Introdução: O estudo dos insetos em virtude da nocividade ou benefício que oferecem ao homem é objeto da entomologia aplicada. No Brasil, a incorporação da entomologia pela saúde pública vem ocorrendo de forma gradual até os dias de hoje. A vigilância entomológica surge como uma ferramenta que possibilita sistematizar informações sobre os insetos, com a finalidade de conhecer aspectos biológicos e ecológicos que permitam definir o papel vetorial, predizer o risco de exposição da população humana aos vetores e fornecer bases técnicas para ações de controle das espécies de interesse. Embora existam meios legais para tornar a Vigilância Entomológica uma prática contínua e abrangente, essa ainda não é uma realidade no Rio Grande do Sul. Objetivo: Demonstrar a importância da entomologia em saúde pública, através das práticas de Vigilância Entomológica de mosquitos (Diptera, Culicidae), vinculadas à rotina da Vigilância Ambiental em Saúde. Métodos: Entre dezembro de 2006 e dezembro de 2008 foram realizados estudos mensais, abordando aspectos ecológicos da fauna em uma área de Mata Atlântica do litoral norte do Estado, empregando armadilhas CDC e aspirador de Nasci. Em novembro de 2008, no noroeste, foram realizadas investigações entomológicas em áreas com circulação de vírus da febre amarela, utilizando rede entomológica associada a aspirador tipo frasco e, em julho de 2006, ações de monitoramento do vírus do Nilo Ocidental em refúgio de aves migratórias no sul do Estado, com uso de aspirador de Nasci. Resultados: O trabalho possibilitou detectar 23 novos registros de mosquitos para o Rio Grande do Sul. As coletas continuadas mostraram uma distribuição sazonal das espécies, sendo o período de outubro a maio o mais indicado para atividades de levantamento e monitoramento da fauna. O papel vetorial de Haemagogus leucocelaenus foi comprovado já que o vírus da febre amarela foi novamente detectado nessa espécie. Outra importante contribuição foi o primeiro isolamento do vírus da febre amarela em Aedes serratus, sugerindo o papel dessa espécie como 5 vetor secundário do vírus. Conclusões: A Vigilância Entomológica forneceu informações e indicadores que ampliam as perspectivas sobre a capacidade e competência vetorial de algumas espécies de mosquitos do Rio Grande do Sul, evidenciando a importância dessa ferramenta / Introduction: The study of insects, due to the damage or benefit they give to humans, is an object of applied entomology. In Brazil, the incorporation of entomology by public health has been occurring gradually until today. The Entomological Surveillance appears as a tool that provides the organization of information about the insects, aiming to know biological and ecological aspects that allow the definition of the role of vectors, the prediction of the risk of exposure of the human population to the vectors, and the provision of technical foundation in the control of key species. Although there are legal ways to turn the Entomological Surveillance in a continuous and broad practice, this is not real in Rio Grande do Sul. Objective: To demonstrate the importance of the entomology in public health through the practice of Entomological Surveillance of mosquitoes (Diptera, Culicidae), linked to the routine of the Health Environmental Surveillance. Methods: Between December 2006 and December 2008 systematic studies were carried out and focused on ecological aspects of the fauna in an Atlantic Forest area on the north coast of the state, using CDC traps and Nasci vacuum. In November 2008, in the northwestern region, entomological investigations were performed in areas with circulation of the yellow fever virus, using an entomological net associated with a bottle-type vacuum. In July 2006, monitoring of the West Nile virus in a refuge of migratory birds was carried out using a Nasci vacuum. Results: The study promoted the detection of 23 new records of mosquitoes for Rio Grande do Sul State. Systematic sampling demonstrated a seasonal distribution of the species, with the period between October and May adequate to activities related to fauna surveying and monitoring. The role of Haemagogus leucocelaenus as a vector was demonstrated since the yellow fever virus was again detected in this species. Another important contribution was the discovery of the first isolate of the virus in Aedes serratus, suggesting a role of this 7 species as secondary vector of the virus. Conclusions: The Entomological Surveillance gave information and indicators that broadened perspectives on the vector capacity and competency of determined mosquito species in Rio Grande do Sul, highlighting the importance of this tool

Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.

Introdução: Dos arbovírus transmitidos no Brasil, os Flavivirus apresentam destaque por causarem o maior número de infecções e doenças no homem e pela gravidade das doenças que provocam. A cidade de São Paulo possui áreas verdes, representadas por parques municipais em que existem lagos, aves e mamíferos. Esses locais são frequentados pela população e podem servir de refúgio para mosquitos que infestam a área urbana. Alguns trabalhos revelam a ocorrência de espécies de mosquitos conhecidas como vetoras de Flavivirus em tal cidade, o que pode favorecer o aparecimento de casos e transmissão de doenças causadas por este tipo de vírus. No entanto, a presença de Flavivirus infectando tais artrópodes não é conhecida. Objetivo: Identificar presença de Flavivirus em mosquitos (Diptera: Culicidae) provenientes de áreas verdes da cidade de São Paulo. Método: Sete parques municipais localizados em diferentes regiões da cidade foram selecionados para o estudo. Foram realizadas coletas de mosquitos mensais em cada parque no período de março de 2011 e fevereiro de 2012. As armadilhas utilizadas foram: aspirador, Shannon e CDC-CO2. Os mosquitos foram transportados para o laboratório em gelo seco, identificados em mesa fria e agrupados em \"pools\" de até 10 fêmeas não ingurgitadas, segundo espécie, data e local de coleta. Fêmeas ingurgitadas foram armazenadas individualmente. As amostras foram submetidas à extração de ácidos nucleicos, seguida de RT-PCR em tempo real para amplificação de fragmento de aproximadamente 200pb do gene NS5 de Flavivirus. Amostras positivas foram encaminhadas para sequenciamento e análises filogenéticas. Resultados: Dentre as 5.213 fêmeas não ingurgitadas (818 pools) e as 778 fêmeas ingurgitadas coletadas, ocorreu presença de onze gêneros de Culicídeos, sendo mais frequentes Culex e Aedes. Dezenove pools de fêmeas não ingurgitadas obtiveram resultado positivo para Flavivirus. Análises filogenéticas mostraram presença de RNA relacionado à Aedes flavivirus (AEFV) em dois pools de Aedes e à Culex flavivirus (CxFV) nos demais pools, todos de Culex. Conclusões: CxFV e AEFV estão presentes em mosquitos dos gêneros Culex e Aedes, respectivamente, coletados em parques municipais da cidade de São Paulo. Embora flavivírus patogênicos ao homem não tenham sido encontrados no presente trabalho, recomenda-se vigilância de flavivírus nas áreas estudas, visto que elas possuem presença de mosquitos vetores e hospedeiros vertebrados, ou seja, elementos necessários para a transmissão destes vírus. / Introduction: Among the arboviruses transmitted in Brazil, Flavivirus are noteworthy once they cause the largest number of infections and diseases in humans and also because they can cause serious illnesses. In the city of São Paulo there are green spaces, represented by city parks in which lakes, birds and mammals are found. The population visits those places, which can also be a refuge for mosquitoes that infect the urban area. Some studies reveal the occurrence of mosquitoes species known to be vectors of Flavivirus in this city, what can contribute to the emergence of cases and transmission of diseases caused by this kind of virus. However, the presence of Flavivirus infecting those arthropods is not known. Objective: To Identify infection by Flavivirus in mosquitoes (Diptera: Culicidae) collected in São Paulo\'s city parks. Method: Seven city parks located in different places of the city were selected for the study. Monthly mosquito collections were carried out in each park from March 2011 to February 2012. The traps employed were aspirator, Shannon and CDC-CO2. The mosquitoes were transported to the laboratory on dry ice. Identification was performed in a chill table. Up to 10 non-engorged females were pooled according to specie, date and place of collection. Engorged females were stored individually. Nucleic acids were extracted and submitted to real time RT-PCR that amplifies a 200pb fragment of NS5 gene of Flavivirus. Positive samples were sequenced and phylogenetic analyses were performed. Results: Eleven genus of Culicidae were found among the 5,213 non engorged females (818 pools) and the 778 engorged females. Culex and Aedes were the most frequent collected genus. Nineteen non engorged female pools had positive results for the presence of Flavivirus RNA. Phylogenetic analyses showed the RNA found was related to Aedes flavivirus (AEFV) in two pools of Aedes and to Culex flavivirus (CxFV) in the other pools, all of them consisting of Culex. Conclusion: CxFV and AEFV are present in mosquitoes Culex and Aedes, respectively, collected in São Paulo\'s city parks. Flavivirus of medical importance were not detected. Although, once there are species of mosquitoes that can act as vectors of pathogenic Flavivirus and vertebrate hosts, which are required for the transmission cycle of those virus, surveillance is recommended in the studied areas.

Orientador: Carlos Fernando Salgueirosa de Andrade / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T12:43:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_GilciaAparecidadeCarvalho_D.pdf: 2420692 bytes, checksum: 389c3c5a059387fa98ae9be752bd8f0e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Mosquitos pertencentes aos gêneros Culex, Aedes, Anopheles, Mansonia, Psorophora e Coquillettidia são susceptíveis à infecção por Dirofilaria immitis (Leidy, 1856), podendo transmitir o filarídeo aos cães e gatos. Os vetores de D. immitis no Brasil são conhecidos apenas nos Estados do Rio de Janeiro e do Maranhão, fazendo-se necessária a investigação da susceptibilidade e da competência vetorial de espécies existentes nos demais Estados brasileiros. O presente trabalho teve por finalidade verificar a freqüência de infecção por D. immitis em cães domiciliados na Região Metropolitana do Recife, bem como avaliar a susceptibilidade e a competência vetorial de Culex quinquefasciatus Say, 1823, Aedes aegypti Linnaeus, 1762 e Ae. albopictus Skuse, 1894 provenientes de área endêmica e não endêmica para a transmissão desse filarídeo, em condições experimentais. A resposta imune humoral (melanização) apresentada pelos mosquitos expostos à infecção também foi avaliada. Para a realização do inquérito epidemiológico, 816 amostras de sangue canino foram coletadas nas áreas costeiras da Região Metropolitana do Recife e no município de Bezerros, agreste do Estado de Pernambuco. As amostras sangüíneas foram analisadas por meio de teste parasitológico para a pesquisa de microfilárias de D. immitis, utilizando-se o método modificado de Knott. Para a avaliação da competência vetorial Cx. Quinquefasciatus população RECIFE, Ae. aegypti populações RECIFE, UNICAMP e linhagem ROCKFELLER e Ae. albopictus população RECIFE foram criados em insetário sob condições controladas (28 '+ ou ¿' '1 GRAU C¿ e 80 ' + ou ¿' 5% de umidade relativa do ar). As fêmeas das espécies estudadas foram alimentadas com sangue canino contendo diferentes densidades de microfilárias de D. immitis, por meio de membrana artificial confeccionada com pele fresca de animal. Para Cx. quinquefasciatus, que é uma espécie ornitofílica, foi utilizada pele de codorna, e para Ae. aegypti e Ae. albopictus a membrana artificial foi confeccionada com pele de rato. Os resultados obtidos no estudo mostraram freqüência de 3,61%, 7,89% e 7,69% de cães infectados na Ilha de Itamaracá, Igarassu e Recife, respectivamente. Após as infecções experimentais, observou-se que a mortalidade de Cx. quinquefasciatus não foi influenciada pela exposição a diferentes densidades de microfilárias de D. immitis (F = 0,0615, p>0,05) e os índices encontrados variaram de 8,9% a 36,25%. Os índices de eficiência vetorial (IEV) apresentados por Cx. quinquefasciatus população RECIFE variaram de 7,8% a 56,5%. Em relação à razão de infecção, o maior índice foi encontrado no grupo de fêmeas expostas a densidade de 1913 microfilárias/ml, entretanto, não foi influenciado pela taxa de ingurgitamento das fêmeas (F=3,2937, p>0,05). Por meio de melanização, Cx. quinquefasciatus população RECIFE, limitou a intensidade do parasitismo, promovendo o equilíbrio da relação parasito-hospedeiro e deste modo passando a ser um excelente vetor de D. immitis na Região Metropolitana do Recife. Dentre as espécies de Aedes estudadas, verificou-se que a população RECIFE de Ae. aegypti apresentou maior mortalidade (70,7%) ao final dos experimentos, apresentando diferença estatisticamente significante (p<0,01) em relação à linhagem ROCKFELLER, população UNICAMP e Ae. albopictus população RECIFE, que não diferiram entre si (p>0,05). Em relação ao índice de eficiência vetorial (IEV) foi detectado um índice de 7,4% para a linhagem ROCKFELLER e uma variação de 20,0% a 53,8% para as populações de Ae. aegypti e 25,2% para Ae. albopictus população RECIFE. O maior número de larvas de D. immitis infectantes na probóscide foi apresentado por Ae. albopictus população RECIFE, além de uma baixa mortalidade. Desta forma, esta população mostrou-se susceptível ao filarídeo e por apresentar baixa mortalidade, foi considerada como a melhor vetora. Ae. aegypti população RECIFE não apresentou reação de melanização e apresentou mortalidade acentuada, enquanto que Ae. aegypti população UNICAMP e linhagem ROCKFELLER mostraram-se refratárias à infecção por D. immitis / Abstract: Mosquitoes belong to the genus Culex, Aedes, Anopheles, Mansonia, Psorophora and Coquillettidia are susceptible to infection of Dirofilaria immitis (Leidy, 1856) and some of them serve as vectors heartworm disease in dogs and cats. Although the potential vectors of canine heartworm in Brazil have been recorded only in Rio de Janeiro and Maranhão State and no more date are available. The objective of this study was to verify the frequency of heartworm infection in dogs in metropolitan region of Recife and also identify under experimental conditions their ability of Culex quinquefasciatus Say, 1823, Aedes aegypti Linnaeus, 1762 and Ae. albopictus Skuse,1894 from enzootic and non enzootic areas to become infected with and transmit D. immitis. After the experimental infection of mosquitoes, the melanization response to larvae of D. immitis also was evaluated. The survey study were performed on a total of 816 dogs from costal areas of Metropolitan Region of Recife and Bezerros County, located in agreste area of Pernambuco State. Whole blood samples were collected from all animals and were examined for the presence of microfilariae of D. immitis by the modified Knott test. To verify the vector competence of Cx. quinquefasciatus RECIFE population, Ae. aegypti RECIFE, UNICAMP populations and also ROCKFELLER strain and Ae. albopictus RECIFE population, the mosquitoes were reared under constant insectary conditions (28 '+ or ¿' '1 DEGREE C¿ and 80 '+ or ¿' 5% relative humidity). Females mosquitoes, were exposed to blood¿s dog with diferents density of D. immitis microfilariae by artificial feeding apparatus made by fresh animal skin. For this puporse, ornithophilic Cx. quinquefasciatus was feeding by skin quail menbrane, and for the Ae. aegypti and Ae. albopictus the artificial membrane was made by rat skin. The results of the survey study showed 3.61%, 7.89%, and 7.69% of heartworm infection frequency in dog from Itamaracá Island, Igarassu and the city of Recife respectively. The mortality of Cx. Quinquefasciatus RECIFE population observed in the vector competence study did not show influence of different density of microfilariae of D. immitis (F = 0.0615, p>0.05) and the mortality rate was 8.9% to 36.25%. The vector efficiency (VE) rates of Cx. quinquefasciatus RECIFE population were 7.8% to 56.5%. The higher infection rate was showed in females feeding with blood containing 1913 mf/ml, but no influence was observed in engorged females. The melanization response observed in Cx. quinquefasciatus was important for vector survival by limiting the number of larvae, acting as an important mechanism of parasitic-host interactions. The data indicate that the Cx. quinquefasciatus RECIFE population should is an excelent vector of D. immitis at metropolitan region of Recife. Significant difference (p<0.01) was observed in the mortality rates between the RECIFE population of Ae. aegypti, UNICAMP population, ROCKFELLER strain, and Ae. albopictus RECIFE population. Although no difference were observed between Ae. aegypti ROCKFELLER, UNICAMP and Ae. albopictus RECIFE population. The vector efficiency (VE) rates of Ae. aegypti and Ae. albopictus RECIFE population were 7.4% to 53.8% and 25.2% respectively. Not only the high number of infective third stage larvae of D. immitis in mouth of mosquitoes but also low mortality was observed in Ae. albopictus RECIFE population. This data showed that this specie is the best vector of heartworm infection in the study area. No melanization response was observed in Ae. Aegypti RECIFE population but high mortality was reported. The UNICAMP population and ROCKFELLER strain of Ae. aegypti were refractory to infection to D. immitis / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Introdução: Os culicídeos (insetos da Ordem Diptera, Família Culicidae), vulgarmente conhecidos como pernilongos, são vetores de diversos agentes patogênicos de doenças humanas e animais e fator de incômodo à população em geral. Os recursos lançados com o objetivo de controlar as pragas urbanas utilizando compostos químicos devem ser feitos com o máximo de parcimônia a fim de se evitar a contaminação ambiental e dificultar o aparecimento de linhagens resistentes dos vetores e pragas urbanas aos biocidas empregados. Objetivos: Estabelecer índices de infestações de Culex quinquefasciatus baseados na contagem de insetos adultos e de suas formas imaturas, coletados em piscinões e propor instrumento para estimar o incômodo provocado pelas picadas na população do entorno. Materiais e Métodos: O período estabelecido de coleta de espécimes de mosquitos e dados provenientes foi de agosto de 2014 a maio de 2015. Foram escolhidos dois piscinões do Município de Santo André, o Piscinão do Bairro Bom Pastor e o Piscinão da Faculdade de Medicina (Valparaíso) para ser a área de estudo. Esta pesquisa propõe a construção de alguns índices de infestação da espécie em estudo baseado em duas vertentes: 1) Foi feito o diagnóstico por meio de contagem de pernilongos conduzida na área dos piscinões. Foram contados e identificados os exemplares adultos deste mosquito que foram coletados por meio de aspiração nos abrigos e a aspiração dentro de caixas de repouso que foram instaladas nas áreas dos piscinões e contagem de formas imaturas (larvas e pupas), recolhidas dos criadouros aquáticos dos piscinões. 2) Foram analisadas as reclamações provindas dos munícipes através do Sistema de Informação de Atendimento da Prefeitura Municipal, dentro de um raio limítrofe correspondente à área de influência de cada reservatório. Resultados: Foram coletados 1896 exemplares adultos na atividade de aspiração nos abrigos, 621 exemplares imaturos e 67 exemplares adultos aspirados das caixas de repouso. Identificados o sexo dos exemplares adultos e verificou-se a predominância de machos. A partir da amostragem efetuada com observância das variáveis naturais e antrópicas, e análise das reclamações, foram criados e aplicados três índices de infestação (Densidade de Imaturos por Litro, Índice de Mosquitos Aspirados por Minuto e Índice de Mosquitos Aspirados das Caixas de Repouso) e um índice de reclamações (Índice de Reclamações Correspondentes). Conclusões: Através da análise de aspectos sazonais, os índices mostram-se ferramentas importantes para as intervenções de controle desta praga. O método das caixas de repouso mostrou-se pouco produtivo se comparado aos outros índices. / Introduction: Culicids (Diptera: Culicidae) usually known as mosquitoes, are vectors of several animal and human diseases pathogenic agents and also are nuisance factors to general population. The features launched with the objective to control the urban pests using chemicals must be made with maximum parsimony to avoid environmental contamination and also hamper the emergence of resistant strains to biocides used. Objectives: To establish infestation levels of Culex quinquefasciatus based on the insect count adults and their immature forms, collected in big pools and propose tool to estimate the nuisance caused by the bites on the surrounding population. Materials and Methods: The established period collection of mosquito specimens and originated data was from August 2014 to May 2015.For the study area, were chosen two reservoirs of the Municipality of Santo André, São Paulo, Brazil, from the reservoir of the Bom Pastor and the reservoir district, School of Medicine, located in Valparaiso neighborhood. This research proposes the construction of some infestation rates of target species based on two fronts: 1) it was diagnosed by mosquitoes count conducted in the area of big pools. They were counted and identified the adult specimens of this mosquito were collected through aspiration in shelters and aspiration within resting boxes were installed in the areas of big pools and count immature forms (larvae and pupae), collected in aquatic breeding of big pools . 2) Complaints were analyzed stemmed from residents through the Information Service of the City System within a radius corresponding to the boundary area of influence of each reservoir. Results: 1896 adult specimens were collected in the suction activity in shelters, 621 immature specimens and 67 adult specimens aspirated the resting box. Identified the sex of adult specimens and were a predominance of males. From the sampling done in compliance with the natural and anthropogenic variables, and analysis of complaints they were created and applied three indices of infestation (Immature Density per Liter, Mosquitoes Aspirates per Minute Index and Mosquitoes Aspirates from Resting Boxes) and one of complaints (Correspondents Complaints Index). Conclusions: Through the analysis of seasonal aspects, the indexes showed how important tools for control interventions of this pest. The method of resting boxes proved to be unproductive compared to other indices.

Objetivo - Estabelecer um método para produção em massa do mosquito Culex (Culex) quinquefasciatus em laboratório, com o intuito de fornecer subsídio ao controle populacional desta espécie por meio da liberação de machos estéreis. Métodos Foi fundada uma colônia de Cx. quinquefasciatus a partir de imaturos coletados em janeiro de 2013 no rio Pinheiros, São Paulo/SP, Brasil. Os mosquitos adultos tiveram seus pesos secos mensurados e o desenvolvimento avaliado como o tempo para atingirem o estágio de pupa e a fase adulta. No primeiro experimento foram testadas quatro dietas diferentes (ração de peixe, ração canina, mistura de 50 por cento de ração de peixe e 50 por cento de ração canina ou uma mistura de 33,33 por cento de ração de peixe, 33,33 por cento de ração canina e 33,33 por cento de leite em pó) e três temperaturas (27 ± 2°C, 23 ± 2°C e 20 ± 2°C). No segundo experimento testaram-se diferentes quantidades de ração de peixe, densidades larvárias, volume e altura da coluna dágua Resultados - No primeiro experimento não houve diferença estatística significante entre as quatro dietas testadas e o tempo de formação até a fase de pupas e para o peso seco dos adultos. No entanto a ração de peixe proporcionou a menor mortalidade. A maior temperatura (27 ± 2°C) diminuiu o tempo do ciclo de vida dos imaturos, porém gerou adultos com pesos secos menores. No segundo experimento, a condição 0,5 mg/larva, 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C ofereceu boa produção em massa e gerou maiores taxas de desenvolvimento, menor mortalidade de imaturos e maior peso seco em adultos. Conclusão - Não foi definida uma dieta ideal para uso na produção em massa, considerando os parâmetros analisados. A dieta menos custosa é a ração canina, porém deve ser moída manualmente ou em máquina, tornando a ração de peixe mais eficiente para ser diretamente aplicada nas bandejas de produção. O estudo sugere que a melhor condição para a produção massa do Cx. quinquefasciatus foi 0,5 mg de ração de peixe/dia por larva num volume de 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C. O estudo sugere que esta técnica pode auxiliar no controle populacional dessa espécie / Objective To establish a method for mass rearing of Culex (Culex) quinquefasciatus mosquitoes in laboratory, in order to provide subsidy to the population control of this species through the release of sterile males. Methods - A colony of Cx. quinquefasciatus was founded from immature collected in January 2013 in the Pinheiros River, São Paulo/SP, Brazil. Adult mosquitoes had their dry weights measured and the development was evaluated as the time to reach pupae and adult phase. In the first experiment it was tested four different diets (fish food, dog food, a mix of 50 percent fish and 50 percent dog food or a mix of 33.33 percent fish 33.33 percent dog food and 33.33 percent milk powder) and three temperatures (27 ± 2°C, 23 ± 2°C and 20 ± 2°C). In the second experiment it was tested several conditions of food amounts (mg/day), larvae densities (ml of water/larva) and water column height that would generate high development rate, low immature mortality and high adult dry weight. Results - In the first experiment there was no statistically significant difference in the time for the development to pupae stage or in the total dry weight of adults among the four experimental diets. However, fish food provided less immature mortality. The highest temperature (27 ± 2°C) decreased the time of the immature life cycle, but generated adults with lower dry weights. In the second experiment, the condition 0.5 mg/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C offered good mass rearing and generated higher development rate, lower immature mortality and higher adult dry weights. Conclusion No ideal diet was defined for mass rearing in the parameters analyzed. The less expensive diet was the dog food, but this should be milled by hand or machine, which makes the fish food more practical in the production trays. This study suggested that the best condition for mass rearing of Cx. quinquefasciatus mosquitoes was 0.5 mg of daily fish food/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C. The study suggests that this technique can assist in population control of this species

Rondônia apresenta área com rica diversidade de artrópodes, porém pouco se conhece sobre a transmissão de arbovírus por estas espécies. O presente trabalho visou detectar arbovírus, por meio da RT-PCR e da Duplex RT-PCR, nas espécies de dipteros coletados no Estado, bem como caracterizá-los pela reação de sequenciamento. A RT-PCR e a Duplex RT-PCR detectaram as suspensões dos vírus Mayaro e Oropouche até 104 e 101 TCID50/mL, respectivamente, porém o vírus Dengue 2 em pools contendo menos de três mosquitos infectados foi negativa. O controle endógeno foi detectado em 66,8 % das amostras, sendo que, em pools contendo entre um e três mosquitos, a detecção foi aproximadamente metade da detecção nos pools contendo entre 11 e 15. Em 0,66 % dos pools foi encontrado o vírus Oropouche e em outros 0,66 %, o vírus Cacipacoré. O vírus Oropouche foi detectado em Coquillettidia sp. e Deinocerites sp., enquanto o vírus Cacipacoré foi encontrado em Anopheles sp. e Culex sp. As técnicas possibilitaram a detecção dos arbovírus pesquisados nos pools coletados em Rondônia. / The Rondônia state has an area with rich arthropods diversity although the knowledge about the arboviruses transmition for these species is poor. The present work aimed to detect arboviruses through RT-PRC and RT-PCR Duplex in the diptera species collected in the region as well as their characterization through the sequence reaction. The RT-PRC and RT-PCR Duplex detected the Mayaro and Oropouche virus suspensions until 104 e 101 TCID50/mL respectively, although it was negative for the Dengue 2 virus in pools containing less than three infected mosquitoes. The endogenous control was detected in 66,8 % of samples and from pools containing from one to three mosquitoes the detection rate was approximately half from that obtained from pools with 11 to 15 mosquitoes. Oropouche virus was found in 0,66 % of pools and Cacipacore virus also in 0,66 % of pools. Oropouche virus was detected in Coquillettidia sp. and Deinocerites sp. while Cacipacoré virus was found in Anopheles sp. and Culex sp. The techniques allowed the detection of examined arboviruses in the pools collected from Rondonia.

Durante o repasto sanguíneo, fêmeas do mosquito Aedes aegypti inoculam saliva na pele de seu hospedeiro vertebrado, modulando suas funções imunológicas e facilitando a transmissão de doenças. Alguns componentes presentes na saliva de Ae. aegypti já foram descritos e caracterizados como alérgenos. No presente estudo, desenvolvemos um modelo de inflamação alérgica em camundongos expostos naturalmente às picadas de mosquitos Ae. aegypti. Nossos dados revelam que a sensibilização e posterior desafio com componentes salivares desse mosquito induz inflamação pulmonar com aumento no número de eosinófilos, células T CD4+, CD19+ e citocinas IL-4 e IL5 no lavado broncoalveolar, produção de muco e colágeno no pulmão, anticorpos IgE total e IgG1 e IgG2a específicos no soro, porém, sem alterações no padrão respiratório e reatividade das vias aéreas. Em conjunto, os resultados gerados neste trabalho confirmam o desenvolvimento de uma resposta alérgica diferente dos modelos clássicos dessa área com a presença de elementos que sugerem tanto um perfil Th1 quanto Th2 de resposta. / During blood feeding, Aedes aegypti female mosquitoes inoculate saliva into the skin of their vertebrate hosts, modulating their immune functions and facilitating disease transmission. Some components presents in the saliva of Ae. aegypti have been described and characterized as allergens. In this study, we developed a model of allergic inflammation in mice naturally exposed to Ae. aegypti mosquito bites. Our data show that the sensitization and subsequent challenged with this mosquito salivary components induces lung inflammation with increased numbers of eosinophils, T CD4+ and CD19+ cells and IL-4 and IL-5 in bronchoalveolar lavage, mucus and collagen production in lung, total IgE and specific IgG1 and IgG2a antibodies in serum, but no changes in breathing pattern and in the airways reactivity. Together, the results generated in the present study confirm the development of an allergic response that is different from classic models of this area with the presence of components which suggest both Th1 and Th2 responses.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-19T15:30:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE KAYNARA CECILIA NERY RABELO.pdf: 2652314 bytes, checksum: e260b3caf6e8bee65596000a545c79d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-19T15:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE KAYNARA CECILIA NERY RABELO.pdf: 2652314 bytes, checksum: e260b3caf6e8bee65596000a545c79d1 (MD5) Previous issue date: 2015-06-30 / Insetos e outros artrópodes quando em locais de crime podem servir como vestígio criminal. O advento da genética forense pode auxiliar na obtenção do DNA humano a partir destes insetos, podendo relacionar o suspeito a cena do crime. Desta forma, esta pesquisa objetivou a obtenção e a comparação do perfil genético humano extraído de mosquitos hematófagos com diferentes metodologias para a extração de DNA, analisando os seguintes fatores: variação temporal para obtenção dos perfis genéticos após a hematofagia; a obtenção e a comparação dos perfis de DNA humano do sangue proveniente do trato digestivo dos mosquitos hematófagos com as amostras referências (saliva) de voluntários; influência da amônia, ácido lático e tipo sanguíneo, além da temperatura corporal dos voluntários e a relação na atratividade dos mosquitos e consequente obtenção do material genético; avaliou-se também a mistura de perfis genéticos provenientes de um único mosquito e o intervalo temporal após a hematofagia. Para a análise da comparação das extrações foi utilizado o kit DNA IQTM ,a resina Chelex® 100 e extração com NaOH; e para as outras variáveis em estudo utilizou-se somente o DNA IQTM. A quantificação foi realizada com o Quantifiler® Duo e a amplificação com o kit AMPFlSTR Identifiler® Plus® PCR, que analisou 15 loci STR e amelogenina. A quantificação para o estudo das misturas de DNA nos mosquitos foi realizada com PowerPlex 16HS System. Os dados foram analisados através do programa estatístico PATCAN v. 1.2 software e para a análise das misturas foi utilizado o programa DNA MIX v. 3.2 software. Os resultados demonstraram que o uso do DNA IQTM foi melhor quando comparado a resina Chelex® 100, com obtenção de perfis viáveis em até 72h após a refeição sanguínea. Não foi obtido perfil de DNA quando utilizado NaOH. Os resultados demonstraram também uma confrontação positiva entre o sangue encontrado no trato digestivo dos mosquitos e o material genético cedido pelos voluntários, como amostra referência. As análises bioquímicas demonstraram que o tipo sanguíneo com maior número de obtenção de perfil genético foi o tipo O; além disso, foi constatado valores de normalidade para o exame de lactato, mas para a análise de amônia foi obtido DNA também com valores maiores que o padrão de referência para este tipo de exame, tanto em homens quanto em mulheres. Houve obtenção de DNA nas temperaturas corporais registradas entre 36ºC a 37º C. Foi observado também que mistura de DNAs humano pode ser detectado a partir de um único mosquito hematófago. Desta forma, os resultados demonstraram que os mosquitos hematófagos quando encontrados em cenas de crimes tem efetivo valor forense. / Insects and others arthropods can be used as traces when located in the crime scene. The advent of forensic genetic can assist in obtaining human DNA from these insects, relating the suspect to the crime scene. So, this research aimed the obtainment and the comparison of the human gene profile extracted for the hematophagous mosquitoes with different methodologies to the DNA extraction, analyzing the following factors: temporal variation to the obtainment of the genetic profile after the hematophagy; obtainment and comparison of the human gene profile from the hematophagous mosquitoes´ digestive tract with the volunteers´ samples (saliva); influence of ammonia, lactic acid and blood type, besides the volunteers’ body temperature and the relation on mosquitoes´ attractiveness and genetic material obtainment; the compound of the genetic profile from one mosquito and temporal intermission after hematophagy was also evaluated. DNA IQTM, resin Chelex® 100 and extraction with NaOH was used to the analyses of the extract comparison. The quantification was held with Quantifiler® Duo and the amplification with AMPFlSTR Identifiler® Plus® PCR kit, that analyzed 15 loci STR and amelogenin. The quantification to study the compound of DNA in the mosquitoes was held with PowerPlex 16HS System. Data were analyzed through statistic program PATCAN v. 1.2 software and to analyze the profiles mixtures DNA MIX v. 3.2 software program was used. The results showed that the use of DNA IQTM was typical when compared with Chelex® 100, and success in gene amplification with obtainment of viable profiles up to 72 hours after blood meal. DNA profile was not obtained when used NaOH. The results also showed a positive confrontation between blood found in the mosquitoes´ digestive tract and the material assigned by the volunteers, with reference sample. Biochemical analysis demonstrated that the blood type with bigger obtainment number obtained profile gene was type O; besides that the human DNA profiles were achieved from hematophagous mosquitoes when compared with the correspondent biochemical analysis of the volunteer found normal values to lactate exam, but to ammonia analysis was obtained DNA with higher values than the reference standard to this type of exam, in both gender. There was DNA obtainment from body temperatures registered between 36°C to 37°C. It was also observed that human DNA compound can detected through a only single hematophagous mosquito. With that the results showed hematophagous mosquitoes when found in the crime scene have effective forensic value.

Mosquitos transgênicos incapazes de transmitir malária podem ser um controle alternativo, mas atualmente não estão disponíveis. O estudo da interação mosquitopatógeno é importante para melhorar o desenho de genes. A proteína circumsporozoita (CSP) tem dois domínios conservados que podem estar envolvidos na penetração dos esporozoítos na glândula salivar. Nosso objetivo foi expressar peptídeos contendo essas regiões na hemolinfa do mosquito usando o sistema de expressão transiente vírus Sindbis e a tecnologia de transgênese. Se a CSP está envolvida neste processo, os peptídeos competirão com spz impedindo a penetração. Cinco vírus sindbis e quatro linhagens transgênicas foram construídos e desafiados por P. gallinaceum. Nossos resultados mostram que os peptídeos não impediram a penetração de spz na glândula salivar, principalmente porque os peptídeos recombinantes não foram produzidos ou detectados. Aprimorar o desenho de genes, usando a otimização de códons e outras tecnologias, será essencial para a expressão de proteínas exógenas em mosquitos transgênicos. / Transgenic mosquitoes that impair malaria transmission can be an alternative control but currently an effective line is not available. A better understanding of mosquito interaction with pathogens is very important to improve refractory transgene design. Circumsporozoite protein (CSP) has two conserved domains that could be involved in spz penetration into mosquito salivary glands. Our aim was to express peptides encompassing these conserved regions in the mosquito hemolymph using Sindbis virus transient expression system and transgenesis technology. If CSP is involved in this process these peptides will compete with sporozoites impairing its penetration. Five Sindbis virus and four transgenic lines were constructed and challenged with P. gallinaceum. Our results showed these peptides could not impair sporozoites penetration in salivary glands, mainly because the recombinant proteins could not be produced or detected. Improving transgene design using codon usage and other technologies will be essential for expressing foreign proteins in transgenic mosquitoes.