Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-01Bitstream added on 2014-06-13T19:14:39Z : No. of bitstreams: 1 silva_rp_me_arafcf.pdf: 536845 bytes, checksum: 3ba525b127840312a55b9b1b1e2c7d26 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A paracoccidioidomicose é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas incluem desde formas localizadas até doença disseminada que pode evoluir para letalidade, dependendo provavelmente da relação entre a virulência do fungo, a resposta imunológica e a habilidade deste em interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro e invadir células epiteliais e mononucleares. P. brasiliensis tem a capacidade de invadir células epiteliais de linhagens humanas e animais, pode circunscrever os sinais celulares via actina e tubulina para invadir células normalmente não fagocíticas, assim como a citoqueratina parece desempenhar um importante papel. Neste projeto foi estudado o comportamento de P. brasiliensis quanto ao perfil de infecção aos queratinócitos e as células epiteliais pulmonares. Por outro lado, identificou-se a expressão diferencial de RNAm e de proteínas quando o fungo foi posto em contato com os dois tipos celulares, no intuito de caracterizar genes diferencialmente expressos e proteínas durante a infecção de P. brasiliensis. Verificou-se que a porcentagem de fungos que interagiu com os dois tipos celulares foi bastante semelhante. No entanto, o mecanismo de interação pode ser diferente, uma vez que as proteínas encontradas ligadas fracamente à parede do fungo apresentaram diferenças significativas no perfil eletroforético. O fungo após o contato com as células NOK aparentemente induziu alterações expressivas nas células, aparecendo prolongamentos celulares, fruto da provável alteração do citoesqueleto em que actina pode estar envolvida, principalmente em cinco e oito horas de infecção. Por outro lado, a técnica de RDA foi extremamente útil, fornecendo-nos uma visão global da situação da célula nas horas iniciais de contato... / Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. Clinical manifestations range from localized forms to disseminated disease that can progress to lethality, probably depending on the relationship among the virulence of the fungus, the immune response, the ability to interact with the surface structures and invade epithelial cells and mononuclear cells of the host. In order to study the steps involved from the initial contact of P. brasiliensis until the events of adhesion and invasion culminating in its entry into the cell. Using this model, it was demonstrated that not only P. brasiliensis has the ability to invade human and animal epithelial cells, as correlated for the first time, the degree of virulence with the adhesion ability of the isolates. Among the components of the cytoskeleton, P. brasiliensis probably using the actin and tubulin to invade cells, and cytokeratin seems to play an important role. In this study, we evaluated the behavior of P. brasiliensis and the profile of infection to keratinocytes and lung epithelial cells. Furthermore, we identified the differential expression of mRNA and protein when the fungus was placed in contact with the two cell types in order to characterize differentially expressed genes and proteins during P. brasiliensis infection. The percentage of fungi that interacted with the two cell types was very similar. However, the mechanism of interaction may be different, since the expressed proteins showed significant differences in electrophoretic profile. We analyzed two cDNA populations of P. brasiliensis, one obtained from contact between P. brasiliensis and pneumocytes, and other PB and keratinocytes. Our analysis identified transcripts related to 28 proteins involved in different biological processes. Transcripts were found with multiple functions... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Célia Maria de Almeida Soares / Banca: Gil Bernard / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico causador da paracoccidioidomicose, doença de comprometimento orgânico múltiplo e de evolução prolongada. A virulência de P. brasiliensis pode ser atenuada ou perdida após subseqüentes ciclos de subcultivos durante longos períodos e restabelecida após inoculações em animais ou pela passagem em cultura de células. Um aspecto importante na interação entre P.brasiliensis e seu hospedeiro é a habilidade do fungo em aderir aos componentes da matriz extracelular. O entendimento e identificação destas moléculas revestem-se de importância na descoberta de tratamentos eficientes para as micoses sistêmicas. Assim, neste trabalho, foram estudados 13 diferentes isolados de P. brasiliensis quanto ao padrão de infecção à cultura de células epiteliais pulmonares (A549), genotipagem com os iniciadores OPJ4, M13 e GACA4 empregando as técnicas de RAPD e PCR fingerprinting, bem como a verificação de proteínas expressas diferencialmente, e sua capacidade de ligação a componentes da matriz extracelular (MEC). Os diferentes isolados de P. brasiliensis apresentaram maior capacidade de infecção após reisolamento de células epiteliais. As amostras mais aderentes foram Pb18, Pb2508 e Pb2367 e as menos aderentes foram Pb2669, Pb2508 e Pb2367. Quanto aos genótipos, perfis diferenciais foram observados e correlação com padrão de infecção e distribuição geográfica foi observada para alguns isolados com dois dos iniciadores (OPJ4 e M13). A análise protéica dos extratos "cell free" de P. brasiliensis, por eletroforese bidimensional também forneceu perfis diferenciais entre as amostras subcultivadas e reisoladas e 62 ligantes de colágeno tipo I, 18 de laminina e 23 de fibronectina de um total de 420 proteínas expressas foram observados...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abastract: Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus, ethiologic agent of paracoccidioidomycosis, disease of multiple organic implications and prolonged evolution. P. brasiliensis virulence can be attenuated or lost after subsequent cycles of subcultive for during long periods and reestablished after by the passage in animals or in the epithelial cells culture. The success of colonization is a complex event, generally involving a ligand coded by the pathogen (adhesins) and a cell receptor. An important aspect in the interaction between P.brasiliensis and your host is the ability to adhere to matrix extracelular components (ECM). This fungal employs a series of strategies to colonize and to disseminate, including ligands. The understanding and identification of these molecules is very important in the discovery of efficient treatments for the systemic mycoses. The aim of this study was to investigate the P. brasiliensis infection pattern to the pulmonary epithelial cells (A549), the molecular typing by RAPD and PCR fingerprinting using, respectively, the primers OPJ4, M13 and GACA4, as well as the protein expressed and the ligand to ECM of the different strains. All P. brasiliensis isolates presented different capacity to adhere to epithelial cells. The most and less adherent isolates were respectively Pb18, Pb2508ar and Pb2367ar, and Pb2669ar, Pb113 e Pb2663ar. Regarding the genomic polymorphisms, differential RAPD's profiles and PCR fingerprinting were observed and a relative correlation with the infection pattern and geographical distribution could be observed. The profile of four P. brasiliensis "cell-free" extracts from subcultivated and reisolated strains was analysed by two-dimensional electrophoresis. Differentially expressed proteins were identified. Furthermore, a lot of ligands were observed to ECM components, 62 ligands to collagen type I, 23 to fibronectin...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Henrique Leonel Lenzi / Banca: Eduardo Bagagli / Resumo: A paracoccidioidomicose é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas incluem desde formas localizadas até doença disseminada que pode evoluir para letalidade, dependendo provavelmente da relação entre a virulência do fungo, a resposta imunológica e a habilidade deste em interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro e invadir células epiteliais e mononucleares. P. brasiliensis tem a capacidade de invadir células epiteliais de linhagens humanas e animais, pode circunscrever os sinais celulares via actina e tubulina para invadir células normalmente não fagocíticas, assim como a citoqueratina parece desempenhar um importante papel. Neste projeto foi estudado o comportamento de P. brasiliensis quanto ao perfil de infecção aos queratinócitos e as células epiteliais pulmonares. Por outro lado, identificou-se a expressão diferencial de RNAm e de proteínas quando o fungo foi posto em contato com os dois tipos celulares, no intuito de caracterizar genes diferencialmente expressos e proteínas durante a infecção de P. brasiliensis. Verificou-se que a porcentagem de fungos que interagiu com os dois tipos celulares foi bastante semelhante. No entanto, o mecanismo de interação pode ser diferente, uma vez que as proteínas encontradas ligadas fracamente à parede do fungo apresentaram diferenças significativas no perfil eletroforético. O fungo após o contato com as células NOK aparentemente induziu alterações expressivas nas células, aparecendo prolongamentos celulares, fruto da provável alteração do citoesqueleto em que actina pode estar envolvida, principalmente em cinco e oito horas de infecção. Por outro lado, a técnica de RDA foi extremamente útil, fornecendo-nos uma visão global da situação da célula nas horas iniciais de contato... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. Clinical manifestations range from localized forms to disseminated disease that can progress to lethality, probably depending on the relationship among the virulence of the fungus, the immune response, the ability to interact with the surface structures and invade epithelial cells and mononuclear cells of the host. In order to study the steps involved from the initial contact of P. brasiliensis until the events of adhesion and invasion culminating in its entry into the cell. Using this model, it was demonstrated that not only P. brasiliensis has the ability to invade human and animal epithelial cells, as correlated for the first time, the degree of virulence with the adhesion ability of the isolates. Among the components of the cytoskeleton, P. brasiliensis probably using the actin and tubulin to invade cells, and cytokeratin seems to play an important role. In this study, we evaluated the behavior of P. brasiliensis and the profile of infection to keratinocytes and lung epithelial cells. Furthermore, we identified the differential expression of mRNA and protein when the fungus was placed in contact with the two cell types in order to characterize differentially expressed genes and proteins during P. brasiliensis infection. The percentage of fungi that interacted with the two cell types was very similar. However, the mechanism of interaction may be different, since the expressed proteins showed significant differences in electrophoretic profile. We analyzed two cDNA populations of P. brasiliensis, one obtained from contact between P. brasiliensis and pneumocytes, and other PB and keratinocytes. Our analysis identified transcripts related to 28 proteins involved in different biological processes. Transcripts were found with multiple functions... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-24T21:01:09Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-11-25T15:41:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-25T15:41:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5) Previous issue date: 2006 / Nove espécies de fungos da Ordem Erysiphales foram estudadas em treze hospedeiros nativos do Bioma Cerrado. O material estudado foi proveniente tanto de áreas nativas quanto de arborização urbana e viveiro de mudas, e foi depositado na Coleção Micológica de Referência da Universidade de Brasília (CMRUnB). Foram propostas quatro espécies novas de Oidium sp. encontrados associados aos hospedeiros Astronium fraxinifolium e Myracrodruon urundeuva, Caryocar brasiliense, Pouteria ramiflora, e Pterogyne nitens. Uma espécie nova de Erysiphe foi encontrada parasitando duas espécies de Bauhinia. A espécie Phyllactinia paulowniae cf. foi encontrada parasitando Tabebuia avellanadae, T. impetiginosa, e T.serratifolia e descreveu-se pela primeira vez a fase anamórfica de Erysiphe alvimii encontrada sobre Bowdichia virgilioides e o primeiro relato de um membro da ordem Erysiphales na família Caryocaraceae. Para os gêneros botânicos Astronium, Brosimum, Myracrodruon, Pouteria, e Pterogyne relatou-se pela primeira vez o gênero Oidium. Erysiphe peruviana foi relatado pela primeira vez em T. ochracea, assim como o anamorfo Ovulariopsis em T.caraiba. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nine fungi species belonging to the Erysiphales were investigated here in association with thirteen native hosts from the Brazilian Cerrado. The specimes came from native areas, urban trees and nurseries and are stored at the Coleção Micológica de Referência da Universidade de Brasília (CMRUnB). Four new species of Oidium have been proposed having the following plants as hosts: Astronium fraxinifolium and Myracrodruon urundeuva, Caryocar brasiliense, Pouteria ramiflora, and Pterogyne nitens. A new species of Erysiphe was found growing in two Bauhinia species. Phyllactinia paulowniae cf. was found growing on Tabebuia avellanadae, T. impetiginosa, T.serratifolia. The anamorphic stage of Erysiphe alvimii was found for the first time in association with Bowdichia virgilioides and a first report of a member of the Erysiphales attacking a host in the Caryocaraceae family. Oidium sp. was found for the first time attacking members of the following genera: Astronium, Brosimum, Myracrodruon, Pouteria, and Pterogyne. In addition, Erysiphe peruviana was also reported on Tabebuia ochracea, as well as the anamorph Ovulariopsis on T.caraiba.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T13:37:00Z No. of bitstreams: 1 2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-02T02:17:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-02T02:17:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5) Previous issue date: 2008-10-30 / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, a micose sistêmica com maior prevalência na América Latina. A patogenia deste fungo parece estar diretamente ligada ao processo dimórfico. A expressão diferencial de genes é essencial em diversos processos biológicos como resposta ao estresse, diferenciação celular, interação hospedeiro-patógeno, entre outros. P. brasiliensis, é capaz de sobreviver e se replicar no interior dos macrófagos do hospedeiro. Nesse sentido, genes ortólogos a potenciais fatores de virulência de outros microrganismos patogênicos são encontrados em P. brasiliensis. Nesse contexto, esse trabalho analisa a regulação do gene quitina sintase 4 (CHS4), responsável pela polimerização da quitina, um polímero que atua na biosíntese da parede celular. Visando a análise da função promotora do gene CHS4, um fragmento de DNA contendo a região promotora deste gene foi clonado e transformado em A. nidulans utilizando o gene repórter lacZ. Os transformantes foram cultivados em meios contendo diferentes fontes de carbono. Os resultados sugerem que o precursor de quitina, Nacetilglicosamina, ativa o promotor de CHS4. Também foi realizada uma busca por regiões consenso a sítios de ligação para fatores de transcrição. Foram encontrados vários sítios para fatores de transcrição diversos e selecionado uma região que continha um elemento consenso ao sítio de ligação a PacC e dois sítios consenso para STRE. Para essa região foi sintetizado um oligonucleotídeo utilizado como sonda para o experimento de retardo de mobilidade eletroforética (EMSA). Os resultados do EMSA sugerem uma interação DNA-proteína específica em ambas as fases e outra interação micélio específica. Esses resultados nos mostram que a região utilizada como sonda pode estar atuando na regulação transcricional do gene CHS4, mas ainda são dados insuficientes para determinar qual proteína está interagindo com a região promotora deste gene. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of the paracoccidioidomycosis, the major systematic mycosis prevalent in Latin America. This fungus is able to survive and replicate in the interior of the host macrophages, and its pathogenesis seems to be directly correlated with its dimorphism for which differential gene expression is essential. The differential gene expression is also crucial in different biological processes such as stress-response, cellular differentiation, host-pathogen interactions, and others. Furthermore, orthologs genes to potential virulence factors in other pathological microorganisms are found in P. brasiliensis. In this context, this work analyses the regulation of chitin synthase 4 (CHS4), responsible for the polymerization of chitin - a polymer which acts in the biosynthesis of the cellular wall. In the attempt to analyse the promoter function of the CHS4 gene, a DNA fragment containing the promoter region of this gene was cloned and transformed in Aspergillus nidulans, using lacZ as the gene reporter. The transformants were cultivated in broth containing different sources of carbon. The results from these experiments suggest that the chitin precursor, N-acetylglucosamine, activates the promoter of CHS4 gene. A search for consensus regions to transcriptional factors’ binding sites was also performed and assorted sites for diverse transcriptional factors were found. A region which contained a consensus element to the binding site of PacC and two consensus sites for STRE was selected for further investigation. An oligonucleotide, for this region, was synthesized to be used as a probe for the electro mobility shift assay (EMSA). The results suggest two specific protein- DNA interactions, one in both phases and another peculiar to the mycelium phase. This would suggest the region used as a probe may act in the transcriptional regulation of the CHS4 gene; nevertheless the results so far are insufficient to determine which protein is interacting with the promoter region.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-10T18:11:30Z No. of bitstreams: 1 2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T13:47:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T13:47:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5) Previous issue date: 2009 / Paracoccidioides brasiliensis, o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), é um fungo termodimórfico que cresce como micélio à temperatura ambiente e se diferencia para levedura em culturas a 37°C e no tecido do hospedeiro. A transição dimórfica de P. brasiliensis está associada com alterações na parede celular. Quando o fungo se diferencia de micélio para levedura, o conteúdo de quitina é aumentado e a composição de glicana é alterada, reduzindo o conteúdo de 1,3-b-glicana e aumentando o conteúdo de 1,3-a-glicana. Em P. brasiliensis, um homólogo do gene de 1,3-b-glicana sintase (Pbfks1) e seis genes de quitina sintase (Pbchs1, Pbchs2, Pbchs3, Pbchs4, Pbchs5 e Pbchs6) foram identificados. Em nosso estudo, nós investigamos a região promotora dos genes Pbfks1 e Pbchs4. Por meio de ensaio de retardo da mobilidade eletroforética (EMSA), analisamos sondas referentes aos promotores desses dois genes e identificamos prováveis sítios regulatórios. A análise da região promotora do gene Pbfks1 indica um TATA Box que pode ser funcional, e sugerimos que o promotor do gene Pbchs4 possa estar sendo regulado pelo elemento de resposta ao estresse (STRE). Além disso, demonstramos também que o domínio de ligação ao DNA de PacC de P. brasiliensis reconhece um sítio descrito para PacC de A. nidulans, porém, a proteína não reconheceu uma variação na seqüência consenso presente no promotor do gene Pbchs4. Observamos que uma sonda referente ao promotor do gene Pbchs4 que contém um sítio para o fator de transcrição CreA não interage com o domínio de ligação ao DNA de CreA de Humicola grisea, mas apresenta interações DNA-proteína específicas nas fases de micélio e levedura. Adicionalmente, resultados de RT-PCR em tempo real revelaram que o gene Pbfks1 é mais expresso em meio com acetato do que em meio com glicose como fonte de carbono. Portanto, o trabalho desenvolvido em nosso grupo de pesquisa fornece dados que podem contribuir para a compreensão da regulação dos promotores dos genes 1,3-b-glicana sintase e quitina sintase 4 em P. brasiliensis. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Paracoccidioides brasiliensis, the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), is a thermal dimorphic fungus which grows as a mycelium at room temperature and differentiates to yeast in cultures at 37°C and in the host tissue. The dimorphic transition of P. brasiliensis is associated with changes in the cell wall. When the fungus differentiates from mycelium to yeast, the chitin content is increased and the composition of glucan changes, reducing the 1,3-β-glucan content and enhancing the content of 1,3-α-glucan. In P. Brasiliensis, one homologous of 1,3-β-glucan synthase gene (Pbfks1) and six genes of chitin synthase (Pbchs1, Pbchs2, Pbchs3, Pbchs4, Pbchs5 e Pbchs6) were identified. In our study, we investigated the promoter region of Pbfks1 and Pbchs4 genes. By means of Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA), we analyzed probes referring to promoters of these two genes and we identified probable regulatory sites. The analysis of the promoter region of the Pbfks1 gene indicates one TATA Box that could be functional, and we propose that the Pbchs4 promoter may be regulated by the stress responsive elements (STRE). Furthermore, we also demonstrated that the PacC DNA binding-domain of P. brasiliensis recognizes one A. nidulans’s PacC described site, nevertheless, the protein didn’t recognize one variation in the consensus sequence in the Pbchs4 promoter. We observed one Pbchs4 promoter probe with one CreA transcription factor site doesn’t interact with the CreA DNA bind-domain of Humicola grisea, but shows specific DNA-protein interactions in mycelium and yeast phases. Additionally, results of Real Time RT-PCR disclosed that Pbfks1 gene is more expressed in medium with acetate then in medium with glucose as a carbon source. Therefore, the work developed in our research group provides data which may contribute for the comprehension of 1,3-β-glucan synthase and chitin synthase 4 promoters’ regulation in P. brasiliensis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2007. / Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-06-30T18:34:21Z No. of bitstreams: 1 2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-07-03T21:39:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-03T21:39:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5) / A Cromomicose é uma micose crônica, supurativa e granulomatosa, que tem distribuição cosmopolita. O Fonsecaea pedrosoi é o principal agente etiológico da cromomicose no mundo. A infecção inicia-se a partir de um trauma com a implantação no tecido subcutâneo de conídios e fragmentos de hifas do fungo, causando a lesão inicial. No hospedeiro essas estruturas do fungo se diferenciam em células escleróticas, estabelecendo a doença. Em função da importância do estabelecimento de uma resposta imune celular eficiente através da interação entre as células do sistema imunológico com os componentes da parede celular dos fungos, que são capazes de promover a ativação destas, o objetivo do presente trabalho foi analisar a influência das frações da parede celular do Fonsecaea pedrosoi na ativação dos fagócitos peritoneais obtidos de camundongos. Nossos resultados revelaram que após 4 horas da inoculação das preparações houve a migração predominante de neutrófilos, e com 72 horas a migração de macrófagos. As frações F2 e o fungo inativado estimularam a migração de linfócitos B predominantemente e os fagócitos de 4 horas produziram óxido nítrico espontaneamente. A fração F1 induziu uma alta produção de IL-12 nas células que migraram após 72 horas da inoculação das frações. O fungo inativado e a fração F2 induziram a produção de IL-10. A estimulação prévia das células com a fração F2 diminuiu o índice de fagocitose e aumentou a produção de IL-10. Nossos resultados sugerem que a fração F2 modula a resposta imunológica para Th2 enquanto que a fração F1 modula a resposta imunológica para Th1 na cromomicose. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chromoblastomycosis is a chronic suppurative granulomatous mycosis that exists all around the world. The Fonsecaea pedrosoi is the most frequent etiologic agent in the world. The infection begins with a trauma and the implantation of conidia or hyphae fragments in the subcutaneous tissue producing the initial lesion. Inside the host, a fungus structure differentiates into sclerotic forms allowing the establishment of the disease. Considering the importance of the establishment of an efficient immune cellular response, through the interaction between the cells of the immunologic system with the components of the fungus wall, the objective of the present work was to analyze the influence of the fractions from the Fonsecaea pedrosoi cellular wall in the activation of murine peritoneal phagocytes extracted from mice. Our result demonstrates that after 4 hours after of the inoculation of the solutions the migration was constituted predominantly by neutrophils, and after 72 hours predominantly by macrophages. The F2 fractions and the inactive fungus stimulate predominantly the migration of B lymphocytes and the four hours phagocytes produced spontaneously nitric oxide. The F1 fraction induced the high production of IL-12 in the cells that migrated after 72 hours of the fractions inoculation. The inactive fungus and the F2 fraction induced the IL-10 production. Cells previously stimulated with the F2 fraction resulted in a decreased phagocytosis index and increased the IL-10 production. Our results suggest that, in chromoblastomycosis, the F2 fraction modulates the immunological Th2 type response while the F1 fraction modulates the immunological Th1 type response.

ROBERTO, Ana Emília de Medeiros, também é conhecida em citações bibliográficas por: MEDEIROS, A. E. R. / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-11T20:48:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:51:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / CAPES / Observa-se um contínuo aumento na resistência de espécies de Candida aos antifúngicos disponíveis. Faz-se necessário que o diagnóstico seja oportuno e verossímil, associado à indicação terapêutica que é corretamente direcionada a partir de testes de sensibilidade antifúngica in vitro. A utilização da espectrometria de massas através da técnica de Matrix Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) que reduz o tempo de diagnóstico em comparação com métodos de rotina já é uma realidade, contudo estudos apontam a capacidade dessa metodologia em identificar cepas resistentes pela detecção de mudanças mínimas no perfil proteíco da cepa após exposição ao fármaco. Assim, objetivou-se diagnosticar, em pacientes internados em UTI, isolados clínicos do complexo Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis) através da técnica proteômica Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) e correlacionar sua sensibilidade/resistência às equinocandinas com mudanças no espectro protéico. Trata-se de uma pesquisa experimental analítica com abordagem qualitativa. Amostras sanguíneas venosas foram coletadas entre agosto de 2014 e julho de 2015, a partir de pacientes internados em UTI, foram observadas ao exame direto e colhidas em frascos de hemocultura. As leveduras isoladas foram identificadas por MALDI-TOF MS e testes de sensibilidade antifúngica foram realizados através do CLSI frente a anidulafungina, caspofungina e micafungina. A detecção na resistência através da mudança mínima do plano espectral protéico obtida no MALDI-TOF MS, foi possível após o cruzamento de cada concentração do espectro com uma das duas concentrações extremas, máxima ou nula, onde formou-se uma matriz a partir do Índice de Correlação do Composto (ICC) utilizado para gerar mapas de calor. Foram diagnosticados 44 casos de candidemia, sendo 26 por Candida parapsilosis, dez C. albicans, dois casos por C. metapsilosis, dois C. orthopsilosis, dois por C. tropicalis, um C. haemulonii e um Candida sp. Vinte e oito (93,2%) isolados do complexo Candida parapsilosis foram sensíveis as equinocandinas de acordo com CLSI e 24 (79,9%) foram sensíveis de acordo com MALDI-TOF. A Concentração Inibitória Mínima e a Mudança Mínima no Perfil Protéico obtidos através do CLSI e MALDI-TOF, apresentaram concordância de 91,6%, 96,6% e 98,3% para anidulafungina, caspofungina e micafungina, respectivamente, frente os isolados de Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS é capaz de determinar o breakpoint de uma levedura clínica após 15 horas de exposição ao antifúngico e permite predizer a melhor escolha antifúngica para pacientes críticos com candidemia. / Recently, there is an increase in resistance of Candida species to antifungal drugs available. It is necessary that the diagnosis is timely and credible associated with therapeutic indication that is directed from in vitro antifungal susceptibility testing. The use of mass spectrometry through the technique of Matrix Assisted Laser Desorption / Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS), which reduces the time of diagnosis as compared to routine methods is already a reality, however pointed studies this methodology can identify resistant strains by detecting minimal changes in protein profile of strain after exposure. Thus, the objective was to diagnose in ICU patients, clinical isolates of complex Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis) through proteomic technique Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) and correlate their sensitivity/resistance to echinocandins with changes in the protein spectrum. It is an analytical experimental research with qualitative approach. Venous blood samples were collected between August 2014 and July 2015, from ICU patients were observed in the direct examination and harvested in blood culture bottles. The yeasts were identified by MALDI-TOF MS and sensitivity tests were performed using CLSI antifungal and MALDI-TOF MS, compared to anidulafungin, caspofungin and micafungin. After crossing every spectrum concentration with one of the two extreme concentrations, maximum or zero, formed the matrix of Compound Correlation Index (ICC) used to generate heat maps. 44 cases of candidemia were diagnosed, 26 by Candida parapsilosis ten C. albicans, two cases of C. metapsilosis two C. orthopsilosis two by C. tropicalis, a C. haemulonii and one case of Candida sp. Twenty-eight (93.2%) isolates of Candida parapsilosis complex echinocandins according to CLSI and 24 were sensitive (79.9%) were sensitive according to MALDI-TOF. The Minimum Inhibitory Concentration and Minimum Change in Protein Profile obtained by CLSI and MALDI-TOF showed concordance of 91.6%, 96.6% and 98.3% for anidulafungin, caspofungin and micafungin, respectively, compared isolates Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS is able to determine the breakpoint of a clinical yeast after 15 hours of exposure to antifungal and allows predicting the best antifungal choice for critically ill patients with candidemia

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-28T20:26:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T22:05:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-05T22:05:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / CAPES / O Cryptococcus neoformans, levedura capsulada, acomete geralmente de forma disseminada imunossuprimidos, com predileção pelo sistema nervoso central. Os glicoconjugados da cápsula podem ser evidenciados por marcação com lectinas, que possuem especificidade a diversos carboidratos distintos. As lectinas desempenham atividades biológicas, e desta forma podem reconhecer padrões de expressão de glicoproteínas relacionadas a processos patológicos e maturação celular. Ainda nos processos patológicos, a capacidade desta levedura na formação do biofilme indica maior possibilidade de dano ao hospedeiro. Assim, essa pesquisa objetivou definir o perfil de virulência de C. neoformans quanto aos carboidratos da parede celular, capacidade de formação de biofilme e avaliação do tratamento da criptococose experimental. Foram avaliados 30 isolados utilizando as lectinas ConA, WGA, UEA-I e PNA conjugadas a flurosceína. Para formação do biofilme foi utilizado meio mínimo para o crescimento do fungo e os resultados foram avaliados visualmente. A criptococose experimental foi reproduzida com uma cepa capaz de produzir biofilme, segundo perfil in vitro, sendo tratado com anfotericina B. A lectina wheat germ agglutinin (WGA) foi aquela mais reconhecida pelos carboidratos. Todos os isolados formaram biofilme sem variação de intensidade. Após o tratamento, foi demonstrada a resistência a terapêutica antifúngica. Portanto, verifica-se que a composição da superfície com maior expressão de N-acetil-glicosamina em Cryptococcus contribui para formação do biofilme, proporcionando maior resistência à anfotericina B no tratamento experimental. / Cryptococcus neoformans encapsulated yeast, usually affects immunosuppressed disseminated form, with a predilection for the central nervous system. The glycoconjugates of the capsule may be evidenced by staining with lectins that have specificity to several different carbohydrates. The lectins play biological activities, and therefore can recognize the expression patterns of pathological processes related to the glycoproteins and cell maturation. Even in pathological processes, the ability of this strain in biofilm formation indicates a higher possibility of damage to the host. Thus, this research aimed to establish the profile of virulence of C. neoformans as the cell wall carbohydrates, the ability of biofilm formation and evaluation of the treatment of experimental cryptococcosis. 30 isolates were evaluated using ConA, WGA, UEA - I and PNA lectins conjugated to fluorescein. For biofilm formation was minimal medium used for growth of the fungus and the results were evaluated visually. The experimental cryptococcosis was reproduced with a strain able to produce biofilm, second profile in vitro, and treatment with amphotericin B. The lectin wheat germ agglutinin (WGA) was the most recognized by carbohydrates. All isolates formed biofilm with no intensity variation. After treatment was demonstrated resistance to antifungal therapy. Therefore, it is seen that the surface composition with increased expression of N-acetyl-glucosamine on Cryptococcus contributes to biofilm formation, providing greater resistance to amphotericin B in the experimental treatment.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Márcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Banca: Regina Célia Candido / Resumo: Cryptococcus neoformans é levedura capsulada saprobiota que acomete principalmente indivíduos com o sistema imunológico comprometido. Seu habitat está relacionado com algumas espécies de árvores, madeira em decomposição e fezes de pássaros, em especial de pombos do gênero Columba livia. Nas grandes cidades estas aves vêm causando diversos problemas devido a sua multiplicação intensa. Desta maneira, medidas saneantes serão de grande auxílio para controlar a população desta levedura. Assim, este estudo teve como objetivo reidentificar 67 isolados de C. neoformans de fontes ambientais e caracterizá-los quanto ao seu genótipo e perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B, cetoconazol, itraconazol e fluconazol, utilizando o método da difusão em ágar seguindo o documento M44A e determinando a concentação inibitória mínima frente a fluconazol pelo método M27-A2, ambos preconizados pelo CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). Por outro lado, verificar o efeito antifúngico de extratos de plantas e sua atividade saneante em fezes de pombos comprovadamente contaminadas com isolado ATCC 90012 de C. neoformans. Todos isolados foram Mating Type α e tipo VNI. Pelo método de microdiluição, 21% (14/67) dos isolados ambientais apresentaram sensibilidade diminuída ao fluconazol com CIM de 16 μg/mL e mais de 50% (34/67) apresentaram CIM de 8 μg/mL.O extrato de Alibertia macrophylla apresentou efeito saneante com índice de eficiência de mais de 80% após 24 horas, na grande maioria dos isolados de C. neoformans. Este extrato foi estável... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryptococcus neoformans is a saprobiote capsuled yeast that proliferates mainly in individuals who have the immunologic system compromised. It natural habitat is related to some species of trees, decaying wood and bird excrement, in special Columba livia doves. In big cities, these birds have caused many problems due to its intense proliferation and the cleaning measures will be of great help in controlling this yeast. The aim of this study was to re-identify 67 C. neoformans isolates and characterize them according to their genotype and susceptibility to antifungal amphotericin B, cetoconazole, itraconazole e fluconazole, using the method of agar diffusion following the M44A document and determining the minimum inhibitory concentration to fluconazole by method M27-A2, both recommended by the CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). On the other hand, the verification of the effect of plant extracts e and their cleaning activity on dove excrement previously contaminated with isolate ATCC 90012 of C. neoformans. All the isolates were Mating Type α and VNI. For the microdilution method, 21% (14/67) of the environmental isolates showed decreased susceptibility to fluconazole with MIC of 16 mg/mL and more than 50% (34/67) had MICs of 8 mg/mL. The extract of Alibertia macrophylla presented clean effect with index of efficiency of 80% after 24 hours, in the great majority of C. neoformans isolates. This extract was stable to the light incidence, to the heat and variation of pH. Our results are of great use for the development and utilization of active natural compounds in the fight against C. neoformans from environmental and the study of other variables are necessary for the viability of its use as a domestic cleaner. / Doutor