Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T21:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno_TreziaIedaBallerini_M.pdf: 1532084 bytes, checksum: 5368f597f8d6c02acebeb7a1068b72f9 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Com o objetivo de verificar ocomportamento do s. manson_ das linhagens BH eSJ em B.glabrata eB. Tenagophila tratadas com açúcar foram constituídos 2grupos experimentais BH e SJ, subdivididos em subgrupos que receberam os seguintes tratamentos: A - moluscos tratados com açúcar e expostos ao s. manson_; Bmoluscos tratados com açúcar enão expostos ao S. mansoni; Cmoluscos tratados com água declorada eexpostos ao S. mansoni; D - moluscos tratados com água declorada e não expostos ao S. mansoni. Os moluscos dos subgrupos A e B foram tratados com solução de açúcar UNIÃO à0,01% eos moluscos dos subgrupos C e D com água declorada. Após uma semana de tratamento foram submetidos à infecção com as respectivas 1 inhagens de S. mansoni BH e SJ. Os seguintes parâmetros foram observados: Taxa de penetração de miracídios; Período pré-patente de eliminação de cercárias; Taxa de infecção dos moluscos; Taxa de mortalidade dos moluscos; Produtividade de cercárias; Capacidade de penetração das cercárias em camundongos.De acordo com a análise estatística dos dados, observamos que a sacarose não mostrou efeito significante na taxa de infecção dos moluscos B. glabrata eB. tenagophila e na produção de cercárias. Em contrapartida asacarose mostrou efeito significante em diminuir asobrevi da dos moluscos infectados, sendo que a mortalidade foi mais acentuada no período que antecedeu a eliminação de cercarias ou durante este período, oque pode ter interferido nas taxa de infecção e produção de cercárias. A sacarose teve um papel marcante em contribuir para uma maior capacidade de penetração das cercarias em camundongos Swiss / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T11:57:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_MariaLecticiaPereiraSiqueirade_M.pdf: 8895119 bytes, checksum: d492f3563725d74e2b72646217afc80e (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A suscetibilidade de moluscos hospedeiros do Schistosoma mansoni é controlada geneticamente. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune celular em Biomphalaria tenagophila selecionada geneticamente para o caráter resistência ao Schistosoma mansoni da linhagem SJ procedente do Vale do Rio Paraíba do Sul. Avaliamos nas gerações parental, FI e F2 as taxas de infecção e mortalidade, o número de amebócitos na circulação lacular, a atividade fagocitária dos amebócitos frente à hemácias formolisadas de carneiro e a reação amebocitária nos tecidos em tomo das larvas do trematódeo. O processo de seleção por autofecundação de moluscos resistentes, não implicou em alteração significativa da taxa de infecção, entretanto nossos resultados mostraram que a seleção genética para o caráter resistência aumentou os índices de sobrevivência dos moluscos infectados (P > 0.0001). Uma forte proliferação celular ocorreu para neutralizar a presença das larvas que se caracterizou pelo aumento significativo do número de amebócitos na circulação tanto de granulócitos como hialinócitos (P > 0.0001). A atividade fagocitária dos amebócitos não foi diferente nas três gerações. Uma intensa reação amebocitária ocorreu nos tecidos da região céfalo podal nas primeiras horas pós infecção demonstrando a resistência do hospedeiro à infecção pelo Schistosoma mansoni. Concluímos que no processo de resistência apresentado por Biomphalaria tenagophila ao Schistosoma mansoni da linhagem SJ, o aumento do número de amebócitos na circulação foi fator decisivo, assegurando maior sobrevivência dos planorbídeos / Mestrado / Mestre em Ciências

Orientadores : Vanderlei Rodrigues, Luiz Candido de Souza Dias / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T23:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_ClaudiaMourade_D.pdf: 21271243 bytes, checksum: e521441608321ceb6dde5db11e7107b2 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo / Resumo: Variações fenotípicas intra e inter-populacionais de Schistosoma mansoni ocorrem em várias áreas geográficas. A heterogeneidade genética do parasita contribui para a observada variação fenotípica na interação parasita-hospedeiro, desempenhando um importante papel na epidemiologia da doença. A diferença fenotípica mais estudada, no entanto, é a resposta a quimioterapia, visto que ela é bastante relevante para o controle da esquistossomose. Com o objetivo de observar e avaliar a variabilidade genética entre linhagens brasileiras com características distintas e inferir relações filogenéticas entre elas, o DNA foi isolado de um " pool " de vermes das linhagens BH, SJ1, SJ2, 000, LE e MAP. O RAPD foi processado com 5 iniciadores com seqüências de nucleotídeos aleatórias. O RAP-PCR , por sua vez, foi realizado com o intuito de observar a variabilidade em regiões codificadoras do genoma. Os dois métodos se mostraram capazes de distinguir linhagens gerando marcadores moleculares intra-específicos. Um desses marcadores foi seqüenciado e mostrou alta homologia de nucleotídeo (99%) com uma sequência humana e 89% com gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase humana, proteína já correlacionada com a indução de resistência a reinfecção com S. mansoni e S. haematobium. O marcador G400-9 mostrou alta homologia de nuc1eotídeo, confirmada pela alta homologia de aminoácido com transposase de TNIO. Outro marcador sequenciado foi o CBH300-IO que apresentou alta homologia de nucleotídeo com o gene do ribossomo 28S. Outros marcadores interessantes foram observados na linhagem tolerante 000: 0uh250-IO e 0uh200-II, com os iniciadores RdIO (GGGTAACGCC) e RdII (GTGACTGCAG). Não detectamos marcadores específicos para a linhagem MAP, resistente ao oxamniquine, e sim um perfil eletroforético distinto com o iniciador Rd7 (TGCCGAGCTG). Na construção de árvores filogenéticas Neighbor-joining, quando foram inferidas as áreas geográficas das linhagens, obteve-se um dendograma formado por dois grupos distintos, um de linhagens paulistas e outro de mineiras. O dendograma obtido quando inferiu-se o tipo de hospedeiro intermediário revelou a formação de 3 grupos. A linhagem LE, mantida em laboratório sem retro-alimentação, pertence a um grupo externo bastante diferente dos demais. As linhagens BH, SJ1 e SJ2 foram agrupadas entre si, possivelmente em função do fluxo gênico existente entre elas, e a linhagem 000 foi estabelecida em um terceiro grupo. Estes dois últimos grupos (um formado pelas linhagens BH, SJ1 e SJ2, e outro pela linhagem 000), com linhagens de manutenção recente em laboratório ou com retroalimentação, são mais relacionadas entre si que com a LE. Acreditamos que a maior distância genética desta linhagem em relação as outras se deva a sua longa manutenção em laboratório com fixação de determinados alelos. As relações filogenéticas observadas nas árvores Neighborjoining corroboram as características fenotípicas distintas das linhagens e estas podem ser distinguidas e diagnosticadas por marcadores moleculares obtidos por RAPD e RAP-PCR / Abstract: Phenotypical variation intra and inter-populational of Schistosoma mansoni ocurred in several geographic areas. The genetic heterogenicity of the parasite contributes for phenotypic variation in the parasite-host interaction, representing an important role in the disease epidemiology. The more studied phenotypic difference, however, is the response to chemotherapy, so that is very relevant in the schistosomiasis contro!. The DNA was isolated fiom a pool of worms of the strains: BH, SJ1, SJ2, 000, LE and MAP, with the finality to observe and evaluate the genetic variability among brazilian strains, with different characteristics, and infer phylogenetic relations among them. The RAPD was processed with 5 random primers. The RAPD-PCR was realized with the fmality to observe the variability in codificators regions of genome. The two methods showed to be able to distinguish, generating molecular markers of strains. One of this markers was sequenced and showed high homology of nucleotides (99%) comparing to a human sequence and 89% with human glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, protein already relationed to the induction of resistance to the reinfection with S. mansoni and S. haematobium. The marker G400-9 showed high homology of nucleotides confirmaded for high homology of amino acid with transposase of TNI0. Other marker (CBH300-l0) was sequenced and apresented high homology with ribosomal 28 S gene Other interesting markers were observed in tolerant strain 000: 000250-10 and 000200-11, with the primers RdlO (GGGTAACGCC) and Rdll (GTGACTGCAG). Specific markers were not detected by us for MAP strain, resistant to oxamniquine, and a distinct PCR product profile with the primer Rd7 (TGCCGAGCTG). In the construction of phylogenetic trees Neighbor-joining, afier the geographic areas of strains were infered, a dendogram was obtained formed by two differents groups, one of paulistas strains and another of mineiras. When the type of intermediate host was infered the obtained dendogram revealed the formation of three groups. The LE strain kept in laboratory without retro-feed, belong to a external group very different fiom the others. The BH, SJ1 and SJ2 strains were grouped among them, possibly, in fimction of the genic flux existent among them, and the strain 000 was established in other group. This last two groups, with recent laboratory maintenance strains or with retro-feed, are more related among them, than to LE strain. We believed that the major genetic distance from this strain in relation to the others should be because the long maintenance in laboratory with the establishment of the allels. The phylogenetic relations observed in trees Neighbor-joining corroborate the different phenotypic characteristics of strains and this should be distinguished and diagnosed by molecular markers obtained by RAPD and RAP-PCR / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientador : Luiz Candido de Souza Dias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:43:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_LannyCristinaBurlandy_M.pdf: 679101 bytes, checksum: d1ba7ad762471ada25462b2d10c06367 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O controle da esquistossomose mansoni, iniciado em 1980 no município de Pedro de Toledo, área de baixa endemicidade no Estado de São Paulo, foi avaliado em 1998 por meio deste estudo. Têm-se demonstrado que nesta área, com pequenos índices de infecção, a sensibilidade dos métodos parasitológicos é falha devido ao reduzido número de ovos nas fezes, subestimando a prevalência. Os métodos sorológicos de alta sensibilidade e especificidade permitem obter coeficientes de prevalência mais próximos do real. Por amostragem aleatória, 12% (894) dos moradores do município forneceram amostras clínicas, sendo 749 amostras de fezes e 591 de sangue da polpa digital, em papel de filtro. As técnicas utilizadas para diagnóstico de infecção pelo Schistosoma mansoni foram o método parasitológico de Kato-Katz para exame de fezes e o método sorológico de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos IgG (RIF-IgG) e IgM (RIF-IgM). O coeficiente de prevalência do método parasitológico foi de 1,6%, com intensidade de infecção média de 40,9 ovos por grama de fezes (opg). As reações sorológicas apresentaram entre si um coeficiente de concordância considerado bom (Kappa = 0,84), com prevalências de 33,2% para a RIF-IgG e de 33,5% para a RIF-IgM. A RIF-IgM se mostrou um teste sorológico seguro e prático, constituindo importante instrumento na avaliação do perfil epidemiológico de populações em área de baixa endemicidade. Existiu uma acentuada discrepância entre a prevalência pelo método parasitológico em relação aos imunológicos, sendo a prevalência sorológica cerca de 20 vezes maior. Estes resultados sugerem a importância da inclusão dos métodos sorológicos em inquéritos epidemiológicos, na complementação dos achados parasitológicos, no diagnóstico e tratamento da parasitose. Com estas medidas, os indivíduos falso-negativos para o exame de fezes poderiam ser diagnosticados e tratados, diminuindo fontes de infecção em potencial. Comparando-se os dados de 1980 com os obtidos no presente estudo (1998) verifica-se um deslocamento na curva de distribuição das prevalências quanto à faixa etária, de maior prevalência no grupo de 10 a 19 anos em 1980 para 25 a 29 anos em 1998. Os coeficientes obtidos em 1980 de 22,8% (58,5 opg de fezes) e 55,5%, respectivamente pelo método de Kato-Katz e RIF-IgG, em relação aos resultados deste estudo, demonstram queda significativa nos coeficientes de prevalência, indicando efetividade das medidas de controle. Todavia, existe um residual de transmissão, demonstrando a necessidade de um esforço conjunto na ampliação das medidas de controle e vigilância da esquistossomose mansoni / Abstract: In 1980, schistosomiasis mansoni control measures were introduced in the municipality of Pedro de Toledo, a low endemic region in the State of Sao Paulo and this study was conducted, in 1998, to evaluate the program. Flaws were detected in the sensitivity of the parasitological methods used in this area of low infection indices due to the reduced number of eggs in the feces, which resulted in underestimated prevalence indices. Highly sensitive-specific serological methods provide prevalence indices that are closer to reality. A random sample of 12% of the residents in the municipality provided clinical samples that consisted of 749 stool samples and 591 blood samples from the finger on filter paper. The Kato-Katz parasitological technique for stool examinations and the serological techniques of indirect immunofluorescence for the detection of IgG (RIF-IgG) and IgM (RIF-IgM) antibodies were used in the diagnostics of mansoni schistosomiasis. The prevalence index obtained by the parasitological method was 1.6% with an infection intensity of 40.9 eggs per gram of feces (epg). Good concordance was shown by the serological reactions (Kappa = 0.84) with a prevalence of 33.2% for the RIF-IgG and 33.5% for RIF-IgM. The serological test RIF-IgM proved to be safe, practical and an important tool for assessing the epidemiological profile of a population in a low endemic area. A clear discrepancy was observed between the prevalence indices obtained by the parasitological and immunological methods, as the serological prevalence was 20 times greater than the parasitological prevalence. These results demonstrated the importance of incorporating serological techniques in epidemiological surveillance, for complementing parasitological findings and in the diagnosis and treatment of parasitoses. These techniques help in diagnosis and treatment of individuals who are false negative for stool examinations, which in turn reduces potential infection foci. When the prevalence distribution curve according to age group for 1980 was compared with that of this study (1998), a transference was observed of the highest prevalence, which was in the 10 -19 year old age group (190) to the 25 - 29 year old age group (1998). In 1980, the indices obtained by the Kato- Katz and RIF-IgM methods were 22.8% (58.5 epg of feces) and 55.5%, respectively. When compared with the results obtained by this study, a significant fall was observed in prevalence indices that indicated the effectiveness of the control measures. Nevertheless, the occurrence of residue transmission demonstrates the need for a joint effort in extending control and surveillance measures related to schistosomiasis mansoni / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Luiz Candido de Souza Dias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_RosanaAparecidaTrevisan_M.pdf: 29716650 bytes, checksum: 98dd518aeb2565fc09166e5ef8722ea0 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O estudo foi realizado no município de Pedro de Toledo, situado no Vale do Rio Ribeira de Iguape, São Paulo. A população estudada foi escolhida de forma aleatória e depois caracterizada quanto à área de moradia, sexo e idade. Tive-se o interesse em estimar a soroprevalência para toxocaríase e esquistosomose mansoni e prevalência de parasitos intestinais. A toxocaríase é uma zoonose comum em cães e gatos e é causada por Toxocara canis. A prevalência para toxocaríase foi revelada pela técnica imunoenzimática de ELISA, com uso de antígeno proveniente de larvas de Toxocara canis contra anticorpos anti-Toxocara canis IgG. A coleta de sangue foi realizada em papel de filtro, pela técnica de puntura digital, sendo todas as amostras testadas em duplicata. A técnica utilizada para diagnóstico da infecção por Schistosoma mansoni foi a reação de imunofluorêscencia indireta IgM para a detecção de anti- Schistosoma mansoni. As amostras de fezes foram examinadas pelos métodos parasitológicos de Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ e Kato-Katz. A análise de dados indicou que a prevalência para Toxocara canis foi mais elevada (26,8%) em indivíduos mais jovens. Também estava mais associada em moradores da área urbana (50,7%). Quanto ao sexo dos examinados a toxocaríase mais prevalente nos homens (43,2%). Neste estudo, a prevalência sorológica para a esquistOssomosefoi de 19,3%. Nos exames de fezes foram registrados índices de 2,0% no Kato-Katz e 0,9% Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿. A média geométrica foi de 24 ovos por grama de fezes, indicando intensidade leve de infecção. Houve diferença acentuada entre as prevalências sorológica e parasitológica. A análise de dados encontrou que a prevalência geral para helmintos intestinais foi de 43,6% e de 44,3% respectivamente para as técnicas de Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ e Kato-Katz. Os helmintos mais prevalentes foram Ascaris lumbricoides (37,6%), Trichuris trichiura (17,3%) e ancilostomatídeos (10,4%). As helmintíases foram mais freqüentes na zona rural. Neste estudo relatou-se diferença significativa no diagnóstico da infecção causada por Trichuris trichiura pelos métodos de Kato-Katz 17,3% e 7,8 no Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿. Devido a essa diferença, compararam-se amostras positivas e negativas do método Coprotes 'MARCA REGISTRADA¿ com o número de ovos por grama de fezes (opg) obtido pelo Kato-Katz. Quando o Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ era negativo foi verificado que a intensidade de infecção foi leve. Quanto aos protozoários intestinais o índice registrado foi de 26,1%, segundo técnica de Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿. Porém quando consideradas apenas as espécies patogênicas (Giardia intestinalis 10,4%, Blastocystis hominis 4,8% e Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar, 1,3%) a prevalência foi menor (14%). O protozoário intestinal mais prevalente foi a Entamoeba coli 12,6%. Desde 1980 é desenvolvido na região programa de controle para a infecção causada por Schistosoma mansoni, visto que a região ainda é considerada de baixa endemicidade. Apesar da não erradicação da infecção os coeficientes de prevalência tem se mostrado cada vez menores, embora exista um residual de transmissão senso confirmado pelo exame parasitológico. Neste estudo encontram-se altos índices para toxocaríase e parasitoses intestinais o que comprova a necessidade de medidas de controle e vigilância sanitária. Também seria importante alertar a população com medidas de prevenção contra as infecções / Abstract: This study was conducted in Pedro Toledo, Vale do Rio Ribeira de Iguape, State of Sao Paulo. The population sample was randomly chosen and then classified according to the residential area, sex and age. Our purpose was to estimate the seroprevalence of toxocariasis and schistosomiasis mansoni as well as the prevalence of intestinal parasites. Toxocariasis is a zoonosis caused by Toxocara canis and is commonly found in cats and dogs. The immunoenzymatic ELISA technique, which utilizes the antigen from the Toxocara canis larvae against anti-Toxocara canis IgG antibodies, was applied to obtain toxocariasis prevalence. Blood samples were collected on filter paper using the finger puncture technique and duplicate samples were tested. The indirect IgM immunofluorescence test technique for detection of anti- Schistosoma mansoni was utilized in the diagnosisof infections caused by Schistosoma mansoni The stool samples were examined by the Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ and the Kato-Katz parasitological methods. Data analysis indicated that Toxocara canis prevalence was higher (26.8%) in young individuals and demonstrated a higher relationship with residents of urban areas (50.7%). Toxocariasis was also found to be more prevalent in males (43.2%). In our study, the serological tests revealed that the prevalence of schistosomiasis was 19.3%. The stool examination results registered 2.0% for the Kato-Katz test and 0.9% for the Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿. The geometric mean was 24 eggs per gram of fecal matter, indicating a slight infection leveI. The difference between results of the serological and parasitological tests was very clear. Data analysis revealed that the general prevalence of intestinal helminthes using the Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ and Kato-Katz tests was 43.6% and 44.3%, respectively. The most prevalent helminthes were: Ascaris lumbricoides (37.6%), Trichuris trichiura (17.3%) and ancylostomatidae (10.4%). Helminthiases were more common in the rural area. This study exposes a significant difference in diagnoses of infections caused by the Trichuris trichiura utilizing the Kato-Katz (17.3%) and the Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ (7.8%) methods. Therefore, the positive and negative samples of the Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ method were compared with number of eggs per gram (epg) of fecal matter obtained by the Kato-Katz. When the Coprotest 'MARCA REGISTRADA¿ results were negative, the leveIof infectionwas found to be low. According to the Coprotest@ technique, the leveI of intestinal protozoa was 26.1%. However, when only the pathogenic species were considered (Giardia intestinalis 10.4%, Blastocystis hominis 4.8% and Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar 1.3%) the prevalence was lower (14%). The most prevalent intestinal protozoa were Entamoeba coli 12.6%. The control program, initiated in this area in 1980, of infections caused by Schistosoma mansoni, has been continued as this area is still considered as a region of low endemicity. Although the infection has not been eradicated, prevalence coeflicients have been steadily decreasing, despite the fact that residual transmission has been confirmed by parasitological exams. Our study revealed high parasitic infection rates that prove the need for control measures and sanitary surveillance,as well as the importance of warning the population and implementingpreventive actions against these infections / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Eliana Maria Zanotti Magalhães, Luiz Augusto Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T00:56:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serrano_DeborahRegina_M.pdf: 7164559 bytes, checksum: c709b5cc492def4a2ff1daa6c767ea12 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Os corticosteróides, hormônios do córtex da supra-renal com formação esteróide ou composto qualquer que possua atividades similares, tem como exemplo principal a hidrocortisona (cortisol), que nos mamíferos apresenta efeito anti-inflamatório e imunossupressivo, atuando. principalmente sobre as células de defesa. É por isso usada em casos de infecção e alergia, inibindo melhor a resposta primária do que secundária. Os moluscos apresentam sistema de defesa interno constituído por mecanismo de origem celular e humoral. Os amebócitos, células de defesa, podem ser de dois tipos: hialinócito e granulócito, sendo o segundo semelhante aos macrófagos dos mamíferos e responsáveis pela atividade fagocitária. Com o objetivo de verificar a ação da hidrocortisona sobre os componentes da hemolinfa de Biomphalaria glabrata infectada com miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH e sua influência no desenvolvimento do trematódeo em seu hospedeiro intermediário, realizamos vários experimentos: verificação da sobrevivência dos moluscos, taxa de infecção, número de cercárias liberadas, verificação da reação amebocitária em torno dos esporocistos. Os resultados mostraram que os moluscos tratados com hidrocortisona apresentaram menor quantidade de amebócitos circulantes na hemolinfa, maior suscetibilidade à infecção, precocidade na liberação de cercárias, liberação de cercárias em maior número, predominância de esporocistos viáveis sem reação amebocitária ao seu redor, precocidade no aparecimento dos esporocistos secundários. Tais dados, compatíveis entre si, sugerem atuação da hidrocortisona sobre o sistema de defesa interno dos moluscos Biomphalaria glabrata de modo semelhante ao que ocorre no ser humano, ou seja, causando imunossupressão. Tal atuação facilitaria o desenvolvimento do Schistosoma mansoni em seu hospedeiro intermediário / Abstract: Hydrocortisone (cortisol) is the main example of a drug which presents anti­inflammatory and immunosupressive efTects in mammals like other compounds as corticosteroids, suprarenal hormones with steroid formation or any others with similar activities. Its main activity is on the cell defence and is used in the infection and allergy cases best inhibiting primary than secondary response. The internal defence system of molluscs are constituted by humoral and cell mechanisms. Two types of amoebocytes, the cell defence in molluscs are found: hialinocyte and granulocyte. The second type is similar to the macrophage of mammals and is responsible for the phagocytic activity. Experiments were conducted to verify the mo de of action of hydrocortisone over the haemolimph cells of Biomphalaria glabrata infected with BH strain of Schistosoma mansoni miracidia and its developmental influence in the intermediate host. Survival of molluscs, rate of infection, number of released cercaria, haemolymph circulating amoebocytes, amoebocyte reaction around the sporocysts were verified. Molluscs treated with hydrocortisone exhibited less circulating amoebocytes in the haemolymph, more susceptibility to the infection, more production and precocious release of cercaria and predominance of viable sporocysts without secondary sporocysts. These results which are compatible among them, suggest similar mo de of action of hydrocortisone in the defence system óf Biomphalaria glabrata and human been causing immunosupression. This action would facilitate the Schistosoma mansoni development in its intermediary host / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Neste estudo avaliou-se o efeito in vitro de 4 compostos isolados de espécies vegetais, as amidas piplartina e piperina, a lignana grandisina e o alcaloide epiisopiloturina; 1 composto isolado da pele de anfíbio, o peptídeo antimicrobiano dermaseptina 01; e de 6 extratos etanólicos obtidos de vegetais, Piper tuberculatum, P. crassinervium, P. diospyrifolium, P. fuligineum, P. gaudichaudianum e Pothomorphe umbellata em adultos (machos e fêmeas com 49 dias) e esquistossômulos (recém-transformados, 1, 3, 5 e 7 dias) de Schistosoma mansoni linhagem BH. O estudo avaliou: 1) a viabilidade de vermes adultos; 2) a capacidade reprodutiva, avaliada pelo acasalamento e oviposição; 3) o efeito no tegumento em parasitas adultos; 4) a viabilidade e o efeito no tegumento em esquistossômulos; 5) a citotoxicidade de compostos e extratos em células de mamífero (célula Vero). Além disso, com microscopia confocal, neste estudo é proposto um novo modelo experimental que avalia, quantitativamente, o efeito de esquistossomicidas no tegumento dos esquistossomos. / In this study, the in vitro effect of 4 compounds isolated from plant species, amides piplartine and piperine, the lignin grandisin and alkaloid epiisopiloturine; 1 compound isolated from amphibian skin, the antimicrobial peptide dermaseptin 01; and 6 ethanolic extracts of plants, Piper tuberculatum, P. crassinervium, P. diospyrifolium, P. fuligineum, P. gaudichaudianum and Pothomorphe umbellata was evaluated in adults worm pairs (49-day-old) and schistosomula (newly-transformed, 1-, 3-, 5-, and 7-day-old) of Schistosoma mansoni BH strain. The effect of compounds and extracts against schistosomes was examined regarding: 1) adult worms survival, 2) the reproductive fitness as assessed by mating and oviposition; 3) alterations on adult worms tegumental surface; 4) viability and morphological alterations on schistosomula; 5) the cytotoxicity of compounds and extracts in mammalian cells (Vero cells) In addition, this study shows a new experimental model to evaluate quantitatively the effect of schistosomicidal drugs on the tegument of the schistosomes.

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A esquistossomose humana, doença causada pelo S. mansoni e com 6 milhões de infectados somente no Brasil, possui uma única estratégia terapêutica eficiente atualmente disponível. Esta se baseia na utilização de praziquantel e relatos de cepas resistentes à essa droga tem despertado o interesse da comunidade científica sobre o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Uma melhor caracterização dos processos metabólicos do parasita podem auxiliar nestas buscas. Diante desse contexto, nosso grupo tem trabalhado na caracterização estrutural e funcional das enzimas que compõem a via de salvação de purinas e pirimidinas deste parasita, com dez enzimas já caracterizadas. Uma das enzimas remanescentes é a uridina fosforilase (UP) (EC 2.4.2.3), cujo a qual o genoma do parasita apresenta duas isoformas, a smUPa e smUPb (92% de identidade entre elas). Com o objetivo de caracterizar estruturalmente estas enzimas, ambas foram obtidas via expressão heteróloga, purificadas e submetidas a ensaios de cristalização e co-cristalização (para obtenção das estruturas interagindo com diferentes ligantes). Após coleta de dados de difração de raio-x, processamento e refinamento adequado foram obtidas seis estruturas da smUPa (smUPaapo, smUPa+Timidina, smUPa+timina, smUPa+uracil, smUPa-5fluorouracil) e duas da smUPb (smUPbapo e smUPb+citrato). A análise das estruturas revela que as duas isoformas apresentam essencialmente a mesma estrutura, no entanto, apesar das poucas divergências em nível de sequência de aminoácidos, existem diferenças significativas entre os sítios ativos. A smUPa apresenta o sítio com as mesmas características de UPs conhecidas, em contrapartida a smUPb apresenta duas mudanças significativas que elimina a capacidade de interagir com a base nitrogenada (Q201L) e a cavidade que acomoda a base nitrogenada (G126D), o que torna as smUPs um caso único de isoformas de UP em um mesmo organismo conhecidas. É plausível que a smUPb não seja capaz de catalisar a fosforólise reversível da uridina, sendo ou um pseudogene ou alguma outra enzima com atividade catalítica diferente da UP. Para a completa caracterização destas enzimas, testes de atividade enzimática serão realizados e deverão auxiliar a determinar a real função da smUPb. / Human schistosomiasis, a disease caused by Schistosoma sp., is estimated to affect six million individuals in Brazil alone and there is currently only one therapeutic strategy available. This is based on the use of praziquantel and reports of the appearance of strains resistant to the drug has motivated the scientific community towards the search for new possible therapies. Biochemical characterization of the parasites metabolism is essential for the rational development of new therapeutic alternatives. Based on this,reasoning our group has been working on the structural and functional characterization of the enzymes involved in the pyrimidine and purine salvage pathways of S. mansoni. One of the remaining enzymes to be characterized is uridine phosphorylase (UP) (EC 2.4.2.3), for which there are two isoforms present in the parasite genome, smUPa and smUPb, which share 92% sequence identity. In order to structurally characterize these enzymes, both smUPs were produced by heterologous expression, purified and submitted to crystallization e co-crystallization assays, in the latter case in order to obtain the structure of different enzyme-ligand complexes. After data collection, processing and refinement, five structures of smUPa (smUPaapo, smUPa+Timidina, smUPa+timina, smUPa+uracil and smUPa+5fluorouracil) and two structures of smUPb (smUPbapo and smUPb+citrato) were obtained. Analysis of the structures revealed that the isoforms have the same fold, but despite the high sequence identity, significant differences are observed at the active site probably profoundly affecting enzyme activity. Whilst SmUPa presents an active site similar to that of other known UPs, smUPb is predicted to lack the ability to interact with the nucleoside base due to the presence of a leucine in place of a glutamine at position 201 and an aspartatic acid in place of glycine at position 126. These differences turn the smUPs into a unique case of UP isoforms. It is plausible that smUPb is unable to catalyze the reversible phosphorolysis of uridine and could be either a pseudogene or a different enzyme altogether of unknown catalytic activity. A complete functional characterization in vitro will be necessary in order to determine its real function.

A Adenina Fosforibosiltransferase (APRT E.C. 2.4.2.7) pertence à família de enzimas Fosforibosil Transferases (PRTase) do Tipo I , que catalisa a conversão reversível de Adenina e 5-fosfo-α-D-ribose-1-difosfato (PRPP) em difosfato e adenosina monofosfato, um importante precursor energético da célula. A APRT integra a via de salvação de purinas, única forma de suprir o balanço de purinas em Schistosoma mansoni. Este trabalho apresenta o isolamento, clonagem, expressão heteróloga e purificação da APRT de S. mansoni a fim de caracterizá-la quanto seus parâmetros físico-químicos. Não se obtendo cristais de proteína, foram elaborados modelos tridimensionais por homologia para estudos de dinâmica molecular e avaliação conformacional via tCONCOORD. A estrutura de APRT humana foi usada como controle nas simulações. Os dados computacionais e de biologia molecular foram comparados entre si para validação mútua e, verificou-se que a análise cuidadosa de dados computacionais é capaz de fornecer informações críticas sobre a APRT, auxiliando e guiando os estudos experimentais. Ainda, as simulações de dinâmica molecular foram capazes de evidenciar a abertura de loops do sítio ativo, explicitar a importância da análise de rotâmeros em modelos, permitindo, então, rearranjar da forma correta resíduos erroneamente modelados. Por fim, um estudo envolvendo mecanismo catalítico sugere a participação de uma molécula de água abstraindo o próton ligado ao N9 da adenina e, para efeito de comparação, um mecanismo alternativo independente desta participação também foi descrito. Ambas as observações expandem a corrente visão sobre o mecanismo catalítico de APRTs. / The Adenine Phoshoribosyltransferase (APRT E.C.2.4.2.7) belongs to the Phosphoribosyltransferase enzyme family (PRTase) of type I which catalyzes the reversible conversion of adenine and 5-phospho-α-D-ribose-1-diphosphate (PRPP) in diphosphate and adenosine monophosphate, an important source of this compound for the cell. APRT is involved in the purine salvage pathway, the only way that Schistosoma mansoni has to supply its purine demands. This work shows the isolation, cloning, heterologous expression and the purification of APRT from S. mansoni in order to establish its physical chemical and kinetics parameters. Since crystallographic structure was not obtained, we built homology models to perform molecular dynamics experiments and conformational evaluation via tCONCOORD. The human APRT structure was used as control in the simulation experiments. The computational and molecular biology data were compared for consistency and the detailed analysis of the former allowed us to improve experimental manipulation of APRT. The molecular dynamics experiments showed the opening of the loops of the catalytic binding site and the key function of rotamers. Finally, we were able to suggest that a water molecule may catch the proton of adenine N9. Both observations improve the current view of APRT catalytic mechanism.