossomais pode ser uma nova alternativa para a quimioterapia de doenças infecciosas, especialmente Leishmanioses, já que são usados como sistemas carreadores para entrega sustentada e direcionada de fármacos ao local da infecção. / Leishmaniases are a complex of parasitic diseases caused by intramacrophage protozoa of the genus Leishmania, and is fatal if left untreated. Pentavalent antimonials, though toxic and their mechanism of action being unclear, remain the first-line drugs for treatment. Effective therapy could be achieved by delivering antileishmanial drugs to these sites of infection. Liposomes are phospholipid vesicles that promote improvement in the efficacy and action of drugs in target cell. Liposomes are taken up by the cells of mononuclear phagocytic system (MPS). The purpose of this study was to develop a preparation of meglumine antimoniate encapsulated in liposomes of phosphatidylserine and to study its pharmacokinetic in healthy mice to establish its metabolism and distribution. Quantitative analysis of antimony from liposomes demonstrated that Neutron Activation Analysis was the most sensitive technique with almost 100 % of accuracy. All liposome formulations presented a mean diameter size of 150 nm. The determination of IC50 in infected macrophage showed that liposome formulations were between 10 63 fold more effective than the free drug, indicating higher selectivity index. By fluorescence microscopy, an increased uptake of fluorescent-liposomes was seen in infected macrophages during short times of incubation compared with non-infected macrophages. Biodistribution studies showed that meglumine antimoniate irradiated encapsulated in liposomes of phosphatidylserine promoted a targeting of antimony for MPS tissues and maintained high doses in organs for a prolonged period. In conclusion, these data suggest that meglumine antimoniate encapsulated in liposomes showed higher effectiveness than the non-liposomal drug against Leishmania infection. The development of liposome formulations should be a new alternative for the chemotherapy of infection diseases, especially Leishmaniasis, as they are used to sustain and target pharmaceuticals to the local of infection.

Orientador: Anselmo Gomes de Oliveira / Banca: Maria Virginia Costa Scarpa / Banca: Maria Vitória Lopes Badra Bentley / Resumo: Neste trabalho estudou-se a encapsulação do cloridrato de ciprofloxacino (CIPRO) em lipossomas revestidos de ácido poli-láctico-co-glicólico (PLGA) ou o copolímero termosensível Pluronic® F127 (PLU). A eficiência de encapsulação foi obtida a partir das frações contendo lipossomas carregados de CIPRO separadas por cromatografia de exclusão em gel de Sephadex G-50, e mostrou-se melhor para as amostras contendo PLGA e maior concentração de CIPRO (5 mg/mL). A determinação do diâmetro médio dos lipossomas foi realizada por espalhamento dinâmico de luz (Light Scattering) e demonstrou redução no tamanho das estruturas quando PLGA ou PLU estavam presentes nas preparações. A incorporação de CIPRO aos lipossomas provocou aumento do tamanho das estruturas quando comparadas com as preparações isentas de fármaco. Verificou-se que o aumento na concentração de fármaco provocou a diminuição do diâmetro médio dos lipossomas. Experimentos de liberação in vitro mostraram que a liberação do CIPRO a partir dos lipossomas foi mais lenta em relação ao CIPRO não encapsulado. A liberação do CIPRO a partir de lipossomas revestidos com PLGA mostrou que a liberação foi mais lenta em relação aos lipossomas não revestidos. Os resultados demonstram que as preparações de CIPRO em lipossomas revestidos com PLGA ou PLU podem representar sistemas de liberação de fármacos antibióticos com grande potencial de utilização. O estudo de biodisponibilidade ocular demonstrou que lipossomas revestidos com PLGA e PLU mantiveram a MIC90 de CIPRO para os principais patógenos oculares por mais tempo que o CIPRO em solução no humor aquoso, quando administrados por via subconjuntival. Estes resultados demonstram que a associação de PLGA e PLU com lipossomas pode ser utilizada como um eficiente sistema de liberação ocular de fármacos. / Abstract: In the present work we studied the encapsulation of ciprofloxacin hydrochloride (CIPRO) in liposomes coated either by the poly-lactic-co-glycolic acid (PLGA) or thermosensitive copolymer Pluronic® F127 (PLU). Unilamellar liposomes containing 40 or 50 mM of hydrogenated soy phosphatidylcholine (FSH) were prepared by reverse phase evaporation (REV) method, followed by sonication. Encapsulation efficiency was obtained using fractions containing liposomes loaded with CIPRO, separated by exclusion chromatography on Sephadex G-50 gel. Best encapsulation efficiency was obtained with samples containing PLGA with CIPRO at a higher concentration (5 mg/mL). Liposome medium diameter was determined by dynamic light scattering, and showed a size reduction when either PLGA or PLU was present in the preparations. The incorporation of CIPRO into the liposomes caused a size increasement of the structures when compared to preparations lacking the drug. Nevertheless, increasing the drug concentration caused a decrease of the liposome medium diameter. Experiments of in vitro release showed that the liberation of CIPRO from the liposomes was slower when compared to not encapsulated CIPRO. The release of CIPRO from liposomes coated by PLGA showed that the liberation was slower when compared to non-coated liposomes. The results show that liposome preparations containing CIPRO and covered either by PLGA or PLU represent antibiotic drug delivery systems with great possibilities. The bioavailability study shows that liposomes covered by both PLGA and PLU maintained the MIC90 of CIPRO against the main ocular pathogens for longer time than CIPRO solution in aqueous humor, when subconjunctivally injected. These results demonstrate that the PLGA and PLU association with liposomes can be used as an efficient ocular drug delivery system. / Mestre

Leishmanioses são um complexo de doenças infecciosas causadas por protozoários intramacrofágicos do gênero Leishmania, fatal se não tratadas adequadamente. Os antimoniais pentavalentes são os medicamentos de primeira escolha para o tratamento, apesar de sua toxicidade e seu mecanismo de ação pouco esclarecido. Uma terapia mais eficaz pode ser conseguida pelo direcionamento de fármacos antileishmania para os locais de infecção. Os lipossomas são vesículas lipídicas que promovem melhora na eficácia e na ação de fármacos na célula alvo. Os lipossomas são capturados preferencialmente pelas células do sistema mononuclear fagocitário (SMF). O objetivo deste estudo foi desenvolver uma formulação de antimoniato de meglumina lipossomal, constituído por fosfatidilserina e estudar sua farmacocinética em animais sadios para esclarecer seu metabolismo e distribuição. As análises quantitativas de antimônio em lipossomas demonstram que Análise por Ativação Neutrônica foi a técnica mais sensível com cerca de 100 % de precisão. Todas as formulações de lipossomas apresentaram um tamanho de diâmetro médio de 150 nm. A determinação da CE50 em macrófagos infectados mostrou que as formulações de antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas foram entre 10 - 63 vezes mais eficazes do que a fármaco livre, indicando maior índice de seletividade. Por microscopia de fluorescência, foi verificada uma maior internalização de lipossomas fluorescentes em macrófagos infectados durante um curto tempo de incubação em comparação com macrófagos não infectados. A biodistribuição do antimoniato de meglumina irradiado encapsulado em lipossomas contendo fosfatidilserina mostrou que a formulação lipossomal promoveu um direcionamento seletivo do antimônio para tecidos do SMF, além do que manteve as doses elevadas nos órgãos por um período prolongado. Em conclusão, estes dados sugerem que o antimoniato de meglumina encapsulado em lipossomas apresentou maior eficácia do que a fármaco não lipossomal contra a infecção por Leishmania. O desenvolvimento de formulações lipossomais pode ser uma nova alternativa para a quimioterapia de doenças infecciosas, especialmente Leishmanioses, já que são usados como sistemas carreadores para entrega sustentada e direcionada de fármacos ao local da infecção. / Leishmaniases are a complex of parasitic diseases caused by intramacrophage protozoa of the genus Leishmania, and is fatal if left untreated. Pentavalent antimonials, though toxic and their mechanism of action being unclear, remain the first-line drugs for treatment. Effective therapy could be achieved by delivering antileishmanial drugs to these sites of infection. Liposomes are phospholipid vesicles that promote improvement in the efficacy and action of drugs in target cell. Liposomes are taken up by the cells of mononuclear phagocytic system (MPS). The purpose of this study was to develop a preparation of meglumine antimoniate encapsulated in liposomes of phosphatidylserine and to study its pharmacokinetic in healthy mice to establish its metabolism and distribution. Quantitative analysis of antimony from liposomes demonstrated that Neutron Activation Analysis was the most sensitive technique with almost 100 % of accuracy. All liposome formulations presented a mean diameter size of 150 nm. The determination of IC50 in infected macrophage showed that liposome formulations were between 10 63 fold more effective than the free drug, indicating higher selectivity index. By fluorescence microscopy, an increased uptake of fluorescent-liposomes was seen in infected macrophages during short times of incubation compared with non-infected macrophages. Biodistribution studies showed that meglumine antimoniate irradiated encapsulated in liposomes of phosphatidylserine promoted a targeting of antimony for MPS tissues and maintained high doses in organs for a prolonged period. In conclusion, these data suggest that meglumine antimoniate encapsulated in liposomes showed higher effectiveness than the non-liposomal drug against Leishmania infection. The development of liposome formulations should be a new alternative for the chemotherapy of infection diseases, especially Leishmaniasis, as they are used to sustain and target pharmaceuticals to the local of infection.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-09-12T13:57:47Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL-ALBERTINO FREITAS SANTANA NETO.pdf: 1316788 bytes, checksum: f39a128f8df20db288ee61c8e42daee7 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-10-02T18:18:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL-ALBERTINO FREITAS SANTANA NETO.pdf: 1316788 bytes, checksum: f39a128f8df20db288ee61c8e42daee7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T18:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL-ALBERTINO FREITAS SANTANA NETO.pdf: 1316788 bytes, checksum: f39a128f8df20db288ee61c8e42daee7 (MD5) / Capes / Os triterpenos constituem talvez o grupo mais importante dos terpenóides. Eles apresentam diversas propriedades medicinais, destacando-se os efeitos antinflamatórios, analgésicos, cardiovasculares e antitumorais. O aumento da bioatividade destes ácidos pode apresentar um avanço na medicina como alternativa na terapia de diversas doenças. A inserção de novas tecnologias para produção fármacos é de essencial importância na química de produtos naturais, afim de tornar viável terapeuticamente algumas moléculas que possuem pouca expressão na natureza. Nas últimas décadas, diferentes sistemas carreadores têm sido extensivamente estudados visando a liberação controlada do fármaco e o possível aumento da eficácia e seletividade das formulações. Tornando-os uma ótima estratégia para a aplicação de substâncias lipofílicas, para promover liberação homogênea do ativo. A importância no desenvolvimento de formulações baseia-se no fato que raramente os ativos são administrados isoladamente, sendo frequentemente inseridos em uma formulação. O objetivo deste trabalho foi à obtenção de formulações contendo nano e micro cápsulas a partir de ácidos triterpênicos. Os lipossomas de ácidos triterpênicos foram obtidos através da técnica de extrusão utilizando seringas conectadas, apresentaram relativa estabilidade coloidal em relação a processos de agregação observada pelo Potencial zeta. Os tamanhos das partículas se encontram próximos a 1µm, tanto para os lipossomas contendo ácidos triterpênicos quanto para os puros, identificados pelo espalhamento de luz dinâmico (DLS), além da observação microscópica da morfologia e distribuição das microcápsulas as quais revelarem uma homogeneidade do diâmetro das vesículas e na distribuição na superfície na lâmina. Quanto as formulações finais o pH compatível com o fisiologico informa ausência, ou pouca, interferência na a pele. Os produtos são estáveis e viáveis no estresse produzido frente ao teste centrifugação. As formulações com os lipossomas possuem maior retenção de água, ampliando o poder de umectancia da formulação. Dentre as quais o emulsão com lipossomas de ácidos triterpênicos possui melhor espalhabilidade e também a melhor preservação do efeito antioxidante no produto final. A encapsulação de ácidos terpênicos pode ser considerada viável e promissora, como também sua incorporação em formulações com finalidades farmacológicas e cosméticas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-04Bitstream added on 2014-06-13T19:48:18Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_lc_me_arafcf.pdf: 1008043 bytes, checksum: 986417155d3a5f5fe5fe070125ff8109 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Neste trabalho estudou-se a encapsulação do cloridrato de ciprofloxacino (CIPRO) em lipossomas revestidos de ácido poli-láctico-co-glicólico (PLGA) ou o copolímero termosensível Pluronic® F127 (PLU). A eficiência de encapsulação foi obtida a partir das frações contendo lipossomas carregados de CIPRO separadas por cromatografia de exclusão em gel de Sephadex G-50, e mostrou-se melhor para as amostras contendo PLGA e maior concentração de CIPRO (5 mg/mL). A determinação do diâmetro médio dos lipossomas foi realizada por espalhamento dinâmico de luz (Light Scattering) e demonstrou redução no tamanho das estruturas quando PLGA ou PLU estavam presentes nas preparações. A incorporação de CIPRO aos lipossomas provocou aumento do tamanho das estruturas quando comparadas com as preparações isentas de fármaco. Verificou-se que o aumento na concentração de fármaco provocou a diminuição do diâmetro médio dos lipossomas. Experimentos de liberação in vitro mostraram que a liberação do CIPRO a partir dos lipossomas foi mais lenta em relação ao CIPRO não encapsulado. A liberação do CIPRO a partir de lipossomas revestidos com PLGA mostrou que a liberação foi mais lenta em relação aos lipossomas não revestidos. Os resultados demonstram que as preparações de CIPRO em lipossomas revestidos com PLGA ou PLU podem representar sistemas de liberação de fármacos antibióticos com grande potencial de utilização. O estudo de biodisponibilidade ocular demonstrou que lipossomas revestidos com PLGA e PLU mantiveram a MIC90 de CIPRO para os principais patógenos oculares por mais tempo que o CIPRO em solução no humor aquoso, quando administrados por via subconjuntival. Estes resultados demonstram que a associação de PLGA e PLU com lipossomas pode ser utilizada como um eficiente sistema de liberação ocular de fármacos. / In the present work we studied the encapsulation of ciprofloxacin hydrochloride (CIPRO) in liposomes coated either by the poly-lactic-co-glycolic acid (PLGA) or thermosensitive copolymer Pluronic® F127 (PLU). Unilamellar liposomes containing 40 or 50 mM of hydrogenated soy phosphatidylcholine (FSH) were prepared by reverse phase evaporation (REV) method, followed by sonication. Encapsulation efficiency was obtained using fractions containing liposomes loaded with CIPRO, separated by exclusion chromatography on Sephadex G-50 gel. Best encapsulation efficiency was obtained with samples containing PLGA with CIPRO at a higher concentration (5 mg/mL). Liposome medium diameter was determined by dynamic light scattering, and showed a size reduction when either PLGA or PLU was present in the preparations. The incorporation of CIPRO into the liposomes caused a size increasement of the structures when compared to preparations lacking the drug. Nevertheless, increasing the drug concentration caused a decrease of the liposome medium diameter. Experiments of in vitro release showed that the liberation of CIPRO from the liposomes was slower when compared to not encapsulated CIPRO. The release of CIPRO from liposomes coated by PLGA showed that the liberation was slower when compared to non-coated liposomes. The results show that liposome preparations containing CIPRO and covered either by PLGA or PLU represent antibiotic drug delivery systems with great possibilities. The bioavailability study shows that liposomes covered by both PLGA and PLU maintained the MIC90 of CIPRO against the main ocular pathogens for longer time than CIPRO solution in aqueous humor, when subconjunctivally injected. These results demonstrate that the PLGA and PLU association with liposomes can be used as an efficient ocular drug delivery system.

A utilização de bioativos naturais como ingredientes está em constante expansão na indústria alimentícia, devido ao aumento das exigências pelos consumidores por alimentos mais saudáveis. Por isso, há uma busca constante de tecnologias que possibilitem a incorporação de tais substâncias em alimentos. O β-caroteno é uma substância hidrofóbica, cujos benefícios estão relacionados principalmente à sua ação antioxidante. Devido à sua característica hidrofóbica, a utilização deste pigmento implica em desafios tecnológicos para ser incorporado em formulações alimentícias de base aquosa. Por este motivo, a encapsulação em lipossomas pode ser uma ótima alternativa, devido à capacidade de englobar tais substâncias em sua bicamada lipídica. Além da proteção, essas matrizes encapsulantes podem proporcionar a liberação controlada dos ingredientes encapsulados, bem como aumento de sua biodisponibilidade. O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar dispersões de lipossomas encapsulando β-caroteno estabilizadas com a adição de hidrocolóides(goma xantana ou mistura de goma xantana e goma guar). O diâmetro médio hidrodinâmico, a distribuição de tamanho das partículas e a morfologia foram avaliadas. Os lipossomas produzidos foram vesículas multilamelares (MLV), as distribuições de tamanho dos lipossomas apresentaram-se heterogêneas e as micrografias revelaram a forma esférica dos lipossomas dispersos no meio aquoso, assim como a integridade da sua bicamada lipídica. Foram realizadas análises de quantificação do β-caroteno e colorimetria instrumental, sendo que todas as dispersões mostraram-se eficientes na preservação do β-caroteno ao longo do período de armazenamento. Os hidrocolóides adicionados foram eficazes no aumento da viscosidade da fase contínua, evitando a agregação das vesículas ao longo do tempo, exceto para dispersão estabilizada com a mistura de goma xantana e goma guar, com 0,15% de goma total. Em relação à adição das dispersões de lipossomas em iogurte, as formulações mostraram-se homogêneas, com ausência de grumos ou qualquer tipo de separação de fases, e também foram aprovados por uma parcela de painelistas na análise sensorial. / The use of natural bioactives as ingredients is in constant expansion in the food industry, due to increasing consumer demands for healthier foods. Therefore, there is a constant search for technologies capable of incorporating such substances in food. β-carotene is a hydrophobic substance, whose benefits are mainly related to its antioxidant action. Because of its hydrophobic characteristics, the use of this pigment implies technical challenges to be incorporated into aqueous-based food formulations. For this reason, encapsulation in liposomes may be a good alternative, because of their ability to incorporate such substances in their lipid bilayer. Besides the protection, these encapsulants matrix can provide controlled release of the encapsulated ingredients, as well as increasing its bioavailability. The objective of this study was to produce and characterize dispersions of liposomes encapsulating β-carotene, which were stabilized with the addition of hydrocolloids: xanthan gum or a mixture of xanthan gum and guar gum. The mean hydrodynamic diameter, distribution of particle size and its morphology were studied. The obtained dispersions were multilamellar vesicles (MLV), the liposomes size distributions were heterogeneous and the micrographs revealed the liposomes spherical shape dispersed in aqueous medium, as well as the integrity of their lipid bilayer. The quantification of β-carotene and instrumental colorimetry analyses indicated the liposomes were efficient in the preservation of β-carotene during the storage period. The hydrocolloids added in the dispersions were highly efficient to increase the viscosity of the continuous phase. Therefore, the hydrocolloids were responsible for the prevention of aggregation of the vesicles during the storage period, except for stabilized dispersion with the mixture of xanthan gum and guar gum, with 0.15% gum total. Regarding the dispersions of liposomes added in yoghurt, the formulations were homogeneous, with absence of lumps or any phase separation, and also have been approved by a significant number of the panelists.

A utilização de bioativos naturais como ingredientes está em constante expansão na indústria alimentícia, devido ao aumento das exigências pelos consumidores por alimentos mais saudáveis. Por isso, há uma busca constante de tecnologias que possibilitem a incorporação de tais substâncias em alimentos. O β-caroteno é uma substância hidrofóbica, cujos benefícios estão relacionados principalmente à sua ação antioxidante. Devido à sua característica hidrofóbica, a utilização deste pigmento implica em desafios tecnológicos para ser incorporado em formulações alimentícias de base aquosa. Por este motivo, a encapsulação em lipossomas pode ser uma ótima alternativa, devido à capacidade de englobar tais substâncias em sua bicamada lipídica. Além da proteção, essas matrizes encapsulantes podem proporcionar a liberação controlada dos ingredientes encapsulados, bem como aumento de sua biodisponibilidade. O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar dispersões de lipossomas encapsulando β-caroteno estabilizadas com a adição de hidrocolóides(goma xantana ou mistura de goma xantana e goma guar). O diâmetro médio hidrodinâmico, a distribuição de tamanho das partículas e a morfologia foram avaliadas. Os lipossomas produzidos foram vesículas multilamelares (MLV), as distribuições de tamanho dos lipossomas apresentaram-se heterogêneas e as micrografias revelaram a forma esférica dos lipossomas dispersos no meio aquoso, assim como a integridade da sua bicamada lipídica. Foram realizadas análises de quantificação do β-caroteno e colorimetria instrumental, sendo que todas as dispersões mostraram-se eficientes na preservação do β-caroteno ao longo do período de armazenamento. Os hidrocolóides adicionados foram eficazes no aumento da viscosidade da fase contínua, evitando a agregação das vesículas ao longo do tempo, exceto para dispersão estabilizada com a mistura de goma xantana e goma guar, com 0,15% de goma total. Em relação à adição das dispersões de lipossomas em iogurte, as formulações mostraram-se homogêneas, com ausência de grumos ou qualquer tipo de separação de fases, e também foram aprovados por uma parcela de painelistas na análise sensorial. / The use of natural bioactives as ingredients is in constant expansion in the food industry, due to increasing consumer demands for healthier foods. Therefore, there is a constant search for technologies capable of incorporating such substances in food. β-carotene is a hydrophobic substance, whose benefits are mainly related to its antioxidant action. Because of its hydrophobic characteristics, the use of this pigment implies technical challenges to be incorporated into aqueous-based food formulations. For this reason, encapsulation in liposomes may be a good alternative, because of their ability to incorporate such substances in their lipid bilayer. Besides the protection, these encapsulants matrix can provide controlled release of the encapsulated ingredients, as well as increasing its bioavailability. The objective of this study was to produce and characterize dispersions of liposomes encapsulating β-carotene, which were stabilized with the addition of hydrocolloids: xanthan gum or a mixture of xanthan gum and guar gum. The mean hydrodynamic diameter, distribution of particle size and its morphology were studied. The obtained dispersions were multilamellar vesicles (MLV), the liposomes size distributions were heterogeneous and the micrographs revealed the liposomes spherical shape dispersed in aqueous medium, as well as the integrity of their lipid bilayer. The quantification of β-carotene and instrumental colorimetry analyses indicated the liposomes were efficient in the preservation of β-carotene during the storage period. The hydrocolloids added in the dispersions were highly efficient to increase the viscosity of the continuous phase. Therefore, the hydrocolloids were responsible for the prevention of aggregation of the vesicles during the storage period, except for stabilized dispersion with the mixture of xanthan gum and guar gum, with 0.15% gum total. Regarding the dispersions of liposomes added in yoghurt, the formulations were homogeneous, with absence of lumps or any phase separation, and also have been approved by a significant number of the panelists.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-21T17:09:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Monalisa Martins Trentini - 2014.pdf: 3160453 bytes, checksum: bcd4f593c1bbefa247afd83aa66ef627 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-10-21T17:16:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Monalisa Martins Trentini - 2014.pdf: 3160453 bytes, checksum: bcd4f593c1bbefa247afd83aa66ef627 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-21T17:16:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Monalisa Martins Trentini - 2014.pdf: 3160453 bytes, checksum: bcd4f593c1bbefa247afd83aa66ef627 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Tuberculosis is a disease that affects thousands of people in the World. Although Brazil Health Program had achieved the goal of reducing to 50% the rate of death induced by Tuberculosis, this disease continues to be the second cause of death by infectious disease. One of the main problems to control the disease is the low efficacy of BCG vaccine in protecting young adults. The development of new vaccines that induces long lasting immune response or that stimulate the immunity induced by BCG may improve the control of TB spreading. This study evaluated the use of microstructured liposomes containing HspX with or without MPL or CpG DNA adjuvants as vaccine for tuberculosis. The HspX specific humoral and cellular immune responses were compared between the different vaccine formulations. All vaccines containing liposome microparticules and HspX were immunogenic and antigenic. Vaccines formulated with CpG DNA and HspX induced the strongest humoral and cellular immune responses, mainly by generating IFN- and TNF-by both CD4 and CD8 T cells. HspX and MPL mainly induced CD8 T cell activation and humoral specific responses. After protection efficacy evaluation against Mycobacterium tuberculosis challenge, the vaccine formulation that reduced both lung inflammatory lesions and the bacterial load was the microstructured liposome containing HspX and CPG DNA. These results show for the first time the use of microstructured liposome as adjuvant and delivery system in HspX vaccine formulation for tuberculosis. / A tuberculose é uma doença que acomete milhões de indivíduos no mundo. No Brasil esta doença é a segunda causa de morte por doença infectocontagiosa, embora o País tenha reduzido a metade o numero de mortes por tuberculose. Um dos principais problemas para o controle desta doença é a baixa eficácia da vacina BCG em proteger adultos. O desenvolvimento de novas vacinas que induzam uma resposta imune eficaz e duradoura, ou que estimulem a BCG a aumentar a imunidade já existente é de grande valia. O objetivo desta dissertação foi avaliar e comparar se lipossomas microestruturados contendo HspX em diferentes formulações vacinais, associados ou não a adjuvantes conhecidos: CpG DNA ou MPL poderiam influenciar na resposta imune humoral e celular de camundongos contra o Mycobacterium tuberculosis. Nossos resultados mostram que lipossomas microestruturados contendo HspX foram imunogênicos e antigênicos. As formulações vacinais contendo o adjuvante CpG DNA foram as principais indutoras de resposta humoral e celular específica, principalmente com produção de IFN- e TNF- tanto por linfócitos T CD4+ quanto CD8+. Formulações vacinais contendo HspX e MPL induziram resposta imune humoral e ativaram principalmente linfócitos T CD8. A formulação vacinal que melhor reduziu as lesões pulmonares provocadas pelo Mycobacterium tuberculosis, assim como a carga bacilar foi a composta por lipossomas microestruturados contendo HspX e CpG DNA. Estes resultados demonstram pela primeira vez o uso de lipossomas microestruturados em formulações de vacinas com o antígeno HspX para a tuberculose.

A terapia fotodinâmica (TFD) tem se apresentado nos últimos anos como uma alternativa para o tratamento de tumores cutâneos, viscerais e sistêmicos, demonstrando resultados promissores, tanto em estudos in vitro como in vivo. Trata-se de uma técnica simples e não invasiva. A terapia consiste na excitação de um fármaco fotossensibilizante por uma fonte de luz visível que depois de absorvida pela molécula, leva a produção espécies reativas de oxigênio (EROs) em presença do oxigênio molecular por uma sequencia de reações fotoquímicas. Nesse trabalho propõe-se a preparação, caracterização e detreminação da atividade fotodinâmica de uma nanoemulsão rica em colesterol e de lipossomas ultradeformáveis como novos sistemas de liberação para o fármaco fotossensibilizante cloro alumínio ftalocianina (PcAlCl), comparando com um sistema clássico de lipossoma convencional. Como modelo celular foram utilizadas células de glioblastoma (U87MG) e de melanoma (B16F10). As formulações apresentaram características desejáveis como reprodutibilidade, tamanho de partícula, estabilidade curto e em longo prazo e deformidade adequados para a utilização como meio de veiculação da PcAlCl. Pela análise dos estudos fotofísicos de rendimento quântico de fluorescência (?F), tempo de vida de fluorescência (?) e rendimento quântico de oxigênio singleto (??) da PcAlCl em etanol e incorporada nas formulações, pode-se observar que a incorporação a um veículo de liberação melhorou as características da PcAlCl. Nos estudos em células nenhum dos sistemas apresentou citotoxicidade na ausência de luz, mas apresentaram um aumento da atividade fotodinâmica da PcAlCl de até 80% quando comparadas à PcAlCl livre quando irradiadas. Todas as formulações apresentaram características que corrobora com o emprego como sistemas de liberação para o aumento da atividade fotodinâmica da PcAlCl podendo serem empregados no tratamento de glioblastoma e de melanoma / The Photodynamic therapy (PDT) has been an alternative for the treatment of skin, and brain tumors, and has shown promising results, both in vitro and in vivo, is a simple and non-evasive technique. The therapy consists into a light-sensitive drug excitation by a light visible source that once absorbed by the molecule lead to produce reactive oxygen species (ROS) in the molecular oxygen presence by a sequence of photochemical reactions. This work proposes the preparation and characterization of a cholesterol-rich nanoemulsion and ultradeformable liposomes as new delivery systems for the drug photosensitizer chloro aluminum phthalocyanine (PcAlCl) compared to a classical system as the conventional liposome and their photodynamic activity in glioblastoma cells line (U87MG) and melanoma cells line (B16F10). The formulations showed suitable characteristics such as reproducibility, particle size, short and long-term stability and deformity for their use as drug delivery for PcAlCl. For the photophysical studies: absorption, fluorescence, fluorescence quantum yield (?F), fluorescence lifetime (?) and quantum yield of singlet oxygen (??) of PcAlCl in ethanol and incorporated in the formulations demonstrated that the incorporation was able to improve its photophysical characteristics. In in vitro studies, the drug delivery systems showed no cytotoxicity in the absence of light, but demonstrated increased in PcAlCl photodynamic activity up to 80% over the PcAlCl free when irradiated. All formulations showed characteristics, which cooperates with the use of these drug delivery systems for, increased the PcAlCl photodynamic activity for glioblastoma and melanoma treatment

O câncer de mama representa um grave problema de saúde pública. Dentre os fármacos empregados, destaca-se o paclitaxel, um agente citotóxico eficaz, porém associado a severos efeitos colaterais. A metformina hidrocloreto tem obtido resultados promissores para o tratamento de neoplasias, porém é bastante hidrofílica, fator limitante da biodisponibilidade. A rapamicina tem demonstrado sinergismo com paclitaxel e potente atividade antitumoral. Todavia, é um fármaco lipofílico e possui desvantagens. Sistemas nanoestruturados de fármacos como lipossomas PEGlados são largamente empregados para a melhora da farmacocinética e potencialização da ação terapêutica. Ademais, a funcionalização de lipossomas com anticorpos monoclonais pode permitir a entrega seletiva do fármaco encapsulado à célula alvo. No presente trabalho objetivou-se desenvolver e caracterizar lipossomas e imunolipossomas funcionalizados com trastuzumabe, contendo paclitaxel, metformina hidrocloreto e/ou rapamicina, bem como avaliar as formulações através de estudos in vitro e in vivo. Os resultados mostraram que a metformina hidrocloreto foi encapsulada com baixa eficiência, menor que 20%, ao passo que paclitaxel e rapamicina puderam ser co-encapsulados com adequados valores de eficiência de encapsulação, equivalente a 56,32% para paclitaxel e 73,31% para rapamicina, e tamanho de partícula nanométrico, de 136,95 nm em composição biocompatível baseada em SPC:Col:DSPE-PEG(2000). Os dois fármacos apresentaram liberação lenta, e foram convertidos às formas molecular e amorfa, respectivamente para paclitaxel e rapamicina quando encapsulados. Os imunolipossomas foram funcionalizados com elevada eficiência com trastuzumabe e mantiveram o tamanho nanométrico, com adequados valores de encapsulação dos fármacos. Ainda, mostrou-se o sinergismo entre paclitaxel e rapamicina coencapsulados em lipossomas em células triplo negativas (4T1) e houve sinergismo entre os dois fármacos, mediado pelo anticorpo em imunolipossomas frente à linhagem celular HER2 positiva (SKBR3), em virtude do aumento do uptake celular mediado pelo trastuzumabe. Finalmente, os resultados obtidos in vitro foram confirmados in vivo, sendo que os lipossomas com paclitaxel e rapamicina coencapsulados foram capazes de controlar o crescimento tumoral em modelo de câncer de mama triplo negativo, ao passo que o imunolipossoma com os dois fármacos permitiu o controle do crescimento de tumores xenográficos HER2 positivos, cuja média de volume tumoral correspondeu a 25,27%, 44,38% e 47,78% das médias dos volumes tumorais de controle negativo, positivo e lipossoma, respectivamente. Portanto, a formulação desenvolvida nesse trabalho tem potencial para ser avaliada em estudos clínicos. / Breast cancer represents a severe public health problem. Among the drugs used in the treatment, paclitaxel is an effective cytotoxic drug, but associated with side effects. Hydrocloride metformin has shown promising results for cancer treatment, however it is very hydrophilic, a limiting factor for bioavailability. Rapamycin has demonstrated synergism with paclitaxel and potent anticancer activity, though it is a lipophilic drug with drawbacks that compromise its bioavailability. Nanostructured drug delivery systems, such as PEGylated liposomes are largely employed for pharmacokinetics improvement and enhancement of therapeutic effect. Furthermore, the functionalization of liposomes with monoclonal antibodies enables the selective delivery of the loaded drug to the target cell. In the present work, we aimed to develop and characterize liposomes and immunoliposomes functionalized with trastuzumab, containing paclitaxel, hydrocloride metformin and/or rapamycin, as well as to evaluate the formulations through in vitro and in vivo studies. The results showed that hydrocloride metformin was encapsulated with low efficiency, less than 20%, on the other hand paclitaxel and rapamycin could be co-loaded with suitable values of encapsulation efficiency, 56.32% for paclitaxel and 73.31% for rapamycin and nanometric particle size, 136.95 nm, based on a SPC:Chol:DSPE-PEG(2000) composition. The two drugs displayed slow release, and were converted to molecular and amorphous form, respectively for paclitaxel and rapamycin when encapsulated. The immunoliposomes were developed with high efficiency with trastuzumab and kept the nanometric size, with adequate encapsulation of drugs. Moreover, herein it was shown the synergism between paclitaxel and rapamycin co-loaded in liposomes in triple negative cells (4T1) and there was synergism between the two drugs mediated by the antibody in immunoliposomes in the HER2-positive cell line (SKBR3), due to the improved cell uptake mediated by trastuzumab. Finally, the results obtained in vitro were confirmed in vivo. Co-loaded paclitaxel and rapamycin were able to control tumor growth in a triple negative breast cancer animal model, while the immunoliposome containing the two drugs allowed for better control of tumor growth in a HER2-positive breast xenograft model, whose average tumor volume corresponded to 25.27%, 44.38% and 47.78% of the tumor volumes of positive control, negative control and liposome, respectively. Therefore, the formulation developed herein has potential to be evaluated in clinical trials.