Skeletal muscle satellite cells located between the plasma membrane and the basal lamina of muscle fibres, could for many years, only be studied in situ by electron microscopy. The introduction of immunohistochemistry and the discovery of molecular markers of satellite cells then made them accessible for light microscopic studies and a wealth of information is today available. Satellite cells are myogenic stem cells that can be activated from a quiescent state to proliferate for self-renewal or differentiate into myogenic cells. The satellite cells are involved in muscle growth during fetal and postnatal development and play a key role in repair and regeneration of damaged muscle fibres. The satellite cells are also essential for muscle fibre hypertrophy and maintenance of muscle mass in the adult. When the present thesis was initiated, studies on satellite cells in human skeletal muscle relied on the neuronal cell adhesion molecule (NCAM) as a marker for satellite cell identification. The results from different studies varied markedly. Therefore the aims of the present thesis were i) to develop a highly reliable method using light microscopy for satellite cell identification and quantification in biopsies of human skeletal muscle in normal and pathological conditions. A molecular marker for the myofibre basal lamina or plasma membrane to enhance the reliability of myonuclei and satellite cell identification were to be included. Furthermore unbiased morphometric methods should be used in the quantification process. ii) to evaluate which molecular markers which had been described for satellite cell and stem cell identification in different cell states (quiescence, activated or differentiated) are the most useful for studies on human skeletal muscle. iii) to further explore the function and heterogeneity of satellite cells with respect to different markers in human skeletal muscle by studying the effects of strength-training, intake of anabolic substances and pathological conditions. A new immunofluorescence method was developed where in the same tissue section, two satellite cell markers, the basal lamina and nuclei were monitored. From the evaluation of different markers it was found that both NCAM and Pax7 identified the majority of satellite cells but that both markers were needed for reliable identification. The members of the myogenic regulatory family were evaluated and by using the new method MyoD and myogenin were found to be useful markers to identify activated and differentiated satellite cells. Upon re-examination of biopsies from power-lifters, power-lifters using anabolic substances and untrained subjects it was observed that the new results on satellite cell frequency were significantly different from those obtained when using staining for NCAM and nuclei alone. In addition three subtypes of satellite cells (94.4% NCAM+/Pax7+, 4.2% NCAM+/Pax7– and 1.4% NCAM–/Pax7+) were observed. Thus the multiple marker method gave more information about satellite cells heterogeneity in human muscle and we propose that this is more reliable than previous methods. Low numbers of MyoD or myogenin stained satellite cells were observed in both untrained and strength trained subjects. Other markers such as DLK1/FA1, a member of the EGF-like family and c-Met, the receptor for hepatocyte growth factor showed that satellite cell heterogeneity in human muscle is far greater than previously shown. Furthermore, new evidence is presented for so called fibre splitting observed in hypertrophic muscle fibres to be due to defect regeneration of partially damaged fibres.

Customary marriages are essentially polygamous. Courts were of the opinion that the nature of customary marriages are against public policy and natural justice. The Interim Constitution, 1993 gave effect to the consequences of customary marriages in principle XIII, while section 15(3) of the Constitution of the Republic of South Africa, 1996 allows for the recognition of marriages concluded in terms of custom. These marriages may, however not be in conflict with the Bill of Rights. Recognition was given to lobolo as the courts could not find it to be against public policy as is reflected initially in section 11 (1) of the Black Administration Act 38 of 1927 and subsequently in section 54A of the Magistrate's Court Act 32 of 1944 and section 1 of the Law of Evidence Amendment Act 45 of 1988. In 1998 the Recognition of Customary Marriages Act 120 of 1998 was promulgated to give recognition to customary marriages. In this study, the question to what extent customary marriages and the Recognition of Customary Marriages Act 120 of 1998 are consistent with the Constitution within a democratic society based on equality, freedom and human dignity is addressed. It was found that the purpose of the Recognition of Customary Marriages Act 120 of 1998 is not only to give recognition to customary marriages, but to amend the traditional customary rules which may be inconsistent with the Bill of Rights. The Act succeeds in this. / Thesis (LL.M.)--North-West University, Potchefstroom Campus, 2006.

De par l'étendue de leur répartition géographique et la facilité de leur extraction, les molasses d'âge miocène du bassin rhodanien ont été largement exploitées par l'homme comme pierre de construction depuis le début de l'ère chrétienne. Le patrimoine bâti provençal érigé à l'aide de ce matériau, connu sous le nom de " Pierre du Midi ", et exposé aux intempéries depuis plus de cinq cents ans présente cependant un certain nombre de morphologies de dégradations. Parmi ces dégradations, la desquamation en plaques a la particularité de se développer en dehors des zones de remontées capillaires ainsi qu'en l'absence de sels solubles, de sollicitation mécanique, de pollution atmosphérique ou de colonisation biologique. Ce phénomène est donc induit par les propriétés intrinsèques du matériau et son comportement vis-à-vis des conditions environnementales. L'objectif de ce travail de recherche est d'établir le rôle joué par les minéraux argileux dans ce phénomène de dégradation spécifique. Une étude de terrain a pu mettre en exergue que le degré de desquamation en plaques observable sur des monuments de périodes de construction équivalentes est variable suivant l'origine des assises. A l'issue de cette reconnaissance, neuf échantillons représentatifs de la variabilité du degré de desquamation en plaques ont été prélevés en carrières. Une étude conventionnelle sur les caractéristiques pétrographiques et la composition minéralogique de ces types de " Pierre du Midi " a tout d'abord été conduite. Par la suite, une définition précise du cortège de minéraux argileux a été menée par le biais d'une approche méthodologique originale. Cette dernière combine la caractérisation cristallochimique au MET-EDS à la simulation des raies 00ℓ de diffraction des rayons X. Cette méthode a permis de déterminer les quantités de chacune des phases de phyllosilicate composant les différents cortèges. Le lien entre la quantité de feuillets de phyllosilicates expansifs et le degré de desquamation en plaques a pu, de ce fait, être mis en évidence. Après avoir déterminé les propriétés de stockage et de transfert des fluides des différents types de pierre, leur comportement hydromécanique a été évalué. L'ensemble de ces propriétés pétrophysiques a permis de mettre en relief la forte hétérogénéité du matériau à l'étude. Les indices de durabilité calculés à partir de ces résultats manquent cependant de pertinence quant à la prédiction du phénomène de desquamation en plaques. Après une analyse statistique (ACP) des données expérimentales, la meilleure interprétation suggère que ce phénomène soit déclenché par l'interaction entre les feuillets de phyllosilicates expansifs et les molécules d'eau. Cette interaction se manifeste par le comportement hydromécanique des pierres qui entraîne leur dégradation. Ce dernier est largement contrôlé par les propriétés physiques de stockage et de transfert des fluides qui conditionnent l'accommodation des déformations au niveau macroscopique.

Breast cancer is a heterogeneous disease comprised of distinct biological entities that correlate with diverse clinical outcomes. Gene expression profiling has divided this heterogeneity into luminal, ERBB2+ and basal molecular subtypes. Basal breast cancers are difficult to treat as they lack expression of candidates suitable for targeted therapies and are associated with poor outcome. / Elevated protein level of the hepatocyte growth factor receptor, MET, is observed in 20% of human breast cancers and correlates with poor prognosis. However, the role of MET in mammary tumorigenesis is poorly understood. To address this, we generated a murine model that expresses weakly oncogenic mutants of Met (Metmt) in the mammary epithelium under the transcriptional control of the mouse mammary tumor virus promoter. We demonstrate that Metmt induces mammary carcinomas with diverse phenotypes and used gene expression microarrays to elucidate gene expression changes induced by Met. Since mammary tumors contained variable contents of epithelium and stroma, we used laser capture microdissection to procure epithelial cells for microarray analysis. Based on immunohistochemistry and expression profiling, we show that Metmt produces tumors with luminal or basal characteristics. From hierarchical clustering, Metmt-induced basal tumors clustered with murine models that share features of epithelial to mesenchymal transition and human basal breast cancers. Moreover, Metmt basal tumors clustered with human basal breast cancer. The status of MET among the human breast cancer subtypes has not previously been addressed. We demonstrate that MET levels are variable across molecular subtypes but show elevation in the basal subtype and correlates with poor outcome. We used a candidate gene approach derived from microarray data to gain an understanding of signals required for Met-dependent tumorigenesis. We investigated Nck adaptor proteins and demonstrate a role for Nck in cell motility and actin dynamics of Met-dependent breast carcinoma cells and show elevated expression in human basal breast cancers. By generating a unique mouse model in which Met is expressed in mammary epithelia, with the examination of MET levels in human breast cancer, we have established a novel link between MET and basal breast cancer. This work identifies poor outcome basal breast cancers that may benefit from anti-MET therapies.

Parmi les nanoparticules aptes à accompagner la radiothérapie en clinique, les nanoparticules à base d'oxyde de gadolinium paraissent pertinentes, de part leur multimodalité en imagerie et leur effet radiosensibilisant prouvé in vitro et in vivo. Cet effet de radiosensibilisation est exceptionnel notamment sur des cellules cancéreuses radiorésistantes de la lignée SQ20B (carcinome squameux tête et cou) et uniquement pour des doses modérées de nanoparticules (aux alentours de 0.6 mM en Gd). Les clichés de microscopie électronique ont montré que ce maximum de radiosensibilisation est dû à une internalisation maximale des particules dans le cytoplasme, notamment par macropinocytose. Ce mécanisme d'internalisation est caractérisé par la formation de vésicules de grandes tailles, ou macropinosomes. Il se produit suivant deux étapes : la formation d'agglomérats de nanoparticules à proximité de la membrane cellulaire puis la récupération de ceux-ci par les lamellipodes de la cellule. La première étape est fortement dépendante des caractéristiques physicochimiques des particules, plus particulièrement leur potentiel zêta qui détermine la taille de l'agglomérat, et de la distance les séparant de la cellule. Dans des gammes de taille et de distance à la membrane optimales aux concentrations modérées, l'agglomérat peut être récupéré par les lamellipodes de la cellule. Il s'en suit une protubérance sur la membrane plasmique formant un macropinosome contenant les agglomérats de nanoparticules. Cet endosome précoce suivra ensuite le schéma d'endocytose classique dans le cytoplasme en fusionnant avec des corps multivésiculaires, uniquement visible en microscopie électronique à transmission, pouvant contenir des enzymes de dégradation détruisant leur contenu. Ces enzymes rendent le pH acide à l'intérieur de la vésicule. Plus les nanoparticules sont proches du noyau cellulaire plus leur effet radiosensibilisant sera efficace. Les espèces oxygénées réactives (ROS) et les électrons Auger et secondaires peuvent atteindre l'ADN du noyau plus facilement. A faibles doses (<0.4 mM) très peu de nanoparticules sont internalisées et un effet linéaire de la radiosensibilisation est observé jusqu'à 0.6 mM. A fortes doses (> 0.7 mM) les nanoparticules forment une couronne autour de la membrane cellulaire agissant comme écran, empêchant ainsi les ROS et les électrons générés de pouvoir atteindre l'ADN et induire des cassures, le noyau étant situé à quelques micromètres de la membrane cellulaire. Les résultats obtenus ouvrent la voie sur la nécessité de contrôler l'internalisation cellulaire des nanoparticules en contrôlant leur chimie, laissant envisager ainsi des opportunités prometteuses dans le domaine de la radiothérapie assistée par nanoparticules délivrant de faibles doses de radiation aux patients.

La réaction de films minces métalliques avec un substrat de silicium reste encore peu étudiée dans le domaine des très faibles épaisseurs. Afin de suivre les cinétiques de réaction et l'évolution des contraintes lors de la formation d'une phase, des mesures de diffraction du rayonnement X synchrotron, et de courbure de substrat ont été couplées. Le système Pd/Si constitue un système modèle ; un siliciure unique se forme : Pd2Si. Les résultats obtenus prouvent que le modèle de Zhang et d'Heurle permet d'expliquer l'évolution des contraintes résultant de la compétition de deux mécanismes : le développement de contraintes en compression dû à la formation d'une nouvelle phase et la relaxation des contraintes du siliciure déjà formé. Néanmoins, la microscopie électronique en transmission et les figures de pôle révèlent que la texture de cette phase change selon l'orientation du substrat. Sur Si(111), Pd2Si est en épitaxie alors que sur Si(001), la phase présente une texture qui évolue au cours du traitement thermique. Cette évolution serait activée par un mécanisme de fluage diffusionnel puis par de la déformation plastique. L'étude de films ultra-minces de Ni montre qu'il existe une épaisseur critique (<6 nm) en dessous de laquelle la séquence de phases et la texture des siliciures formés sont modifiées. Différentes techniques révèlent qu'à partir de 200 °C, la phase NiSi croît sous la forme d'une couche homogène et continue. En augmentant la température, les phases NiSi et NiSi2 coexistent avec différentes morphologies : îlots pénétrant dans le substrat ou bâtonnets.

Les fullerènes de bisulfure métallique de type ( M eS2 , où Me= Mo et W) rencontrent un intérêt croissant du fait de leurs pouvoirs anti usure et réducteur de frottement en régime de lubrification limite. Les propriétés tribologiques de ces nanoparticules, dépendent à la fois de leurs caractéristiques intrinsèques (structure, morphologie, taille, ... ), des conditions de sollicitations (nature des surfaces, pression, température, ... ) ainsi que du cocktail d'additifs présent dans une formulation d'huile moteur. La compréhension de l'origine de ces propriétés passe obligatoirement par une parfaite connaissance du mode d'action des nanoparticules. L'objectif de ce travail de thèse est d'identifier les paramètres pouvant avoir une influence sur le comportement des nanoparticules à l'échelle nanométrique et de faire le lien entre ce comportement, les mécanismes de lubrification des nanoparticules, et leurs propriétés tribologiques. Afin de répondre à cet objectif nous avons adopté une approche multi échelle qui consiste dans un premier temps à étudier le comportement de fullerènes individuels (IF - M eS2 , ou Me= Mo et W) en cours de sollicitation. Ainsi grâce à une méthodologie expérimentale originale couplant la technique de nano indentation à une observation in situ dans un microscope électronique à transmission haute résolution (HRMET), nous avons visualisé pour la toute première fois et en temps réelle comportement de nanoparticules individuelles d'if- M eS2 (Me= Mo et W) sollicitées en compression et/ou en cisaillement dans un contact dynamique. Cette étude a permis d'identifier l'influence des caractéristiques intrinsèques des fullerènes sur leur réponse à l'échelle nanométrique et d'estimer des pressions de contact pour lesquelles le fullerène s'exfolie, roule ou glisse dans le contact. Nous nous sommes ensuite intéressés aux mécanismes de lubrification des fullerènes en dispersion dans une base lubrifiante, en condition de lubrification limite. En se basant sur des analyses XPS et des observations MEB et MET des tribofilms et des débris d'usure générés à l'issu d'essais de frottement réalisés dans trois contacts de nature différente (acier, alumine et DLC), nous avons clairement montré que les propriétés lubrifiantes des nanoparticules d'IF - M eS2 (Me= Mo et W) dépendaient à la fois de leurs caractéristiques intrinsèques et de la nature des surfaces frottantes. Ainsi un lien a été établi entre le comportement des fullerènes à l'échelle nanométrique et leur mode d'action dans un contact tribologique. Enfin, l'influence de la mise en dispersion des nanoparticules sur leurs propriétés tribologiques a été étudiée. Les propriétés tribologiques des nanoparticules dans une huile moteur ont été également évaluées. Deux approches expérimentales de type 'Bottom up' et 'Top dawn'ont été adoptées afin d'évaluer les interactions entre les nanoparticules et l'ensemble des additifs présents dans une huile complétement formulée. L'influence de la température sur les propriétés tribologiques des nanoparticules a été également abordée.

Grâce à ses propriétés d'antioxydant, d'anti-usure et éventuellement d'extrême pression le dithiophosphate de zinc (ZDDP) fait partie des additifs les plus utilisés dans les lubrifiants pour moteurs thermiques. De nos jours, dans un souci de respect de l'environnement, de nouveaux lubrifiants possédant de bonnes performances en lubrification (frottement faible et usure limitée) sont développés en prenant compte des limitations d'utilisations actuelles du ZDDP. L'idée étant de réduire dans ceux-ci les teneurs en phosphore et soufre (Normes euros VI), éléments essentiels du ZDDP qui endommagent les pots catalytiques. L'objectif de cette thèse est l'étude du comportement tribologique du phosphate de zinc di alkyl (ZP) en comparaison avec le ZDDP. La méthodologie expérimentale étudiée pour comprendre le mécanisme d'action de ces additifs, associe des essais de frottement à descaractérisations physico-chimiques des surfaces frottantes après essais.Cette comparaison a été effectuée en fonction de la température (25°C et 100°C), la vitesse de glissement (25, 50 et 100 mm/s) et la concentration en additif (200 et 600 ppm dephosphore). Les meilleures actions anti-usure sont obtenues avec le ZDDP pour une température de 100°C et une vitesse de glissement de 100 mm/s et le ZP pour une température de 25°C et une vitesse de glissement de 25 mm/s. Les analyses de surface XPS, AES, XANES et MET-EDX ont permis de mettre en évidence la présence d'un film protecteur constitué principalement de phosphate de zinc, ceci pour les deux additifs.Une synergie de comportement tribologique a été mise en évidence avec un lubrifiantconstitué de ZP (usure faible) et d'oléate d'urée (frottement faible). Des essais complémentaires sur un tribomètre dynamique ont permis d'étudier le niveau de frottement du tribofilm formé à partir du ZDDP. Le caractère visqueux du tribofilm de ZDDP a été mis en évidence.

Studies presented in this dissertation were conducted to gain more insight into the role of phospholipid asymmetry and amyloid-β (Aβ)-induced oxidative stress in brain of subjects with amnestic mild cognitive impairment (aMCI) and Alzheimer disease (AD). AD is a largely sporadic, age-associated neurodegenerative disorder clinically characterized by the vast, progressive loss of memory and cognition commonly in populations over the age of ~65 years, with the exception of those with familial AD, which develop AD symptoms as early as ~30 years-old. Neuropathologically, both AD and FAD can be characterized by synapse and neuronal cell loss in conjunction with accumulation of neurofibrillary tangles and senile plaques. Elevated levels of oxidative stress and damage to brain proteins, lipids, and nucleic acids are observed, as well. Likewise, aMCI, arguably the earliest form of AD, displays many of these same clinical and pathological characteristics, with a few exceptions (e.g., no dementia) and to a lesser extent. Studies in this dissertation focused on the contributions of oxidative stress to the exposure of phosphatidylserine (PtdSer) to the outer-leaflet of the lipid membrane, how and when PtdSer asymmetric collapse contributes to the progression of aMCI, AD, and FAD, and the role played by methionine-35 (Met-35) of Aβ in oxidative stress and damage, as measured in a transgenic mouse model of Aβ pathology. Normally, the PtdSer is sequestered to the cytosolic, inner-leaflet of the bilayer by the adenosine triphosphate (ATP)-dependent, membrane-bound translocase, flippase, which unidirectionally transports PtdSer inward against its concentration gradient. Oxidative stress-induced modification of flippase and/or PtdSer, however, leads to prolonged extracellular exposure of PtdSer on the outer membrane leaflet, a known signal for both early apoptosis and selective recognition and mononuclear phagocytosis of dying cells. Within the inferior parietal lobule (IPL) of subjects with aMCI and AD, a significant collapse in PtdSer asymmetry was found in association with increased levels of both pro- and anti-apoptotic proteins, Bax, caspase-3, and Bcl-2. Moreover, a significant collapse in PtdSer asymmetry was also found in whole brain of human double-mutant knock-in mouse models of Aβ pathology, together with significantly reduced Mg2+ATPase activity, representing flippase activity, and increased levels of pro-apoptotic caspase-3. Significant PtdSer externalization corresponded to the age at which significant soluble Aβ(1-42) deposition occurs in this particular mouse model (9 months), and not of plaque deposition (12 months), suggesting that elevated levels of Aβ(1-42), together with increasing oxidative stress and apoptosis, may contribute to altered PtdSer membrane localization. Also in this dissertation, transgenic mice carrying Swedish and Indiana mutations on the human amyloid precursor protein (APPSw,In) and APPSw,In mice carrying a Met35Leu mutation on Aβ were derived to investigate the role of Met-35 in Aβ(1-42)-induced oxidative stress in vivo. Oxidative stress analyses revealed that Aβ-induced oxidative stress requires the presence of Met-35, as all indices of oxidative damage (i.e., protein carbonylation, nitration, and protein-bound 4-hydroxy-2-trans-nonenal [HNE]) in brain of Met35Leu mice were completely prevented. Moreover, immunohistochemical analyses indicated that the Met35Leu mutation influences plaque formation, as a clear reduction in Aβ-immunoreactive plaques in Met35Leu mice was found in conjunction with a significant increase in microglial activation. In contrast, behavioral analyses suggested that spatial learning and memory was independent of Met-35 of Aβ, as Met35Leu mice demonstrated inferior water-maze performance compared to non-transgenic mice. Differential expression and redox proteomic analyses to pinpoint proteins significantly altered by the APPSw,In and Met35Leu mutations was performed, as well. Expression proteomics showed significant increases and decreases in APPSw,In and Met35Leu mouse brain, respectively, in proteins involved in cell signaling, detoxification, structure, metabolism, molecular chaperoning, protein degradation, mitochondrial function, etc. Redox proteomics found many of these same proteins to be oxidatively modified (i.e., protein carbonylation and nitration) in both APPSw,In and Met35Leu mouse brain, providing additional insights into the critical nature of Met-35 of Aβ for in vivo oxidative stress in a mammalian species brain, and strongly suggesting similar importance of Met-35 of Aβ(1-42) in brain of subjects with aMCI and AD. Taken together, studies presented in this dissertation demonstrate the role of oxidative stress-induced alteration of PtdSer asymmetry and Met-35 in Aβ-induced oxidative stress in aMCI, AD, and FAD brain.

Syfte och frågeställningar Syftet med studien är att undersöka om det finns några skillnader i fysisk aktivitet beroende på upplevd stress. Undersökningen avser att jämföra en tidsmässigt lugn respektive stressig vecka. För att besvara syftet undersöks om deltagarna når upp i rekommendationerna för fysisk aktivitet samt om det finns en skillnad i aktivitetsgrad mellan domänerna.  Metod Studien är en tvärsnittsstudie där enkäter används för att besvara syftet. Enkäten är egenkonstruerad och uppdelad i två delar, där delarna representerar en vanlig lugn vecka och en vanlig stressig vecka. Den upplevda stressen är utgångspunkt, den fysiska aktiviteten undersöks genom frågor som berör intensitet, duration och frekvens. Detta omvandlas sedan till motsvarande MET-minuter. Domänerna som undersöks är ”hem- och hushållsarbete”, ”aktiv transport”, ”motion och träning på fritiden”, ”yrkesarbete eller studie” samt ”motion och träning på betald arbetstid”. Urvalet utgörs av personer som tränar på tre gymanläggningar i Stockholms stad. Resultat Resultatet baseras på 65 deltagare. 63 av dessa uppnår rekommendationerna för fysisk aktivitet under en lugn vecka, motsvarande siffra för en stressig vecka är 59. Totalt minskade aktiviteten med 910,3 MET-minuter i den stressiga veckan, detta i jämförelse med en lugn vecka. Signifikanta skillnader i fysisk aktivitet ses i domänerna ”hem- och hushållsarbete” samt ”motion och träning på fritiden”. Vidare ses en stor spridning i aktivitetsgrad inom domänerna ”yrkesarbete eller studier” och ”aktiv transport”, skillnaderna mellan veckorna är inte signifikanta.”Motion och träning på betald arbetstid” utnyttjas av ett fåtal deltagare, signifikanta skillnader går inte att påvisa. Slutsats Majoriteten av deltagarna når upp till rekommendationerna för fysisk aktivitet vilket är positivt, men det finns en skillnad i aktivitetsgrad beroende på den upplevda stressen i vardagen. Utmärkande är domänerna ”hem- och hushållsarbete” samt ”motion och träning på fritiden” där aktiviteten sänks under stressiga veckor. Det är av stor vikt att utforska området kring domäner och en kartläggning på samhällsnivå kan i framtiden möjliggöra punktinsatser för ökad fysisk aktivitet, och på så vis öka välmåendet hos befolkningen.