Este estudio consiste en el análisis prospectivo de las enfermedades coroidoretinianas a través del ecógrafo tridimensional. Se analizaron todas las ventajas de esta técnica con relación a los otros ecógrafos convencionales.Los pacientes fueron distribuidos en tres grupos dependiendo de la enfermedad: grupo 1: Pacientes con melanomas de coroides, grupo 2: Pacientes con desprendimiento total de retina, grupo 3: pacientes con desprendimiento masivo de coroides.La ecografía tridimensional en el grupo de pacientes con desprendimiento total de la retina, en los casos pos traumáticos, proporcionó una enorme rapidez en la localización espacial del cuerpo extraño intraocular. También fue de gran ayuda, en los casos de desprendimiento total de retina con intensa proliferación vítreo-retiniana, a medida en que proporcionó una localización espacial más precisa y más rápida de las proliferaciones vítreas para un mejor planeamento quirúrgico y a la hora de elegir un sítio más adecuado para las esclerotomías. En los casos de desprendimiento hemorrágico masivo de coroides nos dio en unos pocos segundos, la localización y la extensión espacial exacta y total de de la hemorragia supracoroidea y su relación anatómica con el globo ocular. En el grupo de pacientes com melanomas de coroides observamos observamos que los pacientes tratados con radioterapia y termoterapia transpupilar, hubo una subestimación de la reducción de estos dos tipos de tratamientos cuando medimos solamente la altura máxima del tumor, que normalmente son medidas a través del ecógrafo convencional, no teniendo en cuenta el volumen total del tumor. Y el ecógrafo tridimensional se mostró superior al ecógrafo bidimensional principalmente en los tumores grandes y medianos a medida en que nos dio más cortes sectoriales de los tumores. / This is a prospective study of the choroidal retinal diseases in the tridimensional echography, aiming to analyze its advantages in relation to the bidimensional echography. The patients were divided into three study groups, according to the diseases: 1: choroidal melanomas; 2: retinal detachment; and 3: hemorragic choroidal detachment.In patients with retinal detachment after trauma, the tridimensional echography allowed a very quick space location of intraocular foreign body. It was very useful too in the retinal detachment with intense vitreoretinal proliferacion, for it permitted a faster and more accurate space location of those vitreo proliferacion and consequently a better surgical planning and a more exact choice of the best point to do the sclerotomies.In the cases of hemorragic choroidal detachment, the tridimensional echography determined, in a few seconds, the extension and the location of the hemorragy, helping in establishing the best point to do the sclerotomies and the relation of the choroidal hemorragy and the ocular anatomy.In the cases of choroidal melanomas, whose patients were treated with radiotherapy and transpupillary termotherapy, it was possible to observe that the measures of the height of the tumors provided by the conventional echography tend to underestimate the results of these treatments, for it is not able to evaluate the total volume of the tumor, as the tridimensional echography does.The tridimensional echography revealed to be more useful than the bidimensional one mainly in the medium and large tumors, in which it gives us a larger number of sectional cuts.

La plupart des cellules cancéreuses présentent une reprogrammation métabolique qui favorise la glycolyse et diminue la phosphorylation oxydative. Cette reprogrammation a reçu le nom d’effet Warburg et permet aux cellules tumorales de proliférer même en conditions adverses. Bien que l’effet Warburg ait été, pendant longtemps, associé à un dysfonctionnement mitochondrial, plusieurs études ont montré que dans les cellules cancéreuses les mitochondries ne sont pas dysfonctionnelles et jouent même un rôle important dans la tumorigénèse. Cependant, les mécanismes qui régulent cette reprogrammation métabolique dans le mélanome restent encore à être bien évalués. Dans ce contexte, nous avons montré que les mélanomes présentent une faible activité mitochondriale caractérisée par une diminution de la consommation d’oxygène. Ce profil métabolique est contrôlé au moins en partie par le facteur de transcription HIF-1, via l’expression de la pyruvate déshydrogénase kinase 3 (PDK3). L’inhibition pharmacologique de la PDK3, utilisant le Dichloroacetate (DCA) est suffisante pour réactiver la phosphorylation oxydative et induire la production des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Ainsi, la combinaison du DCA avec la molécule pro-oxydant elesclomol permet de potentialiser l’effet antitumural de cette dernière, de manière synergique. Fait intéressant, cette combinaison est également efficace dans les cellules ayant développé une résistance au vemurafenib, un inhibiteur de la protéine BRAFV600E. Dans ce contexte, dans la deuxième partie de cette étude, nous avons évalué si les cellules résistantes au vemurafenib présentent une modification métabolique qui pourrait expliquer leur sensibilité à la combiniasion DCA+eleslclomol. Nous avons montré que le vemurafenib induit une diminution de la glycolyse rendant les cellules dépendantes à la phosphorylation oxydative et augmente la biogénèse mitochondriale de manière dépendante ou indépendante de la réactivation de la voie MITF/PGC1α. En accord avec ces résultats, les cellules résistantes au vemurafenib présentent une augmentation de la consommation d’oxygène et de la production de ROS par rapport aux cellules sensibles. Le nouveau profil métabolique des cellules résistantes les rende plus sensibles aux agents pro-oxydants tels que l’elesclomol Nos résultats ont permis de montré la possibilité de cibler les modifications métaboliques par une approche pro-oxydant dans le but d’éradiquer de manière efficace les cellules de mélanome. / Most cancer cells undergo a metabolic rewiring from oxidative phosphorylation to glycolysis that allows them to proliferate even under stressful conditions. This phenomenon is known as the Warburg Effect and has been often associated to mitochondrial dysfunction. Although, many studies have shown that mitochondria is still active in cancer cells and seems to play a key role in tumorigenesis little is know about the mechanisms that regulate this metabolic swift. In this context, we first focused in the study of melanoma metabolism in different cell lines as in samples coming from patients. We first found that melanoma cells present low mitochondrial activity characterized by low oxidative phosphorylation. This metabolic behavior is at least partially controlled by the hypoxia-inducible factor-1α HIF-1α witch is constitutively express in melanoma cells even under nomoxic conditions. Inhibition of this factor induces a strong decrease in the expression and activity of PDK3. Pharmacological inhibition of PDK3 activity by dichloroacetate (DCA) is enough to reactivate mitochondrial oxidative phosphorylation and reactive oxygen species (ROS) production. Furthermore DCA increases in a synergistic manner elesclomol’s induced ROS production and cell death. Interestingly, BRAF V600E melanoma cells that were resistant to the BRAF inhibitor vemurafenib show were also sensible to this combination. Consequently, as a second part of this work we looked for to understand, why resistant cells were so sensible to these agents and if there were some metabolic modifications that could explain this behavior. We found that vemurafenib BRAFV600E induced inhibition causes an important decrease in glycolysis and renders melanoma cells addicted to oxidative phosphorylation by increasing mitochondria biogenesis dependently or not of MTIF/PCG1 axis. Conversely, vemurafenib resistant melanoma cell lines show higher mitochondrial activity associated with higher ROS production. Thus these cells are more sensible to elesclomol induced cell death than vemurafenib sensible cell lines. Our findings provide new insights into the metabolic pathways that allow cells to adapt to difficult microenvironment, showing that these metabolic modifications, especially in terms of ROS production, can be used to target and eradicate melanoma cells.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:35:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:35:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Embora a terapia com uso de laser de baixa potência (TLBP) seja uma modalidade terapêutica amplamente estudada no meio científico, sua aplicação na clínica médica ainda gera controvérsias, já que a literatura reporta que a TLBP é capaz de promover a proliferação e diferenciação de células tumorais. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da TLBP no crescimento celular usando como modelo a linhagem B16F10 de melanoma murino em estado de homeostase e estado redox, além de verificar o comportamento quimiotáxico da linhagem B16F10 por meio do ensaio de migração transwell em resposta à TLBP em diferentes densidades de energia. Foram montados cinco grupos experimentais utilizando um laser de emissão vermelha em λ = 660 nm: Grupo controle (GC) onde nenhuma irradiação foi realizada; G30 (30J/cm2); G60 (60J/cm2); G90 (90J/cm2); G120 (120J/cm2); G150 (150J/cm2), com as respectivas doses utilizadas. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística. Sob as condições experimentais deste estudo, nossos resultados mostram que a TLBP neste comprimento de onda não promoveu mudanças no metabolismo celular nos tempos de 48 h e 72 h, independente do estado nutricional. Foi possível observar mudança no padrão de comportamento quimiotáxico da linhagem celular B16F10 irradiadas com laser de emissão vermelha. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Tumores malignos de origem nÃo epitelial sÃo considerados raros na regiÃo de cabeÃa e pescoÃo e podem apresentar grande morbidade e mortalidade. Este estudo teve o objetivo de fazer um levantamento dos casos de sarcomas e melanomas em regiÃo de cabeÃa e pescoÃo no perÃodo de 1999 a 2008, em trÃs centros especializados no MunicÃpio de Fortaleza, CearÃ. A coleta de dados foi feita com base nos livros de registros das cirurgias de cabeÃa e pescoÃo e dos prontuÃrios dos centros avaliados. Foram observados 54 casos, sendo 36 sarcomas e 18 melanomas. Quanto à avaliaÃÃo dos sarcomas, observamos que os indivÃduos mais acometidos foram homens adultos, da raÃa parda, na faixa etÃria de 20 a 59 anos, com idade mÃdia de 39,7. A relaÃÃo homem/mulher foi de 1,76:1. O tipo histolÃgico mais prevalente foi o rabdomiossarcoma, e as localizaÃÃes mais acometidas foram face e regiÃo cervical. Em relaÃÃo aos melanomas, homens adultos tambÃm foram predominantes, na faixa etÃria de 20 a 59 anos, com idade mÃdia de 54,6. Verificou-se igual acometimento nas raÃas parda e branca, com 33,3%, cada uma. A relaÃÃo homem/mulher foi de 1,25:1. O tipo histolÃgico mais prevalente foi o melanoma de disseminaÃÃo superficial, e a pele da face foi a localizaÃÃo mais frequente. Na avaliaÃÃo da procedÃncia, houve semelhanÃa em ambas as doenÃas, sendo aproximadamente metade dos pacientes da capital e metade do interior do estado. Quanto ao acompanhamento, a maior parte da amostra foi de pacientes vivos sem evidÃncia de doenÃa na Ãltima consulta, correspondendo a 41,6% nos sarcomas e 44,5% entre os melanomas. A variaÃÃo de terapia tambÃm foi observada em ambos os grupos, sendo os tipos mais comuns de tratamento a associaÃÃo de cirurgia, radioterapia e quimioterapia e cirurgia e radioterapia para sarcomas, e cirurgia, seguida da associaÃÃo de cirurgia e radioterapia para melanomas. Apesar de os tumores malignos de origem nÃo epitelial em cabeÃa e pescoÃo serem lesÃes raras, eles apresentam grande morbidade e mortalidade e dessa forma, necessita-se de que seus aspectos clinicopatolÃgicos sejam estudados e conhecidos, sempre com o objetivo de melhorar as formas de tratamento dessas lesÃes, garantindo assim maiores chances de cura e melhor qualidade de vida para os pacientes acometidos. / Malignant tumors of non-epithelial origin are considered rare in the head and neck region and they can show great morbidity and mortality. The aim of this study was to investigate the cases of sarcomas and melanomas in the head and neck region over the period from 1999 to 2008, in specialized centers located in the Municipality of Fortaleza. The data were collected from the register books of surgery of the head and neck and patient reports at the evaluated centers. Fifty-four cases were observed, being 36 sarcomas and 18 melanomas. As per the evaluation of the sarcomas, we have observed that the most assailed individuals were men with brown skin, ranging from 20 to 59 years old, with median age of 39.7. The relation man/woman was 1.7:1. The most prevailing histological type was the rhabdomyosarcoma, and the most attacked areas were the face and the cervical region. And as per the melanomas, adult men were also prevailing, ranging from 20 to 59 years old, with median age of 54.6. It has also been verified equal assailment in the brown and white races, with 33.3% in each one. The relation man/woman was 1.25:1. The most prevailing histological type was the superficial spreading melanoma, and the face skin was the most frequent location. In the evaluation of the origin, there was similarity in both diseases, being approximately half the patients in the capital city, and half in the stateÂs hinterland. As concerning the monitoring, the greatest part of the sample came from patients alive without evidence of the disease from the last consultation, corresponding to 41.6% in sarcomas and 44.5% in melanomas. The variation of therapy has also been observed in both groups, being the most common types of treatments, the association of surgery, radiotherapy and chemotherapy and surgery and radiotherapy for sarcomas and surgery, followed by surgery and radiotherapy for melanomas. Although malignant tumors of non-epithelial origin are rare in the head and neck region, they can show great morbidity and mortality and it is necessary the better understanding of their clinicalpatological aspects, in order to establish better treatment and life quality to these patients.

Apesar de ser bem conhecido que a radiação ultravioleta (UV) causa danos na pele, já foram descritos alguns efeitos benéficos desta radiação, como por exemplo a sensação de bem estar proporcionado pela exposição a luz. Na pele, o triptofano (Trp) é metabolizado a compostos biologicamente ativos, e acredita-se que a síntese de serotonina (SER), um dos metabólitos do Trp, na fototerapia seja parte dos mecanismos de remissão da depressão de pacientes com desordem de humor sazonal. Ainda, a radiação UV induz diretamente a expressão e atividade de TDO, enzima que catalisa a transformação de Trp em quinurenina (KYN), em bactérias, efeito que ainda não havia sido estudado em células humanas. Com isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a habilidade da radiação UV-A em modular a expressão de enzimas envolvidas nas rotas catabólicas do Trp em melanócitos e melanomas. Para isso foi realizada a padronização das condições de radiação UV-A através de ensaio de viabilidade celular, e então definimos condições que não levaram a morte das células (1,5 J/cm2 para melanócitos e 3 e 6 J/cm2 para melanomas). A radiação UV-A aumentou a expressão de IDO e TDO nos melanomas, enzimas que favorecem a progressão tumoral, e não só essas enzimas, houve aumento da expressão de KYNU e KMO, que também estão envolvidas na progressão tumoral. Além disso, a expressão de AANAT e HIOMT, responsáveis pela produção de melatonina (MLT), foi maior nos melanomas após 48 horas da radiação, enquanto a enzima INMT teve sua expressão aumentada em todos os tempos. O aumento de INMT em melanomas é muito interessante e podemos relacionar ao bem estar proporcionado pela exposição à luz, já que o produto dessa enzima, DMT, é conhecido por proporcionar essa sensação, porém o aumento observado na expressão de IDO e TDO em melanomas, indica um efeito nocivo da luz associado a produção de moléculas que estão fortemente ligadas aos processos de progressão e imunoescape tumoral. Os melanócitos parecem possuir menor susceptibilidade a radiação UV-A, pois as únicas enzimas que tiveram expressão aumentada após a radiação foram a KMO e a TPH1, e apesar da enzima TPH1 ter a expressão aumentada, esse aumento foi modesto o que nos levou a pensar que outras células da pele possam ter um papel mais relevante na produção de SER ou então outras condições de radiação. / Although it is well known that ultraviolet (UV) radiation causes skin damage, it was already described some benefits to this radiation, for instance the well-being feelings provided by light exposure. In the skin, tryptophan (Trp) is metabolized to biologically active compounds, and it is believed that the synthesis of serotonin, one of tryptophan metabolites, in phototherapy is part of mechanisms of remission of depression in patients with seasonal mood disorder. Moreover, in bacteria the UV radiation directly induces the expression and activity of TDO, the enzyme that catalyzes the metabolization of Trp to kynurenine (KYN). This effect has not been studied in human cells yet. Therefore, the objective of this work was to evaluate if UV-A radiation modulates the expression of enzymes involved in melanocytes and melanoma Trp metabolism. For this aim, we standardized the UV-A radiation conditions through cell viability assay, and then we defined the better conditions to avoid cell death (1,5 J/cm2 to melanocytes and 3 and 6 J/cm2 to melanomas). The UV-A radiation increased the expression of IDO and TDO in melanomas, enzymes that contribute to tumor immune- escape. The expression of KYNU and KMO also increased, and these enzymes are also involved with some types of tumors progression. Furthermore, the expression of AANAT and HIOMT, responsible for melatonin (MLT) production, was higher in melanomas after 48 hours of radiation while INMT had an increased expression at all times. The increase of INMT by melanomas is very interesting and can be related to the well being provided by exposure to light, since the product of this enzyme, DMT, is known to provide this sensation. However, the observed increased of expression of IDO and TDO in melanomas indicates a harmful effect of light associated with the production of molecules linked to tumor progression and immune-escape processes. The melanocytes appear to be less susceptible to UV-A radiation, because only the enzymes KMO and TPH1 had their expression increased after radiation, and for TPH1 this effect was relatively small. Thus, we believe that other skin cells may have a more relevant role in SER production or other radiation conditions.

Uma série de três complexos de cobre(II) dinucleares, contendo ligantes nitrogenados e grupos aromáticos (compostos 2, 4 e 6), foi sintetizada e caracterizada por diversas técnicas espectroscópicas (UV/Vis, IV e EPR). Esses compostos tiveram sua atividade tirosinase avaliada à temperatura ambiente, através da oxidação de L-di-hidroxifenilalanina (L-dopa), e sua citotoxicidade investigada frente a células melanomas, comparada às de complexos análogos de cobre(II) mononucleares (compostos 1, 3 e 5). A influência da luz UVB, que estimula a melanogênese, também foi verificada. A exposição das células à radiação de intensidade (13 ± 2) mJ/cm2 aumentou os danos causados, principalmente em presença das espécies dinucleares. A citotoxicidade dos diferentes complexos foi determinada frente a duas linhagens de melanomas humanos (SKMEL-05 e SKMEL-147), após 24 e 48h de incubação. Células com maior teor de melanina foram mais sensíveis aos efeitos dos complexos. Verificou-se um aumento na porcentagem de células na fase sub-G1 do ciclo celular após tratamento por 24 ou 48h com estes complexos, ao contrário do verificado frente a queratinócitos não tumorais. Testes clonogênicos também indicaram maior atividade do composto (2) contendo dois centros de cobre em sua estrutura, com diminuição significativa no número de células sobreviventes após tratamento. Ensaios complementares mostraram a redução dos íons de cobre(II) nos compostos (1) e (2) em presença de melanina e a formação de espécies reativas de oxigênio (radicais hidroxil e ânions superóxido), através de espectroscopia EPR ou do uso de sondas fluorescentes. Adicionalmente, foi constatado um aumento no nível de vacúolos citoplasmáticos após tratamento com o complexo (2), indicando indução à autofagia, corroborada pelo monitoramento das proteínas LC3 e tubulina, implicadas neste processo de morte celular. Os resultados apontam para a ocorrência de pelo menos dois mecanismos de ação dos complexos frente aos melanomas, por processo apoptótico e autofágico. Indicam ainda que esta reatividade frente a melanomas é fortemente dependente da estrutura dos complexos de cobre, sendo mais significativa para os dinucleares / A series of dinuclear copper(II) complexes containing nitrogen ligands and aromatic groups (compounds 2, 4 and 6), were synthesized and characterized by various spectroscopic methods (UV/Vis, IR and EPR). These complexes had their tyrosinase activity evaluated at room temperature, through the oxidation of L-di-hidroxyphenylalanine (L-dopa), and its cytotoxicity toward melanoma cells investigated, in comparison with the toxicity of the corresponding mononuclear complexes (compounds 1, 3 and 5). The influence of UVB light, that stimulates melanogenesis, was also verified. The exposition of the cells to radiation of intensity (13 ± 2) mJ/cm2, increased the caused damage, especially in the presence of dinuclear species. The cytotoxicity of the different complexes was determined toward two cell lines of human melanomas (SKMEL-05 e SKMEL-147), after 24 and 48h incubation. Cells containing higher leveis of melanin were more sensitive to the effects of the complexes. An increasing in the percentage of cells in the sub-G1 phase of cellular cycle was verified after treatment for 24 or 48h with these complexes. On the contrary, this effect was not observed with non-tumor keratinocytes. Clonogenic tests also indicated higher activity of compound 2 containing two copper centers in its structure, with a significant decrease in the number of survival cells after the treatment. Complementary assays show the reduction of copper(II) ions in complexes (1) and (2), in the presence of melanin, as well as the formation of reactive oxygen species (hydroxyl radicais and superoxide anions) via EPR spectroscopy or the use of fluorescent labels. Further, an increase in the levei of cytoplasmatic vacuoles was verified after treatment with complex (2), indicating induction to autophagy, which was corroborated by monitoring the proteins LC3 and tubulin, implicated in this process of cell death. The results pointed to the occurrence of at least two mechanisms of action of these complexes toward melanomas, apoptotic and autophagic processes. Also, they indicated that the reactivity of the studied compounds is strongly dependent on its structural features, being more remarkable to the dinuclear ones.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-25 / Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito do uso tópico da fenitoína na cicatrização de feridas cutâneas. A fenitoína como terapia sistêmica tem ação anticonvulsivante, e com o uso tópico tem ação de acelerar a cicatrização de feridas cutâneas. Neste estudo foram avaliados 100 pacientes cada um com 2 feridas cutâneas resultantes da excisão de lesões de nevos melanocíticos, sendo 50 pacientes com lesões na face e 50 pacientes com lesões em dorso do tórax, totalizando 200 lesões excisadas com punch modificado. Durante o tratamento o mesmo paciente recebia a fenitoína a 0,5% em creme e o creme base (controle), para fazer os curativos diariamente. O seguimento dos pacientes foi realizado no periodo de 7, 14, 21 e 60 dias, sendo avaliados os seguintes parâmetros: sangramento, exsudato, eritema na borda da ferida, infecção, presença de tecido de granulação hipertrófico, tempo de cicatrização, intensidade da epitelização, área da ferida cutânea, o formato e área da cicatriz, as possíveis reações adversas e o resultado cosmético. Os pacientes foram comparados quanto a idade, peso, altura, fototipo, tipo histológico da lesão. A fenitoína apresentou melhor resultado terapêutico e cosmético comparado com o creme base (controle). A fenitoína é uma droga de baixo custo, que acelera a cicatrização de feridas cutâneas. / This study aims to evaluate the effect of topical use of phenytoin in healing of skin wounds. A systemic therapy with phenytoin have anticonvulsant activity, and the topical use action is to accelerate the healing of skin wounds. This study evaluated 100 patients each with 2 wounds resulting from excision of lesions of melanocytic nevi, 50 patients with lesions on the face and 50 whith back injuries in the chest, total of 200 lesions excised with punch modified. During treatment the patient received phenytoin to 0.5% in the cream and cream base (control), to make the dressing daily. The follow up of patients was carried out from 7, 14, 21 and 60 days, where the following parameters were evaluated: bleeding, exudate, erythema at the edge of the wound, infection, presence of hypertrophic granulation tissue, healing time, intensity of epithelialization, the wound area, the shape and area of the scar, possible adverse reactions and cosmetic outcome. The patients were compared in age, weight, height, phototype, histological type of lesion. The phenytoin showed better therapeutic and cosmetic results compared with the cream base (control). The phenytoin is a drug of low cost, which accelerates the healing of skin wounds. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Uma série de três complexos de cobre(II) dinucleares, contendo ligantes nitrogenados e grupos aromáticos (compostos 2, 4 e 6), foi sintetizada e caracterizada por diversas técnicas espectroscópicas (UV/Vis, IV e EPR). Esses compostos tiveram sua atividade tirosinase avaliada à temperatura ambiente, através da oxidação de L-di-hidroxifenilalanina (L-dopa), e sua citotoxicidade investigada frente a células melanomas, comparada às de complexos análogos de cobre(II) mononucleares (compostos 1, 3 e 5). A influência da luz UVB, que estimula a melanogênese, também foi verificada. A exposição das células à radiação de intensidade (13 ± 2) mJ/cm2 aumentou os danos causados, principalmente em presença das espécies dinucleares. A citotoxicidade dos diferentes complexos foi determinada frente a duas linhagens de melanomas humanos (SKMEL-05 e SKMEL-147), após 24 e 48h de incubação. Células com maior teor de melanina foram mais sensíveis aos efeitos dos complexos. Verificou-se um aumento na porcentagem de células na fase sub-G1 do ciclo celular após tratamento por 24 ou 48h com estes complexos, ao contrário do verificado frente a queratinócitos não tumorais. Testes clonogênicos também indicaram maior atividade do composto (2) contendo dois centros de cobre em sua estrutura, com diminuição significativa no número de células sobreviventes após tratamento. Ensaios complementares mostraram a redução dos íons de cobre(II) nos compostos (1) e (2) em presença de melanina e a formação de espécies reativas de oxigênio (radicais hidroxil e ânions superóxido), através de espectroscopia EPR ou do uso de sondas fluorescentes. Adicionalmente, foi constatado um aumento no nível de vacúolos citoplasmáticos após tratamento com o complexo (2), indicando indução à autofagia, corroborada pelo monitoramento das proteínas LC3 e tubulina, implicadas neste processo de morte celular. Os resultados apontam para a ocorrência de pelo menos dois mecanismos de ação dos complexos frente aos melanomas, por processo apoptótico e autofágico. Indicam ainda que esta reatividade frente a melanomas é fortemente dependente da estrutura dos complexos de cobre, sendo mais significativa para os dinucleares / A series of dinuclear copper(II) complexes containing nitrogen ligands and aromatic groups (compounds 2, 4 and 6), were synthesized and characterized by various spectroscopic methods (UV/Vis, IR and EPR). These complexes had their tyrosinase activity evaluated at room temperature, through the oxidation of L-di-hidroxyphenylalanine (L-dopa), and its cytotoxicity toward melanoma cells investigated, in comparison with the toxicity of the corresponding mononuclear complexes (compounds 1, 3 and 5). The influence of UVB light, that stimulates melanogenesis, was also verified. The exposition of the cells to radiation of intensity (13 ± 2) mJ/cm2, increased the caused damage, especially in the presence of dinuclear species. The cytotoxicity of the different complexes was determined toward two cell lines of human melanomas (SKMEL-05 e SKMEL-147), after 24 and 48h incubation. Cells containing higher leveis of melanin were more sensitive to the effects of the complexes. An increasing in the percentage of cells in the sub-G1 phase of cellular cycle was verified after treatment for 24 or 48h with these complexes. On the contrary, this effect was not observed with non-tumor keratinocytes. Clonogenic tests also indicated higher activity of compound 2 containing two copper centers in its structure, with a significant decrease in the number of survival cells after the treatment. Complementary assays show the reduction of copper(II) ions in complexes (1) and (2), in the presence of melanin, as well as the formation of reactive oxygen species (hydroxyl radicais and superoxide anions) via EPR spectroscopy or the use of fluorescent labels. Further, an increase in the levei of cytoplasmatic vacuoles was verified after treatment with complex (2), indicating induction to autophagy, which was corroborated by monitoring the proteins LC3 and tubulin, implicated in this process of cell death. The results pointed to the occurrence of at least two mechanisms of action of these complexes toward melanomas, apoptotic and autophagic processes. Also, they indicated that the reactivity of the studied compounds is strongly dependent on its structural features, being more remarkable to the dinuclear ones.

Apesar de ser bem conhecido que a radiação ultravioleta (UV) causa danos na pele, já foram descritos alguns efeitos benéficos desta radiação, como por exemplo a sensação de bem estar proporcionado pela exposição a luz. Na pele, o triptofano (Trp) é metabolizado a compostos biologicamente ativos, e acredita-se que a síntese de serotonina (SER), um dos metabólitos do Trp, na fototerapia seja parte dos mecanismos de remissão da depressão de pacientes com desordem de humor sazonal. Ainda, a radiação UV induz diretamente a expressão e atividade de TDO, enzima que catalisa a transformação de Trp em quinurenina (KYN), em bactérias, efeito que ainda não havia sido estudado em células humanas. Com isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a habilidade da radiação UV-A em modular a expressão de enzimas envolvidas nas rotas catabólicas do Trp em melanócitos e melanomas. Para isso foi realizada a padronização das condições de radiação UV-A através de ensaio de viabilidade celular, e então definimos condições que não levaram a morte das células (1,5 J/cm2 para melanócitos e 3 e 6 J/cm2 para melanomas). A radiação UV-A aumentou a expressão de IDO e TDO nos melanomas, enzimas que favorecem a progressão tumoral, e não só essas enzimas, houve aumento da expressão de KYNU e KMO, que também estão envolvidas na progressão tumoral. Além disso, a expressão de AANAT e HIOMT, responsáveis pela produção de melatonina (MLT), foi maior nos melanomas após 48 horas da radiação, enquanto a enzima INMT teve sua expressão aumentada em todos os tempos. O aumento de INMT em melanomas é muito interessante e podemos relacionar ao bem estar proporcionado pela exposição à luz, já que o produto dessa enzima, DMT, é conhecido por proporcionar essa sensação, porém o aumento observado na expressão de IDO e TDO em melanomas, indica um efeito nocivo da luz associado a produção de moléculas que estão fortemente ligadas aos processos de progressão e imunoescape tumoral. Os melanócitos parecem possuir menor susceptibilidade a radiação UV-A, pois as únicas enzimas que tiveram expressão aumentada após a radiação foram a KMO e a TPH1, e apesar da enzima TPH1 ter a expressão aumentada, esse aumento foi modesto o que nos levou a pensar que outras células da pele possam ter um papel mais relevante na produção de SER ou então outras condições de radiação. / Although it is well known that ultraviolet (UV) radiation causes skin damage, it was already described some benefits to this radiation, for instance the well-being feelings provided by light exposure. In the skin, tryptophan (Trp) is metabolized to biologically active compounds, and it is believed that the synthesis of serotonin, one of tryptophan metabolites, in phototherapy is part of mechanisms of remission of depression in patients with seasonal mood disorder. Moreover, in bacteria the UV radiation directly induces the expression and activity of TDO, the enzyme that catalyzes the metabolization of Trp to kynurenine (KYN). This effect has not been studied in human cells yet. Therefore, the objective of this work was to evaluate if UV-A radiation modulates the expression of enzymes involved in melanocytes and melanoma Trp metabolism. For this aim, we standardized the UV-A radiation conditions through cell viability assay, and then we defined the better conditions to avoid cell death (1,5 J/cm2 to melanocytes and 3 and 6 J/cm2 to melanomas). The UV-A radiation increased the expression of IDO and TDO in melanomas, enzymes that contribute to tumor immune- escape. The expression of KYNU and KMO also increased, and these enzymes are also involved with some types of tumors progression. Furthermore, the expression of AANAT and HIOMT, responsible for melatonin (MLT) production, was higher in melanomas after 48 hours of radiation while INMT had an increased expression at all times. The increase of INMT by melanomas is very interesting and can be related to the well being provided by exposure to light, since the product of this enzyme, DMT, is known to provide this sensation. However, the observed increased of expression of IDO and TDO in melanomas indicates a harmful effect of light associated with the production of molecules linked to tumor progression and immune-escape processes. The melanocytes appear to be less susceptible to UV-A radiation, because only the enzymes KMO and TPH1 had their expression increased after radiation, and for TPH1 this effect was relatively small. Thus, we believe that other skin cells may have a more relevant role in SER production or other radiation conditions.