Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-14Bitstream added on 2014-06-13T19:35:16Z : No. of bitstreams: 1 miranda_es_me_botib.pdf: 341881 bytes, checksum: 0398d195977255821cd91dc539be7ad7 (MD5) / A mastite é uma inflamação da glândula mamária, geralmente causada por infecção bacteriana, causando as maiores perdas econômicas na bovinocultura leiteira, devido à redução na produção de leite e de sua qualidade, aumento do uso de medicamentos e morte dos animais. Existem muitos micro-organismos responsáveis pela mastite bovina, mas Staphylococcus sp permanecem como os mais comumente isolados, em casos de mastites clínicas e subclínicas. São vários os fatores de virulência envolvidos nessa patogênese, principalmente a produção de biofilmes, o que explicaria a cronicicidade da infecção e a produção de toxinas. A presença constante desses micro-organismos pode ocasionar a seleção de cepas resistentes, além de ser um perigo no momento da ordenha, pois o leite contaminado pode causar intoxicações, devido à ingestão de enterotoxinas pré formadas. Assim, o objetivo do trabalho foi identificar os Staphylococcus sp isolados a partir de 279 amostras de leite de vacas saudáveis e 293 de vacas com mastite (clínica ou subclínica), quanto à formação de biofilmes, além da resistência a determinadas drogas. Foram isolados 63 (22,6%) cepas de Staphylococcus sp, entre as amostras de leite de animais hígidos e 80 (27,3%), entre os doentes. A espécie mais frequentemente isolada entre os animais doentes foi S. warneri (27,5%), mas S. aureus (17,5%) foi a única espécie onde ocorreu diferença estatisticamente significativa (p-valor 0,001) entre ambos os grupos, comprovando sua maior ocorrência em animais doentes. Em relação à produção de biofilme, foram testadas duas metodologias e a técnica da microplaca (p-valor 0,47) foi melhor que a do vermelho congo (p-valor 0,29). O gene mecA foi encontrado em 14 (9,8%) das 143 cepas analisadas,ocorrendo somente em estafilococos coagulase negativa (ECN). S. aureus ocorreu predominantemente em vacas doentes, enquanto... / Mastitis is an inflammation of breast tissue, by bacterial infection. It causes economic losses to dairy cattle, because mastitis results in decrease of production and in low quality of milk, increasing antimicrobial treatment and cows mortality. Several microorganisms are associated to bovine mastitis, but Staphylococcus spp. remain as the most commonly isolated bacteria from clinical and subclinical mastitis. Several virulence factors are involved in mastitis pathogenesis; one of the most important of them is the biofilm production that can explain the infection persistency. The persistency of these microorganisms can select antimicrobial resistant strains, besides, can contaminate the milk during collection, resulting in foodborne for the consumers, if pre formed enterotoxins were present. The aim of this study was to identify the species of Staphylococcus, to detect the biofilm formation and to characterize the antimicrobial susceptibility patterns in strains isolated from milk of 279 healthy and 293 mastitic cows. Sixty-three strains of Staphylococcus spp. were isolated from milk of healthy cow (22.6%), and 80 from mastitic cow milk samples (27.3%). The most common species isolated from sick cows were S. warneri (27.5%), but S. aureus was the only species that was significantly (P value 0.001) more associated with mastitic cows group. Regarding to biofilm production, two methodologies were carried out. The microtiter plate assay detected more biofilm producer strains (47%) than the congo red agar technique (29%). In relation to mecA gene, that confers resistance to all beta-lactam antimicrobial agents, it was detected in 14 (9.8%) out of 143 analyzed strains, all of them occurring in coagulase-negative staphylococci. In summary, we observed that S. aureus occurred mainly in mastitic cows, while coagulase-negative staphylococci occurred equally between the healthy and sick (Complete abstract click electronic access below)

Orientador : Carlos Alberto de Magalhães Lopes / Resumo: Estudou-se a viabilidade da utilização da citologia aspirativa por agulha fina (CAAF) e Citologia de Expressão (CE) em 137 búfalas, procedentes de sete propriedades leiteiras, localizadas nos municípios de Jaú, Botucatu e Sorocaba, estado de São Paulo, como novo recurso no diagnóstico precoce da mastite, além da frequência de mastite subclínica, as características dos agentes etiológicos envolvidos, a relação entre a Contagem de Células Somáticas (CCS) pelo método automático, reação ao "California Mastitis Test" (CMT), reação ao "Whiteside" modificado WSM contagem de bactérias aeróbias mesófilas e exame microbiológico, avaliou-se, ainda, a sensibilidade bacteriana frente a antimicrobianos, produção de beta-lactamase para E. coli e S. aureus, além da caracterização pela Reação em Cadeia de Polimerase das amostras de Escherichia coli isoladas e pesquisa da produção de toxinas estafilocócicas. Dos 548 quartos mamários estudados, obteve-se uma freqüência para mastite subclínica de 16,8%. O Staphylococcus epidermidis o agente mais freqüente (21,43%). A média da CCS obtida nas amostras analisadas foi de 170, 26 x 103 cél./mL de leite. As cepas de S. aureus apresentaram maior sensibilidade para Meticilina (100%), Amoxilina + Ácido clavulônico (100%), Cefalotina (84%) e Gentamicina (67%) e as E. coli para Enrofloxacina (100%), Gentamicina (100%) e Cefoperazone (100%). Das seis (06) cepas de S. aureus isoladas cinco (05) foram produtoras de TSST-1 e uma (01) para EEA. A produção de beta-lactamase foi de 83% para as cepas de S. aureus e 57% para E. coli. A CAAF apresentou ótima especificidade (96%) da mesma forma que a CE por análise comparativa, quando comparada com outras técnicas para diagnóstico da mastite, verificando-se a predominância de neutrófilos nas amostras com reação inflamatória, deste modo conclui-se que a CAAF... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The viability of Fine Needle Aspiration Cytology (FNAC) and Expression Cytology (EC) in 137 buffalos, proceeding of seven farms in Jaú, Botucatu and Sorocaba municipal districts in São Paulo State were studied. Frequency of subclinical mastitis, feature of etiological agents, production of toxins in Staphylococcus aureus and beta-lactamase by S. aureus and Escherichia coli were studied too. Total of 548 udder quarters, the frequency was 16,8%. Staphylococcus epidermidis was the pathogen found in 21,43% of samples and was the highest rate. The Somatic Cell Count (SCC) media was 170,26 x 103 cell/mL of milk. Sensibility to antimicrobial drugs demonstrate S. aureus was more susceptible methicilin, Amoxilin + Clavunonic acid, cephalothin and gentamicin and E. coli to enrofloxacin, gentamicin and cefoperazone. Five (05) samples S. aureus tested were producers TSST-1 and one (01) enterotoxin A (EEA). The beta-lactamase production was 83% in S. aureus samples and 57% to E. coli samples. A excellent specificity (96%) was observed to FNAC and EC when compared to others techniques to mastitis diagnostic. Neutrophils were the most prevalent cellular type in the analyzed samples. The FNAC and EC can be used for determination of inflammation grade in the buffaloes mammary gland. / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-10-03T13:03:20Z No. of bitstreams: 1 2012_HudsonHolandaAndrade.pdf: 1063058 bytes, checksum: ee57d92a7464633f32590d7c9007e463 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-03T13:48:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_HudsonHolandaAndrade.pdf: 1063058 bytes, checksum: ee57d92a7464633f32590d7c9007e463 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-03T13:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_HudsonHolandaAndrade.pdf: 1063058 bytes, checksum: ee57d92a7464633f32590d7c9007e463 (MD5) / O Staphylococcus aureus está entre os microrganismos mais comumente isolados em mastite subclínica bovina, sendo muito prejudicial para os tecidos produtores de leite devido à liberação de toxinas e de difícil tratamento. O objetivo deste trabalho foi analisar o perfil de resistência antimicrobiana e genotitipificar os genes da coagulase e espécie-específicos dos S. aureus nas propriedades do Distrito federal e Entorno. Foram analisadas 47 amostras de leite de 116 animais de diversas raças que apresentaram um escore de 3+ no teste do Californian Mastit Test. Foi incorporado mais 28 amostras do banco de germoplasma do Laboratório de Microbiologia (MicroMedVet) da Universidade de Brasília aos testes, totalizando 75 amostras. O teste do perfil de resistência antimicrobiana demostrou que a penicilina (71,2%), ampicilina (52,9%) e enrofloxacina (39,9%) foram os antibióticos que mais apresentaram resistência. Os maiores índices de sensibilidades antimicrobianas foram visto na gentamicina (79,8%), neomicina (76,9%), norfloxacina (76,9%), cefalexina (74,1%), cefazolina (74,1%), lincomicina (74,1%), oxacilina (74,1%), tetraciclina (74,1%), tobramicina (74,1%), ceftiofur (71,2%). A sensibilidade da enrofloxacina apresentou uma discrepância muito elevada quando comparada a estudos anteriores, pois no presente trabalho seu índice foi de apenas 51,3%. Os genes da coagulase (CoA) obtiveram quatro diferentes tamanhos de bandas do produto da PCR nas amostras testadas. Foram elas 490bp (2,66%), 570bp (33,35%) 680bp (41,33%), e 780bp (22,66%). O gene de espécie-específico amplificou todas as 75 amostras com fragmentos de 1153bp e mostrou ser uma ferramenta útil na identificação rápida de S. aureus. Os resultados apresentados nesse estudo demostra que o perfil de resistência antimicrobiana vem se tornando algo mundial e que técnicas simples podem facilitar a sua identificação e também mapear o polimorfismo ocorrido nos genes da coagulase. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Staphylococcus aureus is one of the most commonly microorganisms isolated from bovine subclinical mastitis, it is very damaging to the producing milk tissues due to the release of toxins and difficulty of treatment. The objective of this study was to analyze the antimicrobial resistance profile and genotyping genes of coagulase and species-specific of S. aureus in the properties of the Distrito Federal and Entorno. We analyzed 47 milk samples from 116 animals of several breeds that showed score of 3+ in the Californian Mastit Test. Another 28 samples from the germplasm bank of the University of Brasília Microbiology Laboratory (MicroMedVet) were incorporated to the tests, totaling 75 samples. Testing of the antimicrobial resistance profile showed that penicillin (71.2%), ampicillin (52.9%) and enrofloxacin (39.9%) were the antibiotics that showed more resistance. The highest rates of antimicrobial sensitivities were seen in gentamicin (79.8%), neomycin (76.9%), norfloxacin (76.9%), cephalexin (74.1%), cefazolin (74.1%), lincomycin (74.1%), oxacillin (74.1%), tetracycline (74.1%), tobramycin (74.1%), ceftiofur (71.2%). The sensitivity of enrofloxacin showed a very high discrepancy when compared to previous works, at the present study its index was only 51.3%. Coagulase genes (CoA) had four different PCR product bands sizes in the tested samples. These were 490bp (2.66%), 570bp (33.35%) 680bp (41.33%), and 780bp (22.66%). The species-specific gene amplified all the 75 samples with fragments of 1153bp and proved to be a useful tool for S. aureus rapid identification. The results presented in this study shows that the antimicrobial resistance profile is becoming worldwide and that simple techniques can facilitate their identification and also map the polymorphism occurred in the coagulase genes.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8559_1.pdf: 3687024 bytes, checksum: 53fb31d406d0f0aeeb423e204503ef60 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A mastite bovina, inflamação da glândula mamária, é uma das principais doenças que acomete o rebanho leiteiro em todo o mundo. O principal agente infeccioso responsável por esta enfermidade é o Staphylococcus aureus (S. aureus), bactéria de interesse na microbiologia dos alimentos como agente causador de intoxicações alimentares. Outro importante fato que envolve este microrganismo é a resistência aos antibióticos usados na terapêutica humana e veterinária. Como o leite e derivados são amplamente consumidos e podem conter S. aureus enterotoxigênicos e resistentes, objetivou-se com este estudo caracterizar feno e genotipicamente Staphylococcus spp. isolados de amostras de leite de vacas com mastite e queijos de coalho no Estado de Pernambuco. Para o diagnóstico da mastite bovina foram realizados os testes da caneca telada e o California Mastitis Test. As amostras de queijos de coalho foram submetidas ao isolamento e contagem de Staphylococcus coagulase positiva (SCP) em Ágar Baird-Parker. As cepas de Staphylococcus spp. obtidas tanto do leite quanto dos queijos foram caracterizadas fenotipicamente em S. aureus, SCP e Staphylococcus coagulase negativa (SCN), através da técnica de coloração de gram, características morfo-tintoriais das colônias e produção de hemólise em Ágar sangue, além de provas bioquímicas como fermentação da glicose em anaerobiose, fermentação do manitol em aerobiose e anaerobiose, produção de termonuclease, acetoína e coagulase. A caracterização genotípica foi realizada através da utilização da técnica de PCR-RFLP do gene coa, PCR-Uniplex e Multiplex para investigação dos genes toxigênicos, além de clivagem e seqüenciamento para confirmação da presença dos genes se. Para traçar o perfil de resistência dos isolados, foi empregada a técnica de difusão em ágar, utilizando diferentes antibióticos. Foram analisados 246 animais, totalizando 984 quartos mamários, dos quais, 562 (57,1%) apresentaram mastite subclínica, sendo os microrganismos mais prevalentes Staphylococcus spp. (36%), Corynebacterium spp. (34,8%) e S. aureus (13,6%). O perfil de sensibilidade antimicrobiana demonstrou que das 59 cepas de SCP isoladas de leite, 28,5% foram resistentes, sendo os antibióticos menos eficazes a penicilina e a amoxicilina. A caracterização das cepas de S. aureus de casos de mastite bovina pela técnica de PCR-RFLP revelou a presença de dois perfis genotípicos, P1=750pb e P2=1000pb. Das 81 cepas de Staphylococcus spp. isoladas de leite de vacas com mastite, 65 (80,2%) comportavam genes toxigênicos, sendo os genes se encontrados (seg, seh, sei e sej). Com relação aos queijos de coalho, das 10 amostras avaliadas, 90% estavam fora dos padrões permitidos pela legislação para SCP. 18/20 das cepas de Staphylococcus spp. apresentaram os genes tst, sec, sed, seg, seh, sei e sej. O percentual de resistência entre as cepas isoladas de queijo foi baixo. A análise de restrição e o seqüenciamento confirmaram a presença dos genes se nos isolados de leite e queijo. A tipagem molecular permitiu compreender o padrão de dispersão dos S. aureus nas propriedades estudadas. A presença de cepas de Staphylococcus spp. resistentes a antibióticos e portadoras de genes toxigênicos isoladas de amostras de leite de vacas com mastite e queijos de coalho no Estado de Pernambuco, é preocupante para a saúde do consumidor, por tornarem estes alimentos possíveis veículos de intoxicações alimentares

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Foram analisadas 240 amostras de leite proveniente de animais com mastite clínica e de animais com mastite subclínica, criados em propriedades leiteiras de alta produção, da região do Planalto Médio, Rio Grande do Sul. Houve isolamento de 250 agentes bacterianos em 218 amostras (90,8%) e 65 agentes leveduriformes em 39 amostras (16,25%). Foram identificados 10 gêneros e 12 espécies de bactérias, sendo os gêneros Staphylococcus, Corynebacterium e Nocardia responsáveis por 88% dos isolados. Foram identificados 08 gêneros (29 espécies) de leveduras além de 02 gêneros de fungos semelhantes a leveduras (04 espécies), sendo os gêneros Candida, Pichia, Cryptococcus e Rhodotorula responsáveis por 80% das espécies isoladas.Apenas 03 amostras apresentaram crescimento puro de leveduras, o restante estando associado com isolamentos bacterianos, o que demonstra uma importante relação entre fungos e bactérias na etiologia das mastites. Mais de 90% dos agentes leveduriformes isolados tiveram crescimento em temperaturas acima de 37ºC, demonstrando seu potencial patogênico. Verificou-se que a prevalência de mastite fúngica na região é significante e fortemente relacionada com a presença de agentes bacterianos, o tratamento inadequado com produtos antimicrobianos e a saúde do úbere. / The bovine mastitis is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to the industry and to the final consumer. High production dairy herds were analyzed in Planalto Médio, Rio Grande do Sul, were 240 samples with clinical and subclínica mastitis were collected. There was the isolation of 250 bacterial agents in 218 samples (90,8%) and 65 yeast organisms in 39 samples (16,25%). There was identification of 10 genera and 12 species of bacteria, and 88% of the isolates were from genera Staphylococcus, Corynebacterium and Nocardia. There was the identification of 08 genera (29 species) of yeasts and 02 genera of yeast-like organisms (04 species), and 80% of the isolates were from genera Candida, Pichia, Cryptococcus and Rhodotorula. Only 03 samples presented pure growth of yeasts, the remaining was associated with bacterial isolations, which demonstrates an important relationship between yeasts and bacteria in the etiology of the mastitis. More than 90% of the yeast isolates had growth in temperatures above 37ºC, which demonstrates their pathogenic potential. It was verified that in this particularly region, the occurrence of mastitis caused by yeasts has a significant importance and are closely related with the bacterial agents' presence, the inadequate treatment with antibiotic products and udder’s health.

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Foram analisadas 240 amostras de leite proveniente de animais com mastite clínica e de animais com mastite subclínica, criados em propriedades leiteiras de alta produção, da região do Planalto Médio, Rio Grande do Sul. Houve isolamento de 250 agentes bacterianos em 218 amostras (90,8%) e 65 agentes leveduriformes em 39 amostras (16,25%). Foram identificados 10 gêneros e 12 espécies de bactérias, sendo os gêneros Staphylococcus, Corynebacterium e Nocardia responsáveis por 88% dos isolados. Foram identificados 08 gêneros (29 espécies) de leveduras além de 02 gêneros de fungos semelhantes a leveduras (04 espécies), sendo os gêneros Candida, Pichia, Cryptococcus e Rhodotorula responsáveis por 80% das espécies isoladas.Apenas 03 amostras apresentaram crescimento puro de leveduras, o restante estando associado com isolamentos bacterianos, o que demonstra uma importante relação entre fungos e bactérias na etiologia das mastites. Mais de 90% dos agentes leveduriformes isolados tiveram crescimento em temperaturas acima de 37ºC, demonstrando seu potencial patogênico. Verificou-se que a prevalência de mastite fúngica na região é significante e fortemente relacionada com a presença de agentes bacterianos, o tratamento inadequado com produtos antimicrobianos e a saúde do úbere. / The bovine mastitis is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to the industry and to the final consumer. High production dairy herds were analyzed in Planalto Médio, Rio Grande do Sul, were 240 samples with clinical and subclínica mastitis were collected. There was the isolation of 250 bacterial agents in 218 samples (90,8%) and 65 yeast organisms in 39 samples (16,25%). There was identification of 10 genera and 12 species of bacteria, and 88% of the isolates were from genera Staphylococcus, Corynebacterium and Nocardia. There was the identification of 08 genera (29 species) of yeasts and 02 genera of yeast-like organisms (04 species), and 80% of the isolates were from genera Candida, Pichia, Cryptococcus and Rhodotorula. Only 03 samples presented pure growth of yeasts, the remaining was associated with bacterial isolations, which demonstrates an important relationship between yeasts and bacteria in the etiology of the mastitis. More than 90% of the yeast isolates had growth in temperatures above 37ºC, which demonstrates their pathogenic potential. It was verified that in this particularly region, the occurrence of mastitis caused by yeasts has a significant importance and are closely related with the bacterial agents' presence, the inadequate treatment with antibiotic products and udder’s health.

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Foram analisadas 240 amostras de leite proveniente de animais com mastite clínica e de animais com mastite subclínica, criados em propriedades leiteiras de alta produção, da região do Planalto Médio, Rio Grande do Sul. Houve isolamento de 250 agentes bacterianos em 218 amostras (90,8%) e 65 agentes leveduriformes em 39 amostras (16,25%). Foram identificados 10 gêneros e 12 espécies de bactérias, sendo os gêneros Staphylococcus, Corynebacterium e Nocardia responsáveis por 88% dos isolados. Foram identificados 08 gêneros (29 espécies) de leveduras além de 02 gêneros de fungos semelhantes a leveduras (04 espécies), sendo os gêneros Candida, Pichia, Cryptococcus e Rhodotorula responsáveis por 80% das espécies isoladas.Apenas 03 amostras apresentaram crescimento puro de leveduras, o restante estando associado com isolamentos bacterianos, o que demonstra uma importante relação entre fungos e bactérias na etiologia das mastites. Mais de 90% dos agentes leveduriformes isolados tiveram crescimento em temperaturas acima de 37ºC, demonstrando seu potencial patogênico. Verificou-se que a prevalência de mastite fúngica na região é significante e fortemente relacionada com a presença de agentes bacterianos, o tratamento inadequado com produtos antimicrobianos e a saúde do úbere. / The bovine mastitis is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to the industry and to the final consumer. High production dairy herds were analyzed in Planalto Médio, Rio Grande do Sul, were 240 samples with clinical and subclínica mastitis were collected. There was the isolation of 250 bacterial agents in 218 samples (90,8%) and 65 yeast organisms in 39 samples (16,25%). There was identification of 10 genera and 12 species of bacteria, and 88% of the isolates were from genera Staphylococcus, Corynebacterium and Nocardia. There was the identification of 08 genera (29 species) of yeasts and 02 genera of yeast-like organisms (04 species), and 80% of the isolates were from genera Candida, Pichia, Cryptococcus and Rhodotorula. Only 03 samples presented pure growth of yeasts, the remaining was associated with bacterial isolations, which demonstrates an important relationship between yeasts and bacteria in the etiology of the mastitis. More than 90% of the yeast isolates had growth in temperatures above 37ºC, which demonstrates their pathogenic potential. It was verified that in this particularly region, the occurrence of mastitis caused by yeasts has a significant importance and are closely related with the bacterial agents' presence, the inadequate treatment with antibiotic products and udder’s health.

Orientador: José Jurandir Fagliari / Coorientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Daniela Gomes Silva / Banca: Kalina Maria de Medeiros Gomes Simplício / Banca: Viviani Gomes / Resumo: O estudo teve como objetivo avaliar as alterações da secreção láctea de cabras com mastite mediante o uso do teste da caneca de fundo escuro, California Mastitis Test (CMT), contagem de células somáticas (CCS) e perfil microbiológico, bem como determinar o perfil bioquímico, em especial de proteínas de fase aguda, do soro sanguíneo e soro lácteo de cabras com mastite clínica ou subclínica, de ocorrência natural. Foram constituídos três grupos experimentais compostos de 30 metades mamárias de cabras sadias, com secreção láctea negativa na prova da caneca de fundo escuro, CMT e no exame microbiológico (grupo controle - G1), 30 metades mamárias com secreção láctea negativa ao teste da caneca de fundo escuro, reação moderada (2+) ou intensa (3+) no CMT e positividade no exame microbiológico (Grupo mastite subclínica - G2) e 12 metades mamárias com secreção láctea positiva na prova da caneca de fundo escuro e no exame microbiológico (grupo mastite clínica - G3). Após antissepsia dos tetos foram colhidas amostras de leite para CCS, cultura microbiológica e determinação do perfil bioquímico do soro lácteo, inclusive o proteinograma mediante fracionamento em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), e amostras de sangue venoso para determinação do perfil bioquímico sérico. A contagem automática de células somáticas (CCS) e por contagem microscopia direta foi maior nas amostras de secreção láctea das cabras com mastite subclínica (G2: 4.500.000 células/mL e 20.830.000 células/mL, respectivamente) e com mastite clínica (G3: 7.500.000 células/mL e 39.100.000 células/mL, respectivamente). Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase negativa (SCN), Staphylococcus coagulase positiva (SCP), Corynebacterium spp. e Streptococcus spp. foram os microrganismos isolados nas amostras de leite das cabras do G2 e G3. As amostras de soro lácteo das cabras do G2 e G3 apresentaram maiores atividades das enzimas... / Abstract: The study aimed to evaluate the changes in milk from goats with mastitis by using the strip cup test, California Mastitis Test (CMT), somatic cell count (SCC) and microbiological profile as well as to determine the biochemical profile, especially acute phase proteins, in blood serum and whey from goats with naturally occurring clinical or subclinical mastitis. Three experimental groups were formed by 30 mammary glands from healthy goats with milk samples negative to strip cup test, CMT and microbiological examination (control group - G1); 30 mammary glands with milk samples negative to strip cup test but with moderate (2+) or intense (3+) reaction in CMT and microbiological examination (group with subclinical mastitis - G2), and 12 mammary glands with positive results to strip cup test and microbiological examination (group with clinical mastitis - G3). After asepsis of the teats milk samples were collected for SCC, microbiological culture, and to determine the biochemical profile in whey, including proteinogram by fractionation in poliacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). At the same time, blood samples were obtained to determine the serum biochemical profile. Automatic and microscopic methods were higher in milk samples from goats with subclinical mastits (G2: 4,500.000 cells/mL e 20,830,000 cells/mL, respectively) e with clinical mastitis (G3: 7,500,000 células/mL e 39,100,000 cells/mL, respectively). Staphylococcus aureus, Coagulase-negative Staphylococcus (CNS), Coagulase-positive Staphylococcus (CPS), Corynebaterium spp. and Streptococcus spp. were the microorganisms isolated in milk samples from goats of G2 and G3. Whey samples from goats of G2 and G3 showed higher activity of alkaline phosphatase (G2: 122 U/L and G3: 207 U/L) and gamma-glutamyltransferase (G2: 483 U/L and G3: 571 U / L), and higher concentrations of albumin (G2: 0.18 g/dL and G3: 0.29 g/dL), total protein (G2: 1.50 g/dL and G3: 1.67 g/dL), chlorides ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-14Bitstream added on 2014-06-13T20:04:30Z : No. of bitstreams: 1 victoria_c_dr_botfmvz_prot.pdf: 1093615 bytes, checksum: 38f6838cc7718e11088dbd2ac37600cf (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A proposta do presente estudo foi determinar se o Corynebacferium bovis possui a capacidade de se multiplicar em temperatura de refrigeração e se este microrganismo possui os genes aprX e lipA, capazes Je produzir enzimas termoestáveis que degradam proteínas e gorduras do leite armazenado por longos períodos de tempo. Para isto o agente foi submetido a ncubação em temperatura de refrigeração que variou entre 0,7 e 4°C, por 10 :lIas consecutivos, com a aferição dos valores de absorbância (A) em espectrofotômetro a cada 24 horas, correspondendo aos momentos MO à M9. Para a verificação da presença dos genes foi realizada a técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Os resultados obtidos revelaram que o C. bovis é capaz de se multiplicar em temperatura de refrigeração após 120 horas de ncubação onde houve diferença estatisticamente significante com p>0,05 entre os períodos M5(A = 0,264) e M6(A = 0,297) podendo ser considerado então como psicrotrófico. Por outro lado, não possui os genes aprX e lipA, não oroduzindo as enzimas codificadas por estes genes, o que não significa que o C. bovis não possua genes para a produção de outras enzimas degradantes, não pesquisadas no presente estudo. Isto sugere que novos estudos do genoma deste microrganismo são necessários, para se elucidar o verdadeiro papel deste agente na alteração da qualidade do leite e de seus subprodutos. / The purpose of the present study was to determine if Corynebacferium bovis has the capacity to multiply in low temperature and if this microorganism possesses the genes aprX and lipA, capable to produce term stable enzymes that degrade proteins and fats of the milk stored by long Deriods of time. At the first part of this study was accomplished with the agent's ncubation by 10 consecutive days in temperature of cooling that varied Jetween 0,7 and 4°C, and daily reading of absorbance (A) in spectrophotometer, corresponding from moments MO to M9. The gene presence was accomplished with polimerase chain reaction (PCR). The results -evealed that C. bovis is capable to multiply at low temperature after 120 hours of incubation as observed between the moments M5(A = 0,264) and M6(A = 0,297)where p>0,05 confirming that this microorganism could be considered as psychotropic. In the other hand the studied microorganism doesn't possess the lipA and aprX genes, therefore it is not capable to produce the enzymes codified by these genes, what doesn't mean that C. bovis doesn't possess genes for the production of other degrading enzymes, don't researched in the present study. This suggests that new studies of the genome of this microorganism are necessary, to elucidate this agent's true paper in the alteration of the quality of the milk and of their products.

Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: Ari Fernandez Junior / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Resumo: A mastite é uma inflamação da glândula mamária, geralmente causada por infecção bacteriana, causando as maiores perdas econômicas na bovinocultura leiteira, devido à redução na produção de leite e de sua qualidade, aumento do uso de medicamentos e morte dos animais. Existem muitos micro-organismos responsáveis pela mastite bovina, mas Staphylococcus sp permanecem como os mais comumente isolados, em casos de mastites clínicas e subclínicas. São vários os fatores de virulência envolvidos nessa patogênese, principalmente a produção de biofilmes, o que explicaria a cronicicidade da infecção e a produção de toxinas. A presença constante desses micro-organismos pode ocasionar a seleção de cepas resistentes, além de ser um perigo no momento da ordenha, pois o leite contaminado pode causar intoxicações, devido à ingestão de enterotoxinas pré formadas. Assim, o objetivo do trabalho foi identificar os Staphylococcus sp isolados a partir de 279 amostras de leite de vacas saudáveis e 293 de vacas com mastite (clínica ou subclínica), quanto à formação de biofilmes, além da resistência a determinadas drogas. Foram isolados 63 (22,6%) cepas de Staphylococcus sp, entre as amostras de leite de animais hígidos e 80 (27,3%), entre os doentes. A espécie mais frequentemente isolada entre os animais doentes foi S. warneri (27,5%), mas S. aureus (17,5%) foi a única espécie onde ocorreu diferença estatisticamente significativa (p-valor 0,001) entre ambos os grupos, comprovando sua maior ocorrência em animais doentes. Em relação à produção de biofilme, foram testadas duas metodologias e a técnica da microplaca (p-valor 0,47) foi melhor que a do vermelho congo (p-valor 0,29). O gene mecA foi encontrado em 14 (9,8%) das 143 cepas analisadas,ocorrendo somente em estafilococos coagulase negativa (ECN). S. aureus ocorreu predominantemente em vacas doentes, enquanto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mastitis is an inflammation of breast tissue, by bacterial infection. It causes economic losses to dairy cattle, because mastitis results in decrease of production and in low quality of milk, increasing antimicrobial treatment and cows mortality. Several microorganisms are associated to bovine mastitis, but Staphylococcus spp. remain as the most commonly isolated bacteria from clinical and subclinical mastitis. Several virulence factors are involved in mastitis pathogenesis; one of the most important of them is the biofilm production that can explain the infection persistency. The persistency of these microorganisms can select antimicrobial resistant strains, besides, can contaminate the milk during collection, resulting in foodborne for the consumers, if pre formed enterotoxins were present. The aim of this study was to identify the species of Staphylococcus, to detect the biofilm formation and to characterize the antimicrobial susceptibility patterns in strains isolated from milk of 279 healthy and 293 mastitic cows. Sixty-three strains of Staphylococcus spp. were isolated from milk of healthy cow (22.6%), and 80 from mastitic cow milk samples (27.3%). The most common species isolated from sick cows were S. warneri (27.5%), but S. aureus was the only species that was significantly (P value 0.001) more associated with mastitic cows group. Regarding to biofilm production, two methodologies were carried out. The microtiter plate assay detected more biofilm producer strains (47%) than the congo red agar technique (29%). In relation to mecA gene, that confers resistance to all beta-lactam antimicrobial agents, it was detected in 14 (9.8%) out of 143 analyzed strains, all of them occurring in coagulase-negative staphylococci. In summary, we observed that S. aureus occurred mainly in mastitic cows, while coagulase-negative staphylococci occurred equally between the healthy and sick (Complete abstract click electronic access below) / Mestre