Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T13:38:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 271254.pdf: 980179 bytes, checksum: b39c20bd2905add945e031ef2820062f (MD5) / O efeito dos polissacarídeos sulfatados (PS), extraídos da macroalga Gracilaria birdiae, foi testado sobre a imunocompetência do camarão Litopenaeus vannamei através da alimentação dos animais com ração contendo 0,3% de PS, seguido por desafio experimental com o vírus da síndrome da mancha branca (WSSV) (0,35 DL50). A hemolinfa foi coletada nos dias 0, 3 e 14 pós-infecção com WSSV e utilizada para avaliar alguns parâmetros hemato-imunológicos. Os resultados sugerem uma aparente estimulação da atividade da fenoloxidase e da capacidade aglutinante no dia 14 pós-infecção. O número total de hemócitos (CTH) diminuiu (40%) nos camarões alimentados com a dieta controle (sem PS), mas manteve-se estável nos animais tratados com PS. A porcentagem de hemócitos granulares diminuiu (30%) em todos os grupos desafiados, independentemente da presença de PS. Esses resultados sugerem uma estimulação na produção de hemócitos hialinos associada ao tratamento com PS, uma vez que a CTH não foi alterada. Além disso, verificou-se um aumento na atividade da a2-macroglobulina e na produção de ânion superóxido em todos os camarões infectados (dias 3 e 14) independente do tratamento com PS. Embora a dieta contendo PS não tenha resultado em imunoestimulação importante nos camarões, os animais desafiados com WSSV apresentaram uma diminuição (11%) na mortalidade quando tratados com PS, em comparação aos da dieta controle. Curiosamente, o vírus não foi detectado nos animais desafiados com WSSV a partir do dia 3. Acredita-se que esse achado esteja relacionado ao fenômeno de interferência viral, já que os animais apresentaram-se infectados de forma latente pelo vírus da necrose hipodérmica e hematopoiética (IHHNV). Estudos futuros devem ser realizados para esclarecer tal fenômeno, bem como a atuação dos PS de G. birdiae na sobrevivência dos animais.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T16:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 273860.pdf: 2877096 bytes, checksum: 3f6283aa90114783b89e2a4000ab45e8 (MD5) / O vírus da Síndrome da Mancha Branca (WSSV) é uma doença que afeta várias espécies de crustáceos, causando grandes mortalidades e perdas econômicas em regiões produtoras de camarão. Este trabalho teve como objetivo padronizar a metodologia de PCR em Tempo Real para a detecção do WSSV, genotipar isolados geográficos do vírus e isolar genes diferencialmente expressos em camarões de cultivo infectados com WSSV. Amostras positivas e negativas por PCR nested foram analisadas através de PCR em Tempo Real. A carga viral das amostras foi determinada e algumas amostras negativas por PCR nested foram positivas por PCR em Tempo Real, com baixa carga viral. Vírus isolados de camarões coletados em Santa Catarina e na Bahia foram comparados quanto ao padrão de três minissatélites, à presença de uma grande deleção e uma transposase. Todas as amostras de Santa Catarina tiveram o mesmo padrão para os minissatélites analisados.As amostras da Bahia apresentaram um padrão diferente para os loci analisados, indicando que existem dois genótipos de WSSV diferentes no Brasil. Os isolados brasileiros tem uma deleção de 10,780 bp na ORF 23/24 e não possuem a seqüência da transposase. O padrão de repetições para os três minissatélites analisados foi diferente entre os isolados brasileiros e de outros países da América. Entretanto, ao analisar apenas a ORF 94, Santa Catarina, México, Nicarágua, Honduras e Panamá têm mais de nove repetições, enquanto a Bahia e os EUA têm menos de nove repetições. Esta similaridade pode estar relacionada a uma similaridade em virulência. Aparentemente, os WSSVs encontrados na Bahia e em Santa Catarina originaram-se de diferentes fontes de contaminação ou o vírus sofreu mutações ao longo do tempo. mRNA foi extraído das brânquias de camarões infectados e não-infectados com o WSSV, reversamente transcrito e uma hibridização subtrativa (SSH) foi realizada. A Biblioteca 1 (genes induzidos) tem 300 clones dos quais foram formados 36 contigs e 36 singlets. Destas seqüências, 69 (88,4%) são similares a seqüências no GeneBank. Na Biblioteca 2 (genes reprimidos), de 403 clones, foram formados 23 contigs e 36 singlets e 40 (75,5%) são similares a seqüências conhecidas. Estes genes foram organizados em grupos, de acordo com a sua função. Dentre os genes induzidos há genes envolvidos na síntese de ATP, citoesqueleto, adesão celular, metabolismo e transporte de moléculas. Dentre os genes reprimidos, há genes envolvidos na defesa contra bactérias, transdução de sinal e biossíntese de ácidos nucléicos. A infecção pelo WSSV parece alterar várias rotas metabólicas diferentes. / White Spot Syndrome Virus (WSSV) is a disease that affects several species of crustaceans, causing high mortality rates, which has been causing great economical losses in shrimp farming regions. The aims of this study were to standardize the Real Time PCR methodology for WSSV detection, to genotype geographical isolates of the virus and to isolate differentially expressed genes in farmed shrimps infected with WSSV. Samples positives and negatives by nested PCR were analyzed by Real Time PCR. The viral load of the samples was determined and some samples negative by nested PCR were positive by Real Time PCR, with low viral load. The pattern of three minisatellite regions, the presence of a deletion and a transposase were compared in virus isolated from shrimp collected in Santa Catarina and Bahia. All Santa Catarina samples had the same pattern for the minisatellites analyzed. Bahia samples showed a different pattern for the loci, indicating that there are two different ORF 23/24 and do not have a transposase sequence. The repeat number pattern for the three minisatellite analyzed was different between the Brazilian isolates and isolates from America#s countries. However, when analyzing only ORF 94, South Brazil, Mexico, Nicaragua, Honduras and Panama have all more than nine repeats, while Northeast Brazil and USA samples have less than nine repeats. This similarity of repeats could be related to a similarity in virulence. Our results show that WSSV found in Bahia and Santa Catarina States have originated from different sources of contamination or the virus have undergone mutations during time. mRNA was extracted from gills of shrimps infected and non-infected with WSSV, reverse transcribed and a suppression subtractive hybridization (SSH) was performed. Library 1 (induced genes) has 300 clones, which formed 36 contigs and 36 singlets. Of these sequences, 69 (88,4%) are similar to sequences in GeneBank. Library 2 (repressed genes), has 403 clones, which formed 23 contigs and 36 singlets, and 40 sequences (75,5%) are similar to known sequences. These genes were organized in groups, according to their functions. Among the induced genes there are genes involved in ATP synthesis, cytoskeleton, cell adhesion, metabolism and molecule transport. Among the repressed genes, there are genes involved in antibacterial defence, signal transduction and nucleic acids biosynthesis. WSSV infection seems to alter several metabolic routes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T00:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 279589.pdf: 892949 bytes, checksum: cbd88e9c44bb9ea284c521be963e43dc (MD5) / Este estudo teve como objetivo principal selecionar individualmente por Nested-PCR reprodutores de L. vannamei livres de WSSV e de IHHNV e a partir destes produzir pós-larvas livres destes patógenos virais por meio da prevenção da sua transmissão vertical. A partir de 2.650 camarões, foram selecionados fenotipicamente 1.600, destes 800 machos e 800 fêmeas. Os camarões foram marcados individualmente com anel numerado (487 fêmeas e 231 machos). As análises por Nested-PCR mostraram que 307 fêmeas (63%) e 127 machos (55%) estavam infectados com IHHNV. Os animais livres de IHHNV foram analisados para WSSV, os animais livres dos dois vírus, foram destinados a reprodução. As pós-larvas produzidas foram estocadas em 9 tanques berçário,para análise. Das 45 replicas analisadas apenas 2 estavam positivas para IHHNV e nenhuma positiva para WSSV, e os animais foram encaminhados posteriormente para fazendas. Ainda foi realizada uma análise comparativa em viveiros de engorda entre pós-larvas livres, produzidas localmente e pós-larvas do Nordeste provenientes da região de Canguaretama (RN) Os juvenis analisados, de pós-larvas locais, em fazenda apresentaram 1,25% de WSSV e IHHNV em 80 animais examinados. Por outro lado, as análises de juvenis do Nordeste revelaram que 10% dos examinados estavam infectados com WSSV e IHHNV. Além de juvenis de L. vannamei, foram examinados caranguejos (Chasmagnathus granulata), aplísias (Aplysia brasiliana) e siris (Callinectes sapidus) sendo 50% das aplísias e 67% dos siris infectados por WSSV. A comparação de sobrevivências em 3 fazendas mostrou sobrevivência média de 55% para pós-larvas locais contra 23,4% e para pós-larvas do Nordeste.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T11:58:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 281559.pdf: 724745 bytes, checksum: 0263af8e3fa1aa4b1340292bd1b2db90 (MD5) / A proteção antiviral específica contra o vírus da síndrome da mancha branca (WSSV) induzida via RNA de interferência (RNAi) e sua influência na expressão de alguns genes imunológicos foram avaliados em Litopenaeus vannamei. Os animais foram injetados com dsRNA de sequência específica (vp28 do envelope viral), e posteriormente desafiados com o WSSV. Camarões tratados com dsRNA vp28 tiveram a infecção viral limitada, uma alta taxa de sobrevivência (73%) e ausência do vírus em 80% dos sobreviventes, confirmando a ativação do mecanismo antiviral específico via RNAi. Animais desafiados e não tratados com dsRNA vp28 tiveram uma queda significativa no hemograma (85%) e depleção gênica da argonauta, caspase-3, fator antilipopolissacarídeo (ALF), pró-fenoloxidase (proPO) e transglutaminase (TGase). Uma superexpressão gênica da proteína que reconhece LPS e ?-1,3-glicanas (LGBP) e do inibidor de proteases ?2-macroglobulina (?2M) foi verificada nesses animais, indicando o envolvimento destas proteínas na fase aguda da infecção por WSSV. O tratamento com dsRNA vp28 limitou a infecção e restabeleceu as condições imunológicas gerais dos animais através do aumento do hemograma e da modulação positiva dos genes argonauta, ALF, proPO e TGase, sugerindo a participação destas proteínas na defesa do organismo contra o WSSV. Os resultados deste estudo apontam para uma potencial utilização do dsRNA vp28 como agente terapêutico anti-WSSV e confirmam que a técnica de RNAi é uma abordagem preventiva promissora e efetiva para o controle das viroses de crustáceos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aquicultura. / Made available in DSpace on 2012-10-24T00:18:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 262533.pdf: 987968 bytes, checksum: 513ec97a854807d0eadaec8588845db4 (MD5)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:09:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 284852.pdf: 1557637 bytes, checksum: 99bac419f15001cc1be70781c7194b1a (MD5) / A enfermidade da mancha branca afetou a maioria das fazendas de Camarões de Santa Catarina a partir de 2004. Pelas informações de estudo epidemiológico sugere-se que o ingresso do vírus ocorreu através de náuplius e pós larvas importados de outros estados. A dispersão da enfermidade entre fazendas da mesma região ocorreu através de efluentes contaminados pelo WSSV. Dez das 107 fazendas existentes no estado não sofreram mortalidades pelo WSSV, possivelmente pelo seu isolamento e distância das fazendas afetadas. Valores elevados de amônia e o baixo potencial redox do solo dos viveiros foram o provável gatilho para as primeiras manifestações da enfermidade. A presença do WSSV em camarões, caranguejos e siris silvestres em cinco lagoas do Complexo Lagunar Sul de Santa Catarina foi observada em 112 das 309 (36,24%) amostras analisadas através de nested PCR e em sete de 174 (4,02%) camarões analisados por histopatologia Observou-se um aumento na presença de WSSV nos organismos silvestres ao longo de quatro anos, apesar da redução da área de fazendas afetadas pelo WSSV. No monitoramento de oito fazendas de camarão foi verificada a ocorrência de mortalidade e à presença do WSSV por PCR e histopatologia em cinco delas com focos nos ciclos anteriores. Sugere-se a aplicação de medidas de biosseguridade para evitar o ingresso do WSSV nos cultivos e diminuir os riscos de novos surtos da enfermidade.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T23:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297043.pdf: 1842359 bytes, checksum: 1d48884fc3dac8252b93652ea00a8693 (MD5) / Litopenaeus vannamei e a especie de camarao marinho mais cultivado no mundo e no Brasil. Essa especie e considerada bastante resistente a variacoes ambientais adversas. Entretanto, parece ser bastante susceptivel a patogenos de origem viral. Com o objetivo de estudar os efeitos de estressores ambientais e sua susceptibilidade a patogenos virais, camaroes L. vannamei foram submetidos a condicao hiposmotica do meio e desafiados com o virus da mancha branca. Um total de quarenta e seis genes foi identificado pela tecnica de hibridizacao subtrativa supressiva como diferencialmente transcritos em branquias de L. vannamei submetidos ao estresse osmotico. Os transcritos identificados codificam proteinas envolvidas com processos de defesa, sinalizacao celular, transferencia de eletrons, proliferacao e diferenciacao celular, apoptose, metabolismo intermediario, proteinas de citoesqueleto e atividade metallopeptidase. A partir do perfil transcricional obtido, alguns genes foram avaliados por PCR quantitativo em camaroes submetidos ao estresse osmotico e ao patogeno viral. Foi observada uma inducao significativa dos genes da proteina nuclear 1 induzida por TGF-beta, proteina QM, ciclofilina, lectina-C, malato desidrogenase e duas ATPs sintase mitocondriais nos camaroes submetidos ao estresse osmotico. Um segundo estressor ambiental avaliado no camarao foi a hepatotoxina microcistina (MC). Essa toxina e sintetizada por cianobacterias e liberada no ambiente. Frequentemente e detectada em ambientes eutrofizados e em areas de cultivo de camarao. A conjugacao com glutationa reduzida (GSH) pela glutationa S-transferase (GST) e enzimas de defesa antioxidante, como a catalase (CAT), sao importantes mecanismos de defesa contra a toxicidade bioquimica de MCs. Foi investigada a atividade das enzimas CAT e GST e os niveis de transcricao genica de CAT e oito isoformas GST no hepatopancreas do camarao apos 48h de uma injecao intramuscular com 100 Êg kg-1 de extrato toxico de Microcystis aeruginosa. MC foi capaz de induzir significativamente tres isoformas de GST (Ö, m e MAPEG) em 12, 2,8 e 1,8 vezes, respectivamente, e aumentou a atividade enzimatica total da GST e CAT. A partir dos resultados obtidos, podemos sugerir que o estresse osmotico em L. vannamei parece alterar principalmente genes envolvidos em mecanismos de defesa e de energia celular, e a MC altera a transcricao e expressao de GSTs e CAT que parecem estar envolvidas na biotransformacao e eliminacao da toxina e em processos de protecao celular. Esses estudos reforcam a importancia de caracterizar ainda mais o perfil transcricional e as regulacoes postranscricionais em L. vannamei exposto a estressores ambientais e a patogenos infecciosos para uma melhor compreensao dos principais mecanismos envolvidos nas defesas do camarao.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T00:28:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 299617.pdf: 1058149 bytes, checksum: fe577bb1346a58bf48006955f22d0b1f (MD5) / O vírus da síndrome da mancha branca (White Spot Syndrome Virus - WSSV) é o agente etiológico da doença viral que afeta a maior parte dos cultivos de camarão marinho no mundo. A ocorrência do WSSV em Santa Catarina, no início de 2005, revelou a fragilidade das medidas sanitárias aplicadas nas fazendas de criação de camarões marinhos e do sistema de vigilância sanitária animal. A saúde dos camarões e, conseqüentemente, a produtividade de uma fazenda de cultivo são fortemente influenciadas pelas condições físicas, químicas e biológicas que prevalecem ao longo do processo de cultivo. Compostos tóxicos, como pesticidas, alterações na salinidade temperatura da água de cultivo, são alguns dos fatores que podem promover estresse e induzir alterações bioquímicas, moleculares e fisiológicas nesses animais, podendo, ainda, favorecer a incidência de enfermidades virais. A permetrina é o inseticida piretróide mais utilizado em práticas de cultura de arroz em muitos países. Concentrações sub-letais de permetrina podem causar impacto nos cultivos, afetando sua produtividade. Neste estudo, camarões juvenis, Litopenaeus vannamei foram expostos permetrina (0,01, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 e 0,8 µg.L-1) por 96h e em um segundo experimento (0,8 µg.L-1) por 6, 12, 24, 48, 72 e 96h. Ensaios enzimáticos envolvendo a determinação da atividade da superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa S-Transferase (GST) e acetilcolinesterase (AChE), foram realizados em brânquias e hepatopâncreas de camarão exposto a permetrina. Níveis de transcrição dos genes que codificam estes biomarcadores enzimáticos foram investigados por PCR em tempo real (qPCR) em ambos os tecidos. Num segundo experimento, os camarões foram expostos a 0,8 µg.L-1 de permetrina durante 7 dias antes de serem inoculados com o WSSV. O perfil de expressão de proteínas de estresse e de defesa, tais como ferritina, ß-actina, proteína quinase C., ubiquitina, HSP90 Hsp60, Hsp70, caspase-3 e proteína QM, foi avaliado no tecido branquial destes animais, através de qPCR e por Western blot. Mudanças nos níveis de expressão sugerem que a toxicidade de permetrina promove alterações na expressão de genes-alvo no camarão L. vannamei, modulando a transcrição e os níveis de proteínas, bem como a atividade enzimática de biomarcadores de estresse oxidativo. Além disso, a infecção e a carga viral poderiam ser associadas a um diferencial de transcrição de alguns dos genes que codificam essas proteínas. O padrão de respostas provocadas após a exposição à permetrina, através da análise mútua de respostas transcricionais, traducionais e enzimáticas relacionadas a estes genes, apóiam o desenvolvimento de um sistema multi-biomarcador que poderia ser usado como ferramenta para o monitoramento de ambientes aquáticos e, consequentemente, de saúde dos camarões de cultivo. Outra etapa deste trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do estresse térmico sobre a taxa de replicação do WSSV em camarões marinhos, mantidos em água quente (29±0,5°C), em comparação com camarões mantidos em água fria (18±0,5°C), além disso, pós-larvas e crustáceos selvagens capturados foram selecionados quanto à presença ou ausência do WSSV, após serem mantidos por 48h em estresse térmico. No caso de camarões silvestres, previamente negativos para o vírus, foram obtidos resultados positivos para o WSSV após estresse térmico de 48h. Os resultados apóiam a aplicação de um protocolo de estresse térmico como estratégia de seleção de reprodutores e para monitoramento dos ambientes de cultivo.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura. / Made available in DSpace on 2012-10-26T01:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 300653.pdf: 1263473 bytes, checksum: 427fb2b29d891407cc49bd3d130710f8 (MD5) / A carcinicultura tem crescido muito nos últimos anos devido à grande demanda do mercado consumidor. No entanto, o surgimento de enfermidades representa uma ameaça concreta para a manutenção dos níveis de produção do setor. Entre as enfermidades virais, podemos citar aquela causada pelo vírus da síndrome da mancha branca como uma das principais responsáveis por afetar o cultivo de camarão marinho em nível mundial. Este trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil diferencial de proteínas expressas em brânquias do camarão branco, Litopenaeus vannamei, infectado com o vírus da síndrome da mancha branca (White spot syndrome vírus, WSSV). Espécimes de L. vannamei sobreviventes foram coletados em cultivos na região norte e sul do estado de Santa Catarina, de 2008 a 2009, entre Maio e Setembro, período no qual são registradas temperaturas mais baixas na região. A segunda parte do estudo foi realizada com camarões L. vannamei livres de patógeno específico (specific pathogen free, SPF), os quais foram divididos em dois grupos, sendo um deles inoculado (inoculação intramuscular) com o WSSV. Os camarões (grupo inoculado e grupo controle) foram mantidos em laboratório e monitorados continuamente por um período de 72 horas, após a inoculação. Foi realizada a coleta de brânquias e pleópodes. A confirmação da presença do WSSV nos camarões coletados no campo e naqueles inoculados em laboratório foi realizada através de PCR nested. Posteriormente, a análise proteômica foi realizada através de eletroforese bidimensional (2-DE), seguida de coloração dos géis por nitrato de prata e/ou CBB (G-250). O perfil de proteínas, revelado com base na análise densitométrica dos géis, foi, então, comparado entre os camarões positivos para o WSSV e aqueles sem a presença do vírus. Dentre os spots (proteínas) presentes nos perfis eletroforéticos determinados para cada um dos grupos, um total de 56 foi associado à expressão diferencial entre os camarões infectados e camarões não infectados pelo WSSV. Oito spots foram observados nos animais coletados no campo, enquanto 48 deles foram observados nos animais inoculados em laboratório. A identificação das proteínas expressas diferencialmente foi realizada através de espectrometria de massa MALDI/TOF. As proteínas identificadas podem ser agrupadas de acordo com as suas funções celulares, revelando proteínas envolvidas nas respostas de defesa do hospedeiro, no metabolismo energético, na resposta ao estresse e na apoptose celular. Estas proteínas podem ser consideradas como biomarcadores moleculares potenciais, cuja identificação pode contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos de defesa, susceptibilidade e tolerância ao WSSV, bem como, para o delineamento de novas estratégias para minimizar o impacto e combater a enfermidade.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aquicultura. / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 249948.pdf: 1403222 bytes, checksum: a41cafd7f7c023baa5871f24bb8d1a16 (MD5) / A carcinicultura é o segmento da aqüicultura que mais cresce no mundo. Porém, o maior problema enfrentado pela indústria é a ocorrência de enfermidades que assolam os cultivos. Em Santa Catarina, a produção de camarões cultivados era crescente até os últimos anos, quando o Estado passou a ser afetado por perdas drásticas na produção causadas pelo vírus da Síndrome da Mancha Branca (White Spot Syndrome Virus - WSSV). Assim sendo, foi estabelecido um conjunto de medidas de controle da enfermidade envolvendo pesquisas em diferentes áreas. O presente estudo foi desenvolvido dentro desta perspectiva, visando estimar a prevalência do vírus em exemplares da espécie endêmica de caranguejo (Chasmagnathus granulata) do ambiente natural e do viveiro de cultivo de uma fazenda, onde foram investigados também camarões cultivados (Litopenaeus vannamei). Paralelamente foi realizada a padronização do diagnóstico do WSSV através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) de dois passos (nested) utilizando-se os iniciadores recomendados pela OIE e anteriormente descritos na literatura. Foi estimada uma prevalência no mínimo de 5% e no máximo de 23% para os caranguejos coletados no ambiente. Na fazenda, no Tempo1 de coleta, os caranguejos apresentaram prevalência em torno de 97% e os camarões em torno de 90%. No Tempo2 não foi detectada a presença do WSSV nos caranguejos e nos camarões foi detectada uma prevalência do vírus em torno de 27%. Neste estudo, a utilização da PCR como ferramenta de diagnóstico e detecção de estágios virais latentes mostrou-se uma arma eficiente no monitoramento desta enfermidade presente nos cultivos.