Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-13T18:57:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1936800 bytes, checksum: aea26c71058afe51e5b887cc8d97afe5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T18:57:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1936800 bytes, checksum: aea26c71058afe51e5b887cc8d97afe5 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O objetivo deste trabalho foi realizar a análise descritiva da cinemática e atividade eletromiográfica da coluna vertebral de equinos durante a marcha. A amostra foi composta por 5 equinos adultos, Mangalarga Marchador, livres de claudicação ou dor lombar. Para a análise tridimensional foram utilizados marcadores (retrorreflexivo, 2,6 cm de diâmetro), fixados na pele dos animais com fita adesiva dupla face hipoalergênica, nas apófises dos processos espinhosos das vértebras torácicas (T8, T12, T15, T18), lombares (L3 e L5), da 1a (S1) vértebra sacral e 1a (Cd1) coccígea, foram utilizadas 18 câmeras (PRIME 17w, 250Hz – Optitrack System®) posicionadas ao redor do animal. O volume de aquisição foi de 16,0×4,8×3,0 metros. Foi avaliada a atividade eletromiográfica nos músculos Longuíssimo Dorsal, Oblíquo Abdominal Externo, Reto Abdominal e Glúteo Médio a partir de sensores (Delsys®) de superfície fixados sobre os mesmo. Os animais foram conduzidos na marcha ao cabresto, de forma rotineira ao exame de claudicação, pelo volume de aquisição. Cada animal realizou cinco passagens pelo volume, com três passadas completas de cada passagem utilizadas para análise. O ciclo da passada foi determinado por dois contatos consecutivos do membro torácico direto ao solo. Os ângulos estudados neste trabalho foram formados pelos marcadores T8-T12-T15 (Torácico Cranial), T12-T15-T18 (Torácico Caudal), T12- T18-L5 (Toracolombar 1) ,T15-T18-L3 (Toracolombar 2), T18-L3-L5 (Lombar) e L3- S1-Cd1 (Lombossacro), calculados nos planos sagital e transverso. A média e o desvio padrão da variação dos ângulos estudados foi descrita para cada animal em função do ciclo médio de uma passada (100%), e relacionada as fases de apoio e suspensão de cada membro durante este ciclo. Os animais não apresentaram grande mobilidade da coluna vertebral durante a marcha em nenhum dos planos estudados. A lateroflexão ocorreu na região torácica durante o terço médio do apoio diagonal, ipsilateral ao membro torácico apoiado; Na região toracolombar ocorreu no terço médio da fase de apoio diagonal, ipsilateral ao membro pélvico apoiado. No plano sagital o ângulo Torácico Cranial apresentou pico de extensão no terço médio dos apoio diagonais e o de flexão durante o momento de suspensão. No ângulo Torácico Caudal o pico de extensão ocorreu no terço inicial dos apoios diagonais e o de flexão ao final dos mesmos. A coluna torácica foi mantida em postura de flexão durante as trocas de apoio diagonais. Na região toracolombar a máxima extensão ocorreu durante a metade de cada apoio diagonal, com a extensão completa ocorrendo durante os mesmos, e a máxima flexão ocorreu ao final dos apoios diagonais e durante suas trocas, incluindo os apoios tripedais. A articulação lombossacra apresentou predomínio do movimento de extensão. A atividade eletromiográfica do Longuíssimo Dorsal foi ipsilateral ao membro pélvico apoiado, na metade dos apoios diagonais. No Oblíquo Abdominal Externo a atividade foi ipsilateral ao membro pélvico apoiado, no início dos apoios diagonais. O Reto Abdominal apresentou atividade bilateral, no inicio dos apoios diagonais. O Glúteo Médio apresentou atividade ipsilateral ao membro pélvico, do final da fase de suspensão até metade do apoio do mesmo. / The aim of this study was to perform a descriptive analysis of kinematics and electromyographic activity of the spinal column of horses during the gait marcha. Five healthy Mangalarga Marchador horses (without lameness and back pain) were analyzed. For the acquisition of three-dimensional coordinates of the markers (retrorreflexive, 2.6 cm diameter), fixed on the skin with double-sided hypoallergenic tape, over the apophyses of the spinous processes of the thoracic vertebrae (T8, T12, T15, T18), lumbar (L3 and L5), 1st (S1) sacral vertebra and 1st (Cd1) coccygeal, were used eighteen OptiTrack Prime 17W cameras (250Hz) were positioned around the animals and an acquisition volume of 16×4.8×3 meters was used. Electromyographic activity was assessed in the longissimus dorsi, Oblique External Abdominal, rectus abdominis and gluteus medius from fixed surface sensors on the same. The animals were conducted from the acquisition volume at gait “marcha”, routinely the examination of lameness. Each animal held five passages by volume, with three complete steps of each passage used for analysis. The cycle of the step was determined by two consecutive contacts right forelimb to the ground. Angles studied in this work were formed by markers T8-T12-T15 (Thoracic Cranial), T12-T15-T18 (thoracic flow), T12-T18-L5 (thoracolumbar 1), T15-T18-L3 (thoracolumbar 2), T18 -L3-L5 (lumbar) and L3-S1-Cd1 (lumbosacral), calculated in the sagittal and transverse planes. The mean and standard deviation of the variation of angles studied described for each animal according to the one step cycle (100%) and the related phase support and each suspension member during this cycle. The animals showed no great mobility of the spine during gait in any of the studied plans. The lateral flexion occurred in the thoracic region during the middle third of the diagonal support, on the ipsilateral forelimb supported; In the thoracolumbar region occurred in the middle third of the diagonal support phase, on the ipsilateral hindlimb supported. In the sagittal plane the Thoracic Cranial angle presented extension peak in the middle third of the diagonal support and bending during the time of suspension. The Cranial Thoracic angle extension peak occurred in the first third of the diagonal support and bending the end of the same. The thoracic spine was kept bending posture during the exchange of diagonal support. In the region thoracolumbar maximum extension occurred during half of each diagonal support, as occurring during the full extension thereof, and the maximum bending occurred at the end of the diagonal support and during their exchanges, including tripedal support. The lumbosacral joint showed a predominance of the extension movement. The electromyographic activity of the longissimus dorsi was ipsilateral to the pelvic limb resting in the middle of the diagonal support. The Oblique External Abdominal activity was ipsilateral to the pelvic limb supported at the beginning of the diagonal support. The rectus abdominis showed bilateral activity at the beginning of the diagonal support. The gluteus medius activity showed ipsilateral to the pelvic limb, the end of the suspension phase to half the support of the same.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-03T17:06:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520179 bytes, checksum: 82f7ab11782c0fc92b88e2d7d0df243b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-03T17:06:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520179 bytes, checksum: 82f7ab11782c0fc92b88e2d7d0df243b (MD5) Previous issue date: 2016-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve como objetivo a avaliação comparativa dos crioprotetores glicerol, etilenoglicol e dimetilformamida, além da adição de antocianina ao meio base de congelamento, como tentativa de minimizar os danos celulares oriundos do processo de criopreservação. Foram utilizados seis garanhões da raça Mangalarga Marchador, maturos sexualmente, hígidos e aprovados para reprodução por meio de exame andrológico. As coletas de sêmen foram realizadas com intervalos de dois dias pelo método da vagina artificial com auxílio de uma fêmea em estro natural ou induzido ou manequim, totalizando cinco ejaculados por garanhão. A primeira etapa do estudo teve por finalidade determinar a melhor concentração destes crioprotetores e aditivo para que fosse usada na etapa seguinte. Para este fim foram realizadas análises de motilidade espermática progressiva total e vigor espermático. Verificou-se que as concentrações de 4, 5 e 6 % de etilenoglicol e dimetilformamida utilizadas isoladamente nos diluentes de criopreservação não tiveram diferença (P>0,05) sobre os parâmetros de motilidade espermática progressiva total e vigor espermático. Os mesmos crioprotetores utilizados em associação podem ser feitos nas proporções 1:4 e 2:3 % (etilenoglicol : dimetilformamida) sem proporcionar diferenças nos parâmetros físicos do sêmen espermatozoides. Na segunda etapa, as amostras de sêmen criopreservadasforam submetidas às análises físicas convencionais (motilidade espermática progressiva total e vigor espermático), teste de termo- resistência e a análise do grau de integridade das células espermáticas utilizando sondas fluorescentes e analisados por meio da citometria de fluxo. Os tratamentos experimentais foram assim constituídos: Controle Botucrio (B); Etilenoglicol 4% (E); Dimetilformamida 5% (D); Etilenoglicol + Dimetilformamida (ED) ou associados com antocianina (BA, EA, DA e EDA) na verificou-se os piores valores médios em todos os testes, enquanto nos tratamentos D e DA se mostraram menos agressivos às membranas plasmática e acrossomal. Os valores médios de motilidade espermática progressiva total e vigor espermático foram semelhantes em todos os tratamentos, exceto nos tratamentos E e EA, que foram inferiores. No entanto, os tratamentos empregando o diluente a base de dimetilformamida caíram aproximadamente 50 % nos valores de motilidade espermática nos primeiros 30 minutos do teste de termorresistência quando comparados ao tratamento controle (B) ou acrescido de antioxidante (BA). Resultado condizente com os valores percentuais de células com o potencial de membrana mitocondrial íntegro quantificados por meio de citometria de fluxo. A antocianina parece ter efeito neutralizador de radicais livres produzidos por células inviáveis, podendo ser utilizada como antioxidante não penetrante na criopreservação do sêmen de equinos da raça Mangalarga Marchador. / The present study aimed at comparative assessment of glycerol, ethyleneglycol and dimethylformamide as cryoprotectants, and the addition of an anthocyanin in the extander base of freezing, as an attempt to minimize cell damage arising from the cryopreservation process. Six stallions MangalargaMarchador breed, sexually mature, healthy and approved for breeding by breeding soundness evaluationwere used. Semen was collected in intervals of two days by artificial vagina method with the aid of a female in natural or induced estrus or manikin, totalizing five ejaculates per stallion.Thefirst stage of the study aimed to determine the best concentration of these cryoprotectants and additive to be used onthe following stage. For this purpose were conducted analysis of spermaticprogressive motilityand spermatic vigor. As results the concentrations of 4, 5 and 6% ethyleneglycol and dimethylformamide used alone had no differences ( P>0.05 ) on the spermatic progressive motilityand spermatic vigor. The same cryoprotectants can be used in association in the proportions 1:4and 2:3% (ethyleneglycol: dimethylformamide) without differences in the physical parameters of criopreservaited semen. The anthocyanin may be used in concentrations of 0.5 and 3 μL / 100 million of espermatozoa, but not on the concentration of 9 μL / 100 million of espermatozoa. At the second stage, the semen criopreservated samples were subjected to conventional physical analysis (total spermatic motility and spermatic vigor), thermal resistance test, and analysis of the level of integrity of sperm cells using fluorescent probes by flow cytometery. The treatments were constituted as follows: Control Botucrio (B); 4 % Ethyleneglycol (E); Dimethylformamide 5 % (D); Ethyleneglycol + Dimethylformamide (ED) orassociated with anthocyanin (BA, EA, DA, and EDA) at 0.5 μL / 100 million spermatozoaconcentration. For E and EA treatments, there were verified the worst average valuesfor all tests, meanwhile D and DA treatments showed to be less aggressive to the plasma and acrosome membranes. The mean values of spermatic progressive motility and spermatic vigorwere similar for all treatments, except for the treatments E and EA, witch presented inferior results. Even though, diluents Dimethylformamide-based treatments droppedalmost 50 % in the spermatic motility values at the first 30 minutes of the thermal resistance test compared to control treatment (B) or with anthocyaninadded (BA). This result was consistent with the percentual values of cells with intact mitochondrial membrane potential quantified by flow cytometery. Anthocyanin seems to have a scavenger effect over free radicals produced by unviable cells and can be used as non-penetrating antioxidant for cryopreservation in equine semen of MangalargaMarchadorbreed stallions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-08Bitstream added on 2014-06-13T19:33:16Z : No. of bitstreams: 1 prioli_ra_me_jabo.pdf: 689132 bytes, checksum: 17eaeca002f2374370af36bb9266bcc4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos deste trabalho foram a padronização de metodologia alternativa de genotipagem do SNP AY_731081:g.1900T>C do gene CD14 equino por PCR-RFLP, bem como a caracterização em equinos da raça Mangalarga deste e de outros dois polimorfismos, o AY_005808: c.1530A>G do TLR4 e o AX_463789: g.133T>C do Cε, a fim de promover o embasamento necessário para futuras pesquisas visando associação entre marcadores de DNA e características relacionadas à fisiologia do sistema imune na raça. Para tanto, foram utilizados 151 animais Mangalarga, de ambos os sexos e de idades variadas, representativos da população do estado de São Paulo. O método de PCR-RFLP mostrou-se adequado para a genotipagem do SNP AY_731081: g.1900T>C do gene CD14 equino. Entretanto, tal polimorfismo provavelmente não ocorre em equinos Mangalarga, impossibilitando estudos de associação com o marcador na raça. Os parâmetros genético-populacionais obtidos para os polimorfismos AY_005808:c.1530A>G do gene TLR4 e o AX_463789:g.133T>C do gene Cε demonstraram a possibilidade de realização de pesquisas visando a associação entre os marcadores e características relacionadas ao sistema imune na raça Mangalarga / The objective of this work was to contribute to the molecular characterization of the equine Mangalarga, aiming at future studies on the association of DNA polymorphisms and traits associated with the immune system physiology of this equine breed. An alternative PCR-RFLP genotyping method was developed for the SNP AY_731081:g.1900T>C, in the gene CD14. Furthermore, this SNP plus the AY_005808: c.1530A>G, in the gene TLR4, and the AX_463789: g.133T>C, in the gene Cε, were used to analyze 151 Mangalarga individuals. The analyzed horses are representative of the São Paulo State population and consisted of male and female animals of several ages. The PCR-RLP method has been demonstrated to be suitable for equine genotyping using the SNP AY_731081: g.1900T>C of the gene CD14. However, this polymorphism is apparently absent in the Mangalarga breed. The population genetic data obtained for the polymorphisms AY_005808:c.1530A>G, of the gene TLR4, and the AX_463789:g.133T>C, in the gene Cε, indicated the feasibility of these SNPs for further studies aiming at the association of molecular markers with traits related to the immune system of the Mangalarga horse breed

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-07-24T11:40:16Z No. of bitstreams: 1 textocompleto.pdf: 1185499 bytes, checksum: 4e05140c2b8cee1bcd0af3e67874ccf9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-24T11:40:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 textocompleto.pdf: 1185499 bytes, checksum: 4e05140c2b8cee1bcd0af3e67874ccf9 (MD5) Previous issue date: 2017-07-17 / A pesquisa teve como objetivos descrever a morfologia dos cascos dos membros torácicos e pélvicos de equinos da raça Mangalarga Marchador. Adicionalmente, descrever a trajetória (deslocamento vertical, longitudinal e transversal), alinhamento e comportamento do movimento dos cascos nesses animais, durante o andamento marcha batida (MB) e picada (MP), na velocidade curta e média (marcha reunida e marcha média). Foram utilizados 28 equinos pertencentes a diversos criatórios do Brasil, que participaram da Exposição Nacional dos Criadores do Cavalo Mangalarga Marchador, sendo divididos em quatro grupos: sete fêmeas de marcha batida, sete fêmeas de marcha picada, sete machos de marcha batida e sete machos de marcha picada. Para descrição morfológica do casco foram mensurados comprimento da parede dorsal (CP), altura dos talões medial (ATM) e lateral (ATL), e o ângulo (ANG) dos cascos. Para o estudo cinemático, foi utilizado um marcador retroreflexivo, de 1,5 cm de diâmetro, colocado na região dorsoproximal da muralha dos quatro cascos. As coordenadas tridimensionais (3D) deste marcador no andamento marcha batida e picada foram obtidas utilizando um sistema optoeletronico (Sistema Optitrack®, Natural Point, Corvallis, Oregon, USA – modelo PRIME 17 w), utilizando 18 câmeras posicionadas ao longo de um percurso de 16 m. As coordenadas 3D foram plotadas em função do tempo e nos planos dorsal, sagital e transverso para análise do padrão do movimento por meio do programa Visual 3D® (Visual3D v6 Professional, C-Motion, Inc., Century Blvd, Germantown – USA). Membros torácicos e pélvicos foram analisados separadamente. Primeiramente foi verificada a simetria entre os antímeros, e depois de verificada a normalidade, os efeitos de sexo e tipo de marcha na descrição morfológica do casco foram estudados por meio da análise de variância (ANOVA de duas vias). Para observar a influencia do CF na morfologia do casco foi usada análise de regressão linear, relacionando a data do último CF com os valores encontrados para CP, ATM, ATL e ANG. Os dados referentes à avaliação cinemática foram analisados de forma descritiva (média, desvios padrão e porcentagem) e inferencial.Também foi verificada simetria entre antímeros e normalidade dos dados, que não foi encontrada para o deslocamento transversal, então para verificar os efeitos de sexo, marcha e velocidade foi utilizada o teste não paramétrico Wilcoxon. Para os deslocamentos longitudinal e vertical o teste utilizado foi ANOVA. O valor de significância foi de 5%. As médias de CP, ATM, ATL e ANG foram 94,50±8,25 mm, 41,41±4,84 mm, 41,00±4,36 mm e 47,76±2,88 graus, respectivamente. O CP sofreu efeito da marcha (maior na batida), enquanto ATM e ATL variaram com a marcha e sexo (machos de marcha batida) nos membros torácicos, e apenas a sexo (machos) nos membros pélvicos. O ANG não sofreu variação da marcha e do sexo. A velocidade executada na marcha reunida e na marcha média varia de 11,05 a 11,49 km/h e 12,77 a 13,71 km/h, respectivamente. Apenas dois animais de MP apresentaram completo alinhamento dos cascos. Fêmeas de MB apresentaram 71,43% de desalinhamento. Os membros torácicos e pélvicos se comportaram de forma semelhante, sendo que no deslocamento vertical houve efeito de marcha, que foi maior na batida. Também houve efeito da marcha no movimento longitudinal, sendo maior na marcha batida, e efeito de velocidade, que foi maior na marcha média (velocidade média). Movimentos transversais apesar de irregulares não sofreram efeitos. O gesto ideal foi encontrado em maior número no grupo das fêmeas de MB na marcha média (71,43%). No membro pélvico foram encontrados dois tipos de movimento trasnversais, um descrevendo um arco externo e outro um arco interno (16,07% dos animais). A data do último CF tem relação inversa com a altura dos talões. Cascos de equinos Mangalarga Marchador apresentam variação de CP, ATM e ATL. O movimento transversal existe, apesar de não ser descrito no padrão da marcha. Os achados da presente pesquisa irão colaborar com o maior conhecimento do funcionamento do sistema locomotor de equinos, servirão de base para estudos futuros e contribuirão para o entendimento do padrão da marcha realizada pela raça Mangalarga Marchador. / The objectives of this study were to describe the morphology of fore- and hindlimb hooves of Mangalarga Marchador (MM) horses and describe the trajectory (vertical, longitudinal, and transverse displacements), alignment, and pattern shown by the hooves of these animals during the marcha batida (MB) and marcha picada (MP) gaits, at collected (short speed) and medium (medium speed) walks. Twenty-eight animals belonging to several horse farms in Brazil that participated in the National Mangalarga Marchador Breeders' Horse Show were divided into four groups: seven MB mares, seven MP mares, seven MB stallions, and seven MP stallions. For the morphological description of the hoof, the length of the dorsal wall (WL); height of medial (MHH) and lateral (LHH) heels; and hoof angle (ANG) were measured. For the kinematic study, a 1.5-cm-diameter retro-reflective marker was fixed to the dorsoproximal region of the wall of the four hooves. The three-dimensional coordinates (3D) of this marker in the marcha batida and marcha picada gaits were obtained using an optoelectronic system (Optitrack®, Natural Point, Corvallis - OR, USA – model PRIME 17 w), with 18 cameras placed along a 16-m track. The 3D coordinates were plotted as a function of time on the dorsal, sagittal, and transverse planes for an analysis of the movement pattern using Visual 3D® software (Visual3D v6 Professional, C-Motion, Inc., Century Blvd, Germantown - MD, USA). Fore- and hindlimbs were analyzed separately. First, the symmetry between the antimeres was checked, and after normality was confirmed, the effects of sex and marcha type on the morphological description of the hoof were studied by analysis of variance (two-way ANOVA).To observe the influence of TS on hoof morphology, a linear regression analysis was performed, relating the date of the last TS with the values found for WL, MHH, LHH, and ANG. Data pertaining to the kinematic evaluation were analyzed descriptively (means, standard deviations, and percentage) and inferentially. Symmetry between the antimeres and data normality were tested and not confirmed for vertical displacement; thus, Wilcoxon non-parametric test was used to check the effects of sex, marcha type, and speed. A three-way ANOVA was used for the longitudinal and vertical displacements. The significance level adopted was 5%. Mean values for WL, MHH, LHH, and ANG were 94.50±8.25 mm, 41.41±4.84 mm, 41.00±4.36 mm, and 47.76±2.88 degrees, respectively. Wall length was affected by marcha type (higher in batida), while MHH and LHH varied with marcha type and gender (marcha batida males) in the forelimbs, and only gender (males) in the hindlimbs. ANG did not vary according to marcha type or sex. The speeds used at collected and medium walks ranged from 11.05 to 11.49 km/h and 13.71 to 12.77 km/h, respectively. Only two MP animals showed complete alignment of the hooves. Marcha batida mares had 71.43% hoof misalignment. Fore- and hindlimbs behaved similarly, with an effect of marcha type observed in vertical displacement, which was higher in the batida gait. There was also an effect of marcha type on longitudinal displacement, which was higher in MB; and an effect of speed, which was higher at medium walk (medium speed). Though irregular, transverse movements were not affected. The ideal style was most frequent (71.43%) in the group of medium-walk MB females. Two types of transverse movement were detected in the hindlimb: one describing an outer arc, and another describing an inner arc (16.07% of the animals). The date of the last trimming-shoeing is inversely related to the height of the heels. The hooves of Mangalarga Marchador horses vary in WL, MHH, and LHH. Transverse movement exists, though not described in the marcha pattern. The current findings will serve as basis for further research and contribute to extending the knowledge of the horse locomotor system and to the better understanding the marcha gait pattern of the Mangalarga Marchador breed.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-17T10:25:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1092571 bytes, checksum: 58c49be4dd74df0158635ae605d33d22 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T10:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1092571 bytes, checksum: 58c49be4dd74df0158635ae605d33d22 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho foi realizado com o objetivo de comparar os efeitos de diferentes crioprotetores e aditivos na criopreservação do sêmen equino sobre a viabilidade espermática in vitro pós-descongelamento. Para tanto, foram designados dois experimentos (E). No E1 objetivou-se comparar o efeito do glicerol (GLIC) e da dimetilformamida (DMFA), associados ou não, sobre a viabilidade espermática in vitro pós-descongelamento, o que conferiu quatro grupos experimentais: glicerol a 5 % (GLIC), dimetilformamida a 5 % (DMFA), dimetilformamida a 3% associada ao glicerol a 2 % (DG) e o tratamento controle, composto pelo diluente comercial Botu-Crio® (BC). Já no E2 objetivou-se avaliar o efeito do congelamento de sêmen de garanhões em diluente contendo glicerol e/ou dimetilformamida, associados à antocianina (ATC) e/ou colesterol carreado por ciclodextrina (CCC). Para tanto, os ejaculados foram congelados em dez diferentes tratamentos, de acordo com as associações entre crioprotetores e aditivos. As amostras de ambos os experimentos foram avaliadas mediante teste de termo-resistência (TTR) e por meio de citometria de fluxo quanto à integridade de membrana plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial, produção de peróxido de hidrogênio intracelular e peroxidação lipídica da membrana plasmática; a avaliação quanto à organização da bicamada lipídica só foi realizada no E1. Os melhores resultados obtidos no TTR do E1 foram referentes aos tratamentos DMFA e DG (p<0,05), que mantiveram as maiores médias de motilidade espermática total após trinta minutos de incubação a 37 oC. O potencial mitocondrial não sofreu alteração frente aos tratamentos aplicados (p>0,05). A maior proporção de células com integridade de membrana plasmática e acrossomal foi observada nos tratamentos DMFA e BC (p<0,05). A análise de organização de membrana revelou maior desorganização no tratamento GLIC (p<0,05). Foi observada maior proporção de células viáveis com alta produção de peróxido de hidrogênio no tratamento DMFA e menor proporção no tratamento GLIC (p<0,05). Quanto à peroxidação da bicamada lipídica, não foram observadas diferenças entre os valores médios nos tratamentos (p>0,05). Em relação ao E2, não houveram interações entre crioprotetores e diluentes para maioria das características estudadas, sendo as comparações realizadas entre grupos de tratamentos. Entre os crioprotetores, o grupo DMFA apresentou os melhores resultados quanto à motilidade espermática durante o TTR, seguido do grupo DG (p<0,05) e dentre os aditivos os grupos CCC e AC foram superiores aos demais (p<0,05). Em relação à integridade de membrana plasmática e acrossomal, os grupos BC e GLIC apresentaram os piores resultados dentre os crioprotetores, assim como os grupos BC e ATC dentre os aditivos (p<0,05). As maiores médias obtidas quanto ao potencial mitocondrial foram referentes aos grupos DMFA e DG entre os crioprotetores, e CCC e AC entre os aditivos (p<0,05). Foi observada maior proporção de células viáveis com alta produção de peróxido de hidrogênio nos grupos DMFA e DG dentre os crioprotetores, e nos grupos CCC e AC dentre os aditivos (p<0,05). Em relação à peroxidação da membrana plasmática foi observada interação entre crioprotetores e aditivos na população de células viáveis (p<0,05), de forma a revelar melhor associação da CCC à DMFA. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que os tratamentos DMFA e DG apresentaram melhores condições para manutenção da viabilidade espermática in vitro, de forma que ambos podem sem utilizados como alternativa em diluidores na criopreservação de sêmen equino. Em relação ao uso da CCC, a sua associação deve ser feita preferencialmente com a DMFA. Os resultados obtidos quanto à ação da ATC não foram satisfatórios, necessitando de novos estudos quanto à concentração ideal e seus efeitos no congelamento de sêmen de garanhões. / The aim of this study was to compare the effects of different cryoprotectants and additives in cryopreservation of Mangalarga Marchador stallions semen on sperm viability in vitro post-thaw. Thus, we designed two experiments (E). In E1 we aimed to compare the effect of glycerol and dimethylformamide, associated or not, on the sperm viability post-thawing. Therefore we collected thirty ejaculates from four stallions. Each one was divided into four treatments: 5% glycerol (GLYC), 5% dimethylformamide (DMFA), an association of 2% glycerol and 3% dimethylformamide (DG) and control treatment compound by Botu-Crio®. In E2 we aimed to evaluate the effect of stallions semen freezing in diluent containing glycerol and or dimethylformamide associated with the anthocyanin (ATC) and or cholesterol loaded cyclodextrin (CCC). We collected orty-eight ejaculates of eight stallions and each one was frozen in ten different treatments, according to the associations between cryoprotectants and additives. The samples of both experiments were evaluated by thermo- resistance test (TTR) and by flow cytometry as to integrity of plasma and acrosomal membrane, mitochondrial potential, intracellular peroxide hydrogen production, lipid peroxidation and organization of the plasma membrane bilayer (only E1). The E1 best results on the TTR were related to DMFA and DG treatments (p<0.05), who maintained the highest average total sperm motility after thirty minutes of incubation at 37 ° C. Mitochondrial potential was not affected by any group (p>0.05). The highest proportion of cells with plasma and acrosomal membrane integrity was observed in DMFA and BC treatments (p<0.05). The analysis revealed the organization of membrane disruption was greater in GLIC treatment (p<0.05). We observed a higher proportion of cells with high production of hydrogen peroxide in the treatment DMFA and a lower proportion in GLIC treatment (p<0.05). As for the peroxidation of the lipid bilayer, no differences were observed between treatments (p>0.05). About E2 there were no interactions between cryoprotectants and diluents for most traits, with comparisons made between treatment groups. Among the cryoprotectants, DMFA group showed the best results on the TTR, followed by DG group (p <0.05) and among the additives CCC and AC groups were superior to the others (p <0.05). Regarding the integrity of plasma and acrosomal membrane, the BC and GLYC groups showed the worst results among cryoprotectants, as well as BC and ATC groups among the additives (p <0.05). The highest mean about mitochondrial potential were related to DMFA and DG groups among cryoprotectants, and CCC and AC between additives (p <0.05). There was a higher proportion of cells with high production of hydrogen peroxide in DMFA and DG groups from the cryoprotectants, and CCC and AC groups among the additives (p <0.05). In relation to the plasma membrane peroxidation was observed interaction between cryoprotectants and additives in the population of viable cells (p <0.05), in order to better reveal the association CCC plus DMFA. It was concluded that the DMFA and DG treatments showed better conditions for maintaining sperm viability in vitro, so both can use like alternative method for cryopreservation of stallion semen. The association with the CCC should be made preferably by with DMFA. The results related to ATC were not satisfactory, revealing with it the need for new studies about its optimal concentration and effects on semen freezing stallions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:54:03Z : No. of bitstreams: 1 arneiro_lcm_me_jabo.pdf: 935977 bytes, checksum: a8cbfbbed53f54f73a608f20e432bfe4 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Em mamíferos, incluindo os eqüinos (Equus caballus), o gene protein kinase, AMP-activated, gamma 3 non-catalytic subunit (PRKAG3) encontra-se relacionado ao desempenho muscular, os genes cysteine-rich secretory protein 1 (CRISP1) e spermatogenesis associated 1 (SPATA1) à fertilidade de machos e os genes 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 1A (HTR1A) e solute carrier family 6 (neurotransmitter transporter, serotonin), member 4 (SLC6A4) ao temperamento. Os objetivos deste trabalho foram a padronização de metodologia alternativa de genotipagem por PCR-RFLP dos SNPs AY_376689:c.773C>T, AJ_315378:c.110A>G e AB_264325:c.771G>C dos genes eqüinos PRKAG3, CRISP1 e HTR1A, respectivamente, bem como a caracterização em cavalos da raça brasileira Mangalarga destes e de outros polimorfismos, o AAWR_02017454:g.121684T>C do gene SPATA1 e o AB_098561:c.1470G>A do gene SLC6A4, a fim de promover o embasamento necessário para futuras pesquisas visando associação entre marcadores de DNA e características de interesse na raça. Foram utilizados 151 animais Mangalarga, de ambos os sexos e de idades variadas, representativos da população do Estado de São Paulo. O método de PCR-RFLP mostrou-se adequado para a genotipagem dos SNPs AY_376689:c.773C>T do PRKAG3, AJ_315378:c.110A>G do CRISP1 e AB_264325:c.771G>C do HTR1A. Entretanto, os polimorfismos do PRKAG3 e CRISP1 provavelmente não ocorrem na Mangalarga, impossibilitando estudos de associação com os marcadores. As estimativas dos parâmetros genético-populacionais obtidas para o polimorfismo AAWR_02017454:g.121684T>C do gene SPATA1 na amostra estudada demonstraram a possibilidade de realização de pesquisas visando a sua associação com fertilidade de machos. As mesmas estimativas obtidas para os polimorfismos AB_264325:c.771G>C do HTR1A e o AB_098561:c.1470G>A do SLC6A4 desencorajam a realização de pesquisas visando suas associações à características relacionadas ao temperamento / In mammals, including the equine (Equus caballus), the protein kinase, AMP-activated, gamma 3 non-catalytic subunit (PRKAG3) gene is related to muscular development, the cysteine-rich secretory protein 1 (CRISP1) and spermatogenesis associated 1 (SPATA1) genes are related to male fertility and the 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 1A (HTR1A) and solute carrier family 6 (neurotransmitter transporter, serotonin), member 4 (SLC6A4) genes are related to temperament. The aims of the present study were to propose an alternative genotyping method for the AY_376689:c.773C>T, AJ_315378:c.110A>G and AB_264325:c.771G>C SNPs of the equine PRKAG3, CRISP1 and HTR1A genes, respectively, as well as the characterization in Mangalarga Brazilian breed horses of these and other polymorphisms, the AAWR_02017454:g.121684T>C of the SPATA1 gene and the AB_098561:c.1470G>A of the SLC6A4 gene, in order to provide the necessary basis for future research towards associating the DNA markers and traits of interest in this breed. For this, 151 Mangalarga animals were used, from both sexes and random ages, representing the São Paulo state population. The PCR-RFLP methodology was found to be adequate for the genotyping of the SNPs AY_376689:c.773C>T of the PRKAG3, AJ_315378:c.110A>G of the CRISP1 and AB_264325:c.771G>C of the HTR1A. Nevertheless, the PRKAG3 and CRISP1 polymorphisms probably do not occur in Mangalarga, making it impossible the association studies with these markers. The estimative of the population genetic parameters obtained for the AAWR_02017454:g.121684T>C polimorphism of the SPATA1 gene in the sample studied showed the possibility of carrying out research towards its association with male fertility. On the other hand, the same estimatives obtained for the polymorphisms AB_264325:c.771G>C of the HTR1A and AB_098561:c.1470G>A of the SLC6A4 discourage research towards their association to traits related to temperament

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 584112 bytes, checksum: a7c18b045b74693958d5dfb7232f1660 (MD5) Previous issue date: 2014-07-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this study was to evaluate the reproductive parameters and the profile of testosterone release and their average concentrations in Mangalarga Marchador stallions. It was evaluated in two periods, during breed season and outside the breed season, in Viçosa, Muriaé and Teófilo Otoni-MG. The research was divided in two phases (First: July and August, 2013 and the second: January and February, 2014), using eleven stallions at the first one and eight at the second one, age between 5 and 25 years old. To determine the serum testosterone, they were blood sampled about 20 days after the beginning of winter(1st phase) and 20 days after the beginning of summer(2nd phase). The samples were collected for 12 hours/day, from 7am to 7pm, each 30 minutes. The testicular biometry was measured at the same Day of the blood sample. To determine the seminal parameters, sêmen was collected from the stallions the two days following the blood samples. At this time, during the semen collects, the reproductive behaviour was evaluated. Regarding the measurements of the testis, the quantitative variables, height, width, lengh and volume of right and left testis did not differ significantly between seasons(P>0.05). The same was observed about seminal and behavioral parameters, volume, appearance, motility, vigor, concentration, membrane integrity, reaction time, latency time, copulation time and number of mounts, in which the results do not indicate differences between seasons(P>0.05). Dispite the fact that the profile of testosterone release are differents during the seasons, there was no difference in means of concentrations (P>0,05). This differences were bigger during the morning, when the concentrations in this time were higher during breeding season. However, there was difference between animal interaction and season,which suggests that in some animals the mean androgen concentrations displayed a seasonal pattern, while in other animals, this behavior was not observed. It was concluded that seasonality has no effect on the reproductive characteristics as testis size, sexual behavior and semen parameters, beyond the average testosterone secretion, so that the influence on the latter not presented correlations with other important traits studied. / O objetivo do presente estudo foi avaliar os parâmetros reprodutivos e o perfil de testosterona de garanhões da raça Mangalarga Marchador, em dois períodos, dentro da estação de monta e fora da estação reprodutiva, criados nos município de Viçosa, Muriaé e Teófilo Otoni MG e mantidos em regime semi-estabulado. O estudo foi divido em duas etapas (1a etapa: julho e agosto de 2013 e 2a etapa: janeiro e fevereiro de 2014) utilizando onze garanhões na primeira etapa e oito na segunda, com idades entre 5 e 25 anos que foram submetidos a colheitas de sangue para determinação da concentração de testosterona sérica, 20 dias após o início do inverno (1aetapa) e 20 dias após o início do verão (2a etapa). As colheitas foram realizadas durante 12 horas, intervaladas por 30 minutos. Foi mensurada, no mesmo dia da colheita de sangue, a biometria testicular de cada animal. Para a determinação dos parâmetros seminais, fez-se nos dois dias consecutivos da colheita de sangue, as colheitas de sêmen, totalizando dois ejaculados de cada garanhão por estação, momento em que também foi avaliado o comportamento pré-cópula de cada animal. Em relação à biometria testicular, percebeu-se que as variáveis quantitativas avaliadas, altura, largura, comprimento e volume dos testículos direito e esquerdo não tiveram diferenças entre as estações (P>0,05). Do mesmo modo, os parâmetros seminais e comportamentais, volume, aspecto seminal, motilidade, vigor e concentração eseprmática, integridade de membrana dos espermatozóides, tempo de reação, tempo de latência, tempo de monta e número de montas não apresentaram diferenças entre as estações do ano (P>0,05). Apesar de que a distribuição dos valores absolutos de testosterona serem diferentes dentro e fora da estação, não se observou diferença nas médias das concentrações (P>0,05). Essas diferenças foram maiores nas amostras feitas pela manhã, em que as concentrações no período durante a estação de monta foram maiores do que fora da estação reprodutiva (P>0,05). No entanto, ocorreu interação de animal e estação, o que permitiu concluir que em alguns animais as concentrações médias do andrógeno apresentaram comportamento sazonal, enquanto em outros animais, esse comportamento não foi observado. Portanto, sazonalidade não exerce efeito sobre as características reprodutivas como biometria testicular, comportamento sexual e parâmetros seminais, além da secreção de testosterona, sendo que a influência sobre esta última não apresenta correlações importantes com as demais características estudadas.