O presente estudo teve como objetivo avaliar a associação entre o polimorfismo da β-lactoglobulina e as características físico-químicas (pH, acidez e crioscopia), de composição (gordura, sólidos totais, uréia, proteína bruta, proteína verdadeira, nitrogênio não-protéico e caseína), e de estabilidade do leite. Para tanto, 11 rebanhos leiteiros foram selecionados, 5 da raça Holandesa e 6 da raça Girolanda, dos quais foram coletadas 4 amostras de leite de 164 vacas da raça Holandesa e 74 da raça Girolanda, sendo duas coletas realizadas na estação das secas e 2 na estação das chuvas. Cada amostra foi submetida à análise de composição e de características físico-químicas. Para a identificação do genótipo para β-lactoglobulina, foram coletadas amostras de sangue de cada vaca, as quais foram submetidas à reação de polimerase em cadeia (PCR), determinando-se as freqüências alélicas e genotípicas dos animais. A estabilidade do leite foi avaliada pelo teste de estabilidade ao etanol, nas seguintes concentrações alcoólicas: 70, 76, 80 e 84ºGL. As freqüências genotípicas foram 0,28, 0,30 e 0,41 para os genótipos AA, AB e BB, respectivamente. A freqüência do alelo B foi maior que do alelo A, 0,52 e 0,47, para a raça Holandesa, e 0,58 e 0,41, para a raça Girolanda, respectivamente. Não houve efeito do polimorfismo da β-lactoglobulina (AA, AB e BB), entre os animais das raças, avaliadas sobre as propriedades físico-químicas e a composição do leite. Observou-se efeito de raça (Holandesa e Girolanda, respectivamente) sobre a acidez titulável (16,16 e 17,07°D) e pH (6,78 e 6,75), e de composição do leite quanto as variáveis gordura (3,31 e 3,20%), NUL (16,62 e 14,45mg/dL) e PB (3,13 e 3,04%). Houve efeito da estação (chuvosa e seca, respectivamente) sobre as características físico-químicas de acidez titulável (16,62 e 16,34°D), pH (6,76 e 6,79) e crioscopia (-0,5411 e -0,5376°H), e de composição do leite quanto as variáveis lactose (4,34 e 4,50%), sólidos totais (11,65 e 11,90%), LogCCS (2,44 e 2,34), PB (3,08 e 3,14%), PV (2,84 e 2,91%), caseína (2,01 e 2,13%) e relação caseína:proteína verdadeira (0,70 e 0,72). Verificou-se também efeito da raça e estação do ano sobre a estabilidade do leite, sendo que o leite foi mais instável para raça Girolanda e durante a estação seca, mas não se observou efeito do polimorfismo da β-lactoglobulina sobre esta característica. / The objective of this study was to evaluate the association between beta-lactogobulin polymorphism and physico-chemical characteristics, composition (fat, total solids, urea, crude protein, true protein, non protein nitrogen and casein), and stability of milk. For this aim, 11 dairy herds were selected, six of them composed of crossbred Holstein-Zebu (H-Z) cows and five from Holstein cows. Milk samples were taken four times (twice in dry season and twice in rainy season), from 278 Holstein and 156 crossbred Holstein-Zebu cows. Individual milk samples were analyzed for milk composition and physico-chemical properties. For β-lactoglobulin polymorphism analysis, 10 mL of blood samples were ollected from each cow and then submitted to polymerase chain reaction (PCR). Following β-lactoglobulin protein variants detection, genotype and allele frequencies for the 11 herds were analyzed. Heat stability of milk was determined by the alcohol-induced precipitation test, using the following ethanol concentrations 70, 76, 80 and 84ºGL. The genotype frequencies were 0.28, 0.30 and 0.41 for AA, AB and BB, respectively. Allele B frequency was higher than A, 0.52 and 0.47, for Holstein cows, 0.58 and 0.41, for Holstein-Zebu, respectively. Genetic variants of β-lactoglobulin (AA, AB and BB) had no effect on physico-chemical (acidity, pH and crioscopy), and compositional characteristics (fat, total solids, urea, crude protein, non-protein nitrogen, true protein and casein percentages), either among milk from Holstein cows, or from crossbred Holstein-Zebu. Breed effect for Holstein and H-Z on titrable acidity (16,16 and 17,07°D, respectively), pH (6,78 and 6,75, respectively), fat (3,31e 3,20%, respectively), milk urea nitrogen (16,62 e 14,45mg/dL, respectively) and crude protein (3,13 e 3,04%, respectively) could be observed. Effect of seasonality between rainy and dry seasons was also observed on physico-chemical variables of titrable acidity (16,62 and 16,34°D, respectively), pH (6,76 and 6,79, respectively) and freezing point (-0,5411and -0,5376°H, respectively), and on composition characteristics of lactose (4,34 and 4,50%, respectively), total solids (11,65 and 11,90%, respectively), LogCCS (2,44 and 2,34, respectively), crude protein (3,08 and 3,14%, respectively), true protein (2,84 and 2,91%, respectively), casein content (2,01 and 2,13%, respectively) and casein:true protein ratio (0,70 and 0,72, respectively). Effect of breed and seasonality on milk ethanol stability test was observed. Holstein-Zebu milk was ethanol-unstable on dry season. No effect of β-lactoglobulin on milk stability was observed.

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da utilização de grão de soja integral e moído em diferentes peneiras, sobre o consumo e digestibilidade da matéria seca e nutrientes; fermentação e síntese de proteína microbiana ruminal, produção e composição do leite, perfil de ácidos graxos do leite, concentrações de parâmetros sangüíneos e balanço de energia e nitrogênio. Foram utilizadas 12 vacas da raça Holandesa, agrupadas em três quadrados latinos balanceados e contemporâneos 4x4, alimentadas com as seguintes rações: 1) controle (C); 2) grão de soja integral (GI), 3) grão de soja moído em peneira de 2 mm (G2), e 4) grão de soja moído em peneira de 4 mm (G4). Nas rações GI, G2 e G4 foram utilizados 20% de grão de soja na material seca. As amostras utilizadas para análise da composição do leite foram coletadas no 16º dia de cada período experimental, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras de sangue foram coletadas em tubos vacuolizados por punção da veia e/ou artéria coccígea. As amostras de líquido ruminal foram coletadas com a utilização de sonda esofágica três horas após a alimentação matinal. A digestibilidade foi determinada por meio de indicador interno FDAi. Houve redução no consumo de matéria seca, matéria orgânica e FDN nas vacas suplementadas com as rações contendo grão de soja em relação à ração controle. Foi observado efeito no consumo de EE onde as vacas que receberam as rações contendo grão de soja apresentaram maiores valores de consumo deste nutriente. Houve diferença na digestibilidade aparente total dos nutrientes entre as rações experimentais, sendo que as dietas com grão de soja apresentaram aumento da digestibilidade do EE e o processamento do grão também influenciou a digestibilidade, pois foram observados maiores valores para o grão processado em relação ao grão integral. Não houve diferença das rações experimentais para os valores de pH ruminal e concentração de N-NH3 ruminal entre as rações utilizadas. A produção e composição do leite, bem como o PAG da gordura do leite não foram influenciadas pelas rações experimentais. As concentrações de colesterol total e colesterol - HDL foram maiores para as vacas alimentadas com rações contendo grão de soja em relação à ração controle. As rações utilizadas não influenciaram a síntese de proteína microbiana. O balanço de energia e nitrogênio não foi influenciado pelas rações experimentais. A utilização de grão de soja integral ou processado nas rações altera o consumo, sem com tudo influenciar o desempenho produtivo e metabolismo de vacas em lactação. / This study carried out to evaluate the effects the use of whole soybean grain and milled in different screens, on the intake and digestibility of dry matter and nutrients, fermatation and rumen microbial protein synthesis, yield and milk composition, fatty profile of the milk concentration of blood paramenters and energy balance nitrogen. Twelve Holstein cows were allocated in three balanced Latin square balancead and comtemporary 4x4, and fed with the following diets: 1) control (C), 2) whole soybean (GI), 3) ground in sieve of 2 mm (G2), and 4) ground soybean in sieve of 4 mm (G4). In the GI, G2 and G4 diets were used 20% of soybean in the dry matter. The sample used for analyzing the milk composition were collected on the 16th day of each period, and from the two milkings. Blood samples used were colleted in tubes vacuolated by venipuncture and / or coccygeal artery. Samples of rumen fluid were collected with use of esophageal gavage three hours after the morning feeding. The digestibility was determined through of an internal indicator iADF. A reduction in dry matter intake, organic matter and NDF in cows fed with diet containing soybean in relation to the control diet. Effect was observed in the consumption of EE where the cows that received diets containing soybean showed higher intake of this nutrient. Differences in total apparent digestibility of the nutrients between the experimental diets, and diets with soybean showed an increase in EE digestibility and grain processing also affected the digestibility, a was observed higher values for grain processed against the whole grain. There was no difference in the experimental diets, and diets for the values of pH and NH3-N concentration between diets used. The yield and milk composition, and the FAP of milk fat were not influenced by experimental diets. The concentrations of total cholesterol and HDL-cholesterol were higher for cows fed with diets containing soybean in relation to the control diet. The ration used did not affect microbial protein systhesis. The energy balance and nitrogen were not influenced by experimental diets. The use of whole soybean or processed in diets changes in composition without influencing the performance and metabolism in dairy cows.

Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de níveis crescentes de uréia na dieta de vacas em lactação sobre a produtividade, características físico-químicas e de composição do leite, bem como composição da proteína do leite. Foram utilizadas nove vacas Holandesas em lactação, em delineamento experimental tipo quadrado latino 3X3, com 3 tratamentos, 3 períodos e 3 quadrados. O experimento teve duração total de 63 dias divididos em 3 períodos de 21 dias. Os tratamentos foram: tratamento A (controle) com dieta formulada para suprir 100% das exigências do NRC (2001) em termos de PB, proteína degradável no rúmen (PDR), proteína não degradável no rúmen (PNDR), utilizando farelo de soja como principal fonte protéica e cana-de-açúcar como volumoso; tratamento B, dieta com a inclusão de 0,75% de uréia, em substituição parcial ao farelo de soja, e tratamento C, dieta com inclusão de 1,5% de uréia, em substituição parcial ao farelo de soja. Todas as dietas foram isoenergéticas (1,53 Mcal/kg de energia líquida de lactação) e isoprotéicas (16% de proteína bruta). Não foram observadas diferenças entre os tratamentos, quando os resultados foram analisados por regressão polinomial simples, quanto a: consumo de matéria seca, produção de leite, produção de leite corrigida para 3,5%, produção de proteína, produção de gordura, produção de lactose e produção de sólidos totais e Log CCS. Também não houve influência dos tratamentos sobre pH, crioscopia, densidade e prova de resistência ao álcool. No entanto, a acidez, sofreu efeito linear decrescente (p = 0,017) em função dos níveis de uréia na dieta. Quanto à composição do leite, os teores de proteína, gordura, lactose, uréia, extrato seco total e extrato seco desengordurado não foram influenciados pelos tratamentos. A composição da proteína também não foi alterada pela inclusão de até 1,5% de uréia na dieta, não sendo observada diferença entre os tratamentos para a proteína bruta, proteína verdadeira, caseína, proteína do soro, nitrogênio não caseinoso, nitrogênio não protéico, uréia, bem como as relações proteína verdadeira: proteína bruta e caseína: proteína verdadeira. Estes resultados sugerem que o uso de até 1,5% de uréia na matéria seca da dieta não altera a capacidade de produção, as características físico-químicas e de composição do leite, bem como a composição da proteína do leite. / The aim of this study was to evaluate the effects of three different dietary levels of urea on milk yield and composition, and milk protein composition. Nine lactating Holstein cows were used in a 3X3 latin square arrangement, with 3 treatments, 3 periods of 21 days each and 3 squares. The treatments were: A) NRC-based (NRC, 2001) diet to provide 100% of crude protein (CP), as well as, rumen undegradable protein (RUP) and rumen degradable protein (RDP) requirements, by using soybean meal and sugar cane; B) 0,75% urea inclusion; partially substituting soya meal from diet C) 1,5% urea inclusion, partially substituting soya meal from diet. Energy and protein levels of treatment diets comply with NRC (2001), and were isoenergetic and isoproteic. No statistical differences were observed among treatments, when results were analyzed by simple polynomial regression in relation to dry-matter intake, milk yield, 3,5% FCM, protein and fat yield, and somatic cell count (Log SCC). Cryoscopy, pH, milk density and alcohol stability, fat, lactose, urea, total solids and solids with no fat were not influenced by treatments. The protein composition, crude protein, true protein, casein, whey protein, non-casein nitrogen, milk urea nitrogen, as well as, true protein:crude protein and casein:true protein ratios were not influenced by the substitution of soybean meal by urea in ration. Results indicate that the use of urea up to 1,5% in DM does not alter milk yield and its composition.

O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos de diferentes fontes de ácidos graxos ω-6 na suplementação de vacas em lactação sobre o consumo e digestibilidade da matéria seca e nutrientes, fermentação e síntese proteína microbiana ruminal, produção e composição do leite, parâmetros sanguíneos e balanço de energia e nitrogênio. Foram utilizadas 16 vacas da raça Holandesa, agrupadas em quatro quadrados latinos 4x4, balanceados e contemporâneos, recebendo as seguintes dietas: 1) Controle; 2) Óleo de Soja; 3) Sais de cálcio de ácidos graxos (MEGALAC-E®, Química Geral do Nordeste e Arm & Hammer, Inc.); e 4) Sais de cálcio de ácidos graxos, (LACTOPLUS®, Dalquim-Nutriacid Nutrição e Ciência). As dietas 2, 3 e 4 receberam a inclusão de 3% das fontes de ácidos graxos ω-6 na dieta, e a forragem usada no experimento foi silagem de milho. A produção de leite e o consumo de matéria seca foram mensurados diariamente durante todo o período experimental, mas somente os últimos sete dias foram usados para os cálculos. A digestibilidade foi determinada utilizando o indicador interno FDAi. As amostras utilizadas para análise da composição do leite foram coletadas no 16o dia de cada período experimental, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras de sangue foram coletadas em tubos vacuolizados por punção da veia e/ou artéria coccígea. As amostras de líquido ruminal foram coletadas com a utilização de sonda esofágica três horas após a alimentação matinal Houve redução no consumo de matéria seca para as dietas com adição de ácidos graxos em relação à dieta controle. O consumo matéria orgânica, fibra detergente neutro e carboidratos não fibrosos diminuíram quando adicionado lipídios nas dietas experimentais. O consumo de proteína bruta foi maior para a dieta controle, e entre as fontes de ácidos graxos a dieta com óleo de soja apresentou menor consumo de proteína bruta que as dietas com sais de cálcio. Ainda, as dietas com adição de ácidos graxos apresentaram maior consumo de extrato etéreo, e as fontes de sais de cálcio tiveram redução no consumo de extrato etéreo em relação à dieta com óleo de soja. Não foi observado efeito para o consumo de NDT entre as dietas experimentais, no entanto o consumo de energia líquida de lactação foi maior para as dietas com ácidos graxos em relação a dieta controle. A digestibilidade da matéria seca, matéria orgânica, proteína bruta, fibra detergente neutro e carboidratos não fibrosos não foram influenciadas pela adição de lipídios na dieta. A digestibilidade do NDT apresentou efeito da adição de lipídios e as dietas contendo ácidos graxos tiveram maiores coeficientes de digestibilidade em relação à dieta controle. Não houve efeito dos tratamentos nos valores de pH ruminal na concentração de nitrogênio amoniacal ruminal e na fermentação ruminal. A produção de leite e produção de leite corrigida (kg/dia) para gordura não apresentaram efeito das dietas experimentais, assim como a concentração e rendimento de lactose. A produção de gordura (kg/dia) foi menor para a dieta com óleo de soja em relação á dieta com sais de cálcio, no entanto a porcentagem de gordura no leite não foi influenciada pelas dietas experimentais. A produção de proteína (kg/dia) também não sofreu alteração pelos tratamentos, no entanto a concentração de proteína foi menor para a dieta com óleo de soja do que as demais. As dietas experimentais não influenciaram a síntese de proteína microbiana. O balanço de energia não teve efeito de tratamento. O consumo de nitrogênio e a excreção de fezes (g/dia) foram maiores para a dieta controle em relação às dietas com fontes de ácidos graxos e a dieta com óleo de soja apresentou menor consumo de nitrogênio do que as dietas com sais de cálcio, no entanto o balanço de nitrogênio não apresentou efeito. As concentrações de colesterol total e colesterol-HDL foram maiores para as vacas alimentadas com rações contendo ácidos graxos. A utilização de ácidos graxos insaturados ω-6 nas dietas experimentais de vacas em lactação alterou o consumo e digestibilidade dos nutrientes, a produção de gordura, composição proteica do leite e as concentrações de colesterol e HDL-colesterol. / The objective of this study was to examine the effect of feeding diets containing fat supplements ω-6 dairy cows on intake and nutrients digestibility, ruminal fermentation, microbial protein synthesis, composition and milk yield, metabolite concentration in blood and liver tissue, and balance of energy and nitrogen. Sixteen midlactacion Holstein cows (180 ± 20 days in milk) were used four 4 x 4 Latin square balanced, for carry over effect, with 21 days of experimental period. Cows were fed with the following diets: 1) control (C) without fat source; 2) refined soybean oil (SO); 3) calcium salts of unsaturated fatty acids (CSFA1) (MEGALAC-E®); 4); calcium salts of unsaturated fatty acids (CSFA2) (LACTOPLUS®). Diets 2, 3 and 4 received inclusion of 3% of the sources of ω-6 fatty acids, and the forage used during the experiment was corn silage. Milk yield and dry matter intake was measured daily throughout the experimental period, but the last seven days were used to calculate. Digestibility was determined using the internal indicator ADFi. The samples used for analysis of milk composition were collected on the 16th day of each experimental period, and from the two daily milkings. Blood samples for analysis of blood metabolites were collected in tubes vacuolated by vein puncture and/or coccygeal artery, the 16th experimental day. The samples of ruminal liquid were collected with use of esophageal probe three hours after the morning feeding. There was a reduction in dry matter intake for diets with added fatty acids compared to the control diet. The consumption of organic matter, neutral detergent fiber and non-fiber carbohydrates decreased when added lipids in experimental diets. The crude protein intake was higher for the control diet, and between sources of fatty acid diet with soybean oil consumption had lower crude protein diets with calcium salts. Although, diets with added fatty acids were more intake of ether extract, and sources of calcium salts decreased the ether extract intake in relation to diet with soybean oil. No effect was observed for TDN intake among diets, however the net energy of lactation was higher for diets containing fatty acids compared to control diet. The digestibility of dry matter, organic matter, crude protein, neutral detergent fiber and non-fiber carbohydrates were not influenced by the addition of lipids in the diet. The digestibility of TND had effect of the addition of lipids and fatty diets had higher digestibility compared to the control diet. There were no treatment effects on ruminal pH, ammonia concentration in the rumen and ruminal fermentation. The milk production and milk production corrected (kg / day) had no effect to the fat diets, and the content and yield of lactose. The fat production (kg / day) was lower for the diet with soybean oil in relationship to diet with calcium salts, however the percentage of milk fat was not influenced by the experimental diets. The protein yield (kg / day) also did not change by the treatments, though the protein concentration was lower for the diet with soybean oil than others. The experimental diets did not affect the synthesis of microbial protein. The balance of energy had no effect of treatment. The nitrogen intake and fecal excretion (g / day) were higher for the control diet compared to diets with sources of fatty acids and soybean oil diet had lower nitrogen consumption of the diets with calcium salts, however nitrogen balance had no effect. The concentrations of total cholesterol and HDL cholesterol were higher for cows fed diets containing fatty acids. The utilization of &#969-6 unsaturated fatty acids in the experimental diets for lactating cows alter the intake and digestibility of nutrients, fat production, milk protein composition and concentrations of cholesterol and HDL-cholesterol.

Os objetivos deste trabalho foram determinar a sensibilidade e especificidade do limiar de contagem de células somáticas (CCS) de vacas Gir para o diagnóstico de mastite subclínica causada por patógenos primários e secundários e avaliar os efeitos de rebanho, vaca, mês de coleta, quarto mamário, presença de infecção intramamária, tipo de microrganismo e suas interações sobre o logCCS e composição do leite. Avaliou-se a hipótese que o limiar da CCS para detecção de mastite subclínica é igual entre vacas Gir e Holandesas. Foram utilizadas 221 vacas Gir em lactação, provenientes de três fazendas comerciais. Foram coletadas amostras de leite individuais por quarto mamário e compostas uma vez por mês, durante um ano. Foram realizadas análises de CCS, composição do leite e cultura microbiológica. O quarto mamário e a vaca foram considerados unidades experimentais. Para determinar a sensibilidade, especificidade e odds ratio (OR) dos limiares da CCS para identificação de quartos infectados, foram utilizados quatro valores de CCS: 100, 200, 300 e 400 (x 103 células/mL), assim como a correlação entre a CCS e composição do leite. Não houve efeito do rebanho sobre o logCCS para amostras individuais de quartos mamários e compostas, mas vaca dentro de rebanho foi o principal fator responsável pela variação do logCCS. Houve efeito do rebanho sobre a composição do leite, assim como o mês de coleta apresentou efeito tanto sobre o logCCS quanto para a composição do leite, considerando as duas unidades experimentais. A presença de infecção intramamária afetou negativamente a composição do leite, exceto sobre o teor de gordura; sendo que os maiores teores de lactose, proteína e ESD foram encontrados em amostras sem isolamento bacteriano. Os maiores logCCS foram obtidos em amostras infectadas. O limiar da CCS de 100 x 103 células/mL apresentou, em ambas as unidades experimentais, maiores valores de sensibilidade e valor preditivo negativo. O limiar de 200 x 103 células/mL apresentou maior chance da ocorrência de mastite do que o limiar de 100 x 103 células/mL. Foi observada correlação negativa entre CCS com lactose e extrato seco desengordurado (ESD), mas a correlação foi positiva entre CCS com gordura e proteína, tanto em nível de quarto mamário quanto de vaca. Portanto, a composição do leite foi influenciada pela CCS, os teores de lactose e ESD diminuíram em altas CCS, enquanto que as concentrações de gordura e proteína aumentaram. / The aim of this study was to determine the sensibility and specificity of somatic cell count (SCC) threshold in Gyr cows to diagnosis the subclinical mastitis caused by primary and secondary pathogens, and to evaluate the effect of herd, cows, month, mammary quarter, intramammary infection, type of microorganism and their interactions on logSCC and milk composition. The hypothesis to be tested was that the SCC threshold to detection of subclinical mastitis is the same for Holstein and Gir cows. A total of 221 lactation Gir cows from three commercial dairy farms was selected. Composed and quarter individual milk samples were collected once a month, during one year for SCC, milk composition and bacteriological analysis. The mammary quarter and the cow were considered experimental units. To determine the sensibility, specificity and odds ratio (OR) from SCC threshold to identify the infected quarters four values of SCC: 100, 200, 300 and 400 (x 103 cells/mL) were used. It was also evaluated the correlation between SCC and milk composition. There was no effect of herd on logSCC in individuals and composed samples, but cow nested within herd was major factor responsible for the logSCC variation. The month of sampling presented significant effect on logSCC and milk composition in both experimental units. The intramammary infection presence affected negatively the milk composition, except of fat concentration. Higher lactose, protein and non-fat solids (NFS) percentages were found in negative samples and higher logSCC were observed in infected samples. The SCC threshold of 100 x 103 cells/mL presented the major sensibility and negative predictive value for subclinical mastitis detection. The threshold of 200 x 103 cells/mL had higher chance to have mastitis than the threshold of 100 x 103 cells/mL. It was observed a negative correlation between SCC with lactose and NFS; but the correlation was positive between SCC with fat and protein in mammary quarters and cow level. Milk composition was influenced by SCC, once the lactose and NFS percentages decreased in samples with high SCC and the protein and fat concentration increased.

The diploma thesis focuses on the comparison of milk quality in two different ways of farming, conventional and organic farming. Almost a hundred parameters on the set of 64 bulk milk samples were monitored. The theoretical part of the paper describes the composition of cow's milk, its technological and hygienic properties and it notes the nutritional impact of milk and milk products. It also mentions the most important legal definition of organic farming. Experimental part describes the setting of the experiment and mentions the methods used to analyze milk samples for individual parameters and it details the ten selected determination. The difference in measured values of various milk indicators depending on the dairy farm was observed by using statistical methods and an explanation was suggested in the case of the statistical significance. The thesis was based on the cooperation of the Faculty of Chemistry VUT Brno and a National reference laboratory for raw milk at the Research Institute for Cattle Breeding in Rapotin.

A manipulação da dieta constitui uma prática efetiva e rápida de alteração da composição do leite, especialmente do seu teor de gordura. Entretanto, os mecanismos envolvidos não são ainda completamente conhecidos, embora muito se tenha avançado na última década. Sabe-se hoje que certo tipo de ácido graxo (CLA trans-10 cis-12) formado no rúmen sob condições específicas de alimentação é capaz de inibir a síntese de gordura do leite. Entretanto, depressão da gordura do leite (DGL) tem sido observada em casos (e.g. dietas contendo óleo de peixe) onde não há formação deste inibidor. Embora o efeito do CLA sobre a secreção de gordura do leite já esteja bem caracterizado, estudo prévio conduzido pelo nosso grupo mostrou ainda um aumento do teor de proteína do leite em resposta a este tratamento. Dois experimentos foram conduzidos com os seguintes objetivos principais, respectivamente: 1) determinar se um maior suprimento de proteína através da dieta afeta a secreção de proteína do leite de vacas recebendo CLA e 2) Estudar os mecanismos envolvidos na DGL de vacas recebendo dietas contendo óleo de peixe (OP) e níveis distintos de fibra. No primeiro experimento, 48 vacas em lactação receberam os seguintes tratamentos: 1) Dieta controle (DC) + Lac100, 2) DC + CLA, 3) Dieta com alta proteína (DAP) + Lac100 e 4) DAP + CLA. O Lac100 (sais de cálcio de óleo de soja) foi utilizado como placebo. O CLA foi protegido por encapsulação e o produto utilizado continha ~16% de CLA. No segundo experimento, 12 vacas em lactação foram avaliadas em 3 períodos: a) Basal: os animais receberam uma dieta com alto teor de fibra sem OP (dieta basal) por 12 dias; b) Suplementação: 4 vacas/grupo receberam os seguintes tratamentos: 1) Dieta com alta fibra + OP (AF+OP), 2) Dieta com baixa fibra sem OP (BF) e 3) Dieta com baixa fibra + OP (BF+OP); c) Pós-suplementação: todos os animais passaram a receber novamente a dieta basal por 12 dias. Os resultados obtidos no primeiro experimento mostraram que o CLA não foi eficientemente protegido, de forma que a redução da secreção de gordura do leite foi de pequena magnitude em relação a outros trabalhos. Da mesma forma, a proteção dos sais de cálcio de óleo de soja foi pequena, resultando em maior concentração de CLA cis-9 trans-11 (P<0,05) e menor concentração de ácido linoléico (P<0,05) no leite dos animais. Apesar da concentração do CLA trans-10 cis-12 no leite ter aumentado igualmente em resposta ao CLA e ao Lac100, o teor de gordura do leite foi menor (P<0,05) no primeiro tratamento, sugerindo a presença de outros inibidores (ou precursores) no produto utilizado. A concentração de CLA trans-10 cis-12 no leite explicou ~50% da variação da DGL, sugerindo que outros fatores afetaram a síntese de gordura do leite. Os resultados do segundo experimento demostraram, de forma inédita, que o CLA trans-9 cis-11 e o C18:1 cis-11 estão estreitamente relacionados à DGL dos animais que receberam OP. A DGL foi causada por uma ampla redução (P<0,01) da secreção tanto dos ácidos graxos sintetizados de novo quanto dos pré-formados, sugerindo que o mecanismo da DGL pode envolver a inibição de diferentes enzimas lipogênicas. O menor (P<0,01) índice de atividade da enzima &#8710;-9 dessaturase em animais que receberam OP é consistente com a idéia acima. Diferentemente do observado em resposta ao OP, a secreção de gordura do leite não foi afetada pelo tratamento BF (P>0,1). Os teores de proteína e lactose aumentaram na dieta BF e nas dietas contendo OP, respectivamente. / Diet manipulation is an effective and rapid way to change milk composition, mainly for fat content. However, mechanisms are not fully undestood in despite of progress in the area over the last decade. Nowadays, it is known that a molecule of fatty acid (CLA trans-10 cis-12) which is formed in the rumen under specific feeding situations is capable of inhibiting milk fat synthesis. However, milk fat depression (MFD) has been observed even at conditions where there is no formation of trans-10 cis12 CLA (e.g. fish oil-supplemented diets). Although CLA effects on milk fat synthesis are well-established, previous study from our group also showed an increase on milk protein content in cows fed CLA. Two trials were conducted with two main objectives: 1) to determine if an additional supply of diet protein affects milk fat synthesis in cows fed CLA and 2) to study the mechanisms involved in MFD of cows fed diets with fish oil (FO) and different fiber levels. In the first trial, 48 lactating cows received the treatments as follow: 1) Control Diet (CD) + Lac100, 2) CD + CLA, 3) High Protein Diet (HPD) + Lac100 and 4) HPD + CLA. The Lac100 (calcium salts of soybean oil) was used as a placebo. CLA was protected by encapsulation (prills) and the product contained 16% CLA. In the second trial, 12 lactating dairy cows were evaluated in three periods: a) Basal: for 12 days, all cows received a baseline diet (High fiber without FO); b) Suplementation: 4 cows/group received the treatments for 21 days: 1) High fiber diet + FO (HF+FO); 2) Low fiber diet without FO (LF) and 3) Low fiber diet + FO (LF+FO); c) Post-supplementation: cows returned to baseline diet on 12 days. Results from the first trial showed that CLA protection method was innefficient. Thus, milk fat reduction was smaller than in other studies. Protection of calcium salts of soybean oil was also small which resulted in higher cis-9 trans-11 CLA and lower linoleic acid concentrations (P<0.05) in milk from cows fed Lac100. In despite of similar milk trans-10 cis-12 CLA increase in response to CLA and Lac100, milk fat content was lower (P<0.05) in cows fed CLA. It suggests the presence of other fat inhibitors (or precursors) in the product containing CLA isomers. Moreover, concentration of milk trans-10 cis-12 CLA explained ~50% of MFD suggesting others factors influencing milk fat synthesis. Results of the second trial were inedit in showing the close association of milk trans-9 cis-11 CLA and C18:1cis-11 concentrations and FO-induced MFD. MFD resulted from a lower (P<0,01) secretion of both de novo and preformed milk fatty acids. It suggests that mechanisms of FO-induced MFD must involve the inhibition of different lipogenic enzymes. The lower (P<0.01) dessaturase activity index in cows fed FO is consistent with this hypothesis. In contrast to FO, milk fat secretion was unchanged (P>0.1) by LF diet which is consistent with low CLA trans-10 cis-12 and C18:1trans-10 concentrations in milk from cows fed this diet. Contents of milk protein and milk lactose increased (P<0.05) in cows fed LF and FO diets, respectivelly.

Os objetivos do presente estudo foram os de verificar a validade do método de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detectar e quantificar o Staphylococcus aureus em amostras de leite conservadas com bronopol oriundas de quartos mamários bovinos subclinicamente infectados, e de avaliar os efeitos da presença e da quantidade de células da bactéria sobre a contagem de células somáticas (CCS), a composição do leite (lactose, gordura, proteína bruta, proteína verdadeira e caseína), e a produção de leite de quartos mamários bovinos subclinicamente infectados pelo patógeno. Para a quantificação do S. aureus e das células somáticas bovinas por meio do qPCR, foi utilizado leite cru bovino para o preparo dos padrões como meio de diluição da inoculação seriada de células somáticas e do S. aureus ATCC 29213, e construídas as equações log10UFC = 37,86 23,54 log10CtSAU e log10CCS = 49,3 - 34,0 log10CtBMCB, com base nos resultados obtidos pelas metodologias de referência para cada procedimento. Para testar a equivalência dessas equações aos respectivos métodos de referência, determinar a sensibilidade e especificidade analíticas e a repetibilidade do método proposto, foram coletadas amostras de leite dos quartos mamários de 60 animais de 2 rebanhos leiteiros da região de Pirassununga dos quais se determinou previamente a ocorrência de casos subclínicos de mastite por S. aureus. Dos quartos mamários também foram mensuradas as produções e coletadas amostras de leite para análise de composição, diagnóstico da mastite, e determinação da sensibilidade e especificidade diagnósticas do procedimento de qPCR estabelecido no estudo. Cada amostra foi submetida à análise de composição, CCS, cultura microbiológica, contagem em placas do S. aureus, processadas para a extração do DNA genômico bovino e do S. aureus, e submetida à reação de qPCR. Para análise da concordância entre os resultados obtidos pelos métodos de referência para o diagnóstico da mastite por S. aureus e o de qPCR foi utilizado o teste Kappa. Para avaliação da equivalência das contagens obtidas pelos métodos de referência do S. aureus e de células somáticas bovinas, foi utilizado o teste das diferenças de Bland-Altman. Para a identificação do efeito da infecção subclínica pelo S. aureus sobre a composição e produção de leite do quarto mamário afetado foi utilizada a análise da variância num delineamento em parcelas subdivididas em faixas. Para estimar o grau de relação entre as contagens de S. aureus, a CCS, produção e composição do leite produzido pelo quarto mamário afetado foi utilizado o coeficiente de correlação de Pearson. A correlação entre os resultados de contagem de células somáticas bovinas determinados pelos métodos de rotina e de qPCR para a quantificação de células somáticas apresentou coeficiente r = - 0,978 (P < 0,001). A correlação entre os resultados da contagem do S. aureus ATCC 29213 determinados pelos métodos de rotina e de qPCR para a quantificação do patógeno apresentou coeficiente r = - 0,989 (P < 0,001). A especificidade analítica do qPCR para a detecção do S. aureus em amostras de leite frente a Escherichia coli, Enterococcus sp., Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, os estafilococos coagulase-negativa, e as espécies coagulase-positiva Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius foi de 100%. O método de qPCR aplicado à detecção de Staphylococcus aureus ATCC 29213 em amostras de leite é replicável e apresentou sensibilidade analítica com limite de detecção para a faixa de 10 UFC/mL à 4,2 x 106 UFC/mL. Em amostras de leite conservadas com bronopol provenientes de quartos mamários subclinicamente infectados, o S. aureus pôde ser detectado, mas não pôde ser quantificado pelo método de qPCR. Nessas amostras, a CCS pôde ser determinada de forma equivalente ao método de rotina. A CCS independe da contagem de S. aureus viáveis, mas foi observada correlação linear e negativa entre o número total de células do patógeno e a CCS. A mastite subclínica pelo S. aureus aumentou a CCS nos quartos mamários, mas não alterou a composição do leite. A doença diminuiu a produção de leite e de gordura dos quartos mamários anteriores acometidos pela infeção, mas não se observou efeito da interação entre o posicionamento da glândula e a infecção sobre a produção de leite. Houve correlação entre as concentrações de lactose (r = 0,42; P = 0,0051), de gordura (r = 0,46; P = 0,0016), de produção de gordura (r = 0,49; P = 0,001), e de leite com produção ajustada para o teor de 3,5% de gordura (r = 0,41; P = 0,006), e o número de S. aureus presentes na amostra de leite. / The objectives of this study were to verify the validity of the real-time polymerase chain reaction (qPCR) to detect and quantify Staphylococcus aureus in bronopol-preserved milk samples from subclinically infected mammary quarters, and to assess the effects of the presence and amount of the pathogen on the somatic cell count (SCC), the composition of milk and milk yield of bovine mammary quarters subclinically infected by the pathogen. In order to quantify S. aureus and bovine somatic cells through qPCR, raw bovine milk was used as a means of serial inoculation media of somatic cells and S. aureus ATCC 29213. From that, equations based on the reference methods for each procedure were built, log10UFC = 37,86 23,54 log10CtSAU and log10CCS = 49,3 - 34,0 log10CtBMCB, respectively. To test their equivalence with the reference methods, determine the analytical sensitivity and specificity, and repeatability of the proposed method, milk was sampled from quarters of 60 animals from two dairy herds in Pirassununga, where subclinical S. aureus mastitis cases had been previously diagnosed. Also, quarter milk yield had been measured and samples collected for milk composition analysis, diagnosis of mastitis, sensitivity and specificity of the procedure established in the study had been determined. Each sample was subjected to composition analysis, SCC, microbiological culture, plate counting of S. aureus, DNA extraction, and subjected to qPCR reaction. Agreement between results from reference methods and qPCR for the diagnosis of mastitis by S. aureus was assessed by Kappa test. Equivalence between S. aureus, SCC scores obtained by reference and qPCR was assessed with Bland-Altman procedures. The effect of S. aureus subclinical infection on milk composition and milk yield of affected quarters was measured using a strip plot design. To estimate the degree of relationship between the counts of S. aureus, SCC, yield and composition of the milk from affected quarters was assessed by the Pearson Correlation. Correlation between SCC determined by routine methods and qPCR was r = - 0.978 (P <0.001). Correlation between S. aureus ATCC 29213 determined by routine methods and qPCR was r = - 0.989 (P <0.001). Analytical specificity of qPCR to detect S. aureus in milk samples against Escherichia coli, Enterococcus sp., Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, coagulase-negative staphylococci and coagulase-positive species, Staphylococcus hyicus and Staphylococcus intermedius was 100%. The use of the qPCR to detect S. aureus ATCC 29213 in milk samples is replicable. Analytical sensitivity detection limit of the method ranged from 10 CFU/mL to 4.2 x 106 CFU/mL. S. aureus could be detected, but not quantified by qPCR in bronopol-conserved milk samples from subclinically infected quarters. In these samples, SCC could be determined by qPCR as it had been done by routine method. SCC was not dependent on S. aureus viable cells, but a negative linear correlation between the total number of cells of the pathogen and SCC was observed. S. aureus subclinical mastitis increased quarters SCC, but did not change milk composition. The disease decreased quarter milk and fat yield, but no interaction effect was observed between the gland positioning and S. aureus subclinical infection on milk production. Correlations between lactose (r = 0.42, P = 0.0051), fat (r = 0.46, P = 0.0016), fat yield (r = 0.49, P = 0.001), and 3.5% fat adjusted milk yield (r = 0.41, P = 0.006), and the number of S. aureus present in the milk sample were observed.

A silagem de milho é um dos principais alimentos suplementares utilizados na alimentação de gado leiteiro, no entanto, seu elevado custo de produção tem levado técnicos e produtores a buscarem outras alternativas como fonte de volumoso. O farelo de glúten de milho pode ser utilizado como fonte energética, protéica e fibrosa, substituindo parte da silagem de milho em rações para ruminantes. O presente ensaio teve por objetivo estudar o efeito da substituição de 0, 8 e 16% da MS da silagem de milho por FGM-21 em rações de vacas holandesas em lactação na produção de leite, composição do leite, parâmetros sanguíneos metabólicos, variação de peso, escore de condição corporal e a viabilidade econômica. O trabalho foi conduzido no confinamento "free-stall" do Departamento de Zootecnia da Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", Universidade de São Paulo, localizada no município de Piracicaba. As rações foram formuladas de forma que fossem isoprotéicas e isoenergéticas. Foi feita avaliação de produção de leite, composição do leite, variação de peso, escore de condição corporal e a viabilidade econômica, utilizando-se 30 vacas Holandesas com produções de leite ao redor de 25 a 30kg/vaca/dia, com média de peso de 654kg e média de escore corporal 2,8. A inclusão do FGM-21 nos dois níveis 8 e 16% aumentou a produção de leite bem como a produção de leite corrigida para 3,5% de gordura. Foi feita avaliação de parâmetros metabólicos, utilizando-se 15 vacas Holandesas pertencentes ao grupo. Os resultados para os teores de N-Uréico plasmático e de glicose plasmática não diferiram entre os tratamentos. A análise de viabilidade econômica mostrou aumento na lucratividade nos tratamentos com inclusão de FGM-21 nas rações considerando-se os preços dos alimentos na época do estudo. / Corn silage is one of the major feedstuffs used in dairy farms but its high cost has encouraged farmers to look after alternative feeds. Corn gluten feed has been used as a source of energy, protein and effective fiber in dairy rations. This study was carried out at the Departamento de Zootecnia, Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", in a free-stall facility, with 30 mid-lactation Holsteins multiparous cows, averaging 25 to 30 kg milk/day and 654 kg body weight. The objectives of this study were to evaluate the effects of replacing 0, 8 and 16% corn silage dry matter with dried corn gluten feed. Experimental diets were formulated by the NRC, 2001 and were isonitrogenous and isoenergetic. Cows fed both corn gluten feed supplemented diets produced more milk and 3.5% FCM than control animals. Milk composition and plasma urea and glucose were the same among treatments. Under the conditions of this trial, corn gluten feed was an effective replacement for corn silage, both from the nutritional and economical stand point.

O objetivo deste estudo foi avaliar diferentes concentrações de monensina sódica na ração de vacas em lactação e seus efeitos sobre o consumo e digestibilidade aparente total da matéria seca e dos nutrientes, produção e composição do leite, fermentação ruminal, síntese de proteína microbiana, parâmetros sanguíneos e resíduos de monensina no leite. Foram utilizadas 12 vacas da raça Holandesa, distribuídas em três quadrados latinos 4x4 balanceados, alimentadas com as seguintes rações: 1) Controle (C), composto por ração basal sem adição de monensina, 2) Monensina 12 (M12), adição de 12 mg/kg MS de monensina na ração, adicionada ao concentrado, 3) Monensina 24 (M24), adição de 24 mg/kg MS de monensina na ração, adicionada ao concentrado e 4) Monensina 48 (M48), adição de 48 mg/kg MS de monensina, adicionada ao concentrado. A produção de leite e o consumo de matéria seca foram mensurados diariamente durante todo o período experimental. As amostras utilizadas para análise da composição do leite foram coletadas no 16o dia de cada período experimental, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras de sangue foram coletadas em tubos vacuolizados por punção da veia e/ou artéria coccígea. As amostras de líquido ruminal foram coletadas com a utilização de sonda esofágica três horas após a alimentação matinal. A digestibilidade foi determinada por meio de indicador interno FDAi. Houve efeito linear decrescente do consumo de matéria seca, matéria orgânica, proteína bruta, extrato etéreo, carboidratos totais, fibra detergente neutro, carboidratos não fibrosos e nutrientes digestíveis totais. Não houve diferença na digestibilidade aparente total da matéria seca e dos nutrientes em função das rações experimentais, excetuando-se a digestibilidade aparente total da proteína bruta e fibra detergente neutro, que foram observados efeitos linear crescente e decrescente, respectivamente. Não houve efeito das rações experimentais sobre os valores de pH ruminal. A suplementação com monensina sódica nas dietas resultou em alteração da proporção molar de propionato no líquido ruminal, além de diminuir a relação acetato:propionato. As rações contendo monensina sódica apresentaram maior proporção molar de propionato e menor de acetato em relação à ração controle, e, de forma semelhante, apresentaram menor relação acetato:propionato. Não houve efeito das dietas experimentais nas excreções diárias totais de urina, de alantoína e de acido úrico na urina, e de derivados de purinas totais. Não houve diferença na porcentagem de alantoína nos derivados de purina, das purinas absorvidas e do nitrogênio microbiano para as rações experimentais. Foi observado aumento de produção de leite para as vacas alimentadas com as concentrações intermediárias de monensina sódica nas rações. Não houve efeito da adição de monensina sódica nas rações sobre os parâmetros sangüíneos glicose, colesterol total, proteína total, albumina, aspartato aminotransferase e &gamma;-glutamiltransferase. Foi observado efeito linear crescente com a adição de monensina sódica nas rações sobre a uréia e nitrogênio uréico do soro. Os resíduos de monensina sódica detectados no leite estão dentro do limite máximo estabelecido pela FAO/WHO. A utilização de monensina sódica nas rações de vacas leiteiras no terço médio de lactação influencia o desempenho produtivo dependendo da dose utilizada, e não resulta em resíduos no leite independentemente da dose utilizada. / This aim this study was evaluate the use of different concentrations of sodic monensin the feed of dairy cows and its effects on consumption and total apparent digestibility of dry matter and nutrients, milk yield and milk composition, ruminal fermentation, synthesis microbial protein, blood parameters and sodic monensis residues in milk. Twelve Holstein cows were allocated in three balanced Latin squares 4x4, and fed with the following rations: 1) control (C), basal diet without sodic monensin addition, 2) monensin 24 (M24), addition of 24 mg/kg DM of monensin in the ration, added to concentrate, and 3) monensin 48 (M48), addition of 48 mg/kg DM of monensin in the ration, added to concentrate. Milk yield and dry matter intake were measured daily throughout the experimental period. The samples used for analysis of milk composition were collected on the 16th day of each period, and from the two milkings. Blood samples were collected in vacuolated tubes by puncture or coccygeal vein or artery. Samples of rumen fluid were collected with use of esophageal probe three hours after the morning feeding. The digestibility was determined by means of an internal indicator iADF. There was linear effect dry matter intake, organic matter, crude protein, ether extract, total carbohydrates, neutral detergent fiber, non-fiber carbohydrates and total digestible nutrients. There was no difference on apparent total tract digestibility of dry matter, organic matter, ether extract, total carbohydrates, non-fiber carbohydrates and total digestible nutrient values observed for the experimental diets. There was no difference in total apparent digestibility of dry matter and nutrients depending on the experimental diets, except for the total apparent digestibility of crude protein and neutral detergent fiber, wich effects were observed linear ascending and descending, respectively. There was no effect for ruminal pH values. Supplementation with sodic monensin in the diets resulted inchanging the molar proportion of propionate in ruminal fluid while decreasing the acetate:propionate. The rations containing monensin had higher molar ratio of acetate propionate and smaller relation to the control diet and similary had a lower acetate:propionate ratio. There was no effect in total daily urine excretion of allantoin and uric acidin urine and total purine derivates. There was no difference in the percentage of allantoin in the purine derivates, absorbed purines and microbial nitrogen to the experimental diets. We observed increase in milk yield for cows fed the intermediate concentration of monensin in the feed. There was no effect of monensin in feed on the blood parameters glucose, total cholesterol, total protein, albumin, aspartate aminotransferase and &gamma;-glutamyltransferase. Increased linearly, with the addition of monensin in the feed on the urea and serum urea nitrogen. The detected residues of sodic monensin in milk was smaller that the maximum limit established for FAO/WHO. The use of monensin in diets cows in the middle third of lactation influences growth performance depending on the dose used, and does not result in residues in milk regardless of dose.