Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical botanic and ekology Candidate: Nikol Vavřichová Supervisor: Ing. Kateřina Macáková Ph.D. Title of diploma thesis: Iron - chelating effects of flavonoid metabolites - small polyphenolic substances (2015/2016) Iron is a trace element which is necessary for function of an organism. There is no specific excretion mechanism for iron, therefore any deflection causes deficiency or abundance. Iron abundance leads to hemochromatosis. An application of iron chelators is a treatment of choice for hemochromatosis. There are three clinically used chelators for treatment of iron overload: deferoxamine, deferasirox and deferiprone. These drugs are inappropriate for therapy (side effects, dosage form). Therefore there is a place for serching for new types of medicine for treatment of hemochromatosis. Flavonoids are natural substances with positive influence on a human organism. The most investigated effects are antioxidant and chelating activity. As flavonoids are metabolised in a human body, there is an arising question if flavonoid metabolites are also able to chelate iron ions. For this work we chose derivates of benzoic acid: benzoic acid, 3 - hydroxybenzoic acid, 4 - hydroxybenzoic acid, 2,4 - dihydroxybenzoic...

Active compounds have been always originated from plants. Plants though, were able to produce only very low amounts of them and that was the reason for trying many alternative ways of production, one of them being plant tissue culture cultivation. This method is any fragment of living tissue or organ taken from an intact plant or an already existing explant culture, with the intention of growing an artificial growth medium. Even this method though, is not able to produce large amounts compared to extraction from field plants. Elicitation is considered a possible way to increase the production of secondary metabolites. This method used the plant's own defense system, in order to increase the production of secondary metabolites in vitro. The compound which is used to produce the effect is called elicitor. During our experimental work I used as an elicitor the compound Ethephon (2-Chloroethylphosphonic acid) upon callus and suspension cultures of Hypericum perforatum, with intention to observe its effect on flavonoid production. This experiment was based on three different concentrations and six different withdrawal times, being 6, 12, 24, 72, 168 hours. The maximum effect of elicitor was reached with concentration c1 (1mg/100ml) after 12 hours and with concentration c3 (100mg/100ml) after 72 hours.

Orientadora: Angela Regina Araujo / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Adriana Aparecida Lopes / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Resumo: Fungos são organismos que podem ser encontrados nos mais diversos habitats e constituem um dos maiores grupos sobre a Terra. Em particular, os fungos endofíticos associados a espécies vegetais, são excelentes produtores das mais diversas classes de metabólitos secundários, sendo uma fonte promissora e racional na obtenção de protótipos para os mais diversos usos terapêuticos. Os endófitos do gênero Xylaria pertencentes à família Xylareaceae, constituem um grupo de espécies que produzem substâncias que apresentam as mais diversas atividades biológicas como antitumorais, antibióticas, entre outros. Dentro deste contexto, neste trabalho avaliamos a produção de griseofulvina, um metabólito secundário produzido por Xylaria spp., e de utilização na terapêutica animal e humana. Também foi realizado o estudo químico e biológico de sete espécies diferentes de fungos endofíticos do gênero Xylaria. Estes foram cultivados em meios líquidos comerciais (MDB, Czapek, YM, EM e Nutrient) e sólidos (arroz e milho) para obtenção dos extratos brutos, totalizando 49 extratos. Cinco evidenciaram a produção de griseofulvina e foram submetidos a análises por RMN de 1H e CLAE-DAD para a detecção e quantificação desta substância, respectivamente. O fungo que apresentou maior produção de griseofulvina foi o Xylaria sp., codificado como PR-03 e cultivado em Czapek. Neste meio foi realizado o estudo de aplicação de estímulos, tais como agitação e luz, utilizando planejamento experimental visando a maximi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungi are organisms that can be found in a diversit y of habitats and constitute one of the largest groups on Earth. In p articular, the endophytic fungi associated with plant species are excellent p roducers of several classes of secondary metabolites, as well a promising ratio nal source in obtaining prototypes for several therapeutic effects. Endophy tes of the genus Xylaria belong to Xylareaceae family, are a group of specie s that produce substances with potential biological activities, including ant itumoral, antibacterial, among others. In this context, this study evaluated the optimal condictions of griseofulvin-producing endophytic fungus from Xylaria spp., for application in animal and human therapy. It was als o conducted chemical and biological study of seven different species of endophytic fungi of the genus Xylaria . The fungal strain was cultivated in commercial li quid (Potato Dextrose Broth, Czapek, Yeast Medium, Malt Extract and Nutrient) and solid media forms (rice and corn) to obtain the crude ext racts (n= 49). Five samples showed griseofulvin production and were an alyzed by 1 H NMR and HPLC-DAD for the detection and quantification of th e substance, respectively. The fungus that showed higher product ion of griseofulvin was Xylaria sp., encoded as PR-03 and cultured in Czapek. In t his environment, the experiments design under light and shaker induc ed stimulus were performed in order to improve the production of the substance. It was observed a significant increase of production under both conditions. At the same time, all the extracts were submetted to bioas says for evaluation of antitumor, antifungal, and acetylcholinesterase act ivities. Two extracts that revealed promising chemical and biological profiles were subjected to chromatographic fractionation for isolation and ide ntification of substances. Two compounds had their structures determined or el... / Doutor

Orientadora: Angela Regina Araujo / Banca: Novaldo Borale / Banca: Geraldo Humberto Silva / Resumo: O fungo endofítico P. stromaticum isolado dos frutos maduros da espécie vegetal E. jambolana foi cultivado em escala ampliada no meio líquido de Malte por 28 dias a 25 oC no modo estático e, no meio sólido de milho tipo canjica por 21 dias a 25 oC no modo estático. Após 28 dias de crescimento no meio líquido, este foi submetido a sucessivas extrações com acetato de etila (AcOEt), que após evaporado forneceu o extrato bruto de Malte AcOEt. O meio sólido, após 21 dias de cultivo, foi extraído com metanol, seguido de filtração e evaporação fornecendo o extrato bruto metanólico. Este foi submetido à partição líquido/líquido com acetato de etila e água, sendo que a fração AcOEt foi evaporada fornecendo o extrato bruto AcOEt. Este foi particionado com acetonitrila e hexano, e após evaporação dos solventes forneceu os extratos acetonitrila (ACN) e hexânico do meio sólido. O extrato ACN do meio sólido passou por novas partições com acetonitrila e hexano, por apresentar ácidos graxos ainda, fornecendo o extrato bruto de milho NP (novas partições). O extrato bruto de Malte AcOEt, foi fracionado em coluna de bancada, sendo coletadas 11 frações (Fr-1 Ps Ma a Fr-11 Ps Ma). Já o extrato bruto de milho NP sofreu partição utilizando-se cartucho de C18, com base em seu cromatograma, resultando em 6 frações (Fr-1 Ps Milho a Fr-6 Ps Milho). Das 6 frações obtidas do extrato de milho NP, escolheu-se trabalhar com a primeira, a qual sofreu partição no CLAE-DAD preparativo, resultando em 8 frações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The endophytic fungus P. stromaticum isolated from the ripe fruits of the E. jambolana was cultivated in large scale in the malt liquid medium for 28 days at 25 oC in the static mode and in the solid medium of hominy corn for 21 days at 25 oC in static mode. After 28 days of growth in the liquid medium, it was made successive extractions with ethyl acetate (EtOAc). The organic layer was evaporated affording the crude extract of Malt EtOAc. The solid medium, after 21 days of cultivation, was extracted with methanol, followed by filtration and evaporation to give the crude methanolic extract. This was subjected to the liquid/liquid partition with EtOAc and H2O, being this EtOAc fraction evaporated giving the crude EtOAc extract. After that, the extract was partitioned with acetonitrile and hexane, and after the evaporation of the solvents provided the acetonitrile (ACN) and hexane extracts from the solid medium. The ACN extract of the solid medium was partitioned again with ACN and hexane, due the remaining fatty acid, providing the corn crude extract NP (new partitions). The crude extract of Malt EtOAct was fractionated in a chromatographic column, resulting in11 fractions (Fr-1 Ps Ma to Fr-11 Ps Ma). The crude extract of corn NP was fractionated by solid phase extraction in reverse phase (C18), based on its chromatogram, resulting in 6 fractions (Fr-1 Ps Corn to Fr-6 Ps Corn). Among the corn fractions collected, it was chosen the fraction Fr-1 Ps Corn to the chemical studies. This fraction was fractionated by preparative HPLC-DAD resulting in 8 fractions. The crude extract of Malt EtOAc and its fraction and the crude extract of corn NP, were submitted to the chemical evaluation by 1H NMR and biological against the phytopathogenic fungus Cladosporium sphaerospermum (and in the case of corn to C. cladosporioides as well). Besides, anticolinesterasic activity was made, the crude... / Mestre

Recentemente foram isolados da esponja marinha Axinella cf. corrugata dois compostos derivados da esculetina: o éster metílico do ácido 4-esculetínico e o éster etílico do ácido 4-esculetínico. Este último apresentou importante atividade contra o vírus da SARS. Este projeto teve como meta isolar e cultivar as linhagens de fungos associadas à esponja Axinella cf. corrugata, bem como analisar seus extratos por HPLC-PDA-MS, objetivando a possível detecção desses compostos (ou derivados) nesses extratos. Avaliações preliminares levaram à obtenção de 11 amostras potencialmente relacionadas a esses compostos. Dentre elas, uma apresentou espectros no UV e de massas muito similares aos obtidos para o aduto de sódio do éster metílico do ácido 4-esculetínico. No entanto análises espectroscópicas mais detalhadas por RMN - 1H, RMN - 13C, HSQC, HMBC e COSY da amostra purificada permitiram identificar o composto isolado, a 1,3,6-trihidroxi-8-metil-9H-xanten-9-ona. Simultaneamente às análises químicas, os extratos obtidos a partir das linhagens fúngicas isoladas da esponja Axinella cf. corrugata tiveram suas atividades biológicas avaliadas frente a microrganismos e células tumorais humanas, resultando em mais de 20% dos extratos com alguma atividade biológica. / Recently two compounds derived from esculetin have been isolated from the marine sponge Axinella cf. corrugata: the methyl ester of esculetin-4-carboxylic acid and the ethyl ester of esculetin-4-carboxylic acid. The latter displayed antiviral activity against the SARS virus. This project aimed the isolation and the growth of fungal strains associated to the sponge Axinella cf. corrugata, and the subsequent analysis of the fungal extracts by HPLC-PDA-MS, aiming the possible detection of the esculetin compounds (or derivatives) in those extracts. Preliminary analysis yielded 11 samples potentially related to these compounds. Among these extracts, one presented UV and MS spectra very similar to the spectra obtained for the sodium adduct of the methyl ester of esculetin-4-carboxylic acid. However, a detailed spectroscopic analysis of a pure compound isolated by RMN - 1H, RMN - 13C, HSQC, HMBC e COSY allowed the identification of the compound, which is 1,3,6-trihydroxy-8-methyl-9H-xanthen-9-one. Simultaneously to the chemical analysis of the fungal crude extracts, the biological activities of the obtained extracts were evaluated against microrganisms and human tumoral cell lines. More than 20% of the extracts displayed some biological activity.

O gênero Croton abriga aproximadamente 1300 espécies, muitas delas reconhecidas pela sua utilização terapêutica, que se deve a presença de grande diversidade de metabólitos secundários. Tais propriedades foram ponto de partida para investigações sobre as propriedades fitoquímicas do gênero. C. vulnerarius e C. echinocarpus são espécies endêmicas do Brasil pertencentes à seção Cyclostigma e até então pouco estudadas. Neste projeto foram extraídos, identificados e isolados componentes químicos destas espécies e analisadas as suas propriedades bioativas (antioxidante, antimicrobiana e anti-HIV). Foi verificado que, diferentemente de outras espécies da mesma seção, C. echinocarpus e C. vulnerarius não apresentam diterpenos em sua composição. No entanto, C. echinocarpus possui entre seus principais componentes um alcaloide, identificado por espectrometria de massas como coridina. Em relação às substâncias fenólicas, observamos que as espécies possuem perfis semelhantes, com alguns flavonoides em comum, sendo que o principal componente de C. echinocarpus é a apigenina vitexina e de C. vulnerarius , o derivado de campferol tilirosídeo. Em relação às atividades biológicas, foi verificado que ambas as espécies possuem potencial antioxidante e antimicrobiano contra espécies de bactérias Gram negativas, especialmente nos extratos mais ricos em compostos fenólicos. Quanto à ação anti-HIV, foi observado que a fração contendo o alcaloide coridina isolado apresentou um grande potencial de atividade anti transcriptase reversa, atingindo valores acima de 90% de atividade, mesmo para a menor concentração testada / Croton comprises approximately 1,300 species, many of them known for their therapeutic uses, which is due to the presence of a large diversity of secondary metabolites. Those properties were the starting point for research on the phytochemical characteristics of the genus. C. vulnerarius e C. echinocarpus are Brazilian endemic species belonging to section Cyclostigma. This project aimed the extraction, identification and isolation of chemical constituents from both species and the analyze of the bioactive properties of such constituents (antioxidant, antimicrobial and anti-HIV). It was found that, unlike other species of the same section, C. echinocarpus and C. vulnerarius does not present diterpenes in their composition. However, C. echinocarpus showed alkaloids among its main constituents, one of them identified by mass spectrometry as coridine. Regarding the phenolic substances, we observed that the two species have similar profiles, with some flavonoids in common. C. echinocarpus presents the flavone C-glycosylated vitexin as its main flavonoid constituent, while C. vulnerarius has the acylated derivative of kaempferol, tiliroside. Regarding the biological activities, both species showed antioxidant potential; antimicrobial effects against Gram-negative bacteria, especially the extracts richer in vitexin; and anti-HIV activity, where the fraction containing the alkaloid coridine showed great potential, reaching values above 90% of the anti-HIV activity, even when the lowest concentration was tested (100 mg.mL-1)

A investigação de produtos naturais tem sido cada vez mais direcionada para o estudo de microrganismos, com destaque para aqueles do ambiente marinho. Neste trabalho foram estudadas linhagens bacterianas isoladas de tecidos da esponja Arenosclera brasiliensis, como parte de um estudo que tinha o objetivo de encontrar novas moléculas bioativas. O cultivo da linhagem bacteriana Pseudovibrio denitrificans Ab134 permitiu o isolamento e identificação de três compostos derivados de dibromotirosina, a fistularina-3 (26), o ácido verongidoico (27) e a 11-hidroxiaerotionina (28). Outros cinco compostos derivados de dibromotirosina foram detectados, em frações ainda impuras, através de análises por CLUE-qTOF e tiveram suas estruturas propostas de acordo com os íons de fragmentação observados no espectro de EMAR: aerotionina (29), um éster do ácido purpurocerático B (30), purealidina L (31) e aplisinamisina II (32). Este é o primeiro relato da produção dos derivados de dibromotirosina a partir de uma linhagem bacteriana e representa um forte indício de que tais compostos, comumente isolados de esponjas, são na verdade produzidos pela microbiota associada destes animais. O cultivo da linhagem fúngica Biatriospora sp. permitiu o isolamento e identificação de nove compostos diterpênicos da classe das fomactinas, sendo seis deles inéditos. As fomactinas são conhecidas por apresentarem potente atividade como inibidoras de receptores do PAF. As fomactinas S, P, U e I apresentaram bons resultados na inibição da ligação do PAF aos seus receptores. As fomactinas S e P foram também avaliadas em ensaio de re-população tumoral pós irradiação e foram capazes de inibir o fenômeno de re-população em concentração molar equivalente a antagonistas comerciais. Tal resultado sugere que a associação da radioterapia com antagonistas do PAF-R pode ser uma nova e eficiente alternativa terapêutica para inibição do crescimento de tumores. / Research on natural products is increasingly focusing on the study of microorganisms, especially those from the marine environment. In the present investigation, bacterial strains isolated from tissues of the sponge Arenosclera brasiliensis were studied in order to find new bioactive molecules. Cultivation of the bacterial strain P. denitrificans allowed the isolation and identification of three dibromotyrosine-derived compounds: fistularin-3 (26), verongidoic acid (27) and 11-hydroxyaerothionin (28). Another five dibromotyrosine-derived compounds were detected in still impure fractions by UPLC-qTOF analysis and had their structures proposed according to the fragmentation ions observed in the HRMS spectrum: aerothionin (29), the methyl ester of purpuroceric acid B (30), purealidin L (31) and aplisinamysin II (32). This is the first report of the production of dibromotyrosine derivatives by a bacterial strain and represents a strong indication that such compounds, commonly isolated from sponges, are actually produced by the associated microbiota of these animals. Cultivation of the fungal strain Biatriospora sp. allowed the isolation and identification of nine fomactin diterpenes, six of wich are new. Fomactins are known as inhibitors of PAF receptors. Fomactins S, P, U and I have shown good results in inhibiting the binding of PAF to their receptors. The fomatins S and P were also evaluated in the post-irradiation tumor re-population assay and were able to inhibit the re-population phenomenon at micromolar concentration equivalent to commercial antagonists. Such a result suggests that the association of radiotherapy with PAF-R antagonists may be a new and efficient therapeutic alternative in tumors.

O saco vitelino esta presente em todas as espécies de vertebrados e desempenha importantes funções no desenvolvimento do embrião até a fase de placentação. O objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do saco vitelino de embriões bovinos atentando para os aspectos morfológicos, bioquímicos e moleculares e suas relações ultraestruturais, bioquímicas e moleculares. Foram avaliados 69 amostras de SVEB distribuídos da seguinte forma: Grupo I (23-27), Grupo II (28-32), Grupo III (33-37), Grupo IV (38-42), Grupo V (43-47) e Grupo VI (48-52) dais de gestação. Os resultados inferem que o saco vitelino de embriões bovinos apresenta atividade proliferativa durante os primeiros dois grupos analisados, a presença de apoptose e necrose foram encontrados nos grupos restantes. A presença de importantes metabolitos como a alanina, mio-inositol, taurina, colina, glicerofosfocolina, cadaverina, glutamato, glutamina, lactato, hidrouracila, creatina, creatinina, aspartato e lisina; e proteínas como filamentos de actina ou tubulina do citoesqueleto, histona, sub unidades da hemoglobina, HSP-β1, proteína ribossomal, marcadores da matrix extracelular vimentina, alfafetoproteina e transferrina. Estas proteínas estão relacionadas diretamente com a formação de metabólitos secundários e foram encontradas durante todos os períodos estudados, com exceção da alanina que foi identificada somente no grupo I, ativando diversas proteínas e metabolitos, que estão envolvidos em vias de sinalização que promovem a ativação dos mecanismos de morte celular programada e na diferenciação celular, as quais iniciam as etapas da involução do saco vitelino e de outras estruturas no embrião, e assim dar inicio à placentação. / The yolk sac is present in all vertebrate species, and plays important roles in the developing embryo until the arrival of the placenta. The objective of this study was to evaluate the functioning of the yolk sac of bovine embryos and how the morphological, biochemical and molecular related, one ultrastructural analysis, biochemical and molecular analysis was performed. For these purpose we evaluated 69 samples of YSBE distributed as follows: Group I (23- 27), Group II (28-32), Group III (33-37), Group IV (38-42), Group V (43-47) and Group VI (48-52) days of pregnancy. The results infer that the yolk sac of bovine embryos has proliferative activity during the first two groups analyzed, the presence of apoptosis and necrosis were found in the remaining groups. The presence of major metabolites such as alanine, myo-inositol, taurine, choline, glicerofosfocolina, cadaverine, glutamate, glutamine, lactate, hydrouracile, creatine, creatinine, aspartate and lysine, proteins such as tubulin and actin cytoskeleton, histone, subunits of hemoglobin, HSP-β1, ribosomal protein, vimentin, markers of extracellular matrix, alpha-1-fetoprotein and transferrin. These proteins are related to the metabolites and were found throughout the study period, with the exception of alanine which was found in Group I, activating many proteins and metabolites that are involved in signaling pathways that trigger cell death mechanisms that originated the involution of the yolk sac, and thus give way to the beginning of placentation.

O presente estudo teve como objetivo utilizar a técnica de enzimaimunoensaio (EIE) com o Ac monoclonal CL425 na dosagem de metabólitos de progestinas fecais para caracterizar o perfil no início da atividade ovariana e durante o ciclo estral em onça pintada (Panthera onca) e durante a gestação e lactação em gato mourisco (Puma yagouaroundi). Foram estudadas três fêmeas de onça pintada em fases distintas (pré-puberes n=2 e adulta n=1) e três fêmeas de gato mourisco em duas fases distintas (gestantes n=2 e lactantes n=3). O protocolo empregado no EIE foi validado para a mensuração de progestinas em fezes de onça pintada e gato mourisco (r=0,98, p=0,0078; r=0,97, p=0,0130, respectivamente). Observou-se que os animais pré-puberes apresentaram início da produção de progesterona nos meses de setembro e novembro. As elevações das progestinas fecais na fêmea adulta de onça pintada não se sustentaram, indicando que não ocorreu ovulação espontânea nessa espécie. Houve diferença significativa entre as concentrações médias de progestinas fecais (p<0,001) dos animais pré-púberes e adultos no grupo das fêmeas de onça pintada. No grupo das fêmeas de gato mourisco, não foi possível diferenciar as concentrações de progestinas fecais durante a gestação e lactação.Obtivemos correlação entre as concentrações de progestinas fecais medida pelos métodos de radioimunoensaio (RIE) e enzimaimunoensaio (r=0,98, p<0,0001). / The present study had as objective to use the technique of enzyme immunoassay (EIA) with monoclonal antibody CL425 in the dosage of faecal progestin to characterize the profile during ovarian activity beginning and estral cycle in jaguar (Panthera onca) and gestation and lactation in jaguarondi (Puma yagouaroundi). Three female jaguars were studied in distinct phases (pre-pubertal n=2 and adult n=1) and three female jaguarondi were studied during two distinct phases (gestation n=2 and lactation n=3). The EIA used was validated for faecal progestin measurement in jaguar and jaguarondi (r=0,98, p=0,0078; r=0,97, p=0,0130, respectively). The beginning of progesterone production for pre-pubertal animals was in September and November. Elevations of progestin in the adult jaguar were not supported, showing that there was not spontaneous ovulation for this specie. There was significant difference between medium progestin concentrations (p<0,001) of pre-pubertal and adult jaguars. It was not possible to identify different progestin concentrations during gestation and lactation in female jaguarondi. The faecal progestin profiles measured by radioimmunoassay (RIA) and enzyme immunoassay (EIA) corresponded well and were positively correlated (r=0,98, p<0,0001).

No presente trabalho estudou-se o perfil bioquímico do plasma seminal bem como o perfil metabólico de touros Nelore com degeneração testicular. O estudo está apresentado em dois artigos. No Artigo 1, o objetivo foi investigar alguns metabólitos do plasma seminal de touros da raça Nelore para caracterizar valores e avaliar sua relação com as características espermáticas. Foram realizadas 14 colheitas seminais, com intervalos semanais, de 11 touros (n=154). O sêmen foi avaliado para motilidade, vigor, concentração, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, morfologia e pH. O plasma seminal foi submetido às avaliações metabólicas de proteína total, albumina, gama glutamil transferase (GGT), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Os dados foram analisados no programa do Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004), sendo realizadas estatística descritiva e análise de correlação de Pearson, o nível de significância considerado foi de 5%. Os valores dos metabólitos encontrados no plasma seminal foram descritos e podem ser utilizados como referência para touros Nelore. Também se pode concluir que há relação entre o perfil metabólico do plasma seminal e as características espermáticas. No Artigo 2, o objetivo foi investigar a bioquímica séria e do plasma seminal de touros Nelore com degeneração testicular. Para isso, foram utilizados 22 touros, que foram distribuídos em dois grupos: Grupo Controle (CON; n=11) e Grupo Degeneração (DEG; n=11). Foram realizadas 14 colheitas de sêmen, e 21 colheitas de sangue com intervalos semanais. As avaliações seminais e do plasma seminal foram as mesmas realizadas no estudo do artigo 1 e o sangue foi avaliado quanto às concentrações de proteína total, albumina, fibrinogênio, GGT, AST, creatina-quinase (CK), glicose, lipoproteína de alta densidade (HDL), colesterol, triglicérides, beta-hidroxibutirato (BHB) e ácidos graxos não esterificados (NEFA). Os dados foram submetidos à Análise de Variância, sendo adicionado o fator medidas repetidas no tempo, utilizando-se o comando REPEATED gerado pelo PROC MIXED do SAS, com nível de significância de 5%. Pode-se afirmar que a degeneração testicular em touros Nelore causa elevação de pH do sêmen, bem como elevação da concentração de ALT e diminuição nas concentrações de GGT e FA no plasma seminal. Em relação às proteínas de fase aguda, a degeneração testicular causa diminuição na concentração de albumina. Em adição, este insulto local não altera os metabólitos séricos em touros Nelore. / In the present work the biochemical profile of the seminal plasma and the metabolic profile of Nelore bulls with testicular degeneration were studied. The study was presented in two articles. First in article 1, the objective was to investigate some seminal plasma metabolites of Nellore bulls to characterize values and evaluate their relation with sperm characteristics. Fourteen seed samples were taken, with weekly intervals, of 11 bulls (n = 154). Semen was evaluated for motility, vigor, concentration, plasmatic and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, morphology and pH. Seminal plasma was submitted to metabolic assessments of total protein, albumin, gamma glutamyl transferase (GGT), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (AP). Data were analyzed by the Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004), with descriptive statistics and Pearson\'s correlation analysis performed, the level of significance considered was 5%. The values of the seminal plasma metabolites found have been described and can be used as reference for Nellore bulls. It can also be concluded that there is a relation between the metabolic profile of seminal plasma and sperm characteristics. In Article 2, the objective was to investigate the seric biochemistry and seminal plasma of Nellore bulls with testicular degeneration. For this, 22 bulls were used, which were distributed in two groups: Control Group (CON; n = 11) and Degeneration Group (DEG; n = 11). There were 14 semen crops and 21 weekly blood sampling. Seminal and seminal plasma evaluations were the same as those performed in the study of article 1 and blood was evaluated for total protein, albumin, fibrinogen, GGT, AST, creatine-kinase (CK), glucose, high density lipoprotein (HDL), cholesterol, triglycerides, beta-hydroxybutyrate (BHB) and non-esterified fatty acids (NEFA). The data were submitted to Variance Analysis, adding the factor measures repeated in time, using the REPEATED command generated by PROC MIXED of the SAS, with significance level of 5%. It can be affirmed that testicular degeneration in Nellore bulls causes elevation of semen pH, as well as elevation of ALT concentration and decrease in GGT and AF concentrations in seminal plasma. In relation to acute phase proteins, testicular degeneration causes a decrease in albumin concentration. In addition, this local insult does not alter serum metabolites in Nellore bulls.