Orientador: Maria Filomena Rocha Lima Huhtala / Coorientadora: Juliana Campos Junqueira / Banca: Eduardo Bresciani / Banca: Tânia Mara da Silva / Resumo: Materiais restauradores denominados bioativos se propõem a auxiliar no equilíbrio biodinâmico entre os dentes e a saliva. O objetivo deste estudo, portanto, foi avaliar quatro desses materiais quanto à: adesão bacteriana e microdureza do esmalte adjacente a restaurações realizadas com esses materiais quando submetidos ao desafio cariogênico. Para a adesão bacteriana foram confeccionados 10 espécimes padronizados de cada material restaurador que foram expostos em uma cepa padrão de Streptococcus mutans (UA 159). Depois da incubação foi determinado o número de unidades formadoras de colônia (UFC/mL). Para a avaliação da microdureza foram utilizados 91 incisivos bovinos distribuídos em 7 grupos (n=13): 2 grupos controle; ES, esmalte hígido sem ciclagem de pH e EC, esmalte com ciclagem de pH e 5 grupos com preparos padronizados de classe V na superfície do esmalte vestibular, restaurados com dos materiais selecionados: AB, ActivaBioactive (Pulpdent); BB, Beautifil Bulk (Shofu); CN, Cention N (Ivoclar Vivadent); EF, Equia Forte (GC) e FB, Filtek Bulk Fill (3M ESPE). A microdureza das superfícies do esmalte foi medida em um microdurômetro acoplado a um software para análise de imagem. Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey (5%). Para a adesão bacteriana os resultados demonstraram que não houve diferença estatística entre a resina composta convencional Filtek Bulk (10,58 ± 0,04) e os materiais bioativos Activa Bioactive (10,19 ± 0,08) e Cention N (10,16 ± 0,12). No ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / ABstract: Bioactive restorative materials are intended to aid the biodynamic balance between teeth and saliva. The objective of this study was to evaluate four of these materials for bacterial adhesion and microhardness of the enamel adjacent to restorations with them, when submitted to cariogenic challenge. For bacterial adhesion, 10 standardized specimens of each restorative material were prepared and exposed in a standard strain of Streptococcus mutans (UA 159). After incubation, the number of colony forming units (CFU / mL) was determined. To evaluate the microhardness, 91 bovine incisors were distributed in 7 groups (n = 13): 2 control groups; ES, enamel without pH cycling and EC, enamel with pH cycling and 5 groups that received standardized class V preparations on the buccal enamel surface restored with one of the selected materials: AB, ActivaBioactive (Pulpdent); BB, Beautifil Bulk (Shofu); CN, Cention N (Ivoclar Vivadent); EF, Equia Forte (GC) and, FB, Filtek Bulk Fill (3M ESPE). Enamel surfaces microhardness was measured in a microdurometer coupled to software for image analysis. The results were submitted to ANOVA and Tukey tests (5%). For bacterial adhesion the results showed that there was no statistical difference between the composite resin Filtek Bulk (10,58 ± 0,04) and the bioactive materials, Activa Bioactive (10,19 ± 0,08) and Cention N (10,16 ± 0,12). However, it was observed that these materials presented significant difference in relation to Beautifil Bulk (9,66 ± 0,09) and Equia Forte (7,75 ± 1,27); which presented the lowest bacterial adhesion. The analysis of microhardness data showed a difference between treatment and time (p <0.001) and in the interaction of these two factors. The groups: pH cycled enamel (77,89 ± 45,19) and Filtek Bulk resin (121,32 ± 43,53) presented the lowest microhardness values, followed by the Beautifil Bulk... / Mestre

Streptococcus mutans (S. mutans) é considerado o principal agente etiológico da cárie dentária e estudos acerca de sua virulência têm sido realizados com o intuito de compreender melhor os mecanismos de patogenia da doença. Dentre outros fatores, a virulência dessa espécie bacteriana está relacionada a sua habilidade em produzir proteína ligante de glucano tipo A (GbpA) e mutacinas, proteínas que desempenham importante papel na adesão celular e colonização da superfície dentária. Desta forma, o objetivo da presente pesquisa foi analisar, geneticamente, esses fatores de virulência de S. mutans e verificar sua relação com a persistência e transmissão de genótipos entre os membros de oito famílias brasileiras. Foram utilizados 392 isolados clínicos de S. mutans obtidos a partir da saliva de 20 indivíduos adultos cárie-ativos. Os microrganismos foram previamente identificados e genotipados em um estudo anterior que avaliou sua transmissibilidade e estabilidade ao longo do tempo. As amostras estocadas a -86°C foram reativadas por semeadura em diferentes meios de cultura (ágar sangue e ágar Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose) e repicadas em caldo de Infusão de Cérebro e Coração. Após extração do DNA cromossômico bacteriano foram realizadas análises genético-moleculares, por meio da reação em cadeia da polimerase, visando a detecção nas amostras dos genes envolvidos na produção de GbpA (gbpA) e codificadores dos tipos I, II, III e IV de mutacinas (mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV). Os dados obtidos foram analisados por meio das estatísticas descritiva e inferencial, utilizando-se os testes de Qui Quadrado, Odds Ratio (OR) e exato de Fisher, a um intervalo de confiança de 95% (IC95%) e nível de significância de 5%. Os genes gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV foram detectados, respectivamente, em 77,3%, 12,5%, 51%, 16,6% e 89,8% dos isolados de S. mutans considerados viáveis (N=392). A virulência do S. mutans apresentou associação com sua transmissão (P<0,001) e estabilidade (P=0,011), sendo que os genótipos mais virulentos apresentaram aproximadamente três vezes mais chance de serem transmitidos (OR=3,07; IC95% 2,02 - 4,66) e aproximadamente duas vezes mais chance de persistirem na cavidade bucal dos indivíduos (OR=2,06; IC95% 1,17 - 3,63) do que os menos virulentos. Apesar da prevalência dos genes mutAI (P<0,001) e mutAIII (P<0,001) terem sido diferentes entre os genótipos de S. mutans transmitidos e não transmitidos, não houve associação (P=0,357) entre a experiência de cárie dentária das crianças e a virulência dos genótipos adquiridos. Os resultados sugerem que os genótipos dotados de informação genética para sintetizar GbpA e mutacinas apresentam importante vantagem ecológica no processo de colonização por S. mutans, mantendo-se estáveis na microbiota bucal do hospedeiro e favorecendo a transmissão intrafamiliar. / Streptococcus mutans (S. mutans) is the main etiologic agent in the development of dental caries and several studies about its virulence have been conducted to understand the mechanisms of disease pathogenesis. Among other factors, the virulence of this bacterial species is based on their ability to produce glucan-binding protein-A (GbpA) and mutacins, proteins that play an important role in cell adhesion and colonization of the dental surface. Thus, the aim of the present study was to analyze, genetically, these virulence factors of S. mutans and to investigate their relation with the persistence and transmission of genotypes among the members from eight Brazilian families. A total of 392 clinical isolates of S. mutans, collected from 20 caries-active adults, were utilized. These microorganisms were previously identified and genotyped in a study that evaluated their transmissibility and stability over time. The samples stored at -86°C were plated on different culture media (blood agar and Mitis Salivarius Sucrose Bacitracin agar) and grown in Brain Heart Infusion broth. After extraction of bacterial chromosomal DNA, the samples were amplified, by the technique of polymerase chain reaction, for the presence of genes coding for GbpA (gbpA) and for mutacins types I, II, III and IV (mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV). Data obtained were analyzed through descriptive and inferential statistics, using the Chi-Square, Odds Ratio (OR) and Fisher\'s exact tests, with a 95% confidence interval (95%CI) and a significance level of 5%. The gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV genes were detected, respectively, in 77.3%, 12.5%, 51%, 16.6% and 89.8% of viable clinical isolates (N=392). The virulence of S. mutans was associated with the transmission (P<0,001) and stability of colonization (P=0.011). The most virulent genotypes showed approximately three times more likely to be transmitted (OR=3.07; 95%CI 2.02 - 4.66) and approximately two times more likely to persist in the oral cavity (OR=2.06; 95%CI 1.17 - 3.63) than the less virulent genotypes. Despite the prevalence of genes mutAI (P<0.001) and mutAIII (P<0.001) have been different between the genotypes of S. mutans transmitted and no transmitted, there was no association (P=0.357) between the experience of dental caries of children and the virulence of the acquired genotypes. The results suggest that the genotypes with genetic information to synthesize GbpA and mutacins can represent an important ecological advantage in the process of colonization by S. mutans, remaining stable in the oral microbiota of the host and favoring an intrafamilial transmission.

Desequilíbrios no desenvolvimento da microbiota bucal podem gerar algumas patologias e, entre elas, está a cárie dental, uma doença crônica - contagiosa, de etiologia multifatorial, mas extremamente relacionada à bactéria Streptococcus mutans, que através de seu metabolismo fermentativo destrói estruturas mineralizadas do dente. Além disso, o aumento da resistência à antibioticoterapia, devido à existência do biofilme (também formado pelo S. mutans) e aos tratamentos bactericidas mal sucedidos, faz do desenvolvimento de técnicas antimicrobianas alternativas um importante foco nesta área de pesquisa. Assim, na busca de novas metodologias contra microrganismos, estudos usando a Terapia fotodinâmica (TFD) têm sido empregados para se obter a inativação de bactérias como o S. mutans. A TFD é uma modalidade terapêutica em que há a integração de uma luz visível, um corante e oxigênio que quando interagem, levam à produção de diferentes espécies reativas de oxigênio (ERO?s) que irão desencadear uma seqüência de eventos biológicos, resultando numa possível morte ou inativação celular, inclusive de microrganismos como o S. mutans. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação da TFD sobre a bactéria S. mutans em meio planctônico ou formando biofilme. Assim, a metodologia padronizada possibilitou o cultivo da bactéria em meio líquido (planctônico) ou na forma de biofilme, tornando-se possível a realização de testes com a aplicação da terapia fotodinâmica. Uma análise das curvas de crescimento possibilitou avaliar o metabolismo anaeróbico de S. mutans que consome açúcares fermentáveis (glicose, frutose, sacarose e maltose), mostrando-se hábil na produção de ácidos. Conforme proposto, um fotopolimerizador de resina odontológica foi empregado como fonte de luz na TFD. Esta luz é emitida em comprimentos de onda variáveis (possível graças à troca do filtro de luz do equipamento) que fotoativam os diferentes corantes empregados tais como: Rose bengal, a Protoporfirina IX (PPIX) e a Zinco ftalocianina. Estes agentes fotossensíveis, depois de irradiados, produzem espécies reativas de oxigênio, principalmente o oxigênio singlete, que leva à inativação bacteriana observada nos experimentos realizados. Em contrapartida, as concentrações de luz e corantes empregados na inativação bacteriana apresentaram valores de baixa toxicidade para culturas de fibroblastos. Além disso, a grande diferença entre as concentrações de corante que causa a morte da bactéria na presença e na ausência de luz, indica que os compostos produzidos pela fotoativação são os responsáveis pela morte bacteriana em meio planctônico. Quanto ao biofilme formado por S. mutans, é possível promover uma diminuição da sua formação tanto com a TFD quanto com o emprego de flúor. Células irradiadas imediatamente após a adição do corante foram semelhantemente inativadas após TFD, podendo ser desconsiderada uma incubação prévia para que agente fotossensível fosse homogeneamente distribuído. Aparentemente a TFD não acarretou em mudanças na atividade ATPase total extraída da membrana da bactéria. Os experimentos para a determinação da localização dos corantes na célula ou para a avaliação de sua capacidade acidogênica não foram conclusivos em relação à possibilidade das espécies reativas estarem causando danos à parede, membrana plasmática ou ainda em alguma biomolécula citoplasmática da bactéria. Em adição, os estudos da peroxidação lipídica, de análise do DNA e de proteínas de stress após a TFD não trouxeram nenhuma informação adicional conclusiva sobre o alvo específico das ERO?s que causam a inativação bacteriana. Esta metodologia, apesar de ainda não poder ser aplicada na clínica, poderá complementar as técnicas antimicrobianas convencionais, por ser uma metodologia simples, de fácil emprego e baixo custo, podendo inclusive ser associada à possibilidade do uso de diferentes agentes fotossensíveis e adequada às necessidades da prática odontológica. / Unbalance in the development of the mouth macrobiota can originate some pathologies, dental cavity being among them - a chronic disease - contagious, of multifactorial etiology, but extremely related to the Streptococcus mutans bacteria, which, through its fermentative metabolism, destroys tooth mineralized structures. Besides that, the increase in resistance to antibiotic therapy, due to the existence of biofilm (also formed by S. Mutans) and to non successful bactericide treatments, makes alternative antimicrobial techniques development an important focus in this research area. So, in search of new methodologies against microorganisms studies using the Photodynamic Therapy (TFD) have been employed to achieve inactivation of bacteria such as S. mutans. TFD is a therapeutical modality in which there is an integration of a visible light, a dye and oxygen and, when they interact, there is the production of different reactive oxygen species (ERO?s) which will lead to a sequence of biological events, resulting in a possible cellular death or inactivation, including microorganisms such as S. mutans. The aim of this work was to evaluate the action of TFD on S. mutans bacteria in planktonic medium of forming biofilm. So, the standardized methodology allowed the cultivation of bacteria in liquid media (planktonic) or in the biofilm form, making it possible to do tests with the application of the photodynamic therapy. The analysis of the growth curves allowed the evaluation of the anaerobic metabolism of S. mutans, which consumes fermentable sugars (glucose, fructose, sucrose and maltose), and is apt in acid production. According to what is was proposed, a odontological resin photopolymerizer was used as light source in TFD. This light is sent in variable wave lengths (made possible thanks to the change of the light filter in the equipment) which photoactivate the different dyes used, such as Rose Bengal, Protoporfirine IX (PPIX) and the Zinc Phtalocyanine. These photosensitive agents, after being irradiated, produce reactive oxygen species, specially the singlet oxygen, which leads to the bacterial inactivation observed in the experiments done. Nonetheless, the light concentrations and dyes used in the bacterial inactivation have shown low toxicity values for fibroblasts cultures. Besides that, the high difference between the dye concentrations which causes the death of bacteria in the presence and absence of light indicates that the compounds produced by the photoactivation are the responsible for the bacterial death in planktonic media. As for the biofilm formed by S. mutans, it is possible to have a decrease in its formation with TFD as much as with the use of fluoride. Cells irradiated immediately after the dye addition were similarly inactivated after TFD, so a previous incubation for the homogeneous distribution of the photosensitive agent can be discarded. Apparently, the TFD did not cause changes in the total APTase activity extracted from bacteria membrane. The experiments for the determination of dye location in the cell or for the evaluation of its acidogenic capacity were not conclusive in relation to the possibility of reactive species to be causing damage to the wall, plasmatic membrane or still in some cytoplasmatic biomolecule of the bacteria. In addition, the studies of lipidic peroxidation, DNA analysis and stress proteins after TFD did not bring any conclusive additional information about the specific target of ERO?s that cause bacterial inactivation. This methodology, although can?t be applied in clinic yet, can complement the conventional antimicrobial techniques, being a simple methodology, of easy used and low cost, which can also possibly be associated to the use of different photosensitive agents and adjusted to the needs of odontological practice.

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a contaminação de escovas dentais por Streptococcus grupo mutans e a ocorrência de infecção cruzada por Streptococcus mutans após armazenagem conjunta das mesmas. A amostra foi composta de 46 crianças de 6 a 7 anos de idade divididas em Grupo A com 22 e Grupo B com 24 alunos, de acordo com a sala de aula que freqüentavam. As amostras de biofilme obtidas da cavidade bucal das crianças no início do estudo e o biofilme das escovas dentais das crianças que compartilhavam o mesmo ambiente, foram recolhidas após 21 dias e cultivadas sob condições adequadas em meio de cultura SB20. Em cada escova foram isoladas UFC com morfologia típica, as quais foram identificadas por meio de testes bioquímicos e o polimorfismo genético foi detectado pela técnica de AP-PCR. Pode-se observar 94 UFC de Streptococcus mutans isoladas a partir das escovas dentais. O crescimento bacteriano ocorreu em 14 escovas dentais, sendo que 6 escovas pertenciam às crianças do Grupo A, e 8 às crianças do Grupo B. Dos microrganismos encontrados nas escovas dentais, 83,92% eram Streptococcus mutans. Todos os isolados apresentaram perfil genético distinto, com exceção de 4 e 3 amostras dos Grupo A e B respectivamente, os quais pertenciam a mesma escova dental. Pode-se concluir que dos microrganismos encontrados, ocorreu maior prevalência de colonização por Streptococcus mutans nas crianças e escovas analisadas, não havendo evidência de que a armazenagem conjunta de escovas dentais pode ser um veículo para infecção cruzada por este microrganismo. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the contamination of toothbrushes by mutans streptococci and cross-section infection of Streptococcus mutans. Forty-six children aged from 6 and 7 years were divided into two groups, Group A with 22 children and Group B with 24, according to attending class. A dental plaque sample from each participant was collected at the beginning of the study and the plaque present in toothbrushes was collected after 21 days. The samples were processed and cultivated under adequate conditions in SB20 medium. Typical morphotype mutans streptococci colonies were isolated and submitted to bioquimical tests for identification. An arbitrarily primed polymerase chain reaction (AP-PCR) method was performed for genotypic characterization of Streptococcus mutans. Fourteen toothbrushes were contaminated by mutans streptococci, 6 in Group A and 8 in Group B. Streptococcus mutans represented 83,92% of the mutans streptococci identified. The presence of matching genotypes of Streptococcus mutans has occurred in 4 strains of Group A and in 3 strains of Group B. However, for both groups, the matching genotypes belonged to the same toothbrush. In conclusion, Streptococcus mutans was the predominant specie in both dental plaque and toothbrush. The latter did not represent a source of cross-sectional infection of such microorganism. / Orientador: Angela Cristina Cilense Zuanon / Coorientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Josimeri Hebling / Banca: Marcelo Fabiano Gomes Boriollo / Mestre

Imunoglobulinas secretoras presentes nas superfícies mucosas representam a primeira linha de defesa do sistema imune adaptativo contra desafios infecciosos. A imunidade humoral de recém-nascidos prematuros é diminuída em comparação a recém-nascidos a termo. A identificação de antígenos de virulência de bactérias colonizadoras da cavidade oral pode ajudar na investigação dos mecanismos de estimulação antigênica e desenvolvimento da resposta imune de mucosa. No presente estudo, foram medidos os níveis de imunoglobulina A (IgA) e M (IgM) na saliva e caracterizada a especificidade de IgA contra antígenos de espécies de estreptococos da cavidade oral no início da vida. Foram estudadas as respostas de anticorpos IgA específicos para espécies bacterianas pioneiras (Streptococcus mitis , S. sanguinis , S. gordonii) e patogênicas (Streptococcus mutans) da cavidade oral em crianças a termo (AT) e pré-termo (PT) em duas visitas: ao nascimento (T0) e aos 3 meses de idade (T3). Salivas de 123 crianças (72 AT e 51 PT) foram coletadas durante as primeiras 10h após o nascimento (T0) e, novamente, aos 3 meses de idade (T3). Os níveis de anticorpos IgA e IgM nas amostras salivares foram analisados por ELISA. Um subgrupo de 26 crianças AT e 24 PT foram comparados com relação a padrões de especificidades de anticorpos contra diferentes antígenos de estreptococos, utilizando ensaios de Western blot. Não houve diferença significativa (p> 0,05) nos níveis salivares de IgA e IgM entre o grupo de crianças AT e PT ao nascimento. Em T3, os valores médios de IgA foram semelhantes entre os grupos e os níveis de IgM foram significativamente maiores em PT que AT (p < 0,05). Os ensaios Western blot identificaram resposta positiva de IgA para os estreptococos estudados na maioria das crianças, especialmente no grupo AT . Houve algumas diferenças entre os grupos com relação à frequência de crianças com resposta positiva a antígenos e intensidade da resposta IgA. Em geral, os antígenos de estreptococos orais foram mais frequentemente detectados e as bandas foram mais intensas no grupo de crianças AT quando comparados aos PT, especialmente em T3. Análise prospectiva de padrões de IgA específica para os antígenos de diferentes espécies de estreptococos revelou um aumento na complexidade da resposta de anticorpos IgA do nascimento (T0) até os 3 meses de vida (T3), tanto em PT quanto nos AT. O padrão de resposta de IgA aos antígenos dos estreptococos parece ser influenciado pela idade gestacional, o que pode refletir o grau de maturidade do sistema imune de mucosa / Secretory immunoglobulins present in mucosa surfaces represent the first line of defense of the adaptive immune system against infectious challenges. Preterm neonates humoral immunity is diminished compared to fullterm newborns. The identification of important antigens of virulence of oral species may help in the investigation of the mechanisms of antigenic stimulation and the development of the mucosal immune response. In the present study we measured saliva levels of immunoglobulin A (IgA) and M (IgM) and characterized the specificity of IgA against antigens of several streptococcal species found early in life. Salivary IgA antibody responses to bacterial species that are prototypes of pioneer (Streptococcus mitis, S. sanguinis, S. gordonii) and pathogenic (Streptococcus mutans) microorganisms of the oral cavity were studied in fullterm (FT) and preterm (PT) children in two visits: at birth (T0) and at 3 months of age (T3). Salivas from 123 infants (72 FT and 51 PT) were collected during the first 10h after birth (T0) and again at 3 months of age (T3). Salivary levels of IgA and IgM antibodies were analyzed by ELISA. A subgroup of 26 FT and 24 PT children were compared with respect to patterns of antibody specificities against different streptococci antigens using Western blot assays. No significant differences (P>0.05) in salivary levels of IgA and IgM between FT and PT babies were found at birth. At T3, mean sIgA values were similar between groups and salivary IgM levels were significantly higher in PT than FT (p<0.05). Western blot assays identified positive IgA response to streptococci in the majority of children, especially in the FT group. There were some differences between groups in relation to the frequency of children with positive response to antigens and intensity of IgA response. In general, oral streptococci antigens were more frequently detected and bands were more intense in FT than in PT, especially in T3. Prospective analysis of patterns of saliva IgA against Ags of different streptococcal species revealed an increase in complexity of the salivary IgA antibody response from the first day of birth (T0) to T3 in PT and FT. The patterns of salivary IgA response to streptococci antigens appear to be influenced by the gestational age, which might reflect the level of immunological maturity of the mucosal immune system

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Objetivo: Investigar o perfil dos aminoÃcidos salivares em crianÃas saudÃveis e com diferentes graus de desnutriÃÃo, portadoras e livres de cÃrie da primeira infÃncia (CPI), correlacionando esses achados com experiÃncia de cÃrie e nÃveis de estreptococos do grupo mutans (EGM) em saliva. MÃtodos: Cento e vinte e duas crianÃas, de 12 â 71 meses de idade, com e sem CPI foram selecionadas para participar do estudo. Termos de consentimento foram assinados e as crianÃas foram divididas nos grupos saudÃveis (GS, n = 47), levemente (GI, n = 22), e moderadamente (GII, n = 53) desnutridas. NÃveis de desnutriÃÃo foram classificados segundo os padrÃes de crescimento da OMS 2006. Amostras de saliva nÃo estimulada foram coletadas de todos os participantes e subseqÃentemente centrifugadas. Sobrenadantes foram extraÃdos, liofilizados, armazenados a â 20o C e utilizadas para anÃlise de aminoÃcidos em um analisador de aminoÃcidos Biochem 20 plus. Saliva estimulada foi tambÃm coletada e usada para detecÃÃo de EGM. Estas amostras foram cultivadas em meio de cultura MSB (ufc/mL). Os resultados das concentraÃÃes de aminoÃcidos foram expressos em ÂM/mL. O exame dentÃrio foi realizado para cÃlculo do Ãndice ceo-s. Os dados foram analisados por meio do teste do Qui-quadrado de Pearson e de um modelo LogÃstico BinÃrio. Resultados foram considerados significantes quando p-valor < 0.02. Resultados: Quarenta aminoÃcidos foram identificados, com grande variabilidade em suas concentraÃÃes. AnÃlise da presenÃa/ausÃncia de cada aminoÃcido, e presenÃa/ausÃncia de cÃrie demonstrou uma associaÃÃo entre asparagina e CPI em GII (p=0.003). RegressÃo logÃstica mostrou que o risco à experiÃncia de cÃrie aumenta com a idade (p = 0.003). A presenÃa de alanina (p = 0.014) e carnitina (p = 0.008) reduziram as chances de experiÃncia de CPI. A presenÃa de histidina aumentou significativamente o risco à cÃrie (p = 0.012). Entretanto, EGM nÃo aumentou o risco à CPI (p = 0.065) nesse modelo. ConclusÃo: A presenÃa de aminoÃcidos especÃficos na saliva de crianÃas com DEP predispÃem a um maior ou menor risco à experiÃncia de cÃrie. / Aim: The aim of the present study was to identify the free amino acid content in whole saliva of children with protein-energy malnutrition (PEM), with and without early childhood caries (ECC), correlating these findings with caries experience and mutans streptococci (MS) levels in saliva. Methods: One hundred and twenty two, 12 â 70 months-old children, with or without ECC were selected to participate in the study. Consent forms were signed and children were divided into healthy (GH, n = 47), and mildly (GI,n = 22) or moderately (GII,n = 53) malnourished groups. Malnourishment levels were classified according to WHO 2006 growth standards. Unstimulated whole saliva was collected from all participants and centrifuged. Supernatants were extracted, lyophilized, stored at â 20oC and used for amino acid analysis, on a Biochem 20 plus amino acid analyzer. Stimulated whole saliva was also collected from all subjects, and used for MS detection on MSB agar medium (cfu/mL). Amino acid concentrations were expressed in ÂM/mL. Dental examination was performed for calculation of dmfs scores. Pearson Chi-Square test and a Logistic Binary Model were used for statistical analysis. Results were considered significant when p-value < 0.02. Results: Forty amino acids were identified, with great variability in their concentrations. Analysis of presence/absence of each amino acid and presence/absence of caries demonstrated an association between asparagine and ECC in GII (p = 0.003). Logistic regression showed that caries experience increased with an increase in age (p = 0.003). The presence of alanine (p = 0.014) and carnithine (p = 0.008) reduced the chances of experiencing ECC. The presence of histidine significantly increased caries risk (p = 0.012). However, MS counts did not significantly increase the risk of experiencing ECC (p = 0.065) in this model. Conclusion: Presence of specific amino acids in saliva of children with PEM predisposes to a higher or lower risk of caries experience.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-08-31T20:27:06Z No. of bitstreams: 1 ElizabethLimaCosta.pdf: 1115114 bytes, checksum: d6818412fe12c8ac2583651c4f42aed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-31T20:27:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ElizabethLimaCosta.pdf: 1115114 bytes, checksum: d6818412fe12c8ac2583651c4f42aed3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-04 / FAPEMA / Introduction: Several risk factors are associated with the ECC, including the S. mutans, identified as responsible for the onset of the disease; maternal saliva, the main source of primary infection to the child, socioeconomic factors, dietary habits and oral hygiene shared in the family environment. Thus, this thesis is divided into two chapters: Chapter I aimed at analyzing the contamination of S. mutans in the mother mediated by the contamination of S. mutans in the child together with the ECC. Chapter II aimed at analyzing the association between the consumption of added sugar by the mother and the frequency of the child's added sugar consumption. Methods: The sample consisted of 697 preschool children between 24 and 71 months old and their mothers. The mothers answered a questionnaire on their general and oral health as well as the child and a food frequency questionnaire (FFQ) to assess the diet of the binomial and the consumption of added sugar by the mother and the child. Mothers and children were subjected to an oral clinical examination to measure the caries index (DMF/ceo), IPV, ISG, anthropometric analysis of the mother's waist circumference and microbiological examination of saliva in 400 mothers / children pairs. A theoretical model based on causal diagrams (DAGs) that allows control of confounding factors in the most appropriate manner and at the same time avoids unnecessary adjustments to mothers / children mediators has been prepared. For Article 1, two models have been suggested, adjusted and analyzed: a total effect model and a mediated effect model of the association between maternal contamination S. mutans and ECC. The Paramed test was used to quantify the proportion of maternal S. mutans contamination effects mediated by contamination by S. mutans in the child in the ECC. To Article 2, two models have been suggested to study the association between the consumption of added sugar by the mother and child: an Effect 1 model and an Effect 2 model. The multinomial regression analysis was used to test the models, based on th e DAGs. The marginal structural model was estimated by weighting by the inverse of the probability of consumption exposure in order to assess the association between consumption of added sugar by the mother and child. We estimated the prevalence ratio (PR) and confidence intervals (95% CI), in a 5% significance level. Results: In the total effect model, the presence of high colonization of S. mutans in the mother, the largest measurement of the waist circumference of the mother were associated with the ECC; Maternal IPV; child's age ≥ 4 years old and higher frequency of sugar consumption by the child. In the mediated effect model, the high maternal colonization remained linked to the ECC. Paramed test showed the proportion of mediated effect in 33% of maternal contamination of S. mutans by contamination in the child of S. mutans in the ECC. In effect model 1, the second and third tertile of the mother added sugar consumption was associated with the second tertile of added sugar consumption by the child; likewise the second and third tertile of consumption by the mother were also associated with the third tertile of the child's added sugar consumption. In effect model 2, all these variables of maternal consumption were also associated with the greatest child's consumption tertiles; yet maternal CW ≥88cm was also associated with the highest tertile of sugar consumption by the child. In marginal structural model, the consumption of added sugar by the mother was associated with added sugar consumption by the child. Conclusions: The contamination of S. mutans in the child only partially measured the association of the mother's S. mutans contamination in ECC. Other factors must be considered in the mother/child binomial, such as diet, oral hygiene practices and history of caries in the family environment. Sugar consumption by the mother and the highest maternal metabolic risk seem to explain the child's added sugar consumption in early childhood. / Introdução: Diversos fatores de risco estão associados à CPI, dentre eles os S.mutans, apontados como responsável pelo início da doença; a saliva materna, como principal fonte de infecção primária para o filho, os fatores socioeconômicos, os hábitos de dieta e de higiene bucal compartilhados no ambiente familiar. Assim sendo, esta tese foi dividida em dois capítulos: O capítulo I teve como objetivo, analisar a contaminação de S.mutans na mãe mediado pela contaminação de S.mutans no filho em associação com a CPI. O capítulo II teve como objetivo analisar a associação entre o consumo de açúcar de adição pela mãe e a frequência do consumo de açúcar de adição pelo filho. Métodos: A amostra foi composta por 697 pré-escolares de 24 a 71 meses de idade e suas mães. As mães responderam a um questionário sobre saúde geral e bucal da mãe e do filho e questionário de frequência alimentar (QFA), para avaliar a dieta do binômio e o consumo de açúcar de adição pela mãe e consumo de açúcar de adição pelo filho. Mães e filhos foram submetidos a um exame clínico bucal para aferição do índice de cárie (CPOD/ceo), IPV, ISG, análise antropométrica da circunferência da cintura da mãe e exame microbiológico da saliva em 400 pares mães/filhos. Foi elaborado um modelo teórico baseado em diagramas causais (DAGs) que permite o controle de fatores de confusão da forma mais adequada e ao mesmo tempo evita ajustes desnecessários para mediadores mães/filhos. Para o Artigo 1, dois modelos foram sugeridos, ajustados e analisados: um modelo de efeito total e outro modelo de efeito mediado da associação entre contaminação de S. mutans materna e CPI. O teste paramed foi usado para quantificação da proporção do efeito da contaminação de S. mutans materna mediada pela contaminação por S. mutans no filho na CPI. Para o artigo 2, foram sugeridos dois modelos para o estudo da associação entre o consumo de açúcar de adição pela mãe e o consumo de açúcar de adição pelo filho: um modelo de Efeito 1 e um modelo de Efeito 2. A análise de regressão multinomial foi usada para testar os modelos, baseados nos DAGs. Modelo estrutural marginal foi estimado pela ponderação pelo inverso da probabilidade do consumo da exposição, para avaliar a associação entre consumo de açúcar de adição pela mãe e consumo de açúcar de adição pelo filho. Estimou-se o razão de prevalência (RP) e os respectivos intervalos de confiança (IC 95%), a um nível de significância de 5%. Resultados: No modelo de efeito total, foram associadas à CPI, a presença de alta colonização de S. mutans na mãe, as maiores medidas da circunferência da cintura materna; IPV materno; idade da criança ≥ 4 anos e maior frequência de consumo de açúcar pelo filho. No modelo de efeito mediado, a alta colonização materna permaneceu associada à CPI. O teste paramed mostrou a proporção do efeito mediado de 33% da contaminação materna de S. mutans pela contaminação no filho de S. mutans na CPI. No modelo de efeito 1, o segundo e terceiro tercil do consumo de açúcar de adição pela mãe foram associados o segundo tercil do consumo de açúcar de adição pela filho; da mesma forma o segundo e terceiro tercil de consumo pela mãe foram também associados ao terceiro tercil do consumo de açúcar de adição pelo filho. No modelo de efeito 2, todas essas variáveis de consumo maternas também foram associadas aos maiores tercis de consumo do filho; ainda a CC materna ≥88cm também foi associada ao maior tercil de consumo de açúcar pelo filho. No modelo estrutural marginal, o consumo de açúcar de adição pela mãe foi associado ao consumo de açúcar de adição pelo filho. Conclusões: A contaminação de S. mutans no filho media apenas parcialmente a associação da contaminação de S. mutans da mãe na CPI. Outros fatores devem ser considerados no binômio mãe-filho, como hábitos alimentares, práticas de higiene bucal e a história da cárie no ambiente familiar. O consumo de açúcar pela mãe e o maior risco metabólico materno parecem explicar o consumo de açúcar de adição pelo filho na primeira infância.

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Coorientadora: Juliana Ferreira Strixino / Banca: Natalia Mayumi Inada / Banca: Ana Lia Anbinder / Resumo: A terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando eficaz na redução de patógenos bucais e diferentes fotossensibilizadores têm sido investigados. O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia da TFD sobre Streptococcus mutans usando dois fotossensibilizadores derivados da Clorina, Photoditazine (PDZ) e Fotoenticine (FTC), associados à irradiação Laser (660nm, 50 mw/cm²). Esses fotossensibilizadores também foram comparados com o Azul de Metileno (AM) que já tem seus efeitos comprovados contra S. mutans. Para realização desse trabalho, foram isoladas 11 amostras clínicas de S. mutans a partir de pacientes com lesões de cáries ativas. Essas amostras foram identificadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), seguida por confirmação em sequenciamento automático. Também foi incluída no estudo uma cepa padrão de referência (S. mutans UA159). Os efeitos da TFD foram testados sobre S. mutans em culturas planctônicas e sobre biofilmes formados em dentes bovinos. Os resultados foram avaliados pela contagem de células viáveis e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A capacidade dos fotossensibilizadores em penetrar nas células de S. mutans foi avaliada por meio da absorbância em espectrofotômetro. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey. Na identificação das amostras, verificou-se que todas apresentaram o fragmento de 517 pb específico para S. mutans e que o sequenciamento demonstrou similaridade de 87% com a cepa de referência. Em culturas planctônicas, todos os fotos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Photodynamic therapy (PDT) has been shown to be effective in reducing oral pathogens and different photosensitizers have been investigated. The objective of this study was to evaluate the efficacy of PDT on Streptococcus mutans using two photosensitizers derived from Chlorine, Photoditazine (PDZ) and Fotoenticine (FTC) associated with Laser irradiation (660 nm, 50 mw / cm²). These photosensitizers were also compared to Methylene Blue (AM) that already has its proven effects against S. mutans. To perform this work, 11 clinical samples of S. mutans were isolated from patients with active caries lesions. These samples were identified by the Polymerase Chain Reaction (PCR), for confirmation in automatic sequencing. Also included in the study was a standard standard (S. mutans UA159). The effects of PDT were tested on S. mutans in planktonic cultures and on biofilms formed in bovine teeth. Results of viable cell and Scanning Electron Microscopy (SEM) tests. The ability of the photosensitizers to penetrate the S. mutans cells was evaluated by spectrophotometer absorption. Data were analyzed by ANOVA and Tukey's test. In the identification of the samples, all the presentations of the 517 bp fragment specific for S. mutans and that the sequencing demonstrate similarity of 87% with a reference strain were found. In planktonic cultures, all photosensitizers reduced as S. mutans cells with a significant difference in relation to the untreated group. The FTC achieved a 100% reduction for both the reference strain and the clinical strains. In biofilm tests, there was a 4 log reduction for AM, 6 log for PDZ and 5 to 8 log for FTC. In the standard reference strain, FTC led to the complete elimination of S. mutans cells. In addition, it was found that FTC was the photosensitizer with the greatest capacity to de-structure the biofilm and penetrate S. mutans cells. It was concluded ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Objetivos: avaliar o papel da Candida albicans (ATCC 90028) no potencial cariogênico e acidogênico de biofilmes in vitro de Streptococcus mutans (UA159). Métodos: biofilmes de dupla-espécie (C. albicans + S. mutans) e de espécie única (S. mutans ou C. albicans) foram cultivados sobre a superfície hígida de blocos de esmalte bovino com dureza inicial conhecida na presença de meio de cultura suplementado com glicose 20 mM e sacarose 3 mM por 24, 48 e 72 horas. O meio foi substituído diariamente e seu pH foi registrado. Blocos de esmalte foram então coletados ao final de cada período experimental e contagens de células viáveis foram realizadas. A desmineralização foi avaliada através da porcentagem de alteração de microdureza superficial (% SMC) e análise de microradiografia transversal (perda mineral integrada e profundidade de lesão). Resultados: o pH do meio de cultura permaneceu constante nos biofilmes de espécie única de C. albicans causando quase nenhuma desmineralização no esmalte. Não houve diferença no potencial acidogênico dos biofilmes de espécie única de S. mutans ao longo dos períodos experimentais sendo estes valores de pH sempre menores quando comparados ao pH relacionado aos demais biofilmes (p < 0.01) A % SMC dos biofilmes de espécie única de S. mutans aumentou significativamente com o tempo. Além disso, lesões de cárie após 72 horas de crescimento de biofilme bacteriano apresentaram maior perda mineral integrada e foram mais profundas do que lesões de cárie relacionadas a biofilmes de dupla-espécie (p < 0.01). O pH do meio de cultura relacionado a biofilmes de dupla-espécie foi baixo no primeiro dia, mas aumentou no decorrer do tempo para valores acima do pH crítico para desmineralização do esmalte. Em consequência, a % SMC permaneceu a mesma depois de 48 horas de crescimento de biofilmes de dupla-espécie e foi significantemente menor do que os valores relacionados a S. mutans em espécie única (p < 0.01). Conclusões: os presentes dados sugerem que a C. albicans apresenta um baixo potencial de desmineralização de esmalte e esse micro-organismo parece reduzir tanto o potencial cariogênico quanto acidogênico de biofilmes de S. mutans pela modulação do pH extracelular durante o crescimento in vitro de biofilmes de dupla-espécie. / Aim: evaluate the role of Candida albicans (ATCC 90028) on the cariogenic and acidogenic potentials of Streptococcus mutans (UA159) in vitro biofilms. Methods: dual-species (C. albicans + S. mutans) and single-species (S. mutans or C. albicans) biofilms were grown on the surface of sound bovine enamel slabs with known baseline hardness in the presence of culture medium supplemented with 20 mM glucose and 3 mM sucrose for 24, 48 and 72 hours. The medium was replaced daily and its pH was recorded. Enamel slabs were collected at the end of each experimental period and counts of viable cells were performed. Demineralization was evaluated through percentage of surface microhardness change (% SMC) and transversal microradiography analysis (integrated mineral loss and lesion depth). Results: spent medium pH remained neutral in C. albicans single-species biofilms causing almost no enamel demineralization. No difference in acidogenic potential of S. mutans single-species biofilms was found among experimental periods and its pH was always lower than pH related to other biofilms (p < 0.01). The % SMC in S. mutans single-species biofilms significantly increased with time. In addition, caries lesions after 72 hours of S. mutans biofilm growth had higher integrated mineral loss and were deeper than caries lesions related to dual-species biofilms (p < 0.01). Spent medium pH related to dual-species biofilms was low in the first day, but increased with time to values above critical pH for enamel demineralization. As a consequence, the % SMC remained the same after 48 hours of dual-species biofilm growth and was significantly lower than S. mutans single-species related values (p < 0.01). Conclusions: the present data suggest that C. albicans has low enamel demineralization potential and may decrease both the cariogenic and acidogenic potentials of S. mutans by modulating extracellular pH during in vitro dual-species biofilm growth.

O objetivo deste estudo foi avaliar, em crianças de creches públicas e filantrópicas do município de São Paulo, a prevalência de cárie dental e os fatores de risco relacionados à presença de cárie e presença de altos níveis de estreptococos mutans (SM). Foram incluídas variáveis denominadas sociodemográficas, condições de gestação e nascimento, variáveis fisiológicas do estado nutricional, aleitamento materno e alimentação complementar, hábitos alimentares, variáveis comportamentais e odontológicas. O estudo foi desenvolvido em parceria entre a Disciplina de Odontopediatria da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo (FOUSP) e a Disciplina de Nutrologia do Departamento de Pediatria da Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP EPM). É parte integrante do Projeto Crecheficiente - Ações de Segurança e Educação Alimentar em Creches Públicas e Filantrópicas do Município de São Paulo. A população deste estudo foi constituída de 150 e 144 crianças, que participaram da avaliação odontológica e microbiológica respectivamente, entre 12 e 24 meses, de ambos os gêneros, regularmente matriculadas em cinco creches, sendo duas públicas e três filantrópicas. A coleta dos dados foi obtida por meio de entrevistas com as mães ou responsáveis, antropometria, coleta de sangue para dosagem de hemoglobina, avaliação odontológica (índices ceo-d e ceo-d modificado) e coleta salivar das mães e das crianças para teste de estreptococos mutans. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando análise de regressão logística univariada, considerando o nível de significância a 5%. Foram utilizadas as mesmas variáveis de risco e seus respectivos pontos de corte nas análises univariadas da avaliação odontológica e microbiológica. Das crianças examinadas 7,3% apresentaram experiência de cárie, sendo encontrada uma média do índice ceo-d igual a 0,09 e ceo-d mod de 3,37, sem diferença entre gêneros e tipo de creche. Em relação à presença de cárie, a análise de regressão univariada indicou significância dos seguintes fatores: o tempo de matrícula na creche, aleitamento materno exclusivo menor de 60 dias, idade do primeiro contato com açúcar, e níveis altos de SM que favoreceram a ocorrência da doença, o número maior de irmãos e a presença de biofilme visível foram significantes e associados com proteção. Dentre os alimentos citados encontrados na dieta dos lactentes, observa-se que o consumo de mel e o consumo de refrigerantes favoreceram a ocorrência da cárie dentária. Em relação à presença de SM, 72,9% das crianças tinham este microrganismo presente na cavidade bucal sendo que 9,5% apresentavam altos níveis de SM. As variáveis que influenciaram significantemente os altos níveis de SM foram: idade da mãe, idade de introdução do açúcar e presença de cárie dentária na criança. Em relação aos hábitos alimentares apenas o consumo de petit suisse favoreceu a quantidade elevada de SM. A contagem dos níveis salivares de SM da mãe não foi significante. / The aim of this study was to assess in children of public and philanthropic day care centers of São Paulo, the prevalence of dental carie and the risk factors associated to dental carie and high levels of mutans streptococci (MS). Were included variables denominated socio-demographic, pregnancy and birth conditions, physiological variables of nutrition status, breast feeding and complementary diet, dietary habits, behavior and dental variables. This study was the result of a partnership between the Pediatrics Department of the University of São Paulo and the Nutrology Department of Federal University of São Paulo, UNIFESP EPM. It is part of a larger study called Crecheficiente Project Security and Dietary Education actions of public and philanthropic day care centers of São Paulo city. The population of this study were consisted of 150 and 144 children that participated of the dental and microbiological evaluation respectively, between 12 and 24 years old, both gender, regularly registered in five day care centers, two publics and three philanthropic. The data collection were done by interviews with mothers or childrens responsible, anthropometry, bloody collection for hemoglobin, dental test (Knutson, dmf and modified dmf) and salivary collection from mothers and children for estreptococos mutans test analysis. Data analysis involved univariate logistic regression, The level of significance was set at 5%. The same variables presented at univariate analysis of the dental test and break point, were described into microbiological test. 7,3% of the children had dental carie. A mean of dmft index were 0,09 and modified dmft 3,37. No difference was found between gender and type of day care center. The univariate analyses indicated significance for caries experience: time of day care center admission, exclusive breast feeding least than 60 days, age of the first sugar contact, high levels of MS benefit caries, the major number of brothers and sisters, presence of dental plaque were associated to protection. The foods found in the dietary habits of the infants, honey and soft drinks exposed the occurrence of dental caries. For the streptococci mutans experience, 72,9% of the children had the microorganism present and 9,5% were high levels of MS. The variables that influence significantly this group were: mothers age, age of the first sugar contact and childrens carie experience. In the dietary habits, only the pettit suisses consume exposed to high levels of SM. The mothers mutans streptococci levels were not significant.