Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2017-01-10T12:27:17Z No. of bitstreams: 1 DissMSCP.pdf: 2238237 bytes, checksum: 45491802360ff30f68b05e329839935b (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-13T19:41:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissMSCP.pdf: 2238237 bytes, checksum: 45491802360ff30f68b05e329839935b (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-13T19:42:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissMSCP.pdf: 2238237 bytes, checksum: 45491802360ff30f68b05e329839935b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T19:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissMSCP.pdf: 2238237 bytes, checksum: 45491802360ff30f68b05e329839935b (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Não recebi financiamento / The viability of technologies that make possible to use all available plant biomass, such as the production of lignocellulosic ethanol, faces challenges as the search for microorganisms capable of fermenting pentoses with high tolerance to inhibitors released in the biomass hydrolysis step, such as acetic acid and furfural. This study aimed to evaluate the metabolizing capacity of pentoses and glucose by a yeast strain of Meyerozyma guilliermondii (CCT7783) in the presence of furfural and acetic acid. The first set of experiments comprised the evaluation of cell growth in a synthetic medium containing acetic acid as the sole carbon source at concentrations of 1.5; 2.5; 4.5; 10.5; 13.5; 16.5 and 19.5 g/L at 30°C, 160 rpm, pH 5.5, with initial concentration of 0.2 g/L of dry mass for a period of 96 hours of incubation. It was also evaluated the effect of pH (3.5 and 5.5) and the initial concentration of dry mass (0.2, 0.5 and 2.5 g/L). The second set of experiments consisted in the evaluation of the effect of furfural (20 and 40 mg/L) and acetic acid (5 and 10 g/L) in the fermentation of pentoses (arabinose and xylose) and glucose, biomass and ethanol production. The yeast M. guilliermondii was able to grow in synthetic medium in all the acetic acid concentrations tested, at pH 5.5. The concentrations of acetic acid evaluated were much higher than those commonly found in hemicellulosic hydrolysates. Growth inhibition occurred in concentrations of acetic acid beyond 10.5 g/L. The initial pH and the initial cell concentration influenced the growth and the acetic acid consumption. In synthetic medium containing glucose, pentoses and acetic acid as carbon sources, the highest specific growth rate was obtained in the treatment with the addition of 5 g/L of acetic acid, which was consumed concomitantly with the pentoses and glucose in all treatments, however the acetic acid was an inhibitor at the concentration of 10 g/L. Furfural inhibited the growth of the yeast in the concentration of 40 mg/L. The ethanol production by M. guilliermondii was lower comparing to the micro-organisms commonly utilized in the fermentation process. The yeast was able to grow and promote the biological detoxification even in the presence of the inhibitors like acetic acid and furfural, showing that the process requires optimization and that the yeast M. guilliermondii may be applied in biotechnological routes for the production of second generation ethanol. / A viabilidade de tecnologias que aproveitem ao máximo toda a biomassa vegetal disponível, como a produção de etanol lignocelulósico, enfrenta desafios como a busca por micro-organismos capazes de fermentar pentoses, com alta tolerância aos inibidores liberados na etapa de hidrólise da biomassa, como o ácido acético e o furfural. O presente trabalho objetivou avaliar a capacidade de metabolização de pentoses e glicose por uma linhagem da levedura Meyerozyma guilliermondii (CCT7783), na presença de furfural e ácido acético. A primeira fase experimental consistiu da avaliação do crescimento celular em meio sintético contendo ácido acético como única fonte de carbono nas concentrações de 1,5; 2,5; 4,5; 10,5; 13,5; 16,5 e 19,5 g/L, a 30ºC, 160 rpm, pH 5,5, com concentração inicial de 0,2 g/L de massa seca durante um período de incubação de 96 h. Avaliou-se ainda nesta etapa a influência do pH (3,5 e 5,5) e concentração inicial de massa seca (0,2; 0,5 e 2,5 g/L). A segunda fase consistiu na avaliação do efeito do furfural (20 e 40 mg/L) e ácido acético (5 e 10 g/L) na fermentação de pentoses (arabinose e xilose) e glicose, produção de biomassa e etanol. A levedura M. guilliermondii foi capaz de crescer em meio sintético em todas as concentrações de ácido acético testadas, em pH 5,5, sendo essas concentrações muito acima daquelas normalmente encontradas em hidrolisados hemicelulósicos. A concentração a partir da qual ocorreu inibição do crescimento foi 10,5 g/L. O pH inicial teve influência no consumo do ácido acético e crescimento assim como a concentração celular inicial. Em meio sintético contendo glicose, pentoses e ácido acético como fontes de carbono, a maior velocidade específica de crescimento foi obtida no tratamento com adição de 5 g/L de ácido acético, o qual foi consumido concomitantemente com as pentoses e glicose em todos os tratamentos, porém o ácido acético atuou como inibidor na concentração de 10 g/L. O furfural inibiu o crescimento da levedura na concentração de 40 mg/L. A produção de etanol (g/L) foi baixa em relação aos micro-organismos comumente aplicados no processo de fermentação, porém a levedura foi capaz de crescer e promover a detoxificação biológica mesmo na presença de inibidores como ácido acético e furfural, denotando que o processo requer otimização e que a levedura M. guilliermondii pode ser aplicada em rotas biotecnológicas de produção de etanol de segunda geração.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1124939 bytes, checksum: fc1e814adfedce17cc2a8ab97331b5d8 (MD5) Previous issue date: 2014-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / There is a great interest in the selection of yeasts able to convert xylose, the main pentose released from the pretreatment of lignocellulosic biomass, into metabolites of industrial interest, such as fuel, food ingredients, drugs and antimicrobial drugs. Therefore, five xylose fermenting yeasts were selected from the culture collection of the Laboratory of Physiology of Microorganisms, Department of Microbiology, Universidade Federal de Viçosa. Among them, Meyerozyma guilliermondii UFV-1 was able to completely consume xylose available in the medium and convert it into ethanol and other metabolites of industrial relevance. Its fermentation potential was evaluated at different oxygen concentrations. Ethanol production was higher in hypoxia where the concentration of dissolved oxygen (DO) in the culture medium was 10% (1.98 g L -1). The higher production of xylitol, 5.34 g L-1, was also obtained in hypoxia. The effect of ethanol and acetic acid, furfural and hydroxymethyl furfural, inhibitors generated during the acid pre-treatment, on the growth of M. guilliermondii UFV-1 was evaluated. The yeast was able to grow in ethanol concentration of 13.5 g L-1 corresponding to the maximum amount that can be produced from the xylose released from hemicellulose. Furthermore, M. guilliermondii UFV-1 grew in concentrations of acetic acid, furfural and hydroxymethyl furfural which are normally found in hemicellulose hydrolysates. Analysis of M. guilliermondii UFV-1 exometaboloma revealed no difference in the metabolites profile produced in the two growth conditions evaluated: low specific growth rate and near maximum specific growth rate. Five metabolites of biotechnological interest were identified: valeric, caproic and butyric acids, used as antifungal; glicofuranoside used by the pharmaceutical industry in the control of diabetes; and malic acid, compound used in food industry as acidulant and flavor enhancer. Therefore, the identification of these extracellular metabolites demonstrates the biotechnology potential of this yeast not only to produce ethanol and xylitol, but other chemicals of industrial interest. / Existe grande interesse na seleção de leveduras que possam converter xilose, principal pentose liberada do pré-tratamento de biomassas lignocelulósicas, em metabólitos de interesse industrial, tais como combustíveis, ingredientes de alimentos, drogas antimicrobianas e fármacos. Portanto, cinco leveduras fermentadoras de xilose foram selecionadas a partir da coleção de culturas do Laboratório de Fisiologia de Micro-organismos do Departamento de Microbiologia da Universidade Federal de Viçosa. Dentre essas, destacou-se a levedura Meyerozyma guilliermondii UFV-1, capaz de consumir totalmente a xilose disponível no meio e convertê-la em etanol e outros metabólitos de interesse industrial. O potencial fermentativo dessa levedura foi avaliado em diferentes concentrações de oxigênio. A produção de etanol foi maior no cultivo em hipoxia cuja concentração de oxigênio dissolvido (OD) no meio de cultivo foi de 10% (1,98 g L-1). A maior produção de xilitol, 5,34 g L-1, foi obtida em hipoxia em Erlenmeyer. Verificou-se o efeito do etanol e dos inibidores ácido acético, furfural e hidroximetilfurfural, formados no pré-tratamento ácido, no crescimento de M. guilliermondii UFV-1. A levedura foi capaz de crescer em concentrações de etanol de 13,5 g L-1 que correspondem aos valores máximos que podem ser produzidos a partir da xilose liberada da hemicelulose. Além disso, M. guilliermondii UFV-1 cresceu nas concentrações de ácido acético, furfural e hidroximetilfurfural normalmente encontradas em hidrolisados hemicelulósicos. A análise do exometaboloma de M. guilliermondii UFV-1 revelou que não houve diferença no perfil de metabólitos produzidos nas duas condições de crescimento avaliadas: baixa velocidade específica de crescimento e velocidade específica de crescimento próxima da máxima. Foram identificados 5 metabólitos de interesse biotecnológico: os ácidos valérico, capróico e butírico, usados como antifúngicos; o glicofuranosídeo, utilizado pela indústria farmacêutica no controle de diabetes; e o ácido málico, composto utilizado na indústria alimentícia como acidulante e realçador de sabor. Portanto, a identificação desses metabólitos extracelulares demonstra o potencial biotecnológico dessa levedura não apenas para a produção de etanol e xilitol, mas de outros produtos químicos de interesse industrial.

FREITAS, M. F. M. Produção de lipases por leveduras isoladas do bagaço de caju utilizando fontes alternativas de Carbono e Nitrogênio. 2017. 103 f. Tese (Doutorado em Engenharia Química)-Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-21T19:19:47Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfsales.pdf: 1907549 bytes, checksum: 22fee806e690e6f63b1598b0a1542349 (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Prezada Fátima: Vc realizou muitas alterações sugeridas, mas faltam ainda algumas para vc corrigir. Por esse motivo, sugerimos consultar o modelo de template, para ajudá-la nesta tarefa, disponível em: http://www.biblioteca.ufc.br/educacao-de-usuarios/templates/ Vamos agora as correções sempre de acordo com o template: 1. Na capa, na parte inferior da folha coloque a informação da cidade e o ano em negrito. 3. Na ficha Catalográfica, o seu nome deve estar de acordo com a folha de rosto e capa. Voce suprimiu o ultimo nome. Sendo assim a entrada: Sales, Maria de Fátima Matos de Freitas (Não de Freitas) No corpo da ficha coloque seu nome completo por extenso. 4. Retire os hifens de separação na LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS. 7. No sumário na seção terciária (3 dígitos) a partir do 4.2.1 os numerais não estão em itálico. Favor colocar em toda a lista. A palavra CONCLUSÃO Por ser seção primária deve ser toda maiúscula. Retire o numeral 7 da palavra REFERÊNCIAS 8. Na lista de referencias, A palavra que deve ser usada é REFERÊNCIAS (sem o numeral 7), em negrito e centralizada na folha. 9. Na lista de REFERENCIAS, dê uma revisada em toda a lista para colocar o espaço depois do ponto de abreviação (v. n. p. ) nos artigos de revistas. Ex; v.2, n. 3, 2012. Coloque espaço após v. 2, n. 3, 2012 Reenvie novo arquivo para a secretaria com as correções que enviaremos o nada consta por e-mail. Att. Marlene mmarlene@ufc.br 3366-9620 on 2017-11-22T11:23:36Z (GMT) / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-24T19:13:19Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfsales.pdf: 1891030 bytes, checksum: b360634c75b70dda334f156745c6be57 (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Alteração de Maria de Fátima Matos de Freitas Sales Prezada Fátima: Vc realizou muitas alterações sugeridas, mas faltam ainda algumas para vc corrigir. Por esse motivo, sugerimos consultar o modelo de template, para ajudá-la nesta tarefa, disponível em: http://www.biblioteca.ufc.br/educacao-de-usuarios/templates/ Vamos agora as correções sempre de acordo com o template: 3. Verifiquei que houve alteração no seu nome em relação ao arquivo passado, portanto vc tem que alterar em todas as folhas em que é citada. Faltou alterar na folha de aprovação, pois seu nome ainda permanece com SALES. Na ficha então deve ficar: Freitas, Maria de Fátima Matos de (Não de Freitas). No corpo da ficha coloque seu nome completo por extenso. 7. No sumário na seção terciária (3 dígitos) a partir do 4.2.1 os numerais não estão todos em itálico. Favor colocar em toda a lista. Faltou vc colocar em itálico: 5.9.1 Efeito da temperatura e pH na atividade da enzima produzida. 5.9.2 Eletroforese. 5.9.3 Processo de purificação 9. Na lista de REFERENCIAS, dê uma revisada em toda a lista para colocar o espaço depois do ponto de abreviação (v. n. p. ) nos artigos de revistas. Ex; v.2, n. 3, 2012. Coloque espaço após v. 2, n. 3, p. 513-523, 2012 . Vc ainda não corrigiu o espaçamento solicitado em toda a lista. Reenvie novo arquivo para a secretaria com as correções que enviaremos o nada consta por e-mail. Att. Marlene mmarlene@ufc.br 3366-9620 on 2017-11-27T13:25:15Z (GMT) / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-30T11:40:13Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfsales(1).pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Danilo, Favor renomear o arquivo para: 2017_tese_mfmfreitas Depois me envie novamente. Marlene on 2017-11-30T12:52:03Z (GMT) / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-30T12:58:25Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfreitas.pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2017-11-30T14:20:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfreitas.pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-30T14:20:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfreitas.pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) Previous issue date: 2017-06-13 / Lipolytic enzymes can catalyse a wide variety of reactions and are highly specific. For biotechnology, the need arises for the search for new microrganisms for this production. The objective of this work was to evaluate lipase production by two yeasts isolated from cashew bagasse, Candida tropicalis URM 7057 and Meyerozyma caribbica LABIOTEC 4 and to compare it with C. rugosa yeast NRRL Y-95. Synthetic culture media were initially tested for production of the enzyme. Synthetic medium C (containing glucose, KH2PO4, yeast extract, MgSO4 .7H2O, peptone and oleic acid) showed the best intracellular activity results (282 ± 14 in 48 h of cultive). Then, alternative medium culture was formulated with residues, in addition to ammonium sulfate and peptone, and evaluated the production of the enzymes of interest. Medium culture 01 contained molasses, medium culture 02, corn steep liquor (CSL), medium culture 03, olive mill wastewater (OMW) and medium culture 04, all of them. Medium 04 was better because it allowed the production of larger amounts of lipase, probably because it had a higher amount of nutrients for yeast. An experimental design was conducted to verify the influence of the concentrations of residues on lipase production. Corn steep liquor (CSL) had a positive effect on this production, providing extracellular lipase activity of 587 ± 5 U/L, in 24 h of cultive. The use of stirred tank bioreactors favored the production of lipases, since the activities of the lipase produced by C. rugosa in bioreactor were higher than those produced in flasks (600 U/L in bioreactor and 400 U/L in flasks, after 48 h of cultive) and for yeast C. tropicalis the enzymatic activity also presented in a larger quantity (close to 500 U/L, compared to 400 U/L in flasks). Biomass growth of yeast biomass C. tropicalis, in flasks and in bioreactor, was similar up to 48 h. The enzyme produced by C. rugosa has a molar mass close to 60 KDa, with an optimum pH of 7.0 and an optimum temperature of 40 °C. The partial biochemical characterization of the lipase produced by C. tropicalis showed that it presents an optimum temperature of 60 °C for the intracellular extract and 70 °C for the extracellular extract, optimum pH equal to 7.0. After adsorption of the enzyme in octyl-agarose, it was possible to identify, by zymogram analysis and by electrophoresis, bands close to those obtained for C. rugosa commercial lipase (60 KDa, 45 KDa and 22 KDa). / As enzimas lipolíticas são capazes de catalisar uma grande variedade de reações e são altamente específicas. Para a biotecnologia surge a necessidade da busca de novos micro-organismos para essa produção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a produção de lipases por duas leveduras isoladas do bagaço de caju, Candida tropicalis URM 7057 e Meyerozyma caribbica LABIOTEC 4 e comparar pela levedura C. rugosa NRRL Y-95. Inicialmente foram testados meios de cultura sintéticos para a produção da enzima. O meio sintético C (contendo glicose, KH2PO4, extrato de levedura, MgSO4.7H2O, peptona e ácido oleico) foi o que apresentou melhor resultados de atividade intracelular (282 ± 14 U/L em 48 horas de cultivo). Em seguida, 4 meios de cultura alternativos foram formulados com resíduos, além de sulfato de amônia e peptona, e avaliados na produção da enzima de interesse. O meio 01 continha melaço, o meio 02, milhocina (CSL - corn steep liquor), o meio 03, águas residuais da produção do azeite (olive mill wastewater - OMW) e o meio 04, todos eles. O meio 04 se mostrou melhor por permitir a produção de maiores quantidades da enzima lipolítica, provavelmente por apresentar uma quantidade maior de nutrientes para levedura. Um planejamento fatorial fracionado foi conduzido para se verificar a influência das concentrações dos resíduos na produção da lipase. A milhocina apresentou efeito positivo nessa produção, propiciando atividade extracelular de lipase de 587 ± 5 U/L, em 24 horas de cultivo. O uso de biorreator tipo tanque agitado favoreceu a produção de lipases, visto que as atividades da lipase produzida por C. rugosa em biorreator foram maiores que as produzidas em frascos (600 U/L em biorreator e 400 U/L em frascos, após 48 horas de cultivo), e para levedura C. tropicalis a atividade enzimática também se apresentou em quantidade maior (próximo a 500 U/L, comparado a 400 U/L em frascos). O crescimento da biomassa da levedura C. tropicalis em frascos e em biorreator foi similar até 48 horas. A enzima produzida por C. rugosa tem massa molar próxima a 60 KDa, com pH ótimo em torno de 7,0 e temperatura ótima de 40 °C. A caracterização bioquímica parcial da lipase produzida por C. tropicalis mostrou que ela apresenta temperatura ótima de 60 ºC para o extrato intracelular e 70 °C para o extracelular, pH ótimo igual a 7.0. Após adsorção da enzima em octil-agarose, foi possível identificar, por análise de zimograma e por eletroforese, bandas próximas às obtidas para a lipase de C. rugosa comercial (60 KDa, 45 KDa e 22 KDa).

Submitted by Aelson Maciera (aelsoncm@terra.com.br) on 2017-03-30T19:00:59Z No. of bitstreams: 1 DissTBO.pdf: 1573981 bytes, checksum: e4e97b3faf18cb39cb38dffdf87ccfc6 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-04-17T19:48:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissTBO.pdf: 1573981 bytes, checksum: e4e97b3faf18cb39cb38dffdf87ccfc6 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-04-17T19:49:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissTBO.pdf: 1573981 bytes, checksum: e4e97b3faf18cb39cb38dffdf87ccfc6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T20:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissTBO.pdf: 1573981 bytes, checksum: e4e97b3faf18cb39cb38dffdf87ccfc6 (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Não recebi financiamento / Microorganisms Plant Growth Promoters (MPCV) have the ability to produce compounds which stimulate plant growth by different mechanisms, such as the production of plant hormones and solubilization of minerals. Considering these aspects, this study aimed to evaluate the potential of yeast strains as plant growth promoters by producing indole acetic acid (IAA) and phosphate solubilization, and its inoculation of tomato seedlings. Six yeast strains were evaluated belonging to bank microorganisms Agricultural Microbiology and Molecular Laboratory (LAMAM - CCA, UFSCar). For the evaluation of IAA production by isolates the colorimetric method was used, modified DiMenna (1957); for quantification of tricalcium phosphate solubilization was used to colorimetric method of molybdenum blue. The test with tomato seedlings was conducted in a greenhouse with different cell concentrations of T. globosa (5S55) and with or without addition of glucose and tryptophan. The results showed that isolates of T. globosa and Rh. mucilaginosa produced IAA in the presence of tryptophan; the isolates of T. globosa and M. guilliermondii solubilized inorganic phosphate in a liquid medium. The isolate T. globosa (5S55) promoted the growth of tomato seedlings, with significant increases in the length of shoot and root. In conclusion, the isolates of T. globosa, Rh. mucilaginosa and M. guilliermondii have the potential for improving plant production by IAA production and / or phosphate solubilization; the yeast T. globosa (5S55) was shown to promote growth of tomato plants. / Micro-organismos Promotores de Crescimento Vegetal (MPCV) apresentam a habilidade de produzir compostos que estimulam o desenvolvimento das plantas por meio de diferentes mecanismos, como a produção de hormônios vegetais e a solubilização de minerais. Considerando estes aspectos, este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de linhagens de leveduras como promotoras de crescimento vegetal, através da avaliação in vitro da produção de ácido indolacético e solubilização de fosfato, e da avaliação in vivo através da inoculação da linhagem com melhores resultados em mudas de tomate. Foram avaliadas seis linhagens de levedura pertencentes ao banco de micro-organismos do Laboratório de Microbiologia Agrícola e Molecular (LAMAM - CCA, UFSCar). Para a avaliação da produção de AIA pelos isolados foi utilizada a metodologia colorimétrica, modificada de diMenna (1957); para quantificação da solubilização de fosfato tricálcico foi utilizada o método colorimétrico do azul de molibdênio. O ensaio com mudas de tomate foi realizado em casa de vegetação com diferentes concentrações de células de T. globosa (5S55), e com adição ou não de glicose e triptofano. Os resultados mostraram que os isolados de T. globosa e o isolado de Rhodotorula mucilaginosa produziram AIA na presença de triptofano; os isolados de T. globosa e o isolado de Meyerozyma guilliermondii solubilizaram fosfato inorgânico em meio líquido. A levedura T. globosa (5S55) promoveu o crescimento das mudas de tomate, com aumentos significativos no comprimento da parte aérea e raiz. Conclui-se que os isolados de T. globosa, Rh. mucilaginosa e M. guilliermondii apresentam potencial para a melhoria da produção vegetal através da produção de AIA e/ou solubilização de fosfato; a levedura T. globosa, isolado 5S55, mostrou ser capaz de promover o crescimento de mudas de tomate.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-11T14:59:51Z No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-11T15:00:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-11T15:00:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_Andrelisse Arruda_2017.pdf: 5916961 bytes, checksum: d3d6f3dd277d94f02ba45cb40e90dc81 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Microrganisms living in insects’ midgut have been isolated and identified for developing biotechnological tools to fight vector-born diseases. In this context, the mosquitoes Anopheles from different regions around the world have been studied about their midgut microbiota focused on paratransgenesis. However, information about microrganisms living in neotropical mosquitoes midgut are scarce. And, specially about Anopheles darlingi, the main malaria vector in the Brazilian Amazon, still this study, there were not any report about culturable microrganisms associated to this insect. The first step for paratransgenesis is to isolate culturable microrganisms naturally associated to the insect vector, and thus amenable to experimentation in laboratory. The objectives of this work were to isolate and to identify culturable bacteria and yeasts isolated from feces of Anopheles darlingi, the main vector of malaria in Brazil; to estimate the species richness and frequency distribution of the sampled bacteria and yeasts and to characterize and to select the sampled bacteria and yeasts isolated from feces of An. darlingi with potential for paratransgenesis. The female mosquitoes of An.darlingi were captured in two rural places of Porto Velho, Rondônia, Brasil. For improving the bacterial growth, mosquito feces were collected on LB agar medium and cultivated at 37 ºC for 24 hours, and for improving the yeast growth, mosquito feces were collected on YPD agar medium with Chloramphenicol and cultivated at 30 ºC for 48 hours. Sixty pure bacteria colonies and sixty pure yeast colonies were sampled. The isolates were preserved in -80 ºC freezer. PCR reactions with genomic DNA from each isolate were perfomed using the primers of 16S rRNA genes for bacteria and 26S and ITS for yeasts. From 60 bacterial isolates, 55 samples were identified. From 60 yeast isolates, 27 samples were identified. The fragments were sequenced with the Sanger method and the sequences with similarities above of 97% with sequences in reference database were deposited in Genbank (NCBI). For bacteria, MALDI-TOF, VITEK®2 and BBL Crystal were also used as a complementar protocols to identify the isolates. The identified bacteria fall into 8 genera, Enterobacter, Klebsiella, Cedecea, Pantoea, Serratia, Acinetobacter, Burkholderia and Staphylococcus. The identified yeast fall into 7 genera, Pseudozyma, Papiliotrema (Cryptococcus), Meyerozyma (=Pichia), Rhodotorula, Candida, Hanseniaspora and Metschnikowia. As candidates to paratransgenesis to control of malaria in An. darlingi are those bacteria belonging to the genera Pantoea and Serratia and the yeasts belonging to the genera Meyerozyma (=Pichia), Pseudozyma, Hanseniaspora and Metschnikowia. / Microrganismos contidos no trato digestório de insetos vem sendo isolados e identificados com o intuito de desenvolver ferramentas biotecnológicas para o controle de doenças transmitidas por insetos. Nesse contexto, mosquitos Anopheles de diferentes partes do globo têm sua microbiota investigada com foco em paratransgênese. No entanto, a informação sobre microrganismos associados aos anofelinos neotropicais é escassa. Tratando-se de Anopheles darlingi, o principal vetor de malária no Brasil, até o presente trabalho, não havia informações sobre microrganismos cultiváveis associados a esse vetor. Os objetivos deste trabalho foram isolar e identificar bactérias e leveduras cultiváveis isoladas das fezes de An. darlingi, o principal vetor da malária no Brasil; estimar riqueza e distribuição de frequência das bactérias e leveduras amostradas, e caracterizar e selecionar bactérias e leveduras isoladas das fezes de An. darlingi com potencial para paratransgênese. Os mosquitos An. darlingi fêmeas foram coletados em duas localidades rurais de Porto Velho, Rondônia, Brasil. Para favorecer o crescimento de bactérias, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio LB ágar e cultivadas à 37°C por 24 horas, e para propiciar o crescimento de leveduras, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio YPD ágar com cloranfenicol e cultivadas à 30°C por 48 horas. Sessenta colônias bacterianas e 60 colônias leveduriformes foram amostradas. Os isolados foram preservados em freezer -80 °C. Foram realizadas PCR utilizado DNA genômico dos isolados com iniciadores para a região do DNA ribossomal 16S para bactérias e 26S e ITS para leveduras. Todas as 60 bactérias isoladas foram identificadas. Das 60 leveduras isoladas, 27 foram identificadas. Os fragmentos foram sequenciados pelo método Sanger e as sequências com similaridades superiores a 97% frente a sequências disponíveis em bancos de dados foram depositadas no GenBank. Para bactérias, MALDI-TOF, VITEK®2 e BBL Crystal foram utilizados como métodos complementares para identificação dos isolados. As bactérias identificadas pertencem a 8 gêneros: Staphylococcus, Burkholderia, Cedecea, Enterobacter, Klebsiella, Pantoea, Serratia e Acinetobacter. As leveduras identificadas pertencem a 7 gêneros: Candida, Meyerozyma (=Pichia), Metschnikowia, Hanseniaspora, Rhodotorula, Papiliotrema (=Cryptococcus) e Pseudozyma. São candidatas à paratransgênese para o controle da malária em An. darlingi as bactérias do gênero Pantoea e Serratia e as leveduras dos gêneros Meyerozyma (Pichia), Metschkowia, Hanseniaspora e Pseudozyma.

The thesis deals with the study of the different yeast strains from the point of view of extracellular lipolytic enzyme production. First part of this work consisting of appropriate yeasts was developed within study interships in Slovak Academy of Sciences, department of Glycomics in Bratislava. From ten given strains three yeasts such as Pseudozyma fusiformata, Meyerozyma guilliermondii, Yarrowia lipolytica were chosen, these strains showed the highest lipolytic activity and cell growth on basal medium with Tween 80. These yeasts were used for optimization of cultivation conditions and characterization of lipolytic enzymes. The yeasts were cultivated on media with different carbon sources, which appeared to be a most suitable medium the basal medium with Tween. Tween acted as and inducer of lipase production. The substrate specificity was determined using three p-nitrophenylester substrates with varying sizes of the fatty acid site chains. The results showed that tested lipases are probably triacylglycerol-acyl-hydrolases which has the highest activity towards in the water insoluble substrates with medium long chains. The pH optimum and temperature optimum were measured. The results showed that the tested lipases had the highest activity in neutral and mild acid region around 30°C. By measuring of thermal stability has been demonstrated that extracellular lipases are relatively thermostable enzymes. Afterwards the storage stability was measured for 5 weeks when supernatant was kept in fridge at 4°C and in freezing box at -20°C. The results showed that in both cases tested lipases exhibited high storage stability which allows to store the samples without loss of activity for a longer time. Finally, the results of lipolytic and proteolytic activity, cell growth and pH of the medium of yeast Y. lipolytica were compared between the batch cultivation in L-tubes with the continual cultivation in the bioreactor. The highest lipases production was achieved in bioreactor due to the setting conditions of the continual proces to regulate the production and enzymatic stability.