Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-17Bitstream added on 2014-06-13T20:49:49Z : No. of bitstreams: 1 martins_dr_me_botfm.pdf: 1423175 bytes, checksum: c2ecf3527dbbca2e6ab24a1b745d5696 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Gap / A eficacia da vacina BCG (Mycobacterium bovis atenuado) contra tuberculose pulmonar apresenta grande variabilidade em diferentes populacoes. Dentre as hipoteses sugeridas, prevalece a que atribui esta variacao as interacoes entre a vacina e micobacterias presentes no meio ambiente. Estudos tem demonstrado que antigenos expressos pelo BCG estao conservados no M. avium, corroborando com a hipotese de que a exposicao as micobacterias ambientais gera resposta imune cruzada que interfere com a eficacia do BCG. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da exposicao previa de camundongos ao M. avium inativado na resposta imune e eficacia protetora induzidas pela vacina DNAhsp65 (pVAXhsp65) na tuberculose experimental murina. Na primeira etapa, grupos de camundongos BALB/c femeas foram injetados com diferentes doses (0,08x106, 4x106 e 200x106) de M. avium inativado termicamente, pela via subcutanea. Apos tres semanas, os animais foram imunizados com DNAhsp65 por via intramuscular. Os animais receberam tres doses de DNA (100ug/intervalos de 15 dias). Grupos controle receberam somente M. avium, vacina (pVAXhs65), vetor (pVAX) ou solucao salina esteril. A producao de citocinas e os niveis de anticorpos foram determinados por ELISA. Na segunda etapa, os animais foram inicialmente sensibilizados por via subcutanea com 200x106 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de M. avium inativado e depois imunizados com tres doses de pVAXhsp65 (100ug/intervalos de 15 dias) por via intramuscular. Os grupos controle foram injetados com salina, pVAX (4 doses), pVAXhsp65 (4 doses), M. avium, M. avium mais pVAX (3 doses) ou M. avium mais pVAXhsp65 (3 doses). Quinze dias apos a ultima dose de DNA os animais foram infectados com 1x104 UFC de M. tuberculosis, H37Rv, pela via intratraqueal. Trinta dias apos o desafio os animais foram sacrificados e a carga bacteriana determinada pelo numero de UFC nos pulmoes. Cortes histopatologicos dos pulmoes tambem foram analisados. / The efficacy of BCG vaccine (attenuated Mycobacterium bovis) against pulmonary tuberculosis varies enormously in different populations. The prevailing hypothesis attributes this variation to interactions between the vaccine and mycobacteria common in the environment. Studies have revealed that most protective antigens expressed by the antituberculous vaccine are conserved in M. avium, supporting the hypothesis that exposure to environmental mycobacteria generates a crossreactive immune response that interferes with BCG efficacy.The objective of this investigation was to evaluate the effect of a prior exposure to heat killed M. avium on both, the immune response and the protective efficacy induced by a DNAhsp65 vaccine (pVAXhsp65) in experimental murine tuberculosis. To evaluate the effect on the immune response, BALB/c female mice were, initially, injected with distinct doses (0,08x104, 4x106 and 200x106) of heat killed M. avium by subcutaneous route. Three weeks later the animals were immunized with 3 doses of DNAhsp65 by intramuscular route (100æg / 15 days apart). Control groups received only M. avium, vaccine (pVaxhsp65), vector (pVax) or saline solution. Cytokine production and antibody levels were determined by ELISA. To evaluate the effect on the protective efficacy, animals were initially, sensitized with 2x108 heat killed CFU of M. avium by subcutaneous route and then immunized with 3 doses of pVAXhsp65 (100æg/15 days apart) by intramuscular route. Control groups were injected with saline, pVAX (4 doses), pVAXhsp65 (4 doses), M. avium, M. avium plus pVAX (3 doses) or M. avium plus pVAXhsp65 (3 doses). Fifteen days after last DNA dose the animals were infected with 1x104 viable CFU of H37Rv M. tuberculosis by intratracheal route. Thirty days after challenge the animals were sacrificed and the bacterial burden was determined by the number of CFU in the lungs. Lung histological sections were also analysed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:31:20Z : No. of bitstreams: 1 buchi_at_me_botfm.pdf: 494324 bytes, checksum: 8a45f84c2c6a750412659b4b78ff10f4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As serpentes do gênero Crotalus durissus terrificus possuem em seu veneno diversas substâncias, entre elas uma serinoprotease com atividade trombina símile denominada giroxina, a qual é capaz de coagular o fibrinogênio plasmástico, promovendo a formação de fibrina. O objetivo do estudo foi a purificação e caracterização estrutural da enzima giroxina de Crotalus durissus terrificus. Para tanto, foram utilizadas métodos cromatográficos de gel filtração em Sephadex G75 e afinidade em Benzamidina-Sepharose 6B para isolamento e purificação; eletroforéticos de SDSPAGE 12% reduzido e de seqüenciamento do N-terminal da enzima purificada para identificação e avaliação do grau de pureza; clonagem e expressão do cDNA da glândula venenífera por RT-PCR e testes de cristalização. A modelagem teórica molecular foi realizada a partir de ferramentas de bioinformática baseadas em análises comparativas de outras serinoproteases depositadas no NCBI (National Center for Biotechnology Information). O seqüenciamento N-terminal da giroxina purificada, produziu uma proteína de cadeia única com massa molecular aproximada de 30 KDa e sua seqüência completa de cDNA apresentou 714 pb os quais codificaram uma proteína completa contendo 238 aminoácidos. Foram obtidos cristais a partir das soluções nos 2 e 5 do Kit Crystal Screen® 2 e 1 respectivamente, verificando-se sua constituição protéica. Para os alinhamentos múltiplos da sequência molde giroxina símile B2.1 com outras seis serinoproteases derivadas de veneno de serpentes (SVSPs) indicou-se a preservação de resíduos de cisteína e de seus principais elementos de estruturais (α-hélices, β-barris e loops).Evidenciou-se a localização da tríade catalítica nos aminoácidos His57, Asp102, Ser198 e os sítios de atividade especifica S1 e S2 nos aminoácidos Thr193 e Gli215 respectivamente... / The venom of snakes Crotalus durissus terrificus genus have in their various substances, including a serinoproteases with thrombin-like activity called gyroxin, which clot the plasmatic fibrinogen and promote the fibrin formation. The objective of this study was purificate and characterize structurally the gyroxin enzyme from Crotalus durissus terrificus. For this, we used chromatographic gel filtration with Sephadex G75 and affinity benzamidine-Sepharose 6B for isolation and purification, SDS-PAGE 12% in reduce conditions for assessment purity, N-terminal sequencing of purified enzyme for identification and assessment purity; the cloning and expression of cDNA from venom gland by RT-PCR and crystallization tests. The theoretical molecular modeling was performed with bioinformatics tools based on comparative analysis of other serinoproteases deposited in the NCBI (National Center for Biotechnology Information). The N-terminal sequencing purified gyroxin protein produced a single chain with a molecular mass of approximately 30 kDa and its full-length cDNA had 714 bp which encoded a complete protein containing 238 amino acids. Crystals were obtained from the solutions 2 and 5 of the Crystal Screen Kit ® 2 and 1 respectively and was verificated a protein constitution. For multiple sequence alignments such gyroxin-like B2.1 with six other serinoproteases derived from snake venom (SVSPs) indicated the preservation of cysteine residues and its main structural elements (α helices, β-barrel and loops). Identificated the amino acids positions in the catalytic triad His57, Asp102, Ser198 and sites of specific activity in S1 and S2 amino acids Thr193 and Gli215 respectively. The recognition area of fibrinogen cleavage in SVSPs to template sequence gyroxin B2.1 was located in residues Arg60, Arg72, Gln75, Arg81, Arg82, Lis85, Glu86, Lis87... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:55Z : No. of bitstreams: 1 000865143.pdf: 1222502 bytes, checksum: 6d7d7cfc6cf6e5880416ce873a338cad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Muitas espécies de protozoários podem causar gastroenterite aguda ou crônica em seres humanos e são altamente prevalentes nas populações residentes nos países em desenvolvimento, onde a transmissão é favorecida devido a condições precárias de higiene e escassa disponibilidade de água potável. No entanto, a infecção assintomática e o poliparasitismo também são comumente observados nessas populações. Neste trabalho, investigou-se a prevalência de protozoários intestinais em duas colônias de pescadores, Porto Said (PS) e Santa Maria da Serra (SM), situadas ao longo do rio Tietê, no Estado de São Paulo. As colônias não dispõem de serviços públicos básicos como: vias públicas, fornecimento de água e luz e saneamento básico. Todos os colonos (n = 88 em PS, e n = 38 em SM) coletaram três amostras de fezes, e todos eram assintomáticos no momento da coleta. Para obter informações sobre as possíveis vias de transmissão, amostras fecais de 49 cães (38 de PS e 11 de SM) e 28 amostras de água do rio foram coletadas (16 de PS e 12 de SM). As amostras fecais humanas e caninas foram analisadas por microscopia e PCR para detectar e caracterizar os protozoários Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis e Cryptosporidium spp. Diante dos resultados obtidos, Blastocystis spp. foi o parasita mais prevalente nas amostras humanas (45,4% em PS e 71% em SM), seguido por D. fragilis (13,6% em PS e 18,4% em SM) e G. duodenalis (18,2% em PS e 7,9% em SM), já Cryptosporidium spp. não foi detectado na população humana. Além disso, G. duodenalis foi detectado em quatro cães (10,5%) em PS e dois cães (18,2%) em SM, enquanto que um único cão foi detectado com Cryptosporidium canis. Nas 28 amostras de água previamente processadas pelos métodos de filtração e separação imunomagnética e examinadas por microscopia de fluorescência, oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia não foram... / Several species of protozoa cause acute or chronic gastroenteritis in humans, worldwide. The burden of disease is particularly high among children living in developing areas of the world, where transmission is favored by lower hygienic standards and scarce availability of safe water. However, asymptomatic infection and polyparasitism are also commonly observed in poor settings. Here, we investigated the prevalence of intestinal protozoa in two small fishermen villages, Porto Said (PS) and Santa Maria da Serra (SM), situated along the river Tietê in the State of São Paulo, Brazil. The villages lack basic public infrastructures and services, such as roads, public water supply, electricity and public health services. Multiple fecal samples were collected from 88 individuals in PS and from 38 individuals in SM, who were asymptomatic at the time of sampling and had no recent history of diarrheal disease. To gain insights into potential transmission routes, 49 dog fecal samples (38 from PS and 11 from SM) and 28 river water samples were also collected. All samples were tested by microscopy and PCR was used to genotype isolates of Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis and Cryptosporidium spp. By molecular methods, the most common human parasite was Blastocystis spp. (prevalence, 45% in PS and 71% in SM), followed by D. fragilis (13.6% in PS, and 18.4% in SM) and G. duodenalis (18.2% in PS and 7.9% in SM); Cryptosporidium spp. were not detected. Further, G. duodenalis was found in 4 dogs (10.5%) in PS and 2 dogs (18.2%) in SM, whereas a single dog was found infected with Cryptosporidium canis. River water samples processed by filtration and immunomagnetic separation and examined by fluorescent microscopy, were negative for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts. Sequencing of the barcoding region of the small subunit ribosomal gene revealed large genetic variation among Blastocystis isolates, with subtypes (STs) that ... / FAPESP: 11/52100-3

Orientador: Alexandrina Sartori / Banca: Jussara Marcondes Machado / Banca: Vânia Luiza Deperon Bonato / Resumo: A eficacia da vacina BCG (Mycobacterium bovis atenuado) contra tuberculose pulmonar apresenta grande variabilidade em diferentes populacoes. Dentre as hipoteses sugeridas, prevalece a que atribui esta variacao as interacoes entre a vacina e micobacterias presentes no meio ambiente. Estudos tem demonstrado que antigenos expressos pelo BCG estao conservados no M. avium, corroborando com a hipotese de que a exposicao as micobacterias ambientais gera resposta imune cruzada que interfere com a eficacia do BCG. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da exposicao previa de camundongos ao M. avium inativado na resposta imune e eficacia protetora induzidas pela vacina DNAhsp65 (pVAXhsp65) na tuberculose experimental murina. Na primeira etapa, grupos de camundongos BALB/c femeas foram injetados com diferentes doses (0,08x106, 4x106 e 200x106) de M. avium inativado termicamente, pela via subcutanea. Apos tres semanas, os animais foram imunizados com DNAhsp65 por via intramuscular. Os animais receberam tres doses de DNA (100ug/intervalos de 15 dias). Grupos controle receberam somente M. avium, vacina (pVAXhs65), vetor (pVAX) ou solucao salina esteril. A producao de citocinas e os niveis de anticorpos foram determinados por ELISA. Na segunda etapa, os animais foram inicialmente sensibilizados por via subcutanea com 200x106 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de M. avium inativado e depois imunizados com tres doses de pVAXhsp65 (100ug/intervalos de 15 dias) por via intramuscular. Os grupos controle foram injetados com salina, pVAX (4 doses), pVAXhsp65 (4 doses), M. avium, M. avium mais pVAX (3 doses) ou M. avium mais pVAXhsp65 (3 doses). Quinze dias apos a ultima dose de DNA os animais foram infectados com 1x104 UFC de M. tuberculosis, H37Rv, pela via intratraqueal. Trinta dias apos o desafio os animais foram sacrificados e a carga bacteriana determinada pelo numero de UFC nos pulmoes. Cortes histopatologicos dos pulmoes tambem foram analisados. / Abstract: The efficacy of BCG vaccine (attenuated Mycobacterium bovis) against pulmonary tuberculosis varies enormously in different populations. The prevailing hypothesis attributes this variation to interactions between the vaccine and mycobacteria common in the environment. Studies have revealed that most protective antigens expressed by the antituberculous vaccine are conserved in M. avium, supporting the hypothesis that exposure to environmental mycobacteria generates a crossreactive immune response that interferes with BCG efficacy.The objective of this investigation was to evaluate the effect of a prior exposure to heat killed M. avium on both, the immune response and the protective efficacy induced by a DNAhsp65 vaccine (pVAXhsp65) in experimental murine tuberculosis. To evaluate the effect on the immune response, BALB/c female mice were, initially, injected with distinct doses (0,08x104, 4x106 and 200x106) of heat killed M. avium by subcutaneous route. Three weeks later the animals were immunized with 3 doses of DNAhsp65 by intramuscular route (100æg / 15 days apart). Control groups received only M. avium, vaccine (pVaxhsp65), vector (pVax) or saline solution. Cytokine production and antibody levels were determined by ELISA. To evaluate the effect on the protective efficacy, animals were initially, sensitized with 2x108 heat killed CFU of M. avium by subcutaneous route and then immunized with 3 doses of pVAXhsp65 (100æg/15 days apart) by intramuscular route. Control groups were injected with saline, pVAX (4 doses), pVAXhsp65 (4 doses), M. avium, M. avium plus pVAX (3 doses) or M. avium plus pVAXhsp65 (3 doses). Fifteen days after last DNA dose the animals were infected with 1x104 viable CFU of H37Rv M. tuberculosis by intratracheal route. Thirty days after challenge the animals were sacrificed and the bacterial burden was determined by the number of CFU in the lungs. Lung histological sections were also analysed. / Mestre

Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Lucilena Delazari dos Santos / Banca: Ricardo de Oliveira / Resumo: A leishmaniose visceral americana, causada pelo parasita intracelular Leishmania (L) infantum chagasi, é transmitida pela picada do mosquito Lutzomyia longipalpis. O tratamento é realizado à base de quimioterápicos clássicos, que desenvolvem importantes efeitos colaterais no hospedeiro. A prospecção de novas drogas é o grande desafio mundial do momento. Assim, este estudo realizado in vitro teve por objetivos avaliar o efeito anti-leishmania de frações do veneno de Crotalus durissus terrificus sobre as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi. Do veneno total foram extraídas e purificadas duas frações denominadas respectivamente de fosfolipase A2 (PLA2) e peptídica. Além disso, formas promastigotas e macrófagos infectados por amastigotas foram expostos a uma diluição seriada de PLA2 e da fração peptídica em intervalos que variaram entre 1,5625 μg/mL e 200 μg/mL. Ambas demonstraram atividade contra as formas promastigotas de Leishmania (L.) infantum chagasi variando de acordo com as doses testadas e o tempo de incubação. O ensaio MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina) das frações contra as formas promastigotas mostrou IC50 de 52,07 μg /mL para a PLA2, e uma IC50 de 16,98 μg/mL para a fração peptídica. O ensaio MTT para se avaliar a citotoxicidade nos macrófagos peritoneais mostrou uma IC50 de 98 μg/mL para PLA2 e uma IC50 16,98 μg/mL para a fração peptídica. Nos macrófagos peritoneais infectados pelas formas amastigotas de Leishmania (L) infantum chagasi a PLA2 estimulou o crescimento dos parasitas; em doses mais elevadas foi capaz de controlar em 23% o seu crescimento. A fração peptídica controlou 43% do crescimento do parasita intracelular na dose de 16,98 μg/mL., mostrando-se tóxica acima desta doe para os macrófagos. Ambas as frações estimularam a produção de H2O2 pelos macrófagos, mas apenas PLA2 foi capaz de estimular a produção ... / Abstract: American visceral leishmaniasis is caused by the intracellular parasite Leishmania ( L ) infantum chagasi , and transmitted by sand fly Lutzomyia longipalpis. Treatment is based on classical chemotherapeutics with significant side effects and the search for new drugs is the greatest global challenge. Thus , this in vitro study aimed to evaluate the anti - leishmanicidal effect of Crotalus durissus terrificus venom's fractions on promastigotes and amastigotes of Leishmania (L) infantum chagasi. The whole venom were purified two fractions called respectively phospholipase A2 (PLA2) and peptide. Furthermore, promastigotes and macrophage infected per amastigotes were exposed to serial dilutions of the peptide fraction and PLA2 at intervals varying between 1.5625 μg/mL and 200 μg/mL. Both showed activity against promastigotes and varies according to the tested doses and the time of incubation. The MTT assay (3-(4,5-Dimethyl-1,3- thiazol-2-yl)-3,5-diphenyl-2H-tetrazol-3-ium bromide) against promastigotes showed IC50 of 52.07 μg/mL to PLA2, and 16.98 μg/mL for peptide venom's fraction. The MTT assay to evaluate the cytotoxicity in peritoneal macrophages showed an IC50 of 98 μg/mL for PLA2 and 16.98 μg/ml for peptide. In peritoneal macrophages infected by Leishmania (L) infantum chagasi amastigotes the PLA2 stimulated growth of parasites, at higher doses was able to control 23 % growth. The peptide fraction controlled 43 % of the intracellular parasite growth at a dose of 16.98 μg/mL, showing up this dose toxic to macrophages . Both fractions stimulated H2O2 production by macrophages but only PLA2 was able to stimulate NO production . The results encourage further studies to describe the metabolic pathways involved in cell death , as well as the prospect of molecules with antiparasitic activity present in the peptide fraction of Crotalus durissus terrificus / Mestre

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Patrícia Yoshida Faccioli Martins / Banca: Amanda Keller Siqueira / Banca: Elizabeth Oliveira da Costa Freitas Guimarães / Resumo: Os estafilococos coagulase negativa são patógenos associados a infecções nosocomiais, principalmente bacteremia e sepse. A oxacilina é uma das alternativas de escolha no tratamento das infecções causadas por Staphylococcus spp., contudo, a resistência a esta droga têm se tornado um grande problema nas últimas décadas. O objetivo deste estudo foi caracterizar a sensibilidade à oxacilina em amostras de ECN isoladas de pacientes do Hospital das Clínicas (HC) da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB) por diferentes métodos, determinar a concentração inibitória mínima a antimicrobianos, a triagem de amostras com sensibilidade intermediária à vancomicina e a caracterização do perfil clonal de amostras de MRCoNS isoladas de hemoculturas. Um total de 160 amostras foram analisadas quanto a resistência à oxacilina por meio da técnica de difusão da droga em ágar com disco de oxacilina e cefoxitina, teste de triagem em Ágar Mueller-Hinton com 4 μg/mL de oxacilina e 4% de NaCl, E-test, detecção do gene mecA, e determinação da sensibilidade intermediária a vancomicina em ágar BHI com 4 μg/mL e com 6 μg/mL de vancomicina, além da caracterização do perfil epidemiológico pela tipagem do cassete cromossômico mec (SCCmec) e análise clonal por PFGE de 59 amostras de S. epidermidis e 07 amostras de S. haemolyticus isoladas no período de 2002 a 2009. Um total de 74,4% das amostras foram positivas para o gene mecA. A sensibilidade do método de difusão com disco de oxacilina e da técnica de E-test foi de 99,1% e com especificidade de 90,1%. O disco de cefoxitina apresentou 100% de sensibilidade e a mesma especificidade descrita para o disco de oxacilina. O método de triagem apresentou 94,2% de sensibilidade e a melhor taxa de especificidade com 93,2%. Houve diferença entre as amostras MRCoNS... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Oxacillin is one of the alternatives of choice in the treatment of infections caused by Staphylococcus spp. However, resistance to this drug has become a major problem in recent decades. The aim of this study was to characterize the sensitivity to oxacillin in CNS samples isolated from patients at the School of Medicine University Hospital (HCFMB) - UNESP by different methods, to determine antimicrobial minimum inhibitory concentration, the screening of samples with intermediate sensitivity to vancomycin and characterization of the clonal profile of MRCoNS samples isolated from blood cultures. A total of 160 samples were analyzed for resistance to oxacillin by the drug diffusion technique in agar with oxacillin and cefoxitin, a screening test on Mueller-Hinton agar with 4 μg/mL of oxacillin and 4% NaCl, E-test, mecA gene detection, and determination of intermediate susceptibility to vancomycin in BHI agar with 4 μg/mL and 6 μg/mL of vancomycin, and characterizing the epidemiological profile by typing the cassette chromosome mec (SCCmec) and clonal analysis by PFGE a total of 59 samples of S. epidermidis and 07 samples of S. haemolyticus isolated in the period 2002 to 2009. A total of 74.4% of the samples were positive for mecA. The sensitivity of the oxacillin disk diffusion and E-test technique was 99.1% and specificity 90.1%. The cefoxitin disk showed 100% sensitivity and specificity reported for the same oxacillin disc. The screening method showed 94.2% sensitivity and specificity with the best rate of 93.2%. There were differences between samples when analyzed MSCoNS MRCoNS and the minimum inhibitory concentration (MIC), with higher levels of MIC in the group MRCoNS, and higher rates of multidrug resistance. None of the samples showed resistance or heteroresistant to vancomycin, however, 10 samples grown... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: As serpentes do gênero Crotalus durissus terrificus possuem em seu veneno diversas substâncias, entre elas uma serinoprotease com atividade trombina símile denominada giroxina, a qual é capaz de coagular o fibrinogênio plasmástico, promovendo a formação de fibrina. O objetivo do estudo foi a purificação e caracterização estrutural da enzima giroxina de Crotalus durissus terrificus. Para tanto, foram utilizadas métodos cromatográficos de gel filtração em Sephadex G75 e afinidade em Benzamidina-Sepharose 6B para isolamento e purificação; eletroforéticos de SDSPAGE 12% reduzido e de seqüenciamento do N-terminal da enzima purificada para identificação e avaliação do grau de pureza; clonagem e expressão do cDNA da glândula venenífera por RT-PCR e testes de cristalização. A modelagem teórica molecular foi realizada a partir de ferramentas de bioinformática baseadas em análises comparativas de outras serinoproteases depositadas no NCBI (National Center for Biotechnology Information). O seqüenciamento N-terminal da giroxina purificada, produziu uma proteína de cadeia única com massa molecular aproximada de 30 KDa e sua seqüência completa de cDNA apresentou 714 pb os quais codificaram uma proteína completa contendo 238 aminoácidos. Foram obtidos cristais a partir das soluções nos 2 e 5 do Kit Crystal Screen® 2 e 1 respectivamente, verificando-se sua constituição protéica. Para os alinhamentos múltiplos da sequência molde giroxina símile B2.1 com outras seis serinoproteases derivadas de veneno de serpentes (SVSPs) indicou-se a preservação de resíduos de cisteína e de seus principais elementos de estruturais (α-hélices, β-barris e loops).Evidenciou-se a localização da tríade catalítica nos aminoácidos His57, Asp102, Ser198 e os sítios de atividade especifica S1 e S2 nos aminoácidos Thr193 e Gli215 respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The venom of snakes Crotalus durissus terrificus genus have in their various substances, including a serinoproteases with thrombin-like activity called gyroxin, which clot the plasmatic fibrinogen and promote the fibrin formation. The objective of this study was purificate and characterize structurally the gyroxin enzyme from Crotalus durissus terrificus. For this, we used chromatographic gel filtration with Sephadex G75 and affinity benzamidine-Sepharose 6B for isolation and purification, SDS-PAGE 12% in reduce conditions for assessment purity, N-terminal sequencing of purified enzyme for identification and assessment purity; the cloning and expression of cDNA from venom gland by RT-PCR and crystallization tests. The theoretical molecular modeling was performed with bioinformatics tools based on comparative analysis of other serinoproteases deposited in the NCBI (National Center for Biotechnology Information). The N-terminal sequencing purified gyroxin protein produced a single chain with a molecular mass of approximately 30 kDa and its full-length cDNA had 714 bp which encoded a complete protein containing 238 amino acids. Crystals were obtained from the solutions 2 and 5 of the Crystal Screen Kit ® 2 and 1 respectively and was verificated a protein constitution. For multiple sequence alignments such gyroxin-like B2.1 with six other serinoproteases derived from snake venom (SVSPs) indicated the preservation of cysteine residues and its main structural elements (α helices, β-barrel and loops). Identificated the amino acids positions in the catalytic triad His57, Asp102, Ser198 and sites of specific activity in S1 and S2 amino acids Thr193 and Gli215 respectively. The recognition area of fibrinogen cleavage in SVSPs to template sequence gyroxin B2.1 was located in residues Arg60, Arg72, Gln75, Arg81, Arg82, Lis85, Glu86, Lis87... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Benedito Barravieira / Coorientador: Marcos R. M. Fontes / Banca: Patrick Jack Spencer / Banca: Andreimar Martins Soares / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-15T19:47:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_Maria Paula Gomes.pdf: 2034473 bytes, checksum: 405247549d22cee3742048849e17a9f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-01-24T11:33:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Maria Paula Gomes.pdf: 2034473 bytes, checksum: 405247549d22cee3742048849e17a9f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-01-24T11:33:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Maria Paula Gomes.pdf: 2034473 bytes, checksum: 405247549d22cee3742048849e17a9f0 (MD5) Previous issue date: 2007-03-09 / Grande parte dos sistemas de vigilância epidemiológica implantados consiste em modelos passivos de notificação de agravos. Todavia, os casos notificados são, em geral, aqueles clinicamente mais exuberantes e, conseqüentemente, mais graves, o que descaracteriza o processo de vigilância. A abordagem sindrômica surge, dentro deste contexto, com o objetivo de orientar a conduta clínica, diagnóstica e terapêutica, diante de doenças cujos sinais e sintomas parecem indistinguíveis a priori, e requerem o apoio de uma rede de laboratórios para o diagnóstico etiológico preciso. Em 1998, em Manaus (Amazonas), os países amazônicos, coordenados pela Organização Pan-Americana da Saúde, implantaram uma Rede de Vigilância de Doenças Emergentes da Amazônia, na qual a vigilância sindrômica seria uma das recomendações para o aprimoramento das ações de vigilância. Entretanto, apesar de ser uma estratégia bastante promissora para aplicação em saúde pública, a VS implica investimentos vultuosos e ainda requer estudos para avaliar sua real efetividade, equivalência ou superioridade em relação ao método convencional. Assim, o presente estudo, realizado em Manaus, teve por objetivo descrever e analisar os modelos de abordagem sindrômica para doenças febris agudas, implantados em uma unidade terciária de saúde – a Fundação de Medicina Tropical do Amazonas - em três momentos epidemiológicos distintos (fases A, B e C), entre os anos 2001 e 2005. Fase A: A abordagem da síndrome febril hemorrágica aguda (VSFHA), durante a epidemia de dengue em 2001, possibilitou a organização dos serviços de saúde destinados à assistência dos pacientes com suspeita de dengue, a padronização da conduta médica e, conseqüentemente, a ausência de óbitos no centro de referência. Além disso, apresentou sensibilidade estimada de 100% para a captação dos casos potencialmente graves e permitiu a detecção precoce da febre hemorrágica e de formas atípicas de dengue. Fase B: A abordagem da síndrome febril ictérica e/ou hemorrágica aguda (VSFIHA), implantada entre os anos 2003 e 2005, em período sem a detecção de epidemias, proporcionou a redução do percentual de casos sem definição etiológica e a identificação do primeiro caso confirmado de hantavirose no Amazonas, representando um avanço no monitoramento de doenças emergentes nesta região. Porém, a ficha de notificação de SFIHA não foi útil para a detecção dos casos, apresentando baixa aceitabilidade entre os profissionais de saúde e, possivelmente, levando à sub-notificação. Fase C: A vigilância do dengue a partir da abordagem da síndrome febril aguda (VSFA), realizada no ano de 2005, em um período inter-epidêmico, pode ser um instrumento eficiente para o monitoramento de epidemias de dengue e da circulação de novos sorotipos virais. A apresentação clínica das infecções por dengue e malária foi muito semelhante na população estudada, o que confirma a importância da realização sistemática da pesquisa de plasmódio, pelo método da gota espessa de sangue, para todo paciente febril, na área tropical. Este trabalho contribui para o entendimento do papel da abordagem sindrômica nas ações de vigilância em saúde, e para o conhecimento das principais causas de doença febril aguda na Região Amazônica. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Most ongoing disease surveillance systems are based on passive notification of disease occurrence. The reported cases are usually the most clinically significant or the most severe, depriving the process of true surveillance. In this context, the syndromic approach was developed to guide the management, diagnosis and specific treatment of diseases with clinically indistinguishable features which otherwise require laboratory capabilities to establish a precise diagnosis. In 1998, in Manaus (Amazonas state), several South American nations bordering the Amazon Basin created a Surveillance Network for Emerging Diseases in the Amazon Region, coordinated by the Pan-American Health Organization, and syndromic surveillance was one of the recommendations to improve surveillance activities. However, despite being a highly promising strategy for public health application, syndromic surveillance requires huge investments and still needs studies to validate its effectiveness, and determine equivalence or superiority to conventional surveillance methods. Therefore, the following study was conducted in Manaus to describe and analyze the models of syndromic surveillance for acute febrile diseases established in a tertiary healthcare center – the Tropical Medicine Foundation of Amazonas – in three different epidemiological circumstances (Phases A, B and C), between 2001 and 2005. Phase A: Acute hemorrhagic fever surveillance during a dengue epidemic in 2001 enabled organization of healthcare facilities for optimal patient assistance, as well as standardization of clinical management and consequentially absence of fatalities. The system showed a 100% sensitivity for identification of potentially severe cases with early recognition of dengue hemorrhagic fever and unusual presentations of dengue infection. Phase B: Surveillance for acute hemorrhagic and/or icteric febrile syndromes developed between 2003 and 2005, a period without epidemics, led to the reduction of laboratory unconfirmed cases and identification of the first human hantavirus infection in Amazonas state, thereby demonstrating improved monitoring for emerging diseases in this region. Conversely, the report form was useless for case detection and had a low acceptability among healthcare personnel, possibly leading to reduced reporting of cases. Phase C: Dengue surveillance through acute febrile syndrome surveillance, performed in 2005, in a period between dengue epidemics, can be an efficient tool for monitoring dengue outbreaks and circulation of new viral serotypes. The clinical picture of dengue and malaria infection was very similar in the study population, confirming the importance of systematically performing a thick blood smear for malaria in all febrile patients in a tropical area. This study clarifies the role of the syndromic surveillance approach in public health vigilance, and how it enhances recognition of the primary causes of acute febrile disease in the Amazon Basin.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Gabriela Ribeiro (gaby_ribeiro87@hotmail.com) on 2011-09-19T14:42:10Z No. of bitstreams: 1 2011_KatiaReginaPenaSchesquiniRoriz.pdf: 1493089 bytes, checksum: 3f93522a67b82e0aeb4a6b63353ebc30 (MD5) / Approved for entry into archive by LUCIANA SETUBAL MARQUES DA SILVA(lucianasetubal@bce.unb.br) on 2011-09-20T15:00:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_KatiaReginaPenaSchesquiniRoriz.pdf: 1493089 bytes, checksum: 3f93522a67b82e0aeb4a6b63353ebc30 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-09-20T15:00:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_KatiaReginaPenaSchesquiniRoriz.pdf: 1493089 bytes, checksum: 3f93522a67b82e0aeb4a6b63353ebc30 (MD5) / O Brasil tem o maior número de casos de acidentes por serpentes da América do Sul, os quais na grande maioria se concentram nas regiões Centro-Oeste e Norte. Este trabalho foi o primeiro levantamento realizado na macrorregião de Porto Velho, através do estudo observacional descritivo dos aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais, dos casos de acidentes ofídicos encaminhados ao Centro de Medicina Tropical do Estado de Rondônia (CEMETRON), no período de setembro de 2008 a setembro de 2010. Os dados foram coletados conforme protocolo específico, sendo incluídos pacientes entre 18 e 59 anos e excluídos grupos vulneráveis (indígenas, idosos, gestantes e crianças). Foram estudados 92 casos de envenenamentos por serpentes, sendo 81 homens (88,04%) e 11 mulheres (11,96%), com idade média de 37 anos, oriundos principalmente da zona rural (91,3%). Os acidentes ocorreram durante o desempenho das atividades de trabalho (63%) e na estação do ano correspondente ao inverno amazônico (78,3%). A grande maioria dos casos era procedente da macrorregião de Porto Velho (84,7%). O principal acidente foi do tipo botrópico com 88 casos (95,6%) seguido de 2 casos laquéticos e 2 casos elapídicos. Em 48,9%, o acidente foi classificado como grave e quando correlacionado com o tempo decorrido até a chegada ao hospital (< ou > 6hs), não houve associação entre o tempo decorrido e a gravidade do caso (p=0,565). Foi necessário procedimento cirúrgico em 10 casos (fasciotomia em 9 casos e amputação de membro inferior direito em 1 caso). Não houve óbito nesta casuística, porém 4 casos (4,3%) evoluíram com seqüelas em membros inferiores. Os exames laboratoriais analisados, pré e pós-soroterapia, foram: hematimetria, leucometria, CK, creatinina, TC, ALT, AST e uréia. Ocorreu diminuição significativa nos valores de uréia e creatinina, sendo mais sensível a redução dos níveis de uréia (p=0,000473). Houve aumento dos níveis de ALT no pós-soro (p=0,043903) e os demais parâmetros não apresentaram significância estatística nos seus valores pré e pós-soroterapia. Assim, houve predomínio do acidente do tipo botrópico e grave. A chegada ao hospital em tempo superior a 6 horas e o uso de medicamentos alternativos não influenciou na classificação de gravidade dos acidentes. A função renal apresentou reversão das alterações 48h após soroterapia, porém a ALT aumentou após soroterapia. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil has the largest number of cases of bites by snakes of South America, which in the vast majority are concentrated in the Midwest and North. This research was the first survey in macro-region of Porto Velho - Rondonia, through of a descriptive observational, clinical, epidemiological and laboratorial study of cases of snakebites forwarded to the center of Tropical Medicine of Rondônia (CEMETRON) from September 2008 to September 2010. The data were collected according to a specific protocol that included patients between 18 and 59 years old excluding vulnerable groups (indians, elderly, pregnant women and children). We studied 92 cases of envenenomation by snakes, 81 men (88.04%) and 11 women (11.96%), mean age 37 years, coming mainly from rural areas (91.3%). The accidents occurred during the performance of work activities (63%) and the season corresponds to Amazon winter (78.3%). The majority of cases came from the macro-region of Porto Velho (84.7%). Among 92 accidents, 88 (95.6%) were caused by Bothrops, 2 were caused by Lachesis and two were caused by Micrurus. In 48.9% of the cases, the accident was classified as serious, but when correlated with the time elapsed until the arrival at the hospital (prior or after 6 hrs), there was no significant difference between time elapsed and the severity of the case (p = 0.565). Surgery was necessary in 10 cases (9 cases of fasciotomy and 1 case of amputation of right lower limb). There were no deaths in this series, but in 4 cases (4.3%) there were sequelae on lower limbs. Laboratory tests performed before and after serum therapy, were: red and white blood cells count, CK, creatinine, TC, ALT, AST and urea. There was a significant decrease in levels of urea and creatinine in the blood of patients, more expressive in terms of urea (p = 0.000473). There was a significant increased only in ALT serum levels before and after treatment in patients post serum therapy (p=0.0439), other parameters were not significantly different in their values before and after serum therapy. Thus, there was a predominance of snakebites by Bothrops and classified as serious. The arrival to the hospital longer than six hours and the use of alternative drugs did not affect the classification of severity of accidents.Renal function changes reverted to 48h after serum therapy, but ALT increased after serum therapy.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2002. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2011-05-09T19:33:52Z No. of bitstreams: 1 2002_PedroLuizTauil.pdf: 327721 bytes, checksum: 7cc450ced9cb0da67972d1ef0120acc5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-05-10T15:42:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2002_PedroLuizTauil.pdf: 327721 bytes, checksum: 7cc450ced9cb0da67972d1ef0120acc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-10T15:42:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2002_PedroLuizTauil.pdf: 327721 bytes, checksum: 7cc450ced9cb0da67972d1ef0120acc5 (MD5) / INTRODUÇÃO. Desde o início da última década de 70, em decorrência da ocupação intensa e desordenada da Amazônia brasileira, a malária vem se constituindo em um dos principais problemas de saúde da região. Existem fatores favoráveis à transmissão da doença: temperatura, umidade, altitude e cobertura vegetal adequadas à proliferação do mosquito vetor e condições habitacionais e de trabalho facilitadoras do contacto deste vetor com os seres humanos. Por outro lado, existem dificuldades de seu controle: ausência total ou parcial de paredes para aplicação de inseticida, acesso difícil a muitas localidades, precariedade dos serviços permanentes de saúde. A mudança da estratégia global de luta contra a malária, por meio do seu controle integrado e não mais de sua erradicação, e a implantação do Sistema Único de Saúde (SUS) no Brasil, com descentralização das ações de assistência e controle de doenças, determinaram uma alteração nas atividades de combate à malária na Amazônia, consubstanciada no Plano de Intensificação das Ações de Controle da Malária na Amazônia Legal (PIACM), iniciado em julho de 2 000, promovido pela Fundação Nacional de Saúde (FUNASA), do Ministério da Saúde. OBJETIVOS. Avaliar a efetividade do plano na região como um todo e, especificamente, em dois estados onde houve diferenças temporais na sua implantação. METODOLOGIA. Estudo epidemiológico do tipo ecológico, onde a variável independente é a implantação do plano, cuja principal característica é o controle da malária integrado ao SUS. As variáveis dependentes são os indicadores malariométricos.. Os dados foram obtidos junto à FUNASA, nas oito reuniões periódicas de avaliação do PIACM, realizadas em diferentes estados da região até abril de 2001 e em visitas de supervisão realizadas por técnicos da 15 FUNASA e pelo autor deste trabalho. Dados pluviométricos foram obtidos junto ao Instituto Nacional de Meteorologia (INMET) RESULTADOS. Ao longo da fase preparatória do plano, dois estados diferenciaram- se quanto ao momento de sua implantação: o Acre rapidamente estruturou- se, implantando-o no final de 2000 e o Amapá só veio a implantá-lo no final do primeiro semestre de 2001. Os outros estados implantaram o plano ainda em 2000 ou começo de 2 001. A incidência da malária diminuiu em todos os estados da região, reduzindo-se em 38,9 %, entre 1999 e 2001. O número de casos por P.falciparum caiu 34,4 % no mesmo período. No Acre, a incidência geral caiu 67,2 % e a de P.falciparum 76,0 % neste período. No Amapá, a incidência geral caiu 14,5 % e a de P.falciparum aumentou de 106,2 %. O Acre adotou uma estratégia de descentralização estadual do controle das endemias, diferentemente de todos os outros estados da região, que optaram pela municipalização destas ações. Os dados sobre internação e óbito por malária , referentes a 2000 e 2001, são ainda preliminares e sua análise não pode ser feita com segurança, neste momento. Não houve correlação entre a variação dos índices pluviométricos e a incidência da malária na região. CONCLUSÕES. O plano mostrou-se bastante efetivo no controle da malária. A redução observada na sua incidência foi a maior registrada desde 1961, num mesmo período. A comparação simultânea dos dados malariométricos do Estado do Acre, que implantou o plano ao final de 2000, e do Estado do Amapá, que o implantou somente no final do primeiro semestre de 2001, mostra que a redução foi 4,6 vezes maior no Acre. No primeiro semestre de 2001, o Amapá teve aumento da incidência da malária, em relação a 1999. Porém, no segundo semestre, após a implantação do plano, obteve uma redução de 52,4 %.