Orientador: Gilson Pereira de Oliveira / Coorientador: Alvimar José da Costa / Banca: Luís Fernando Santana / Banca: Maria Imaculada Fonseca / Banca: Giane Serafim da Silva / Banca: Ana Carolina de Souza Chagas / Resumo: As helmintoses, aliadas ao problema de resistência aos quimioterápicos, tornam-se o grande entrave na ovinocultura mundial, sendo ampliado pela escassez de informações sobre o custo-benefício de metodologias de diagnóstico. O objetivo do trabalho foi avaliar e comparar a eficiência de três técnicas de diagnóstico e o custo-benefício de quatro medidas estratégicas de controle de helmintos de ovinos naturalmente parasitados em uma de baixa tecnificação. Foram selecionadas 48 matrizes em idade reprodutiva, predominando mestiços de raça Santa Inês X Dorper, com médias de contagem de ovos por grama (OPG) superiores a 400, pelo método McMaster. Assim, foram realizadas coletas de amostras de fezes e avaliações da conjuntiva ocular a cada 14 dias, para realização das técnicas Mini-FLOTAC, McMaster e FAMACHA© durante um ano. As ovelhas foram divididas em quatro grupos experimentais e tratadas, estrategicamente. No GI, realizou-se tratamento dos animais que apresentassem contagens de OPG igual ou superior a 1000 no Mini-FLOTAC; GII, realizado com proposições semelhante ao GI, mas de acordo com McMaster; GIII tratado todos os ovinos a cada 56 dias; GIV - desverminados apenas os animais que apresentassem grau FAMACHA© 3, 4 ou 5, em duas avaliações (dias diferentes). Para comparação, as três técnicas de diagnóstico foram, repetidamente, efetuadas em todos os grupos. Ao iniciar o estudo, foi realizada coprocultura das fezes para identificação genérica dos nematódeos, e, posteriormente, nec... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Helminthic infections, allied to the problem of resistance against chemotherapeutics, become the major worldwide hindrance in sheep industry, which is magnified by lack of information regarding cost benefits of diagnosis methodologies. The objective of this study was to evaluate and compare efficiency of three diagnosis techniques and cost benefits of four strategic control measures against helminths of naturally parasitized sheep on a farm with modest technology. 48 ewes were selected, predominantly crosses of Santa Inês and Dorper breeds, at reproductive age, with average counts of eggs per gram of feces (EPG) superior to 400 detected by the McMaster method. Therefore, collection of fecal samples and evaluation of ocular conjunctiva were conducted every 14 days for performing the Mini-FLOTAC, McMaster and FAMACHA© techniques. Animals were divided in four experimental groups and treated strategically. In GI, treatment was performed on animals which obtained EPG counts superior to 1000 on the Mini-FLOTAC test. Treatment at GII followed similar propositions to GI, but was based on the McMaster test. GIII consisted of treating all sheep at 56-day intervals. Animals at GIV were dewormed only when presenting FAMACHA© degrees 3, 4 or 5, in two evaluations. For comparison, all three diagnosis techniques were repeatedly conducted in all groups. In order to calculate costs, expenses with product acquisition and treatments, as well as expenditure with laboratorial exams and other fact... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Samples of excrements for parasitological investigation were obtained in two year period 2011 and 2012 on three sheep farms and two goat farms in South Bohemia (a farm conventional, an organic and converting to an organic farming system). A total of 400 samples were examined using four parasitological methods. Thirteen species of gastrointestinal nematodes and one species of Protozoa were recovered. In farms Coccidia Eimeria spp. was the most diagnosed. Results revealed that goats were 1,8 times more often infected with parasites than sheep (x2 = 6,274; d. f. = 1; p = 0, 00576; OR = 1,82). Animals younger 6 months were 3 times more often infected with Eimeria than older ones (x2 = 17,174; d. f. = 1; p = 0,00003; OR = 3,16). Goats were 11 times more often infected with parasites in winter than sheep (x2 = 5,8174; d. f. = 1; p = 0,0050; OR = 10,78). Goats were 2 times more often infected with lungworm infection than sheep (x2 = 8,407; d. f. = 1; p = 0,0019; OR = 1,99). A statistically significant difference in infectious contamination between conventional and an organic system bred animals was not discovered (x2 = 0,0145; d. f. = 1; p = 0,452; OR = 1,05).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-07Bitstream added on 2014-06-13T20:24:14Z : No. of bitstreams: 1 cardia_dff_dr_jabo.pdf: 2910916 bytes, checksum: 3f70fd080a4c82de31b109a17ad81f6b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Brasil possui uma das maiores diversidades de quirópteros do planeta, entretanto apesar do grande número de espécies distribuídas por todo território nacional, pouco se sabe sobre alguns aspectos da biologia destes mamíferos. Pesquisas referentes à fauna parasitária destes animais, especialmente de seus helmintos, ainda são escassas no país. Diante disso, o presente estudo objetivou identificar a helmintofauna de quirópteros, provenientes da região Centro- Oeste do Estado de São Paulo. Para isto, foram realizadas análises morfológicas e biométricas dos diferentes grupos de helmintos, colhidos durante a necropsia de 340 morcegos de várias espécies, previamente recolhidos pelos Serviços Municipais de Controle de Zoonoses da referida região para vigilância epidemiológica da raiva. Foram identificadas 12 espécies de helmintos, dentre as quais oito eram de nematódeos, três de digenéticos e uma de cestódeo. Seis das espécies de helmintos analisadas apresentaram novos registros de hospedeiro na região Neotropical e cinco no Brasil. Duas espécies foram registradas pela primeira vez no território nacional e três no Estado de São Paulo. Além disso, o nematódeo Pterygodermatites (Paucipectines) andyra n. sp. foi descrita como uma nova espécie / Brazil has one of the highest diversities of chiropteran of the world, however despite the large number of species distributed throughout the national territory, little is known about some aspects of the biology of these mammals. Researches related to parasitic fauna of these animals, especially helminths, are still scarce in the country. Thus, the present study aimed to identify the helminth fauna of bats, from Midwest Region of São Paulo State. For this, biometric and morphological analyzes were performed in the different groups of helminths, collected during the necropsy of 340 bats of various species, previously collected by Municipal Disease Control Services of this region for rabies epidemiological surveillance. Twelve of helminths were identified, which eight were nematodes, three of digeneans and one of cestodes Six species of helminths analyzed had new host records in the Neotropical region and five in Brazil. Two species were recorded for the first time in the country and three in the state of São Paulo. Also, the nematode Pterygodermatites (Paucipectines) andyra n. sp. was described as a new species

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-09Bitstream added on 2014-06-13T21:06:23Z : No. of bitstreams: 1 lima_fc_dr_jabo.pdf: 883563 bytes, checksum: 3a27c094f030ab9479767c790e7ac1cd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Janaúba é a denominação popular mais difundida para as espécies do gênero Himatanthus que ocorrem no Estado do Maranhão. A planta é membro da família Apocynaceae, nativa do Brasil e tem ampla distribuição na região Nordeste, com várias indicações de uso popular, que vai desde o tratamento de inflamações uterinas e gastrites até o tratamento de verminoses. Para avaliar o efeito anti-helmíntico de Himatanthus ssp., contemplando os requisitos de eficácia e segurança para fitoterápicos e tendo em vista a crescente demanda por produtos agropecuários livres de resíduos químicos e a ocorrência de cepas de nematódeos resistentes aos quimioterápicos convencionais, o estudo objetivou contribuir com a investigação de tratamentos anti-helmínticos alternativos com possibilidade de uso na redução da verminose ovina. Inicialmente foi realizada a identificação botânica do vegetal, a produção do extrato bruto hidroalcoólico (EBHA), caracterização fitoquímica, ensaios de toxicidade e atividade ovicida in vitro do EBHA de janaúba sobre nematódeos gastrintestinais em ovinos. O vegetal foi classificado como Himatanthus drasticus. O extrato apresentou compostos nitrogenados, glicosídeos e fenólicos e não foi verificada registros de toxicidade. Houve atividade ovicida (p<0,05) in vitro sobre a emergência de larvas de nematódeos gastrintestinais nas concentrações testadas. Essas observações possibilitam a indicação da planta para testes anti-helmínticos em pequenos ruminantes. Prosseguiu-se experimenação in vivo por trinta dias com ovinos naturalmente infectados por nematódeos gastrintestinais, tendo sido avaliado o efeito do EBHA de H. drasticus sobre a redução do OPG e LPG, bem como as implicações de uso do extrato sobre as atividades e funções orgânicas dos animais tratados. Verificou-se redução... / Janauba the common name of Plumeria (Himatanthus Willd), is the most common species of this genus found in Maranhão state. This plant, widely distributed in the Northeastern, belongs to the Apocynaceae family, is native to Brazil and other warm, tropical countries. Its use in popular medicine ranges from uterine inflammation, gastritis to worm treatment. The anthelmintic effect of Himatanthus ssp. is the focus of this study that aimed at evaluating an alternative anthelmintic treatment with potential use to reduce nematode parasites in sheep. Initially, we performed plant botanical identification, crude hydroalcoholic extract production (EBHA), phytochemical characterization, toxicity testing and in vitro ovicidal activity of Janaúba EBHA on gastrointestinal nematodes found in sheep. The plant was classified as Himatanthus drasticus. The extract presented nitrogen compounds and phenolic glycosides, with no record of toxicity. In vitro ovicidal activity (p <0.05) was observed on the emergence of gastrointestinal nematode larvae at the concentrations tested. These results seemed to indicate the plant potential to be used as anthelmintics in small ruminants. Therefore, in vivo tests continued for thirty days with sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes. These trials evaluated the effect of H. drasticus EBHA on EPG and LPG, as well as the implications of using the extract on the activities and bodily functions of treated animals. A reduction (p <0.05) of fecal eggs and larvae was observed in the period; however, liver and kidneys were not influenced by the treatment. The janauba can... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-14T14:10:56Z No. of bitstreams: 1 2011_JoseDijairAntoninoSouzaJunior_Parcial.pdf: 7235276 bytes, checksum: 6d4a83a25b6b3f969d2db64af5cbfc7f (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-14T16:45:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JoseDijairAntoninoSouzaJunior_Parcial.pdf: 7235276 bytes, checksum: 6d4a83a25b6b3f969d2db64af5cbfc7f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-14T16:45:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JoseDijairAntoninoSouzaJunior_Parcial.pdf: 7235276 bytes, checksum: 6d4a83a25b6b3f969d2db64af5cbfc7f (MD5) / O nematoide formador de galhas Meloidogyne incognita está presente em quase todos os continentes, causando prejuízos em várias culturas importantes. Proteínas da glândula esofagiana de Meloidogyne spp. podem desenvolver funções importantes no estabelecimento de sítios de alimentação funcionais do nematoide. A função precisa destas proteínas no processo de desenvolvimento do sítio de alimentação é desconhecida. Além disso, estudos sugerem que as proteases do nematoide também estejam envolvidas neste processo de estabelecimento do sítio de alimentação, tornando estas enzimas proteolíticas alvos interessantes para estudos de intervenção de expressão. No primeiro capítulo foi feita a intervenção da expressão das proteínas por intermédio de RNA interferente de três genes (Mi-asp-1, Mi-ser-1 e Mi-cpl-1) de proteases de classes catalíticas diferentes, para entender melhor a função das mesmas na interação do nematoide com o hospedeiro. Observou-se uma diminuição da taxa de fecundidade nos nematoides que infectaram as plantas GM. Além disso, a progênie apresentou menor taxa de eclosão de J2 e de infecção do hospedeiro. No segundo capítulo, a proteína 7E12 de M. incognita, que é produzida na glândula dorsal e secretada dentro da planta durante o parasitismo, foi super expressa em plantas de tabaco para o conhecimento da função desta proteína. A partir dos resultados obtidos foi possível sugerir que a presença da proteína 7E12 na planta de tabaco acelerou a formação das galhas de M. incognita, indicando uma possível função desta proteína na iniciação e/ou na manutenção do sítio de alimentação. O estudo destas moléculas efetoras de parasitismo é um passo chave para compreender melhor as relações entre o hospedeiro e o parasita. A compreensão destas interações possibilitará o desenvolvimento de novas ferramentas para o controle de M. incognita. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The root-knot nematode Meloidogyne incognita is present in almost all continents, causing serious damage in many important crops. Some reports indicate that proteins produced by its dorsal gland perform important roles in the establishment of a functional nematode feeding site. The precise role of these proteins in the development of these feeding sites is still unknown. However, previous studies suggest that nematode proteases are involved in the establishment of feeding sites, turning them into interesting targets for expression intervention studies. In the first chapter, in order to understand the function of these enzymes in the interaction between the nematode and its host, the protein expression of three genes (Mi-asp-1, Mi-ser-1 and Mi-cpl-1) representing different catalytic classes of proteases was reduced by RNA interfering (RNAi). I found that the nematodes that infect GM plants had their fertility rate reduced. In addition, the progeny show reduced hatching rate and host infection. In the second chapter, the protein 7E12 of M. incognita, which is produced in the dorsal gland and secreted into the host during parasitism, was overexpressed in tobacco plants in order to address the function of this protein. The results obtained in this study suggest that the presence of this protein in tobacco plants accelerated the formation of M. incognita galls, indicating a possible function of this protein in the initiation and/or maintenance of feeding sites. The study of these parasitism effector molecules is a key step to better understand the relationship between host and parasite. I envisage that the understanding of these interactions will help the development of new tools for M. incognita control.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:10:00Z : No. of bitstreams: 1 cardia_dff_me_botfmvz.pdf: 585057 bytes, checksum: f3c3565d13f02268ca436eddfd676ae7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o objetivo de se investigar a resposta imunológica e fisiopatologia das infecções por Trichostrongylus colubriformis em cordeiros Santa Inês, trinta ovinos foram agrupados em 10 classes, de acordo com seu peso vivo, sendo cada uma destas constituída de três animais. Por sorteio, um animal de cada classe constituiu o grupo infectado artificialmente com 2500 larvas de T. colubriformis, três vezes por semana, ao longo de 13 semanas e alimentado ad libitum, outro animal constituiu o grupo não infectado, alimentado com a mesma quantidade consumida pelo animal infectado, de mesma classe, no dia anterior, e o último animal constituiu o grupo não infectado e alimentado ad libitum. Diariamente as sobras de alimento eram pesadas, para que se estimasse o consumo alimentar individual de cada cordeiro. Semanalmente os animais eram pesados e amostras de sangue e fezes eram colhidas para a realização de exames hematológicos, imunológicos e coproparasitológicos. Ao final deste estudo, os cordeiros foram eutanaziados para a determinação da carga parasitária e colheita de amostras de tecido e muco intestinal para realização de análises histopatológicas e imunológicas. Os resultados demonstraram que a resposta imunológica impediu parcialmente o estabelecimento das larvas infectantes nos cordeiros infectados, porém houve redução do desempenho produtivo nos animais, independentemente da carga parasitária. O grupo infectado apresentou a pior conversão alimentar (88,81 ± 21,19 g a cada 1000g de alimento consumido), sendo esta significativamente menor (P<0,01) aos outros dois grupos experimentais. Os efeitos deletérios nos cordeiros foram decorrentes tanto das alterações patológicas causadas pelos vermes adultos na mucosa intestinal, como das alterações imunopatológicas produzidas pelo contato com as larvas infectantes. A alta demanda de nutrientes destinados ao desenvolvimento... / To investigate the immune response and physiopathology of Trichostrongylus colubriformis infections in Santa Inês lambs, thirty sheep were grouped into 10 classes of three animals each according to their liveweight. From each class, one animal was randomly selected to constitute the group artificially infected with 2500 T. colubriformis larvae three times every week for 13 weeks and fed ad libitum; another animal included the non-infected group fed with the same quantity consumed by the infected animal of the same class on the previous day; and one third animal constituted the non-infected group fed ad libitum. Leftovers were daily weighed to assess food consumption for each lamb. Every week, the animals were weighed and blood and fecal samples were collected for hematological, immunological and coproparasitological tests. At the end of this study, lambs were euthanized to detect worm burden and collect intestinal mucus and tissue samples for histopathological and immunological analyses. The immune response partially prevented the establishment of infective larvae in infected lambs. However, there was a reduction in the productive performance of these animals independently of their worm burden. The Infected Group had the worst feed conversion (88.81 ± 21.19 g in body weight for each 1000 g food consumed), this it was significantly lower (P<0.01) than that of the other two experimental groups. Deleterious effect in the lambs were due to pathological changes caused by adult nematodes in the intestinal mucosa and to immunopathological changes resultant of the contact with infective larvae. The high nutrient demand for the development and maintenance of the immune response and the repair of damaged tissues during infections also contributes in the low performance presented infected animals.

Orientador: Silvia Renata Siciliano Wilcken / Banca: Wilson Badiali Crocomo / Banca: Luis Garrigos Leite / Resumo: No Brasil, Cornitermes cumulans é uma das espécies de cupim mais freqüentes, principalmente nas regiões sul, sudeste e centro-oeste do país. Causam danos diretos e indiretos em várias culturas agrícolas. Os nematóides das famílias Steinernematidae e Heterorhabditidae têm sido considerados agentes promissores no controle biológico de pragas, inclusive para cupins. Com a finalidade de avaliar a possibilidade de utilização desses nematóides no controle de Cornitermes cumulans, a presente pesquisa teve como objetivo verificar a suscetibilidade de C. cumulans a diferentes isolados de Steinernema e Heterorhabditis. De acordo com os resultados obtidos na primeira fase, S. carpocapsae foi o isolado mais patogênico às castas de C. cumulans. Na segunda fase da pesquisa, a patogenicidade desse isolado à C. cumulans foi estudada em colônias artificiais, nas concentrações de 133, 166, 267, 332 e 533 juvenis infectivos (JI)/inseto, e duas formas de exposição (substrato e alimento). Nesta fase também foi conduzido um experimento em placas de Petri utilizando as concentrações de 2.000 e 4.000 JI/inseto. O isolado S. carpocapsae foi patogênico a C. cumulans, em todos os experimentos, proporcionando 100% de mortalidade dos insetos. / Abstract: In Brazil, Cornitermes cumulans is one of the most frequent termite species, mainly in the south, southeast and center-west of country. They cause direct and indirect loss many crops. The nematodes of Steinernematidae and Heterorhabditidae families have been considered promising agents for the biological control of pests, including for termites. With the purpose of evaluating the possibility of use those nematodes for the Cornitermes cumulans control, this research had the objective to verify the susceptibility of C. cumulans to different isolates of Steinernema and Heterorhabditis. According to the results obtained in the first phase, S. carpocapsae was the most pathogenic one to C. cumulans castes. In the second phase of the research, the effect action of this nematode to C. cumulans was investigated in artificial colonies, in different concentrations (133, 166, 267, 332 and 533 juveniles infectives (JI)/insect), and two exhibition forms (substratum and food). An experiment in Petri dishes was also conducted with two concentrations (2.000 and 4.000 JI/insect). The S. carpocapsae isolate was pathogenic to C. cumulans, for all experiments, providing 100% mortality of insects. / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-11-19T10:26:48Z No. of bitstreams: 1 2006_Rodrigo da Rocha Fragoso.pdf: 5736952 bytes, checksum: 13405ab42e898414d9e1cb8e2ec9d4d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2009-11-25T19:46:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Rodrigo da Rocha Fragoso.pdf: 5736952 bytes, checksum: 13405ab42e898414d9e1cb8e2ec9d4d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-25T19:46:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Rodrigo da Rocha Fragoso.pdf: 5736952 bytes, checksum: 13405ab42e898414d9e1cb8e2ec9d4d4 (MD5) Previous issue date: 2006-10-11 / O nematóide formador de galhas Meloidogyne incognita ("southern root-knot nematode", SRN) apresenta distribuição mundial, causando grandes perdas em várias culturas. Seu ciclo de vida compreende seis estádios de desenvolvimento (ovo, larva 1-4 e adulto). A larva L2, fase infectiva, penetra na raiz de planta hospedeira por força mecânica e degradação enzimática para, então, estabelecer a interação planta-patógeno. Em condições favoráveis, as larvas L2 se diferenciam em fêmeas adultas apomíticas, que completam o ciclo de vida após a deposição de mais de 2000 ovos. As práticas agrícolas atuais não são eficientes contra os fitonematóides, de modo que uma estratégia poderosa e promissora para o controle de nematóides é a produção de plantas transgênicas expressando moléculas que afetam o parasitismo. Proteinases são importantes alvos para o controle de nematóides e o primeiro capítulo descreve um estudo das ESTs codificadoras de aspártico, serino e cisteíno proteinases disponíveis em banco de dados, além da completa caracterização de cDNAs isolados anteriormente. Parece existir um abundância de ESTs de aspártico proteinases em fase larval, quando comparado com ovos e fêmeas. Apenas em bibliotecas de ovos se encontram ESTs de serino proteinase. Por outro lado, ESTs de cisteíno proteinase são as mais abundantes e são encontradas em todas as fases. O cDNA Mi-asp1 codifica uma catepsina D-tipo com vários ortólogos conhecidos em nematóides. Análises de expressão temporal e espacial mostram que Mi-asp1 seja mais transcrito em ovos, do que larvas L2 ou fêmeas, sugerindo um importante papel na embriogênese do nematóide. Já no segundo capítulo, objetivando a identificação de genes envolvidos na infecção e nos processos vitais, uma biblioteca de cDNAs foi construída a partir de mRNA de larvas L2, usando o "Superscript Plasmid System with Gateway Technology for cDNA Synthesis and Cloning" (Invitrogen). A biblioteca de ESTs apresentou 2.137 seqüências validadas com 17% de redundância, distribuídas em 1.506 singlets e 197 contigs, gerados de 631 ESTs. A anotação gênica foi obtida por comparação dos resultados do BLASTx (GenBank). A análise in silico das seqüências obtidas foi feita para predição funcional, agrupamento filogenético, predição de transferência horizontal gênica e determinação da importância na interação planta-patógeno. A predição da função gênica por classificação em categorias KOG demonstrou que várias seqüências são relacionadas com mecanismos de transdução de sinais (13%) e modificações pós-traducionais, renovação de proteínas, chaperonas (12%). Os trabalhos de validação de genes-alvo estão em andamento e incluem ensaios in vitro, in vivo e in planta. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The southern root-knot nematode Meloidogyne incognita (SRN) is worldwide distributed, causing great losses in several crops. Its life cycle comprises six developmental stages (egg, four juveniles and adult). The infective stage larva 2 (L2) enters the host root via mechanical force and enzymatic degradation, and establishes the host-pathogen interaction. Under favorable parasitism conditions the L2 differentiates into an apomitic female adult that resumes its life cycle by depositing up to 2000 eggs. Current agronomic traits are not effective against the SRN, so, a powerful and promising strategy to the nematode control is the production of transgenic plants expressing molecules that are able to hinder the infection process. In this way, the promising one is the anti-feeding strategy based upon digestive enzymes inhibition and the first chapter shows an analysis of EST encoding proteinase from the data bank, beyond the complete characterization of isolated cDNAs. Aspartic proteinase ESTs are more abundant in larval stages than eggs or females. Only eggs library showed serine proteinase ESTs. On the other hand, cysteine proteinase ESTs are the most abundant and are found in all life stages. The Mi-asp1 cDNA encodes a cathepsin D-like with several known nematode orthologues. Temporal and spatial expression analysis showed that Mi-asp1 is most transcribed in eggs than larva L2 or female, suggesting an important role during nematode embryogenesis. In the second chapter, in order to identify the genes involved in the infection and other vital processes, a cDNAs library was constructed from L2 mRNAs using the Superscript Plasmid System with Gateway Technology for cDNA Synthesis and Cloning (Invitrogen). Up to the moment, the L2 cDNA library was constructed, in which 2,137 valid sequences with 17% of redundancy, distributed in 1,506 singlets and 197 contigs, generated with 631 sequences. Sequence annotation was obtained by comparing BLASTx results (GenBank). In silico analysis of obtained sequences were performed functional prediction, phylogenetic grouping, horizontal-transferred genes prediction and determination of plant- pathogen interaction. Prediction of gene function by KOG categories classification demonstrated that several sequences are related to signal transduction mechanisms (13%) and postranslational modification, protein turnover, chaperones (12%). Validation works are in test and include in vitro, in vivo and in planta assays.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-12-15T22:36:36Z No. of bitstreams: 1 2007_JansenRodrigoPereiraSantos.pdf: 722246 bytes, checksum: 11231a0698512f78cd12fb4667de6687 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-15T23:18:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_JansenRodrigoPereiraSantos.pdf: 722246 bytes, checksum: 11231a0698512f78cd12fb4667de6687 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-15T23:18:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_JansenRodrigoPereiraSantos.pdf: 722246 bytes, checksum: 11231a0698512f78cd12fb4667de6687 (MD5) Previous issue date: 2007-03-16 / A bananeira é uma ótima hospedeira de vários nematóides importantes, sendo os principais, Radopholus similis e Helicotylenchus multicinctus. Um método eficiente, de baixo custo para o produtor e que tem mostrado grande potencial para o controle de fitonematóides é a resistência genética. Uma etapa importante do melhoramento genético é a avaliação da variabilidade genética da planta hospedeira. Neste trabalho objetivou-se avaliar e caracterizar 26 genótipos de bananeira com relação à resistência ao nematóide cavernícola, Radopholus similis e, caracterizar sete genótipos contrastantes para os fenótipos de resistência e suscetibilidade a R. similis utilizando marcadores moleculares RAPD. As plantas (uma por vaso) foram inoculadas, em de casa de vegetação, com uma suspensão contendo 100 juvenis, machos e fêmeas do nematóide. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com quatro repetições e os genótipos foram avaliados 120 dias após a inoculação. Foram avaliados número de nematóides por grama de raiz, em todo o sistema radicular, no solo e o número total de nematóides. Além destes, o fator de reprodução (FR = população final/população inicial) e seu índice de redução foram calculados para determinação da reação dos genótipos a R. similis. De acordo com essa variável, observou-se que os genótipos Borneo, Grande Naine e 1304-06 se comportaram como suscetíveis e os genótipos 4249-05, 0337-02, 0323-03 e 4279-06, como resistentes a R. similis. Amostras de DNA genômico de cada um destes materiais foram extraídas e amplificadas via PCR utilizando 36 primers decâmeros para a obtenção de marcadores RAPD. Um total de 521 marcadores foram obtidos e convertidos em uma matriz de dados binários, a partir da qual foram estimadas distâncias genéticas entre os genótipos. Análises de agrupamento e dispersão gráfica dos genótipos foram realizadas. Dos 521 marcadores obtidos, 420 (81%) foram polimórficos e 140 (27%) mostraram-se promissores para trabalhos de mapeamento genético da resistência a R. similis, uma vez que estiveram presentes em acessos avaliados como resistentes e ausentes em todos os suscetíveis. As distâncias genéticas entre os genótipos variaram entre 0,106 e 0,455. A maior distância genética (0,455) foi observada entre a cultivar Borneo e o genótipo 4279-06 que se apresentaram como genótipos altamente suscetível e resistente, respectivamente. Os acessos mais contrastantes para a resistência (Borneo e 4249-05) apresentaram uma distância de 0,374 e um total de 114 bandas polimórficas e úteis para o mapeamento genético. Os ¿primers¿ OPE-15, OPH-17 e OPG-09 foram os que apresentaram maior número de bandas promissoras para mapeamento (12, 8 e 8, respectivamente), destacando-se dentre os demais. ________________________________________________________________________________ Abstract / Banana is a suitable host to various important nematodes. Radopholus similis and Helicotylenchus multicinctus are considered the most destructive ones to banana root system. Genetic resistance is a potentially efficient and low cost method of nematode control on bananas. For a breeding program, an important step is the evaluation of genetic variability of the host. This work had as objectives: to evaluate and to characterize 26 banana genotypes in relation to resistance and susceptibility to the burrowing nematode Radopholus similis, and to characterize seven banana contrasting genotypes for the phenotypes of resistance and susceptibility to R. similis with molecular markers of RAPD. Plant materials were obtained from a working collection of bananas maintained by Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical. The plants (one per pot) were inoculated with a nematode suspension containing 100 juveniles, males and females. The experiment followed a completely randomized design with four replicates. The genotypes were evaluated 120 days after inoculation. Nematodes per gram of root, numbers of nematodes per root system, numbers of soil nematodes and total number o nematodes were also evaluated. Moreover, the reproduction factor (FR = final population / initial population) and its reduction index were calculated to determine the reaction of the genotypes to R. similis. According to this variable, the genotypes Borneo, Grand Naine and 1304-06 behaved as susceptible and the genotypes 4249-05, 0337-02, 0323-03 and 4279-06, as resistant to R. similis. Genomic DNA was extracted form each of these genotypes, and tested with 36 decameric primers to obtain RAPD markers. A total of 521 markers were converted into a binary data matrix, from which the genetic distances between genotypes were estimated, and further evaluated by cluster and graphic dispersion analyses. Among 521 resultant markers, 420 (81%) were polymorphic, and 140 (27%) were considered promising markers to be used in studies for genetic mapping of resistance to R. similis in banana genotypes, for they were present on the genotypes evaluated as resistant and absent in all the susceptible ones. The genetic distances between genotypes were in the range of 0.106 to 0.455. The largest genetic distance was observed between cv. Borneo and ‘4279-06’, respectively, a xii highly susceptible and a resistant genotype to R. similis. The highest contrast, as resistance is concerned, occurred between ‘Borneo’ and ‘4249-05’, comprising a genetic distance of 0.374 and a total of 114 polymorphic bands with potential for genetic mapping of the resistance. The primers OPE-15, OPH-17 and OPG-09 were the ones allowing more promising bands for genetic mapping of resistance to the nematode (12.8 and 8, respectively).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-02-17T17:19:01Z No. of bitstreams: 1 2010_FabianedeCastroMota.pdf: 964986 bytes, checksum: 33665c11139e65139c3c63172048888d (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-03-25T15:34:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_FabianedeCastroMota.pdf: 964986 bytes, checksum: 33665c11139e65139c3c63172048888d (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-25T15:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_FabianedeCastroMota.pdf: 964986 bytes, checksum: 33665c11139e65139c3c63172048888d (MD5) / Acesso de Gossypium spp., alguns deles selvagens, nunca testados no Brasil, foram avaliados quanto à resistência a Meloidogyne incognita raça 3 em experimentos de cada vegetação. As respostas foram caracterizadas pela reprodução namatoide e medidas através do fator de reprodução (FR). O padrão resistente ‘M-315’ e os acessos ‘Algodão del Pais nº3’, ‘Auburn 56’ ‘F1 AS 0110 Nº1 x M315, ‘Fai Mui’, ‘Guazuncho 2’, ‘Semi áspero Huanuco’, ‘TX-25 Nº1, E ‘Wild Mexican Jack Jones’ fora considerados resistentes por apresentarem FR<1. Os acessos ‘ASO190 nº2’, ‘Clevewilt-6’, ‘CNPAGO 2002-2043’, ‘DeltaOpal’, ‘F1 AS 0190 nº x M315’, ‘LA RN-1032’, ‘LA-187’ e MT 123 nº3’ foram considerados moderadamente resistentes (FR=1,10 a 4,67). Foram considerados suscetíveis (FR = 5,15 A 11,52) os acessos ‘FM 966’ (padrão suscetível), ‘AS 0191’, ‘China 13-9’, ‘Deltapine 61’, F1 AS0110 nº 1 x M315’, F1 FM966 x AS0110 nº1’, ‘MT 21 Bulck Nº 6’ e ‘VH8 – 4602’. Os demais genótipos, ‘AS0110 nº 1’, ‘AS 0188’, ‘AS0189’, e ‘AS0190 Montpellier’ foram considerados altamente susceptíveis, superando o padrão suscetível (FR= 14,056 A 60, 71). Observações histológicas realizadas em seções do acesso susceptível ‘FM966’ inoculado com M incógnita raça 3 mostraram sítios de alimentação, contendo células gigantes com denso citoplasma a partir de 18 dias pós a inoculação (DAÍ). Células necróticas nunca foram observadas durante todo o ciclo e aos 34-35 DAI apareceram fêmeas e massas de ovos. Observações histológicas realizadas no acesso resistente ‘Algodão del Pais nº3’, mostraram que o parasitismo pode ser bloqueado após a penetração ou durante a migração do J2 e entre o sétimo e o 21° DAI. Observações em fluorescência e microscópia de campo claro mostraram que as células nas proximidades dos nematóides exibiram reação de hipersensibilidade com acúmulo de compostos fenólicos e a presença de células de aspecto necrótico que limitaram o desenvolvimento dos J2 e a formação de células gigantes. Células gigantes em menor número foram encontradas a partir dos 21 DAI com conteúdo citoplasmático completamente degenerado, ao lado de nematoides deformados. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Accessions of Gossypium spp., some of the them wild never tested in Brazil were evalueted for sisitance to Meloidogyne incognita raçe 3 in greenhouse experiments. The responses were characterized by the nematode reproduction, and measured by the reproduction factor (FR). The resistant control ‘M-315’ s well as the accessions ‘Algodão del Pais nº3’, ‘Auburn 56’ ‘F1 AS 0110 Nº1 x M315, ‘Fai Mui’, ‘Guazuncho 2’, ‘Semi áspero Huanuco’, ‘TX-25 Nº1, E ‘Wild Mexican Jack Jones’ were resistant FR<1. The accessions ‘ASO190 nº2’, ‘Clevewilt-6’, ‘CNPAGO 2002-2043’, ‘DeltaOpal’, ‘F1 AS 0190 nº x M315’, ‘LA RN-1032’, ‘LA-187’ and MT 123 nº3’ were considered moderately resistant (FR=1,10 a 4,67).Accessions hat were considered susceptible(FR = 5,15 A 11,52) included‘FM 966’ (susceptible control), ‘AS 0191’, ‘China 13-9’, ‘Deltapine 61’, F1 AS0110 nº 1 x M315’, F1 FM966 x AS0110 nº1’, ‘MT 21 Bulck Nº 6’ and ‘VH8 – 4602’. The genotypes, ‘AS0110 nº 1’, ‘AS 0188’, ‘AS0189’, and ‘AS0190 Montpellier’ were considered suscetible, exceeding the control (FR= 14,056 A 60, 71).Hitological observations made in root sections of the accession ‘FM966’ inoculated with M incognita race 3 showed feeding sites, containing giant cells whith dense cytoplasm at 18 days after inoculation (DAI). Necrotic cells were never observed during the entire cycle, and after 34-35 DAI females and egg masses were already observed. Histological observations made in the resistant accession ‘Algodão del Pais nº3’, showed that parasitism can be blocked after J2 penetration or during its migration at 7 to 21 DAI. Fluorescence and bright light microscopy showed that root cells surrounding nematodes exhibited hypersensitivity reaction, with the accumulation of phenolic compounds and necrotic cells that limited the development of nematodes and the foration of giant cells. Giant cells, with a degenerated cytoplasmic contents, were found in small numbers along with deformed nematodes starting at 21 DAI.