FREITAS, M. R. Mucosite oral induzida por 5-fluorouracil em hamsters persiste após o bloqueio farmacológico da via dos leucotrienos. 2017. 116 f. Tese (Doutorado em Ciências Médico-Cirúrgicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Luciene Oliveira (luciene@ufc.br) on 2017-08-22T14:00:20Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_vcs.pdf: 6067321 bytes, checksum: 7dd2869c70a8517aaae8b4dc434bbd98 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-22T15:20:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_vcs.pdf: 6067321 bytes, checksum: 7dd2869c70a8517aaae8b4dc434bbd98 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T15:20:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_vcs.pdf: 6067321 bytes, checksum: 7dd2869c70a8517aaae8b4dc434bbd98 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / Oral mucositis (OM) is an important adverse effect in patients undergoing cancer treatment. Its pathophysiology is still not fully understood and causes discomfort and treatment interruptions, contributing to a worse prognosis. The relationship of the cyclooxygenase-2 (COX-2) pathway with the MO to chemotherapeutic agents is known, but the role of leukotrienes (another arachidonic acid metabolite and one of the actors in inflammatory processes of the gastrointestinal mucosa) is not determined. An experimental study of 5-fluorouracil induced OM in hamsters was conducted to investigate the participation of cysteinyl leukotrienes (cys-LT) in their pathophysiology. The study had two parts: 1st experiment: four control groups 1) 5-FU: animals submitted to oral mucositis; 2) SAL: animals not submitted to oral mucositis or normal control; 4) CLX (standard treatment group): animals with OM who received celecoxib (7.5 mg/kg/day, intraperitoneal) 1 hour before the administration of 5-fluorouracil, and daily until the tenth day) and three treatment groups: animals with OM and montelukast (MTK) cys-LT blockade (10 or 20 or 40 mg/kg/day/10 days; orally by gavage). The controls groups used were the same as those of the 1st experiment, except for the CLX group and the treatment group had blocked the leukotriene synthesis cascade by MK886 (inhibitor of 5-lipoxygenase synthesis) (3mg/kg/day; intraperitoneal) for 4 days, given 1 hour before 5-fluorouracil administrations and daily until the 4th experimental day. In both experiments the animals were euthanized on the 10th day and macroscopic analysis of the jugal mucosa was performed, as well as histopathological evaluation for hematoxylin-eosin, immunohistochemical evaluation for iNOS2, COX-2, IL1-β, TNF-α and IL10 for all experimental groups and dosage of myeloperoxidase for the animals of the 2nd experiment. Montelukast presented partial protection at a dose of 40mg/kg/day in the macroscopic evaluation, but in the other doses administered there was no protection. MK886 did not macroscopically protect the progression of OM by 5-fluorouracil. Myeloperoxidase activity was not reduced by the use of MK886 for four days. Montelukast or MK886 were unable to protect the animals from OM in the histopathological evaluation by hematoxylin-eosin, and unable to reduce the expression of iNOS2, COX-2 and IL1-β. But montelukast and MK886 decreased TNF-α expression at all doses used. Montelukast promotes a decrease in IL-10 expression at a dose of 40mg/kg/day. COX-2 blockade reduced the expression of iNOS2, COX-2, IL-1β and TNF-α, but was unable to induce decreased expression of IL10. Differing from the COX-2 pathway, the leukotriene pathway is not relevant in the pathophysiology of the 5-fluorouracil induced oral mucositis model. However, its effect on TNF-α suggests a modulating action specifically on this cytokine. / A mucosite oral (MO) é um importante efeito adverso em pacientes submetidos ao tratamento do câncer. Sua fisiopatologia ainda não está totalmente esclarecida e causa desconforto e interrupções do tratamento contribuindo para um pior prognóstico. A relação da via da cicloxigenase-2 (COX-2) com a MO por quimioterápicos é conhecida, mas o papel dos leucotrienos (outro metabólito do ácido araquidônico e um dos atores nos processos inflamatórios da mucosa gastrointestinal) não está determinado. Foi realizado estudo experimental de MO induzida por 5-fluorouracil (5-FU), em hamsters, para investigar a participação, dos cisteinil leucotrienos (cys-LT) na sua fisiopatologia. O estudo teve duas partes: 1° experimento: quatro grupos controles 1) 5-FU: animais submetidos à mucosite oral; 2) SAL: animais não submetidos à mucosite oral ou controle normal; 3) TM: animais submetidos apenas trauma mecânico (escoriações nas mucosas jugais) e 4) CLX (grupo tratamento padrão): animais com MO que receberam celecoxibe (7,5 mg/kg/dia; intra peritoneal) 1 hora antes das administrações de 5-FU e, diariamente até o décimo dia do experimento) e três grupos tratamento: animais submetidos a MO e bloqueio dos cys-LT por montelucaste (MTK) (10 ou 20 ou 40 mg/Kg/dia/10 dias; via oral por gavagem). 2o experimento: os grupos controles utilizados foram os mesmos do 1° experimento, com exceção do grupo CLX e grupo tratamento com bloqueio da cascata de síntese de leucotrienos por MK886 (inibidor da síntese da 5-lipoxigenase) (3mg/kg/dia; intraperitoneal) por 4 dias, administrado 1 hora antes das administrações de 5-fluorouracil e, diariamente, até o 4° dia experimental. Em ambos experimentos os animais foram eutanasiados no 10° dia e realizadas análises macroscópicas das mucosas jugais, além de avaliação histopatológica para hematoxilina-eosina, avaliação imunoistoquímica para iNOS2, COX-2, IL1-β, TNF-α e IL10 para todos os grupos experimentais e dosagem de mieloperoxidade para os animais do 2° experimento. Montelucaste apresentou uma proteção parcial na dose de 40mg/kg/dia na avaliação macroscópica, mas nas demais doses administradas não houve proteção. O MK886 não protegeu macroscopicamente a evolução da MO por 5-fluorouracil. A atividade da mieloperoxidase não foi reduzida pelo uso de MK886 por quatro dias. Montelucaste ou MK886 foram incapazes de proteger os animais da MO na avaliação histopatológica por hematoxilina-eosina, e incapaz de reduzir a expressão de iNOS2, COX-2 e IL1-β. Mas montelucaste e MK886 diminuíram a expressão de TNF-α em todas as doses utilizadas. Montelucaste promoveu a diminuição da expressão de IL10 na dose 40mg/kg/dia. O bloqueio da COX-2 reduziu a expressão de iNOS2, COX-2, IL1-β e TNF-α, mas foi incapaz de promover diminuição da expressão de IL10. Diferindo da via da COX-2, a via dos leucotrienos não é relevante na fisiopatologia no modelo de mucosite oral induzida por 5-flourouracil. Entretanto, o seu efeito sobre o TNF-α sugere uma ação moduladora especificamente sobre esta citocina.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-21T13:46:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 505600 bytes, checksum: 8e43949bb2f44571cb70f82baf79f8f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T13:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 505600 bytes, checksum: 8e43949bb2f44571cb70f82baf79f8f0 (MD5) Previous issue date: 2000-10-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As farinhas de soja integrais utilizadas neste trabalho foram obtidas, a partir de grupos de sementes (bulks) derivadas de linhagens que diferem entre si com relação à presença de lipoxigenases (LOX) e/ou inibidor de tripsina Kunitz (KTI). Para essa seleção e confirmação dos genótipos realizaram-se análises de lipoxigenases, de inibidores de tripsina e de quimotripsina. Realizou-se ainda, análise da composição química centesimal para caracterização das farinhas e atividade hemaglutinante nas sementes e nas farinhas de soja derivadas. Constatou-se , através da atividade hemaglutinante, que o tratamento térmico (89oC por 5 minutos) aplicado no processamento das farinhas foi suficiente para inativar as lectinas presentes na soja. Com o objetivo de avaliar a qualidade protéica e digestibilidade in vivo das farinhas de soja, procedeu-se aos ensaios biológicos com ratos, em que foram avaliados o PER (Relação da Eficiência Protéica), NPR (Razão Protéica Líquida), NPU (Utilização Protéica Líquida) e a digestibilidade. Os valores de PER, NPR, NPU para as variedades de soja foram inferiores aos valores obtidos para caseína, possivelmente em virtude da deficiência da proteína de soja em algum tipo de aminoácido essencial. Para as farinhas sem KTI foram obtidos valores de digestibilidade maiores que para as farinhas com KTI, e esses foram bem próximos aos da caseína. Isto comprova que a eliminação genética do KTI melhora consideravelmente a digestibilidade da proteína de soja. No entanto, essa diferença não refletiu em melhor qualidade protéica dessa variedade, visto que não houve diferença nos valores de PER, NPR e NPU entre as variedades estudadas. Procedeu-se a determinação da composição aminoacídica das farinhas e cálculo do PDCAAS (Escore Químico Corrigido pela Digestibilidade) , constatando-se que o aminoácido limitante dessa soja é lisina e não metionina, ao contrário do que aponta a literatura, possivelmente em decorrência do melhoramento genético que levou a essa alteração. Os resultados do PDCAAS não indicaram diferença entre as farinhas sem KTI das farinhas derivadas de linhagens com KTI, como foi observado pelos resultados da digestibilidade in vivo. Conclui-se que a retirada genética do inibidor de tripsina Kunitz melhora significativamente a digestibilidade da proteína de soja, eliminando a necessidade de se empregar altas temperaturas nos produtos de soja visando inativação desse inibidor e, conseqüentemente, evitando o superaquecimento com insolubilização de proteínas, perdas de características funcionais e destruição de alguns aminoácidos. / The whole soy flours used in this work were obtained from seed bulks derived from strains differing in relation to presence of lipoxygenases (LOX) and/or Kunitz trypsin (KTI). Analyses for lipoxygenase and trypsin and chemotrypsin inhibition were performed in order to select and confirm the genotypes. Chemical content analysis was also performed so as to characterize the flours and the hemaglutinating activity in the seeds and the derived soy flour. It was observed from that activity that the thermal treatment (89 o C for 5 min) on the flour processing was enough to inactivate the lectins present in the soy. In order to evaluate the in vivo digestibility and protein quality for the soy flours, biological tests with rats were performed and from these tests, PER, NPR, NPU and digestibility were evaluated. PER (Protein Efficiency Ratio), NPR (Net Protein Ratio) and NPU (Net Protein Utilization) values were obtained below the values for casein. This result may be due to the deficiency of sulfured amino acids in soy protein. Flours without KTI showed higher values for digestibility than flours with KTI. These values were quite close to the ones for casein. This indicates that the KTI genetic elimination in soy improves the digestibility for the soy protein a lot. However, this difference did not reflect in better protein quality of this soy strain, since there was no differences in the values of PER, NPR and NPU between the strains. Amino-acidic content for the flours and PDCAAS (Protein Digestibility Corrected Amino Acid Score) values were determined showing that lysine rather than methionine is the limiting amino acid for this soy, different of that pointed by literature, possibly because the genetic enhancements. PDCAAS showed no difference between flours without KTI and the flours derived from KTI strains as it was observed from the in vivo digestibility results. It follows that the genetic withdrawal of Kunitz trypsin inhibitor significantly improves digestibility of soy protein, eliminating the need to deploy high temperatures in soy products to inactivate this inhibitor and, consequently, avoiding overheating with protein insolubilization, characteristics and loss of some aminoacids. loss of functional / Tese importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-06T17:21:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 734149 bytes, checksum: f310c496a5b114ec0d26d16fed0a7341 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T17:21:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 734149 bytes, checksum: f310c496a5b114ec0d26d16fed0a7341 (MD5) Previous issue date: 2015-11-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O déficit hídrico é um dos principais estresses abiótico capaz de gerar dano para o crescimento e desenvolvimento da planta de soja, principalmente no período de floração e enchimento dos grãos. Além disso, a lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis), uma das principais pragas desfolhadora da cultura, causa perdas significativas na lavoura. O objetivo deste trabalho foi avaliar o impacto do estresse hídrico no mecanismo de defesa da soja e nos parâmetros bioquímicos da lagarta A. gemmatalis. O experimento foi realizado com a cultivar UFV-16, submetida ou não ao estresse hídrico e à injúria pela lagarta; cultivar UFV-16 submetida ou não ao estresse hídrico sem a injúria pela lagarta, e, cultivar UFV-16 irrigada e reirrigada, submetidas à injúria pela lagarta. Os tratamentos foram compostos por 5 repetições. Avaliou-se a atividade de lipoxigenase e síntese de inibidores de proteases nas folhas de soja. No intestino da lagarta avaliou-se a atividade das proteases totais, da tripsina-like amidásica e esterásica e a concentração de proteína total. A atividade de lipoxigenases nas folhas de soja sob estresse hídrico crescente, com (CL) e sem (SL) a injúria pela lagarta, não apresentou diferença significativa entre os diferentes estresses hídricos (P>0,05). Entretanto, os inibidores de proteases nas plantas de soja em ambos os tratamentos CL e SL, aumentaram até o estresse hídrico ψ am= -1,0 MPa e no ψ am= -1,6 MPa os valores diminuíram. No intestino da lagarta, a atividade de proteases totais foi significativamente menor nas plantas do ψ am= -1,6 MPa. Mas, as atividades da tripsina-like amidásica e esterásica foram decrescentes no intestino das lagartas que se alimentaram das folhas nos três potenciais hídricos: ψ am= -0,6 MPa; ψ am= -1,0 MPa e ψ am= -1,6 MPa. Para a soja irrigada e reirrigada não houve diferença significativa (P>0,05) na atividade da lipoxigenase e na produção de inibidores de proteases. A atividade da enzimas e a concentração da proteína total no intestino da lagarta não apresentaram diferença estatística significativa (P>0,05). Portanto, a cultivar UFV-16 é tolerante ao déficit hídrico ao qual foi submetida, e ainda, responde com defesas às injúrias causadas pela lagarta A. gemmatalis. / Water deficit is a very important abiotic stress and it produces damage to the growth and development of soybean plants, particularly in the flowering period and grain filling. Furthermore, the soybean caterpillar (Anticarsia gemmatalis), the principal defoliator pest crop, it causes significant crop losses. The objective of this study was to evaluate the impact of water stress in soybean defense mechanism and biochemical parameters of soybean caterpillar A. gemmatalis. The experiment was conducted with the UFV-16 cultivar, submitted and did not submit to water stress and injury by the caterpillar; UFV-16 cultivar submitted and did not submit to water stress without injury by the caterpillar, and UFV-16 cultivar irrigated and reirrigated submitted to injury by the caterpillar. The treatments consisted of 5 repetitions. We evaluated the lipoxygenase activity and protease inhibitors synthesis in soybean leaves. In the caterpillar gut was evaluated total proteases activity, amidolytic and esterolytic trypsin-like and total protein concentration. The lipoxygenase activity in soybean leaves submitted crescent water stress, with (CL) and without (SL) the injury caused by the caterpillar, did not show significant difference between all water stress (P>0.05). However, protease inhibitors in the soybean plants to both CL and SL treatments, increased until water stress of ψ am = -1.0 MPa and to plants with ψ am = -1.6 MPa, protease inhibitors decreased. In the caterpillar gut, total protease activity was significantly lower in plants with ψ am = -1.6 MPa. But amidolytic and esterolytic trypsin-like decreased in caterpillars gut fed on leaves in three water potentials: ψ am = -0.6 MPa; ψ am = -1.0 MPa and ψ am = -1.6. Between irrigated and reirrigated soybeans there were not significant differences (P>0.05) in the lipoxygenase activity and protease inhibitors synthesis. The enzymes activities and total protein concentration in the caterpillar gut did not show statistically significant difference (P>0.05). Therefore, UFV-16 cultivar is tolerant to water stress which has been submitted, and it responds with defenses to injuries caused by the caterpillar A. gemmatalis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_carolina_terra_borges.pdf: 918571 bytes, checksum: 18eeef3adf6b7f2c33e02b67f0bfa596 (MD5) Previous issue date: 2013-07-31 / Soybean seed quality is high related with crop production. Seed coat has the function of maintaining this quality, since acts as a modulator of the interactions between the internal and external environment of the seed, controls gas exchange and water to the environment and regulates germination by interfering with the mechanisms dormancy. In soybean seed husk is present lipoxygenase VLXC, which is involved in the temporary storage of nitrogen. Given the above, the objective of this study was to evaluate the expression of the gene coding for the protein VLXC on the tegument of four soybean genotypes at different times of collection after anthesis. The experiment was conducted in greenhouse Station Lowlands of Embrapa Clima Temperado and Laboratório de biotecnologia de sementes (UFPel / FAEM) in the city of Capão do Leão - RS, in a completely randomized design with three replications, and treatments arranged in a factorial model. We used four contrasting genotypes, two cultivars of yellow coat (COODETEC 202 and BMX Potência RR) and two genotypes of black coat (Tegumento Preto and IAC). Samples were collected along the integuments of developing soybean seed corresponding to periods of 25, 30, 35, 40, 45, 50 and 55 days after anthesis. Proceeded to RNA extraction of tegument, followed by obtaining the cDNA for further analysis of qRT-PCR (polymerase chain reaction of reverse transcription real-time), to quantify the relative accumulation of gene transcripts VLX-C. The level accumulation of gene transcripts VLXC cultivar CD 202 has been raised most of the times, followed by a low expression evaluated last time that corresponds with the time it was made harvesting soybeans. The strain TP and the IAC and BMX Potência RR did not show the same behavior of the cultivar CD 202, due to low accumulation of gene transcripts VLXC in all periods. The results indicate that the relative accumulation of gene transcripts VLXC in the seed coat of soybeans differs between both periods evaluated, as well as between genotypes. / A qualidade de sementes de soja é um dos fatores responsáveis para a obtenção de altas produtividades nas lavouras. Para isso, o tegumento da semente tem como função a manutenção dessa qualidade, visto que atua como modulador das interações entre a parte interna e o meio externo da semente, controla trocas gasosas e de água com o ambiente e regula a germinação, interferindo nos mecanismos de dormência. No tegumento de sementes de soja encontra-se presente a lipoxigenase VLXC, a qual está envolvida no armazenamento temporário de nitrogênio. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão do gene que codifica para a proteína VLXC no tegumento de quatro genótipos de soja, em épocas distintas de coleta após a antese. O experimento foi conduzido em casa de vegetação da Estação Terras Baixas da Embrapa Clima Temperado e no Laboratório de Biotecnologia de Sementes (UFPel/FAEM), no município de Capão do Leão - RS, em delineamento completamente casualizado, com três repetições, sendo os tratamentos arranjados em esquema bifatorial. Foram utilizados quatro genótipos de soja contrastantes quanto à coloração, duas cultivares de tegumento amarelo (COODETEC 202 e BMX Potência RR) e duas cultivares de tegumento preto (Tegumento Preto e IAC). Foram efetuadas coletas dos tegumentos ao longo do desenvolvimento da semente de soja correspondendo aos períodos de 25, 30, 35, 40, 45, 50 e 55 dias após a antese. Procedeu-se a extração de RNA dos tegumentos, seguido da obtenção do cDNA para posterior análise de qRT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction in real-time) visando quantificar o acúmulo relativo de transcritos do gene VLXC. O nível de acúmulo de transcritos para o gene VLXC na cultivar CD 202 foi elevado na maioria das amostragens, seguido de baixa expressão na última época avaliada, que corresponde ao momento em que foi efetuada a colheita da soja. A linhagem TP e as cultivares IAC e BMX Potência RR não apresentaram o mesmo comportamento da cultivar CD 202, devido ao baixo acúmulo de transcritos do gene VLXC, em todas as épocas avaliadas. Os resultados obtidos indicam que o acúmulo relativo de transcritos do gene VLXC no tegumento de sementes de soja difere tanto entre as épocas avaliadas, bem como entre os genótipos estudados.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-05T16:26:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 493050 bytes, checksum: d1e2b387073627f55964c108afec3922 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T16:26:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 493050 bytes, checksum: d1e2b387073627f55964c108afec3922 (MD5) Previous issue date: 2002-01-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram conduzidos dois experimentos: 1) mapeamento de QTLs para características agronômicas em soja; 2) lipoxigenases, teor de ácido linolênico e qualidade fisiológica de sementes de soja. O mapeamento de QTLs é uma das primeiras etapas para a implantação da seleção assistida por marcadores moleculares nos programas de melhoramento de plantas. Além de identificar marcadores moleculares associados a QTLs que controlam características de interesse, o mapeamento permite entender as relações existentes entre as diferentes características. O primeiro experimento teve o objetivo de identificar marcadores do tipo microssatélites ligados a QTL’s que controlam as características dias para maturação, altura de planta na maturação, número de nós na maturação, número de vagens por planta, altura da primeira vagem, altura de inserção da primeira vagem, número de sementes por planta, peso de sementes por planta, peso de cem sementes e teor de proteína. Foram utilizados 118 RIL’s (linhagens recombinantes endogâmicas), que se encontravam nas gerações F6 e F7. Inicialmente foi realizado um cruzamento entre os genótipos BARC-8 e Garimpo, contrastantes para as características agronômicas avaliadas. As RIL’s foram obtidas pela descendência, a partir da geração F2, de uma única semente de cada planta, SSD ("single seed descent"). As RIL’s foram cultivadas em quatro ambientes: Viçosa-MG, 1999; Cascavel-PR, 1999; Viçosa-MG, 2000 e São Gotardo-MG, 2000. O mapeamento genético foi realizado com marcadores microssatélites. Com a utilização de um nível de significância de 10% para o mapa foram identificados os seguintes QTLs: 1) dois QTLs ambientes não específicos nos grupos de ligação C1 e E e dois QTLs ambiente específicos nos grupos de ligação N e G associados à característica teor de proteína; 2) dois QTLs ambientes específicos nos grupos de ligação D2 e J associados à característica altura de inserção da primeira vagem; 3) um QTL ambiente não específico nos grupos de ligação K e dois QTLs ambientes específicos nos grupos de ligação D2 e J, associados à característica dias para maturação; 4) dois QTLs ambientes específicos nos grupos de ligação F e J associados à característica número de vagens por planta; 5) três QTLs ambientes específicos nos grupos de ligação F, C1 e K associados à característica número de sementes por planta; 6) três QTLs ambientes específicos nos grupos de ligação D2, K e D1b+W associados à característica número de nós na maturação; 7) um QTL ambiente específico no grupo de ligação C1 e dois QTLs ambientes não específicos nos grupos de ligação K e G associados à característica peso de cem sementes; 8) um QTL ambiente não específico nos grupo de ligação D2 e um QTL ambiente específico nos grupo de ligação J, associados à característica altura da primeira vagem; e 9) dois QTLs ambientes não específicos nos grupo de ligação D2 e J e um QTL ambiente específico no grupo de ligação G, associados à característica altura de plantas na maturação. Lipoxigenases (E.C. 1.13.11.12) são enzimas que catalisam a adição de oxigênio molecular a ácidos graxos polinsaturados. As lipoxigenases (LOX) estão presentes nas sementes de soja na forma de três isoenzimas LOX1, 2 e 3. Os ácidos linoléico e linolênico destacam-se como os mais susceptíveis à degradação oxidativa enzimática e não enzimática. A hidroperoxidação dos ácidos graxos polinsaturados pela ação de lipoxigenases leva a produção do 9 e do 13 hidroperóxidos do ácido graxo, que por reações subseqüentes produzem aldeídos e cetonas de cadeia curta. Estes compostos secundários produzidos têm sido associados com a deterioração de sementes. No segundo experimento o objetivo foi determinar a influência das isoenzimas lipoxigenases e do teor de ácido linolênico na qualidade de sementes de soja. Inicialmente foi realizado um cruzamento entre os genótipos BARC-12 e Doko-TN. O genótipo BARC-12 tem baixo teor de ácido linolênico e a presença das isoenzimas LOX 1, 2 e 3. O genótipo Doko-TN é uma linhagem avançada do Programa de Melhoramento de Soja do Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária (BIOAGRO) que possui teor normal de ácido linolênico e ausência de lipoxigenases (linhagem triplo-nula). Na geração F5, as sementes foram colhidas com retardamento de colheita no campo, nos estádios R8, R8+10, R8+20 e R8+30 dias. Em seguida, foram construídos “bulks” de sementes com as seguintes características: (1) presença de lipoxigenases e teor normal de ácido linolênico; (2) presença de lipoxigenases e baixo teor de ácido linolênico; (3) ausência de lipoxigenases e teor normal de ácido linolênico e (4) ausência de lipoxigenases e baixo teor de ácido linolênico. A qualidade das sementes dos “bulks” foi avaliada por meio dos testes de germinação, envelhecimento acelerado, velocidade de emergência das plântulas em substrato de areia e porcentagem de emergência aos cinco dias em substrato de areia. Sementes com baixo teor de ácido linolênico apresentaram no teste de envelhecimento acelerado maior porcentagem de germinação e menor número de plântulas anormais quando colhidas após o estádio R8+20 dias. Sementes com presença de lipoxigenases apresentaram maior índice de velocidade e percentagem de plântulas emergidas em areia no quinto dia após a implantação do teste de velocidade de emergência. Os resultados indicaram que a característica baixo teor de ácido linolênico conferiu maior vigor às sementes de soja e a presença de lipoxigenases conferiu maior velocidade de emergência de plântulas. / In this work two experiments were carried out: I - Mapping QTLs for soybean agronomic traits and II – Effects of genetic elimination of lipoxygenases and reduced linolenic acid content on physiological quality of soybean seeds. Mapping Quantitative Trait Loci (QTLs) is one of the first steps for the implementation of molecular markers assisted selection in plant breeding. Besides the identification of molecular markers associated to QTLs that control the trait of interest, mapping allows to understand the relationship among different traits. In the first experiment, QTLs were mapped in recombinant imbred lines (RILs) from a cross between two soybeans (Glicyne max (L.) Merrill) cultivars: Garimpo and BARC-8. RILs were obtained by single seed descent (SSD). 118 F6 and F7 RILs were grown at four locations: Viçosa-MG 1999, Cascavel-PR 1999, Viçosa-MG 2000 and São Gotardo-MG 2000. The traits analyzed included plant height, first pod height, number of seeds per plant, maturity, plant seed weight, one hundred seed weight, seed protein content, number of knots, number of pods and insertion of first pod height. The map was constructed with microssatelites markers. The following QTLs were identified: (1) Two QTLs non-environment specific in linkage groups C1 and E and two QTLs environment specific in linkage groups N and G associate with seed protein content; (2) two QTLs environment specific in linkage groups D2 and J associated with first pod insertion heigth; (3) one QTL non-environment specific in linkage group K and two QTLs environment specific in linkage groups F and J associated with maturity; (4) two QTLs environment specific in linkage groups F and J associated with number of pods per plant; (5) three QTLs environment specific in linkage groups F, C1 and K associated with number of seeds per plant; (6) three QTLs environment specific in linkage groups D2, K and D1b+W associated with number of knots; (7) one QTL environment specific in linkage group C1 and two QTLs non-environment specific in linkage groups K and G associated with one hundred seed weight; (8) one QTL non- environment specific in linkage group D2 and one QTL environment specific in linkage group J associated with first pod height; (9) two QTLs non- environment specific in linkage groups D2 and J and one QTL environment specific in linkage group G associated with plant height. In the second experiment, we determine effects of absence of lipoxygenases and low linolenic acid content on seed quality after delayed harvest. Seeds from a cross between the genotypes, BARC-12 (low linolenic acid content) and Doko TN (lipoxygenases absent) were grown under green house and field conditions. F5 seeds were harvested at the stage R8 and 10, 20 and 30 days after R8 stage. Four different bulks were constructed: (1) seeds with lipoxygenase and normal linolenic acid content; (2) seeds with lipoxygenase and low linolenic acid content; (3) seeds without lipoxygenase and normal linolenic acid content and (4) seeds without lipoxygenase and low linolenic acid content. Seed physiological quality was evaluated by the standard germination test, accelerated aging test and emergence speed index. Seeds with low linolenic acid content presented higher seed quality as measured by accelerated aging test. Seeds with lipoxygenase showed higher vigor as compared to those lacking these isozymes as determined by emergence speed index.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-06T19:16:24Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 755251 bytes, checksum: 91e67472aa6d31d28359b627df94c103 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T19:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 755251 bytes, checksum: 91e67472aa6d31d28359b627df94c103 (MD5) Previous issue date: 2004-01-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se neste trabalho: avaliar o perfil de atividade das isoenzimas lipoxigenases, durante a germinação de sementes de soja, submetidas ao retardamento de colheita e ao armazenamento; avaliar a qualidade fisiológica e sanitária de sementes, colhidas em diferentes épocas; e estimar as correlações entre os resultados dos testes, utilizados nessas avaliações com a emergência das plântulas no campo e o seu potencial de armazenamento. No ano agrícola 2000/01, sementes das variedades CAC-1, FT- Cristalina, UVF-16 (Capinópolis) e das respectivas linhagens com ausência das três lipoxigenases LOX1, LOX2 e LOX3 (CAC-1 triplo-nulo, FT-Cristalina triplo-nulo e UFV-16 triplo-nulo), bem como das variedades Doko-RC, Savana, UFV-18 (Patos de Minas) e UFV-19 (Triângulo), foram multiplicadas no campo. As colheitas das variedades, ou linhagens, foram realizadas no estádio R8 e aos 15 e 30 dias após este estádio. Posteriormente, as sementes foram embaladas em sacos de tecido de algodão e armazenadas, durante oito meses, em condições ambientes (sem o controle de temperatura e umidade relativa do ar). A atividade das isoenzimas lipoxigenases, durante a germinação, foi determinada somente nas sementes da variedade CAC-1 e da linhagem CAC- 1 triplo-nulo, antes da semeadura e, diariamente, durante um período de dez dias após a semeadura. A qualidade das sementes foi avaliada por meio dos testes: germinação, primeira contagem e germinação final; envelhecimento acelerado; condutividade elétrica; lixiviação de potássio; determinação do conteúdo de aldeídos totais; emergência das plântulas no campo; velocidade de emergência; índice de emergência; e sanidade. A atividade das lipoxigenases durante a germinação das sementes, colhidas no estádio R8 e aos 15 e 30 dias após este estádio, foi influenciada pelo período de armazenamento, apresentando, em geral, atividade menor na maioria das avaliações (dias de germinação), para as sementes armazenadas por oito meses. As linhagens triplo-nulos apresentaram sementes com maior sensibilidade aos efeitos do retardamento de colheita, em comparação com as variedades das quais se originaram. As variedades CAC-1 e FT-Cristalina destacaram-se como mais tolerantes ao retardamento de colheita das sementes, quanto à germinação e ao vigor avaliado pelo teste de envelhecimento acelerado. A ocorrência de Phomopsis spp., Fusarium spp. e totais de fungos tenderam a maiores percentagens, nas sementes colhidas 30 dias após o estádio R8, com diferenças no grau de tolerância à infecção das sementes entre os materiais genéticos. Nas condições de campo mais próximas às ideais, os resultados de emergência das plântulas apresentaram maior correlação com o teste de germinação, em todas as épocas de colheita. O envelhecimento acelerado foi eficiente para predizer o potencial de germinação das sementes colhidas aos 15 e 30 dias após o estádio R8 e armazenadas por quatro meses. / The objectives of this study were: to evaluate the profile of the lipoxygenase isoenzyme activity during germination of the soybean seeds submitted to the harvesting delay and storage; to evaluate the physiologic and sanitary qualities of the seeds harvested at different times; and to estimate the correlations among the results from the tests used in those evaluations with the seedling emergencies in the field and their storage potential. Seeds of the cultivars CAC-1, FT-Cristalina, UVF-16 (Capinópolis) and their respective inbred lines (CAC-1 triple-null, FT-Cristalina triple-null and UFV-16 triple-null) with absence of the three lipoxygenases LOX1, LOX2 and LOX3, as well as those of the cultivars Doko-RC, Savannah, UFV-18 (Patos de Minas) and UFV- 19 (Triângulo Mineiro) were multiplied in the field, in the agricultural year 2000/01. The harvests of either cultivars or inbred lines were accomplished at stage R8 and at 15 and 30 days after this stage. Later, the seeds were wrapped in cotton cloth and stored for eight months under environmental conditions (without controlling the temperature and air relative humidity). The activity of the lipoxygenase isoenzymes during germination was determined only for seeds of the CAC-1 cultivar and the inbred line (CAC-1 triple-null), before seeding and daily for a 10-day period after seeding. The quality of the seeds were evaluated by the following tests: germination, first counting and final germination; accelerated aging; electric conductivity; potassium leaching; determination of the total aldehyde content; emergency of the seedlings in the field; emergency speed; and emergency rate; and sanity. The activity of the lipoxygenases during germination of the seeds harvested at stage R8 and at 15 and 30 days after this stage were influenced by the storage period, generally presenting a lower activity in most evaluations (germination days), for the seeds stored during eight months. The triple-null inbred lines exhibited seeds with a higher sensibility to the effects of the harvest delay, compared to the cultivars from which they were originated. The cultivars CAC-1 and FT-Cristalina showed to be more tolerant to the delay of the seed harvesting, as for germination and vigor evaluated by the accelerated aging test. The occurrence of Phomopsis spp., Fusarium spp. and total fungus tended to highest percentages in those seeds harvested at 30 days after stage R8, with differences at the level of the seed tolerances to the infection among the genetic materials. Under those field conditions closer to the ideal ones, the results of the seedling emergencies showed the highest correlation with the germination test in all harvesting times. The accelerated aging was efficient to predict the germination potential of the seeds harvested at 15 and 30 days after stage R8 and stored for four months.

O Glioblastoma (GBM) é um astrocitoma grau IV, representando o glioma de maior malignidade e o tumor cerebral primário mais frequente em humanos. A terapia indicada para o GBM é a ressecção cirúrgica, quimioterapia e radioterapia, todas com baixíssima eficiência devido a agressividade e as características do GBM. Consequentemente, a sobrevida dos pacientes indicados aos tratamentos convencionais é pouco mais de um ano. A inflamação é, sabidamente, uma das características que participa de modo decisivo do desenvolvimento tumoral, incluindo do GBM, e as relações entre mediadores inflamatórios e câncer são alvos de pesquisa nos últimos anos. Diversos estudos apontam um papel da via dos eicosanoides na modulação de processos patológicos envolvidos na inflamação e no câncer. Os eicosanoides são mediadores lipídicos bioativos, envolvidos em diversos processos fisiológicos e patológicos, em especial os associados à resposta inflamatória. As principais vias de produção de eicosanoides (ciclooxigenases, lipoxigenases, e citocromo P450), assim como seus produtos, são frequentemente alterados em diversos tipos de tumor, associados ao crescimento e a progressão tumoral. Contudo, o perfil dessas vias é consideravelmente pouco compreendido em GBM. O objetivo deste estudo foi analisar in vitro o perfil e o papel das três vias de eicosanoides e seus produtos (eicosanoides ou não) nas linhagens de GBM (U251-MG, U87-MG, A172, T98G e U138-MG), modulando a atividade de enzimas chaves com drogas especificas para, então, analisar parâmetros de proliferação, migração e morte celular. Nossos resultados mostram, em todas as linhagens analisadas, um perfil heterogêneo das enzimas e receptores chaves das três vias. O perfil lipídico evidencia a produção de 13-HODE, produto de 15-lipoxigenase-1 em todas as linhagens, bem como ausência de leucotrienos e 5-HETE do eixo de 5-lipoxigenase. Os inibidores farmacológicos para 15-LOX e 12-LOX/15-LOX foram capazes de reduzir o crescimento, modular o ciclo celular e a migração celular das linhagens U251-MG, U87-MG e A172. O mesmo é visto com a inibição de mPGES-1. A inibição de 5-LOX por outro lado não afetou nenhum parâmetro nas mesmas linhagens. Todos os resultados apontam, portanto, para um papel do eixo de 15-LOX e COX no crescimento e na migração das células de GBM humano. / Glioblastoma (GBM) is a grade IV astrocytoma, the most malignant and the most frequent primary brain tumour in humans. Standard therapies for treating GBM are surgical resection, chemotherapy and radiotherapy, all with low efficiency due to GBM aggressiveness and characteristics. Therefore, patient survival after conventional treatments is about one year. Inflammation is one of the main characteristics that plays a decisive role in tumour development, including in GBM. The relationships between inflammatory mediators and cancer have been the subject of research in recent years. Several studies point to the eicosanoid pathways as modulators of pathological processes between inflammation and cancer. Eicosanoids are bioactive lipid mediators, involved in various physiological and pathological processes, especially those associated with the inflammatory response. The major eicosanoid pathways (cyclooxygenases, lipoxygenases, and cytochrome P450) as well as their products, are frequently altered in several tumours, associated with tumour growth and progression. However, the profile of these pathways is poorly understood in GBM. The objective of this study was to analyse, in vitro, the profile and role of eicosanoid pathways and their products (eicosanoids or not) in GBM cell lines (U251-MG, U87-MG, A172, T98G and U138-MG), modulating the key enzymes with inhibitors, analysing proliferation, migration and cell death. Our results show, in all analysed cell lines, a heterogeneous profile for the key enzymes and receptors of the three pathways. The lipid profile shows the production of 13-HODE, a product of 15-lipoxygenase-1, as well the absence of leukotrienes and 5-HETE of the 5-lipoxygenase axis. The pharmacological inhibitors for 15-LOX and 12-LOX / 15-LOX led to changes in cell cycle, reduced growth, reduced migration of U251-MG, U87-MG and A172 cell lines. The same was seen with the inhibition of mPGES-1. Inhibition of 5-LOX, on the other hand, did not affect any of these parameters in the same cell lines. All results, therefore, point to an important role of 15-LOX and COX pathways in the growth and migration of human GBM cells.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-10-02T12:28:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361538 bytes, checksum: 2107064ec9fd0a3e1e0676e0c9e8c6d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T12:28:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1361538 bytes, checksum: 2107064ec9fd0a3e1e0676e0c9e8c6d3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cultura do café no Brasil tem muita importância econômica e relevância no setor social, gerando divisas e empregos diretos e indiretos. Por tanto, qualquer fator que diminua a sua produtividade refletirá na economia do país. Uma das possíveis causas da redução de sua produtividade é devido às injurias que os insetos podem causar. Entre estes insetos têm-se Coccus viridis (Green) (Hemiptera: Sternorrhyncha: Coccidae). As plantas ao serem injuriadas são capazes de aumentarem a síntese de inibidores de proteases (IPs) no local da lesão e, também, por toda a sua extensão. Estudos demonstraram que insetos alimentados com plantas previamente pulverizadas com inibidores sintéticos têm seu desenvolvimento prejudicado. Assim, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos dos inibidores de proteases sintéticos, benzamidina e berenil, sobre a atividade proteolítica intestinal de C. viridis e constatar quais foram as alterações na resposta bioquímica em plantas de Coffea arabica. Além disso, avaliar os efeitos destes inibidores nos aspectos biológicos desta praga. Plantas de C. arabica foram infestadas com ninfas de C. viridis e pulverizadas com benzamidina e berenil, em quatro diferentes concentrações: 0; 0,25; 0,5 e 0,75% (p/v). A resposta bioquímica do inseto e do cafeeiro foi realizada após 24 horas da pulverização, coletando-se os insetos e as folhas. A avaliação biológica foi realizada até o aparecimento de novas ninfas de o primeiro instar, sinal de que as cochonilhas chegaram à fase adulta. A atividade das serinoproteases, tripsina-like (amidásica e esterásica) e quimotripsina-like esterásica, foi reduzida devido à presença dos inibidores. O mesmo se obteve em relação à atividade das cisteino-proteases. Nos tratamentos avaliados a atividade de lipoxigenases não apresentou diferença. Entretanto, houve um incremento da produção dos IPs nas plantas com a infestação da cochonilha- verde e na ausência dos inibidores sintéticos. Já nas plantas com o inseto e pulverizadas com os inibidores sintéticos observou-se o contrário, ou seja, uma redução na produção dos IPs. Na avaliação da atividade biológica, os IPs sintéticos usados provocaram diferenças significativas no peso dos insetos, no entanto o comprimento desses insetos não foi afetado. A presença de benzamidina e berenil causou alta taxa de mortalidade, sendo o berenil mais eficiente e não apresentando diferença significativa entre as concentrações. Isto posto, os IPs sintéticos benzamidina e berenil têm potencial uso para controlar a praga cochonilha-verde. / The coffee culture is of an enormous relevance in the Brazil economics and social areas generating many currencies as direct and indirect employees. Such any factor, which decreases its productivity, will directly reflect in country economy. Being insect injuries one of the main causes of lost productivity the scale insect Coccus viridis (Green) (Hemiptera: Sternorrhyncha: Coccidae) is a relevant pest in coffee crops. Plants when attacked increase the synthesis of protease inhibitors (PI ́s) locally or systematically. The use of pulverized synthetic proteases inhibitors prejudice insects’ development. Thus, this work aimed to evaluate the effects of synthetic proteases inhibitors benzamidine and berenil on the gut proteolytic activity of Coccus viridis and to corroborate disrupts in biochemical response of Coffea arabica plants. Furthermore, effects on C. viridis fitness were evaluated. C. Arabica plants were infested with C. Viridis nymphs then benzamidine and berenil were pulverized in concentrations: 0; 0.25; 0.5 e 0.75% (p/v). Evaluations were performed 24 hours after pulverization, insects and leaves were collected for analisys. Biological evaluation was performed until the appearance of young nymphs of the first instar, a sign that the mealybugs reached the adult stage. Serine-proteinases, trypsin-like (amida and ester), ester quimotrypsin-like, and cysteine-proteinases activities, were reduced due to inhibitors presence. There was none differences in plant lipoxygenases between treatments. While there were PI ́s increments in plants infested with C. viridis and absence of synthetic inhibitors. Opposite to plants infested with scale insects and pulverized with synthetic inhibitors in which PI’s production were reduced. Synthetic inhibitors caused significant differences in insect weight; however, the length were not affected. The presence of benzamidine and berenil caused high rates of mortality being berenil more efficient but no matter the concentrations. These results demonstrate the high potential of benzamidine and berenil for use as biological control tools.