Magíster en Bioquímica Área de Especialización en Bioquímica Clínica Aplicada y Memoria para optar al Título de Bioquímico / Durante la progresión tumoral las células epiteliales malignas pierden su polaridad, disminuyen la adhesión celular, aumentan la motilidad y adquieren capacidad invasiva. Este proceso se conoce como transición epitelio mesenquimal (TEM). En el cáncer de próstata (CaP) la disminución en la expresión de e-cadherina, que es inhibida por el factor de transcripción snail, se acompaña de una serie de otros cambios que facilitan el fenotipo mesenquimal. Las moléculas de adhesión celular (MACs)sindecano 1 y sindecano 2 cambian sus patrones de expresión y localización celular en relación a la agresividad del tumor prostático. A través de un análisis in silico, se ha descrito que existen sitios putativos de unión para snail en las regiones promotoras de los genes de sindecano 1ysindecano 2. El objetivo de esta tesis es demostrar que snail se une a regiones específicas de estos promotores reprimiendo su expresión en líneas celulares de CaP. El presente trabajo se realizó utilizando líneas celulares comerciales de CaP de baja (LNCaP) y alta (PC3) capacidad tumorigénica. Se estudió la unión de snail a regiones promotoras de los genes de sindecano 1y 2, mediante ensayos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y retardo en la movilidad electroforética en ambas líneas celulares. Para determinar si snail participa en la regulación transcripcional desindecano 1 ysindecano 2 se generó mediante infección con lentivirus una línea celular, LNCaP-Snail+, con sobreexpresión de snaily mediantePCR en tiempo real e inmunofluorescencia, se determinaron los niveles mRNA y proteínassnail,sindecano 1 y sindecano 2. Complementariamente se clonóel promotor de sindecano 1para evaluar, mediante ensayos de gen reportero con actividad luciferasa, el efecto de la sobreexpresión de snail en la regulación génica sindecano 1. Los resultados obtenidos mediante ChIP en este estudio demuestran que existe una interacción de snailcon las dos zonas más próximas al sitio de inicio de la transcripción del promotor del gen de sindecano 1, pero que no existe interacción de snailcon la región promotora de sindecano 2.Se confirmó que los niveles del transcrito y proteína snail aumentanen la línea celular LNCaP-Snail+ en comparación con líneas controles. Al determinar el efecto de la sobreexpresión de snail no se observaron disminuciones en los niveles de mRNA y proteínas de las moléculas sindecano 1 y sindecano 2 cuando existía sobreexpresión de snail. El ensayo de gen reportero tampoco da cuenta de una represión en el promotor de los genes de sindecano 1en la línea celular LNCaP-Snail+. Es posible concluir que existe unión de snail con dos regiones sólo en el promotor de sindecano 1, pero no existe una disminución en la expresión de esta molécula de adhesión en la línea celular LNCaP-Snail+. En el modelo estudiado no existe una disminución en la expresión de sindecano 1 y sindecano 2 cuando se sobreexpresa snail.Se propone que snail participa en la regulación génica de sindecano 1 en conjunto con otros represores transcripcionales que aún no han sido estudiados / During tumor progression epithelial cells lose their polarity, decrease their cell adhesion, increase their motility and acquire invasive capacity. This process is known as epithelial mesenchymal transition (EMT). In prostate cancer (PCa), the loss of e-cadherin, which is inhibited by the expression of snail, is accompanied by a number of other changes that facilitate the mesenchymal phenotype. The cellular adhesion molecules (CAMs) syndecan 1 and syndecan 2 change their patterns of expression and cellular localization in relation to prostate tumor aggressiveness. Through a in silico analysis, we have described putative snail binding sites in promoter regions of syndecan 1 and 2 genes. The aim of this thesis is to demonstrate that snail binds to specific regions of these promoters repressing their expression in PCa cell lines. This work was performed using commercial PCa cell lines with low (LNCaP) and high (PC3) tumorigenic capacity. The snail binding to promoter regions of genes syndecan 1 and 2 was studied through chromatin immunoprecipitation (ChIP) and electrophoretic mobility shift assay in both cell lines. To determine whether snail participates in the transcriptional regulation of syndecan 1 and syndecan 2, a cell line (LNCaP-Snail+) with overexpression of snail was generated by infection with lentivirus, and through real time PCR and immunofluorescence, mRNA levels and protein snail, syndecan 1 and syndecan 2 were determined. Additionally promoter of syndecan 1 was cloned to evaluate, by reporter gene assays with luciferase activity, the effect of the overexpression of snail in gene regulation of syndecan 1. The results obtained by ChIP in this study show that snail interacts with the two regions closer to the start site of transcription of the gene promoter syndecan 1, but no interaction of snail with the promoter region of syndecan 2. It was confirmed that the snail transcript and protein levels increase in LNCaP-Snail+ cell line compared to controls. The snail overexpression was not reduced syndecan 1 and syndecan 2 mRNA and protein levels. The reporter gene assay result also shows no repression in the promoter of the gene of syndecan 1 in the LNCaP-Snail+ cell line. We conclude that there is snail binding with only two regions in the promoter of the syndecan 1 gene, but there is no decrease in the expression of this CAM in the LNCaP-Snail+ cell line. In this model study, snail was not involved in gene regulation of syndecan 1. It is proposed that snail is involved in gene regulation of syndecan 1 in conjunction with other repressor molecules that have not yet been studied

Objetivo: Determinar el perfil epidemiológico del cáncer de mama HER2- positivo en pacientes atendidos en el Hospital Nacional Hipólito Unanue entre Junio del 2012 a Junio del 2015. Material: revisión retrospectiva de fichas de notificación, (Directiva Sanitaria de Vigilancia Epidemiológica del Cáncer. Registros Hospitalarios) de 34 pacientes con cáncer de mama HER 2 – positivo entre Junio del 2012 a Junio del 2015, en el Hospital Nacional Hipólito Unanue, en la Unidad de cáncer de mama y patología mamaria. Resultados: la edad media fue de 48 años (11,76%), el tamaño tumoral más frecuente fue de 2 a 5 cm (47,06%), el grado histológico más frecuente corresponde a pobremente diferenciado (64,71%), el mayor porcentaje (61,76%) no tuvo recurrencia local, el mayor porcentaje (94,12%) no tuvo metástasis, el tratamiento más frecuente fue el de terapia doble (50,00%), que incluye mastectomía radical y quimioterapia. Conclusiones: La clasificación del cáncer de mama basada en parámetros inmunohistoquímicos (IHQ) permite una mejor definición del pronóstico.

El cáncer es una patología que cada vez se hace más prevalente a nivel mundial. El tipo de cáncer con la mayor tasa de prevalencia en pacientes del género femenino es el cáncer de mama. En el Perú, es el segundo tipo de cáncer más frecuente. El diagnóstico se realiza en estadíos avanzados (estadío III y IV), lo cual trae limitaciones en el manejo de las pacientes. Es por ello que la detección temprana es de suma importancia. Dentro de las pruebas evaluadas para su tamizaje, la de mayor sensibilidad diagnostica y a su vez la más costo-efectiva es la mamografía. Objetivo: Evaluar las mamografías de tamizaje realizadas en el Centro de Prevención y Diagnóstico del Cáncer en el INEN, para determinar su valor predictivo positivo como método de detección temprano de cáncer de mama. Método: Se realizó un estudio de enfoque cuantitativo, de diseño no experimental, de tipo transversal y retrospectivo en el Centro de Prevención y Detección del Cáncer del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas durante Mayo 2013 a Abril 2014. Resultados: Se obtuvo que, de las biopsias realizadas (85) en las pacientes con mamografías BI-RADS 4 (99), 54 fueron positivas para lesiones cancerígenas, lo que hace que la mamografía tenga un valor predictivo positivo de 63.53%. Conclusión: En este estudio que las mamografías de tamizaje tienen un alto valor predictivo positivo para la detección del cáncer de mama

Introducción: En el Perú, el cáncer de estómago representa la segunda neoplasia maligna más frecuente en hombres y la tercera en frecuencia en mujeres, además de ser la causa de cáncer con mayor mortalidad en uno y otro sexo. Objetivos: Identificar los factores de riesgo asociados al diagnóstico de cáncer gástrico en pacientes atendidos en el consultorio externo del servicio de Gastroenterología del HNHU durante el año 2014. Materiales y método: Se realizó un estudio de casos y controles. Un total de 84 pacientes con el diagnóstico de cáncer gástrico fueron comparados con 84 controles. Los datos fueron obtenidos a partir de historias clínicas mediante fichas de recolección de datos previamente validadas, que contenían los problemas sociodemográficos, clínicos, patológicos y ambientales. Se empleó la prueba de Chi cuadrado para determinar la significancia y el modelo de regresión logística para obtener la razón de posibilidades (OR) y sus intervalos de confianza del 95%. Resultados: Del total de la muestra, se observó que 70 eran varones (41.7%) y 98 eran mujeres (58.3%), la mayoría eran menores de 50 años (52.9%). Se encontró una asociación estadísticamente significativa entre el diagnóstico de cáncer gástrico y los siguientes factores: el ser varón (OR=5.96; IC95%, 3.01-11.79), tener 50 años o más (OR=3.81; IC95%, 2.01-7.24), el antecedente familiar de cáncer gástrico (OR=9.47; IC95%, 3.14-28.57), la infección por H. Pylori (OR=8; IC95%, 4.01-15.95) y el consumo de tabaco (OR=6.61; IC95%, 3.18-13.73). Conclusiones: Se encontró que el ser varón, tener 50 años o más, tener el antecedente familiar de cáncer gástrico, la infección por H. Pylori y el tabaquismo fueron factores de riesgo asociados al diagnóstico de cáncer gástrico.

Objetivo: Demostrar la asociación entre los factores de riesgo estudiados: edad, grado de instrucción, edad de inicio de vida de relaciones sexuales, número de parejas seauales y el cáncer de cérvix en pacientes atendidas en el Hospital Vitarte durante el año 2015. Materiales y métodos: Se realizó un estudio analítico, retrospectivo, observacional de corte transversal con enfoque cuantitativo en el cual se revisó historias clínicas del Hospital Vitarte. Resultados: El presente estudio cuya muestra tiene 105 pacientes (n=105), el 84% tuvo el diagnóstico de carcinoma epidermoide y al 16% se le diagnosticó adenocarcinoma, a su vez, la distribución en cuanto a su estadiaje se ubicó: 81% en estadío I, 18% en el estadío II, el 9% en el estadío III y el 3% en el estadío IV. En cuanto a la edad con mayor frecuencia para el carcinoma escamoso, las edades comprendidas entre los 40 y 49 años fueron las de mayor prevalencia, representando el 40% de la muestra total. El adenocarcinoma es más frecuente en el grupo etario comprendido entre los 60 y 69 años. Las pacientes que iniciaron su vida sexual entre los 10 y 13 años de edad presentaron una asociación estadística entre dicho factor y el cáncer cervicouterino (CCU) (p=0.01; p<0,05). El número de parejas sexuales como factor de riesgo para cáncer cervicouterino presenta una asociación estadísticamente significativa (p=0.01; p<0,05). En cuanto a los factores: estado civil de la paciente (p=0.648; p>0,05) y grado de instrucción (p=0.08; p>0,05) no se halló asociación estadística con el cáncer cervicouterino. Conclusiones: Se confirma la asociación estadística entre los factores de riesgo: inicio temprano de relaciones sexuales y poliandria con respecto al cáncer cervicouterino. Es necesario dar a conocer a la población la importancia del cribado para el diagnóstico temprano de las lesiones premalignas y prevenir el CCU.

Objetivo: Determinar el perfil epidemiológico del Cáncer de Mama Triple Negativo en pacientes atendidos en el Hospital Nacional Hipólito Unanue entre Junio del 2012 a Junio del 2015. Material: Revisión retrospectiva de fichas de notificación, (Directiva Sanitaria de Vigilancia Epidemiológica del Cáncer. Registros Hospitalarios) de 42 pacientes con Cáncer de Mama Triple Negativo entre Junio del 2012 a Junio del 2015, en el Hospital Nacional Hipólito Unanue, en la Unidad de Cáncer de Mama y Patología Mamaria. Resultados: La edad media fue de 51 años (14,2%), estado menopáusico más frecuente fue el Pre Menopáusico (52.4%), el estadío patológico más frecuente fue Estadío III (54.8%), el tamaño tumoral más frecuente fue el que afecta a piel (47,06%), hubo compromiso axilar en un 81%, el grado histológico más frecuente corresponde a pobremente diferenciado (64,71%), el mayor porcentaje (50%) no tuvo recurrencia local, el mayor porcentaje (83.3%) no tuvo metástasis, el tratamiento más frecuente fue el de terapia doble (33.3%), que incluye mastectomía radical y quimioterapia. Conclusiones: La clasificación del cáncer de mama basada en parámetros inmunohistoquímicos (IHQ) permite una mejor definición del pronóstico.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / El cáncer oral, parte del grupo de cánceres de la cabeza y cuello, ocupa el sexto lugar entre las enfermedades más frecuentes en el mundo (1). Se han descrito marcadas diferencias geográficas en su prevalencia (2), asociadas a hábitos de tabaquismo, esperanza de vida de la población, educación, programas de prevención y recursos médicos (3). Esta es una patología de gran repercusión física, psíquica y social, pues constituye una amenaza potencial para la salud y la longevidad del paciente (4) La forma histopatológica más común de cáncer oral es el carcinoma escamoso o espinocelular (CEC) que corresponde aproximadamente al 95% de los casos (5). Otros tipos corresponden a melanoma, linfoma, sarcomas, carcinomas de glándulas salivales menores y metástasis (6, 7). Los factores de riesgo más reconocidos que afectan el desarrollo de cáncer oral incluyen el alcohol y el consumo de tabaco. El consumo de tabaco es responsable del 90% de estos cánceres; el riesgo de los fumadores de tener cáncer oral sería 20 veces mayor a quienes no lo hacen y cuando se asocia al consumo de alcohol, éste aumenta mucho más.

Doctora en Bioquímica / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / El cáncer es la segunda causa de muerte a nivel mundial y en Chile luego de las enfermedades cardiovasculares. Importantemente, las muertes por cáncer van en aumento. Los avances más recientes en el entendimiento de las vías de señalización involucradas en cáncer, ha permitido la identificación de marcadores tempranos y tardíos de la carcinogénesis, los cuales son fundamentales para el diagnóstico y la prognosis del paciente. Basados en estos descubrimientos, existen disponibles nuevas terapias para el tratamiento de esta enfermedad. En esta perspectiva, una respuesta generada en el retículo endoplasmático (RE), denominada unfolded protein response (UPR) ha llamado la atención en el estudio del cáncer en la última década. En células eucariontes, la mayoría de las proteínas secretadas y de transmembrana se pliegan y maduran en el lumen del RE. Las proteínas entran al RE como cadenas polipeptídicas no plegadas cuyo flujo hacia el RE varía en respuesta a condiciones del medio y el estado fisiológico de la célula. De acuerdo a estos requerimientos las células ajustan la capacidad de plegamiento de proteínas del RE asegurando el mantenimiento de la fidelidad del proceso. Este control homeostático es realizado a través de vías de transducción de señales iniciadas por proteínas de transmembrana del RE cuyas porciones luminales sensan el estado de plegamiento de proteínas en el RE y sus regiones efectoras citoplasmáticas señalizan hacia el citoplasma y núcleo. Una de las evidencias que sustenta el rol de la UPR en cáncer está relacionada con la alta tasa de proliferación de células cancerosas observada durante el desarrollo tumoral. Este fenómeno requiere de una elevada síntesis de proteínas y de membrana. Adicionalmente, la proliferación celular asociada al crecimiento tumoral ocurre en condiciones hipóxicas y en presencia limitada de nutrientes. La señalización de la UPR involucra al menos tres sensores distintos localizados en la membrana del RE; IRE1-α, ATF6 y PERK. Estos receptores comparten dominios sensores similares en el lumen del RE y bajo condiciones de stress de retículo in vitro, son simultáneamente activados Caveolina-1 (Cav-1) una proteína de andamiaje asociada a la membrana ampliamente expresada que ha sido descrita como una proteína supresora de tumores. Estudios de nuestro laboratorio, han relacionado esta actividad con su localización en la membrana plasmática y asociada a E-Cadherina. Sin embargo, en modelos celulares de cáncer carentes de E-Cadherina, Caveolina-1 mantiene su rol como supresor de tumores. Estas observaciones indican que esta supresión de tumores puede ocurrir mediante mecanismos independientes de E-Cadherina. Adicionalmente en estos modelos, Cav-1 es altamente prevalente intracelularmente, unida a la membrana de organelos. Estas observaciones han hecho surgir la pregunta si la presencia de Cav-1 en estos organelos, pudiese estar relacionada con la actividad supresora de tumores de Cav-1 en ausencia de E-Cadherina. Con los antecedentes anteriormente mencionados, el objetivo de esta tesis fue evaluar in vivo en un modelo murino inmunocompetente, si la función de Cav-1 como supresor de tumores tenía relación con la vía adaptativa UPR y luego analizar in vitro cómo Caveolina-1 afecta la UPR. Para la primera parte, se utilizaron como modelo células de melanoma B16F10, singénicas con la cepa de ratón C57-BL/6. El análisis de diferentes parámetros en tumores formados por las células B16F10 fueron empleados para establecer una conexión entre la expresión de Cav-1 y la modulación de la vía de UPR in vivo. Los ensayos in vivo mostraron que Cav-1suprimió la formación de tumores. Se observó una reducción del 60 % en el tamaño en aquellos tumores formados por las células que expresaron Cav-1 comparado con las que no la expresaron. El hallazgo más importante observado en tumores generados por células que expresan CAV-1 fue la reducción de genes blanco regulados por las vías señalización de los sensores IRE1-α y PERK de la UPR. Esta regulación negativa fue observada además a nivel de proteínas y se mantuvo incluso en tumores de igual tamaño. En modelos de inducción clásicos de estrés de retículo in vitro, se utilizó hipoxia y el tratamiento con el inhibidor de la glicosilación, tunicamicina. En estos experimentos, nuevamente la presencia de Cav-1 se relacionó con una disminución en los niveles transcripcionales y de sus respectivos blancos proteicos río abajo de IRE1-α y PERK. Además la expresión de Cav-1 se asoció con un aumento en la muerte celular luego de 24 h de tratamiento con tunicamicina o exposición a hipoxia. Resultados similares se obtuvieron in vitro en otra línea celular metastásica de cáncer de mama humano (MDA-MB-231). El rol supresor de tumores de Cav-1 es a menudo atribuido a interacciones proteína-proteína mediadas por el dominio de andamiaje de Cav-1 (CSD), la que frecuentemente resulta en la inactivación de estas proteínas. Es por esto que para evaluar la relevancia de este dominio en la supresión de tumores y la regulación negativa de la UPR, se realizaron distintas mutaciones sitio-dirigidas en aminoácidos potencialmente interesantes de este dominio y sus alrededores para analizar su efecto en el rol supresor de tumores y sobre la UPR. Las mutantes Cav-1(S80A) y (S80E), pierden su capacidad de suprimir crecimiento tumoral y a diferencia de Cav-1(WT), generan tumores de tamaño similar a los generados por células que carecen de la expresión de Cav-1. Por el contrario, tumores generados a partir de células que expresaron Cav-1(W98F) y (W1280F), se comportaron como los tumores generados a partir de de Cav-1(WT). Del mismo modo, La inhibición de la UPR observada para de Cav-1(WT) se pierde en tumores generados por las mutantes Cav-1(S80A) y (S80E) pero no en aquellos que se generan a partir de Cav-1(W98F) y (W1280F). En resumen, los resultados obtenidos en esta tesis, indican que la presencia de Cav-1 en compartimentos intracelulares, tales como el retículo endoplasmático y la inhibición ahí de la UPR están relacionadas con la supresión de tumores de Cav-1 independiente de E-Cadherina. Este trabajo además provee de evidencia que Cav-1 suprime UPR in vitro e in vivo y que el residuo aminoacídico S80 es requerido para suprimir la formación de tumores así como también para inhibir UPR / Cancer is the second most important cause of death worldwide and also in Chile after heart diseases. Importantly, deaths caused by cancer are on the rise. More recent advances in our understanding of cancer signaling pathways have led to the identification of early and late stage markers of carcinogenesis important for patient diagnosis and prognosis. Also, based on such insight, new therapies to treat this disease have become available. Particularly, in this perspective, a stress response generated in the endoplasmic reticulum (ER), referred to as the unfolded protein response (UPR) has attracted a great deal of attention in cancer research in the last decade. In eukaryotic cells, most of the secreted and transmembrane proteins are folded in the ER lumen. The proteins enter into the ER as unfolded polypeptide chains and the extent of transport into this compartment varies in response to environment signals or the physiological status of cells. According to the specific demands, cells adapt their protein folding capacity in order to preserve the fidelity of the process. This process that seeks to maintain ER homeostasis is controlled by signal transduction events initiated by ER transmembrane receptor proteins whose luminal domains sense the protein folding status and then convey signals toward the cytoplasm and nucleus via the cytosolic domains. The importance of UPR in cancer is linked to the high proliferation rates developed by cancer cells during tumor growth, which in turn require augmented protein and membrane synthesis capacity. Additionally, such tumor growth frequently occurs in hypoxia and under conditions of limited nutrient availability. All these events posit the UPR as a crucial adaptive response during tumor growth. The UPR signaling pathway involves at least three distinct sensors located in the ER membrane: IRE1-, PERK, and ATF6. These receptors share luminal sensing domains and under stress conditions in vitro they are simultaneously activated. However, the extent of activation and hence the capacity to respond to stress depends on a large variety of ER associated factors, one of them potentially being the protein caveolin-1. Caveolin-1 (Cav-1) is a broadly expressed, membrane-associated scaffolding protein that has been described to function as a tumor suppressor. Studies from our laboratory have linked this ability to its localization in the plasma membrane and association there with E-cadherin. However, in cancer cell models lacking E-Cadherin, Cav-1 still functions as a tumor suppressor, albeit less efficiently. These observations indicate that Cav-1 tumor suppression may occur via mechanisms that are independent of E-cadherin, additionally, in such models; Cav-1 was highly prevalent in intracellular, membrane-bound compartments. These observations raised the question as to whether the presence of Cav-1 in these organelles could be related to the Cav-1 tumor suppressor activity in the absence of E-cadherin. With this in mind, the objective of this thesis was to evaluate in vivo in an immunocompetent mouse model, whether the function of Cav-1 as tumor suppressor was related to the adaptive UPR signaling pathway and then to analyze in vitro how Cav-1 affects the UPR. To test the first part, we used the syngenic mouse melanoma cell line B16F10 in the murine strain C57-BL/6. The analysis of different parameters in tumors formed by B16F10 cells were employed to establish a connection between the expression of Cav-1 and the modulation of the UPR pathway in vivo. The in vivo assays showed that Cav-1 suppressed tumor growth. A 60% reduction in tumor size was observed in tumors generated by B16F10 cells expressing Cav-1, as compared to those generated by cells lacking Cav-1. Importantly, in the tumors generated by Cav-1 expressing cells, a reduction in the transcription of target genes regulated downstream of the UPR sensors IRE1-α and PERK was observed. This down-regulation was observed also at the protein levels and the observed differences were maintained in tumors of the same size. In in vitro experiments, classic ER stress inducers, such as hypoxia and treatment with the glycosylation inhibitor tunicamicyn were employed. Here too, the presence of Cav-1 was linked to a reduction in the transcription of target genes downstream of IRE1-α and PERK that coincided with reduced protein levels of the respective target proteins.Cav-1 expression was associated with an increase in cell death after 24 h of treatment with tunicamicyn or exposure to hypoxia. Of note, similar results were obtained in vitro using the aforementioned B16F10 cells and also the metastasic human breast cancer cell line MDA-MB-231. Cav-1 tumor suppression is often attributed to protein-protein interactions mediated by the Cav-1 scaffolding domain (CSD) that often lead to inactivation of Cav-1 binding partners. To test the relevance of the CSD in tumor suppression and UPR down-regulation, several potentially interesting amino acids were altered by site-directed mutagenesis in the CSD and flanking regions and their impact on Cav-1-mediated inhibition of UPR and tumor growth were assessed. The Cav-1(S80A) and (S80E) mutants lost their ability to suppress tumor formation, and unlike Cav-1(WT) expressing cells generated tumors similar to those formed by Cav-1 lacking B16F10 cells. On the contrary, tumors generated by cells expressing the Cav-1(W98F) and (W128F) mutants behaved essentially the same as Cav-1(WT) expressing cells. Likewise, Cav-1-mediated UPR inhibition observed for tumors generated by Cav-1(WT) expressing cells was lost in tumors generated by cells expressing the S80A and S80E mutants, but not in those expressing the W98F and W128F mutants. In summary, the results obtained in this thesis indicate that the presence of Cav-1 in intracellular compartments, such as the ER, and inhibition there of the UPR is linked to Cav-1 tumor suppression independent of E-cadherin. We also provide evidence showing that Cav-1 suppressed the UPR in vitro and in vivo, and that the amino acid residue S80 is required for Cav-1 to suppress tumor formation and inhibit the UPR / Fondecyt Fondap ICGEB CRP/CH108-03

Resumo não disponível

Introdução O câncer de mama constitui problema de saúde pública em todo o mundo, sendo esta a neoplasia maligna mais comum da mulher. Aproximadamente 15 a 25% destes tumores são classificados como HER2-positivos – um subgrupo que apresenta comportamento biológico mais agressivo e pior prognóstico. O tratamento adjuvante e neoadjuvante desses tumores com quimioterapia associada a inibidores da via HER2 é eficaz em aumentar a chance de cura das pacientes, porém ainda não se sabe qual é o melhor regime de tratamento para esta situação clínica em virtude da dificuldade em estabelecer modelos matemáticos capazes de lidar com a grande variedade de opções existentes. Esta tese teve por objetivo revisar a literatura acerca do tema e conduzir uma metanálise em rede a fim de elaborar uma inferência mais detalhada quanto às opções terapêuticas para esta situação clínica. Métodos Foi conduzida revisão sistemática da literatura a partir das principais bases de dados (MEDLINE, EMBASE e Cochrane Central Register of Controlled trials) e dos anais de congressos pertinentes ao tema. Detalhes da estratégia de busca encontram-se descritos na sessão 9.2 desta tese. Foram incluídos todos os ECRs que compararam quimioterapia associada a pelo menos um inibidor da via HER2 com quimioterapia isolada ou qualquer outro regime de quimioterapia associada à terapia anti-HER2. Dois revisores independentes revisaram a lista de títulos e extraíram os dados. Um terceiro revisor contrapôs as listas e os dados, resolvendo casos de discrepâncias. Medidas de efeito entre tratamentos foram sumarizadas em cada ECR como HR para desfechos mensurados como “tempo-até-evento” – sobrevida global (SG) e sobrevida livre de doença (SLD) – e como RR para eventos dicotômicos – resposta patológica completa (RPC) e cardiotoxicidade. Foi conduzida metanálise em rede baseada no modelo Bayesiano combinando evidência direta e indireta a fim de se estabelecer medidas de efeito comparativas entre todos os braços de tratamentos incluídos nas redes, apresentando as estimativas pontuais e os intervalos de credibilidade (IC) para todas as comparações possíveis. A partir desses dados, os tratamentos foram ranqueados para cada desfecho utilizando a área sob a curva de ranqueamento cumulativo (SUCRA). Os estudos incluídos em cada rede diferiram entre si em virtude da disponibilidade de desfechos. Inconsistências entre as evidências diretas e indiretas foram avaliadas pelo método “split node” (em redes complexas) e pelo método de Bucher (em redes simples). Resultados A revisão sistemática da literatura identificou 1553 referências únicas, das quais 70 foram incluídas na metanalise, totalizando 33 ECRs. A rede de SG incluiu 12 ECRs (27.277 pacientes) e demonstrou que o duplo bloqueio da via HER2 com trastuzumab e lapatinibe associado à quimioterapia é o melhor regime de tratamento (HR 0.78; IC95% 0.61-0.99, quando comparado ao esquema padrão-ouro de quimioterapia associada à trastuzumabe por 12 meses). A rede de SLD incluiu 14 ECRs (30.219 pacientes) e corroborou os achados descritos acima referentes à eficácia do duplo-bloqueio, adicionando os promissores resultados da utilização sequencial de 12 meses de neratinibe após quimioterapia e 12 meses de trastuzumabe (esquema para o qual ainda não foram publicados resultados de SG). Em relação à RPC, 17 ECRs foram incluídos, totalizando 4.383 pacientes. Aqui também o duplo-bloqueio se mostrou superior aos demais esquemas. Taxano associado à trastuzumabe com lapatinibe ou pertuzumabe foram superiores aos demais esquemas e comparáveis entre si, com uma superioridade marginal, porém não significativa, a favor do pertuzumabe (RR 1.10; IC 95% 0.70-1.60). Para todos os desfechos que avaliaram a efetividade do tratamento, os regimes contendo quimioterapia isolada ou com um inibidor da via HER2 que não o trastuzumabe foram as piores opções. Já a cardiotoxicidade foi avaliada em uma rede composta por 21 ECR que em conjunto totalizaram 29.555 pacientes. O duplo bloqueio com trastuzumabe e pertuzumabe se mostrou mais cardiotóxico, mas cabe a ressalva de que quedas sintomáticas e irreversíveis da fração de ejeção constituem evento raro neste cenário clínico (<1%). Conclusões Os achados desta tese vêm a corroborar o conceito do duplo-bloqueio da via HER2 como melhor opção terapêutica em termos de eficácia no tratamento de tumores HER2 positivos e reiteram a associação de quimioterapia com trastuzumabe como pedra angular deste tratamento. Evidência de benefício em termos de ganho de sobrevida global foi identificada com uma destas estratégias (quimioterapia associada à trastuzumabe e lapatinibe). Outras alternativas de duplo-bloqueio – tais como quimioterapia associada à trastuzumabe com pertuzumabe ou com neratinibe sequencial – se mostraram promissoras em relação aos outros desfechos de eficácia avaliados nesta tese (SLD e RPC), mas seus resultados de sobrevida global ainda são esperados para uma melhor caracterização da rede. O uso concomitante do trastuzumabe com o pertuzumabe aumenta a cardiotoxicidade, mas este agravo é de pequena magnitude clínica. Já a associação com lapatinibe é bastante segura do ponto de vista cardiológico, mas aumenta a incidência de diarreia (desfecho este não avaliado nesta tese em virtude da heterogeneidade dos reportes). / Introduction Breast cancer is the most common malignancy among women worldwide. Roughly 15 to 25% of breast cancers are classified as HER2-positive, a subgroup of tumors with a more aggressive clinical phenotype and worse prognosis due to unregulated cell growth and abnormal survival mediated by the overexpression of the HER2 protein. Treating these tumors in the adjuvant and neoadjuvant settings with chemotherapy and anti-HER2 targeted therapy is efficacious with positive impact in overall survival (OS). However, the best regimen to treat these patients has not yet been defined due to the lack of meta-analysis usign appropriate mathematical models capable of dealing with the variety of trials and treatment options that are seen in this scenario. The present theses aims to review the literature on this issue and carry out a network meta-analysis in order to provide more detailed inference on this topic. Methods MEDLINE, EMBASE and Cochrane Central Register of Controlled Trials as well as the main congress proceedings on this theme were searched in a systematic review. Details regarding the search strategy can be found at the 9.2 section of this theses. All phase II or III randomized controlled trials (RCTs) that compared chemotherapy plus any anti-HER2 therapy with chemotherapy alone or any other different combination of chemotherapy and anti-HER2 therapy in the adjuvant or neoadjuvant settings were included. Two independent reviewers examined the lists of trials and extracted data. A third reviewer adjudicated cases of discordance between the first two reviewers. Time-to-event outcomes, such as overall survival (OS) and diseasefree survival (DFS), were pooled as hazard ratios, while relative risks were used to pool effect sizes for complete pathological response (CPR) and cardiotoxicity. The Bayesian framework was used to conduct this network meta-analysis in order to combine direct and indirect evidence. Due to different availability of outcomes among the included studies, distinct networks were built for each outcome. Results were summarized as point estimates and their 95% credibility intervals (CI). Treatments were ranked for each outcome using the area under the cumulative ranking curve (SUCRA). This analysis yields a probability interval for each arm indicating the likelihood of a given schedule being the best. In order to check for inconsistencies between direct and indirect evidence within a closed loop, we used the “split node method” (for complex networks) or the Bucher method (for simple networks). Results Systemic review of the literature retrieved 1.553 unique references, of which 70 were included accounting for 33 RCTs. The OS network included 12 RCTs (27,277 patients) and showed that the dual blockage of the HER2 pathway with trastuzumab plus lapatinib associated with chemotherapy is the best schedule for this outcome (HR 0.78; 95%CI 0.61-0.99, when compared to the gold-standard regimen of chemotherapy associated with trastuzumab for 12 months). DFS network was composed by 14 RCTs (30,219 patients) and reinforced the previous findings regarding the efficacy of the dual blockage. However, it added the promise results of 12 months of neratinib sequential to chemotherapy plus 12 months of trastuzumab (OS results for this study have not yet been published). Probability of achieving CPR was evaluated based on 17 RCTs (4,383 patients). The dual blockage also proved to be superior for this outcome. Taxane associated with trastuzumab and lapatinib or pertuzumab were better than the other regimens and showed comparable efficacy between them, with marginal, though not significant, superiority in favor of pertuzumab (RR 1.10; 95%CI 0.70-1.60). In all the networks that evaluated efficacy, regimens containing only chemotherapy with no anti-HER2 therapy or with any other anti-HER2 therapy other than trastuzumab were the worst options. Cardiotoxicity was assessed in a network with 21 RCTs (29,555 patients). This analysis showed that the dual blockage with trastuzumab and pertuzumab had more cardiotoxicity events, but it is important to state that irreversible symptomatic CHF is a rare event in this clinical scenario (<1%). Conclusion The findings of these networks endorses the concepts that the dual blockage of the HER2 pathway is the best therapeutic option in terms of efficacy for HER2-positive breast cancer and that trastuzumab plus chemotherapy is the backbone of this treatment. It was identified beneffit in terms of OS with one of these schedules (chemotherapy associated with trastuzumab and lapatinib). Other alternatives of dual blockage, such as chemotherapy associated with trastuzumab and pertuzumab or sequential neratinib, are promising alternatives considering their results on DFS and CPR, but their results on OS are still waited. Concomitant use of trastuzumab and pertuzumab increases cardiotoxicity. However, it must be emphasized that clinical meaningfull outcomes such as permanent symptomatic CHF are very uncomon. On the other hand, the simultaneous use of lapatinib is safe from the cardiological point of view, but it increases the incidence of diarrhea (an outcome that was not evaluated in this theses due to high heterogeneity on the reports).