Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Antônio Carlos Paes / Banca: Helio Langoni / Banca: Geraldo de Nardi Junior / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: O presente estudo investigou a eficácia do ceftiofur intramamário no tratamento estendido com dez aplicações, a cada 12 horas, na mastite subclínica por estafilococos em primíparas bovinas. Foram utilizados 60 animais da raça holandesa, divididos em quadro grupos: G1 = Grupo negativo ou sem infecção estafilocócica, CMT negativo e CCS < 200.000 células/mL; G2 = Grupo com infecção estafilocócica não tratado, CMT positivo (2+ ou 3+) e CSS > 200.000 células/mL; G3 = Grupo com infecção tratado no início da lactação (entre 15 e 100 dias de lactação), CMT positivo (2+ ou 3+) e CCS > 200.000 células/mL e G4 = Grupo tratado final da lactação (entre 101 e 200 dias de lactação), CMT positivo (2+ ou 3+) e CCS > 200.000 células/mL. As amostras de leite foram coletadas em cinco momentos: M0 ou dia zero (diagnóstico da mastite subclínica), M1 = 7 dias após o diagnóstico da mastite subclínica e início da terapia estendida, M2 = 2 dias após o término do tratamento estendido (dia 14 após o diagnóstico da mastite subclínica), M3 = 7 dias após M2 (dia 21 após o diagnóstico da mastite ou 9 dias após o final do tratamento), M4 = 7 dias após M3 (dia 28 após o diagnóstico da mastite ou 16 dias após o final do tratamento). Nos grupos tratados com ceftiofur intramamário, foi evidenciada a cura microbiológica com redução na CCS em 73,34% no G3 e 46,66% no G4. Assim, nos grupos tratados (G3 + G4) e não tratado (G2), as taxas de cura foram, respectivamente, 60,00% e 26,66% (p<0,05). Foram isoladas 45 linhagens de Staphylococcus spp., das quais foram identificados principalmente S. aureus (51,12%), S. intermedius (40,0%) e S. epidermidis (8,88%). O perfil de sensibilidade microbiana "in vitro" dos isolados apresentou maiores índices de sensibilidade para oxacilina (80,00%), ceftiofur (77,78%) e cefalexina (77,78%), seguidos do ciprofloxacino (66,66%) e gentamicina (60,00%). Em contraste... / Abstract: This study investigated the efficacy of extended ceftiofur intramammary therapy using 10 applications by five days in primiparous heifers infected by staphylococcal subclinical mastitis. Sixty Holstein cows were divided in four groups: G1 = negative group or without staphylococcal infection, CMT-negative and SCC<200.000 cells/mL; G2 = untreated group with staphylococcal infection, CMT-positive and SCC>200.000 cells/mL; G3 = treated early lactation group (15-100 days of lactation) with staphylococcal infection, CMT-positive and SCC>200.000 cells/mL, G4 = treated late of lactation group (101-200 days of lactation) with staphylococcal infection, CMT-positive and SCC>200.000 cells/mL. The milk samples were collected at five moments: M0 or day zero (diagnosis of subclinical mastitis), M1 = 7 days after diagnosis of subclinical mastitis and early extended therapy, M2 = 2 days after the end of the extended treatment (day 14 after the diagnosis of subclinical mastitis), M3 = 21 days after diagnosis of mastitis (9 days after the end of treatment), M4 = 28 days after diagnosis of mastitis (16 days after the end of treatment). In the groups treated with intramammary ceftiofur, microbiological cure was observed with reduction in SCC in 73.34% and 46.66% of animals for G3 and G4, respectively. Thus, in the treated (G3 + G4) and untreated (G2) groups, microbiological cure rates were 60.00% and 26.66% (p<0.05), respectively. Forty-five Staphylococcus spp. strains were isolated. From these, S. aureus (51.12%), S. intermedius (40.0%), and S. epidermidis (8.88%) were the most common species. In vitro antimicrobial susceptibility profile of isolates showed that the most effective drugs were oxacillin (80.0%), ceftiofur (77.78%), and cephalexin (77.78%), followed by ceftriaxone (69.0%), ciprofloxacin (66.66%) and gentamicin (60,0%). In contrast, high-resistance rates of isolates were founded to cloxacillin (24.44%), penicillin... / Doutor

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Resumo: Estudou-se 94 estirpes de Staphylococcus aureus obtidas do leite de vacas com mastite subclínica em duas propriedades rurais no estado de São Paulo. Essas estirpes foram caracterizadas fenotipicamente quanto a produção de biofilmes pelos testes do agar vermelho congo e pelo teste de aderência em microplacas e também foram genotipicamente identificadas pela presença dos genes icaA e icaD responsáveis pela produção do polissacarídeo de adesão intercelular. Além disso, todas as estirpes foram também submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Os resultados obtidos revelaram que 85% das estirpes produziram biofilmes "in vitro" para o teste do agar vermelho congo. No teste de aderência em placas foi verificado que 98,9% das estirpes produziram biofilme, devido a forte aderência nas placas de polietileno. A presença dos genes icaA e icaD foi encontrada em 95,7% das estirpes de S. aureus. No antibiograma foi observado que sete estirpes foram resistentes aos seguintes antimicrobianos: cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, gentamicina, oxacilina e penicilinaG, sendo que as maiores resistências ocorreram frente a gentamicina (2,2%) e a penicilina G (6,6%). Na avaliação dos testes fenotípicos com os genotípicos o teste de aderência em microplacas foi o mais sensível (100%), sendo indicado para identificar estirpes produtoras de biofilmes. Todos os testes, com exceção do antibiograma, foram estatisticamente significativos (p<0,05). / Abstract: 94 Staphylococcus aureus strains obtained from milk samples of cows suffering from subclinical mastitis in dairy herd, in two properties, in the state of São Paulo were evaluated. These strains were characterized by the in vitro slime production on the Congo red agar, biofilm formation and by the presence of icaA and icaD genes which are responsible for the intercellular adhesion. All strains were too subjected to in vitro susceptibility to 12 different antibiotics. The results revealed that 85% of isolates tested produced slime on the Congo red agar and 98,9% of the isolates produced biofilm in vitro by the adherence in sterile 96-well "U" bottom polystyrene tissue culture plates. 95,7% of isolates possessed the icaA and icaD genes. The results of in vitro antibiotic susceptibility assay to 12 different antibiotics revealed that seven isolates were resistance to follow antibiotics: clorphenicol, clindamicin, erythromycin, gentamicin, oxacillin and penicillin, the higher resistance occurred to penicillin (6,6%) and gentamicin (2,2%). In the study of phenotypic tests compared with genotypic test, the 96-well polystyrene tissue culture plates assay was the most sensitivity (100%) and is recommended with genotypic test for the investigation biofilm formation in S. aureus. All the tests, exception of antibiotic susceptibility assay were statistically significant (p<005). / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Resumo: A medicina veterinária, além de atuar diretamente na sanidade animal, age também na saúde humana, por meio de atividades de inspeção sanitária de alimentos, vigilância epidemiológica, sanitária e ambiental, atividades de orientação e educação em saúde no que diz respeito à saúde pública e zoonoses. Dentre as diversas zoonoses, algumas são mais frequentes em pequenas propriedades rurais de bovinocultura leiteira, devido às condições ambientais e de manejo favoráveis aos agentes etiológicos e vetores, além do acesso limitado à informação técnica acerca da medicina veterinária preventiva. O presente trabalho teve por objetivos analisar a realidade local de propriedades rurais bem como os métodos de educação em saúde (tradicional e dialógico), bem como propor uma nova perspectiva na educação em saúde veterinária. Foram envolvidas 37 pequenas propriedades rurais no interior do estado de São Paulo. Os dados foram obtidos por meio de aplicação de questionário, observação e prática de atividades de educação em saúde, no modelo dialógico. Primeiramente, observou-se grande distanciamento dos produtores frente ao médico veterinário, relacionando a imagem do profissional à fiscalização, acarretando em baixa adesão. O questionário indicou perfil de baixa produção, baixa tecnificação e baixa especialização, bem como deficiência com relação as medidas preventivas contra doenças zoonóticas. Quanto às atividades educativas, não houve adesão nas práticas tradicionais. No entanto as atividades ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Veterinary Medicine acts directly on the animal health and also on human health through activities of sanitary inspection of food, epidemiological surveillance, health and environmental measures of guidance and education in public health concerns and zoonoses. Among various zoonoses some are more frequently observed in small properties of dairy farming, due to favorable environmental and handling conditions for agents etiological and vectors as well as limited access to information. The lack of knowledge about these diseases by the rural population, where technical information is more scarce or deficient, alert to the need for accessibility to this technical knowledge addressed in a diversified, respectful and effective way. This work has an objective aims to analyze the local reality of rural properties as well as the methods of health education (traditional and dialogical), as well as propose a new perspective in veterinary health education. Small farms were used in the interior of the state of São Paulo. The data were obtained by means of a questionnaire, observation, and practice of health education activities, in both methods of health education afore mentioned. Firstly, there was a great distance from the producers in relation to the veterinarian, relating the image of the professional to the inspection, resulting in low adherence. The questionnaire indicated a low production, technification and specialization profile, as little attention well as low rates of preventive... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O Brasil é o quinto maior produtor de leite do mundo, entretanto sua produtividade é considerada baixa. Um dos motivos desta baixa produtividade é a alta incidência da mastite no rebanho. A mastite é a reação inflamatória da glândula mamária, causada principalmente pela invasão e ação de espécies de micro-organismos patogênicos. O principal tratamento consiste no uso de antibióticos de aplicação intramamária. Entretanto, o uso constante de antibióticos apresenta problemas graves como o surgimento de cepas de bactérias resistentes e a presença de resíduos destes medicamentos no leite. Para reduzir esses problemas, formas alternativas de prevenção e tratamento da mastite têm sido estudadas, como o uso de preparações contendo espécies probióticas. Pesquisas recentes têm demonstrado o potencial de algumas destas espécies no tratamento e prevenção da mastite bovina tendo em vista sua atividade inibitória sobre os patógenos responsáveis por esta infecção. Desta forma, a proposta deste estudo foi desenvolver e avaliar a estabilidade de uma preparação probiótica na forma de emulsão de aplicação intramamária contendo 108 UFC/mL de um \"pool\" constituído de cinco cepas de Lactobacillus (L. acidophilus ATCC 4356, L. casei ATCC 7469, L. fermentum ATCC 9338, L. plantarum ATCC 8014 e L. paracasei Nestlé ST11). Para tanto, 12 formulações de emulsão base foram desenvolvidas e avaliadas em ensaios preliminares de estabilidade (centrifugação e estresse térmico), sendo a formulação contendo monestearato de glicerila, lanolina anidra, óleo mineral, Tween 80® e Spam 80® selecionada para formulação da preparação probiótica. Adicionalmente, selecionou-se como agente conservante sorbato de potássio visando aumentar a vida útil da preparação probiótica. A preparação, assim desenvolvida, foi submetida ao teste de estabilidade físico-químico por 90 dias a 50°C ± 2°C. Observou-se que o aspecto da preparação se manteve estável, mas com redução nos parâmetros pH, densidade e aumento na viscosidade. A manutenção da viabilidade dos Lactobacillus na preparação foi estudada em um ensaio de 120 dias, sendo avaliada a influência dos fatores: temperatura de estocagem, adição de sacarose e sorbato de potássio. Observou-se influência significativa da temperatura demonstrando a importância da refrigeração na manutenção na viabilidade dos Lactobacillus. Verificou-se também que, sob refrigeração, a adição de sacarose promoveu redução de 0,5 ciclo logarítmico em relação a população inicial de células viáveis. Observou-se redução do pH da preparação probiótica avaliada nestas condições. Estes resultados permitem concluir que a refrigeração da preparação é indispensável para a manutenção da viabilidade das bactérias probióticas. A adição de 2% de sacarose à preparação, mantida sob refrigeração, se mostrou eficiente na manutenção da população de células viáveis ao final de 120 dias de ensaio, contendo 108 UFC/g, característica desejável para um produto probiótico. / Brazil is the world\'s fifth largest milk producer, though its productivity has been considered low. One of the reasons for this low productivity is the high incidence of mastitis in the herd. Mastitis is the inflammation of the mammary gland, mainly caused by the invasion and action of pathogenic microorganisms. The treatment is accomplished through the use of intramammary application of antibiotics. However, the constant use of antibiotics has serious problems such as the emergence of resistant strains of bacteria and the presence of residues of these drugs in milk. To reduce these problems, alternative means of prevention and treatment of mastitis has been studied as the use of preparations containing probiotic species. Recent studies have demonstrated the potential of some of these species in the treatment and prevention of bovine mastitis due to their inhibitory activity on pathogen species responsible for the infection. Thus, the purpose of this study was to develop and evaluate the stability of probiotic preparation in the form of intramammary application emulsion containing 108 CFU/mL of five Lactobacillus strains (L. acidophilus ATCC 4356, L. casei ATCC 7469 L. fermentum ATCC 9338, ATCC 8014, L. plantarum and L. paracasei ST11 Nestle). Therefore, 12 basic emulsion formulations were developed and evaluated in preliminary tests for stability (thermal stress and centrifugation), and only one was selected. Additionally, potassium sorbate was selected as preservative in order to increase the shelf life of the preparation. The developed preparation was subjected to study the physicochemical stability for 90 days at 50 ° C ± 2 ° C. The results showed that the aspect of the preparation remained stable, but decreasing in pH and density and increasing in viscosity. The maintenance of the viability of the lactobacillus in the preparation was studied in a 120-day test, and flowing factors were considered: storage temperature, sucrose addition and the potassium sorbate addition. It was observed that there was significant differences in the temperature factor demonstrating the importance of cooling in maintaining the viability of Lactobacillus. It was also observed that sucrose decreased by 0,5 log cycle compared to initial population of viable cells in the refrigerated preparation. Regarding the pH, it was noted a decrease in the different formulations evaluated. These results show that the cooling of the preparation is indispensable for maintaining the viability of probiotic bacteria. The addition of 2% sucrose to the preparation proved efficient with a slower decrease in viability maintaining the population of viable cells at the end of the 120 days of the assay.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de cepas de Staphylococcus aureus no ambiente de ordenha, analisar seu perfil genético e a produção de biofilme, provenientes de 10 propriedades localizadas nas regiões de Franca e Ribeirão Preto, estado de São Paulo, Brasil. Foram analisadas 220 amostras de leite individual de vacas positivas no teste CMT (California Mastitis Test), 120 amostras de leite de tanque de expansão, 389 swabs de utensílios e equipamento relacionados com ordenha e 120 swabs de mãos de manipuladores. As coletas de amostras foram realizadas mensalmente durante o período de agosto/2010 a janeiro/2011. Das 849 amostras analisadas, 56 cepas de S. aureus (6,6%) foram isoladas, sendo 12 (5,4%) de leite individual de vacas, 26 (21,6%) de leite de tanque de expansão, 14 (3,6%) de utensílios e equipamentos e 4 (6,9%) de mãos de manipuladores. Os resultados indicam uma baixa prevalência de S. aureus nas propriedades analisadas, não havendo diferença significativa entre as frequências encontradas nas duas regiões analisadas. A técnica de PFGE (pulsed-field gel electrophoresis) permitiu identificar 31 perfis genéticos (pulsotipos), utilizando-se a enzima de restrição SmaI. Nos ensaios de produção de biofilmes em microplaca, 19 (63,3%) de 30 pulsotipos avaliados foram considerados produtores de biofilme. Nos ensaios conduzidos em aço inox, 13 (43,3%, N=30) foram positivos e, para o silicone, não houve produção de biofilme. O elevado percentual de isolados no leite de tanque de expansão evidencia um problema de saúde pública, considerando que no Brasil muitas vezes o leite é consumido sem pasteurização. A ocorrência de pulsitipos de S. aureus formadores de biofilmes indica a persistência do patógeno em diversos pontos no ambiente de ordenha, bem como provável envolvimento dos mesmos com casos de mastite e sua eliminação no leite, ressaltando a necessidade de práticas higiênicas para prevenir a formação de biofilmes nas propriedades estudadas. / The objective of the present study was to evaluate the occurrence of biofilm-producing strains of Staphylococcus aureus in the milking environment from 10 farms located in the regions of Franca and Ribeirão Preto, state of São Paulo, Brazil. Twohundred twenty samples of milk from individual cows previously tested for CMT (California Mastitis Test), 120 samples of bulk tank milk, 389 swabs of equipments and utensils related to milking and 120 swabs of milk\'s handlers hands were analyzed. A total of 56 (6.6%) S. aureus strains were isolated out of 849 samples analyzed, being 12 (5.4%) from milk samples from individual cows, 26 (21.6%) from bulk tank milk, 14 (3.6%) from swabs of equipments and utensils, and 4 (3.3%) from swabs hands of milk\'s handlers. Results indicated a low prevalence of S. aureus in the dairy farms analyzed, and there was no significant difference between the percentages found in the two regions evaluated. On the basis of PFGE results (using SmaI enzyme), 31 profiles (pulsotypes) were found. In the biofilm-production assay using microplates, 19 (63.3%) of 30 pulsotypes tested were considered positive (biofilm producers). For assays conducted in stainless steel, 13 (43.3%) of pulsotypes were biofilm producers, although no pulsotype was able to produce biofilms on the surface of silicon. Results of this trial showed a high percentage of bulk tank milk samples contaminated with S. aureus, hence indicating a public health problem especially in Brazil were milk is often consumed without pasteurization. The occurrence of S. aureus pulsotypes which were also biofilm-producers suggests the persistence of the pathogen in several sites at the milking environment, as well the probable involvement of S. aureus biofilms with mastitis and its excretion in the milk. The need for adoption of hygienic practices to prevent the formation of biofilms of S. aureus in the dairy farms evaluated is stressed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-07Bitstream added on 2014-06-13T19:40:32Z : No. of bitstreams: 1 silva_ncc_dr_botib.pdf: 675325 bytes, checksum: 770804101b6bf91187e2941b56d767bb (MD5) / Staphylococcus sp é agente comum da mastite bovina, causando grandes perdas econômicas na pecuária brasileira. Esse micro-organismo possui fatores de virulência bastante conhecidos como a produção de hemolisinas, leucotoxinas e superantígenos como a toxina do síndrome do choque tóxico e enterotoxinas. Além disso, várias espécies de Staphylococcus podem adquirir genes de resistência aos antibióticos β lactâmicos. O objetivo do estudo foi caracterizar molecularmente isolados de Staphylococcus sp provenientes de leite de vacas com mastite clinica e subclínica de várias regiões do estado de São Paulo. Foram realizadas coletas de leite de vacas com mastite clinica e subclínica de diferentes fazendas no estado de São Paulo e realizados testes fenótipicos de resistência a antimicrobianos e de virulência (Toxina de Panton Valentine, sindrome do choque tóxico e toxinas esfoliativas), além de testes moleculares como Pulse Field Gel Eletrophoresis (PFGE), Multiloccus Sequence Typing (MLST) e Spa typing para comparação entre as cepas epidemiologicamente importantes e da tipagem do cromossomo cassette estafilocócico em cepas meticilina reistentes. As cepas resistentes a meticilina apresentaram amplo perfil de resistência e genes de resistência importantes e pouco relatados, sendo observados genes como fexA, lsaE, lnuB. Foram detectados dois novos spatyping (t10852 e t10856), bem como um novo alelo yqiL e um novo ST (2493). Os ECNs apresentaram resistências à maioria dos antibióticos estudados e foi observado a uma deleção no gene ermC, que codifica a resistência à eritromicina. / Staphylococcus sp. is the common agent of bovine mastitis, causing big economic losses in Brazilian cattle. This micro-organism have virulence factors have been well known as the production of hemolysin, and leucotoxinas toxin superantigens such as toxic shock syndrome and enterotoxins. In addition, several Staphylococcus species can acquire antibiotic resistance genes β lactamics. The objective of the study is to characterize molecularly Staphylococcus sp. from milk of cows with subclinical mastitis in various regions of the state of São Paulo. Samples were coleted from milk of cows with subclinical and clinical mastitis from different farms in the state of São Paulo. Tests were performed phenotypic antimicrobial resistance and virulence (toxin Panton Valentine, toxic shock syndrome and exfoliative toxins), molecular tests as Eletrophoresis Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE), Multiloccus Sequence Typing (MLST) and spa typing for comparison between epidemiologically important strains, as well as the typing of strains in staphylococcal cassette chromosome methicillin reistentes. Methicillin-resistant strains showed broad resistance profile and resistance genes important and underreported were detected as fexA, lsaE, lnuB. Two new spatyping (t10852 and t10856) were detected as well as a new allele yqiL and a new ST (2493). The ECN showed resistance to most antibiotics and was observed the deletion in ermC gene encoding resistance to erythromycin.

Orientador: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Hélio Langoni / Banca: Paulo Fernando Machado / Resumo: Os objetivos foram descrever e identificar fatores da cama associados à concentração bacteriana no leite e na cama, índices epidemiológicos de mastite e higiene animal em rebanhos alojados no sistema de compostagem. Três fazendas foram visitadas mensalmente durante um ano. Amostras foram colhidas do leite do tanque e de casos de mastite para exame microbiológico. Foram avaliados escores de limpeza do flanco, perna, teta e úbere. Amostras da cama foram coletadas para estimar concentrações bacterianas e características físico-químicas. Matéria orgânica, densidade e a relação carbono-nitrogênio foram associados a concentrações bacterianas na cama. A temperatura na camada profunda foi maior do que a da superfície, mas não o suficiente para diminuir substancialmente as concentrações de bactérias totais, estreptococos e coliformes na cama. Exceto em situações de erros de manejo, parâmetros como a temperatura, matéria orgânica, umidade, densidade e relação carbono-nitrogênio foram mantidas dentro de limites de controle durante o estudo. Coliformes e estreptococos ambientais foram os patógenos mais freqüentes isolados nos casos de mastite clínica. A prevalência de mastite causada por patógenos ambientais que podem causar surtos de mastite intratável não foi preocupante. Surtos de mastite ambiental não foram observados. Os resultados do presente estudo indicam que níveis baixos de umidade e densidade da cama estão associados a diminuição do risco de mastite clínica e melhora da limpeza dos animais, respectivamente. Os resultados desta pesquisa podem ser usados para reduzir o risco de mastite de animais alojados em sistema de compostagem / Abstract: Os objetivos foram descrever e identificar fatores da cama associados à concentração bacteriana no leite e na cama, índices epidemiológicos de mastite e higiene animal em rebanhos alojados no sistema de compostagem. Três fazendas foram visitadas mensalmente durante um ano. Amostras foram colhidas do leite do tanque e de casos de mastite para exame microbiológico. Foram avaliados escores de limpeza do flanco, perna, teta e úbere. Amostras da cama foram coletadas para estimar concentrações bacterianas e características físico-químicas. Matéria orgânica, densidade e a relação carbono-nitrogênio foram associados a concentrações bacterianas na cama. A temperatura na camada profunda foi maior do que a da superfície, mas não o suficiente para diminuir substancialmente as concentrações de bactérias totais, estreptococos e coliformes na cama. Exceto em situações de erros de manejo, parâmetros como a temperatura, matéria orgânica, umidade, densidade e relação carbono-nitrogênio foram mantidas dentro de limites de controle durante o estudo. Coliformes e estreptococos ambientais foram os patógenos mais freqüentes isolados nos casos de mastite clínica. A prevalência de mastite causada por patógenos ambientais que podem causar surtos de mastite intratável não foi preocupante. Surtos de mastite ambiental não foram observados. Os resultados do presente estudo indicam que níveis baixos de umidade e densidade da cama estão associados a diminuição do risco de mastite clínica e melhora da limpeza dos animais, respectivamente. Os resultados desta pesquisa podem ser usados para reduzir o risco de mastite de animais alojados em sistema de compostagem / Mestre

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Ruben-Pablo Schocken-Iturrino / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Nilson Roberti Benites / Resumo: Com o objetivo de avaliar a eficácia do ácido lático frente ao iodo na anti-sepsia após a ordenha na prevenção da mastite bovina, foram estudados 668 quartos mamários de vacas holandesas em dois rebanhos leiteiros, sendo um experimental e outro comercial. Para tanto adotou-se o delineamento experimental tipo split-herd baseado na redução da ocorrência natural de novos casos de infecções intramamárias (recomendado pelo protocolo do National Mastistis Council). Os resultados obtidos evidenciaram que o ácido lático apresentou uma eficácia de 57,4% na redução do número de novos casos de IIM causados por Corynebacterium spp., Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. entre as vacas estudadas no rebanho experimental. No rebanho comercial a eficácia foi de 42,9% entre os casos de IIM determinados por Staphylococcus spp., porém não mostrou eficácia entre os casos de IIM determinados por Corynebacterium spp. e Streptococcus spp.. Tanto o ácido lático quanto o iodo não interferiram nas taxas de cura espontânea, persistência de IIM e na ocorrência de casos clínicos de mastite entre as vacas estudadas nos rebanhos experimental e comercial. A utilização do ácido lático na anti-sepsia dos tetos de vacas após a ordenha, mostrou-se eficaz na redução do número de novos casos de IIM, desde que acompanhada por outras medidas de controle. / Abstract: With the objective of evaluate the efficacy of a lactic acid against an iodine postmilking teat dip in preventing bovine mastitis, 668 mammary quarters from Holsteins cows in two dairy herds, one experimental and other commercial, were studied. The National Mastitis Council recommended protocol for determining efficacy of a postmilking barrier teat dip based on reduction of naturally occurring new intramammary infections was used, in a split-herd experimental design. Results demonstrated that lactic acid showed an efficacy of 57.4% in reducing new intramammary infections caused by Corynebacterium spp., Staphylococcus spp. and Streptococcus spp., among the experimental herd cows. In the commercial herd, the efficacy was 42.9%, but only in reducing the number of new cases of intramammary infections caused by Staphylococcus spp., and not for new cases of intramammary infections caused by Corynebacterium spp., and Streptococcus spp. Both, lactic acid and iodine didn't interfere in spontaneous cure, intramammary infections persistence and clinical mastitis rates in experimental and commercial herds. The use of a lactic acid teat dip antisepsis after each milking was effective in reducing new cases of IMI, as part of a mastitis control program. / Doutor

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: José Paes de almeida Nogueira Pinto / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: Diante da importância do colostro e leite de égua na alimentação e aquisição de imunidade de potros recém nascidos e na sua utilização na dieta humana, o objetivo do estudo foi avaliar a composição, propriedades físico-químicas, perfil microbiológico e contagem de células somáticas (CCS) do colostro e leite de éguas na fase inicial da lactação. As amostras foram coletadas de 36 éguas em sete momentos: M1= momento do parto, M2= 12 horas, M3= 24 horas, M4= 36 horas, M5= 48 horas, M6= onze dias e M7= 15 dias após o parto. Houve queda nos teores de proteína, gordura, sólidos totais e sólidos desengordurados, e aumento dos teores de lactose durante os momentos estudados. Também houve variação nos valores de pH, índice crioscópico e acidez durante os momentos, principalmente entre amostras de colostro e leite de transição. Houve isolamento microbiológico em 5,55% das amostras cultivadas, das quais 28,57% eram Streptococcus não hemolítico, 28,57% Streptococcus α hemolítico, 21,43% Streptococcus equi, 14,29% Micrococcus spp. e 7,14% Bacillus spp. Nenhum animal apresentou mastite clínica. Maiores valores de CCS foram encontrados no M1 e M2, com diminuição significativa no M3, com valores inferiores a 100.000 células somáticas/mL a partir deste momento. Perante os resultados podemos constatar alterações na composição, qualidade físico-química e celularidade durante os 15 primeiros dias de lactação. Onze amostras foram positivas ao California Mastitis Test, sendo observadas no M1 (36,36%), M2 (27,27%), M3 (18,19%), M5 (9,09%) e M7 (9,09%). Bactérias do gênero Streptococcus foram as mais frequentes isoladas. Entretanto, é necessário cautela na utilização de alguns métodos de diagnóstico de mastite, já que não há padronização dos mesmos para a espécie equina / Abstract: Given the importance of colostrum and milk of the mare on feeding and acquisition of immunity of newborn foals and their use in the human diet, the aim of the study was to evaluate the composition, physicochemical properties, microbiological profile and somatic cell count (SCC) of colostrum and milk of mares in early lactation. Samples were collected from 36 mares at seven moments: M1 = moment of partum, M2 = 12 hours, M3 = 24 hours, M4 = 36 hours, M5 = 48 hours, M6 = 11 days and M7 = 15 days post-partum. It was observed decreased levels of protein, fat, total solids and solids non-fat, and increased levels of lactose during the evaluated moments. There was also variation in pH, cryoscopic index and acidity during the moments, especially between samples of colostrum and transitional milk. The microbiological isolation occurred in 5.55% of the cultured samples, of which, 28.57% was non-hemolytic Streptococcus, 28.57% α-hemolytic Streptococcus, 21.43% Streptococcus equi, 14.29% Micrococcus spp. and 7.14% Bacillus spp. No animals showed clinical mastitis. Higher SCC values were found in M1 and M2, with a significant decrease in M3, with values less than 100,000 somatic cells / mL from this moment. Given these results, changes in the composition, physicochemical quality and cellularity during the first 15 days of lactation were observed. Eleven samples were positive on California Mastitis Test, being observed in M1 (36.36%), M2 (27.27%), M3 (18.19%), M5 (9.09%) and M7 (9.09%). Bacteria of the genera Streptococcus were the most frequently isolated. However, caution is needed in the use of some methods for diagnosis of mastitis, because there is no standardization in the equine species / Mestre

A mastite é o processo inflamatório da glândula mamária que constitui uma doença comum no setor pecuário leiteiro, evidenciado principalmente durante o período de lactação de vacas leiteiras e, cujos principais agentes etiológicos são o Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. e espécies de coliformes. Os protocolos de combate à mastite preconizam o uso de antibióticos, o que pode trazer riscos à saúde dos animais e humana. Dependendo do agente patogênico, esta estratégia é considerada frequentemente ineficiente e de alto custo, o que leva pesquisadores a buscarem alternativas à antibioticoterapia, testando princípios ativos homeopáticos, fitoterápicos e micro-organismos probióticos, que apresentam potencial como alternativa promissora para a terapia quimioterápica. As formulações contendo bactérias probióticas podem representar uma alternativa de baixo custo para o combate à mastite, com a vantagem de não estimular a resistência entre os patógenos. Desta forma, este estudo baseou-se na avaliação in vitro do potencial antimicrobiano de cepas de Lactobacillus frente a agentes patógenos causadores de mastite, bem como na avaliação in vivo da inocuidade de formulações contendo probióticos em vacas em lactação. Para tanto, 6 cepas de Lactobacillus, na forma isolada e na forma de pool foram avaliadas quanto à capacidade inibitória sobre Streptococcus agalactiae (cepas 1 e 2) por diferentes técnicas de difusão em ágar e co-cultura em meio líquido. A inibição pela técnica de co-cultura foi avaliada mediante determinação de células viáveis das cepas patogênicas por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR). De acordo com os resultados observados no estudo de inibição in vitro, foram preparadas formulações probióticas utilizando dois veículos diferentes, sendo uma emulsão (Formulação A) e outra utilizando um veículo de um medicamento comercial (Formulação B) adicionadas de células de Lactobacillus na forma isolada e na forma de pool. Estas formulações foram avaliadas quanto à inocuidade em 17 vacas separadas em grupos sob regime de 1 ordenha/dia (A e B1) e 2 ordenhas/dia (B2), mediante a aplicação das formulações A e B contendo 109 ou 106 células/dose. Ao longo do cada tratamento, foram avaliados parâmetros fisiológicos como temperatura do úbere, presença de hiperemia, inchaço e manifestação de dor, contagem de células somáticas (CCS), California Mastitis Test (CMT), bem como condutividade elétrica e aspecto do leite e avaliação microbiológica. O estudo de inibição em co-cultura mostrou que as cepas de Lactobacillus avaliadas inibiram o crescimento das cepas patogênicas, em níveis superiores a 75% após 72 horas de ensaio. Após 24 horas, os maiores níveis de inibição sobre S. agalactiae cepa 1 foram exercidos pelas cepas L. acidophilus ATCC 4356, L. fermentum ATCC 9338, com índices de inibição de 99,79% e 99,91%, respectivamente. Nas mesmas condições a inibição de S. agalactiae cepa 2 por L. acidophilus ATCC 4356 e L. delbrueckii UFV H2B20 foi de 86,7% e 79,5%, respectivamente. Estes resultados indicam o potencial de inibição das cepas de Lactobacillus estudadas sobre S. agalactiae causadora de mastite. Estudos de inocuidade demonstraram que as formulações probióticas (A e B) induziram reação inflamatória no úbere dos animais, confirmado pelo aumento significativo da condutividade elétrica do leite (CEL), CCS (p < 0,05), bem como do escore de CMT. As formulações testadas no presente estudo não se mostraram adequadas ao emprego terapêutico na cura da mastite, uma vez que no teste de inocuidade provocaram processos inflamatórios nas glândulas mamárias dos animais testados. / Bovine mastitis is a common disease in dairy farms, usually observed during lactation period in dairy cattle, whose main etiological agents are Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. and coliform species. Current protocols of mastitis therapy include the use of antibiotics, which may represent serious risks for both animal and human health. Depending on the pathogen specie, this strategy is often considered ineffective and highly expensive, what stimulates scientists to search for alternative treatments, including homeopathic or phytotherapic drugs or probiotic microorganisms, which may be a good alternative to chemotherapeutic drugs. Formulations containing probiotic bacteria may represent a low-cost alternative for mastitis treatment. The present study aimed to assess in vitro ability of Lactobacillus strains to inhibit mastitis pathogens growth, as well as in vivo assessment of the safety of formulations containing probiotics in cows with predisposition or affected by mastitis. Thus, six Lactobacillus strains were evaluated on their inhibitory ability over Streptococcus agalactiae (strains 1 and 2) by techniques of agar diffusion and co-culture in liquid medium. The effectiveness of the co-culture was evaluated by enumerating viable pathogen cells through quantitative polymerase chain reaction (qPCR). According to the results of in vitro study, two formulations were prepared based on a probiotic emulsion (formula A) and a commercial matrix (formula B) containing Lactobacillus cells (isolated or pool). Safety tests for the formulations were performed in 17 cows, which were separated into two groups under 1 milking/day (A and B1) and another group submitted to 2 milkings/day (B2), through the application of preparation A or preparation B containing 109 or 106 cells/dose. In each treatment, every cow was assessed on physiological parameters including temperature, presence of hyperemia, swelling and pain, somatic cell count (SCC), electrical conductivity and aspect of milk (color and clots/lumps formation) and microbiological evaluation. The results of the inhibition studies in co-culture showed that all Lactobacillus strains inhibited the growth of pathogenic strains, in at least 75% after 72 h of test. The highest levels of inhibition of S. agalactiae strain 1 were performed by strains L. acidophilus ATCC 4356 and L. fermentum ATCC 9338, at level of 99.79% and 96.70% after 24h, respectively. For the same period, the inhibition of S. agalactiae strain 2 by L. acidophilus ATCC 4356 and L delbrueckii UFV H2B20 was 86.7 % and 79.5%, respectively. These results showed the potential of Lactobacillus strains studied concerning to the inhibition of mastitis caused by Streptococcus agalactiae. Safety studies showed that both formulations evaluated induced inflammatory response in the udder of the animals, what was confirmed by significant raise on electric conductivity and SCC (p < 0,05) and CMT scores on milk. All formulations were considered inappropriate to be used in mastitis therapeutics, once they failed at safety tests, inducing mastitis on tested animals.