Le traitement de cellules par des aminobisphosphonates (ABP) induit une accumulation intracellulaire de molécules activatrices des lymphocytes T Vy9Vd2 (IPP, ApppI). Alors que ces lymphocytes ne semblent pas naturellement activés lors d'une infection par le cytomégalovirus humain (HCMV), le laboratoire a mis en évidence l'existence d'une action synergique entre le HCMV et les ABP sur leur activation. Ma thèse a eu pour objectif d'analyser le mécanisme de cette synergie et d'évaluer le potentiel immuno-thérapeutique des ABP dans le cadre d'une infection HCMV. Nous avons montré qu'après sensibilisation par des ABP in vitro, des cellules infectées sont fortement activatrices des T Vy9Vd2. Les fibroblastes traités par des ABP activent la production d'IFN-y par les T Vy9Vd2 mais pas la production de TNF. L'infection de ces fibroblastes par le HCMV induit une augmentation de la production d'IFN-y et stimule la production de TNF par des T Vy9Vd2. Cette activation a été observée avec des lymphocytes T Vy9Vd2 établis en lignées cellulaires mais aussi avec des cellules Vy9Vd2 isolées directement de sang périphérique. De plus, cette augmentation de production de cytokines est observée avec différentes souches virales (souche de laboratoire et isolats cliniques) et différents types cellulaires permissifs pour HCMV. Nous avons également montré que l'infection par le HCMV entraine une surproduction d'IPP et d'ApppI dans les cellules cibles traitées aux ABP, ce qui explique en partie l'augmentation de la sécrétion de cytokines par les T Vy9Vd2. Enfin, nous avons mis en évidence que ces T Vy9Vd2 sont capables de limiter la réplication et la production virale suite à un traitement par des ABP, tout en préservant les cellules non infectées. Selon nos études, cette activité antivirale implique la production des cytokines IFN-y et TNF et non l'activité cytotoxique des T Vy9Vd2. Par conséquent, mes travaux de thèse fournissent une preuve de concept pour une application thérapeutique des ABP dans le cadre d'une infection par le HCMV. / Aminobisphosphonates (ABP) treatment of cells induces intracellular accumulation of molecules (IPP, ApppI) which stimulate human Vy9Vd2 T cells. Although these lymphocytes do not appear naturally activated during human cytomegalovirus (HCMV) infection, the laboratory demonstrated a synergistic effect of HCMV and ABP on Vy9Vd2 T cell activation. My PhD thesis aimed to analyze the mechanism of this synergy and evaluate the immunotherapeutic potential of ABP in the context of HCMV infection. After ABP treatment of cells in vitro, we showed that HCMV-infected cells strongly activated Vy9Vd2 T cells. ABP-treated fibroblasts activate Vy9Vd2 T cells to produce IFN-y but not TNF. The HCMV infection of these fibroblasts stimulates TNF secretion and an increased production of IFN-y, indicating that Vy9Vd2 cells can sense HCMV infection. Increased cytokine production was observed with Vy9Vd2 T cell lines and "fresh" Vy9Vd2 directly isolated of blood. Moreover, Vy9Vd2 T cell activation was observed with most HCMV strains (laboratory strains or clinical isolates) and different HCMV-permissive cells. We also showed that HCMV infection induces an overproduction of IPP and ApppI in ABP-treated cells, which explains in part the increased cytokine production by Vy9Vd2 T cells. At last, we demonstrated the capacity of Vy9Vd2 T cells to limit viral replication and production after ABP treatment while preserving uninfected cells. Our experiments indicate that this antiviral activity involves IFN-y and TNF secretion by Vy9Vd2 T cells but not their cytotoxicity activity. Consequently, my work provides a proof of concept of the therapeutic potential of ABP in the context of HCMV infection.

Le cancer du sein est le cancer féminin le plus fréquent et celui qui cause le plus de décès dans le monde. Il existe plusieurs types de cancer du sein qui diffèrent par l’expression des récepteurs aux œstrogènes, à la progestérone et du récepteur HER2. Le cancer du sein dit triple négatif (TNBC) n’exprime aucun de ces récepteurs. Le métabolisme des sphingolipides (SL) est fréquemment altéré dans les cancers du sein et semble participer à la progression tumorale. Tandis que les SL ont été décrits comme modulateurs des réponses immunitaires dans des modèles précliniques de cancer, il n’existe pas à ce jour d’étude chez l’Homme évaluant l’impact des altérations du métabolisme des SL sur le développement tumoral et la réponse immunitaire associée. Dans ce contexte, l’objectif de nos travaux est double. Le premier objectif est de caractériser une signature sphingolipidique dans des biopsies de tumeurs mammaires humaines de divers sous-types histologiques. Une analyse par spectrométrie de masse à haute résolution nous a permis d’identifier dans les TNBC des taux élevés de SL en -C24:0, qui pourraient constituer des biomarqueurs potentiels pour ce type de cancer. Le deuxième objectif est d’établir une signature sphingolipidique associée à la réponse immunitaire dans le cancer du sein. Nous avons analysé les lymphocytes infiltrant la tumeur (TIL) par cytométrie en flux et par immunohistochimie dans nos échantillons tumoraux. Ces analyses nous ont permis de montrer que, dans les TNBC, les taux de C16:0-céramide sont corrélés positivement avec la proportion de TIL CD8+ et négativement avec celle des Treg FoxP3+. Afin d’évaluer l’influence potentielle des SL sur la topologie d’infiltration des lymphocytes (intratumoral versus adjacent), nous avons aussi comparé les taux de SL dans les tumeurs ayant une forte ou une faible proportion de lymphocytes T CD8+ intratumoraux. Nous avons observé notamment des taux élevés de sphingosine-1-phosphate (S1P) dans les tumeurs faiblement infiltrées par les lymphocytes T CD8+ intratumoraux. Nos observations suggèrent que la production de C16:0-céramide soit en faveur d’un recrutement préférentiel des lymphocytes T CD8+ dans les TNBC, tandis que la S1P pourrait être un facteur d’immunoéchappement, impactant négativement sur la topologie des TIL CD8+ dans les tumeurs mammaires. L’ensemble de nos travaux indique que certains SL pourraient constituer des biomarqueurs originaux de TNBC. De plus, la reprogrammation de ce métabolisme pourrait augmenter (i) quantitativement et qualitativement l’infiltration intratumorale des lymphocytes, et (ii) potentiellement l’efficacité des immunothérapies dans le cancer du sein. / Breast cancer, the most common malignancy affecting women, is responsible for the majority of woman death by cancer worldwide. There are three different breast cancer types defined by the expression of oestrogen and progesterone and HER2 receptors. The so-called triple negative breast cancer (TNBC), doesn’t express any of these receptors. Sphingolipid (SL) metabolism is frequently altered in breast cancer, alterations are associated with tumour progression. Although SL can act as immune response modulators in preclinical cancer models, there are, to date, no study assessing the impact of SL metabolism alterations on tumor development and associated immune response in Humans. In this setting, our aim was double. Our first objective was to characterize the SL signature in human mammary tumour biopsies from different pathological subtypes. Using high-resolution mass spectrometry assay, we identified elevated levels of C24:0-SL in TNBC, which could be used as potential biomarkers of this cancer subtype. Our second objective was to identify a SL signature associated with immune responses in breast cancer tissues. Tumour-infiltrating lymphocytes (TIL) were analyzed by flow cytometry and immunohistochemistry. Those analyses showed that, in TNBC, levels of C16:0-ceramide are positively correlated with the proportion CD8+ TIL and negatively correlated with that of FoxP3+ Treg TIL. In order to evaluate the potential influence of SL on the topology of infiltrating lymphocytes (intratumoural versus adjacent), we compared the SL levels in tumors depicting high or low proportions of intratumoral CD8+ T cells. We observed higher levels of sphingosine-1-phosphate (S1P) in low infiltrated intratumoral CD8+ T cells. Our observations suggest that C16:0-ceramide production could favor CD8+ T cell recruitment in TNBC, whereas S1P could act as an immune escape factor, negatively impacting on CD8+ TIL topology in mammary tumours. Our whole work indicates that a set of specific SL could constitute original biomarkers in TNBC. Moreover, reprogramming SL metabolism could improve (i) the infiltration of tumours by lymphocytes, both in terms of quality and quantity, and (ii) possibly, the efficacy of immunotherapy in breast cancer.

Les lymphocytes T régulateurs CD4+ Foxp3+ (Treg) sont des acteurs clés de l’homéostasie du système immunitaire. Grâce à des fonctions immunosuppressives, les Treg contrôlent la survenue et l’amplitude des réponses immunitaires. Ils sont ainsi essentiels à la prévention de pathologies auto-immunes et inflammatoires chroniques. Comme les autres lymphocytes Tαβ (Tconv), les Treg se différencient dans le thymus à partir d’un même précurseur hématopoïétique. Bien qu’encore méconnu, le développement des Treg diffère de celui des Tconv par la nature des interactions ou des signaux échangés entre les précurseurs et les cellules stromales thymiques. Dans notre équipe nous nous intéressons à la génération intra-thymique des Treg, et particulièrement aux facteurs pouvant influencer ce processus. Ainsi, au fait de l’involution du thymus avec l’âge et de la réduction de la production de Tconv qui en découle, nous avons monitoré spécifiquement le développement des Treg au cours de la vie. De façon surprenante, nous avons observé une diminution plus importante de la production de Treg, que de Tconv, avec l’âge. Cependant, nous avons constaté que la population de Treg thymique n’était pas seulement constituée de cellules en développement, mais également de cellules plus matures, présentant un phénotype activé et différencié, dont la proportion s’accroit avec l’âge. Nous avons alors démontré qu’il s’agissait de Treg ayant recirculé depuis la périphérie (tissus, organes lymphoïdes) vers leur organe d’origine ; et que ces derniers étaient capables de supprimer spécifiquement le développement de leurs précurseurs en rentrant en compétition pour un facteur de survie essentiel : l’interleukine 2 (IL-2). Ainsi, nos travaux ont révélé l’existence d’une boucle de rétrocontrôle négatif du développement thymique des Treg. Cette découverte nous a alors amené à reconsidérer les données de la littérature qui décrivaient un nombre plus élevé de Treg thymiques chez des souris NOD, enclines aux auto-immunités, par rapport aux souris B6 résistantes. Nous voulions déterminer si la variation du nombre de Treg thymiques d’une souche à l’autre résultait d’une réelle influence génétique sur le développement des Treg, ou bien sur la recirculation de ces derniers. L’analyse comparative de la proportion de Treg recirculants a révélé que celle-ci était toujours plus élevée chez les souris NOD par rapport aux souris B6 dès les premières semaines de vie. Par ailleurs, nous avons démontré que cette forte densité de Treg recirculants chez les souris NOD résultait d’une hyper-activation des Treg dans la périphérie, connue pour favoriser la migration de ces derniers vers le thymus. Enfin, en accord avec le mécanisme de rétrocontrôle précédemment décrit, la plus forte présence de Treg recirculants chez la souris NOD entraine une inhibition plus précoce du développement thymique des Treg. En conclusion, l’ensemble de nos données rapportent l’existence de variations inter-individuelles du développement des lymphocytes T régulateurs dans le thymus. Ces variations conditionnées par l’âge et/ou par la génétique de l’individu sont exercées en partie sur le processus de recirculation des Treg périphériques vers le thymus, ce qui entraine l’inhibition du développement de nouveaux Treg. Les conséquences sur l’organisme de ces variations quantitatives du développement des Treg devront être déterminées, et s’inscriront dans une démarche globale visant à une meilleure prédiction de la susceptibilité des individus vis-à-vis des immuno-pathologies. / CD4+ Foxp3+ regulatory T lymphocytes (Treg) are key players in the immune homeostasis. Thanks to their suppressive functions, Treg control the occurrence and the intensity of immune responses. They are thus essential in preventing the onset of auto-immune and chronic inflammatory diseases. Like other αβ T lymphocytes (Tconv), Treg differentiate in the thymus from a common hematopoietic precursor. Although still not completely unveiled, Treg development seems to differ from that of Tconv due to the interactions and signals exchanged between Treg precursors and thymic stromal cells. The research of our team focuses on the intra-thymic generation of Treg, and on factors that could influence this process. With age, the size of the thymus decreases and as a consequence the thymic production of new Tconv cells is reduced. Then while studying the differential requirements for Tconv and Treg cell development, we monitored their thymic production throughout life. Surprisingly, we observed a stronger decrease in Treg than Tconv production with age. However, we also found that the thymic Treg population was not only constituted by newly developing cells, but also by mature cells whose proportion increased with age, and exhibited an activated and differentiated phenotype. We then demonstrated that this population comprised Treg that have recirculated from the periphery (tissues, lymphoid organs) to the thymus. Mature thymic Treg were able to specifically suppress the development of their precursors by limiting the availability of an essential survival factor: the interleukin-2 (IL-2). Our work therefore demonstrated the existence of a negative feedback loop exerted by peripheral Treg controlling thymic Treg development. This finding led us to reconsider the data from the literature which described a higher number of thymic Treg in NOD mice, prone to autoimmunity, compared to resistant B6 mice. We determined whether the variation in the number of thymic Treg from one strain to another resulted from a genetic control on thymic Treg development, or on Treg recirculation. Strikingly, a greater proportion of recirculating thymic Treg was observed in NOD than in B6 mice at all the ages analyzed. We have subsequently demonstrated that this high amount of recirculating Treg in NOD mice was due to hyper-activation of peripheral Treg, favoring their migration to the thymus. Finally, in agreement with the negative feedback loop we previously described, the higher density of recirculating Treg in the thymus of NOD mice induced an earlier inhibition of the intra-thymic development of new Treg. To conclude, we report here the existence of inter-individual variations of regulatory T lymphocytes development in the thymus. These age-dependent and/or genetic-dependent factors seem to shape Treg recirculation from the periphery to the thymus, and as a consequence the de novo development of Treg. It will be important, in the future, to determine the impact on the organism of these quantitative variations in Treg development and on the susceptibility towards immuno-pathologies

Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2005. / Titre de l'écran-titre (visionné le 23 février 2006). Dans le titre et le dépouillement, le symbole + est suscrit. Bibliogr.

Ce travail suggère que l'apotose régule différentiellement la demi-vie des populations lymphocytaires T productrices de cytokines. Processus anti-inflammatoire physiologique, l'apoptose exerce principalement son contrôle négatif sur les cellules T productrices de TNFa. Lors des traitements anti-rétroviraux combinés, la réduction de l'apoptose lymphocytaire est associée à une polarisation pro-inflammatoire qui pourrait favoriser la constitution des anomalies métaboliques mais aussi la survenue des pathologies inflammatoires associées à la restauration immunitaire.

La plupart des sous-populations des lymphocytes T CD8 mémoires sont définies suite à une infection virale. <br />Le but de ce travail fut de caractériser une sous-population des cellules mémoires générées en conditions inflammatoires stériles, c'est-à-dire en l'absence des signaux délivrés par des pathogènes. Ces cellules mémoires expriment des niveaux intermédiaires pour CD44 et CD122, compris entre les cellules naïves et les cellules mémoires induites par des pathogènes. Elles expriment également des niveaux intermédiaires de plusieurs autres propriétés fonctionnelles (production de l'IFN-g) et moléculaires (T-bet et Eomes) des cellules mémoires classiques. Elles correspondent à une étape précoce de différenciation et peuvent se différencier en mémoire centrale. Ce travail a permis de caractériser les cellules mémoires générées dans un contexte inflammatoire stérile et surtout l'implication de ces cellules dans les maladies inflammatoires de la peau comme la dermatite allergique de contact

Les cellules immunitaires infiltrant le foie (CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD56+, TCRγδ+, FoxP3+ et CD123+) sont plus nombreuses (p<0.05) dans les zones cirrhotiques comparés aux zones tumorales dans les 2 cas d'hépatocarcinomes (induits par l'hépatite C (HCC-HCV) ou par l'alcool (HCC-OH)). Les niveaux d'expressions tumoraux de CD8β dans le groupe HCC-HCV et CD8α et IFN-γ dans le groupe HCC-OH sont plus élevés (p<0.05) que ceux des zones cirrhotiques. Les comparaisons des cirrhoses cancéreuses montrent que les cellules CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, FoxP3+, CD123+ et TCRγδ+ (p=0.089) ainsi que les ratios CD3/CD20, FoxP3/CD4 sont plus élevés (p<0.05) dans la cirrhose HCV que dans celle OH. Les niveaux d'expression de l'IFN-γ, CD8α et de la perforine sont plus faibles (p<0.05) dans la cirrhose HCV que dans la cirrhose OH. De plus, le nombre de cellules CD8+ est corrélée avec celui de cellules FoxP3+ dans les nodules parenchymateux pour la cirrhose HCV alors qu'il l'est avec le niveau d'expression de l'IFN-γ et de la perforine pour la cirrhose OH. Les résultats concernant les HCC-HCV et les cirrhoses C sans cancer montrent que les cellules CD3+, CD4+, CD20+ et CD8+ sont plus nombreuses dans la cirrhose cancéreuse (p<0.05) mais que le nombre de cellules CD56+ (p=0.067) et le rapport CD3/CD20 (p<0.05) est plus bas dans la cirrhose cancéreuse. Le TGF-β et l'IFN-γ sont corrélés dans la cirrhose C. Aucune différence n'a été observée à l'intérieur des tumeurs dans les 2 groupes au niveau cellulaire et transcriptionnel, à l'exception du niveau de CD8α, plus bas dans le groupe HCC-HCV (p<0.05). Le nombre intra-tumoral de cellules FoxP3+ est corrélé positivement avec celui des cellules CD4 et CD8+ et négativement avec l'expression tumorale de la perforine. Dans les tumeurs, des corrélations positives entre le nombre de cellules CD4+ et CD8+, CD56+ et TCRγδ+, perforine avec IFN-γ et RANTES ont aussi été observées. Il est important de noter que les cellules CD3+ sont presque toujours corrélées avec les CD20+ dans toutes les zones et les groupes. Concernant la relation immunité-agressivité tumorale, les niveaux d'ALAT, d'AFP et le score METAVIR sont corrélés avec les cellules CD3+, CD4+ et TCRγδ+ dans le groupe HCC-HCV. La taille des tumeurs est corrélée avec l'age dans les 2 groupes et avec l'expression de FoxP3 dans le groupe HCC-HCV. La nécrose tumorale est plus importante (p<0.05) dans le groupe HCC-OH et inversement corrélée avec l'age et l'expression de RANTES dans les 2 groupes. Le marquage Ki67 est corrélé positivement avec les ALAT, AFP, PT et la virémie et inversement avec le niveau de perforine intra-tumoral. Dans les 2 groupes, le nombre de cellules FoxP3+ est inversement corrélé avec le taux de bilirubine. La rechute est plus fréquente (p<0.05) dans le groupe HCC-HCV. Pour les patients rechuteurs, le nombre de cellules CD3+, CD4+, CD8+, CD20+ et FoxP3+ est plus élevé (p<0.05) dans les zones cirrhotiques alors que le nombre de cellules CD123+ et le rapport FoxP3+/CD4+ sont plus élevés (p<0.05) dans la tumeur. De plus, une réduction significative de la fréquence des cellules NK et du rapport CD56bright/dim est observée pour l'hépatite C comparé à la B. La proportion intra-hépatique de cellules NK CD158a,h+ et CD158b,j+ est plus basse que dans le sang périphérique chez les patients HCV+ et que dans le foie des patients HBV+. La fréquence des NK NKG2A+ est plus basse dans le sang et le foie des patients HBV+ comparativement aux HCV+. Pour les patients HCV+, i) les cellules CD56+ intra-hépatiques se localisent préférentiellement hors des nécroses lorsque l'activité nécro-inflammatoire augmente et ii) les cellules circulantes CD3-CD56brightNKG2A+ corrèlent positivement avec l'extension de la nécro-inflammation et de la fibroses. De plus, chez les patients HCV+ chroniques, les cellules FoxP3+ situées dans les zones nécro-inflammatoires sont majoritairement associées aux cellules T CD8+ et positivement corrélées avec les cellules CD8+ et le score METAVIR de fibrose. Globalement, beaucoup de cellules infiltrant les tumeurs semblent être moins actives et associées avec la rechute et un mauvais pronostic. Les cellules NK et régulatrices dans l'hépatite C chronique pourraient donc être d'un grand intérêt dans le suivi de la maladie.

Les principaux échecs des greffes de cellules souches allogéniques (HSCT) sont la rechute et les infections, accompagnées ou non de GvHD (Graft versus Host Disease, maladie du greffon contre lhôte), manifestations qui pourraient être partiellement attribuées à un déficit immunitaire (rechute, infections) ou à une réaction immunitaire exacerbée envers le receveur (GvHD) (Baron, Storer et al. 2006). Létude de la reconstitution du système immunitaire, et particulièrement, lymphocytaire, savère dès lors capitale dans le développement des HSCT. Nous avons investigué la reconstitution immune de 50 patients traités par HSCT nonmyéloablative classique vs HSCT nonmyéloablative déplétée en lymphocytes T CD8+. 50 patients ont été randomisés : greffon déplété en CD8 (n=22) vs non manipulé (n=28). Lâge médian était de 57 ans au moment de la greffe (range 36-69). Le régime de conditionnement consistait en une irradiation corporelle totale de 2 Gy avec ou sans ajout de Fludarabine. 20 patients ont reçu une greffe de donneur familial, 14 de donneurs non familiaux HLA identiques, et 16 de donneurs non familiaux présentant une disparité HLA. La reconstitution immunitaire la première année après HCT a été monitorée par cytométrie en flux, analyse de la diversité du répertoire du TCR (spectratyping), quantification de sjTREC (signal joint T cell receptor excision circle, marqueur de la thymopoïèse). La déplétion des CD8 a réduit la reconstitution des taux de CD8 durant les 6 premiers mois postgreffe (P<0.0001) mais na pas présenté dimpact significatif sur la récupération des autres populations cellulaires. Les concentrations de sjTREC et des taux de CD3 ont augmenté parallèlement entre le jour 100 et le jour 365 après greffe (P=0.006 et P=0.022, respectivement), suggérant ainsi la néoproduction de lymphocytes T par le thymus, même chez ces patients âgés. Les facteurs associés à une concentration conséquente de TREC un an après greffe incluent 1° le choix dun donneur non familial HLA-matched (P=0.029), 2° de hautes concentrations de lymphocytes T dans le greffon (P=0.002), et 3° labsence de GVHD chronique (P<0.0001). Nos données suggèrent un modèle biphasique de reconstitution du pool lymphocytaire T: 1) une expansion des T matures du greffon en périphérie durant les 3 premiers mois ;2) une néoproduction active par voie intrathymique assurant la reconstitution du système immunitaire à plus long terme. Combien de temps cette néosynthèse intrathymique perdure-t-elle ? Quels facteurs laffectent ? Est-elle associée à une diversité accrue du répertoire lymphocytaire ? Ces questions nous ont amenés à étudier la reconstitution immunitaire à long terme (entre 1 et 6.5 ans) de 73 patients après minigreffe (211 points au total). Nous avons observé un maintien de la thymopoïèse réenclenchée au cours de la première année postgreffe chez les patients âgés de moins de 50 ans et de 50-60 ans. Cette reprise de la thymopoïèse na pas été mise en évidence au sein du groupe des plus de 60 ans. Ainsi, une application clinique concrète à cette observation pourrait être ladministration de greffons particulièrement riches en lymphocytes T à ce type de patients, puisquils seront plus susceptibles de développer une lymphopénie persistante postgreffe par absence de réenclenchement de la voie thymodépendante. Les facteurs associés à une reconstitution thymodépendante à long terme après minigreffe étaient : 1°labsence de cGvHD (P<0.0001); 2°lâge du receveur (P<0.0001); 3° la concentration en lymphocytes T dans le greffon (P=0. 0.0038) ; 4°laugmentation de la diversité HLA (P=0.0001). Enfin, une tendance non significative à une augmentation parallèle de la diversité du répertoire TCR et des concentrations en sjTREC a été mise en évidence. Cette analyse doit être confirmée par létude dun plus grand nombre de sujets. Afin déliminer au maximum les influences extrathymiques sur les taux de TREC périphériques, nous comptons mesurer pour chaque patient des TREC précoces (BTREC) et un TREC tardif (sjTREC), et calculer un ratio reflétant exactement le nombre de divisions intrathymiques. Cette méthode a été validée dans notre centre au cours dune expansion de lymphocytes T in vitro au moyen de billes anti-CD3 anti-CD28, expansion durant laquelle nous avons pu observer une diminution des sjTREC et des BTREC, mais pas du ratio sjTREC/BTREC. Lanalyse des ratios de TREC des patients greffés est actuellement à létude. Une troisième étude a été également menée afin déclaircir le lien entre GvHD, thymopoïèse et présence de lymphocytes T régulateurs (TRegs) chez 64 patients après HCT. Lémergence dun nouveau marqueur spécifique des TRegs, le CD127, a permis pour la première fois une isolation sans équivoque des TRegs (Liu, Putnam et al. 2006). Nous navons pas pu mettre en évidence de différence significative entre lapparition dune cGvHD chez les patients présentant après greffe des taux de TRegs supérieurs ou inférieurs à la médiane (P=0.13). Inversement, loccurrence de cGvHD na pas paru significativement affecter les concentrations en TRegs après greffe (P=0.1). Nous avons également mis en évidence une corrélation positive significative entre le taux de sjTREC/ml et le taux de TReg/ul au J100 (R=0.46, P=0.007) et à 1 an R=0.47, P=0.001). Afin de déterminer lorigine précise de ces TReg après greffe (thymus du donneur?), nous réalisons actuellement des mesures de sjTREC et de chimérisme sur les populations cellulaires triées au moyen du triple marquage CD4+CD25+CD127- (cellules T classiques vs régulatrices).

Aujourd’hui, il est clairement établi que les lymphocytes T (LT) du donneur stimulés chroniquement par les antigènes mineurs (mHAgs) du receveur sont responsables du développement de la maladie du greffon contre l’hôte (GVHD). Il devient dès lors primordial de mettre au point des mécanismes permettant de contrôler l’activité et la fonctionnalité des LT du donneur soumis à une stimulation antigénique persistante. Nous avons montré dans un modèle in vivo de GVHD chronique qu’il est possible de réguler par deux mécanismes différents l’activité des LT du donneur stimulés chroniquement par un mHAg du receveur. Premièrement, la stimulation chronique des LT CD4+ du donneur par l’mHAg modifie fortement leurs fonctions. Ceux-ci s’adaptent à la présence de l’mHAg et y deviennent insensibles. Les LT CD4+ adaptés se caractérisent par un nombre élevé d’ARNm ainsi qu’une importante augmentation à leur surface de l’expression du récepteur inhibiteur PD-1. Nous avons montré que le blocage de la voie de costimulation négative PD-1/PD-L1 inverse et supprime l’adaptation des LT CD4+, stimule fortement leur production d’IFN-γ, entraînant le développement d’une maladie sévère. Le blocage de la voie de costimulation négative PD-1/PD-L1 aggrave aussi le choc toxique causé par l’injection de Lipopolysaccharide (LPS) et active la réaction immunitaire responsable du rejet de peaux mâles greffées sur des souris contenant des LT CD4+ adaptés. Ces résultats suggèrent que les LT CD4+ s’adaptent à la persistance de l’antigène en élevant leur seuil d’activation via la voie de costimulation négative PD-1/PD-L1. D’un autre côté, nos résultats soulignent la capacité que possèdent les cellules NK du receveur à contrôler l’activité ainsi que la prolifération des LT CD4+ du donneur soumis à une stimulation antigénique persistante. Cette faculté de régulation que détiennent les cellules NK préserve le receveur du développement d’une GVHD chronique. La régulation de la prolifération et de l’activité des LT CD4+ par les cellules NK s’effectue via NKG2D, un récepteur activateur présent à la surface de ces cellules. En effet, l’expression de certains ligands de NKG2D est augmentée dans les LT CD4+ activés. L’injection d’anticorps bloquant NKG2D inhibe l’activité régulatrice des cellules NK. Celle-ci semble s’effectuer par un mécanisme indépendant de la perforine. Nos résultats montrent que la voie de costimulation négative PD-1/PD-L1 est le mécanisme moléculaire utilisé par les LT CD4+ adaptés à l’mHAg pour calibrer leurs activités et leurs fonctionnalités en réponse à une stimulation antigénique persistante. Ils soulignent aussi le rôle des cellules NK dans le contrôle de l’activité et de la prolifération des LT CD4+ responsables du développement de la GVHD chronique.

Le cancer de l'ovaire est immunogène et constitue un bon modèle pour étudier l'immunité antitumorale. Nous avons effectué une étude comparative et systématique de la fréquence, du phénotype, de la fonction et de l'impact sur la survie des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) et des lymphocytes T régulateurs (Treg) dans le sang, l'ascite et la tumeur. Nous avons observé que les pDC s'accumulent dans les ascites et sont présentes dans certaines tumeurs alors qu'elles sont profondément déplétées dans le sang des patientes. La présence de pDC associées aux tumeurs (TApDC) est un facteur pronostique indépendant associé à une survie sans progression (SSP) plus courte. De plus, les TApDC, mais pas les pDC d'ascite, sont altérées dans leur fonction innée principale de production d'IFN-α en réponse aux TLR ligands in vitro et induisent le développement de lymphocytes T CD4+ producteurs d'IL-10 responsables d'une tolérance immune favorisant la progression tumorale. Les Treg s'accumulent dans les ascites et les tumeurs de l'ovaire mais leur taux dans le sang est comparable aux donneurs sains. Leur accumulation dans les tumeurs et non dans les ascites est un facteur pronostique indépendant associé à une SSP plus longue. Les TATreg ont un phénotype activé et inhibent la production d'IL-10 par les lymphocytes T CD4+ conventionnels associés aux tumeurs. De façon intéressante, les patientes dont les tumeurs augmentent l'infiltration par les Treg Foxp3+ après chimiothérapie néoadjuvante ont une rechute retardée suggérant qu'en plus d'un effet antitumoral direct, la chimiothérapie induit une réponse immune