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Propriedades citotóxicas daβ lapachona em células de osteossarcoma caninoin vitro / β lapachona cytotoxic properties in cultured canine osteosartcoma cellsPimenta, Vanessa de Sousa Cruz 27 March 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-03-27 / Osteosarcoma is the most diagnosed primary bone cell tumor in dogs and humans. The need for more effective drugs with less intense collateral effect has triggered the development of plant-derived, natural-source chemotherapeutics. This study aimed to verify β lapachone intracellular effects on canine osteosarcoma cultured cells, as well as identify action mechanisms related to its antiproliferative properties. Cells were obtained from a cell line bank, sub cultivated and subjected to treatment with different β lapachone concentrations, followed by tetrazolium reduction, Tripan Blue dye exclusion assay, clongenic survival assay, Annexin V-FITC and propidium iodine double-labeling, JC-1 dye labeling and cell cycle kinetics analysis. The group treated with β lapachone for 72 hours showed the lowest cell viability, 27,74%, and the most conspicuous citotoxic effect, 64,81%, at 0,3 μM concentration; lower IC50, 0,180 μM and also the lowest cell growth - 0,50%- following treatment with 1,0 μM concentration. No statistical difference for cell proliferation was verified between concentrations after β lapachone exposure.Early apoptosis was the most frequent type of cell death considering all groups. It was less frequent in the 24-hour group treated with 0,1 μM (4,26 %) and more frequent in the 72-hour group treated with 1,0 μM (85,89 %). Mitochondrial depolarization was dose-dependent. Cell growth inhibition was carried out through cycle block at G0/G1 phase, according to exposure time. β lapachone was shown to have antiproliferative and cytotoxic effects, to induce apoptosis and to block cell cycle at G0/G1 phase on canine osteosarcoma cells. / O osteossarcoma é o tumor maligno das células ósseas primitivas mais diagnosticado em cães e humanos. A necessidade de medicamentos mais efetivos, com menor consequência adversa, tem gerado esforços para o desenvolvimento de agentes quimioterápicos compostos por plantas e outras fontes naturais. O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos intracelulares da β lapachona sobre células do osteossarcoma canino de cultura estabelecida, bem como identificar mecanismos de ação que possam explicar suas propriedades citotóxicas. Células de osteossarcoma canino foram obtidas do banco de linhagens celulares, subcultivadas e submetidas ao tratamento com a β lapachona, de acordo com as diferentes concentrações. Os resultados foram obtidos por meio do método de exclusão do corante azul de tripan, pelo método deredução do tetrazólio, pelo ensaio de sobrevivência clonogênica, pelo ensaio de dupla marcação com Anexina V-FITC e Iodeto de Propídio, pelo ensaio de marcação com o corante JC-1 e pela análise da cinética do ciclo celular. O grupo tratado com 0,3 μM de β lapachona apresentou melhor regressão da viabilidade celular (80,27% / 24h; 47,41% / 48h e 35,19% / 72h) e maior progressão da citotoxicidade (19,73% / 24h; 52,59% / 48h e 64,81% / 72h). O menor IC50 (0,180 μM) ocorreu no grupo tratado por 72 horas. O crescimento celular após o tratamento foi menor de acordo com o aumento da concentração e tempo de exposição, apresentando 0,50% de fração de sobrevivência na concentração de 1,0 μM. Não houve diferença estatística entre as concentrações, para a proliferação celular após o tempo de exposição à β lapachona.A apoptoseinicial foi o tipo de morte celular mais frequente em todos os grupos. Foi menor no grupo de 24 horas tratado com 0,1 μM (4,26 %) e maior no grupo de 72 horas tratado com 1,0 μM (85,89 %). A despolarização mitocondrial ocorreu de maneira dose dependente, caracterizando a apoptose intrínseca. A inibição do crescimento das células ocorreu pelo bloqueio do ciclo na fase G0/G1 conforme o tempo de exposição. Nas células de osteossarcoma canino, a β lapachona possui efeitos citotóxicos, induz apoptose intrínsecae promove o bloqueio do ciclo celular na fase G0/G1.
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Propriedades citotóxicas da Beta-Lapachona em células de osteossarcoma in vitro / Citotoxic properties of β lapachone in osteosarcoma cells cultured in vitroGabriel, Gabriela Hadler 09 March 2017 (has links)
Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-04-13T17:22:48Z
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Previous issue date: 2017-03-09 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Osteosarcoma is the main primary bone tumor, with unfavorable prognosis, high mortality
and high incidence of metastases. The treatment of choice is the removal of the tumor
associated with combined chemotherapy, whose adverse effects allude to the increasing need
to develop new drugs. The plants constitute a large natural reserve of compounds that have
medicinal and therapeutic properties, such as lapachol and its derivative, β-lapachone. The
aim of this study was to evaluate the cytotoxic effects of β-lapachone in osteosarcoma cells
cultured in vitro. Cells were cultured and treated with β-lapachone at different concentrations
and times of exposure. Tripan blue exclusion, tetrazolium reduction and cell survival assay
methods were performed to evaluate the effects of the compound on the cells. Cells treated
with 0,1μM β-lapachone showed lower initial cytotoxicity in the 24h time, whereas those
submitted to 1,0μM showed less viability after 72h of treatment. Cytotoxicity increased as the
concentration and time of exposure increased. The lowest IC50 (0,148μM) was observed in
treated cells for 72h. Cell growth after treatment was lower in the 1.0μl group after 72h and
the highest cell growth was observed under a concentration of 0.1μl after 24h. There was no
difference between groups for cell proliferation after treatment, and the cell survival fraction
was lower after 72h of exposure. It was concluded that β-lapachone has cytotoxic effects on
osteosarcoma cells cultured in vitro. / O osteossarcoma é o principal tumor ósseo primário, com prognóstico desfavorável, alta
mortalidade e elevada incidência de metástases. O tratamento de escolha é remoção do tumor
associada à quimioterapia combinada, cujos efeitos adversos aludem à necessidade crescente
de desenvolver novos medicamentos. As plantas constituem grandes reservas naturais de
compostos que possuem propriedades medicinais e terapêuticas, como o lapachol e seu
derivado, a β lapachona. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos citotóxicos da β
lapachona em células de osteossarcoma cultivadas in vitro. As células foram cultivadas e
tratadas com a β lapachona em diferentes concentrações e tempos de exposição. Foram
realizados os métodos de exclusão com azul de Tripan, redução do tetrazólio e ensaio de
sobrevivência celular para avaliar os efeitos do composto sobre as células. As células tratadas
com 0,1μM de β lapachona apresentaram menor citotoxicidade inicial, no tempo de 24h,
enquanto aquelas submetidas a 1,0μM apresentaram menor viabilidade após 72h de
tratamento. A citotoxicidade aumentou de acordo com o aumento da concentração e tempo de
exposição. O menor IC50 (0,148μM) foi observado nas células tratadas por 72h. O
crescimento celular após o tratamento foi menor grupo sob concentração de 1,0µl após 72h e
o maior crescimento celular foi observado sob concentração de 0,1µl após 24h. Não houve
diferença entre grupos quanto à proliferação celular após o tratamento tendo a fração de
sobrevivência das células sido menor após 72h de exposição. Concluiu-se que β lapachona
apresenta efeitos citotóxicos em células de osteossarcoma cultivadas in vitro.
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