Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:43:46Z : No. of bitstreams: 1 jordaojunior_cm_dr_arafcf.pdf: 786872 bytes, checksum: 274f8014be73a7e236d6f75ebb8adc01 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Micobacterias ambientais (MA) ou micobactérias não-tuberculosas (MNT) estão relacionadas a uma grande variedade de doenças em seres humanos. As micobactérias ambientais são saprófitas comumente encontradas em todos os ecossistemas, incluindo água, solo, alimento, poeira e aerósóis. Particularmente, essas micobactérias podem se multiplicar em diferentes fontes de águas, como por exemplo águas de superfície, recreação, residuais, subterrâneas e de torneiras. Sistemas de encanamentos fornecedores de águas são rapidamente colonizados por micobactérias e assim os biofilmes formados nos canos d´água servem como fontes desses microrganismos. Micobactérias são resistentes contra a maioria dos desinfetantes usuais e podem tolerar grandes variações de pH e temperatura, o que lhes permite a permanência nos sistemas de distribuição de água por longos períodos de tempo. O objetivo desse estudo foi isolar e identificar MNT de amostras de água e biofilmes na canalização de água de uma fazenda produtora de leite de búfalas na região de São Carlos-SP e também avaliar a qualidade da água da propriedade por meio da contagem de microrganismos heterotróficos, coliformes totais e termotolerantes e Staphylococcus aureus.Das amostras analisadas, 90,5% das amostras foram classificadas como fora dos padrões em relação a coliformes totais e 69% foram classificadas como fora dos padrões em relação a coliformes termotolerantes. Trinta e duas amostras (76,3%) de um total de 42(100%) apresentaram populações acima de 500 UFC/mL para bactérias heterotróficas. S.aureus foram isolados em 9 amostras (32,14%) de um total de 28(100%). De um total de 33 (100%)MNT isoladas nesse trabalho, 12 (36,36%) foram isoladas de biofilmes presentes nos encanamentos de água da propriedade. Esses isolados foram posteriormente identificados usando a técnica do PRA (PCR- restriction enzyme... / Environmental mycobacteria (EM) or nontuberculosis mycobacteria (NTMs) are implicated in a variety of human diseases. They are common saprophytes in all ecosystems, including water, soil, food, dust, and aerosols. In particular, EM species can multiply in numerous water sources, including wastewater, surface water, recreational water, ground water, and tap water. Piped water supplies are readily colonized by mycobacteria, and thus the biofilm in the water pipes may serve as a reservoir for these organisms. Mycobacteria are resistant against common disinfectants and can tolerate wide ranges of pH and temperature, which allows them to persist in drinking water systems for long periods of time.The aim of this study was to isolate and identify NTMs from water samples and biofilms from a dairy buffalo farm in São Carlos city, State of Sao Paulo and to evaluate the water quality of the farm using heterotrophic, faecal and total coliforms count plates. Results showed that 90.5% of the samples were considered as being out of the standards related to total coliforms and 69% of the samples were classified as being out of the standards related to faecal coliforms. From a total of 42 (100%) samples, 32 (76,3%) presented populations above of 500 CFU/mL for heterotrophic bacteria. S.aureus were isolated in 9 samples (32,14%) from a total of 28(100%).Out of 33(100%) NTMs isolated in this work, 12 (36,36) were isolated from biofilms in water pipes. These isolates were further identified using PRA (PCR- restriction enzyme analysis), as well as 16S rDNA and hsp65 DNA sequencing, and mycolic acids by thin layer chromatography (TLC). Twenty-eighty species (84,84%) were identified as M. gordonae (18 isolates from water samples and 10 from biofilms), 2 (2,06%) M. lentiflavum (biofilms), 2 (2,06%)... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Daisy Nakamura Sato / Banca: Susana Correa de Matos David / Banca: Mariza Landgraf / Resumo: Micobacterias ambientais (MA) ou micobactérias não-tuberculosas (MNT) estão relacionadas a uma grande variedade de doenças em seres humanos. As micobactérias ambientais são saprófitas comumente encontradas em todos os ecossistemas, incluindo água, solo, alimento, poeira e aerósóis. Particularmente, essas micobactérias podem se multiplicar em diferentes fontes de águas, como por exemplo águas de superfície, recreação, residuais, subterrâneas e de torneiras. Sistemas de encanamentos fornecedores de águas são rapidamente colonizados por micobactérias e assim os biofilmes formados nos canos d'água servem como fontes desses microrganismos. Micobactérias são resistentes contra a maioria dos desinfetantes usuais e podem tolerar grandes variações de pH e temperatura, o que lhes permite a permanência nos sistemas de distribuição de água por longos períodos de tempo. O objetivo desse estudo foi isolar e identificar MNT de amostras de água e biofilmes na canalização de água de uma fazenda produtora de leite de búfalas na região de São Carlos-SP e também avaliar a qualidade da água da propriedade por meio da contagem de microrganismos heterotróficos, coliformes totais e termotolerantes e Staphylococcus aureus.Das amostras analisadas, 90,5% das amostras foram classificadas como fora dos padrões em relação a coliformes totais e 69% foram classificadas como fora dos padrões em relação a coliformes termotolerantes. Trinta e duas amostras (76,3%) de um total de 42(100%) apresentaram populações acima de 500 UFC/mL para bactérias heterotróficas. S.aureus foram isolados em 9 amostras (32,14%) de um total de 28(100%). De um total de 33 (100%)MNT isoladas nesse trabalho, 12 (36,36%) foram isoladas de biofilmes presentes nos encanamentos de água da propriedade. Esses isolados foram posteriormente identificados usando a técnica do PRA (PCR- restriction enzyme... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Environmental mycobacteria (EM) or nontuberculosis mycobacteria (NTMs) are implicated in a variety of human diseases. They are common saprophytes in all ecosystems, including water, soil, food, dust, and aerosols. In particular, EM species can multiply in numerous water sources, including wastewater, surface water, recreational water, ground water, and tap water. Piped water supplies are readily colonized by mycobacteria, and thus the biofilm in the water pipes may serve as a reservoir for these organisms. Mycobacteria are resistant against common disinfectants and can tolerate wide ranges of pH and temperature, which allows them to persist in drinking water systems for long periods of time.The aim of this study was to isolate and identify NTMs from water samples and biofilms from a dairy buffalo farm in São Carlos city, State of Sao Paulo and to evaluate the water quality of the farm using heterotrophic, faecal and total coliforms count plates. Results showed that 90.5% of the samples were considered as being out of the standards related to total coliforms and 69% of the samples were classified as being out of the standards related to faecal coliforms. From a total of 42 (100%) samples, 32 (76,3%) presented populations above of 500 CFU/mL for heterotrophic bacteria. S.aureus were isolated in 9 samples (32,14%) from a total of 28(100%).Out of 33(100%) NTMs isolated in this work, 12 (36,36) were isolated from biofilms in water pipes. These isolates were further identified using PRA (PCR- restriction enzyme analysis), as well as 16S rDNA and hsp65 DNA sequencing, and mycolic acids by thin layer chromatography (TLC). Twenty-eighty species (84,84%) were identified as M. gordonae (18 isolates from water samples and 10 from biofilms), 2 (2,06%) M. lentiflavum (biofilms), 2 (2,06%)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientadores: Pablo Agustin Vargas, Oslei Paes de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T06:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_AndreiaAparecidada_M.pdf: 1723407 bytes, checksum: 51af57adb05fc46240168f8b36dad6f5 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução: A Micobacteriose (MB) é uma das principais causas de mortes no mundo e sua incidência aumentou significativamente com o surgimento da AIDS. Objetivos: Os objetivos do presente trabalho foram comparar o padrão da resposta inflamatória nas MBs pulmonares (MBP) entre dois grupos (Grupo I: MBP; Grupo II: MBP/AIDS), e caracterizar as espécies de micobactérias através da técnica de PCR. Material e Métodos: Foram selecionados 16 casos de MBP para o grupo I e 59 casos para o grupo II, provenientes de pacientes autopsiados no Departamento de Patologia da FMUSP entre 1975 a 2004. Realizamos colorações de H&E e Ziehl-Neelsen (ZN) para o estudo histopatológico, e para o estudo imunohistoquímico utilizamos anticorpos Anti-BCG, CD4, CD8, CD15, CD20 e CD68. Selecionamos 20 casos de MBP distribuídos igualmente entre os dois grupos para a identificação das espécies M. tuberculosis e M. avium. Resultados: A média de idade do grupo I foi de 28,52 anos + 18, 21 anos e do grupo II foi de 36,2 anos + 10,36 anos. Histopatologicamente observamos o padrão de granulomas bem formados em 15 casos do grupo I, enquanto que no grupo II houve um predomínio de granulomas mal formados. A coloração de ZN foi positiva em 82,35% e 84,75% dos casos para o grupo I e grupo II, respectivamente. A imunohistoquímica para BCG foi positiva em todos os casos de ambos os grupos. O grupo I apresentou uma maior prevalência de linfócitos TCD4 (37,65%), seguido pelos linfócitos TCD8 (26,85%), macrófagos (23,71%), linfócitos B (7,31%) e neutrófilos (4,4%). Já no grupo II observamos um predomínio de macrófagos (50,28%), seguido por linfócitos TCD8 (23,75%), TCD4 (20,05%), linfócitos B (4,47%) e neutrófilos (1,45%). A espécie de M. tuberculosis foi identificada em 8 casos de ambos os grupos. A espécie M. avium foi identificada apenas em 01 caso do grupo II. Conclusão: Com o advento da AIDS houve uma mudança no perfil imunológico da MBP devido à depleção dos linfócitos TCD4. O anticorpo anti-BCG pode ser útil para identificar casos de MB que foram negativos para ZN. A Micobacteriose pulmonar foi causada principalmente por M. tuberculosis em ambos os grupos / Abstract: Introduction: Micobacteriosis (MB) is one of the main causes of deaths around the world and its incidence has been increased significantly with the emergence of the AIDS. Objectives: Our aims were to compare the pattern of the inflammatory response in the pulmonary MBs (PMB) between two groups (Group I: PMB; Group II: PMB/AIDS), and to identify the mycobacterium species using PCR technique.Material and Methods: 16 cases of PMB for group I and 59 cases for group II had been selected from autopsied patients in the Department of Pathology of the FMUSP between 1975 to 2004. We performed H&E and Ziehl-Neelsen (ZN) for the histopathology study, and for the immunohistochemical study we use Anti-BCG antibodies, CD4, CD8, CD15, CD20 and CD68. We select 20 cases of PMB distributed equally in the both groups for the identification of the M. tuberculosis and M. avium. Results: The mean age was 28,52 years + 18, 21 and 36,2 years + 10,36 for the group I and group II, respectively. The histopathology analysis showed well-organized granulomas in 15 cases of the group I, while the group II exhibited a predominance of the poorly organized granulomas. The ZN was positive in 82,35% of the cases in the group I and 84.75% in the group II. The immunohistochemistry for BCG was positive in all cases of the both groups. Group I presented a strong prevalence of TCD4 lymphocytes (37,65%), followed by TCD8 lymphocytes (26,85%), macrophages (23,71%), B lymphocytes (7,31%) and neutrophils (4,4%). The group II displayed a predominance of macrophages (50,28%), followed by TCD8 lymphocytes (23,75%), TCD4 lymphocytes (20,05%), B lymphocytes (4,47%) and neutrophils (1,45%). The species of M. tuberculosis was identified in 8 cases of both the groups. The species of M. avium was only found in one case of the group II. Conclusion: With the advent of the AIDS it had a change in the immunologic profile of the MBP because of the depletion of lymphocytes TCD4. The antibody anti-BCG can be useful to identify cases of PMB that had been negatives for ZN. The PMB was mainly caused by M. tuberculosis in both groups / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

Os complexos Mycobacterium chelonae M.abscessus e Mycobacterium fortuitum - M. peregrinum são compostos por espécies bacterianas de crescimento rápido e potencialmente patogênicas. Sua distribuição é ubíqua no ambiente, são resistentes a cloração da água e a sua replicação ocorre mesmo em condições de escassez de nutrientes. Estão envolvidos em casos de infecção pulmonar e extrapulmonar, e causam infecções em pacientes imunocomprometidos ou submetidos a rocedimentos cirúrgicos invasivos. Os objetivos do presente trabalho foram: confirmar através de testes fenotípicos e com as técnicas de PRA hsp65 e seqüenciamento do fragmento do rpoB, a identificação de micobactérias de crescimento rápido, incluídas nos complexos M. chelonae-M.abscessus e M. fortuitum-M.peregrinum. Foram incluídos no estudo os isolados provenientes de pacientes com dois ou mais isolamentos provenientes de sítio não estéril ou um isolamento de sítio estéril. O estudo de 38 isolados demonstrou que as provas fenotípicas disponíveis atualmente não permitem a identificação de todas as espécies de micobactérias de crescimento rápido já descritas na literatura. O PRA hsp65 possibilitou a identificação rápida e precisa de 63% das espécies de micobactérias e demonstrou um perfil compartilhado pelas espécies M. abscessus 2; M. bolletii 1 e M. massiliense 1. O seqüenciamento do gene rpoB confirmou a identificação das espécies citadas. Nossos resultados demonstraram que o PRA-hsp65 e o seqüenciamento do gene rpoB são ferramentas úteis para fornecer a identificação das espécies de micobactérias com mais acurácia. O uso dessas técnicas poderiam ser consideradas em laboratórios de referência para identificar Micobactérias de crescimento rápido uma vez que elas são patógenos emergentes implicados em surtos e isolados de pacientes em centros de referência para tratamento de tuberculose multirresistente. / Mycobacterium chelonae-M. abscessus and Mycobacterium fortuitum-M. peregrinum complexes are composed by bacterial species characterized by rapid grow and considered as potential pathogens. These microorganisms are ubiquitous in the environment, resistant to water treatment such as standard chlorination and are able to replicate even at poor nutrient conditions. They are related to lung and extralung infections in immune-compromised patients or those submitted to invasive surgical procedures. The aim of this study was to confirm the identification of Mycobacterium chelonae - M. abscessus and Mycobacterium fortuitum - M. peregrinum complexes, isolated from biological samples considering one or two repetitions if samples are originated from sterile or non-sterile site respectively. Phenotypic tests and molecular methods, PRA-hsp65 and rpoB gene sequencing, were applied to identify 38 strains previously isolated. Results demonstrated that available phenotypic tests did not allow the identification of all described fast growing Mycobacterium. The PRA of hsp65 gene confirmed the identification of 63% of the Mycobacterium studied, and demonstrated the band pattern shared by M. abscessus 2, M. bolletii and M. massiliensis. The rpoB gene sequencing confirmed the identification of the species cited. Our results demonstrated that PRA-hsp65 and rpoB gene sequencing are useful tools to provide a more accurate species identification of mycobacteria. The use of such techniques would be considered in reference laboratories to identify fast growing Mycobacterium species since they are considered emerging pathogens implicated in outbreaks and isolated from a patient in reference centers for treatment of multidrug resistant tuberculosis.

Os complexos Mycobacterium chelonae M.abscessus e Mycobacterium fortuitum - M. peregrinum são compostos por espécies bacterianas de crescimento rápido e potencialmente patogênicas. Sua distribuição é ubíqua no ambiente, são resistentes a cloração da água e a sua replicação ocorre mesmo em condições de escassez de nutrientes. Estão envolvidos em casos de infecção pulmonar e extrapulmonar, e causam infecções em pacientes imunocomprometidos ou submetidos a rocedimentos cirúrgicos invasivos. Os objetivos do presente trabalho foram: confirmar através de testes fenotípicos e com as técnicas de PRA hsp65 e seqüenciamento do fragmento do rpoB, a identificação de micobactérias de crescimento rápido, incluídas nos complexos M. chelonae-M.abscessus e M. fortuitum-M.peregrinum. Foram incluídos no estudo os isolados provenientes de pacientes com dois ou mais isolamentos provenientes de sítio não estéril ou um isolamento de sítio estéril. O estudo de 38 isolados demonstrou que as provas fenotípicas disponíveis atualmente não permitem a identificação de todas as espécies de micobactérias de crescimento rápido já descritas na literatura. O PRA hsp65 possibilitou a identificação rápida e precisa de 63% das espécies de micobactérias e demonstrou um perfil compartilhado pelas espécies M. abscessus 2; M. bolletii 1 e M. massiliense 1. O seqüenciamento do gene rpoB confirmou a identificação das espécies citadas. Nossos resultados demonstraram que o PRA-hsp65 e o seqüenciamento do gene rpoB são ferramentas úteis para fornecer a identificação das espécies de micobactérias com mais acurácia. O uso dessas técnicas poderiam ser consideradas em laboratórios de referência para identificar Micobactérias de crescimento rápido uma vez que elas são patógenos emergentes implicados em surtos e isolados de pacientes em centros de referência para tratamento de tuberculose multirresistente. / Mycobacterium chelonae-M. abscessus and Mycobacterium fortuitum-M. peregrinum complexes are composed by bacterial species characterized by rapid grow and considered as potential pathogens. These microorganisms are ubiquitous in the environment, resistant to water treatment such as standard chlorination and are able to replicate even at poor nutrient conditions. They are related to lung and extralung infections in immune-compromised patients or those submitted to invasive surgical procedures. The aim of this study was to confirm the identification of Mycobacterium chelonae - M. abscessus and Mycobacterium fortuitum - M. peregrinum complexes, isolated from biological samples considering one or two repetitions if samples are originated from sterile or non-sterile site respectively. Phenotypic tests and molecular methods, PRA-hsp65 and rpoB gene sequencing, were applied to identify 38 strains previously isolated. Results demonstrated that available phenotypic tests did not allow the identification of all described fast growing Mycobacterium. The PRA of hsp65 gene confirmed the identification of 63% of the Mycobacterium studied, and demonstrated the band pattern shared by M. abscessus 2, M. bolletii and M. massiliensis. The rpoB gene sequencing confirmed the identification of the species cited. Our results demonstrated that PRA-hsp65 and rpoB gene sequencing are useful tools to provide a more accurate species identification of mycobacteria. The use of such techniques would be considered in reference laboratories to identify fast growing Mycobacterium species since they are considered emerging pathogens implicated in outbreaks and isolated from a patient in reference centers for treatment of multidrug resistant tuberculosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:38:47Z : No. of bitstreams: 1 franco_mmj_me_botfmvz.pdf: 346897 bytes, checksum: a14c6f0c3027c35c0fd164665eee96a8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O leite constitui importante fonte de nutrientes para a alimentação humana. No entanto, também pode servir como veículo para disseminação de microorganismos patogênicos. A tuberculose e as micobacterioses estão entre as infecções mais debilitantes que acometem humanos e os animais, com evolução crônica e progressiva, tendo recrudescido sua incidência em vários países. Espécies de Mycobacterium sp. tem alta capacidade de sobrevivência em leite e seus subprodutos. O presente estudo investigou a ocorrência de micobactérias em amostras de leite bovino cru, de rebanhos do sudeste do estado de São Paulo, utilizando cultivo microbiológico nos meios de Lowenstein-Jensen e Stonebrink, seguido de tipificação molecular pelo teste de reação em cadeia pela polimerase com o uso de enzimas de restrição. Foram processadas 300 amostras, 100 de tanques de expansão individuais, 100 de tanques coletivos e 100 obtidas no comércio informal da região amostrada. Obteve-se isolamento de 15 diferentes espécies de Mycobacterium, a saber: M. bovis, M. gordonae, M. fortuitum, M. intracellulare, M. flavescens, M. duvalli, M. haemophilum, M. immunogenum, M. lentiflavum, M. mucogenicum, M. novocastrense, M. parafortuitum, M. smegmatis, M. terrae e M. vaccae. Os isolamentos ocorreram nas seguintes proporções: 9% das amostras de tanques individuais, 7% das amostras de tanques coletivos e 8% das amostras de leite informal. Não houve associação estatística entre a ocorrência de micobactérias com os fatores epidemiológicos considerados nas propriedades amostradas. Considerando o impacto das micobacterioses na saúde pública e animal, particularmente a tuberculose bovina, a prevenção da exposição da população ao risco destas infecções torna-se fundamental. A investigação da presença de micobactérias em leite pode contribuir na melhoria da segurança alimentar inerente ao produto / Milk represents an important source of nutrients for humans. However, it can also serve as a dissemination vehicle for pathogenic microorganisms. Tuberculosis and micobacteriosis are among the most debilitating diseases that affect humans and animals, being chronic and progressive, re-emerging its incidence in many countries. Mycobacterium sp. has high survivability in milk and its byproducts. The main objective of the study was to investigate the occurrence of mycobacteria in bovine raw milk samples from farms along southeast region of Sao Paulo state, using microbiological culture on Lowenstein-Jensen and Stonebrink media followed by molecular typification with polymerase chain reaction tests using restriction enzimes. Three hundred milk samples were processed, 100 from individual bulk tanks, 100 from collective bulk tanks and 100 obtained in informal trading of sampled region. Fifteen different isolates of Mycobacterium species were obtained: M. bovis, M. gordonae, M. fortuitum, M. intracellulare, M. flavescens, M. duvalli, M. haemophilum, M. immunogenum, M. lentiflavum, M. mucogenicum, M. novocastrense, M. parafortuitum, M. smegmatis, M. terrae and M. vaccae. Isolations occurred on following proportions: 9% of the individual bulk tanks samples, 7% of the collective bulk tanks samples and 8% of the informal trade milk samples. There was no statistical association between the occurrence of mycobacteria on samples with the epidemiological factors considered on sampled farms. Considering the impact of mycobacteriosis on public and animal health, especially bovine tuberculosis, is from main importance the prevention of public exposure to risk of these diseases. Investigative approaches of the presence of mycobacteria in raw milk may contribute to improvement of food security inherent in the product

As micobactérias de crescimento rápido causam infecções pulmonares, infecções relacionadas a traumas cutâneos e aos cuidados com a saúde. Ha um número reduzido de opções terapêuticas para o tratamento dessas infecções e os dados nacionais sobre os determinantes genéticos dessa resistência são escassos. Duas classes de antimicrobianos importantes no tratamento são as fluorquinolonas e os macrolídeos. Enquanto a maioria dos isolados do Grupo M. chelonae-abscessus apresenta resistência intrínseca às fluorquinolonas, e são sensíveis aos macrolídeos, a maioria dos isolados do Grupo M. fortuitum é sensível às fluorquinolonas e expressa RNA-metilases que impedem a ação dos macrolídeos. Os determinantes da resistência às fluorquinolonas conhecidos em micobactérias são mutações no gene gyrA e para os macrolídeos é a expressão de genes erm, que codificam RNA-metilases. Nos dois casos os determinantes tem localização cromossômica. Outros determinantes de resistência podem ter localização plasmidial, a exemplo do gene aacA4\'-8, presente em plasmídio do grupo de incompatibilidade IncP, detectado em M. abscessus, que codifica resistência à kanamicina e tobramicina. Neste estudo foram avaliados: a correlação entre à susceptibilidade ao ciprofloxacino e moxifloxacino e presença de mutações nos genes gyrA e gyrB; a susceptibilidade à claritromicina e presença de genes que codificam RNA-metilases; a presença de plasmídios do grupo de incompatibilidade IncP em diferentes espécies de micobactérias; a estabilidade e a transferência por conjugação do plasmídio pBRA-100; a relação clonal entre isolados que albergam plasmídios IncP e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de uma coleção de isolados da espécie M. abscessus. Cento e vinte e dois isolados dos Grupos M. abscessus e M. fortuitum foram analisados quanto às concentrações inibitórias mínimas, por microdiluição, utilizando-se o painel RAPMYCO®. As sequências parciais dos genes gyrA e gyrB e a presença de genes que codificam RNA-metilases foram determinadas em 69 e 59 desses isolados, respectivamente. A presença de plasmídios do grupo IncP foi determinada por PCR e os produtos de amplificação tiveram suas sequencias caracterizadas. A estabilidade do plasmídio pBRA-100 em Escherichia coli TOP10® foi avaliada realizando-se repiques sucessivos por 57 dias e semeadura em agar LB contendo kanamicina. A transferência horizontal foi avaliada por ensaio de conjugação com E. coli J53 resistente à azida sódica. Em M. abscessus não houve diferença entre as sequencias da região QRDR de GyrA e GyrB entre isolados sensíveis e resistentes ao ciprofloxacino. Em M. abscessus subsp. abscessus e M. abscessus subsp. bolletii todos os isolados testados apresentaram genes erm; entretanto não foi observada correlação entre a presença dos genes e resistência indutiva a claritromicina. O gene erm(45), descrito neste trabalho, foi detectado apenas em M. abscessus subsp. bolletii. Os ensaios de microdiluição evidenciaram que os antimicrobianos mais ativos contra M. abscessus subsp. abscessus foram amicacina (89%), tigeciclina (96%) e claritromicina (86%). Apenas nos dois isolados da espécie M. fortuitum resistentes ao ciprofloxacino foi detectada a substituição S83W na proteína GyrA. Trata-se de substituição ainda não descrita em micobactérias. Nao foi observada correlação entre substituições em GyrB e resistência ao ciprofloxacino ou moxifloxacino. O gene erm(46), descrito neste estudo, foi detectado em 65% dos isolados. Nos demais isolados foram detectados três outros genes: erm(47), erm(48) e erm(49), ainda nao descritos. Os plasmídios IncP foram detectados apenas em \"M. massiliense\" pertencentes a três grupos clonais distintos com índice de similaridade maior que 92%, quando analisados por ERIC-PCR. Houve sucesso na conjugação entre E. coli TOP-Myco e E. coli J53. Os ensaios de estabilidade evidenciaram que o plasmídio pBRA-100 é estável em E. coli com aproximadamente 100% da população bacteriana albergando o plasmídio após 57 subcultivos. / The rapidly growing mycobacteria cause lung infections, skin infections related to trauma and health care associated infections. There are a limited number of therapeutic options for treating these infections and national data on the genetic determinants of this resistance are scarce. Two major classes of antimicrobials used in treatment of these infections are macrolides and fluoroquinolones. While the majority of the isolates from M. chelonae-abscessus Group have intrinsic resistance to fluoroquinolones, and are sensitive to macrolides, most isolates from M. fortuitum Group are sensitive to fluoroquinolones and express RNA methylases that prevent the action of macrolides. The known fluoroquinolones resistance determinants in to mycobacteria are mutations in thegyrA gene and for macrolides the main determinant is the expression of erm genes which encode RNA methylases. In both cases the determinants are located at the chromosome. Other resistance determinants may have a plasmidial location, such as aacA4\'-8 gene, present in the pBRA100 plasmid detected in M. abscessus, which encodes resistance to kanamycin and tobramycin. This study evaluated the correlation between the susceptibility to ciprofloxacin and moxifloxacin and mutations in genes gyrA and gyrB; susceptibility to clarithromycin and the presence of RNA-methylases encodinggenes , the presence of plasmids of the incompatibility group IncP in different species mycobacteria; stability and conjugal transfer of plasmid pBRA-100; the clonal relationship between isolates harboring plasmids IncP and antimicrobial susceptibility profile of a collection of isolates of M. abscessus. One hundred and twenty-two isolates of M. chenolae-abscessus and M. fortuitum Groups were analyzed for their minimal inhibitory concentrations by microdilution, using the RAPMYCO® Panel. The partial sequences of the genes gyrA and gyrB and the presence of genes encoding RNA methylases were determined in 69 and 59 isolates, respectively. The presence of IncP group plasmids was determined by PCR and the sequence of PCR products were characterized. The stability of the pBRA-100 plasmid in Escherichia coli TOP10® was evaluated by performing successive subcultures for 57 days, and plating on LB agar containing kanamycin. The horizontal transfer was evaluated by conjugation with E. coli J53 a sodium azide resistant strain. In M. abscessus no differences between the sequences of the QRDR region of gyrA or gyrB among isolates susceptible and resistant to ciprofloxacin were observed. In M. abscessus subsp. abscessus and M. abscessus subsp. bolletii all isolates tested had erm genes; however there was no correlation between the presence of these genes and inducible resistance to clarithromycin. The erm(45), gene described in this paper, was only detected in M. abscessus subsp. bolletii. Microdilution tests showed that the most active antibiotics against M. abscessus subsp. abscessus were amikacin (89%), tigecycline (96%) and clarithromycin (86%). In only in two M. fortuitum isolates resistant to ciprofloxacin the amino acid substitution S83W was detected in GyrA. This substitution had not been described mycobacteria. No correlation was observed between substitutions in GyrB and resistance to ciprofloxacin or moxifloxacin. The erm(46) gene described in this study, was detected in 65% of the isolates. In the remaining isolates other three not yet described genes were detected: erm(47), erm(48) and erm(49). IncP plasmids were detected only in \"M. massiliense\" belonging to three clonal groups with at similarity index greater than 92% when analyzed by ERIC-PCR.We succeeded in conjugating E. coli TOP-Myco and E. coli J53. The stability tests showed that the plasmid pBRA-100 is stable in E. coli since approximately 100% of the bacterial population harbored the plasmid after 57 subcultures.

As micobactérias de crescimento rápido causam infecções pulmonares, infecções relacionadas a traumas cutâneos e aos cuidados com a saúde. Ha um número reduzido de opções terapêuticas para o tratamento dessas infecções e os dados nacionais sobre os determinantes genéticos dessa resistência são escassos. Duas classes de antimicrobianos importantes no tratamento são as fluorquinolonas e os macrolídeos. Enquanto a maioria dos isolados do Grupo M. chelonae-abscessus apresenta resistência intrínseca às fluorquinolonas, e são sensíveis aos macrolídeos, a maioria dos isolados do Grupo M. fortuitum é sensível às fluorquinolonas e expressa RNA-metilases que impedem a ação dos macrolídeos. Os determinantes da resistência às fluorquinolonas conhecidos em micobactérias são mutações no gene gyrA e para os macrolídeos é a expressão de genes erm, que codificam RNA-metilases. Nos dois casos os determinantes tem localização cromossômica. Outros determinantes de resistência podem ter localização plasmidial, a exemplo do gene aacA4\'-8, presente em plasmídio do grupo de incompatibilidade IncP, detectado em M. abscessus, que codifica resistência à kanamicina e tobramicina. Neste estudo foram avaliados: a correlação entre à susceptibilidade ao ciprofloxacino e moxifloxacino e presença de mutações nos genes gyrA e gyrB; a susceptibilidade à claritromicina e presença de genes que codificam RNA-metilases; a presença de plasmídios do grupo de incompatibilidade IncP em diferentes espécies de micobactérias; a estabilidade e a transferência por conjugação do plasmídio pBRA-100; a relação clonal entre isolados que albergam plasmídios IncP e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de uma coleção de isolados da espécie M. abscessus. Cento e vinte e dois isolados dos Grupos M. abscessus e M. fortuitum foram analisados quanto às concentrações inibitórias mínimas, por microdiluição, utilizando-se o painel RAPMYCO®. As sequências parciais dos genes gyrA e gyrB e a presença de genes que codificam RNA-metilases foram determinadas em 69 e 59 desses isolados, respectivamente. A presença de plasmídios do grupo IncP foi determinada por PCR e os produtos de amplificação tiveram suas sequencias caracterizadas. A estabilidade do plasmídio pBRA-100 em Escherichia coli TOP10® foi avaliada realizando-se repiques sucessivos por 57 dias e semeadura em agar LB contendo kanamicina. A transferência horizontal foi avaliada por ensaio de conjugação com E. coli J53 resistente à azida sódica. Em M. abscessus não houve diferença entre as sequencias da região QRDR de GyrA e GyrB entre isolados sensíveis e resistentes ao ciprofloxacino. Em M. abscessus subsp. abscessus e M. abscessus subsp. bolletii todos os isolados testados apresentaram genes erm; entretanto não foi observada correlação entre a presença dos genes e resistência indutiva a claritromicina. O gene erm(45), descrito neste trabalho, foi detectado apenas em M. abscessus subsp. bolletii. Os ensaios de microdiluição evidenciaram que os antimicrobianos mais ativos contra M. abscessus subsp. abscessus foram amicacina (89%), tigeciclina (96%) e claritromicina (86%). Apenas nos dois isolados da espécie M. fortuitum resistentes ao ciprofloxacino foi detectada a substituição S83W na proteína GyrA. Trata-se de substituição ainda não descrita em micobactérias. Nao foi observada correlação entre substituições em GyrB e resistência ao ciprofloxacino ou moxifloxacino. O gene erm(46), descrito neste estudo, foi detectado em 65% dos isolados. Nos demais isolados foram detectados três outros genes: erm(47), erm(48) e erm(49), ainda nao descritos. Os plasmídios IncP foram detectados apenas em \"M. massiliense\" pertencentes a três grupos clonais distintos com índice de similaridade maior que 92%, quando analisados por ERIC-PCR. Houve sucesso na conjugação entre E. coli TOP-Myco e E. coli J53. Os ensaios de estabilidade evidenciaram que o plasmídio pBRA-100 é estável em E. coli com aproximadamente 100% da população bacteriana albergando o plasmídio após 57 subcultivos. / The rapidly growing mycobacteria cause lung infections, skin infections related to trauma and health care associated infections. There are a limited number of therapeutic options for treating these infections and national data on the genetic determinants of this resistance are scarce. Two major classes of antimicrobials used in treatment of these infections are macrolides and fluoroquinolones. While the majority of the isolates from M. chelonae-abscessus Group have intrinsic resistance to fluoroquinolones, and are sensitive to macrolides, most isolates from M. fortuitum Group are sensitive to fluoroquinolones and express RNA methylases that prevent the action of macrolides. The known fluoroquinolones resistance determinants in to mycobacteria are mutations in thegyrA gene and for macrolides the main determinant is the expression of erm genes which encode RNA methylases. In both cases the determinants are located at the chromosome. Other resistance determinants may have a plasmidial location, such as aacA4\'-8 gene, present in the pBRA100 plasmid detected in M. abscessus, which encodes resistance to kanamycin and tobramycin. This study evaluated the correlation between the susceptibility to ciprofloxacin and moxifloxacin and mutations in genes gyrA and gyrB; susceptibility to clarithromycin and the presence of RNA-methylases encodinggenes , the presence of plasmids of the incompatibility group IncP in different species mycobacteria; stability and conjugal transfer of plasmid pBRA-100; the clonal relationship between isolates harboring plasmids IncP and antimicrobial susceptibility profile of a collection of isolates of M. abscessus. One hundred and twenty-two isolates of M. chenolae-abscessus and M. fortuitum Groups were analyzed for their minimal inhibitory concentrations by microdilution, using the RAPMYCO® Panel. The partial sequences of the genes gyrA and gyrB and the presence of genes encoding RNA methylases were determined in 69 and 59 isolates, respectively. The presence of IncP group plasmids was determined by PCR and the sequence of PCR products were characterized. The stability of the pBRA-100 plasmid in Escherichia coli TOP10® was evaluated by performing successive subcultures for 57 days, and plating on LB agar containing kanamycin. The horizontal transfer was evaluated by conjugation with E. coli J53 a sodium azide resistant strain. In M. abscessus no differences between the sequences of the QRDR region of gyrA or gyrB among isolates susceptible and resistant to ciprofloxacin were observed. In M. abscessus subsp. abscessus and M. abscessus subsp. bolletii all isolates tested had erm genes; however there was no correlation between the presence of these genes and inducible resistance to clarithromycin. The erm(45), gene described in this paper, was only detected in M. abscessus subsp. bolletii. Microdilution tests showed that the most active antibiotics against M. abscessus subsp. abscessus were amikacin (89%), tigecycline (96%) and clarithromycin (86%). In only in two M. fortuitum isolates resistant to ciprofloxacin the amino acid substitution S83W was detected in GyrA. This substitution had not been described mycobacteria. No correlation was observed between substitutions in GyrB and resistance to ciprofloxacin or moxifloxacin. The erm(46) gene described in this study, was detected in 65% of the isolates. In the remaining isolates other three not yet described genes were detected: erm(47), erm(48) and erm(49). IncP plasmids were detected only in \"M. massiliense\" belonging to three clonal groups with at similarity index greater than 92% when analyzed by ERIC-PCR.We succeeded in conjugating E. coli TOP-Myco and E. coli J53. The stability tests showed that the plasmid pBRA-100 is stable in E. coli since approximately 100% of the bacterial population harbored the plasmid after 57 subcultures.