Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-13Bitstream added on 2014-06-13T18:07:36Z : No. of bitstreams: 1 oliveirafilho_jp_me_botfmvz.pdf: 530346 bytes, checksum: a5786839360436ee3d174905223904f6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A diarréia é considerada uma das principais causas de doença e mortalidade de bezerros neonatos. Foram colhidas 100 amostras fecais diarréicas e 30 amostras fecais não diarréicas, de bezerros da raça Nelore com até 60 dias de idade para a detecção dos enteropatógenos Salmonella sp., Escherichia coli, rotavírus, coronavírus, Cryptosporidium spp. e ovos de helmintos. O diagnóstico foi realizado respectivamente, pela semeadura em Ágar Salmonella Shigella, Ágar sangue ovino, MacConkey e aglutinação em látex para detecção das E. coliK99+, eletroforese em gel de poliacrilamida, semi-nested PCR, Ziehl-Nielsen modificado e McMaster. Detectaram-se enteropatógenos em 79% das amostras diarréicas e 70% das amostras sem diarréia. No grupo com diarréia, a E. coli (69%) foi o agente mais isolado, seguido do Cryptosporidium spp. (30%), coronavírus (16%) e rotavírus (11%). No grupo controle, a E. coli, Cryptosporidium spp e o coronavírus foram detectados respectivamente em 66,66%, 10% e 3,33% das amostras. A Salmonella sp. e estrongilídeos não foram encontrados em nenhum dos grupos. A fímbria K99 só foi verificada nas cepas de E. coli isoladas de bezerros com diarréia (5.8%). Entre os antimicrobianos testados a enrofloxacina, norfloxacina e gentamicina foram os mais efetivos. Onfalopatias estavam presentes em 43% dos bezerros com diarréia e ausentes nos bezerros do grupo controle. O peso aos 210 dias de vida dos bezerros foi similar nos grupos com e sem diarréia. / Diarrhea is considered as one of the main causes of disease and mortality in newborn calves. Fecal samples from 100 diarrheic and 30 fecal samples from non-diarrheic Nelore calves less than 60 days old were collected to detect Salmonella sp, Escherichia coli, rotavirus, coronavirus, Cryptosporidium ssp. and helminthes eggs. The diagnostic techniques employed were, respectively, culture in agar Salmonella Shigella, ovine blood-agar, McConkey and latex agglutination test to detected E. coliK99+, polyacrylamide gel eletroforesis, semi-nested PCR, Ziehl-Nielsen and McMaster tets. Enteropathogens were detected in 79% diarrheic samples and 70% non diarrheic samples. Among diarrheic calves the Escherichia coli (69%) was the most common agent found, following the Cryptosporidium spp. (30%), coronavirus (16%) and rotavirus (11%). In the control group, E. coli, Cryptosporidium spp and coronavirus were detect in 66,66%, 10% and 3,33% of samples respectivelly. Salmonella sp. and strongylids weren t found on any groups. The K99 fimbrial only was detected only in E. coli strain isolated from diarrheic calves (5,8%). Among the antimicrobials tested, enrofloxacin, norfloxacin and gentamicin, were most effective. Umbilical diseases were detected in 43% of diarrheic calves and not detected in calves of control group. The weight at 210 days old calves was similar in diarrheic and non diarrheic calves.

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Daniel Bartole de Sousa / Resumo: Tendo em vista, a incidência de problemas fetais observados no momento do parto de animais produzidos in vitro (PIV) e a escassez de literatura nesta área, o presente estudo teve por objetivo determinar os níveis de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-), interferon-gama (IFN-), interleucina-6 (IL-6) e IL-8 no fluido amniótico de bezerros oriundos de PIV comparando com aqueles obtidos pela transferência de embrião convencional e inseminação artificial no momento do parto, na tentativa de auxiliar na resolução de problemas ainda pouco conhecidos que são observados a campo durante emprego comercial da PIV. Foram utilizados sessenta animais divididos em grupo 01: vinte vacas gestando bezerros da raça Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (TE); grupo 02: vinte vacas gestando bezerros Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de PIV; grupo 03: vinte vacas Nelore PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) - controle. Todos os partos dos animais do experimento foram observados. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion, foi realizada a punção do âmnion para a colheita de 15mL de líquido amniótico utilizando-se agulhas e seringas descartáveis compatíveis. O material foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer para posterior análise laboratorial. O acompanhamento do padrão de desenvolvimento dos bezerros no periparto foi realizado. Após a descongelação das amostras foi realizado ensaio imunoenzimático (ELISA) para a dosagem de TNF-, com emprego do Kit comercial: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, para IFN- foi Kit comercial: ESS0026 - Bovine IFN-, para IL-6 foi Kit comercial: ESS0029 - Bovine IL-6 da Pierce Biotechnology e para IL-8 Kit... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view, the incidence of fetal problems seen at the time of birth of animals in vitro production and the be short of the literature in this area, this study aimed to determine the levels of tumor necrosis factor (TNF-), interferon-gamma (IFN-), interleukin-6 (IL-6) and IL-8 in amniotic fluid of calves from in vitro production (IVP) compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery, in an attempt to assist in solving problems that are still little known observed in simulations and the experimental field of commercial employment during IVP. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 - Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. Monitoring the pattern of development of the calves in peripartum was performed. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay (ELISA). The commercial kit used was: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, ESS0026 - Bovine IFN- gamma, ESS0029 - Bovine IL-6 Pierce Biotechnology and comercial Kit: D8000C - Human IL-8 of the R & D Systems. The protocol was performed according to the manufacturer's recommendations. The densities were evaluated in automatic optical reader ELISA. The well plates were read at 450nm. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Alexandre Secorun Borges / Banca: Francisco Armando de Azevedo Souza / Banca: Júlio Augusto Naylor Lisboa / Resumo: A diarréia é considerada uma das principais causas de doença e mortalidade de bezerros neonatos. Foram colhidas 100 amostras fecais diarréicas e 30 amostras fecais não diarréicas, de bezerros da raça Nelore com até 60 dias de idade para a detecção dos enteropatógenos Salmonella sp., Escherichia coli, rotavírus, coronavírus, Cryptosporidium spp. e ovos de helmintos. O diagnóstico foi realizado respectivamente, pela semeadura em Ágar Salmonella Shigella, Ágar sangue ovino, MacConkey e aglutinação em látex para detecção das E. coliK99+, eletroforese em gel de poliacrilamida, semi-nested PCR, Ziehl-Nielsen modificado e McMaster. Detectaram-se enteropatógenos em 79% das amostras diarréicas e 70% das amostras sem diarréia. No grupo com diarréia, a E. coli (69%) foi o agente mais isolado, seguido do Cryptosporidium spp. (30%), coronavírus (16%) e rotavírus (11%). No grupo controle, a E. coli, Cryptosporidium spp e o coronavírus foram detectados respectivamente em 66,66%, 10% e 3,33% das amostras. A Salmonella sp. e estrongilídeos não foram encontrados em nenhum dos grupos. A fímbria K99 só foi verificada nas cepas de E. coli isoladas de bezerros com diarréia (5.8%). Entre os antimicrobianos testados a enrofloxacina, norfloxacina e gentamicina foram os mais efetivos. Onfalopatias estavam presentes em 43% dos bezerros com diarréia e ausentes nos bezerros do grupo controle. O peso aos 210 dias de vida dos bezerros foi similar nos grupos com e sem diarréia. / Abstract: Diarrhea is considered as one of the main causes of disease and mortality in newborn calves. Fecal samples from 100 diarrheic and 30 fecal samples from non-diarrheic Nelore calves less than 60 days old were collected to detect Salmonella sp, Escherichia coli, rotavirus, coronavirus, Cryptosporidium ssp. and helminthes eggs. The diagnostic techniques employed were, respectively, culture in agar Salmonella Shigella, ovine blood-agar, McConkey and latex agglutination test to detected E. coliK99+, polyacrylamide gel eletroforesis, semi-nested PCR, Ziehl-Nielsen and McMaster tets. Enteropathogens were detected in 79% diarrheic samples and 70% non diarrheic samples. Among diarrheic calves the Escherichia coli (69%) was the most common agent found, following the Cryptosporidium spp. (30%), coronavirus (16%) and rotavirus (11%). In the control group, E. coli, Cryptosporidium spp and coronavirus were detect in 66,66%, 10% and 3,33% of samples respectivelly. Salmonella sp. and strongylids weren’t found on any groups. The K99 fimbrial only was detected only in E. coli strain isolated from diarrheic calves (5,8%). Among the antimicrobials tested, enrofloxacin, norfloxacin and gentamicin, were most effective. Umbilical diseases were detected in 43% of diarrheic calves and not detected in calves of control group. The weight at 210 days old calves was similar in diarrheic and non diarrheic calves. / Mestre

Grande parte das perdas embrionárias ocorrem nas três primeiras semanas após a inseminação e grande parte pode-se atribuir a baixas concentrações de progesterona. Desta maneira, o objetivo do presente experimento foi avaliar os efeitos e a interação entre o escore de condição corporal (ECC) e condição ovariana (EO) em vacas suplementadas com progesterona de longa ação (P4) após IATF sobre a taxa de prenhez em vacas de corte. Neste experimento foram utilizados 1573 vacas de corte, lactantes entre 30 e 60 dias pós-parto. As vacas tiveram a ovulação sincronizada iniciando-se no dia - 10 e foram inseminadas no dia 0. No dia 4, os animais foram blocados de acordo com ECC e EO e ordem de parto e divididos em dois tratamentos: (P4, n = 786) e (Controle, n = 787). Foram feitas avaliações ultrassonograficas dos ovários nos dias -10, 0 e 4, para mensurações de tamanho de folículo e corpo lúteo e no dia -10 foi feita a avaliação do ECC. A taxa de prenhez (P/IA) entre os grupos P4 vs CONTROLE não apresentou diferenças P=0,49. Vacas com ECC > 2,75 tiveram melhora P/IA (P<0,05) comparadas com vacas com ECC ≤ 2,5. Vacas com presença de folículo ≥ 8 mm no dia -10 apresentou melhor P/IA (P<0,05) comparadas com vacas com presença de CL ou folículo < 8 mm. Vacas com folículo ≥8 mm e CL apresentaram maior tamanho de folículo, maior área de CL, no entanto, os animais com presença de folículo ≥ 8 mm apresentaram maior taxa de concepção comparado com os animais com folículo < 8 mm e com presença de CL. Concluimos que a suplementação com P4 após a IATF não melhora as taxas de prenhez, independente do ECC e do EO, no entanto, o ECC e o EO apresentam influências nas taxas de prenhez, onde os animais com melhor ECC no início do protocolo apresentaram melhor EO e maior taxa de prenhez. / Embryo loss commonly occurs in the first three weeks after insemination due to low progesterone (P4) concentrations. Therefore, this study evaluates the effects of body condition score (BCS) and ovarian condition (OC) on pregnancy rates (P/AI) in beef cows supplemented with long-acting P4 after timed artificial insemination (TAI). We used 1573 lactating Nellore cows at 30-60 days postpartum. The animals were pre-synchronized on Day -10 and inseminated on Day 0. On Day 4, they were evaluated for BCS, OC and parturition order and divided into two treatment groups: P4 supplementation (N= 786) and control group (N = 787). Ultrasound exams were performed on Days -10 and 0 to measure follicle diameter and on Day 4 to evaluate corpus luteum (CL) area. BCS was determined on Day -10. P/AI did not vary between P4 supplementation and control treatments (P = 0.49). Cows with BCS > 2.75 had better P/AI than cows with BCS ≤ 2.5 (P < 0.05). Cows without CL and with follicle diameter ≥ 8 mm on Day -10 presented better P/AI than cows with follicle < 8 mm or CL (P < 0.05). In conclusion, P4 supplementation after TAI did not improve P/AI. However, BCS and OC affected P/AI and the animals with better BCS at the beginning of the experiment had better OC and P/AI.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da introdução da linhagem materna, representando a herança mitocondrial, no modelo de avaliação genética para características de desenvolvimento (peso ao nascer, aos 120 dias, a desmama, ao ano e ao sobreano), perímetro escrotal e temperamento de um rebanho Nelore. O banco de dados era composto pelo registro de produção de 24.498 animais e o de genealogia, de 27.476. Com o intuito de estimar componentes de (co)variâncias e parâmetros genéticos, os dados foram analisados sob dois modelos, o primeiro igual ao atualmente utilizado nas avaliações genéticas desse rebanho, e o segundo incluiu o efeito de linhagem materna como efeito aleatório. A linhagem materna foi obtida traçando-se a partir de uma fêmea, uma linha até a última fêmea com registro no banco de dados, considerando-a uma fundadora. Dentre as características analisadas, o efeito de linhagem materna foi significativo (P < 0,05) somente para peso à desmama. Para essa característica, o efeito de linhagem materna foi responsável por grande alteração do "ranking" dos 1000 melhores animais, tanto para machos quanto para fêmeas. A variação entre as linhagens maternas pode promover diferenças de mais de 22 kg no peso a desmama, o que corresponde a 12,9% da média fenotípica / The present work had the objective to evaluate the effect of the introduction of the maternal lineage, representing the mitocondrial inheritance, in the model of genetic evaluation for growth characteristics (weights at birth, 120 days, weaning, year and 18 months), scrotal perimeter and temperament of one Nelore herd. The data base was composed of 24.498 animals and pedigree, of 27.476. With intention of estimating the (co)variance components and genetic parameters, data were analyzed under two models: first the equal one that currently used in the genetic evaluations of this herd and second that included the maternal lineage effect as random effect. The maternal lineage was gotten tracing itself from a female, a line until the last female with register in the data base, considering she as a founder. Amongst the analyzed characteristics, the maternal lineage effect was significant (P < 0,05) only for weight weaning. For this characteristic, the maternal lineage effect was responsible for great alteration in the ranking of the 1000 better animals, as much for males and females. The variation of the maternal lineages can promote difference of more than 22 kg in the weight at weaning, corresponding to 12,9% of the phenotypic mean

O presente estudo foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal da Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA, localizada no município de Tamarana - Paraná. O experimento se refere aos resultados obtidos na produção in vitro de embriões através da aspiração folicular transvaginal em bovinos das raças Nelore (não CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22). Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) totalizando 172 animais, no período de O 1 janeiro de 2010 a 31 de dezembro de 2012. Todos os animais foram submetidos à OPU (Ovum Pick Up) totalizando 397 procedimentos entre as doadoras, sendo 104 OPUs em Nelore (não CEIP), 52 OPUs em Nelore (CEIP). 133 OPUs em Brangus e 108 OPUs em Girolando. Com estes procedimentos foram aspirados 7335 oócitos, destes 3597 foram considerados viáveis (49%), produzindo 969 embriões (26.93%), destes foram transferidos 922 embriões em receptoras previamente selecionadas, resultando em 266 prenhes (taxa de prenhes 28.85%). Após a obtenção dos oócitos estes eram enviados para o laboratório acima citado para maturação, fecundação e cultivo in vitro, em um período de oito dias. Os embriões produzidos eram transferidos para receptoras de embrião previamente selecionadas e submetidas ao protocolo de TETF (transferência de embrião em tempo fixo), sendo o diagnóstico de gestação realizado aos 30 dias com auxílio de ultrassonografia transretal. Na raça Brangus recuperou-se um total de 2139 oócitos sendo 967 viáveis (45,2%), destes foram obtidos 272 embriões os quais foram transferidos 241 embriões resultando em 81 prenhezes (33.3%). Na raça Girolando, foram recuperados 1806 oócitos, destes 972 foram considerados viáveis (53.8%) e resultaram na produção de 251 embriões (25.8%), os quais foram transferidos 245, obtendo-se 61 prenhezes (24.9%). Com relação às doadoras da raça Nelore (CEIP). recuperou-se 1850 oócitos, destes 842 foram considerados viáveis (45.5%), resultando em 214 embriões (25.4%), obtendo-se 61 prenhezes (28.5%). Na raça Nelore (não CEIP) recuperou-se 1540 oócitos sendo 816 considerados viáveis (53.0%), os quais resultaram na produção de 232 embriões (28.4%), sendo transferidos 222 dos quais se obteve 63 prenhezes (28.4%). De acordo com a análise estatística observou-se que a raça Nelore (CEIP) teve resultados superiores de (P< 0.0001) em relação à média total de oócitos por OPU, total de oócitos viáveis por sessão de OPU (P< 0.0001), produção de embriões (P< 0.0001) e prenhes por OPU (P<O,0115). O presente trabalho forneceu dados inéditos de PIVE para discussão nas raças sintéticas Brangus e Girolando ( Bos taurus x Bos indicus), em larga escala, porém, o experimento também destaca a necessidade de mais estudos relacionados à produção in vitro de embriões nessas raças. Quanto ao comparativo entre as raças, observou que a quantidade total de oócitos não variou de acordo com as raças Brangus, Girolando e Nelore (não CEIP), no entanto podemos notar uma grande variação individual de animais da mesma raça, Nelore (CEIP) e Nelore (não CEIP), onde se obteve nas fêmeas da raça Nelore (CEIP, selecionadas) uma maior produção total de oócitos, oócitos viáveis e embriões por sessão de aspiração. / This study was developed at the Laboratory of Animal Reproduction from the \"Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA\", town of Tamarana, Paraná State, Brazil. Results from in vitro production of cattle embryos through follicular aspiration in the breeds Nelore (no CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22), Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) from January 1st of 2010 to December 31th of 2012 were used totalizing 397 oocyte donors OPU. From those, 104 OPU were realized in Nelore (no CEIP), 52 OPUs in Nelore (CEIP), 133 OPUs in Brangus, and 108 OPUs in Girolando. The total of recovered oocytes was 7335. Then, the oocytes were sent to the Laboratory for in vitro maturation, fertilization and culture during a period of eight days. The number ofviable oocytes was 3597 (49%) and 969 embryos were in vitro produced (26.9%). A total of 922 were transferred to recipients previously selected and submitted to estrous synchronization using the farm routine FTET (fixed-time embryo transfer) protocol. The pregnancy rate was 28.9% (266 pregnancies). Pregnancy diagnosis was done at the embryo age of 30 days using B-mode transrectal ultrasonography. From Brangus cows, a total of 2139 oocytes were recovered and 967 were c1assified as viable (45.2%), 272 embryos were produced and 241 were transferred resulting in 81 pregnancies (33.3%). From Girolando cows, 1806 oocytes were recovered and 972 c1assified as viable (53.8%). A total of 251 embryos (25.8%) were produced, 245 transferred and the pregnancy rate was 24.9% (61 pregnancies).From the Nelore CEIP cows, a total of 1850 oocytes were recovered and 842 were c1assified as viable (45.5%), 214 embryos were produced and 214 were transferred resulting in 61 pregnancies (28.5%).From Nelore cows, 1540 oocytes were recovered and 816 c1assified as viable (53.0%). A total of 232 embryos (28.4%) were produced, 222 transferred and the pregnancy rate was 28.4% (63 pregnancies).The Nelore CEIP presented superior results for the number of oocytes recovered per OPU (P<0.0001), for the total of viable oocytes per OPU (P<0.0001), embryos produced (P<0.0001), and total of pregnancies per OPU procedures (P<0.0115). This work presents for the first time data from IVPE from Brangus and Girolando breeds (Bos taurosx Bos indicus). When the four studied breeds were compared, the results showed a considerable variation between animais in the same breed. Also, it was observed, in the same breed Nelore, a superiority ofthe Nelore CEIP for oocyte recovery rate, viable oocytes e total of embryos produced by OPU procedure.

Três experimentos foram realizados para testar a hipótese de que a resposta superestimulatória de doadoras Nelore (Bos indicus) com tratamentos iniciados próximo à ovulação durante a primeira onda de crescimento folicular seria maior ou comparável àquela decorrente de tratamentos convencionais. Os animais foram aleatoriamente alocados em três grupos. As doadoras dos Grupos 1 - Onda 1 s/P4 e 2 - Onda 1 c/P4 foram superestimuladas na primeira onda de crescimento folicular, e as do Grupo 3 - SincBE+P4/P4 quatro dias após a sincronização da emergência folicular com estradiol e progesterona. Os animais receberam dispositivo intravaginal de Progesterona (CIDR) associado a 50mg de Progesterona e 2,5mg de Benzoato de Estradiol (IM) no Dia 0. Os animais dos Grupos 1 e 2 receberam PGF2&alpha; no Dia 5 e 12,5mg Armour de LH (Lutropin) 24 horas após a remoção do CIDR (Dia 9), e no Dia 11 iniciou-se o tratamento superovulatório. As doadoras do Grupo 2 receberam um novo CIDR juntamente com a primeira dose de FSH (Dia 11). Todos os animais foram superestimulados com 133mg NIH-FSH-P1 de Folltropin diluídos em 10ml, em duas aplicações diárias de 1ml, por cinco dias. No último dia de tratamento, junto com o FSH foram aplicadas doses luteolíticas de PGF2&alpha; nos Grupos 2 e 3 o CIDR foi removido na ultima aplicação. Todas as doadoras receberam 25mg de LH 24 horas após a ultima dose de FSH e foram inseminadas 12 e 24 horas após o LH. Os embriões foram coletados e avaliados pelo mesmo veterinário sete dias após a inseminação. No primeiro experimento, as quantidades de embriões transferíveis não foi significativamente diferente entre os grupos 2 e 3 (8,0 ± 1,8 x 6,6 ± 2,0), e ambas foram maiores que as do 1 (0,2 ± 0,2; P<0,05). Como não houve diferença entre os Grupos 2 e 3 nos parâmetros analisados, o Grupo 3 foi excluído dos outros dois experimentos. No segundo experimento, as doadoras receberam os mesmos tratamentos dos Grupos 1 e 2, mas foram abatidas 12 horas após receberem 25mg de LH (Dia 16) e tiveram seus ovários removidos e levados para o laboratório, para classificação. Os oócitos foram aspirados e avaliados quanto à maturação pela expansão do COC. Os animais que não receberam dispositivo de P4 durante o tratamento superovulatório apresentaram maior número de oócitos não maturados (6,4 ± 2,7 x 1,2 ± 0,9; P< 0,05). O terceiro experimento foi semelhante ao segundo, com a diferença de que os animais foram inseminados 12 horas após o tratamento com 25mg de LH, e tiveram as estruturas coletadas 7 dias após a IA. Os resultados desse experimento confirmaram os do primeiro, no qual animais sem suplementação exógena de P4 durante o tratamento superovulatório apresentaram menor número de embriões transferíveis que o grupo com P4 (0,0 ± 0,0 x 3,9 ± 1,1; P<0,05). Os resultados obtidos retificam a hipótese, demonstrando que a superovulação durante a primeira onda de crescimento folicular em novilhas Nelore é eficiente somente com suplementação exógena de P4 / Three experiments were design to test the hypothesis that superovulatory (SPO) response of Nelore (Bos indicus) donors to treatments administered during the first follicular wave, initiated at the expected time of ovulation, will elicited a higher or a comparable response to traditional protocols. In the first experiment, cows were randomly allocated into 1 of 3 treatment groups. Cows in Group Wave 1 without P4 e Group Wave 1 with P4 were superstimulated during the first follicular wave and cows in the Control Group were superstimulated after synchronized follicular wave emergence using estradiol and progesterone. All cows received a CIDR device and an injection of 50mg of P4 and 2.5mg EB on Day 0. Cows in Groups Wave 1 with P4 and Wave 1 without P4 were also treated with PGF2&alpha; on Day 5 and 12,5mg Armour of pLH (Lutropin) 24 h after CIDR removal (Day 9), to synchronize ovulation. The SPO treatments were initiated on Day 11; donor cows in Group Wave 1 with P4 also received a new CIDR device at the time of the first FSH injection. All donors in three groups were superstimulated with a total dose of 133mg NIH-FSH-P1 of Folltropin-V, divided into twice daily injections of the same dosage (13,3mg diluted in 1ml) over 5 days. On the last day of FSH treatment, all animals received PGF2&alpha; after each FSH injection and cows in Group Wave 1 with P4 and Control Group had their CIDR removed at the time of the last FSH injection. All cows received 25 mg of pLH 24h after the last FSH treatment and were AI 12 and 24h later. Ova/embryo collection and evaluation was done 7d after, aIl by the same veterinarian. Results indicate that there was no difference in the numbers of transferable embryos in CIDR treated donor cows when SPO treatments were initiated at the time of emergence of either the first follicular wave Group Wave 1 with P4 (8.0 ± 1.8) or following synchronization of follicular wave emergence with BE + P4, control Group (6.6 ± 2.0), but both were greater than when SPO treatments were initiated at the first follicular wave without the use of a CIDR device, Wave 1 without P4 (0.2 ± 0.2; P<0,05). Since there were no differences between Groups Wave 1 with P4 and control on all the end points, this group was dropped from the others experiments. A second experiment was performed in order to evaluate the quality of oocyte recovered after animals were treated under the same protocol of Groups Wave 1. The SPO treatments were the same described previously, however 12h after the injection of 25mg of pLH animals were slaughtered and their ovaries were taken to an IVF lab. Follicles were aspirated and the oocyte was evaluated and those with an expanded COC were considered mature. Animals in Group Wave 1 without P4 showed a greater (P<0,05) number of immature oocyte (6.4 ± 2.7) than Group Wave 1 with P4 (1.2 ± 0.9). The third experiment was performed to confirm the results of the first experiment. The treatments were similar as the second experiment, however, animals were AI 12 and 24h after the 25mg of pLH and had ova/embryos collection and evaluation 7 d after by the same veterinarian. Results of this experiment confirmed the first experiment presenting a greater (P<0,05) number of transferable embryos in Group Wave 1 with P4 (3.9 ± 1,1) when compared to Group Wave 1 without P4 (0.0 ± 0.0). The results did not support the hypothesis, showing that exogenous P4 is necessary in order to superovulate Nelore during the first follicular wave

A identificação de mecanismos moleculares é importante para entender os eventos fisiológicos que ocorrem durante o processo de maturação sexual. O objetivo deste trabalho foi semiquantificar o RNAm para os receptores de gonadotrofinas em células da granulosa de folículos dominantes em crescimento de novilhas Nelore pré-púberes, buscando associação com a fertilidade precoce. As novilhas foram separadas em Precoce (P, n=6) e Não Precoce (NP, n=16), de acordo com o diagnóstico positivo de gestação aos 15 meses de idade. Realizou-se exame ultra-sonográfico dos ovários durante 17 dias para a identificação da onda folicular, o folículo dominante com 8-9 mm foi aspirado via trans-vaginal. O RNA total foi extraído das amostras e convertido a DNA complementar que teve uma região amplificada para a expressão dos genes para os receptores de gonadotrofinas. A semiquantificação foi feita por análise digital onde levou-se em consideração a intensidade média das bandas (unidade arbitrária - UA) em gel de poliacrilamida (8%) corado com uma solução de TBE-brometo de etídio (0,02%). Foi utilizado o RNAm para o gene do GAPDH como controle interno para corrigir a expressão dos receptores de gonadotrofinas em função da quantidade de RNA em cada amostra. Não houve diferença entre P e NP na quantidade de RNAm para o receptor de FSH (FSHr, 1,14±0,07 e 1,19±0,04 UA) e de LH (LHr 0,79±0,12 e 0,78±0,05 UA, respectivamente). Foi detectada a presença de splicing alternativo do RNAm para o receptor de LH (LHrs), pelo aparecimento de banda com peso molecular diferente, em todos os animais do experimento, constatando-se através do sequenciamento que o material apresentava a deleção do exon 10. As novilhas P apresentaram maior percentagem de LHrs em relação ao LHr (LHrs/LHr) (83,66±4,26%) quando comparadas a NP (70,05±3,39%). A quantidade de RNAm para receptores de gonadotrofinas parece não estar relacionada com o aparecimento de fertilidade precoce, mas a maior percentagem de deleção do exon 10 no RNAm para o LHr pode estar envolvida com a fertilidade precoce em novilhas Nelore. / Identification of molecular mechanisms is important to understand the physiological events occurring during the process of sexual maturation. The objective of this work was to semiquantify the mRNA for gonadotropins receptors from granulosa cells of developing dominant follicles in pre-pubertal Nellore heifers and associate the results to precocious fertility. The heifers were sorted in Precocious (P, n=6) and Non Precocious (NP, n=16), according to positive pregnancy at 15 months of age. Ovarian ultrasound examination was performed through 17 days for follicular wave identification, the growing dominant follicle was aspirated at 8-9 mm. Total mRNA was extracted from the granulosa cells samples, converted to complementary DNA and had a region amplified for gene expression for gonadotropins receptors. The semiquantification was performed by digital analysis of intensity average for the bands (arbitrary unit - AU) in poliacrilamida gel (8%) stained with etidio TBE-bromide solution (0,02%). mRNA for GAPDH gene was used as internal control to correct the expression of gonadotropins receptors to the amount of mRNA in each sample. There was no difference between P and NP in the amount of mRNA for FSH receptors (FSHr, 1,14±0,07 and 1,19±0,04 AU) and LH receptors (LHr 0,79±0,12 and 0,78±0,05 AU, respectively). Heifers presented alternative splicing of mRNA for LH receptors (LHrs) evidenced through sequencing, as the absence of exon 10. P heifers presented greater percentage of LHrs in relation to LHr (LHrs/LHr) (83,66±4,26%) when compared the NP (70,05±3,39%). The amount of mRNA for gonadotropins receptors was not related with precocious fertility, but the greater percentage of exon 10 deletion from mRNA for LHr was associate the precocious fertility in Nelore heifers.

A identificação do momento mais apropriado para realizar a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) utilizando sêmen sexado pode aumentar a prenhez por inseminação (P/IA) e aumentar a utilização do sêmen sexado em fazendas de corte. Este trabalho teve por objetivo avaliar o melhor intervalo entre a inseminação e a ovulação na P/IA de vacas Nelore lactantes submetidas ao protocolo de IATF utilizando sêmen sexado. Um total de 339 vacas Nelore apresentando 30 a 60 dias pós-parto da fazenda experimental da APTA, em Colina-SP foram utilizadas. No início do tratamento as fêmeas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1g de progesterona (Sincrogest®,Ourofino Saúde Animal) e a aplicação i.m de 2mg de BE (Sincrodiol®, Ourofino). Após oito dias, o dispositivo foi removido e aplicados via i.m 0,25 mg de cloprostenol sódico (Sincrocio® , Ourofino) e 300UI de eCG (Folligon® , Intervet-Schering Plough). As vacas foram homogeneamente distribuídas para receberem IATF com sêmen sexado de um único touro da raça Angus (2.1milhões de espermatozóides por dose) às 36, 48 e 60 horas após a retirada dos dispositivos. O intervalo entre as inseminações e ovulações foi determinado e as análises realizadas comparando a taxa de prenhez entre os intervalos. Exames ultrassonográficos (7.5MHz, CTS-3300V, SIUI, China) foram realizados duas vezes ao dia, a partir da retirada do implante até 96 horas após e aos 30 pós IA para realização do diagnóstico de gestação. A P/IA foi definida como o número de fêmeas prenhes divididas pelo número de fêmeas inseminadas em cada intervalo. Os dados encontrados foram analisados usando o programa estatístico SAS. A taxa de ovulação após o protocolo foi de 92.0 % (312/339), o diâmetro do folículo ovulatório de 14,7 ± 2,3 mm e o intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação de 71.8 ± 7.7 horas [48 horas (6.73%; 21/312), 60 horas (0.64%; 2/312), 72 horas (80.77%; 252/312), 84 horas (11.22%; 35/312), e 96 horas (0.64%; 2/312)]. A P/IA aumentou conforme se atrasou o momento da inseminação: 36 horas (5,8%; 5/86)c, 48 horas (20.8%; 27/130)b e 60 horas (30.9%; 38/123)a. A P/IA foi maior quando as inseminações foram realizadas próximas ao momento da ovulação (0 a 12 horas antes da ovulação = 37,9 %; 35/95) do que as realizadas entre 12,1 a 24 horas (19,4%; 21/108; P = 0,05) ou com mais de 24 horas (5,8%; 5/87; P = 0,0001) antes da ovulação sincronizada. Vacas recentemente ovuladas tiveram P/IA semelhante às realizadas próximo ao momento da ovulação (36,4%; 8/22; P = 0,95). Concluiu-se que a P/IA utilizando sêmen sexado é aumentada quando as inseminações são realizadas próximas a ovulação sincronizada. No experimento 2, de ressincronização, foram avaliadas, as taxas de serviço, concepção e prenhez em vacas previamente sincronizadas e inseminadas em tempo fixo. Foram formados dois grupos: observação de estro e IATF, utilizando na IA sêmen sexado e convencional. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF foram, respectivamente: taxa de serviço [(63,5% (61/96); 100% (88/88)], taxa de concepção [(41% (25/61); 11,4% (10/88)], taxa de prenhez [(26% (25/96); 11,4% (10/88)]. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF de acordo com o tipo de sêmen utilizado foram, respectivamente: sêmen convencional taxa de concepção [(43,3% (13/30); 14,9% (7/47))]; taxa de prenhez [(27,49% (13/61); 14,9% (7/47))]; sêmen sexado taxa de concepção [(38,7% (12/31); 7,3% (3/41))]; taxa de prenhez [(24,57% (12/61); 7,3% (3/41))]. / The identification of most appropriate moment to perform the timed artificial insemination (TAI) using sex-sorted semen following synchronization protocol can be important to improve the fertility of sex-sorted semen and increase the use sexed semen technology in commercial beef farms. The aim of this study was evaluated the better interval to perform the TAI relative to synchronized ovulation in suckled cows. A total of 339 suckled multiparous Nelore cows from an experimental farm (APTA), in Colina-SP, were evaluated in this study. The protocol started between 30 and 60 days post-partum. Cows received one synchronization protocol using an intravaginal device containing 1.0g of progesterone (Sincrogest®, Ouro Fino) plus an i.m. injection of 2.0mg of EB (Sincrodiol®, Ouro Fino). Eight days later, the device was removed and 0.25mg i.m. injection of cloprostenol sodium (Sincrocio®, Ouro Fino) and 300IU of eCG (Folligon®, Intervet-Shering Plough) were administered. Cows were homogenously assigned to receive TAI using sex-sorted semen from a single sire (2.1 millions of sperm cell per straw) at 36, 48 or 60 hours after device removal. The TAI to ovulation interval of synchronized cows was determined and the analysis was performed to compare the pregnancy for TAI performed at various intervals before ovulation using 12 hours time intervals. Ovarian ultrasonographic examinations (CTS-3300V, SIUI, China) were performed twice daily from day of the device removal to 96 hours afterwards, to evaluate ovarian follicular dynamics and interval from device removal to ovulation. All females were examined for pregnancy 30 days after AI. The data were analyzed using the SAS program.Incidence of ovulation after the estrous synchronization protocol was 92.0 % (312/339). Diameter of ovulatory follicle was 14.7 ± 2.3 mm and the interval between the P4 device removal and synchronized ovulation occurrence was 71.8 ± 7.7 hours. The distribution of the synchronized ovulation relative to the device removal was: 48 hours (6.73%; 21/312), 60 hours (0.64%; 2/312), 72 hours (80.77%; 252/312), 84 hours (11.22%; 35/312), and 96 hours (0.64%; 2/312). The pregnancy per artificial insemination (P/AI) was increased (P <0.001) when the TAI was delayed 36 hours (5.8%; 5/86)c, 48 hours (20.8%; 27/130)b and 60 hours (30.9%; 38/123)a. Higher P/AI was achieved on TAI performed closer to ovulation (0 to 12 hours before ovulation = 37.9 %; 35/95) than TAI performed on 12.1 to 24 hours (19.4%; 21/108; P = 0.05) or > 24 hours (5.8%; 5/87; P = 0.0001) before the synchronized ovulation. Recently ovulated cows had P/AI similar to those performed around the time of ovulation (36,4%; 8/22). In conclusion, P/AI is increased when the TAI using sex-sorted is performed closer to synchronized ovulation in suckled Nelore cows. In experiment 2, resynchronization, were assessed the service rates, conception and pregnancy in cows previously synchronized and timed AI. Two groups were formed: estrous detection and TAI, using in AI, sexed and unsexed semen. The results for groups of estrus detection and TAI were, respectively, service rate [(63.5% (61/96) 100% (88/88)], conception rate [(41% (25/61), 11.4% (10/88))], pregnancy rate [(26% (25/96), 11.4% (10/88))]. The results for groups of estrus detection and TAI according the type of semen used were: conventional semen conception rate [(43.3% (13/30), 14.9% (7 / 47))] ; pregnancy rate [(27.49% (13/61), 14.9% (7 / 47))]; sexed semen conception rate [(38.7% (12/31) 7.3% (3 / 41))]; pregnancy rate [(24.57% (12/ 61), 7.3% (3 / 41))].

Foram avaliadas as concentrações plasmáticas de leptina e IGF-I do 8° ao 16° mês de idade de 36 novilhas Nelore e comparadas com a idade à primeira ovulação e precocidade sexual. Para a quantificação da leptina, foi validado um radioimunoensaio (RIA) utilizando anticorpo produzido contra leptina recombinante eqüina após inoculação em coelho. A especificidade, estabilidade, taxa de recuperação e efeito matriz indicaram que o ensaio foi adequado para a quantificação de leptina plasmática bovina. O IGF-I foi quantificado por Kit comercial (DSL). As amostras de sangue foram colhidas em intervalos de 4 dias e avaliadas nos 60 dias retrospectivos à primeira ovulação e de amostras mensais do 8° ao 16° mês de idade. A maioria das novilhas (83,3%) ovulou até o final do experimento e foram divididas em prenhes até os 16 meses de idade (33,3%), formando o grupo precoce (P), e não prenhes (50%), formando o grupo Não Precoce (NP) 16,7% das novilhas não ovularam (chamadas de NO) até o final do experimento. Não houve diferença (P > 0,05) na idade à primeira ovulação entre os grupos P (439±27,9 dias) e NP (445±36,8 dias). O peso aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos, não diferiu (P > 0,05) entre as novilhas P e NP durante o experimento, mas as NO apresentaram peso inferior aos outros grupos a partir do 12°mês (P < 0,01). Nos 60 dias que antecederam a primeira ovulação, a concentração de leptina plasmática aumentou (P < 0,01) no grupo P, mas não nos grupos NP e NO (P > 0,5), porém não houve diferença entre os grupos (P > 0,5). Houve correlação entre a concentração de leptina plasmática e o peso corporal nos grupos P (r=0,36; P < 0,01) e NP (r=0,4313; P < 0,01), mas não no grupo NO (r=0,095; P > 0,5). A concentração plasmática de IGF-I aumentou (P < 0,01) nos 3 grupos do 8° ao 16° mês de idade, mas foi maior no grupo P (P < 0,01) do que nos NP e NO, que não diferiram entre si. Antes da primeira ovulação, não foi verificado aumento (P > 0,1) na concentração de IGF-I em nenhum dos grupos, porém a concentração foi maior no grupo P (P < 0,05). Pode-se concluir que a concentração de leptina, junto com o peso corporal foram importantes na primeira ovulação, enquanto o IGF-I, na determinação da precocidade sexual. / Plasmatic leptin and IGF-I were quantified from 36 Nelore heifers, and compared to age at first ovulation and sexual precocity. For leptin quantification, a radioimmunoassay, using antibody against recombinant equine leptin inoculated in rabbit was validated. The specificity, stability, recuperation tax and matrix effect showed that the assay was able to quantify for plasmatic bovine leptin quantification. The IGF-I was quantified with a commercial Kit (DSL). Blood samples were taken every 4 days and analyzed retrospectively 60 days before first ovulation and from mensal samples from 8th to 16th month of age. Most of the heifers ovulated (83.3%) until the end of experiment, those were divided in heifers that became pregnant until the 16° month of age (33.3%), named Precocious group (P), 50% that did not became pregnant were the non precocious group (NP) 16% of the heifers did not ovulated and were named NO. There was no difference (P > 0.05) in the first ovulation age between P (439±27.9 days) and NP (445±36.8 days) groups. The weight of the 3 groups increased (P < 0.01), but did not differ (P > 0.05) between P and NP heifers but NO showed lower weight (P < 0.01) after the 12th month (P < 0.01). Sixty days before first ovulation, plasmatic leptin concentration increased (P < 0.01) in P group, but did not in NP or NO (P > 0.5), and there were no difference between groups. (P > 0.5). There was correlation between plasmatic leptin and body weight in P (r=0.36; P < 0.01) and NP (r=0.4313; P < 0.01), but did not in NO group (r=0.095; P > 0.5). Plasmatic IGF-I concentration increased (P < 0.01) in the 3 groups, from 8th to 16th month of age, but was higher in P (P < 0.01) than NP and NO, that did not differ among themselves. Before first ovulation there was, no increase (P > 0.1) in IGF-I in none of groups, but concentration was higher in P (P < 0.05) group. It could be concluded that leptin concentration as well as body weight were important in first ovulation, while IGF-I, in the sexual precocity determination.