Orientador: Henrique Ferreira / Coorientadora: Isabel Cristiane da Silva / Banca: Alessandra Alves de Souza / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Resumo: O agente etiológico do cancro cítrico, Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri), infecta todas as variedades de citros de interesse econômico ao redor do mundo. Sem controle químico eficaz, a única forma aconselhada de se evitar a propagação da doença é a erradicação de plantas. Essa prática, porém, não é aceita pelos citricultores e demanda grandes investimentos em inspeção de pomares por pessoal treinado no reconhecimento da doença. Nos últimos anos, a legislação para controle do cancro cítrico tem sofrido afrouxamentos que resultaram em um progressivo aumento da doença no maior produtor mundial de laranja, o estado de São Paulo. Esta pesquisa teve como objetivo estender um projeto que vem sendo realizado em nosso grupo que é o desenvolvimento de substâncias inibidoras de crescimento de X. citri (galatos de alquila). No presente trabalho, quatro novas moléculas, originadas a partir de galatos de alquila - galatos de alquila acetilados - demonstraram inibir o crescimento de X.citri de modo similar ao da canamicina (controle positivo), observado pelo ensaio Resazurin Microtiter Assay Plate (REMA). Em observações com microscopia de fluorescência e utilizando-se uma linhagem de X.citri com septo marcado, a localização da proteína GFP-ZapA foi rapidamente perturbada após o tratamento, sugerindo que as substâncias poderiam ter a maquinaria de divisão celular como alvo. Entretanto, em ensaios bioquímicos com FtsZ purificada de X. citri na presença dos galatos de alquila acetilados, verificou-se que essas drogas têm pouca ou nenhuma ação na sedimentação e na inibição da atividade GTPásica de FtsZ, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico) / Abstract: Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri) is the etiological agent of citrus canker, a disease that affects all the varieties of citrus of economic importance around the world. Currently, eradication of infected trees constitutes the only effective practice to control the spread of X. citri. This disease has enormous social and economic impact in the orange juice production industry, especially concerning the difficulties to inspect plantations and to persuade growers to eliminate foci of the disease. Regarding this, recent relaxations in the policies of eradication within the state of São Paulo, the main orange producer in the world, indicate that citrus canker may become endemic in this area. The current proposal aims to extend the work that is being done in our research group, developing inhibitors of X. citri growth (alkyl gallates). In this study, four new molecules originated from alkyl gallates - acetylated alkyl gallates - were able to inhibit the X.citri growth, similarly to kanamycin (positive control), assessed by Resazurin Microtiter Plate Assay (REMA). In fluorescent microscopy assay, using a mutant strain of X. citri labeled with green fluorescent protein (GFP) in ZapA, the drugs were able to disrupt the location of septa, suggesting that the substances may have the cell division machinery as a target. However, in biochemical assays using FtsZ purified from X. citri in the presence of the drugs, the drugs showed low or no effect on the sedimentation or GTPase activity of FtsZ. Instead of this, they showed reasonable effect on membrane permeability and probably ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Andrei Moroz / Banca: Maria de Lourdes R. da Cunha / Banca: Flávia Karina Delella / Resumo: As infecções por MRSA podem ser consideradas um problema de saúde pública, com alta taxa de mortalidade. Desta maneira, com a ampla disseminação do MRSA é necessário adotar programas de vigilância que avaliem o perfil de sensibilidade dos isolados, além estimular o desenvolvimento tecnológico objetivando métodos mais rápidos e confiáveis que antecipem a escolha da terapêutica mais adequada propondo métodos de prevenção e vacinas para o avanço no controle da infecção hospitalar. Diante deste desafio este projeto tem como objetivo a caracterização de anticorpos monoclonais anti-MRSA obtidos por protocolos de imunização clássica e a obtenção de outros anticorpos com método de imunização subtrativa. Foram utilizados 10 camundongos Balb/C que receberam como tolerógeno proteínas de cepas de E.coli e MSSA associados a 100mg/kg/d de ciclofosfamida (CFM) em D1, D2,D3,D15, D16 e D17. Em D+31, 38, 45 e 54 foram feitas injeções de 50μg de proteínas da cepa de MRSA, anteriormente genotipada e confirmada a presença do gene mec A. Foram preparados extratos antigênicos por 3 métodos diferentes: fervura, morte à temperatura ambiente seguida de filtração 0,22μm e morte à temperatura ambiente e exposição ao banho ultrassônico. Pelo método de fervura obteve-se em média 5,31mg/mL enquanto que as técnica de morte a TA ambiente, filtrado ou submetido ao banho ultrassônico obtiveram em média uma concentração protéica duas vezes maior indicando a existência de proteínas termolábeis. Foi identificado uma taxa de mortalidade de 30% nos animais provavelmente associado ao uso da CFM. Foram realizadas 7 fusões celulares com a construção de 4.402 híbridos com uma taxa de eficiência de fusão de 2,42 vezes menor do que aquela obtida nos protocolos de imunização clássica. Dois hibridomas foram escolhidos para a clonagem pelo método de diluição limitante, cuja caracterização imunoquímica identifica... / Abstract: The MRSA infections are considered a public health problem, with a high mortality rate. Thus, with the wide spread of MRSA it's necessary to embrace monitoring programs to evaluate the sensitivity profile of the isolates, as well as to stimulate technological development aiming faster and more reliable methods to anticipate the choice of the most appropriate therapy by proposing methods of prevention and vaccines to advance the control of hospital infections. Therefore, this study aims the characterization of anti-MRSA monoclonal antibodies obtained by classical immunization protocols and the obtaining of other antibodies with the subtractive immunization method. We used 10 Balb/C mice that received as tolerogen proteins of strains of E. coli and MSSA associated with 100mg/kg/d of cyclophosphamide (Cy) in D1, D2, D3, D 15, D16 and D17. On D+31, 38, 45 and 54 we made injections of 50 μg of the MRSA strain protein, previously genotyped and with confirmed presence of mec A. We prepared antigenic extracts by 3 different methods: boiling, death at ambient temperature followed by 0.22 μm filtration and death at ambient temperature and exposure to ultrasonic wash.The boiling method resulted on average 5.31mg/mL, whereas the technique of death at ambient temperature, filtered or exposed to ultrasonic wash culminated on average in a protein concentration two times higher, indicating the existence of heat labile proteins.We identified a mortality rate of 30% in the animals, which was probably associated with the use of Cy. We performed seven cellular fusions with the construction of 4.402 hybrids with a fusion efficiency rate of 2.42 times smaller than that obtained in protocols of classical immunization.We selected two hybridomas for cloning by the limiting dilution method, whose immunochemical characterization identifies bands of 30 and 50 kDa. The proteomic analysis of protein bands that was recognized by the two clones confirm that the ... / Mestre

Orientador: Henrique Ferreira / Resumo: Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri) é o agente etiológico do cancro cítrico, uma doença que ataca todas as variedades comerciais de citros, causando prejuízos econômicos em vários países produtores. Em áreas endêmicas, o cancro cítrico é controlado principalmente por aplicação de bactericidas cúpricos. Compostos alternativos para controlar a doença são desejáveis, pois os bactericidas cúpricos causam impactos ambientais e podem induzir resistência em X. citri. Um passo importante para a descoberta e avaliação de novos compostos para controle de X. citri é a caracterização de genes/proteínas que são alvos em potencial. O gene mreB codifica para uma proteína que é uma actina bacteriana com papel-chave na determinação da morfologia celular. Esses genes foram caracterizados em algumas bactérias, nas quais foi demonstrado que são essenciais. Não existem relatos da caracterização de mreB em X. citri. A proteína MreB e a actina tem baixa similaridade de sequência, apesar de serem homólogos funcionais. Essas características fazem de MreB um alvo interessante para novos compostos antibacterianos. Os objetivos deste trabalho foram descrever a função e determinar a localização subcelular de MreB em X. citri. Para estudar a função de MreB, duas estratégias foram usadas para deletar o gene mreB em X. citri. Entretanto, não foi possível obter mutantes deletados para mreB nem na ausência, nem na presença de complementação. Esse resultado evidenciou que mreB é essencial para X. citri e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri) is the etiological agent of Citrus canker, a widespread plant disease that attacks all varieties of commercial citrus plants, causing economic loss worldwide. In endemic areas, citrus canker is controlled mainly by the application of cupric bactericides. Alternative compounds to control this pathogen are desirable, since copper based bactericides have negative environmental impact and induce resistance in X. citri. An important step for the discovery and evaluation of new compounds to control X. citri is the characterization of genes/proteins that are potential targets. The mreB gene codes for a protein that is a bacterial actin homologue with a key role in rod shape morphogenesis. This gene was characterized in some bacteria, in which it was shown to be essential. There are no reports of characterization of mreB in X. citri. MreB and actin have a weak sequence similarity, despite being functional homologues. These characteristics make MreB an interesting target for new antibacterial chemical compounds. The objectives of this work were to study the function and subcellular localization of MreB in X. citri. To study the function of MreB in X. citri, two strategies were used to delete the mreB gene. However, neither strategy produced deleted mutants. This result confirmed that mreB is essential to X. citri and showed that the complementation method used was not adequate to ensure the viability of X. citri. To investigate MreB subcellula... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Coorientador: João Manoel Theotonio dos Santos / Banca: Luciane Dias Oliveira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Resumo: A resistência adquirida pelas bactérias aos antibióticos de amplo espectro tornou-se uma ameaça à saúde global. A necessidade de encontrar fármacos que consigam combater micro-organismos multirresistentes tem se tornado um grande desafio. Neste cenário, as plantas medicinais são promissoras por terem propriedades antimicrobianas eficazes, devido à presença de compostos fitoquímicos com atividades biológicas diversas. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana dos extratos glicólicos de Hamamelis virginiana (hamamélis) e de Persea americana (abacateiro) sobre cepas multirresistentes de Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa. A avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos vegetais foi realizada em sete cepas clínicas de K. pneumoniae e de P. aeruginosa, em comparação com uma cepa de referência de K. pneumoniae (ATCC 4352) e de P. aeruginosa (ATCC 15442). Para a determinação das concentrações inibitórias mínimas (CIM) e bactericida mínima (CBM) dos extratos de abacateiro e de hamamélis foi utilizado o método de microdiluição em caldo, segundo NCCLS. Após obtenção destes resultados, foi verificada a ação dos extratos sobre biofilmes monomicrobianos de oito cepas de K. pneumoniae e de P. aeruginosa (1 cepa ATCC e 7 cepas clínicas resistentes). Após o período de 48 horas para a formação do biofilme, os extratos foram adicionados separadamente, pelo período de cinco minutos, na concentração efetiva pré-determinada (CBM) e concentrações superiores. Poster... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : The resistance created by bacteria to broad-spectrum antibiotics has become a threat to global health. The need to find drugs that can combat multidrug-resistant microorganisms has become a major challenge. In this scenario, medicinal plants are promising because they have effective antimicrobial properties due to the presence of phytochemical compounds with diverse biological activities. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial action of the glycolic extracts of Hamamelis virginiana (hamamelis) and Persea americana (avocado) on multiresistant strains of Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. The evaluation of the antimicrobial activity of the plant extracts was carried out in seven clinical strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa, compared to an strain of K. pneumoniae (ATCC 4352) and P. aeruginosa (ATCC 15442). The broth microdilution method, according to NCCLS, was used to determine the minimum inhibitory (MIC) and bactericidal (MBM) concentrations of the extracts of avocado and witch hazel. After obtaining these results, the extracts on monomicrobial biofilms of eight strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa (1 strain ATCC and 7 resistant clinical strains) were verified. After the 48 hour period for biofilm formation, the extracts were removed, with a five-minute interval, in the effective exercise session (MBC) and in the upper sets. Afterwards, the biofilms were washed and measured by two different testicles, in which the biofilm biomass was evaluated by the violet glass and the viability of the microorganisms by the MTT test. The experiments were performed with n = 10, using two replicates for each strain / extract. The data were analyzed statistically by the ANOVA method, complemented by the Tukey test, with a significance level of 5% (p≤0.05). The results demonstrated an antibacterial activity of both extracts against the standard strain and as the clinical .... / Mestre

Orientador: Jonas Contiero / Coorientador: Roberta Barros Lovaglio / Banca: Fabricio Coutinho de Paula / Banca: Antonio José Gonçalves da Cruz / Resumo: Visando à otimização da produção de ramnolipídios, o uso de glicerol cru como fonte de carbono surge como uma estratégia tanto para o reduzir custo de produção como para aproveitar este resíduo da indústria do biodiesel. O gênero Pseudomonas tem sido um dos mais estudados no campo da produção de ramnolipídios, pois as moléculas produzidas por estes micro-organismos apresentam uma elevada atividade de superfície e o rendimento de produção é alto em relação a outros tensoativos. Portanto, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar a produção de ramnolipídios por linhagens de Pseudomonas aeruginosa (PAOI, LBI e LBI 2A1) usando glicerol bruto da indústria do biodiesel como fonte de carbono. Para isto comparou-se a produção de ramnolipídio utilizando três tipos diferentes de glicerol bruto. A influência de uma concentração menor (50g/L) foi avaliada utilizando as linhagens Pseudomonas aeruginosa LBI e Pseudomonas aeruginosa LBI 2A1, sendo que diferentes concentrações também foram avaliadas para a linhagem P. aeruginosa LBI. Também se comparou a síntese de ramnolipídio utilizando glicerol bruto tratado e glicerol bruto na concentração que favoreceu a maior produção por parte de Pseudomonas aeruginosa LBI. Além disso, a caracterização dos homólogos produzidos por P. aeruginosa LBI 2A1, a aplicação destes biossurfactantes na síntese de nanopartículas de prata e o controle de vetores de doenças tropicais foram analisados. O glicerol bruto é um substrato que pode ser utilizado com ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aiming at optimization of rhamnolipid production, the use of crude glycerol as a carbon source emerges as a strategy both for reducing production costs and make use of this residue of the biodiesel industry. The genera Pseudomonas is one of the most studied on the field of rhamnolipids production, because the molecules produced by these kind of microorganisms have a higher superficial activity and the production yield is higher when compared with other tenso-actives. Therefore, the principal aim of this study was to compare the rhamnolipids production by Pseudomonas aeruginosa strains (PAOI, LBI and LBI 2A1) using crude glycerol from biodiesel industry as a carbon source. Was compared the rhamnolipids synthesis using three different types of crude glycerol (70 g/L). The influence of a lower concentration (50 g/L) was tested using the strains P. aeruginosa LBI and P. aeruginosa LBI 2A1, whereas different concentrations of crude glycerol were evaluated for the P. aeruginosa LBI strain. It was also compared the rhamnolipids synthesis using a treated crude glycerol and a raw crude glycerol, using the concentration that favored the higher production by P. aeruginosa LBI. In addition, were characterized the homologs produced by P. aeruginosa LBI 2A1, the biotechnological application of these biosurfactants for silver nanoparticles synthesis and control of vectors of tropical diseases, were tested. Residual glycerol is a substrate that can be used as a carbon source for rhamnolipid ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Título original: Uso do galato de hexila como defensivo agrícola no controle da bactéria causadora do cancro cítrico / Orientador: Henrique Ferreira / Banca: Franklin Behlau / Banca: Daiane Cristina Sass / Resumo: A cultura de citros é uma das mais importantes do Brasil, sendo a citricultura brasileira a maior do mundo; ainda assim, a produção nacional sofre com pragas e doenças, como cancro cítrico, que afetam sua produtividade. O cancro cítrico é causado pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) e tem sido controlado com o uso de estratégias integradas como a eliminação de plantas contaminadas e pulverização de bactericidas cúpricos. O uso de compostos à base de cobre, porém, representa um risco ambiental devido à sua toxicidade e efeito cumulativo, fazendo necessária a investigação de outros compostos com potencial no tratamento fitossanitário contra a doença. Neste estudo avaliamos a atividade bactericida do galato de hexila contra Xac, seu potencial protetivo e curativo no combate ao cancro cítrico, sua fitotoxicidade e predisposição em induzir resistência bacteriana. O composto provocou retardo e diminuição no crescimento populacional de Xac e inibição de seu crescimento in vitro, levando à morte total da população na concentração de 100μg⋅mL-1. A bactéria não foi capaz de desenvolver resistência a Gal-6 ao longo de 31 dias e exibiu taxa de mutantes naturalmente resistentes ao composto menor que 1⋅10-6 para a concentração de 50μg⋅mL-1. A capacidade de germinação de sementes e desenvolvimento de plântulas de rúcula e tomate não foi alterada por Gal-6. A aspersão de galato de hexila em plantas de laranja doce inoculadas com Xac reduziu em até 35% a incidência de sintomas d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citrus culture is one of the most important agricultural activities in Brazil, being the country also the biggest producer in the world; nevertheless, this business struggles with pests and diseases, as citrus canker, that affects its profitability. Citrus canker is caused by the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) and is controlled by using integrated strategies such as elimination of contaminated plants and spraying of cupric bactericides. Using products with copper, however, brings an environmental risk, given 8 its toxicity and cumulative effect, making necessary the research of other compounds with potential to be used as a resource in the phytosanitary treatment against the disease. We evaluated hexyl galate's (Gal-6) bactericidal activity versus Xac and its potential in the preventive and curative treatments against the disease, also Gal-6 phytotoxicity and likeliness to induce bacterial resistance. The compound caused delay and decrease in Xac population growth and in vitro growth inhibition, leading to the total death of the population when at 100 μg⋅mL-1. The bacterium was not able to develop resistance to Gal-6 over 31 days and exhibited a rate of naturally-resistant mutants to the compound of less than 1⋅10-6 at the concentration of 50μg⋅mL-1. Seed germination and seedling development of arugula and tomato were not altered by Gal- 6. Spraying orange plants infected by Xac with hexyl gallate reduced the incidence of citrus canker symptoms by up to 35% an... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Everlon Cid Rigobelo / Coorientador; Fernando Antonio de Ávila / Banca: Mariana Carina Frigieri / Banca: Leonardo Lucas Madaleno / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a inoculação de micro-organismos encapsulados em mudas de frutíferas verificando a interação do inóculo com agentes encapsulantes como a argila e o alginato. O experimento foi realizado em um delineamento inteiramente casualizado, com cinco repetições, no esquema fatorial 3x2. Os tratamentos foram: controle, inóculo, argila, argila com inóculo, alginato e alginato com inóculo microbiano. As mudas foram mantidas em condições de viveiro durante um período de três meses. As análises realizadas nas plantas foram altura e diâmetro, matéria seca foliar e de raiz. As avaliações no solo foram teor de amônio e nitrato, atividade enzimática da desidrogenase, fosfato solúvel, carbono da biomassa microbiana e número total de bactérias. Nenhum tratamento promoveu o aumento de altura, diâmetro, matéria seca foliar e matéria seca de raiz nas mudas das frutíferas comparado com o tratamento controle. Os agentes encapsulantes promoveram um efeito significativo, nos teores de amônio e nitrato, na concentração de carbono da biomassa microbiana e no número total de bactérias nas mudas de araçá-boi. Paras a mudas de mamey, manga e pitanga não foram encontradas alterações significativas. Os resultados sugerem que os agentes encapsulantes utilizados como a argila e alginato na presença ou ausência de micro-organismos podem melhorar alguns parâmetros de solo, apesar de não terem promovido um maior crescimento vegetal. / Abstract: This study had as aim evaluate the inoculation of immobilized microorganisms at seedlings of fruit trees to verify interaction between encapsulating agents such as clay and alginate. The trial was carried out randomized design with five replicates at 3 x 2 factorial. The treatments were: control, inoculum, clay, clay plus inoculum, alginate and alginate plus microbial inoculum. The seedlings were kept at nursery conditions during three months. The analysis carried out at plants were shoot dry matter and root dry matter. The soil assessment were ammonium and nitrate content, dehydrogenase enzymatic activity, soluble phosphate, microbial biomass carbon bacteria total number. No treatment promoted the increase of plant height, diameter, shoot dry matter and root dry matter of the fruit trees compared to control. The encapsulating agents promoted significant effect at the ammonium and nitrate content at the carbon concentration and also at the bacteria total number at the araçá-boi seedlings. To mamey, manga and pitanga seedlings did not find significant changes. The results suggest that encapsulating agents used such as clay and alginate together with microorganisms or not might improve some soil parameters, even though, the plant growth had not been promoted. / Mestre

Orientador: Valéria Marta Gomes do Nascimento / Coorientador: Lucimara Mach Côrtes Cordeiro / Banca: Ivanise Guilherme Branco / Banca: Eutímio Gustavo Fernandez Núñez / Banca: Fhernanda Ribeiro Smiderle / Banca: Fernanda Fogagnoli S. Tosin / Resumo: Lasiodiplodia theobromae é um fungo filamentoso, causador de doenças em espécies vegetais de ampla distribuição no Brasil. Esse fungo produz exopolissacarídeo (EPS) de estrutura química não definida completamente. Além disso, o estudo de cultivo em meio quimicamente definido e os parâmetro fermentativos em bioreator ainda são limitados. Neste trabalho são apresentados a otimização da fermentação submersa de L. theobromae MMBJ em agitador orbital; o estudo de aeração em bioreator; as características reológicas dos caldos fermentativos e também as estruturas químicas dos polissacarídeos presentes no EPS e no micélio do fungo. O EPS purificado e fracionado é composto de três diferentes glucanas. Uma delas, uma β-(1→3)-(1→6)-glucana insolúvel em água fria, foi o EPS de maior rendimento (67% p/p). As outras duas são β-(1→6)-glucanas, sendo uma de 7×103 g/mol e outra de 1,8×106 g/mol. A glucana solúvel de maior peso molecular é a maior β-(1→6)-glucana já descrita e pode ser explorada para uso farmacêutico, uma vez que atividades imunomoduladoras estão associadas ao tamanho da cadeia. Dentre as fontes de carbono (sacarose P.A., sacarose comercial, glicose, frutose, lactose e melaço) e nitrogênio (nitrato de amônio, fosfato de amônio, nitrato de sódio e uréia) foram selecionados sacarose comercial e nitrato de amônio como mais adequadas para síntese de EPS. Na otimização usando DCCR 22, a formulação de meio que favoreceu síntese de produto foi composta de 56,6 g/L de sacarose comercial e 2,03 g/L de nitrato de amônio. Esse mesmo meio, quando em bioreator a 0,8 vvm (agitação fixada em 300 rpm), proporciona maior síntese de EPS, numa concentração de 7,35 g/L, sendo 1,8 g/L de β-(1→6)-glucanas e 5,5 g/L de β-(1→3)-(1→6)-glucana, após 72 h de cultivo. Diferentemente, os cultivos a 1,5 vvm favoreceram o crescimento celular, com 12,5 g/L de biomassa; máxima conversão de YX/S de 0,47... / Abstract: Lasiodiplodia theobromae is phytopatogenic fungus causing gumnosis in plant species that are widely distributed in Brazil. This fungus produces exopolysaccharide (EPS) but its chemical structure is not completely defined. Furthermore, the studies of fermentation in defined medium and parameters in bioreactor cultures are still limited. This work describes the optimization using Response Surface Methodology (RSM) in orbital shaker, an aeration study in stirred-tank bioreactor, an early rheological characterization of fermentation broths, and also a refined structure evaluation from the EPS produced by L. theobromae MMBJ. The polysaccharides from mycelia were also described. Fractionated and purified EPS show the presence of three different glucans. One of them, a chilled water insoluble β-(1→3)-(1→6)- glucan, was the EPS with higher yield (67% w/w). The other two are soluble β-(1→6)- glucans, one with 7×103 g/mol and the other with 1.8×106 g/mol. The glucan with higher molecular weight is the largest β-(1→6)-glucan described and can be applied for pharmaceutical uses, since immunomodulatory effects are usually associated with molecular weight. Commercial sucrose and Ammonium nitrate were chosen among carbon (pure sucrose, commercial sucrose, glucose, fructose, lactose or sugar cane molasses) and nitrogen sources (ammonium nitrate, ammonium phosphate, sodium nitrate or urea) as most suitable for EPS biosynthesis. The Box-Behnken design using RSM showed that 56.6 g/L of commercial sucrose and 2.03 g/L of ammonium nitrate is the formulation that promotes EPS synthesis. This medium formulation was also used in bioreactor at 0.8 vvm or 1.5 vvm (agitation set at 300 rpm). The lower aeration rate promoted EPS synthesis, confirmed by the maximum EPS concentration obtained (7.35 g/L) after 72 hours. From total EPS amount, 1.8 g/L were β-(1→6)-glucans and 5.5 g/L were β-(1→3)-(1→6)-glucan. Differently, cultures at 1.5 vvm... / Doutor

Orientador: Ana Júlia Fernandes Cardoso de Oliveira / Banca: Roberto Fioravanti Carelli Fontes / Banca: Edison Barbieri / Resumo: É sabido que grande parte da produção primária global ocorre nos oceanos, e que um problema fundamental é entender como os organismos usam este carbono e quais são os padrões das variações espaço-temporais do carbono e do fluxo de energia. Deste modo, o interesse no ciclo do carbono vem aumentando nos últimos anos devido ao aumento recente de problemas mundiais, tais como mudanças climáticas e antropização de zonas costeiras. A alça microbiana conduz energia e carbono por meio das bactérias, para os níveis tróficos superiores, além de promover a assimilação de elementos inorgânicos biologicamente importantes, como nitrogênio e fósforo, em matéria orgânica na coluna d'água, elementos estes que são de extrema importância biológica. O presente estudo teve por objetivo estudar a estrutura e o funcionamento da alça microbiana nos sedimentos da Baía do Araça, quantificar seus elementos, verificar as flutuações nas densidades e correlacionar com outros fatores analisados, tais como contaminantes metálicos, matéria orgânica e hidrocarbonetos. Foram coletadas amostras de sedimento em 37 pontos, divididos em duas regiões (entremarés e sublitoral), durante o período de um ano. As amostras foram analisadas quanto a granulometria, conteúdo de matéria orgânica, carbonos orgânicos totais, hidrocarbonetos, além da análise dos componentes microbiológicos. Foi observado que as maiores densidades de microrganismos foram observadas na região do sublitoral. Houve uma correlação negativa entre as densidades de bactérias heterotróficas e nano flagelados, podendo indicar bacterivoria. As variações de matéria orgânica ao longo do estudo afetaram diretamente as populações de bactérias heterotróficas / Abstract: It is known that great part of the global primary occurs in the oceans, and a problem is to understand how the organisms use this carbon, what are the patterns of the spatial-temporal variations of carbon and of the energy flow. Thus, the interest in the carbon cycle is increasig in recent years due to the increase of global problems, such as climate change and the increase of population in coastal areas. The microbial loop leads energy and carbon, by bacteria, to the other trophic levels, and it also promotes the assimilation of inorganic elements biologically relevants, such as nitrogen and phosphorus, in organic matter in the water column, which are extremely biologically importants. This study aims to analyze the structure and the functioning of the microbial loop, quantifying its elements, check the densities variations and correlate with other analyzed factors, such as metal contaminants, organic matter and hydrocarbons. Sediment samples were collected at 37 points, divided into two regions (intertidal and subcoastal), during the period of one year. The samples were processed for granulometric analyzis, organic matter, total organic carbons, hydrocarbons, and microbiological components. It was observed that the highest densities of microrganisms were at the subcoastal region. There was a negative correlation between the densities of heterotrophic bacteria and nanoflagellates, which may indicate bacterivory. Variations of organic matter throughout the study directly affected the heterotrophic bacteria populations / Mestre

Orientador: Ana Julia Fernandes Cardoso de Oliveira / Banca: Roberto Fioravanti Carelli Fontes / Banca: Edson Barbieri / Resumo: A microbiota bacteriana encontrada nos peixes vivos está diretamente relacionada à microbiota do ambiente, ou seja, os microrganismos presentes em sua superfície corporal, brânquias, trato gastrointestinal e musculatura estão relacionados aos mesmos do ambiente em que está inserido. Os peixes possuem naturalmente uma vasta gama de bactérias, que também podem ser comumente encontradas na água. Porém, as bactérias de origem fecal, como E.coli e Enterococos, não são habitantes comuns da flora intestinal dos peixes, sendo sua presença atrelada à contaminação por fezes humanas ou de outros animais de sangue quente na água de captura. Sendo assim, o monitoramento da qualidade microbiológica tanto da água, quanto dos organismos retirados dela para consumo humano, tornam-se necessários, já que podem causar prejuízo a saúde do homem, provocando problemas de saúde pública. O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade microbiológica do peixe (Eugerres brasilianus, Curvier 1830) e das águas do estuário do Rio Itanhaém, SP (Brasil). Três bactérias foram utilizadas para avaliar a qualidade microbiológica da água e dos peixes, duas de origem fecal humana, Escherichia coli e Enterococcus sp. e uma de origem não fecal, Staphylococcus aureus, todas obtidas pela técnica da membrana filtrante. Nos peixes foram avaliados suas brânquias e músculo. Os resultados obtidos mostraram que durante todo o período do estudo, as águas do rio Itanhaém apresentaram-se dentro dos limites estabelecidos pela legislação CONAMA 357/05, porém o uso de E.coli, demonstrou ser insuficiente para avaliar a qualidade da água, visto que a densidade de Enterococcus sp. foi alta durante todo o estudo em todos os pontos analisados. Na análise dos peixes, foram encontradas altas concentrações para as três bactérias utilizadas, com as brânquias se apresentando com maior número em relação ao músculo. De acordo com a legislação RDC 12/01,... / Abstract: The bacterial microbiota found in live fish is directly related to the microbiota of the environmente, in the words, the microorganisms present in their body surface, gills, gastrointestinal tract and muscle are related to the same environment in which it is inserted. Fish naturally have a wide range of bacteria, which may also be commonly found in the water. However, the bacteria of fecal origin, such as E.coli and Enterococci, are not common inhabitants of the intestinal flora of fish, being his presence linked to contamination by human feces or other warm-blooded animals in the water capture. Thus, the monitoring of the microbiological quality of the water and the fish caught for human consumption, it is necessary, since they can cause harm to human health, causing public health problems. The objective of this study was to evaluate the microbiological quality of fish (Eugerres brasilianus, Curvier 1830) and waters of the estuary of the River Itanhaém, SP (Brazil). Three bacteria were used to assess the microbiological quality of water and fish, two of human fecal origin, Escherichia coli and Enterococci, and a source not fecal, Staphylococcus aureus, all obtained by membrane filtration. The fish were evaluated for their gills and muscle. The results showed that during the entire period of the study, the waters of the river Itanhaém presented within the limits set by legislation CONAMA resolution 357/05, however the use of E.coli, proved to be insufficient to assess the quality of the water, since the density of Enterococci was high throughout the study in all points analyzed. The analysis of fish, were found high concentrations for the three bacteria used, with the gills presenting with greater number in relation to the muscle. According to the RDC 12/05, the fish were evaluated during the study were unfit for consumption. In the proximity of the ETE-Anchieta, located to the left boarder of the river, the bacteria S.aureus was more ... / Mestre