Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 644915 bytes, checksum: d059fb831fbd9168fde56d0f1948a13a (MD5) Previous issue date: 2005-05-25 / During the past ten years, the protozoan Neospora caninum has been described and associated as an ethyological agent of infected abortions in cattle. This disease in dogs also has an abortive character, but since dogs are definitive hosts, they have relevant importance in the life cycle of this parasite, acting as a source of the disease. Other diseases such as leptospirosis and brucelosis are also disseminated in Brazil and are associated to reproductive disturbances. The objective of this study was to evaluate the presence of infection for N. caninum in cattle and dogs of rural properties in two municipalities, Viçosa and Mercês, located in the macro-region of Zona da Mata in the state of Minas Gerais, as well as to analyze the existing risk factors for the infection. Serum samples of female cattle and dogs were collected for research of anti-N. caninum antibodies, using the indirect immunofluorescence technique; Brucella abortus selective test (Buffered Acidified Antigen - BAA) and corroborative tests (2-ME and SAT) and Leptospira sp., Microscopic Agglutination Technique (MAT) without and with sera dilution. The bovine sera were tested for the three pathogenic bioagents and the canine sera for N. caninum and Leptospira sp. In addition, information was collected by applying a structured questionnaire on type of exploration, production system and reproductive problem history in cattle and habits, type of food, demographic characteristics in dogs. The prevalence of positive properties was of 54.3% and 18.5% for N. caninum in cattle and dogs, respectively; 15.2% for Brucella abortus and 6.5% for Leptospira sp. in cattle and 7.4% for Leptospira sp.in dogs. The prevalence of positive animals presented lower results: 23.3% of N. caninum in cattle and dogs, respectively; 15.2% for Brucella abortus and 6.5% for Leptospira sp. in cattle and 7.4% for Leptospira. However, it should be emphasized that the prevalence for N. caninum in cattle was significantly higher, compared to Brucella abortus (p < 0.01) and Leptospira sp. (p < 0.01). Positive properties for bovine neosporosis were associated to the presence of reproductive disturbances in the animals (p < 0.01), when the analysis considered the type of disturbance, abortion (OR = 5.2; IC 95% = 1.32-20.54) and prenatal mortality (OR = 6.0; IC 95% = 1.22 - 29.95) presented significant association. The occurrence of positive serology for N. caninum in cattle was associated to the presence of positive dogs in the property (p<0.01); however, reproductive problem in cattle was not associated with canine neosporosis (p = 0.1046). Significant association was also verified between bovine osteoporosis and type of exploration, serum positive cattle having, approximately, three times more chance (OR = 2.82 and IC 95% = 1.05 - 9.52) of belonging to a milk production system rather than mixed. The characterization of canine neosporosis did not show significant association with the variables sex (p = 0.55), age (p = 0.34), animal habit (p = 0.03; OR = 0.00; IC 95% = 0.0-1.06) and type of food (p = 0.11). The results suggest that sanitation in neosporosis has become of utmost importance in bovine herds, especially when reproductive problems resulting from the infection are considered. Therefore, it becomes evident the need for animal health authorities and institutions to fight this disease. / Durante os últimos dez anos o protozoário Neospora caninum tem sido descrito e associado como agente etiológico de abortamentos infecciosos em bovinos. Esta doença em cães também tem caráter abortivo, mas como os caninos são hospedeiros definitivos, possuem relevante importância no ciclo de vida deste parasita, funcionando como reservatório da doença. Outras doenças como a leptospirose e a brucelose também são disseminadas em nosso país e também estão associadas a transtornos reprodutivos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de infecção para N. caninum em bovinos e cães existentes em propriedades rurais de dois municípios, Viçosa e Mercês, pertencentes à Macrorregião Zona da Mata do Estado de Minas Gerais, bem como analisar a existência de fatores de risco para a infecção. Foram coletadas amostras de soro de bovinos fêmeas e cães para pesquisa de anticorpos anti-N. caninum, pela técnica de imunofluorescência indireta; Brucella abortus prova seletiva (Antígeno Acidificado Tamponado - AAT) e provas confirmatórias (2-ME e SAT) e Leptospira sp., Técnica de Aglutinação Microscópica (MAT) sem e com diluição dos soros. Os soros bovinos foram testados para os três bio-agentes patogênicos e os de cães para N. caninum e Leptospira sp. Adicionalmente, foram coletadas informações, utilizando-se questionário estruturado, relativas ao tipo de exploração, sistema de produção e histórico de problemas reprodutivos em bovinos e hábitos, tipo de alimentação, características demográficas dos cães. As prevalências de propriedades positivas foram de 54,3% e 18,5% para N. caninum em bovinos e cães, respectivamente; 15,2% para Brucella abortus e 6,5% para Leptospira sp. em bovinos e 7,4% para Leptospira sp. em cães. As prevalências de animais positivos apresentaram resultados menores: 23,3% de N. caninum em bovinos e cães, respectivamente; 15,2% para Brucella abortus e 6,5% para Leptospira sp. em bovinos e 7,4% para Leptospira, entretanto, é de se destacar que, para os bovinos, a prevalência para N. caninum, significativamente superior quando comparada a Brucella abortus (p < 0,01) e Leptospira sp. (p < 0,01). Propriedades positivas para neosporose bovina estiveram associadas à presença de distúrbios reprodutivos nos animais (p < 0,01), quando a análise considerou o tipo de distúrbio, abortamento (OR = 5,2; IC 95% = 1,32-20,54) e mortalidade perinatal (OR = 6,0; IC95% = 1,22 - 29,95) apresentaram associação significativa. A ocorrência de sorologia positiva para N. caninum em bovinos esteve associada à presença de cães positivos na propriedade (p < 0,01), entretanto, problema reprodutivo em bovinos não esteve associado à neosporose canina (p = 0,1046). Associação significativa também foi verificada entre a neosporose bovina e o tipo de exploração, sendo que os bovinos soropositivos tiveram, aproximadamente, três vezes mais chance (OR = 2,82 e IC 95% = 1,05 - 9,52) de pertencerem a sistema de produção tipo leite do que tipo misto. A caracterização da neosporose canina não revelou associação significativa com as variáveis sexo (p = 0,55), idade (p = 0,34), hábito do animal (p = 0,03; OR = 0,00; IC 95% = 0,0-1,06) e tipo de alimentação (p = 0,11). Os resultados sugerem o significado sanitário que a neosporose vem assumindo em rebanhos bovinos, notadamente quando se considera a ocorrência de problemas reprodutivos decorrentes da infecção. Nesse sentido, evidencia-se a atenção necessária das autoridades e instituições de saúde animal, no combate a esta enfermidade.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1965376 bytes, checksum: 32df14418e8fde9c7b4067ac9f8ea6c6 (MD5) Previous issue date: 2010-05-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Porcine circovirus 2 (PCV-2) is the major causative agent of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and is associated with different syndromes that affect the swine. The term PCVAD (Porcine circovirus associated diseases) was introduced in 2006 to gather many diseases. Since serological studies are essential for monitoring the virus, the aim of this study was to develop enzyme immunoassays (ELISA) for detection and titration of antibodies to PCV-2 and also for viral quantification as well as the recombinant protein capsid PCV-2 (rCAP PCV-2) in extracts of Escherichia coli. After the standardization of the technique, 29 negative serum samples in ELISA were used for determining the cutt off. The quantitative ELISA was compared with the Immunoperoxidase monolayer (IPMA), through analysis of 155 serum samples, pre-determined by IPMA, of which 125 samples were positive and 30 negative samples for antibodies to PCV-2, in ELISA. The tests showed a concordance of 98.70% confirming the high sensitivity and specificity of ELISA on the IPMA. In the quantitative assay, 20 serum samples had the title determined by ELISA and it showed a higher detection limit of antibodies than the IPMA in 18 of the 20 samples tested. To quantify the rCAP PCV-2 in extracts of E.coli, a capture ELISA was developed. Were used precipitated IgGs from polyclonal rabbit serum anti-rCap PCV-2 as capture antibody and the conjugated IgGs with peroxidases as detection antibody. A standard curve was obtained by serial dilution of rCap PCV-2 and the test showed a detection limit in the range of 0.625 to 0.0097 mg/mL, which was successfully used to quantify the protein in the extract of E.coli. Thus it is expected that this test is also applied in the quantification of future PCV-2 in field samples. / O Circovírus suíno 2 (PCV-2) é o principal agente causador da Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS), e está associado a diferentes síndromes que acometem esses animais. O termo PCVAD (Porcine circovírus 2 associated diseases) foi introduzido em 2006, para enquadrar todas essas doenças. Uma vez que estudos sorológicos são fundamentais para o monitoramento do vírus, o objetivo desse trabalho foi desenvolver ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para a detecção e titulação de anticorpos anti-PCV-2 e também para a quantificação viral, assim como da proteína recombinante do capsídeo do PCV-2 (rCap PCV-2) em extratos de Escherichia coli . Após a padronização da técnica, 29 amostras de soro negativos por ELISA indireto foram utilizadas para a determinação do cutt off. O ELISA qualitativo foi comparado com a Imunoperoxidase em Monocamada (IPMA), através da análise de 155 amostras de soro, pré-determinadas por IPMA, sendo 125 amostras positivas e 30 amostras negativas para anticorpos anti-PCV-2, no ELISA. Os testes apresentaram uma concordância de 98,70 % confirmando assim a alta sensibilidade e especificidade do ELISA relativa ao IPMA. No ensaio quantitativo, 20 amostras de soro tiveram o título determinado através do ELISA e este apresentou um maior limite de detecção de anticorpos do que o IPMA, em 18 das 20 amostras avaliadas. Para a quantificação da rCap PCV-2 presente em extratos de E.coli, um ELISA de captura foi desenvolvido. Foram utilizadas IgGs precipitadas a partir de soro policlonal de coelho anti-rCap PCV-2 como anticorpo de captura e as IgGs conjugadas com peroxidase como anticorpo de detecção. Uma curva-padrão foi obtida através da diluição seriada da rCap PCV-2 e o ensaio apresentou um limite de detecção na faixa entre 0,625 a 0,0097 μg/mL, que foi utilizado com sucesso para quantificar a proteína no extrato de E.coli. Assim espera-se que este teste seja também aplicado futuramente na quantificação do PCV-2 em amostras de campo.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 503501 bytes, checksum: 032addff9c64aac101653cab3d7931c7 (MD5) Previous issue date: 2004-03-17 / In the present work it was studied the influence of age and weight at weaning on performance up to forty two days old piglets. A total of 288 animals (C22×AG412, PIC (R)) were grouped into 36 experimental units. The suspended slatted floor of nursery facility was located on a far row to finishing farm with an all-in-all-out system. The experiments were delineated as a random factorial distribution (3 weaning ages -12, 15, 18 days; 3 weight at weaning- light, medium, heavy) with 4 repetitions and using 2 males and 2 females animals. The 8 animals of each experimental unit were weighted at 21, 28 and 42 days of age and their feed intake determined. The analyses of the results indicated that age at weaning was not a variable source of the mean weight at 42 days of age (P> 0.05) and at this age earlier weaning resulted in higher reduction of weight in 3 categories. The age and the weight at weaning had a significant effect on medium weight at 42 days old (P< 0.05). Weaned piglets at 15 days (1:1.3152 kg) had a better feed gain than 18 days old (1:1.4271 kg) and the 12 days old weaned (1:1.3641 kg) had a feed gain statistically equal to the 15 and 18 days old weaned piglets. The light weaned animals (1:1.3061 kg) had a better feed conversion than the heavy piglets (1:1.4250 kg) but the medium (1:1.3641 kg) were statistically similar to the light and heavy ones. No diarrhea was observed on piglets and the belly-nosing behavior were observed only immediately after weaning without any correlation with age or weight at weaning. In the present conditions, the weaning realized with 15 days old was the most practicable in relation of weight gain, feed conversion and costs (R$/kg of piglet produced at 42 days old). / No presente trabalho, estudou-se o efeito da idade e do peso ao desmame sobre o desempenho dos leitões até 42 dias. Utilizaram-se 288 leitões PIC, cruzamento C 22 × AG 412, os quais foram alojados em 36 unidades experimentais, localizadas em uma instalação de creche suspensa e ripada, situada em uma granja de sítio único, ciclo completo e que emprega o sistema "todos dentro/todos fora". O delineamento foi inteiramente casualizado em esquema fatorial (três idades de desmame - 12, 15 e 18 dias; três categorias de peso ao desmame - leve, médio e pesado) com quatro repetições, sendo duas constituídas por machos e duas por fêmeas. Os oito animais de cada unidade experimental, foram pesados aos 21, 28 e 42 dias de idade e seus consumos de ração foram mensurados. Os resultados indicaram que a idade ao desmame não foi fonte de variação sobre o peso médio aos 42 dias (P> 0,05). Aos 42 dias de idade, observou-se que quanto mais precoce o desmame, mais as diferenças de peso entre as três categorias de peso ao desmame diminuíam. A idade e o peso ao desmame tiveram efeito significativo sobre a conversão alimentar (P< 0,05). Leitões desmamados aos 15 dias (1:1,3152 kg), apresentaram melhor conversão do que os de 18 dias (1:1,4271 kg), e os desmamados com 12 dias (1:1,3641 kg), apresentaram conversão alimentar estatisticamente igual às dos desmamados com 15 e 18 dias de idade. Os leitões desmamados leves (1:1,3061 kg) tiveram melhor conversão do que os pesados (1:1,4250 kg); já os médios (1:1,3641 kg) se assemelharam estatisticamente aos leves e pesados. Não houve ocorrência de diarréia e os comportamentos oro-nasais só foram observados no período imediato ao desmame, sem correlação com idade ou peso ao desmame. Nas atuais condições, o desmame realizado aos 15 dias de idade mostrou-se o mais viável em relação ao ganho de peso, conversão alimentar e custo (R$/kg de leitão produzido aos 42 dias de idade).

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 914989 bytes, checksum: 6324bfc7a5398520ac5042a3539b706e (MD5) Previous issue date: 2011-11-22 / Porcine circovirus-2 (PCV2) has been related as the causative agent of the Postweaning Multissystemic Wasting Syndrome (PMWS) and other diseases called porcine circovirus associated diseases (PCVAD). They are responsible for economic losses in pork production worldwide. There is only a few scientific studies describing the infection in other species but swine and their hole at the epidemiologic dynamics of the diseases related to the PCV2. The aim of this study is to investigate the occurrence of infection by the PCV2 in wild mice (Mus musculus and Rattus rattus) captured in hog farms. The capture of the 40 sorted mice was made at 5 pig wean tofinish farms in Minas Gerais, an important state of pork production in Brazil. Samples of tissues (lymph nodes, spleen, kidney, heart and lungs) and blood were collected from the mice. The tissue fragments collected were submitted to immunohistochemistry and Nested PCR. Additionally, samples from spleen and lungs were analyzed by histology assays. Presence of antibodies anti-PCV2 was tested by ELISA assays. Immunohistochemical analysis showed positive prints in 12 animals, mostly on spleen (sub scapular area), lungs (alveolar macrophages) and kidney (inside the tubules). The 12 serum analyzed by ELISA hasn t detected antibodies anti-PCV2. Histopathological analyses revealed in some samples, a multifocal and lympho-neutrophilic interstitial bronchopneumonia, with some node formations. Moreover, spleen samples showed a mild to moderate lymphocyte depletion related to the PCVAD. The Nested PCR assays showed the presence of viral DNA at different tissues from 6 tested rodents. Thus, the results found in this work, indicate that mice from the species Mus musculus and Rattus rattus can be naturally infected by the PCV2 and they would play a hole in the epidemiology of PCVAD. However, more studies are necessary to confirm the transmission of the PCV2 from wild rodents to pigs. / O porcine circovirus-2 (PCV2) é atribuído como um dos agentes relacionados a doenças associadas ao circovírus (PCVAD), ocasionando perdas econômicas significativas na produção mundial de suínos. Poucos trabalhos são realizados a respeito da infecção em outras espécies pelo PCV2 e sua participação na epidemiologia das doenças associadas ao vírus. O propósito desse estudo foi investigar a ocorrência de infecção em roedores peridomésticos das espécies Mus musculus e Rattus rattus pelo PCV2 em granjas comerciais de suínos. Animais dessas espécies foram capturados em importantes centros de produção no estado de Minas Gerais. Amostras de órgãos (linfonodos, baço, rins, fígado, pulmão) e sangue foram coletadas. Os fragmentos de tecidos coletados foram submetidos ao teste de imunohistoquímica e Nested PCR. Adicionalmente, foram realizadas avaliações histológicas em amostras de baço, rim e pulmão. Presença de anticorpos anti-PCV2 foram avaliados pela técnica de ELISA. O teste de imunohistoquímica demonstrou marcações encontradas em 12 animais, principalmente no baço (região subcapsular), no pulmão (macrófagos alveolares) e nos rins (interior dos túbulos). A análise do soro pela técnica de ELISA não detectou anticorpos contra o PCV-2 nas 12 amostras avaliadas.. A histopatologia demonstrou em algumas amostras, uma pneumonia bronco-intersticial neutrofílica e linfocítica, multifocal e moderada, com formação de nódulos linfóides associados a vasos e bronquíolos. No ensaio de nested-PCR foi detectado DNA viral em diferentes tecidos avaliados de seis animais. Os resultados citados demonstram que os roedores domésticos das espécies estudadas podem exercer importante papel na epidemiologia das doenças relacionadas ao PCV2. No entanto, mais estudos são necessários para comprovar a transmissão do PCV2 dos roedores para os suínos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 637342 bytes, checksum: 6a735b2fcb2171581a05241eb10ef371 (MD5) Previous issue date: 2012-02-10 / In order to clarify data on the dynamics of infection by Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) and / or Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5), the aim of this study was to compare the viral clearance of BoHV-1 and/or BoHV-5 in two distinct phases of lactation (five months before and at parturition) of naturally infected dairy cows. Measurements of the cortisol hormone were used as an analysis parameter in order to relate viral shedding to post partum stress., The elimination of viral DNA in colostrum / milk, nasal secretions and viremia was investigated by nested PCR. The antibody response of cattle naturally infected was investigated by neutralization. There was no difference in cortisol levels between the two lactation phases. Therefore, there was no difference in viral genome detection and antibody responses of the tested samples, considering the two studied phases. Milk was an effective sample alternative for genomic diagnosis of BoHV-1 and/or BoHV-5. In one of the properties studied, close to 100% of infected animals were shedding viral DNA, and the mean frequency of milk shedding in cows from other properties was only 52%. The positive viremia rate was similar to the one observed in the milk of infected animals, while viral clearance in nasal discharges had low positivity rate, compared to milk. This suggests an extended shedding time in the milk, when compared to other dissemination routes. This information corroborates with milk efficacy as a sample alternative for viral diagnosis. Thus, in this study, Nested- PCR is an efficient tool for the viral diagnosis in milk. Milk is a promising sample for field practitioners because not only does it allow for productive infection diagnosis, it is easier to collect compared to blood. / A fim de esclarecer dados da dinâmica da infecção pelos Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) e/ou Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5), este trabalho visou comparar a eliminação dos referidos agentes virais em duas fases distintas da lactação (cinco meses antes e na época do parto) de vacas leiteiras naturalmente infectadas. Isso, de modo a relacionar a eliminação viral ao estresse periparto, tomando como parâmetro de análise dosagens do hormônio cortisol. Também foi investigada, através da Nested-PCR, a eliminação do DNA viral no colostro/leite, secreção nasal, viremia e, através da soroneutralização, a resposta sorológica de vacas leiteiras naturalmente infectadas. Foi demonstrado não haver diferenças dos níveis de cortisol entre as fases produtivas estudadas. Consequentemente, não houve diferenças na detecção do genoma viral e na resposta humoral das amostras clínicas focadas, considerando as duas fases estudadas. O leite se apresentou como uma alternativa amostral eficaz de diagnóstico da presença genômica do BoHV-1 e/ou BoHV-5. Em uma das propriedades de trabalho, praticamente 100% dos animais infectados estavam eliminando material genômico dos agentes, e houve uma média de 52% de frequência de positividade desse material eliminado no leite das vacas das demais propriedades. A frequência positiva de viremia se assemelhou àquela do leite em animais infectados, enquanto que a eliminação via secreção nasal apresentou baixa frequência de positividade, comparando ao leite. Isso sugere um prolongamento da época de eliminação via leite quando comparada à secreção nasal, concordando com a eficácia do leite como alternativa de material para diagnóstico viral. Sendo assim, conclui-se que a Nested-PCR é um método eficiente para o diagnóstico dos vírus deste estudo em leite e que essa amostra é promissora para o foco dos profissionais de campo, pois, além do diagnóstico ser possível na fase de infecção produtiva, há maior facilidade em sua coleta, quando comparada à coleta de sangue.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1143577 bytes, checksum: 11dd7b0d8acf42b358fe44ee8ed9ea61 (MD5) Previous issue date: 2012-04-20 / Mastitis is one of the most important diseases of the dairy herd, which has has great economic impact on the milk production chain. The bacterial etiology of this disease had moved from contagious pathogens for environmental ones in which Escherichia coli, is one of the main etiologic agents. Among other things, crashes in therapy could be attributed to the multidrug efflux systems present in bacteria. These systems have the ability to drive virtually all antimicrobial classes, thus contributing to its resistance. Were studied 27 strains of Escherichia coli from cattle with clinical mastitis, which were subjected to sensitivity tests, to the main antimicrobials used in the treatment of this disease in the region. The technique of polymerase chain reaction, was used to identify the presence of genes encoding three multidrug efflux systems, AcrAB, AcrEF and EmrAB. We also evaluated in vitro effectiveness of two inhibitors of these systems, the Phe-Arg-ß-naphthylamide (PAßN) and 1 -(1-naphthylmethyl)-piperazine (NMP), using the minimum inhibitory concentration (MIC) as a reference. In the resistant strains was quantified the relative expression of genes related aspect of these systems in relation to the seven treatments performed by the technique of Quantitative Real Time PCR (qRT-PCR). The results showed that only four strains of E. coli (14.8%) were resistant to ampicillin and trimethoprim/sulfamethoxazole, simultaneously. However, all 27 strains were sensitive to ceftiofur, gentamicin, enrofloxacin and cephalexin. The isolates showed at least a multidrug efflux system. In MIC were observed for values ranging from 6 mg ampicillin / mL to 250 mg / mL, and trimethoprim / sulfamethoxazole 12 mg / mL to 1500 mg / mL and was found to reduce the MIC of ampicillin and trimethoprim/ sulfamethoxazole in all isolates in the presence of two inhibitors, except for trimethoprim / sulfamethoxazole in the presence of NMP. The genes analyzed showed different relative expression levels, relative to the seven treatments done, although literature reporting the AcrAB-efflux system is the main Tolc E. coli, the genes that constitute this system were the least expressed themselves, but the genes Emra and emrB had the highest relative expressions. It has been found that inhibitors contributed to the measured decrease in the relative expression of the gene acrF, treatment with ampicillin. / A mastite é uma das doenças mais relevantes do rebanho leiteiro, a qual tem um grande impacto econômico na cadeia produtiva do leite. A etiologia bacteriana desta enfermidade tem mudado de patógenos contagiosos para ambientais onde Escherichia coli, é um dos principais agentes etiológicos. Entre outros fatores, falhas na terapia poderiam ser atribuídas aos sistemas de efluxo multidrogas presentes em bactérias. Estes sistemas têm a capacidade de expulsar antimicrobianos praticamente de todas as classes, contribuindo na sua resistência. Estudaram-se 27 isolados de Escherichia coli provenientes de leite de bovinos com mastite, os quais foram submetidos a testes de sensibilidade aos principais antimicrobianos usados no tratamento desta doença na região. A técnica de reação em cadeia da polimerase, foi utilizada para identificar a presença de genes que codificam três sistemas de efluxo multidrogas, AcrAB, AcrEF e EmrAB. Avaliou-se também a efetividade in vitro de dois inibidores desses sistemas, o Phe-Arg-ß-naphthylamide e 1-(1-naphthylmethyl)-piperazine, utilizando a Concentração Inibitória Mínima (CIM) como referência. Nos isolados resistentes, quantificou-se a expressão relativa dos genes relacionados a esses sistemas, em relação aos sete tratamentos realizados, pela técnica de PCR em Tempo Real. Os resultados revelaram que apenas quatro isolados de E. coli (14,8%), apresentaram resistência a ampicilina e a sulfametoxazol&#8725;trimetoprim, simultaneamente. Enquanto todos os 27 foram sensíveis a ceftiofur, gentamicina, enrofloxacina e cefalexina. Os isolados apresentaram pelo menos um sistema de efluxo multidrogas. Na CIM, observaram-se valores para ampicilina variando de 6 &#956;g/mL a 250 &#956;g/mL e para sulfametoxazol&#8725;trimetoprim de 12 &#956;g/mL a 1500 &#956;g/mL e verificou-se redução das CIM de ampicilina e sulfametoxazol&#8725;trimetoprim em todos os isolados na presença dos dois inibidores, exceto para sulfametoxazol&#8725;trimetoprim na presença do NMP. Os genes analisados apresentaram diferentes níveis de expressão relativa em relação aos sete tratamentos realizados, embora a literatura reporte que o sistema de efluxo AcrAB-TolC é o principal em E. coli, os genes que constituem esse sistema foram os que menos se expressaram, porem os genes emrA e emrB tiveram as maiores expresoes relativas. Verificou-se que os inibidores avaliados contribuíram na diminuição da expressão relativa do gene acrF, no tratamento com ampicilina.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1676673 bytes, checksum: 5c833a936878e6ed4a6d88b1073a8552 (MD5) Previous issue date: 2013-04-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Escherichia coli is a microorganism of environmental origin that is highly adaptive; its ability to form biofilms under certain conditions can be critical to its resistance to antimicrobial treatments. The aim of this study was to evaluate the expression profiles of the genes luxS (autoinducer synthase-2), fliC (flagellin), csgA (large subunit of the fimbriae curli ) and fimA (largest subunit type I fimbriae), which are involved in biofilm formation, in E. coli obtained from mastitic milk in the presence of antimicrobials on abiotic and biotic environments. The genetic profile of 27 isolates was evaluated by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) with XbaI enzyme digestion. Four isolates of E. coli, two strong biofilm producers (GBP) and two weak producers (WBP) which possessed the genes luxS, fliC, csgA and fimA, were selected by conventional PCR. The minimum inhibitory concentration (MIC) of antimicrobials was assessed for performing other tests at the concentration of ½ MIC. The biofilm production was detected in the presence of antimicrobials and visualized through scanning electron microscopy (SEM). Assay of adhesion/invasion of bacterial cells in bovine mammary alveolar cell (MAC-T) culture in the presence of antimicrobials was quantified in CFU/mL and visualization was achieved by confocal microscopy. Subsequently, the expression profiles of the genes luxS, fliC, csgA and fimA were analyzed at different times after inoculation on abiotic and biotic surfaces. Nine (I to IX) different phylogenetic groups with similarity > 90% were identified by PFGE. The results revealed the presence of the genes luxS, fimA and csgA in all 27 isolates, whereas the fliC gene was only detected in 16. The MICs ranged from 0.05 to 8 &#956;g/mL, with the highest values obtained for gentamicin (8 &#956;g/mL) and ampicillin (6 &#956;g/mL). Enrofloxacin and cotrimoxazole induced biofilm formation in at least one isolated WBP, and ampicillin and gentamicin in one isolated GBP. Also, the reducing effect of enrofloxacin and cotrimoxazole was observed in at least one isolated GBP. There was no increase in the ability of adxiv hesion/invasion of the isolates of E. coli in the presence of antibiotics, but an increase in the internalization of the WBP isolate when treated with antimicrobials was observed through confocal microscopy. The four genes were differentially expressed when exposed to ½ MIC concentrations of antimicrobials with changes in the order of 1.5 to 22 times. The growth on the biotic surface favored the expression of luxS and fimA genes in relation to abiotic surfaces. The sub-inhibitory concentrations of the antimicrobials studied were able to induce the formation of biofilms by some isolates, as well as inducing invasion into host cells, which is a situation that might be occurring in vivo. This could result in a reservoir of bacteria in the udder of the animal, which could explain the increase in cases of persistent mastitis in herds. / Escherichia coli é um micro-organismo de origem ambiental altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes em determinadas condições pode ser fundamental para sua resistência a tratamentos com antimicrobianos. O objetivo desse estudo foi avaliar os perfis de expressões dos genes luxS, fliC, csgA e fimA envolvidos com a formação de biofilmes em E. coli obtidos de leite mastítico na presença de antimicrobianos em meio biótico e abiótico. Foi avaliado o perfil genético de 27 isolados por meio de gel de eletroforese em campo pulsado (PFGE) com a digestão enzimática XbaI. Quatro isolados de E. coli , dois fortes produtores de biofilmes (GPB) e dois fracos produtores (FPB) que possuíam os genes da sintase do autoindutor-2 (luxS), flagelina (fliC), subunidade maior da fímbria curli (csgA) e subunidade maior da fímbria do tipo I (fimA) foram selecionados por PCR convencional. Foi avaliada a concentração inibitória mínima (MIC) dos antimicrobianos para realização dos demais testes com a concentração de ½ MIC. A produção de biofilme foi detectada na presença de antimicrobianos e visualizada em microscopio eletrônico de varredura (MEV). Foram realizados ensaios de adesão/invasão de células bacterianas em cultivo de células alveolares mamárias bovinas (MAC-T) na presença de antimicrobianos, quantificados em UFC/mL, e visualizadas por meio de microscopia confocal. Posteriormente, foram analisados os perfis de expressão dos genes luxS, fliC, csgA e fimA em diferentes tempos e em superfície de inoculação abiótica e biótica. Nove (I a IX) grupos filogenéticos diferentes com similaridade >90 % foram identificados pelo PFGE. Os resultados revelaram a presença de luxS, fimA e csgA em todos os 27 isolados, enquanto o gene fliC foi detectado em 16. As MICs variaram entre 0,05 a 8 &#956;g/mL, sendo os maiores valores obtidos para gentamicina (8 &#956;g/mL) e para ampicilina (6 &#956;g/mL). A enrofloxacina e o cotrimoxazol induziram a formação de biofilme em pelo menos um isolado FPB, ampicilina e gentamicina em um GPB. Também foi observado efeito reduxii tor da enrofloxacina e cotrimoxazol em pelo menos um isolado GPB. Não foi observado aumento na capacidade de adesão/invasão dos isolados de E. coli na presença de antimicrobianos, no entanto observou-se aumento na internalização do isolado FPB quando tratado com os antimicrobianos através da microscopia confocal. Os quatro genes foram diferencialmente expressos quando submetidos à concentração de ½ MIC dos antimicrobianos com alterações da ordem de 1,5-22 vezes. O crescimento em superfície biótica favoreceu a expressão dos genes luxS e fimA em relação à abiótica. A concentração subinibitória dos antimicrobianos estudados foi capaz de induzir a formação de biofilmes por alguns isolados, além de induzir a invasão às células hospedeiras, situação que poderia estar ocorrendo in vivo, resultando em um reservatório de bactéria no úbere do animal, o que poderia explicar também, o crescente aumento de casos de mastites persistentes nos rebanhos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1625922 bytes, checksum: 8e4e59f3e5a2481a04957bd2da9aa918 (MD5) Previous issue date: 2012-09-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) is the etiological agent of paratuberculosis, a disease which causes chronic granulomatous enteritis preferably in domestic and wild ruminants. It is considered a disease of economic and social impact, because of losses in livestock and importance in human health, since there is evidence of possible correlation of MAP with Crohn's disease. However, much is still unknown about the developing the pathophysiology and immunopathogenesis this disease, in the sites of infection. Thus, this study has proposed verify the response of cytokines proinflammatory and anti-inflammatory by quantitative PCR and associate the expression of these cytokines with the lesions and the presence of the agent in organs of C57BL/6 mice infected intraperitoneal with strain MAP66115-98. It was applied 250&#956;l of inoculum at 3 x 108 UFC/ml in 20 mice, and it was applied saline phosphate buffers (PBS) in eight control species. The animals were sacrificed at 30, 60, 90 and 120 days post-inoculation. In each period were collected spleen, liver, intestine (ileum and colon) and Peyer's patches of five challenged mice and two controls. It was found in the majority an upregulation in the expression profiles of proinflammatory cytokines IL-2, IFN-, and TNF-&#945; &#1199;, and anti-inflammatory IL-4 and IL-10 analyzed in the organs compared to controls during period of the experiment. It was observed also negative regulations in the fourth week in spleen and colon, twelfth in the spleen, ileum and Peyer's patch and the sixteenth week in the liver, colon and ileum. Statistical differences were only observed at the eighth week after the challenge for IFN-&#1199; in liver, in spleen for expression of IL-2 and IFN-&#1199; and in the ileum for IL-4 and TNF-&#945;. In the fourth week, it was possible to identify increased levels of mRNA transcripts of the cytokines studied. In the liver, ileum and colon IFN-&#1199; showed the highest level of mRNA transcripts compared to the negative control, however at higher levels spleen were observed for IL- 10. Only eight weeks it was possible to observe a statistically significant difference for the cytokine IFN-&#1199; in the liver and spleen samples for TNF-&#945; and IL-4 in the ileum and IL-2 in spleen. The highest levels of mRNA transcript were observed in the liver for IFN- &#1199;, spleen for IL-2, and in the ileum Peyer's patch for IL-4 and colon for IL-10. In the twelfth week, the major mRNA transcript levels were observed in liver for IL-10 in spleen and ileum for IL-2 in colon for TNF-&#945; and Peyer's patch for IL-4. In the sixteenth week, the major mRNA transcript levels were observed in liver and colon for IL-10 in spleen and ileum for IFN-&#1199; and Peyer's patch for TNF-&#945;. The animals showed increased expression of mRNA transcripts of cytokines studied organs after challenge with MAP, although not verified gross and microscopic changes (hematoxylin and eosin staining). However it was possible to observe the presence of alcohol-acid resistant rods in two samples of Peyer's patches (Ziehl-Neelsen) and nested-PCR technique was possible to observe the presence of MAP in every organ analyzed. Thus, these results contribute to a better understanding of the expression of proinflammatory and anti-inflammatory in local infection at different post-inoculation in both organs taken as site specific as MAP intestine (colon and ileum) and Peyer's patch and organs extraintestinal, and thus find a better understanding of the immunopathogenesis of infection in the local. / Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis (MAP) é o agente etiológico da paratuberculose, uma enfermidade que causa enterite granulomatosa crônica preferencialmente em ruminantes domésticos e silvestres. É considerada uma doença de impacto econômico e social, devido às perdas no rebanho e na saúde humana, uma vez que se têm indícios da possível relação de MAP com a doença de Crohn. Contudo, muito ainda se desconhece sobre o desenvolvimento da patofisiologia e imunopatogênese desta doença, nos locais da infecção. Desse modo, este estudo propôs verificar a resposta de citocinas pró e anti-inflamatórias por meio da técnica de PCR quantitativo e associar a expressão destas citocinas com as lesões e a presença do agente em órgãos de camundongos C57BL/6 infectados por via intraperitoneal com a cepa MAP66115-98. Em 20 camundongos foram aplicados 250&#956;l de inóculo a 3 x 10 8 UFC/ml e, em oito controles foram aplicados PBS. Os animais foram sacrificados aos 30, 60, 90 e 120 dias pós-inoculação. Em cada período, foram coletado baço, fígado, intestino (cólon e íleo) e placas de Peyer de cinco camundongos desafiados e de dois controles. Verificou-se na maioria, uma regulação positiva nos perfis de expressões das citocinas pró-inflamatórias IL-2, IFN-&#1199; e TNF-&#945;, e anti-inflamatórias IL-4 e IL-10 nos órgãos analisados em relação aos controles durante o período do experimento. Observaram-se também regulações negativas na quarta semana no baço e colón, na décima segunda no baço, íleo e placa de Peyer e na décima sexta semana no fígado, colón e íleo. Diferenças estatísticas foram observadas somente na oitava semana após o desafio no fígado para IFN-&#1199;, no baço para expressão da IL-2 e IFN-&#1199; e no íleo para IL-4 e TNF-&#945;. Na quarta semana, foi possível identificar aumento dos níveis de transcritos de RNAm das citocinas estudadas. No fígado, íleo e colón o IFN-&#1199; apresentou maior nível de transcritos de RNAm em relação ao controle negativo, no entanto no baço os maiores níveis foram observados para a IL-10. Somente na oitava semana foi possível observar diferença estatística significativa para a citocina IFN-&#1199;, em amostras do fígado e baço, para o TNF-&#945; e IL-4 no íleo e para a IL-2 no baço. Os maiores níveis de transcrito de RNAm foram observados no fígado, para o IFN-&#1199; , no baço para a IL-2 , no íleo e placa de Peyer para a IL-4 e no colón para a IL-10. Na décima segunda semana, os maiores níveis de transcrito de RNAm foram observados no fígado para a IL-10, no baço e íleo para a IL-2, no colón para o TNF-&#945; e na placa de Peyer para a IL-4. Na décima sexta semana, os maiores níveis de transcrito de RNAm foram observados no fígado e colón para a IL-10, no baço e íleo para o IFN-&#1199; e na placa de Peyer para o TNF-&#945;. Os animais apresentaram uma maior expressão dos transcritos de RNAm das citocinas estudadas nos órgãos após o desafio com MAP, embora não tenham sido verificadas alterações macro e microscópica (coloração de Hematoxilina e Eosina). No entanto foi possível observar presença de bastonetes álcool ácido resistentes em duas amostras de placas de Peyer, (coloração de Ziehl-Neelsen) e pela técnica de nested-PCR foi possível observar a presença de MAP em todos os órgão analisados. Assim, estes resultados contribuem para a melhor compreensão da expressão de citocinas pró e anti-inflamatória nos locais da infecção em diferentes tempos pós-inoculação tanto em órgãos tidos como sitio específicos de MAP como intestino (colón e íleo) e placa de Peyer e órgãos extra-intestinais, e com isso buscar o melhor entendimento da imunopatogênese nos locais da infecção.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 709722 bytes, checksum: 25ae10b4477351d0ee2293c5f5d08d05 (MD5) Previous issue date: 2012-04-27 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) is the etiological agent of paratuberculosis, a disease which causes chronic granulomatous enteritis preferably in domestic and wild ruminants. It is characterized by intermittent diarrhea, progressive weight loss and reduced milk production. The major route of transmission is the ingestion of food and water contaminated by feces of infected animals. It is considered a disease of high economic importance, because of losses in livestock and importance in human health, since there is evidence of possible correlation of MAP with Crohn's disease. Although previous researches have contributed to advances in the diagnosis of subclinical MAP in animals, there is a lack of studies concerning the correct understanding of its pathophysiology. Thus, the aim of this study was to investigate the distribution of MAP by means of the histology and nested-PCR techniques in organs of C57BL/6 mice infected with MAP66115-98 strain at a dose of 3 x 108 CFU /mL intraperitoneally (IP). It was applied 250&#956;l of inoculum in 20 mice, and it was applied saline phosphate buffer (PBS) in eight control species. The animals were euthanized at 30, 60, 90 and 120 days post-inoculation, and fragments of spleen, liver, colon, ileum and Peyer's patches of five mice and two control, for each period of time, were performed molecular and histopathological evaluations. Although it was not found histologic lesions in sections stained by Hematoxylin Eosin, there was a positive staining for two Peyer s patches referring to 90 and 120 days after inoculation, stained by Ziehl-Neelsen. Among the collected organs, 64.9% were positive by molecular technique. The spleen (0.85), colon (0.75) and liver (0.60) had the highest proportion of positive regardless of the evaluation period. Taking into consideration the time after inoculation, the spleen had a higher proportion of positive results after 60 days of infection (1.00), remaining stable until 120 days. The colon had a higher proportion at 30 days (1.00) and drastically reduced to 90 days (0.40). The liver ranged between 0.40 and 0.80 during the four periods of evaluation and the Ileum showed positivity ratio equal to 0.80 only at 120 days of infection. Moreover, Peyer's patches did not vary significantly (0.40) from day 60, remaining with the lowest ratio among the organs studied. The assessment of the probability of infection of an organ relative to another was obtained by the Relative Risk, where the highest values were observed in the ratio of spleen/Peyer's patches (2.00), colon/Peyer's patches (1.74), spleen/ileum (1.54) and spleen/liver (1.40). The highest odds ratio values were observed in the spleen/Peyer s patches (7.56), spleen/ileum (4.64), spleen/liver (3.78), and colon/ileum (2.45). However, among all the established associations, only the relations spleen / ileum and spleen / Peyer's patches were statistically significant at the level of 95%, showing that the spleen was the organ with higher risk and chances of positivity in relation to the ileum and Peyer's patches. Thus, these results can contribute to better understanding of the distribution of MAP in experimental models during the course of systemic infection, being this the first study to correlate the infective capacity of the strain MAP66115- 98 in C57BL/6 mice with a distribution in different organs after inoculation by intraperitoneal route. / Mycobacterium avium subespécie paratuberculosis (MAP) é o agente etiológico da paratuberculose, uma enfermidade que causa enterite granulomatosa crônica preferencialmente em ruminantes domésticos e silvestres. É considerada uma doença de impacto na economia, devido às perdas no rebanho e na saúde humana, uma vez que se têm indícios da possível relação de MAP com a doença de Crohn. Embora pesquisas tenham contribuído para avanços no diagnóstico de MAP, há carências de estudos relacionados à compreensão de sua patofisiologia. Desse modo, este estudo propôs avaliar a distribuição de MAP por meios das técnicas de nested-PCR e histologia em órgãos de camundongos C57BL/6 infectados por via intraperitoneal com a cepa MAP66115-98. Em 20 camundongos foram aplicados 250&#956;l de inóculo contendo 3 x 108 UFC/mL e, em oito controles foram aplicados tampão fosfato-salina (PBS). Os animais foram eutanasiados aos 30, 60, 90 e 120 dias pós-inoculação. Em cada período, foram coletados baço, fígado, cólon, íleo e placas de Peyer de cinco camundongos desafiados e dois controles. O material foi dividido para avaliação molecular e histopatológica. Embora não tenham sido verificadas alterações histológicas nas lâminas coradas pela Hematoxilina Eosina, houve marcação positiva para duas placas de Peyer, referentes a 90 e 120 dias pós-inoculação, quando coradas pela técnica de Ziehl-Neelsen. Dentre os órgãos coletados, 64,9% foram positivos pela técnica molecular. Os órgãos que apresentaram maiores valores proporcionais de positividade independentemente do período de avaliação foram o baço (0,85), o cólon (0,75) e o fígado (0,60). Ao levar em consideração o tempo pós-inoculação, o baço apresentou maior proporção de positividade após 60 dias (1,00), permanecendo estável até os 120 dias, enquanto o cólon apresentou maior proporção aos 30 dias (1,00) e reduziu drasticamente aos 90 dias (0,40) da inoculação. O fígado variou entre 0,40 e 0,80 durante os quatro períodos de avaliação e o Íleo apresentou proporção de positividade igual a 0,80 apenas aos 120 dias de inoculação. Por outro lado, as placas de Peyer não variaram significativamente a partir dos 60 dias (0,40) permanecendo com a menor proporção dentre os órgãos analisados. A avaliação da probabilidade de infecção de um órgão em relação a outro foi obtida pelo Risco Relativo, onde os maiores valores foram verificados na relação entre baço/placas de Peyer (2,00); cólon/placas de Peyer (1,74); baço/íleo (1,54) e baço/fígado (1,40). Os maiores valores de Razão de Chances foram verificados na relação entre baço/placas de Peyer (7,56); baço/íleo (4,64); baço/fígado (3,78) e cólon/íleo (2,45). Contudo, dentre todas as associações estabelecidas, apenas as relações: baço/íleo e baço/placas de Peyer foram estatisticamente significativas à nível de 95%, demonstrando que o baço foi o órgão com maior risco e chances de positividade em relação ao íleo e placas de Peyer. Assim, estes resultados podem contribuir para a melhor compreensão da distribuição de MAP em modelos experimentais durante o curso de uma infecção sistêmica, sendo o primeiro trabalho a correlacionar a capacidade infectiva da cepa MAP66115-98 nos camundongos C57BL/6 com a sua distribuição em diferentes órgãos pós-inoculação usando a via intraperitoneal.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 198280 bytes, checksum: 2e22264df93097f0e349bfa39abd6bcd (MD5) Previous issue date: 2003-09-05 / The present work was developed with the objective to determine the efficiency of an autogenous bacterin against Streptococcus suis serotype 2 and to test route and inoculation doses. Two experiments were accomplished with 64 animals in each experiment. In the Experiment I, 32 animals were vaccinated and 32 animals received placebo, being both groups challenged at the 60 days of age. In the Experiment II, the animals were divided in four groups: NVIP - 16 animals not vaccinated and challenged by the intraperitoneal route; VIP - 16 vaccinated animals and challenged by the intraperitoneal route; NVIV - 16 animals not vaccinated and challenged by the intravenous route; and VIV - 16 vaccinated animals and challenged by the intravenous route. All the groups were challenged at the 88 days of age. In the Experiment I, it was not possible to detect significant difference in the protection, clinical signs and lesions (P>0.05) among the groups not vaccinated and vaccinated. However, the isolation of S. suis and the average of the bacterial count was higher (P <0.01) in the group not vaccinated. The results observed in Experiment II in the groups NVIV and VIV presented protection, clinical signs and lesions similar (P>0.05), and the number of animals with positive isolation of S. suis and the average of the bacterial count was higher in the group NVIV (P<0.05). The groups NVIP and VIP presented significant difference for protection, clinical signs, lesions, number of positive isolations and average of the bacterial agent count (P <0.01). The intravenous challenge route was not appropriate for that experiment type and the intraperitoneal route presented favorable aspects. The vaccine was efficient for prevention of the infection with high virulent S. suis serotype 2, protecting the animals with an efficiency of 87.5 percent. / O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de determinar a eficácia de uma bacterina autógena na proteção de suínos desafiados com Streptococcus suis sorotipo 2 de alta virulência e testar vias e doses de inoculação do agente. Foram realizados dois experimentos com 64 animais em cada experimento. No Experimento I, 32 animais foram vacinados aos 21 e 45 dias de idade, através de injeção intramuscular de 2 e 3 mL da bacterina, respectivamente. Os 32 animais restantes constituíram o grupo controle não vacinado. Aos 60 dias de idade os 64 animais foram desafiados via intravenosa, na dosagem de 8,6 x 109 UFC. No experimento II, 64 animais foram divididos em dois grupos de 32 animais. Um grupo foi vacinado aos 25 (2 mL) e 50 (3 mL) dias de idade, por via intramuscular, e o outro constituiu o grupo controle não vacinado. Os animais foram desafiados aos 88 dias de idade na dosagem de 7,2 x 109 UFC. Para efeito de desafio, os animais foram divididos em quatro grupos: NVIP - 16 animais não vacinados e desafiados pela via intraperitoneal; NVIV - 16 animais não vacinados e desafiados pela via intravenosa; VIP 16 animais vacinados e desafiados pela via intraperitoneal; e VIV - 16 animais vacinados e desafiados pela via intravenosa. No Experimento I, não foi possível detectar diferença significativa na proteção, sinais clínicos e lesões (p>0.05) entre os grupos não vacinado e vacinado. Só foi possível detectar diferença significativa no número de animais com isolamento positivo do S. suis e na média da contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de S. suis (P<0.01). Os resultados observados no Experimento II, foram: 1) os grupos NVIV e VIV apresentaram proteção, sinais clínicos e lesões similares (P>0.05), e o número de animais com isolamento positivo do S. suis e a média da contagem de colônias de S. suis foi mais elevada no grupo NVIV (P<0.01), confirmando os resultados apresentados no Experimento I; e 2) os grupos NVIP e VIP apresentaram diferenças significativas para proteção, sinais clínicos, lesões, número de isolamentos positivos e média da contagem bacteriana do agente (P<0.01). O grupo NVIP apresentou 5/16 mortes e 11/16 sobreviventes doentes, enquanto que o grupo VIP teve 14/16 sobreviventes sadios e 2/16 de sobreviventes doentes, não apresentando nenhuma morte. A temperatura retal no grupo NVIP foi, em média, 0,5o C superior à do grupo VIP (P<0.01). O escore médio dos sinais clínicos nos grupos NVIP e VIP foi de 1,10±0,10 e 0,34±0,05, respectivamente, sendo mais elevado no grupo não vacinado (P<0.05). O escore médio das lesões também foi mais elevado no grupo NVIP (0,89±0,19) em relação ao grupo VIP (0,20±0,08) (P<0.05). O isolamento do S. suis foi positivo em 9/16 animais do grupo NVIP, com média da contagem bacteriana de 295,25±91,62 UFC/mL, sendo que no grupo VIP não foi possível isolar o agente em qualquer dos animais. A proteção da vacina para os animais desafiados pela via intraperitoneal foi calculada em 87,5%. Portanto, a via de desafio utilizada influenciou nos sinais clínicos, lesões e isolamento bacteriano dos animais vacinados e não vacinados. A via intravenosa não se mostrou adequada para esse tipo de experimento e a via intraperitoneal apresentou aspectos favoráveis. Finalmente, a vacina mostrou ser eficaz na prevenção da infecção pelo S. suis sorotipo 2 de alta virulência, protegendo os animais com uma eficiência estimada de 87,5%.