Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Una de las enfermedades más frecuentes en la hembra canina es la neoplasia mama-ria. Los tratamientos más utilizados son la cirugía y la quimioterapia adyuvante, las cuales en muchas ocasiones pueden resultar insuficientes debido probablemente a la existencia dentro del tumor de un subgrupo de células llamadas células neoplásicas iniciadoras de tumores (CNT), que presentan características de troncalidad favoreciendo la reaparición tumoral y metástasis. Estas células exhiben quimioresistencia, por lo cual es fundamental buscar nuevas alternativas citotóxicas para este tipo de células. Metformina, droga utilizada en humanos para el tratamiento de la diabetes mellitus tipo II, ha demostrado modular la actividad proliferativa de CNT, no obstante en caninos hay muy pocos datos pertinentes. En este estudio se evaluó el efecto de metformina sobre la viabilidad y capacidad de formación de esferas celulares (estructuras ricas en CNT) derivadas de células de carcino-ma mamario canino CF41.Mg. Metformina indujo una disminución tanto del número como del tamaño de esferas celulares a 10 y 20 mM (p<0,0001). Sin embargo, la droga no gatilló reducción en la viabilidad de estas células a las 48 horas de incubación respecto al grupo control. Por otro lado, en células CF41.Mg parentales, la viabilidad en presencia de la droga (10 y 20 mM por 48 horas) disminuyó (p<0,0001), lo cual implica que estas células presen-tan mayor sensibilidad a la metformina en comparación con las esferas celulares. Estos resultados sugieren que metformina ejercería actividad citotóxica en esferas derivadas de células de carcinoma mamario canino CF41.Mg, siendo este efecto dependien-te del tiempo de exposición a la droga. Metformina podría ser considerada como una droga que afecta a CNT, lo cual sustenta futuros estudios para esclarecer el potencial rol terapéu-tico de esta droga en la neoplasia mamaria canina. / Mammary neoplasia is one of the most frequent diseases in female dogs. The most common treatment used is surgery and adyuvant chemotherapy, which may often be insuf-ficient due to the existence of a subset of cells called tumor initiating neoplastic cells (CSC) within the tumor, that exhibit stemness characteristics, favoring tumor relapse and metastasis. These cells display chemoresistance, which supports the search for new citotox-ic alternatives. Metformin, a drug used in human diabetes mellitus type II treatment, modu-lates the proliferative activity on CSC, however there are scarce data about this effect in dogs. In this study, the effect of metformin on cell viability and spheres forming ability (structures rich in CSC) derived from canine mammary carcinoma cells CF41.Mg were evaluated. Metformin induced a decrease in number and sized of spheres at 10 and 20 mM (p<0.0001). However, the drug did not reduce viability of these cells at 48 hours of incuba-tion respect to the control group. On the other hand, viability on CF41.Mg parental cells in presence of the drug (10 and 20 mM for 48 hours) decreased, which implies greater sensi-tivity to metformin in relation to spheres. These results suggest that metformin exert cytotoxic activity in spheres derived from CF41.Mg canine mammary carcinoma cells. These effects are dependent on the expo-sure time to the drug. Metformin may be considered a drug that affects CSC, which sup-ports future studies to clarify its potential therapeutic role in canine mammary neoplasia. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110148.

Submitted by VANESSA DE CÁSSIA MARTINS PIRES FERREIRA (vanessapires.lds@gmail.com) on 2018-04-25T16:27:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação de mestrado projeto metformina.pdf: 1241718 bytes, checksum: 57f3c86c906bfcdd00e17fd79b26db9a (MD5) Dissertação de mestrado projeto metformina (1).pdf: 1241718 bytes, checksum: 57f3c86c906bfcdd00e17fd79b26db9a (MD5) / Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: no arquivo submetido não consta abstract (resumo em inglês), item obrigatório de acordo com as normas do seu programa de pós. Assim que tiver efetuado essa correção submeta o arquivo, em PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2018-04-26T18:01:54Z (GMT) / Submitted by VANESSA DE CÁSSIA MARTINS PIRES FERREIRA (vanessapires.lds@gmail.com) on 2018-05-07T13:07:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado projeto metformina REPOSITÓRIO.pdf: 1252280 bytes, checksum: 4ad269b53a70756d64e305bf791b0405 (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-05-07T18:47:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pires_vcm_me_bot_int.pdf: 1252280 bytes, checksum: 4ad269b53a70756d64e305bf791b0405 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-07T18:47:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pires_vcm_me_bot_int.pdf: 1252280 bytes, checksum: 4ad269b53a70756d64e305bf791b0405 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A exposição à fumaça de cigarros (EFC) não só aumenta o risco para doenças cardiovasculares como, também, lesa diretamente o miocárdio. Estudos experimentais e clínicos mostram que EFC está associada com hipertrofia e disfunção miocárdica, independentemente de fatores vasculares. Pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos com a lesão miocárdica induzida pela EFC. Dentre estes mecanismos estão as alterações no metabolismo energético. Em um coração normal, 60 a 90% do adenosina trifosfato (ATP) são provenientes da oxidação de ácidos graxos (AG). Em condições patológicas, existem alterações na utilização dos substratos, na biogênese mitocondrial e por fim na produção de ATP, que podem comprometer a morfologia e função cardíaca. Estudos mostram que o tabagismo pode levar a resistência insulínica, que por sua vez pode comprometer a bioenergética cardíaca. Entretanto, não é sabido se há comprometimento do metabolismo energético cardíaco associado à resistência insulínica induzida pela EFC. Adicionalmente, em estudos experimentais, a metformina tem se mostrado eficiente em atenuar a remodelação cardíaca, principalmente atuando sobre o metabolismo energético. Objetivos: Os objetivos do trabalho foi avaliar o papel da metformina na remodelação cardíaca induzida pela fumaça de cigarro, por meio da avaliação morfofuncional cardíaca, do estresse oxidativo, do metabolismo energético, e expressão de proteínas que participam do metabolismo da glicose. Material e Métodos: Foram utilizados 60 animais alocados em 4 grupos de 15 animais cada: grupo EFC (n=15), formado por animais expostos à fumaça do cigarro; EFC-MET (n=15) formado por animais expostos à fumaça do cigarro e com ingestão de metformina diluida na água; grupo controle C (n=15) e grupo MET (n=15) que recebeu metformina diluida em água. Após 2 meses os animais foram submetidos a: a) estudo bioquímico para avaliação da exposição ao cigarro, b) estudo ecocardiográfico para avaliação morfofuncional; c) aferição da pressão arterial caudal; d) estudo histológico utilizando imunofluorescência para avaliação de hipertrofia, angiogenese e translocação de GLUt-4; e) Western Blot para avaliação da expressão de proteínas envolvidas com resistência insulínica e metabolismo da glicose; f) avaliação espectrofotométrica para avaliação da atividade de enzimas do metabolismo energético e da quantidade de glicogênio cardíaco. Resultados: Os animais EFC tiveram aumento do átrio esquerdo (AE), do diâmetro do ventrículo esquerdo (DDVE), da massa do ventrículo esquerdo (IMVE), da espessura relativa da parede posterior (ERP) seguido de disfunção diastólica. A metformina atenuou o tamanho do AE, a ERP, a disfunção diastólica em animais EFC. Em relação aos mecanismos potencialmente envolvidos, observou-se que a EFC aumentou a formação de hidroperóxido de lipídeos, mas a associação com metformina e fumo aumentou ainda mais. Porém a metformina, independentemente da EFC aumentou a atividade das enzimas antioxidantes catalase e superóxido dismutase. Em relação ao metabolismo energético, observou-se que o fumo independentemente da metformina reduziu a atividade do complexo I e ATP sintase. Já a metformina aumentou a atividade do complexo I, II e ATP sintase, independentemente da EFC. Não houve interação entre fumo e metformina para o metabolismo energético. Em relação a expressão de proteínas do metabolismo da glicose observou-se que AKT fosforilado/AKT total e GLUT-4 da membrana diminuíram com o fumo e foram atenuados pela metformina. Conclusão: A metformina atenua os danos gerados pela EFC, provavelmente este fato não ocorre por redução do estresse oxidativo. Existe a possibilidade da EFC induzir alteração do metabolismo da glicose, que no tecido cardíaco fora atenuada pela metformina, talvez por aumentar a fosforilação da AKT e aumento do GLUT-4 na membrana. / Introduction: Exposure to cigarette smoke (ECS) not only increases the risk for cardiovascular disease but also directly damages the myocardium. Experimental and clinical studies show that ECS is associated with hypertrophy and myocardial dysfunction, regardless of vascular factors. Little is known about the mechanisms involved with myocardial injury induced by ECS. Among these mechanisms are the changes in energy metabolism. In a normal heart, 60 to 90% of the adenosine triphosphate (ATP) comes from the fatty acid oxidation (FA). In pathological conditions, there are alterations in the use of substrates, in mitochondrial biogenesis and finally in the production of ATP, which may compromise morphology and cardiac function. Studies show that smoking can lead to insulin resistance, which in turn can compromise cardiac bioenergetics. However, it is not known whether there is impairment of the cardiac energy metabolism associated with the insulin resistance induced by the ECS. Additionally, in experimental studies, metformin has been shown to be effective in attenuating cardiac remodeling, mainly by acting on energy metabolism. Objectives: The objective of this study was to evaluate the role of metformin in cardiac remodeling induced by cigarette smoke through cardiac morphofunctional evaluation, oxidative stress, energy metabolism, and expression of proteins that participate in glucose metabolism. Material and Methods: Sixty animals were allocated to four groups of 15 animals each: ECS group (n = 15), composed of animals exposed to cigarette smoke; ECS-MET (n = 15) consisting of animals exposed to cigarette smoke and with ingestion of metformin diluted in water; group C (n = 15) and MET group (n = 15) who received metformin diluted in water. After 2 months the animals were submitted to: a) biochemical study to evaluate the exposure to cigarette; b) echocardiographic study for morphofunctional evaluation; c) measurement of caudal blood pressure; d) histological study using immunofluorescence to evaluate hypertrophy, angiogenesis and GLUt-4 translocation; e) Western Blot for evaluation of the expression of proteins involved with insulin resistance and glucose metabolism; f) spectrophotometric evaluation to evaluate the activity of energy metabolism enzymes and the amount of cardiac glycogen. RESULTS: ECS animals had left atrial enlargement (AE), left ventricular diameter (LVDD), left ventricular mass (LVMI), relative posterior wall thickness (ERP) followed by diastolic dysfunction. Metformin attenuated the size of AE, ERP, diastolic dysfunction in ECS animals. Regarding the potentially involved mechanisms, it was observed that the ECS increased the formation of lipid hydroperoxide, but the association with metformin and smoke increased even more. However, metformin, independently of the ECS increased the activity of the antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase. Regarding energetic metabolism, it was observed that smoking independently of metformin reduced the activity of complex I and ATP synthase. On the other hand, metformin increased the activity of complex I, II and ATP synthase, independently of the ECS. There was no interaction between smoking and metformin for energy metabolism. Regarding the expression of glucose metabolism proteins, it was observed that phosphorylated AKT / total AKT and membrane GLUT-4 decreased with smoke and were attenuated by metformin. Conclusion: Metformin attenuates the damage generated by the ECS, probably not by reducing oxidative stress. There is a possibility that ECS may induce altered glucose metabolism, which in cardiac tissue has been attenuated by metformin, perhaps by increasing the phosphorylation of AKT and increasing GLUT-4 in the membrane. / 2016/14547-0

Parte do efeito protetor da metformina na prevenção de eventos cardiovasculares em diabéticos parece ser atribuído a efeitos pleiotrópicos, incluindo a redução na pressão arterial. Estudos experimentais encontraram um efeito de redução na pressão arterial com o uso de metformina. No entanto, estudos clínicos demostram resultados inconsistentes. Considerando-se que maioria não foi desenhado especificamente para avaliar o efeito da metformina sobre a pressão arterial e que esta não foi avaliada através da MAPA-24h, hoje considerada como padrão ouro para aferição da pressão arterial, desenvolvemos este projeto com o objetivo de avaliar o efeito da metformina na PA medida por MAPA-24H. Métodos: em ensaio clínico, 97 indivíduos hipertensos não diabéticos foram randomizados para receber metformina (n=48) 850-1700mg/d ou placebo (n=49). Medidas antropométricas, laboratoriais e MAPA-24H foram realizados no início e após oito semanas de seguimento. Resultados: não houve diferença na PA medida por MAPA-24H ou de consultório entre os grupos. Houve redução significativa na medida da cintura com o uso de metformina (95,110,4; 89,327,4cm; p=0,02).

A metformina (Met) é descrita como um sensibilizador da insulina, levando a redução na resistência e uma significativa diminuição de seus níveis no jejum. Embora o alvo molecular da Met ainda não esteja totalmente descrito, acredita-se que este fármaco age inibindo o complexo I da cadeia respiratória mitocondrial, resultado em um aumento da razão celular de AMP/ATP. Alguns estudos vêm demonstrando que a Met é capaz de atravessar a barreira hematoencefálica, sendo capaz de modular o sistema nervoso central (SNC). Entretanto os efeitos desse fármaco no SNC ainda são pouco estudados. A Met no cérebro desempenha funções, como: regulação do apetite, fosforilação da AMPK, modulação da expressão de neuropeptídeos, inibição do complexo I da cadeia respiratória. Em nosso trabalho administramos intracerebroventricularmente (i.c.v) Met nas doses de 50 e 100ug durante sete dias em camundongos, e observamos uma brusca diminuição no peso, consumo alimentar, temperatura e sobrevivência, bem como na quantidade das gorduras epididimais e mesentéricas. A Met i.c.v foi capaz de aumentar a sensibilidade periférica à glicose e à insulina, aumentou a produção basal de H2O2 em preparações mitocondriais de hipocampo e hipotálamo. Em culturas neuronais observamos uma diminuição da viabilidade mitocondrial após o tratamento com Met e um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Em resumo nossos dados apontam um efeito neurotóxico da Met quando utilizada em altas doses diretamente no SNC, resultando em hipotermia, hipoglicemia, alteração da função mitocondrial com um impacto deletério na sobrevivência de camundongos. / Metformin is an insulin-sensitizer, leading to decrease in insulin resistance and in fasting insulin levels. The precise molecular target of metformin (Met) is unknown; however, some reports showed the inhibition of complex I on mitochondrial electron transport chain as a possible target, resulting in an increase of the cellular AMP / ATP. Some studies have shown that Met is able of crossing the blood brain barrier, modulating central nervous system (CNS) function. However the toxicity of this drug in the CNS has been less explored. In brain Met is proposed to regulate appetite, phosphorylation of AMPK, expression of neuropeptides and inhibits of complex I of the mitochondrial respiratory chain. In our work Met were injected intracerebroventricular (i.c.v) at doses 50 and 100ug in mice for seven days. We observed a decrease in body weight, food intake, visceral and epididymal fat content, corporal temperature and survival rate. Metformin was also able to increase peripheral sensitivity to insulin and glucose. The basal production of H2O2 in mitochondrial preparations hippocampus and hypothalamus was increased by metformin. Similarly, in neuronal cultures there was decreased mitochondrial viability after treatment with metformin and increased production of reactive oxygen species (ROS). In summary, our data indicate that high doses of metformin directly have neurotoxic effects to the CNS, expressed by hypothermia, hypoglycemia, disrupting mitochondrial function and decreasing survival rate.

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado académico de Doctor en Ciencias Farmacéuticas / El Síndrome de Ovario Poliquístico (SOP) es una condición familiar, fuertemente apoyada en factores genéticos y ambientales. Bioquímicamente se caracteriza por una secreción alterada de gonadotrofinas, altos niveles de andrógenos libres, insulino resistencia (IR) y un bajo grado crónico de inflamación. Entre las estrategias farmacológicas empleadas en el SOP destaca la metformina, un sensibilizante de la acción de la insulina, que es administrada comúnmente a estas pacientes obteniendo resultados metabólicos favorables. En el año 2005 fue aprobado el uso de metformina en pacientes con SOP embarazadas, ya que en la práctica clínica este fármaco permite mejorar las complicaciones gestacionales propias del SOP. Aunque la fisiopatología del SOP es compleja y pobremente comprendida, se ha sugerido que las mujeres con SOP presentan una actividad simpática aumentada. Modelos de condición quística en ratas dan lugar a una hiperactivación de neuronas simpáticas periféricas que inervan el ovario y a un aumento en la incorporación de Norepinefrina (NE) dentro del mismo, lo que finalmente resulta en el desarrollo y mantención de una condición quística que parece ser reversible si se atenúa la actividad simpática. Un estudio realizado en mujeres con SOP, a las cuales se les midió la actividad simpática del músculo del lecho vascular, mostraron una elevada actividad relacionada positivamente a altos niveles de testosterona. La NE, efector simpático, es un potente mediador de eventos fisiológicos y patofisiológicos en todo el organismo, por lo que su concentración extracelular se encuentra altamente regulada, principalmente por transportadores a nivel de membrana plasmática y a nivel intracelular en la membrana de vesículas de almacenamiento. Estudios en animales y humanos sugieren que el SOP se desarrolla en la vida fetal, por tanto, perturbaciones en el compartimiento materno programan al feto, vía adaptación placentaria y fetal, para desarrollar enfermedades en la vida adulta. Evidencias experimentales indican que la expresión del transportador de NE (NET) a nivel placentario, se encuentra disminuida en enfermedades gestacionales como preeclampsia, de ahí que se ha sugerido una función protectora para NET en placenta. Aunque las mujeres con SOP presentan un alto riesgo de padecer preeclampsia, no existe evidencia de las posibles alteraciones en la expresión de este transportador en placenta de mujeres con SOP. Para resolver nuestra hipótesis de trabajo empleamos muestras de plasma y placenta de término de mujeres con SOP con y sin tratamiento con metformina y mujeres control. Al evaluar los niveles plasmáticos de NE observamos que a las 24 semanas de gestación hubo un significativo incremento en la concentración plasmática de NE en mujeres con SOP que disminuyó significativamente a la semana 35, lo que podría estar dando cuenta de una desregulación en la actividad del sistema nervioso autónomo en estas pacientes durante el embarazo y de posibles mecanismos compensatorios frente a una hiperactividad adrenérgica. El tratamiento con metformina permitió disminuir significativamente los niveles plasmáticos de NE tanto en la semana 24 como 35 de gestación. En placenta de término de gestantes con SOP observamos una marcada disminución de la proteína NET en ambas caras placentarias, que está inversamente relacionada con los niveles de GLUT4. Sin embargo, el tratamiento con metformina restauró los niveles de proteína NET alcanzando niveles aún mayores que las mujeres control sólo en la cara materna placentaria, lo que sugiere que la actividad nerviosa autonómica no solo modifica la exposición fetal a catecolaminas, sino que el hecho de que responda al tratamiento con metformina también sugiere que está relacionada con alteraciones metabólicas asociadas con el síndrome. Por otro lado, componentes río abajo de la señalización del receptor de insulina, IRS1 y GLUT4, se encontraron alterados en placenta de término de pacientes con SOP. Sin embargo, el tratamiento con metformina durante el embarazo permitió corregir estas alteraciones principalmente en la cara materna de la placenta, lo que sugiere que el mejoramiento del estado hiperinsulinémico en la madre permite restablecer parcialmente la homeostasis metabólica placentaria. El conjunto de estos resultados muestra que las mujeres con SOP presentan un componente simpático alterado durante el embarazo, responsable de producir respuestas adaptativas placentarias a nivel de la proteína NET. Dicha respuesta adaptativa en conjunto con las alteraciones en la señalización insulínica placentaria, podrían ser responsables de la perpetuación del fenotipo SOP en la descendencia de estas pacientes. Por otro lado, la metformina ha demostrado ser una herramienta farmacológica útil que permite corregir las alteraciones simpáticas y metabólicas a distintos niveles, presentes en pacientes con SOP embarazadas, apareciendo como un agente integrador de patologías que involucran componentes metabólicos, circulatorios y neuroendocrinos / Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is a familial status, strongly supported by genetic and environmental factors. Biochemically characterized by an altered secretion of gonadotropins, high levels of free androgens, insulin resistance (IR) and chronic low -grade inflammation. Among the pharmacological strategies employed in PCOS stands metformin, sensitizer of insulin action, which is commonly administered to these patients obtaining favorable metabolic results. In 2005 was approved the use of metformin in pregnant patients with PCOS because in clinical practice this drug improves pregnancy complications of PCOS. Although the pathophysiology of PCOS is complex and poorly understood, it has been suggested that women with PCOS have increased sympathetic activity. Models of cystic condition in rats leading hyper activation to peripheral sympathetic neurons innervating the ovary and an increase in the uptake of norepinephrine (NE) therein, which ultimately results in the development and maintenance of a cystic condition that seems reversible if sympathetic activity is attenuated. A study in women with PCOS, to which muscle sympathetic activity of the vascular bed were measured, showed high sympathetic activity positively related to high levels of testosterone. The NE, sympathetic effector, is a potent mediator of physiological and pathophysiological events throughout the organism, so its extracellular concentration is highly regulated, primarily at the level of conveyor plasma membrane and intracellular level in the membrane of storage vesicles. Studies in animals and humans suggest that PCOS is developed in fetal life, therefore, disruptions in the maternal compartment programming to the fetus, via the placenta and fetal adaptation, for developing diseases in adulthood. Evidence indicates that expression of the NE transporter (NET) to placental level is decreased in gestational diseases as preeclampsia, there has been suggested a protective function for NET in placenta. Although women with PCOS are at high risk for preeclampsia, there is no evidence of possible alterations in the expression of this transporter in placenta of women with PCOS. To solve our working hypothesis, we use plasma samples and term placenta of women with PCOS with or without treatment with metformin and control women. In assessing plasma levels of NE we note that at 24 weeks of gestation was a significant increase in the plasma concentration of NE in PCOS women and then decreased significantly at week 35, which could account for deregulation in activity of autonomic nervous system in these patients during pregnancy and compensatory mechanisms against adrenergic hyperactivity. Metformin allowed significantly decrease plasma levels of NE in both 24 and 35 week of gestation. In term placenta of pregnant PCOS women we observed a marked decrease in NET levels in both placental faces and is inversely related to levels of GLUT4. However, metformin restored levels of NET protein reaching even higher levels than control women only in placental maternal face, suggesting that the autonomic nervous activity not only modifies fetal exposure to catecholamines, but the fact to respond to treatment with metformin also suggests that it is related with metabolic disorders associated with this syndrome. On the other hand, we found altered levels of downstream components of the insulin receptor signaling, IRS1 and GLUT4. However, treatment with metformin during pregnancy was able to correct these alterations mainly in the maternal side of the placenta, suggesting that the improvement of hyperinsulinemic state in the mother can partially restore the placental metabolic homeostasis. All of these results shows that women with PCOS have a sympathetic component altered during pregnancy and it is responsible for producing adaptive responses in placental protein NET. Such adaptive response in conjunction with alterations in placental insulin signaling could be responsible for the perpetuation of PCOS phenotype in the offspring of these patients. Furthermore, metformin has proven be a useful pharmacological tool to correct the sympathetic and metabolic alterations at different levels, present in PCOS pregnant woman, appearing as an integrator agent for pathologies involving metabolic, circulatory and neuroendocrine components / FONDECYT 1090036; FONDECYT 1110864

Um crescente número de estudos tem associado diabetes mellitus a risco aumentado para o desenvolvimento de câncer e ao aumento da mortalidade específica por câncer. Por outro lado, diversos estudos sugerem que a metformina pode estar associada à redução do risco de desenvolvimento e de morte relacionada ao câncer em pacientes com diabetes mellitus. Diversas evidências disponíveis na literatura sugerem o papel da metformina como uma droga antineoplásica. No entanto, o mecanismo envolvido neste efeito benéfico da metformina não é totalmente compreendido. Apesar das evidências, alguns autores discordam quanto ao papel da metformina na redução do risco de câncer em pacientes com diabetes mellitus. Assim, o presente estudo objetivou identificar o perfil dos pacientes com diabetes mellitus que desenvolveram neoplasias e verificar a relação entre o uso de metformina e a presença de neoplasias em indivíduos com diagnóstico prévio de diabetes mellitus. Trata-se de um estudo caso-controle, onde foram selecionados 510 prontuários de pacientes de ambos os sexos, com idade acima de 35 anos que passaram por internações no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, no período de 2002 a 2012, com diagnóstico de diabetes mellitus, classificadas segundo CID-10 com os códigos de E10 a E14, e pacientes com diagnóstico de neoplasias malignas classificadas nos seguintes códigos do CID-10: C00-C75; C76 a C80; C97; D00 a D09; D37 a D48. Foram formados dois grupos na proporção de 1:2, sendo o grupo de casos com diagnóstico de diabetes mellitus e Neoplasias (170 prontuários) e o grupo controle com diagnóstico de diabetes mellitus sem neoplasias (340 prontuários). Os prontuários foram analisados quanto às variáveis sociodemográficas e clínico-epidemiológicas. Os resultados do presente estudo mostraram medianas de idade significativamente maiores no grupo de casos (portadores de diabetes mellitus e neoplasia), assim como maior ocorrência de óbitos, tabagismo e uso de metformina prévio. O tempo de uso de metformina, a dose de insulina NPH utilizada nos últimos 12 meses e a presença de obesidade foram significativamente maiores entre os pacientes com diabetes mellitus sem neoplasia (grupo controle). O estudo sugere a necessidade de mais estudos para avaliar o papel da metformina na ocorrência de neoplasias em pacientes com diabetes mellitus pré-existente / An increasing number of studies have associated diabetes mellitus with an increased risk for the development of cancer and increased specific cancer mortality. Furthermore, several studies suggest that metformin may be associated with reduced risk for developing cancer and cancer-related death in patients with diabetes mellitus. Several available evidence in the literature suggests the role of metformin as an anticancer drug. However, the mechanism involved in this beneficial effect of metformin is not fully understood. Despite the evidence, there are conflicting data on the role of metformin in reducing the risk of cancer in patients with diabetes mellitus. Thus, this study aimed to identify the profile of patients with diabetes mellitus who developed cancer and to investigate the relationship between the use of metformin and the occurrence of malignancies in patients with a previous diagnosis of diabetes mellitus. This is a case-control study where we selected 510 medical records of patients of both sexes, aged 35 years and over who have undergone hospitalization at the Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, in the 2002-2012 period, with diagnosis of diabetes mellitus, categorized by ICD-10 codes E10 to E14, and patients with diagnosis of malignancies classified by the following ICD-10 codes: C00-C75; C76 to C80; C97; D00 to D09; D37 to D48. Two groups were formed, at the proportion 1: 2, one composed by patients with diabetes mellitus and neoplasms, considered the group of cases (170 records) and another group by patients with diabetes mellitus, considered the control group (340 records). The medical records were analyzed regarding to sociodemographic and clinical-epidemiological variables. The results of this study showed significantly higher median age in the case group (patients with diabetes mellitus and cancer), as well as the occurrence of deaths, smoking, previous use of metformin. Length of metformin use, NPH insulin dose used in the last 12 months and the presence of obesity were significantly higher among patients with diabetes mellitus without cancer (controls). The study suggests the necessity of other studies to clarify the real role of metformin in the occurrence of tumors in patients with pre-existing diabetes mellitus

A dissolução de um fármaco a partir de uma forma farmacêutica (FF) sólida oral é um pré-requisito para que o mesmo seja absorvido pelo organismo e cumpra seus efeitos terapêuticos. O ensaio de dissolução de medicamentos permite avaliar a quantidade de princípio ativo que é liberado a partir de sua FF, mimetizando in vitro o processo que ocorre no trato gastrointestinal (TGI). O DDDPlus® é o único programa de computador dedicado exclusivamente a simular ensaios de dissolução. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade do programa de computador DDDPlus® em fornecer perfis de dissolução in silico de comprimidos matriciais contendo metformina semelhantes aos perfis de dissolução in vitro e avaliar a possibilidade de substituir a comparação de perfis de dissolução in vitro de diferentes formulações de comprimidos matriciais contendo metformina pela comparação de perfis de dissolução in silico fornecidos pelo DDDPlus®.Para tanto, um planejamento estatístico foi realizado para obtenção de perfis de dissolução, variando a velocidade das pás e o uso do sinker. Os perfis de dissolução de 3 formulações teste (T1, T2 e T3) de comprimidos de liberação modificada por matriz polimérica contendo metformina foram comparadas pelos métodos de eficiência de dissolução (ED), tempo médio de dissolução (TMD), fator de diferença (f2) e fator de semelhança (f1). Os resultados indicaram o uso do sinker como fator determinante para a ED e TMD. Assim, o método que utilizava o sinker e a velocidade das pás de 50RPM foi utilizado para avaliar 4 produtos comercializados no Brasil. No DDDPlus® os ensaios de dissolução in vitro das formulações T1, T2 e T3 foram otimizadas para a obtenção das constantes de calibração (CC), as CC foram utilizadas para simular os ensaios de dissolução de T1, T2 e T3 em velocidades de 25 e 50RPM. Os perfis de dissolução simulados foram comparados aos perfis observados, resultando em valores de R2. Valores de R2 acima de 0,90 foram obtidos para todas as simulações realizadas utilizando CC de ensaios in vitro que utilizaram sinker, indicando o potencial do programa em auxiliar o desenvolvimento de novas formulações. Valores de R2 abaixo de 0,70 foram obtidos após a simulação de ensaios utilizando CC de ensaios in vitro que não utilizavam o sinker, indicando que o programa de computador não previu a adesão do comprimido ao fundo da cuba de dissolução durante o ensaio. Os perfis de dissolução simulados das formulações T1, T2 e T3 foram comparadas por f1 e f2 com os perfis de dissolução dos produtos do mercado. Tais comparações concluíram que o software não é indicado como substituto dos ensaios in vitro quando se almeja comparar perfis de dissolução. / Dissolution of a drug from an oral solid pharmaceutical form (FF) is a prerequisite for it to be absorbed by the body and to fulfill its therapeutic effects. in vitroDrug dissolution assay allows the amount of active principle released from a FF and mimics the in vivo the process that occurs in the gastrointestinal tract (TGI). DDDPlus® is the only computer program dedicated exclusively to simulating dissolution testing. The objective of this work was to evaluate the ability of DDDPlus® software to provide in silico dissolution profiles of matrix tablets containing metformin similar to in vitro dissolution profiles and to evaluate the possibility of replacing in vitro dissolution profiles comparison of different formulations of matrix tablets containing metformin for a comparison of in silico dissolution profiles provided by DDDPlus®. For this purpose, a statistical design was used, varying agitation speed and the use of sinker to obtain dissolution profiles for 3 test formulations (T1, T2 and T3) of polymer matrix-modified release tablets containing metformin. Dissolution profiles were compared by means of dissolution efficiency (ED), mean dissolution time (TMD), difference factor (f2) and similarity factor (f1). The results indicated the use of sinker as a determinant factor for ED and TMD. Thus, the method that used sinker and agitation speed of 50RPM was used to evaluate 4 products commercialized in Brazil. in vitro dissolution tests of the T1, T2 and T3 formulations were optimized using In DDDPlus® to obtain the calibration constants (CC), which were used to simulate dissolution profiles of T1, T2 and T3 at speeds of 25 and 50RPM. in silico dissolution profiles were compared to in vitro dissolution profiles, resulting in R2 values. R2 values above 0.90 were obtained for all simulations performed using CC from in vitro assays using sinker, indicating the potential of the program to assist the development of new formulations. R2 values below 0.70 were obtained after the simulation of assays using CC from in vitro assays that did not use the sinker, indicating that the computer program did not predict adhesion of the tablet to the bottom of the dissolution cell during the assay. The simulated dissolution profiles of the T1, T2 and T3 formulations were compared by f1 and f2 with the dissolution profiles of the market products. Such comparisons concluded that the software is not indicated as a substitute for in vitro assays when comparing dissolution profiles is desired.

A dissolução de um fármaco a partir de uma forma farmacêutica (FF) sólida oral é um pré-requisito para que o mesmo seja absorvido pelo organismo e cumpra seus efeitos terapêuticos. O ensaio de dissolução de medicamentos permite avaliar a quantidade de princípio ativo que é liberado a partir de sua FF, mimetizando in vitro o processo que ocorre no trato gastrointestinal (TGI). O DDDPlus® é o único programa de computador dedicado exclusivamente a simular ensaios de dissolução. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade do programa de computador DDDPlus® em fornecer perfis de dissolução in silico de comprimidos matriciais contendo metformina semelhantes aos perfis de dissolução in vitro e avaliar a possibilidade de substituir a comparação de perfis de dissolução in vitro de diferentes formulações de comprimidos matriciais contendo metformina pela comparação de perfis de dissolução in silico fornecidos pelo DDDPlus®.Para tanto, um planejamento estatístico foi realizado para obtenção de perfis de dissolução, variando a velocidade das pás e o uso do sinker. Os perfis de dissolução de 3 formulações teste (T1, T2 e T3) de comprimidos de liberação modificada por matriz polimérica contendo metformina foram comparadas pelos métodos de eficiência de dissolução (ED), tempo médio de dissolução (TMD), fator de diferença (f2) e fator de semelhança (f1). Os resultados indicaram o uso do sinker como fator determinante para a ED e TMD. Assim, o método que utilizava o sinker e a velocidade das pás de 50RPM foi utilizado para avaliar 4 produtos comercializados no Brasil. No DDDPlus® os ensaios de dissolução in vitro das formulações T1, T2 e T3 foram otimizadas para a obtenção das constantes de calibração (CC), as CC foram utilizadas para simular os ensaios de dissolução de T1, T2 e T3 em velocidades de 25 e 50RPM. Os perfis de dissolução simulados foram comparados aos perfis observados, resultando em valores de R2. Valores de R2 acima de 0,90 foram obtidos para todas as simulações realizadas utilizando CC de ensaios in vitro que utilizaram sinker, indicando o potencial do programa em auxiliar o desenvolvimento de novas formulações. Valores de R2 abaixo de 0,70 foram obtidos após a simulação de ensaios utilizando CC de ensaios in vitro que não utilizavam o sinker, indicando que o programa de computador não previu a adesão do comprimido ao fundo da cuba de dissolução durante o ensaio. Os perfis de dissolução simulados das formulações T1, T2 e T3 foram comparadas por f1 e f2 com os perfis de dissolução dos produtos do mercado. Tais comparações concluíram que o software não é indicado como substituto dos ensaios in vitro quando se almeja comparar perfis de dissolução. / Dissolution of a drug from an oral solid pharmaceutical form (FF) is a prerequisite for it to be absorbed by the body and to fulfill its therapeutic effects. in vitroDrug dissolution assay allows the amount of active principle released from a FF and mimics the in vivo the process that occurs in the gastrointestinal tract (TGI). DDDPlus® is the only computer program dedicated exclusively to simulating dissolution testing. The objective of this work was to evaluate the ability of DDDPlus® software to provide in silico dissolution profiles of matrix tablets containing metformin similar to in vitro dissolution profiles and to evaluate the possibility of replacing in vitro dissolution profiles comparison of different formulations of matrix tablets containing metformin for a comparison of in silico dissolution profiles provided by DDDPlus®. For this purpose, a statistical design was used, varying agitation speed and the use of sinker to obtain dissolution profiles for 3 test formulations (T1, T2 and T3) of polymer matrix-modified release tablets containing metformin. Dissolution profiles were compared by means of dissolution efficiency (ED), mean dissolution time (TMD), difference factor (f2) and similarity factor (f1). The results indicated the use of sinker as a determinant factor for ED and TMD. Thus, the method that used sinker and agitation speed of 50RPM was used to evaluate 4 products commercialized in Brazil. in vitro dissolution tests of the T1, T2 and T3 formulations were optimized using In DDDPlus® to obtain the calibration constants (CC), which were used to simulate dissolution profiles of T1, T2 and T3 at speeds of 25 and 50RPM. in silico dissolution profiles were compared to in vitro dissolution profiles, resulting in R2 values. R2 values above 0.90 were obtained for all simulations performed using CC from in vitro assays using sinker, indicating the potential of the program to assist the development of new formulations. R2 values below 0.70 were obtained after the simulation of assays using CC from in vitro assays that did not use the sinker, indicating that the computer program did not predict adhesion of the tablet to the bottom of the dissolution cell during the assay. The simulated dissolution profiles of the T1, T2 and T3 formulations were compared by f1 and f2 with the dissolution profiles of the market products. Such comparisons concluded that the software is not indicated as a substitute for in vitro assays when comparing dissolution profiles is desired.

Um crescente número de estudos tem associado diabetes mellitus a risco aumentado para o desenvolvimento de câncer e ao aumento da mortalidade específica por câncer. Por outro lado, diversos estudos sugerem que a metformina pode estar associada à redução do risco de desenvolvimento e de morte relacionada ao câncer em pacientes com diabetes mellitus. Diversas evidências disponíveis na literatura sugerem o papel da metformina como uma droga antineoplásica. No entanto, o mecanismo envolvido neste efeito benéfico da metformina não é totalmente compreendido. Apesar das evidências, alguns autores discordam quanto ao papel da metformina na redução do risco de câncer em pacientes com diabetes mellitus. Assim, o presente estudo objetivou identificar o perfil dos pacientes com diabetes mellitus que desenvolveram neoplasias e verificar a relação entre o uso de metformina e a presença de neoplasias em indivíduos com diagnóstico prévio de diabetes mellitus. Trata-se de um estudo caso-controle, onde foram selecionados 510 prontuários de pacientes de ambos os sexos, com idade acima de 35 anos que passaram por internações no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, no período de 2002 a 2012, com diagnóstico de diabetes mellitus, classificadas segundo CID-10 com os códigos de E10 a E14, e pacientes com diagnóstico de neoplasias malignas classificadas nos seguintes códigos do CID-10: C00-C75; C76 a C80; C97; D00 a D09; D37 a D48. Foram formados dois grupos na proporção de 1:2, sendo o grupo de casos com diagnóstico de diabetes mellitus e Neoplasias (170 prontuários) e o grupo controle com diagnóstico de diabetes mellitus sem neoplasias (340 prontuários). Os prontuários foram analisados quanto às variáveis sociodemográficas e clínico-epidemiológicas. Os resultados do presente estudo mostraram medianas de idade significativamente maiores no grupo de casos (portadores de diabetes mellitus e neoplasia), assim como maior ocorrência de óbitos, tabagismo e uso de metformina prévio. O tempo de uso de metformina, a dose de insulina NPH utilizada nos últimos 12 meses e a presença de obesidade foram significativamente maiores entre os pacientes com diabetes mellitus sem neoplasia (grupo controle). O estudo sugere a necessidade de mais estudos para avaliar o papel da metformina na ocorrência de neoplasias em pacientes com diabetes mellitus pré-existente / An increasing number of studies have associated diabetes mellitus with an increased risk for the development of cancer and increased specific cancer mortality. Furthermore, several studies suggest that metformin may be associated with reduced risk for developing cancer and cancer-related death in patients with diabetes mellitus. Several available evidence in the literature suggests the role of metformin as an anticancer drug. However, the mechanism involved in this beneficial effect of metformin is not fully understood. Despite the evidence, there are conflicting data on the role of metformin in reducing the risk of cancer in patients with diabetes mellitus. Thus, this study aimed to identify the profile of patients with diabetes mellitus who developed cancer and to investigate the relationship between the use of metformin and the occurrence of malignancies in patients with a previous diagnosis of diabetes mellitus. This is a case-control study where we selected 510 medical records of patients of both sexes, aged 35 years and over who have undergone hospitalization at the Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, in the 2002-2012 period, with diagnosis of diabetes mellitus, categorized by ICD-10 codes E10 to E14, and patients with diagnosis of malignancies classified by the following ICD-10 codes: C00-C75; C76 to C80; C97; D00 to D09; D37 to D48. Two groups were formed, at the proportion 1: 2, one composed by patients with diabetes mellitus and neoplasms, considered the group of cases (170 records) and another group by patients with diabetes mellitus, considered the control group (340 records). The medical records were analyzed regarding to sociodemographic and clinical-epidemiological variables. The results of this study showed significantly higher median age in the case group (patients with diabetes mellitus and cancer), as well as the occurrence of deaths, smoking, previous use of metformin. Length of metformin use, NPH insulin dose used in the last 12 months and the presence of obesity were significantly higher among patients with diabetes mellitus without cancer (controls). The study suggests the necessity of other studies to clarify the real role of metformin in the occurrence of tumors in patients with pre-existing diabetes mellitus

La hipótesis de este trabajo de tesis es que tanto <i>in vitro</i> como <i>in vivo</i>, el tratamiento con Metformina podría proteger y/o bloquear los efectos deletéreos de los AGEs sobre el hueso. Objetivos Generales Investigar los mecanismos patogénicos de los AGEs así como los efectos de la Metformina sobre el hueso, en un modelo <i>in vitro</i> de células óseas en cultivo y en un modelo <i>in vivo</i> en ratas diabéticas y controles. Objetivos Específicos 1) Analizar el efecto de los AGEs y la Metformina sobre el citoesqueleto de actina y la diferenciación de osteoblastos en cultivo. 2) Investigar los efectos pro y anti-apoptóticos de los AGEs y la Metformina en osteoblastos en cultivo. 3) Estudiar el efecto de la Metformina sobre el estrés oxidativo inducido por los AGEs sobre osteoblastos en cultivo. 4) Determinar los mecanismos involucrados en la acción de AGEs y Metformina sobre osteoblastos en cultivo. 5) Estudiar el efecto de la Metformina sobre osteoclastos en cultivo. Determinar los mecanismos de transducción de señales involucrados en su acción. 6) Investigar la formación/resorción ósea en ratas diabéticas o control, tratadas o no con Metformina. Estudiar el grado de reparación de heridas óseas, expuestas o no a la acción de la droga Metformina.