Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Resumo: Estudou-se 94 estirpes de Staphylococcus aureus obtidas do leite de vacas com mastite subclínica em duas propriedades rurais no estado de São Paulo. Essas estirpes foram caracterizadas fenotipicamente quanto a produção de biofilmes pelos testes do agar vermelho congo e pelo teste de aderência em microplacas e também foram genotipicamente identificadas pela presença dos genes icaA e icaD responsáveis pela produção do polissacarídeo de adesão intercelular. Além disso, todas as estirpes foram também submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Os resultados obtidos revelaram que 85% das estirpes produziram biofilmes "in vitro" para o teste do agar vermelho congo. No teste de aderência em placas foi verificado que 98,9% das estirpes produziram biofilme, devido a forte aderência nas placas de polietileno. A presença dos genes icaA e icaD foi encontrada em 95,7% das estirpes de S. aureus. No antibiograma foi observado que sete estirpes foram resistentes aos seguintes antimicrobianos: cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, gentamicina, oxacilina e penicilinaG, sendo que as maiores resistências ocorreram frente a gentamicina (2,2%) e a penicilina G (6,6%). Na avaliação dos testes fenotípicos com os genotípicos o teste de aderência em microplacas foi o mais sensível (100%), sendo indicado para identificar estirpes produtoras de biofilmes. Todos os testes, com exceção do antibiograma, foram estatisticamente significativos (p<0,05). / Abstract: 94 Staphylococcus aureus strains obtained from milk samples of cows suffering from subclinical mastitis in dairy herd, in two properties, in the state of São Paulo were evaluated. These strains were characterized by the in vitro slime production on the Congo red agar, biofilm formation and by the presence of icaA and icaD genes which are responsible for the intercellular adhesion. All strains were too subjected to in vitro susceptibility to 12 different antibiotics. The results revealed that 85% of isolates tested produced slime on the Congo red agar and 98,9% of the isolates produced biofilm in vitro by the adherence in sterile 96-well "U" bottom polystyrene tissue culture plates. 95,7% of isolates possessed the icaA and icaD genes. The results of in vitro antibiotic susceptibility assay to 12 different antibiotics revealed that seven isolates were resistance to follow antibiotics: clorphenicol, clindamicin, erythromycin, gentamicin, oxacillin and penicillin, the higher resistance occurred to penicillin (6,6%) and gentamicin (2,2%). In the study of phenotypic tests compared with genotypic test, the 96-well polystyrene tissue culture plates assay was the most sensitivity (100%) and is recommended with genotypic test for the investigation biofilm formation in S. aureus. All the tests, exception of antibiotic susceptibility assay were statistically significant (p<005). / Mestre

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Hélio Langoni / Banca: Vanerli Beloti / Resumo: Estudou-se a influência da mastite subclínica bovina causada por Staphylococcus aureus sobre a qualidade e a quantidade do leite secretado por quartos tratados e não tratados e avaliou-se a relação custo/benefício do tratamento na lactação. Amostras de leite obtidas de vacas em duas fases de lactação, classificadas como Fase 1 e Fase 2, com animais até o final do segundo mês de lactação e do início do terceiro até o nono mês, respectivamente, foram submetidas a análises bacteriológicas, físico-químicas e citológicas. A mastite subclínica influenciou as variações (p<0,05) nas contagens de células somáticas, acidez titulável, densidade, extrato seco desengordurado, teor de cloretos e soroproteínas em ambas as fases estudadas. Após o tratamento, as diferenças entre os quartos mamários tratados e os quartos que serviram como controle diminuíram para todas as características estudadas, com exceção da produção de leite, proteína total, proteína verdadeira e soroproteínas nas duas fases, e do teor de gordura e da caseína, em uma das fases. As taxas de cura das Fases 1 e 2 foram de 79,0% e 83,3% e as taxas de recuperação espontânea de 21,4% e 3,7%, respectivamente. Não houve aumento das receitas com a produção de leite após o tratamento da mastite subclínica bovina causada por S. aureus durante a lactação. / Abstract: The influence of bovine subclinical mastitis by Staphylococcus aureus upon milk quality and quantity of treated and untreated quarters and the treatment cost/benefit relation were studied. Bacteriologyc, physical-chemical and cellular analysis of milk samples from two stages of lactation, classified as Stage 1 and Stage 2, from animals until the second month of lactation and from animals of the third lactation month until the ninth lactation month, respectively, were performed. Subclinical mastitis influenced variations (p < 0.05) in the somatic cells count, titratable acidity, density, non fat solids, chloride levels and soroproteins in both lactation stages. After treatment, variations between treated mammary quarters and healthy quarters were reduced for all characteristics, except for milk production, total protein, true protein and soroproteins, in both stages, and for fat contents and casein in the Stage 1. The cure in the stages 1 and 2 were 79.0% and 83.3%, respectively. Spontaneous recovery rates were 21.4% and 3.7% for stages 1 and 2, respectively. There was no increase of the incomes with the milk production after bovine subclinical mastitis treatment by S.aureus in the lactation. / Doutor

Orientador: Paulo Roberto Rodrigues Ramos / Resumo: A mastite é um processo inflamatório da glândula mamária, aguda ou crônica, freqüente em ruminantes, sendo consideráveis as perdas econômicas por tal patologia, por desencadear inúmeros problemas sanitários para a pecuária leiteira. Portanto, a análise do polimorfismo dessas proteínas constitui-se numa importante ferramenta para o melhoramento genético do rebanho leiteiro. Neste trabalho, foram analisadas possíveis associações entre o polimorfismo bioquímico das hemoglobinas, transferrinas, albuminas séricas e beta lactoglobulinas e freqüência de mastite em vacas da raça Holandês, num rebanho controlado, mantidas em ambiente tropical. Embora não tenha sido constatada diferença significativa entre as freqüências de polimorfismo bioquímico das proteínas entre as duas populações estudadas, propõe-se a realização de novos estudos na área de biologia genética para que os dados que forem obtidos poderão ser empregados na orientação de programas de manejo e de melhoramento com vistas à resistência a mastite. / Abstract: Mastitis is an inflammatory process of the mammary gland, sharp or chronic; frequent in ruminant, being considerable the economical losses for such pathology, for unchaining countless sanitary problems for the livestock milk pan. Therefore, the analysis of polymorphism of those proteins is constituted of an important tool for the flock milkman's genetic improvement. In this work, possible associations were analyzed among the biochemical polymorphism of the hemoglobins, transferrins, serum albumins and beta lactoglobulins and mastitis frequency in cows of the Dutch race, in a controlled flock, maintained in tropical atmosphere. Although it has not been verified significant differences among the frequencies of biochemical polymorphism of the proteins among the two studied populations, intends the accomplishment of new studies in the area of genetic biology so that the data that be obtained can be used in the orientation of handling programs and of improvement with views to the resistance the mastitis. / Mestre

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Banca: Hélio Langoni / Banca: Elizabeth Oliveira da Costa Freitas Guimarães / Resumo: O presente trabalho objetivou o isolamento de Klebsiella pneumoniae do ambiente de sala de ordenha e do ambiente dos animais, incluindo a sala de pré-ordenha, piquetes e, em algumas propriedades os galpões de "free stall", do reto e membros posteriores dos animais, do leite do tanque de refrigeração e do leite dos tetos positivos ao teste do Califórnia Mastitis Test (CMT), pesquisar cepas produtoras de β-lactamases de espectro ampliado (ESβL) e, a partir da identificação clonal, verificar a semelhança entre as cepas. Em 28 (2,14%) amostras de leite coletadas dos animais foi detectada a presença de Klebsiella pneumoniae como patógeno responsável pela infecção intramamária (IMI). A partir de swabs ambientais, da pele dos animais e do leite oriundo do tanque de expansão das dez propriedades, foram isoladas 79 cepas de K. pneumoniae. Os resultados da prova de detecção fenotípica da produção de enzimas do tipo ESβL foram positivos em oito (7,47%) das cepas bacterianas isoladas. No Brasil ainda não há relatos de coliformes produtores destas enzimas oriundos de animais de produção, e no presente estudo uma das cepas foi isolada do tanque de expansão, representando um potencial perigo à saúde pública. Pelo resultado da PFGE, observou-se grande diversidade genética da bactéria dentro da propriedade e entre as propriedades. Demonstrou-se que patógenos ambientais multirresistentes estão presentes em rebanhos bovinos leiteiros, não apenas isolados de quadros de infecção intramamária como também de galpões de free stall, membros posteriores dos animais, sala de ordenha e tanque de expansão. Confirmou-se também, a alta variabilidade genética da K. pneumoniae em rebanhos bovinos leiteiros mesmo dentro de um mesmo rebanho, e a importância da PFGE como recurso na epidemiologia molecular / Abstract: The present study aimed the isolation of Klebsiella pneumoniae from the milk parlor and the animal's environment, including the pre milking room, paddocks and, in some properties the free stall, animal's rectum and hind limbs, bulk tank milk and from all teats positive to the California Mastitis Test (CMT), search for strains producers of extended spectrum β-lactamases (ESβL) and, by the clonal identification, verify if similarities between the strains ocurred. In 2.14% (28) of the milk samples collected from the animals it was detected the presence of Klebsiella pneumoniae as the pathogen responsible for the intramammary infection (IMI). From environmental swabs and bulk milk tank of the ten properties, it was isolated 79 strains of K. pneumoniae. The results of phenotypic detection of the ESβL enzymes production were positive in eight (7.47%) bacterial strains isolated. It is important to know that, in Brazil there are no reports of coliforms producers of these enzymes isolated from livestock animals, and in the present study one of the strains was isolated from the bulk tank milk, representing a potential hazard to public health. The results of PFGE showed high genetic diversity of the bacteria within and between the dairy farms. It was demonstrated that environmental multidrug resistant pathogens are present in dairy herds, isolated from intramammary infections cases, free stall parlors, animal's hindlimbs, milking parlor and bulk tank milk. This study also confirmed the high genetic diversity of K. pneumoniae in dairy herds within the same herd, and the importance of PFGE as a molecular epidemiology tool. Keywords: environment, extended-spectrum β-lactamases (ESβL), Klebsiella pneumoniae, mastitis, milk, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) / Mestre

Resumo: A ovinocultura vem se expandindo no Brasil nos últimos anos, e com isso começa-se a observar também um maior interesse para a produção de leite dessa espécie. Mesmo em países cuja produção leiteira é uma tradição de muitos anos, há uma deficiência de novas tecnologias e de pesquisas ligadas à produção de leite ovino. O leite de ovelha é um produto caro, com nichos de mercados e com excelentes perspectivas de crescimento no Brasil. Este trabalho teve como finalidade estudar aspectos de etio-epidemiologia referentes às vias de transmissão de patógenos na mastite ovina, e os aspectos de produção leiteira em animais com ou sem mastite, durante toda lactação. O experimento foi realizado na área de Produção de Ovinos da Fazenda Edgárdia, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - UNESP - Campus de Botucatu. Foram utilizadas 37 ovelhas em lactação, da raça Bergamácia, submetidas a ordenha mecânica diariamente, com manejo idêntico. Os animais foram acompanhados durante toda a lactação (8 semanas). Avaliou-se o índice de mastite através do Califórnia Mastitis Test (CMT) e o leite dos animais positivos foi realizada cultura microbiológica e também se realizou a cultura microbiológica na água utilizada para higienização das tetas e equipamentos de ordenha; nos insufladores (teteiras); nas mãos dos ordenhadores; no óstio das tetas e na orofaringe dos respectivos cordeiros para correlacionar os achados microbiológicos encontrados nas diferentes situações, com os obtidos de amostras de leite dos animais, com mastites subclínicas e clínicas. Foi avaliada a produção de leite durante a lactação dos animais, correlacionando-se o índice da mastite e o estágio de lactação. O índice de CMT positivos (+, ++ e +++) durante as 8 semanas de lactação variou entre 1,35% e 8,1% das tetas. / Abstract: Sheep farms have been expanding on the last years in Brazil, from this on a bigger interests on milk production of this species starts to grow. Even in countries which milk production is a tradition for years, there are deficits of new technologies and researches on the subject. Sheep milk is a expensive product that shows excellent perspectives onto the brazilian market. The aim of this work is to study the etio-epidemiology aspect which refers to the transmission pathways of sheep mastitis pathogenes, during the lactation period. The research was realized in the sheepraising center of Edgardia farm, of the Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - UNESP - Campus de Botucatu. Thirty seven lactating sheeps were used, Bergamácia breed, under daily milking machines, all of them under similar management. The animals were followed during the lactation period (eight weeks). Evaluation of mastitis rates through the California Mastitis Test (CMT) and for positive milk samples microbiology culture were done on the milk samples and on the water used for hygiene of teat and milking equipments; insufflators; workers hands; teats ostium; and mouth of youngs to correlate to microbiologic findings during diferent situations, with the ones found from milk samples of animals, with clinical and subclinical mastitis. The milk production was evaluated during lactation period, correlating the mastitis rates and the lactation stage. The rate of positive CMT (+, ++ and +++) through eight weeks of lactation varied between 1,35% and 8,1% os the teats. Microbiology cultures realized could indicate that the most common mastite agent in this flock of sheep was Staphylococcus spp. not agreeing with many other cited works that affirmed that Manhemia haemolytica the most common sheep mastitis agent. There was not found a significative correlation between milk production... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Paulo Francisco Domingues / Coorientador: Hélio Langoni / Banca: Luis Carlos de Souza / Banca: Graziela Barioni / Mestre

Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial de atividade antimicrobiana in vitro dos extratos de algumas plantas endêmicas do Cerrado, tais como Baccharis dracunculifolia, Cochlospermum regium, Croton antisyphiliticus, Eugenia dysenterica e Lippia sidoides, frente a estirpes de Staphylococcus aureus isoladas de leite de vacas com mastite e de fontes de contaminação envolvidas na epidemiologia da mastite bovina. Os extratos foram preparados a partir das partes aéreas e sistema radicular das plantas, utilizando os solventes metanol, hexano e clorofórmio, por processo de maceração estática. Para avaliação da atividade antimicrobiana foram aplicadas as técnicas de difusão em disco, microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (MBC). Dentre os extratos que apresentaram atividade bacteriostática, o extrato hexânico de Baccharis dracunculifolia destacou-se com CIM de 10 mg/mL sobre 45% das estirpes. Enquanto o extrato clorofórmico de Croton antisyphiliticus, com atividade bactericida, inibiu a multiplicação de 100% das estirpes de Staphylococcus aureus, com CIM variando entre 1,03mg/mL e 4,15 mg/mL. O estudo demonstra ainda, que tais extratos vegetais apresentaram resultados superiores aos obtidos com a gentamicina, princípio ativo muito utilizado no combate à mastite bovina, reforçando a importância das plantas medicinais como recurso terapêutico. / Abstract: The purpose of this study was to assess the potential of in vitro antimicrobial activity of the extracts of certain endemic plants in the Brazilian Cerrado, such as Baccharis dracunculifolia, Cochlospermum regium, Croton antisyphiliticus, Eugenia dysenterica and Lippia sidoides, against strains of Staphylococcus aureus isolated from the milk of cows with mastitis and sources of contamination involved in the epidemiology of bovine mastitis. The extracts were prepared by using aerial parts and radicular systems of the plants, using methanol, hexane and chloroform as solvents, extracted with static maceration. Techniques of disc diffusion, broth microdillution for the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) were used for the assessment of antimicrobial activity. Among the extracts with bacteriostatic activity, the hexanic extract of Baccharis dracunculifolia had a 10 mg/mL MIC against 45% of the strains, whereas the chloroformic extract of Croton antisyphiliticus, with bactericidal activity, inhibited the multiplication of 100% of the Staphylococcus aureus strains, whose MIC varied between 1.03mg/mL and 4.15 mg/mL. The study also demonstrated that the results of these plant extracts are superior to the results obtained with gentamicin, an active principle commonly used against bovine mastitis, reinforcing the importance of medicinal plants as a therapeutic resource. / Orientador:Luiz Augusto do Amaral / Coorientadora: Ana Maria Soares Pereira / Banca: Bianca Waléria Bertoni / Banca: Oswaldo Durival Rossi Junior / Mestre

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Carlos Augusto Fernandes de Oliveira / Banca: Nilson Roberti Benites / Banca: Helio Langoni / Resumo: o presente estudo teve como objetivo verificar a prevalência da mastite caprina causada por Staphylococcus spp. em três rebanhos do Estado de São Paulo, bem como conhecer as características fenotípicas e genotípicas das cepas isoladas. Por outro lado, através dos testes de susceptibilidade a antimicrobianos e da PCR-ribotipagem, pretendeu-se, também, verificar a relação epidemiológica existente entre as cepas de Staphylococcus spp. isoladas em amostras de leite, óstio do teto, lesão em pele do teto e ordenhadeira, assim como de mãos, tonsilas e fossas nasais de ordenhadores. A prevalência da mastite subclínica foi de 12,0%, 10,7% e 26,6% nos rebanhos pertencentes às três propriedades estudadas, nos quais Staphylococcus coagulase negativa foi o principal agente envolvido na etiologia dos casos. O teste de susceptibilidade a antimicrobianos revelou que 100% das cepas foram sensíveis à gentamicina, a neomicina e ao cefoperazone e, ainda, que a resistência frente a ampicilina e penicilina foi observada em 25,2% das cepas. A análise molecular revelou estreita relação entre as cepas isoladas de amostras de leite e óstio de teto. Cepas isoladas dos insufladores da ordenhadeira, assim como as de fossas nasais dos ordenhadores, têm participação na epidemiologia das mastites em cabras. A PCR-ribotipagem permitiu avaliar a relação epidemiológica existente entre as cepas isoladas de forma mais eficiente que o teste de susceptibilidade a antimicrobianos. A compreensão dessas relações epidemiológicas é necessária para a implementação de medidas eficazes no controle e prevenção das mastites em cabras. / Abstract: The present study aimed to investigate the prevalence of goat mastitis due to Staphylococcus spp. in three flocks from São Paulo State, as well as understand the phenotypic and genotypic characteristics of the strains isolated. Otherwise, epidemiological relationship between the strains isolated from milk, teat ends, skin lesions, milking units and milking personnel was investigated by the antimicrobial susceptibility and PCR-ribotyping. The prevalence of subclinical mastitis was 12,0%, 10,7% and 26,6% for the three flocks studied and coagulase negative Staphylococcus was the most prevalent agent isolated. Antimicrobial susceptibility test revealed 100% of sensibility to gentamicin, neomycin and cephoperazon and, in addition, the resistance to ampicillin and penicillin in 25,2% of the strains isolated. Molecular analysis showed close relationship between strains isolated from milk and teat ends. Strains isolated from milking units, as well as strains isolated from nasal swabs of the milking personnel, play an important role on goat mastitis epidemiology. PCR-ribotyping was more efficient than antimicrobial susceptibility test to evaluate the epidemiological relationship between the strains isolated. An understanding of these epidemiological relationships is necessary for the design of more effective mastitis control programs. / Doutor

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Hélio Langoni / Banca: Nilson Roberti Benites / Banca: Humberto Tonhati / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: Os exames de palpação, inspeção e teste da caneca de fundo escuro, bem como o California Mastitis Test (CMT) foram realizados em 735 quartos mamários de búfalas leiteiras pesquisa de alterações clínicas e subclínicas nos quartos e em suas respectivas secreções. Independentemente dos resultados encontrados, foram coletadas amostras de leite para análises microbiológicas e de contagem de células somáticas (CCS). O isolamento microbiológico foi realizado em ágar sangue de ovino 5% e em ágar MacConkey, com 72 horas de incubação em aerobiose a 37oC. Foram procedidas, a cada 24 horas, leitura e identificação dos isolamentos. A ocorrência de quadros de mastite clínica foi representada por um único caso (0,14%) entre os 735 quartos mamários analisados, ocorrendo na fase inicial da lactação e envolvendo microrganismos de origem ambiental (Morganella morganii, Enterobacter aerogenes). Foram considerados quadros de mastite subclínica aqueles com resultados positivos ao CMT acompanhados de exame microbiológico positivo. A freqüência observada de quadros de mastite subclínica entre os 734 quartos mamários estudados foi de 20,03%, dos quais isolou-se principalmente microrganismos contagiosos. Os resultados negativos ao CMT predominaram durante todo o estudo (69,07%), independente da fase de lactação ou estação do ano consideradas, tendo sido observados resultados positivos do exame microbiológico em 57,58% das amostras CMT negativas. Foi elevada a freqüência de microrganismos classificados como contagiosos entre as amostras de leite analisadas, independente da estação do ano e da fase de lactação, entre os quais prevaleceu o Corynebacterium spp. (47,67%), entre os 579 microrganismos pertencentes a 19 gêneros bacterianos crescidos em cultura pura ou em associação. Considerando-se a falta de homogeneidade entre as variâncias, as contagens de células... (Resumo completo, clicar acesso eletrônicio abaixo) / Abstract: A total of 735 mammary quarters from buffalo cows were submitted to inspection, palpation, strip cup test and California Mastitis Test (CMT) in order to diagnose clinical and subclinical mastitis. Independent of the observed results, milk samples were collected from each mammary quarter to microbiological exams and automatic somatic cell counts (SSC). Milk samples were inoculated in 5% ovine blood agar and MacConkey agar and incubated for 72 hours under 37oC and aerobic condition. Growth observations and identifications were performed every 24 hours. One (0,14%) out of 735 mammary quarters studied presented clinical mastitis. It occurred in first stage of lactation (0 to 60th day post calving) and environmental microorganisms were isolated (Morganella morganii, Enterobacter aerogenes). Mammary quarters presenting positive results to CMT and microbiological exams were considered as subclinical mastitis cases and these represented 20,03% among 734 studied samples. CMT negative results were the most frequent observed during the study (69,07%), independent of lactation stage or season of the year considered. Among these CMT negative milk samples, 57,58% were positive in microbiological exams. There was a high occurrence of contagious microorganisms among the 579 identified bacteria from 19 different genus, isolated in pure or in association. Corynebacterium spp. was the most prevalent (47,67%), in every lactation stage or season of the year. Considering the absence of a normal distribution, somatic cell counts were submitted to a logarithmic transformation, log2(CCS/100)+3, originating the transformed somatic cell count (TSCC). There were statistically significant differences between TCCS means from milk samples with positive (2,23) and negative (1,71) results to CMT. Such differences were also observed in milk... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Entre os diferentes tipos de patógenos que podem ser transmitidos pelo leite e produtos lácteos, Staphylococcus aureus é um dos mais importantes. Então, torna-se fundamental sua pesquisa em produtos lácteos destinados ao consumo humano. A presente tese investigou 100 amostras de leite do tanque de expansão de 50 fazendas leiteiras no Oeste de Santa Catarina, usando o método de cultivo em Baird-Parker, obtendo 42% de amostras positivas para a presença do agente. A análise das condições de manejo de ordenha não apresentou correlação com a presença do agente nas amostras de leite. A metodologia de referência para detecção de S. aureus recomenda a utilização do ágar Baird-Parker (BP). No entanto, outros meios de cultura podem produzir resultados em um tempo mais curto, como Petrifilm® Staph Express Count System (PSE) e da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Assim, este estudo também teve como objetivo comparar a eficiência desta metodologia para a detecção de S. aureus no leite dos tanques. Os resultados mostraram que a PCR - utilizando os primers Sa442- 1 e Sa442-2 - não apresenta limiares de Sensibilidade (53,8), Especificidade (36,5) VPP (23), VPN (69,2), Acurácia (41,0) e Coeficiente de Kappa (-0,067) que justifiquem a sua utilização como método de detecção de S. aureus em amostras de leite de tanque, quando comparado ao cultivo microbiológico em BP. Resultado semelhante foi obtido com o uso do método PSE (100; 14,9; 29,2; 100; 37; 0,083 respectivamente), cuja baixa Especificidade sugeriu incluir também outros estafilococos coagulase-positivos não S. aureus. Investigou-se também a presença de resíduos de antibióticos com Delvotest®. No entanto, não pôde ser estabelecida a correlação entre os resultados dos exames microbiológicos e PCR com os resultados de resíduos de antimicrobianos, devido à ausência desses resíduos nas amostras de leite avaliadas / Abstract: Among the different types of pathogens that can be transmitted by milk and dairy products, Staphylococcus aureus is one of the most important. Then, it becomes fundamental its research in dairy products for human consumption. The present thesis investigated 100 samples of bulk tank milk from 50 dairy farms in the western parto of Santa Catarina, by using the method of cultivation in Baird- Parker, obtaining 42% positive samples to the presence of the agent. The analysis of the management conditions of milking doesn't showed correlaction with the presence of S. aureus in the milk samples. The reference methodology for Staphylococcus aureus detection recommends the use of the Baird-Parker agar (BP). However, others culture media may produce results in a more shorter time, as Petrifilm® Staph Express Count System (PSE) and the Polymerase Chain Reaction (PCR). So, this study also aimed to compare the efficiency of the fore cited methodology for the detection of Staphylococcus aureus in bulk tank milk. The findings showed that PCR - using the primers Sa442-1 e Sa442-2 - doesn't show thresholds of sensitivity (53,8), specificity (36,5), PVP (23), PVN (69,2), Accuracy (41,0) and Kappa Coefficient (-0,067) that justify their use as a method of detection of S. aureus in bulk tank milk samples, when compared to microbiological cultivation in BP. Similar results were obtained with the use of PSE method (100; 14,9; 29,2; 100; 37; 0,083 respectivelly), whose low threshold of Specificity (14,9) suggested include also other staphylococci coagulase-positive other than S. aureus. In addition, antibiotic residues were investigated with Delvotest®. However, could not be established the correlation between the results of microbiological tests and PCR with the results of antimicrobial residues, due to the absence of these residues in the milk samples evaluated / Orientador: Paulo Francisco Domingues / Coorientador: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Hélio Langoni / Banca: Jose Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Adll Knackfuse Vaz / Banca: Nilson Roberti Benites / Doutor

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Luciano Menezes Ferreira / Banca: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Oswaldo Durival Rossi Junior / Banca: Angela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Resumo: A mastite bovina é a principal doença do gado leiteiro em todo o mundo, devido a sua elevada ocorrência, aos prejuízos econômicos que acarreta aos produtores e à perda da qualidade do leite. Dentre os agentes da mastite, o Staphylococcus aureus é o mais frequentemente isolado. Sabe-se que o conhecimento do perfil molecular deste microrganismo é de fundamental importância para uma melhor compreensão dos estudos epidemiológicos de dispersão deste patógeno nas propriedades rurais. Sendo assim, durante o período de janeiro a abril de 2009, 222 vacas lactantes pertencentes a 12 propriedades rurais situadas no Município de Sacramento-MG foram submetidas ao California Mastitis Test (CMT). Foram colhidas amostras de leite dos quartos reagentes ao CMT, assim como do leite produzido em cada propriedade rural e do leite de conjunto das 12 propriedades contido em dois tanques de expansão comunitários. Paralelamente, foram colhidas, também, amostras dos óstios papilares, dos latões, dos baldes, dos coadores, dos insufladores das ordenhadeiras, das mãos dos ordenhadores, da superfície dos tanques de expansão, da tubulação auxiliar no transvase do leite, da água utilizada no processo de produção e da água utilizada para higienização dos tanques comunitários. A partir das 446 amostras colhidas nos diversos pontos, 244 estirpes foram isoladas e caracterizadas bioquimicamente como estafilococos coagulase-positivos. O fragmento de DNA cromossômico específico da espécie de S. aureus foi amplificado em 106 estirpes, das quais 103 foram submetidas à eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os pontos de colheita de amostras que apresentaram maior frequência de isolamento de estirpes de Staphylococcus aureus foram os óstios papilares (31,1%), o leite das vacas reagentes ao CMT (21,7%), os insufladores das ordenhadeiras mecânicas (21,7%), o leite dos latões (6,6%)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bovine mastitis is a main disease in milk cattle worldwide. Staphylococcus aureus is the most frequently isolated among mastitis agents. The microorganism's molecular profile is of paramount importance for a better understanding of epidemiologic studies of these pathogens on farms and ranches. Two hundred twenty-two cows on 12 farms in the municipality of Sacramento-MG, Brazil were tested by the California Mastitis Test (CMT) between January and April 2009. Milk samples were collected from four CMT reagents, from the milk produced on each farm and from milk collectively collected from the 12 farms and maintained in two community bulk tanks. At the same time samples of papillary ostia were collected from milk pails, cans, sieves, milking machine insufflators, milkers' hands, from the water used on the 12 farms and from the two community bulk tanks. Two hundred and forty-four strains among the 446 samples collected from several sites were isolated and biochemically characterized as positive coagulase Staphylococcus. Chromosome DNA fragment, specific to S. aureus, was amplified in 106 strains. Further, when 103 S. aureus strains underwent pulsed field gel electrophoresis (PFGE), the samples' collection sites with the highest isolation frequency of S. aureus strains were papillary ostia (31.1%), milk of cows which reacted to CMT (21.7%), the insufflators of milking machines (21.7%), milk in pails (6.6%) and milk in the community bulk tanks (5.6%). Since 32 different pulsotypes were identified, genetic heterogeneity existed among the 106 S. aureus isolated strains. Pulsotype 1 had the highest similarity among the S. aureus isolated strains at the different sites of the milk production flowchart. Since highest isolation frequency of pulsotype 1 of S. aureus strains were papillary ostia (10.6%), milk of cows which reacted to CMT (5.8%), the insufflators of milking machines (3.8%)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor