Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Fernanda Senter Magajervski / Banca: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Resumo: O estudo foi desenvolvido em uma fazenda localizada em área de mata Atlântica e de floresta artificial, no Município de Telêmaco Borba, Estado do Paraná. Teve por objetivo verificar, por meio de armadilhas fotográficas, quais espécies de carnívoros selvagens ocorrem na região, caracterizar espacialmente a área de vida das espécies-alvo, verificar a inter-relação entre os carnívoros selvagens e os domésticos na área de estudo, investigar a ocorrência de anticorpos contra Brucella, Leishmania, Leptospira, Neospora e Toxoplasma em carnívoros selvagens e domésticos na área de estudo, verificar o conhecimento dos moradores locais a respeito das infecções estudadas e avaliar o efeito de campanha educativa sobre esse conhecimento. Foram examinados 18 cães de funcionários da fazenda e foram capturados três exemplares de lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) e quatro exemplares de jaguatirica (Leopardus pardalis), dos quais foi colhido soro sanguíneo, e nos animais selvagens foi colocado rádio-colar com GPS. Foram realizados testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra Brucella abortus, B. canis, Leishmania chagasi, Leptospira spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Foram identificadas na área 14 espécies de carnívoros selvagens, pertencentes a 12 gêneros e quatro famílias. Foi possível recuperar o colar de apenas um dos animais (jaguatirica), cuja área de vida teve um Mínimo Polígono Convexo (MPC) de 25 mil hectares (Ha), aproximadamente. Os testes sorológicos mostraram que foram observados anticorpos contra: B. abortus, em apenas um dos lobos-guarás; Leptospira, em um dos cães, um dos lobos-guarás e três das jaguatiricas; Neospora, em dois dos cães, dois dos lobos-guarás e duas das jaguatiricas; Toxoplasma, em oito dos cães, todos os três lobos-guarás e todas as quatro jaguatiricas. Nenhum dos animais apresentou anticorpos contra B. canis nem contra Leishmania. As avaliações realizadas... / Abstract: The investigation was carried out in farm located in an area of Atlantic and artificial forest in the municipality of Telêmaco Borba, State of Paraná, Brazil. The aims of the study were: to verify, through photografical traps, the species of wild carnivores in the region; to characterize spatially the area of life of the target species; to verify the relationships between wild and domestic carnivora in the study area; to investigate the occurrence of antibodies against Brucella, Leishmania, Leptospira, Neospora and Toxoplasma in domestic dogs and wild carnivores; to verify the knowledege of people living in the farm about the infections studied and to verify the effect of educational instruction on the knowledge of these people. Blood samples were obtained from 18 domestic dogs belonging to the farm workers, from three freeranging maned wolves (Chrysocyon brachyurus) and four free-ranging ocelots (Leopardus pardalis) captured in the area. A GPS radio transmitter housed in a collar was attached to each of the wild animals. Serological tests to Brucella abortus, B. canis, Leishmania chagasi, Leptospira spp., Neospora caninum, and Toxoplasma gondii antigens were performed. Fourteen wild carnivore species classified in twelve genera and in four families were found in the area. Only one GPS transmitter, attached to one ocelot, was found, and revealed that this animal had an area of life measuring about 25 thousand hectares. Serological tests showed antibody against B. abortus only in one maned wolf, against Leptospira in one dog, one maned wolf and three ocelots, against Neospora in two dogs, two maned wolves and two ocelots, against Toxoplasma in eigth dogs, all the three maned wolves and all the four ocelots. None of the animals had antibody titres to B. canis nor to Leishmania. The workers had initially low knowledge about the diseases, but their knowledge significantly improved after the instructions. Results of the study led to ... / Doutor

Pertencente ao filo Apicomplexa, Neospora caninum causa infecções associadas à perda fetal e mortalidade neonatal em várias espécies animais. A doença é descrita desde 1984, quando ocorreram os primeiros casos de encefalite e miosite em cães. Estes desempenham um papel fundamental na epidemiologia do protozoário, pois são seus hospedeiros definitivos, assim como os coiotes e o cão australiano dingo. Devido à sua importância no mundo e às diferenças de prevalência nos diversos estados brasileiros há necessidade de investigar a ocorrência do protozoário em cães no Rio Grande do Sul. Amostras de soro de 313 cães de origem urbana e rural do município de Caxias do sul foram testadas para a presença de anticorpos para N. caninum mediante a reação de imunofluorescência indireta (RIFI≥1:50). Na área urbana a prevalência foi de 2% (5/160) e na rural foi de 12% (36/153) (p < 0,0001). Os títulos sorológicos variaram de zero (86,9%) a 1:6400 (0,64%), sendo 1:50 (5,11%), o mais prevalente dentre os positivos. Nenhum dos cães examinados apresentou sinais clínicos de neosporose durante a coleta de sangue. Dos fatores de risco avaliados, a idade dos cães rurais foi o único significativo (p = 0,0053), com prevalência de 1% (2/34) entre aqueles com menos de um ano de idade e de 22% (34/119) entre os com mais de um ano de idade. Quanto aos fatores gênero, alimentação confinamento, contato com bovino e recolhimento de carcaças, os cães rurais não apresentaram diferença significativa em relação à soropositividade. Nos cães urbanos, os fatores gênero, alimentação e idade não apresentaram diferença significativa em relação à positividade dos animais. Este estudo demonstrou que os cães da área rural de Caxias do Sul estão mais predispostos à infecção por N. caninum, principalmente animais com mais de um ano de idade. Nos cães de área urbana o protozoário também se fez presente no município de Caxias do sul, necessitando maiores estudos nessa população. / Belonging to the phylum Apicomplexa, Neospora caninum causes infections associated with fetal loss and neonatal mortality among several animal species. This disease has been reported since 1984, when the first cases of encephalitis and myositis in dogs occurred. They play a key role in the epidemiology of the protozoan, because they are its definite hosts, as well as the coyotes and the Australian dog dingo. Due to its importance in the world and to the differences of prevalence in the several Brazilian states, there is the need to investigate the occurrence of the protozoan among dogs in Rio Grande do Sul. Serum samples from 313 dogs from urban and country areas of Caxias do Sul were tested for the presence of antibodies to N. caninum by indirect immunofluorescence assay (RIFI≥1:50). In urban areas the prevalence was 2% (5/160) and in rural areas was 12% (36/153) (p <0.0001). The serological titers ranged from zero (86.9%) to 1:6400 (0.64%) and 1:50 (5.11%), the most prevalent among the positives. None of the dogs examined showed clinical signs of neosporosis during blood collection. Among the risk factors evaluated, the age of rural dogs was the only significant one (p = 0.0053), with a prevalence of 1% (2/34) among those with less than a year old and 22% (34/119) among the ones which were more than one year old. Concerning the factors gender, feeding, confinement, contact with cattle and carcasses collection, the country dogs did not show significant difference related to seropositivity. Among urban dogs, the factors gender, feeding and age did not show significant difference regarding the positivity of the animals. This study showed that dogs from country areas of Caxias do Sul are more likely to get infected by N. caninum, especially the animals which are more than one year old. In dogs from urban areas the protozoan was also present in Caxias do Sul, requiring further studies among this population.

A mortalidade fetal é uma causa importante de perdas reprodutivas em animais domésticos e tem impacto significativo na rentabilidade de um sistema de produção animal. No Brasil, poucas informações são disponíveis sobre as principais causa de aborto em bovinos. O presente estudo resultou em cinco artigos. O primeiro artigo descreve as principais causas de aborto bovino diagnosticadas no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul no período 2003-2011. Neste período um total de 490 fetos bovinos foi analisado. Causas específicas de aborto foram encontradas em 46,7 % dos casos. Infecções por protozoários, em especial Neospora caninum acometeram 33 % dos casos (162/490). Bactérias em 6,3 % (31/490), seguidas por fungos 0,8% (4/490) foram causas adicionais de abortos. Em dois fetos (0,4 %), coinfecções por dois agentes foram identificadas. Causas não infecciosas foram observadas em 3 % dos abortos e malformações congênitas a 2,6%. No segundo artigo estima-se a ocorrência de abortos por Brucella abortus em bovinos na região sul, caracterizando os achados macroscópicos, histopatológicos, bacteriológicos, imuno-histoquímicos e de PCR desta enfermidade. No terceiro artigo relata-se a infecção por Geotrichum candidum em feto bovino abortado associado a lesões de pele e pulmonares. A ocorrência de malformações congênitas múltiplas em um feto bovino abortado é relatada no quarto artigo e casos de condrodisplasia tipo Dexter em fetos bovinos abortados são descritos no quinto. / The fetal mortality is an important cause of reproductive failure in domestic animals and has a significant impact on the profitability of a livestock production system. In Brazil, little information is available on the main cause of abortion in cattle. This study resulted in five articles. The first article describes the main causes of abortion in cattle diagnosed in the period January 2003 to december 2011. A total of 490 fetuses, from several Brazilian states, were evaluated. Specific causes of abortion were found in 46,7 % of cases. Protozoan abortions especially Neospora caninum were detected in 33 % (162/490) of the cases. Bacterial abortions corresponded to 6,3 % (31/490), followed by fungal 0,8 % (4/490). In two aborted fetuses (0,4 %), a co-infection with two agents could be identified. Noninfectious diseases could be associated with 3 % of the abortions and congenital malformations with 2,6%. In the second article estimated the incidence of abortion by Brucella abortus in cattle in the southern region, characterizing the macroscopic findings, histological, bacteriological, immunohistochemical and molecular aspects of this disease. The third article relates a Geotrichum candidum infection in aborted bovine fetus associated with skin and lung lesions. The occurrence of multiple congenital malformations in an aborted bovine fetus is reported in the fourth article and cases of Dexter chondrodysplasia type of aborted fetuses are described in the fifth.

Pertencente ao filo Apicomplexa, Neospora caninum causa infecções associadas à perda fetal e mortalidade neonatal em várias espécies animais. A doença é descrita desde 1984, quando ocorreram os primeiros casos de encefalite e miosite em cães. Estes desempenham um papel fundamental na epidemiologia do protozoário, pois são seus hospedeiros definitivos, assim como os coiotes e o cão australiano dingo. Devido à sua importância no mundo e às diferenças de prevalência nos diversos estados brasileiros há necessidade de investigar a ocorrência do protozoário em cães no Rio Grande do Sul. Amostras de soro de 313 cães de origem urbana e rural do município de Caxias do sul foram testadas para a presença de anticorpos para N. caninum mediante a reação de imunofluorescência indireta (RIFI≥1:50). Na área urbana a prevalência foi de 2% (5/160) e na rural foi de 12% (36/153) (p < 0,0001). Os títulos sorológicos variaram de zero (86,9%) a 1:6400 (0,64%), sendo 1:50 (5,11%), o mais prevalente dentre os positivos. Nenhum dos cães examinados apresentou sinais clínicos de neosporose durante a coleta de sangue. Dos fatores de risco avaliados, a idade dos cães rurais foi o único significativo (p = 0,0053), com prevalência de 1% (2/34) entre aqueles com menos de um ano de idade e de 22% (34/119) entre os com mais de um ano de idade. Quanto aos fatores gênero, alimentação confinamento, contato com bovino e recolhimento de carcaças, os cães rurais não apresentaram diferença significativa em relação à soropositividade. Nos cães urbanos, os fatores gênero, alimentação e idade não apresentaram diferença significativa em relação à positividade dos animais. Este estudo demonstrou que os cães da área rural de Caxias do Sul estão mais predispostos à infecção por N. caninum, principalmente animais com mais de um ano de idade. Nos cães de área urbana o protozoário também se fez presente no município de Caxias do sul, necessitando maiores estudos nessa população. / Belonging to the phylum Apicomplexa, Neospora caninum causes infections associated with fetal loss and neonatal mortality among several animal species. This disease has been reported since 1984, when the first cases of encephalitis and myositis in dogs occurred. They play a key role in the epidemiology of the protozoan, because they are its definite hosts, as well as the coyotes and the Australian dog dingo. Due to its importance in the world and to the differences of prevalence in the several Brazilian states, there is the need to investigate the occurrence of the protozoan among dogs in Rio Grande do Sul. Serum samples from 313 dogs from urban and country areas of Caxias do Sul were tested for the presence of antibodies to N. caninum by indirect immunofluorescence assay (RIFI≥1:50). In urban areas the prevalence was 2% (5/160) and in rural areas was 12% (36/153) (p <0.0001). The serological titers ranged from zero (86.9%) to 1:6400 (0.64%) and 1:50 (5.11%), the most prevalent among the positives. None of the dogs examined showed clinical signs of neosporosis during blood collection. Among the risk factors evaluated, the age of rural dogs was the only significant one (p = 0.0053), with a prevalence of 1% (2/34) among those with less than a year old and 22% (34/119) among the ones which were more than one year old. Concerning the factors gender, feeding, confinement, contact with cattle and carcasses collection, the country dogs did not show significant difference related to seropositivity. Among urban dogs, the factors gender, feeding and age did not show significant difference regarding the positivity of the animals. This study showed that dogs from country areas of Caxias do Sul are more likely to get infected by N. caninum, especially the animals which are more than one year old. In dogs from urban areas the protozoan was also present in Caxias do Sul, requiring further studies among this population.

A mortalidade fetal é uma causa importante de perdas reprodutivas em animais domésticos e tem impacto significativo na rentabilidade de um sistema de produção animal. No Brasil, poucas informações são disponíveis sobre as principais causa de aborto em bovinos. O presente estudo resultou em cinco artigos. O primeiro artigo descreve as principais causas de aborto bovino diagnosticadas no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul no período 2003-2011. Neste período um total de 490 fetos bovinos foi analisado. Causas específicas de aborto foram encontradas em 46,7 % dos casos. Infecções por protozoários, em especial Neospora caninum acometeram 33 % dos casos (162/490). Bactérias em 6,3 % (31/490), seguidas por fungos 0,8% (4/490) foram causas adicionais de abortos. Em dois fetos (0,4 %), coinfecções por dois agentes foram identificadas. Causas não infecciosas foram observadas em 3 % dos abortos e malformações congênitas a 2,6%. No segundo artigo estima-se a ocorrência de abortos por Brucella abortus em bovinos na região sul, caracterizando os achados macroscópicos, histopatológicos, bacteriológicos, imuno-histoquímicos e de PCR desta enfermidade. No terceiro artigo relata-se a infecção por Geotrichum candidum em feto bovino abortado associado a lesões de pele e pulmonares. A ocorrência de malformações congênitas múltiplas em um feto bovino abortado é relatada no quarto artigo e casos de condrodisplasia tipo Dexter em fetos bovinos abortados são descritos no quinto. / The fetal mortality is an important cause of reproductive failure in domestic animals and has a significant impact on the profitability of a livestock production system. In Brazil, little information is available on the main cause of abortion in cattle. This study resulted in five articles. The first article describes the main causes of abortion in cattle diagnosed in the period January 2003 to december 2011. A total of 490 fetuses, from several Brazilian states, were evaluated. Specific causes of abortion were found in 46,7 % of cases. Protozoan abortions especially Neospora caninum were detected in 33 % (162/490) of the cases. Bacterial abortions corresponded to 6,3 % (31/490), followed by fungal 0,8 % (4/490). In two aborted fetuses (0,4 %), a co-infection with two agents could be identified. Noninfectious diseases could be associated with 3 % of the abortions and congenital malformations with 2,6%. In the second article estimated the incidence of abortion by Brucella abortus in cattle in the southern region, characterizing the macroscopic findings, histological, bacteriological, immunohistochemical and molecular aspects of this disease. The third article relates a Geotrichum candidum infection in aborted bovine fetus associated with skin and lung lesions. The occurrence of multiple congenital malformations in an aborted bovine fetus is reported in the fourth article and cases of Dexter chondrodysplasia type of aborted fetuses are described in the fifth.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-17T13:10:52Z No. of bitstreams: 1 Carlos Diogenes Ferreira de Lima Filho.pdf: 3825289 bytes, checksum: b1e7dacbbb9bec4d775fb8e1f9124f70 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-17T13:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Diogenes Ferreira de Lima Filho.pdf: 3825289 bytes, checksum: b1e7dacbbb9bec4d775fb8e1f9124f70 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Neospora caninum is an important etiologic agent of worldwide distribution, which causes abortions in dairy and beef cattle, and consequently significant economic losses to the avian production. The cattle in Brazil is by far the economic activity that occupies the largest area of land, including the Fernando de Noronha Archipelago, where agriculture is a permitted activity, particularly for subsistence, where it is exercised in order rustic and low productivity. This work aims to determine the prevalence and risk factors associated with infection by Neospora caninum in cattle in Fernando de Noronha, Pernambuco, Brazil. They collected 122 samples of bovine serum, and 16 dogs serum samples from 10 properties in the perimeter of the same areas in a radius of 2 km from the handling corral the center, were also collected 22 samples of dogs. The collections occurred in beef cattle or milk, male or female, of different age groups, with clinical history of infection or not neosporosis. The diagnosis of infection was performed by anti N. caninum IgG antibody research by Immunofluorescence Reaction (IFA) was used as cut-off point 1: 200 and 1:50 for cattle and dogs respectively. Of the 122 cattle tested, 84 (68.85%) had anti Neospora caninum antibodies and 09 dogs total of 38 (23.68%) also showed reagents. It was noted in this study that Neospora caninum infection is widespread in all Archipelago properties, the introduction of control and prophylaxis measures being necessary, thus preventing the perpetuation of the agent in herds. The results of the univariate analysis of risk factors associated with infection by Neospora caninum showed no significant odds ratio, however the variables supplementary feeding, technology equipment for the animals, the presence of barn and milking showed a trend in the association between seropositivity of animals in this study . Logistic regression analysis of risk factors associated with infection by N. caninum showed a significant odds ratio of difference for the variables mixed farm (odds ratio p = 13.79) and not raise poultry (odds ratio p = 5,45), demonstrating the influence of these factors on the agent maintaining the studied herds. / Neospora caninum é um importante agente etiológico de distribuição mundial, que ocasiona abortos em bovinos de leite e de corte, e consequentemente grandes prejuízos econômicos a cadeia produtiva destes animais. A criação de bovinos no Brasil é de longe, a atividade econômica que ocupa a maior extensão de terras, incluindo o Arquipélago de Fernando de Noronha, no qual a agropecuária é uma atividade permitida, particularmente para subsistência, onde a mesma é exercida de forma rústica e com baixa produtividade. Este trabalho, tem por objetivo, determinar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Neospora caninum em bovinos no Arquipélago de Fernando de Noronha, Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 122 amostras de soro bovino, e 16 amostras de soro de cães oriundas de 10 propriedades, nas regiões perimetrais das mesmas, em um raio de 2 km do centro do curral de manejo, ainda foram coletadas 22 amostras de cães. As coletas ocorreram em bovinos de corte ou leite, machos ou fêmeas, com diferentes faixas etárias, com histórico clinico ou não de infecção da neosporose. O diagnóstico da infecção foi realizado através da pesquisa de anticorpos IgG anti N. caninum pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizado-se como ponte de corte 1:200 e 1:50 para bovinos e cães respectivamente. Dos 122 bovinos testados, 84 (68,85%) apresentaram anticorpos anti Neospora caninum e 09 cães do total de 38 (23,68%) também se mostraram reagentes. Constatou-se neste estudo que a infecção por Neospora caninum encontra-se disseminada em todas as propriedades do Arquipélago, sendo necessária a introdução de medidas de controle e profilaxia, evitando assim a perpetuação do agente nos rebanhos. Os resultados da análise univariada dos fatores de risco associadas à infecção por Neospora caninum não apresentaram odds ratio significativas, contudo as variáveis suplementação alimentar, tecnologia em equipamentos para os animais, presença de curral e ordenha apresentaram uma tendência na associação da soropositividade dos animais desse estudo. A regressão logística dos fatores de risco associados a infecção por N. caninum revelou diferença de odds ratio significativa para as variáveis exploração mista (odds ratio p = 13,79) e não criar aves (odds ratio p = 5,45), demonstrando a influencia desses fatores na manutenção do agente nos rebanhos estudados.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-08T13:27:56Z No. of bitstreams: 1 Whaubtyfran Cabral Teixeira.pdf: 1497962 bytes, checksum: 6d81f488f57b0167c942138cbd006fcd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-08T13:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Whaubtyfran Cabral Teixeira.pdf: 1497962 bytes, checksum: 6d81f488f57b0167c942138cbd006fcd (MD5) Previous issue date: 2008-02-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The protozoan Neospora caninum and Toxoplasma gondii cause neurological and reproductive disorders in cattle, and neuromuscular changes in dogs. The bovine creation in the state Maranhão - Brazil represents a sector of the economy of high importance, however, the losses caused by parasitic diseases represent a serious problem for the development of livestock. The objective in the present study was to determine the prevalence of anti-N. caninum and anti-T. gondii antibodies in sera from dairy cattle and dogs of rural properties of three microrregions in the state of Maranhão. There were visited properties of dairy cattle, where collected blood samples from cattle (812) and dogs (93), of both sexes and different ages. Serum samples were packed in eppendorfs and stored at -20°C until the realization of the Indirect Immunofluorescence test (IFI). It was used the cut-off of 1:200 and 1:50 to anti-N. caninun and 1:64 and 1:16 for anti-T. gondii in cattle and dogs, respectively. It was used as antigen, tachyzoites of the strains NC-Bahia, NC-1 and Rh-Toxoplasma, produced in theLaboratory Diagnosis of Parasitism of Animals, School of Veterinary Medicine of the Federal University of the state of Bahia - Brazil. Of the total samples of cattle examined, it was found that 50.74% (412/812) and 70.20% (570/812) were seropositive for N. caninum and T. gondii, respectively. The titles of antibodies to N. caninum in cattle ranged from 1:200 to 1:6400, while 108 (26.21%) of serum samples showed title of 1:200; 132 (32.04%) 1:400; 94 (22.81%) 1:800; 46 (11.16%) 1:1600; 23 (5.58%) 1:3200 and nine (2.18%) with titers of 1:6400. While, for T. gondii ranged from 1:64 to 1:1024, while 272 (47.72%) samples showed title of 1:64; 182 (31.93%) 1:128; 90 (15.79%) 1:256; 25 (4.39%) 1:512 and one (0.17%) with title of 1:1024. In samples of dogs, it was found that 62.37% (58/93) and 79.57% (74/93) were seropositive for N. caninum and T. gondii, respectively. The titles of antibodies to N. caninum ranged from 1:50 to 1:1600, with four (6.90%) samples with title of 1:50; nine (15.52%) 1:100; eight (13.79%) 1:200; 18 (31.03%) 1:400; 14 (24.14%) of 1:800 and five (8.62%) with title of 1:1600. For T. gondii the titles ranged from 1:32 to 1:2048; six (8.11%)samples with title of 1:32; nine (12.16%) 1:64; 14 (18.92%) 1:128; 22 (29.73%) 1:256; 13 (17.57%) 1:512; nine (12.16%) with 1:1024 and a (1.35%) 1:2048. No significant association was found (P>0.05) between the sex of the animals and seroprevalence for anti-N. caninum and anti-T. gondii in the two species studied. The high rates of seropositivity found for these parasites in cattle and dogs from all regions, suggest that there is spread of the parasites in the areas studied. / Os protozoários Neospora caninum e Toxoplasma gondii causam distúrbios reprodutivos e neurológicos em bovinos, além de alterações neuromusculares em cães. A bovinocultura Maranhense representa um setor da economia de elevada importância, contudo, as perdas causadas por doenças parasitárias representam um sério problema para o desenvolvimento dos rebanhos. Objetivou-se, no presente estudo, determinar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii em soros de bovinos leiteiros e cães de propriedades rurais de três microrregiões no estado do Maranhão. Foram visitadas propriedades de gado de leite, onde se coletaram amostras sangüíneas de bovinos (812) e cães (93), de ambos os sexos e diferentes idades. Os soros obtidos foram acondicionados em eppendorfs e estocados a -20°C até a realização do teste de Imunofluorescência Indireta (IFI). Foram utilizados como pontos de cortes 1:200 e 1:50 para anti-N. caninun e 1:64 e 1:16 para anti-T. gondii em bovinos e cães, respectivamente. Utilizou-se como antígeno, taquizoítos das cepas NC-Bahia, NC-1 e Rh-Toxoplasma, produzidos no Laboratório de Diagnóstico das Parasitoses dos Animais daEscola de Medicina Veterinária da UFBA. Do total de amostras de bovinos analisadas, verificou-se que 50,74% (412/812) e 70,20% (570/812) foram sororreagentes para N. caninum e T. gondii, respectivamente. Os títulos de anticorpos para N. caninum em bovinos variaram de 1:200 a 1:6400, sendo que 108 (26,21%) amostras de soro apresentaram título de 1:200; 132 (32,04%) 1:400; 94 (22,81%) 1:800; 46 (11,16%) 1:1600; 23 (5,58%) 1:3200 e nove (2,18%) com títulos de 1:6400. Enquanto que, para T. gondii variaram de 1:64 a 1:1024, sendo que 272 (47,72%) amostras apresentaram título de 1:64; 182 (31,93%) 1:128; 90 (15,79%) 1:256; 25 (4,39%) 1:512; e uma (0,17 %) com título de 1:1024. Nas amostras dos cães, verificou-se que 62,37% (58/93) e 79,57% (74/93) foram sororreagentes para N. caninum e T. gondii, respectivamente. Os títulos de anticorpos para N. caninum variaram de 1:50 a 1:1600, sendo quatro (6,90%) amostras com titulo de 1:50; nove (15,52%) de 1:100; oito (13,79%) 1:200; 18 (31,03%) 1:400; 14 (24,14%) 1:800 e cinco (8,62%) com título de1:1600. Para T. gondii os títulos variaram de 1:32 a 1:2048, sendo seis (8,11%) amostras com título de 1:32; nove (12,16%) com 1:64; 14 (18,92%) 1:128; 22 (29,73%) 1:256; 13 (17,57%) 1:512; nove (12,16%) 1:1024 e uma (1,35%) de 1:2048. Não foi observada associação significativa (P>0,05) entre o sexo dos animais e a soroprevalência para anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii nas duas espécies estudas. As altas taxas de soropositividade encontradas para os referidos parasitos em bovinos e cães de todas as regiões, sugerem que há disseminação dos parasitos nas áreas estudadas.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-05-03T14:32:38Z No. of bitstreams: 1 Neurisvan Ramos Guerra.pdf: 2637002 bytes, checksum: 451efc2cbd7dd76dda9b010b8b0189ba (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T14:32:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neurisvan Ramos Guerra.pdf: 2637002 bytes, checksum: 451efc2cbd7dd76dda9b010b8b0189ba (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / The equid industry in Brazil occupies a prominent position worldwide, with about eight million equids. Diseases caused by protozoa such as Babesia caballi, Theileria equi and Neospora spp. as well as parasites that cause zoonotic protozooses such as Leishmania spp. and Toxoplasma gondii represent one of the main obstacles in the development of the sector. Therefore, this study aims to detect infection by Leishmania spp., Babesia caballi, Theileria equi, Toxoplasma gondii and Neospora spp. and their respective risk factors in equidae created with different management forms. To perform the tests, 400 samples of whole blood and serum from clinically healthy equines, including horses, mules and donkeys from 41 rural properties in the state of Pernambuco were analyzed. In order to detect Leishmania spp., direct parasitological and Polymerase Chain Reaction (PCR) tests were performed. Concerning the presence of infection by Babesia caballi and Theileria equi, direct parasitological tests and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used for anti-Babesia caballi and anti-Theileria equi immunoglobulins detection. For the determination of seroprevalences of toxoplasmosis and neosporosis, modified agglutination (MAT) tests were used to identify anti-T. gondii IgG antibodies and anti-Neospora spp. All samples were negative for Leishmania spp. in the tests, suggesting that equidae do not participate in the epidemiological chain of leishmaniasis in the studied areas. The prevalence of anti-Babesia caballi and anti-Theileria equi antibodies of 4.3% (17/400; CI: 2.6-6.9) and the presence of B. caballi and T. equi in the serological tests revealed a prevalence of 10.8% (43/400; CI: 8.0 - 14.3), respectively, and co-infection was detected in 1% (4/400) of the animals. These data allow the characterization of areas of enzootic instability in the sites surveyed. Anti-T. gondii IgG antibodies were detected in 12.5% (50/400) of the animals analyzed. When evaluating the risk factors for T. gondii infection, only the mesoregion factor (p = 0.029) was associated with infection, particularly Zona da Mata (OR = 3). The results reveal the presence of the parasite in the studied area, which may represent a link in the transmission chain of toxoplasmosis. Seropositivity for Neospora spp. was 5.7% (23/400) and the variables age, breeding type and region presented statistical significance. In relation to age, it was observed that animals older than 11 years presented 11.8 times more chances of being serum-reactive wjhen compared with young animals (<2,5) and the prevalence found shows that the parasite is dispersed in the areas studied and that the variables age, breeding type and region are the most important risk factors for the occurrence of infection in equidae, and should be considered in the prevention of the disease. Considering the results found in the present study, the diagnosis of the various diseases present in the State of Pernambuco, when performed at an early stage, allows the application of preventive and control measures, contributing significantly to animal health and public health. / A equideocultura do Brasil ocupa posição de destaque mundial, com cerca de oito milhões de cabeças. Doenças causadas por protozoários como Babesia caballi, Theileria equi e Neospora spp. além de parasitos que causam protozooses zoonóticas a exemplo de Leishmania spp. e Toxoplasma gondii representam um dos principais entraves no desenvolvimento do setor. Diante disso, esse estudo tem como objetivo determinar as prevalências e fatores de risco associados às infecções por Leishmania spp., Babesia caballi (Nuttall & Strickland, 1910), Theileria equi (Mehlhorn & Schein, 1998), Toxoplasma gondii (Nicolle & Manceaux, 1909) e Neospora spp. em equídeos submetidos a diferentes regimes de criação. Para realização dos exames, foram analisadas 400 amostras de sangue total e soro de equídeos clinicamente saudáveis, incluindo equinos (387/400), muares (9/400) e asininos (4/400) provenientes de 41 propriedades rurais do estado de Pernambuco. Com a finalidade da detecção de Leishmania spp., foram realizados os exames parasitológicos diretos e Reação em cadeia da Polimerase (PCR). No intuito de averiguar a presença de infecção por Babesia caballi e Theileria equi foram utilizados os exames parasitológico direto e Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA), para detecção de imunoglobulinas anti-Babesia caballi e anti-Theileria equi. Para determinação das soroprevalências da toxoplasmose e neosporose foram utilizados os testes de aglutinação modificado (MAT) para identificação de anticorpos IgG anti-T. gondii e IgG anti-Neospora spp. Todas as amostras resultaram negativas para Leishmania spp. nos testes, o que sugere que os equídeos não participam da cadeia epidemiológica das leishmanioses nas áreas estudadas. Quanto à presença de B. caballi e T. equi, os testes sorológicos revelaram uma prevalência de anticorpos anti-Babesia caballi e anti-Theileria equi de 4.3% (17/400; I.C. 2,6 – 6.9%) e 10,8% (43/400; I.C. 8.0 – 14.3), respectivamente e foi detectada co-infecção em 1% (4/400) dos animais. Tais dados permitem caracterizar como áreas de instabilidade enzoótica os locais pesquisados. Anticorpos IgG anti-T. gondii foram detectados em 12,5% (50/400) dos animais analisados. Quando avaliados os fatores de risco para infecção por T. gondii, apenas o fator mesorregião (p=0,029) apresentou associação com a infecção, particularmente Zona da Mata (OR=3). Os resultados revelam a presença do parasito na área estudada, o que pode representar um elo na cadeia de transmissão da toxoplasmose. A soropositividade para Neospora spp. total foi de 5,7% (23/400) e as variáveis idade, tipo de criação e região apresentaram significância estatística. Em relação à idade, observou-se que animais acima de 11 anos apresentaram 11,8 vezes de chances a mais de serem sororreagentes quando comparados com os animais jovens (<2,5) e a prevalência encontrada demonstra que o parasito está disperso nas áreas estudadas e que as variáveis idade, tipo de criação e região são fatores de riscos mais importantes para ocorrência da infecção em equídeos, devendo ser considerados na prevenção da doença. Considerando os resultados encontrados no presente estudo, o diagnóstico das diversas doenças presentes no estado de Pernambuco, quando realizado de forma precoce, possibilita a aplicação de medidas preventivas e de controle, contribuindo significativamente com a sanidade animal e saúde pública.

Estima la frecuencia de anticuerpos contra toxoplasma gondii y Neospora caninum en vicuñas de la provincia de Yauli–Junín, así como también determinar el grado de concordancia entre las pruebas de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y ELISA indirecta. Se colectaron 79 muestras de sangre de vicuñas, obtenidas durante un “Chaku”, técnica ancestral de arreo que permite la captura de animales vivos para la esquila, realizado en el distrito de Paccha provincia de Yauli, ubicado en el departamento de Junín. Las muestras fueron trasladadas al laboratorio de Microbiología y Parasitología Sección Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM, para su posterior análisis. El diagnóstico para ambas enfermedades se realizó utilizando las pruebas de ELISA indirecta e IFI, en cada caso. La frecuencia hallada para Toxoplasma gondii fue de 5.06 y 3.08% por las pruebas de ELISA indirecta y la de IFI respectivamente; no encontrándose reacción seropositiva para Neospora caninum con las dos pruebas usadas. Con relación al grado de asociación, entre las dos pruebas usadas en el diagnóstico de Toxoplasma gondii se encontró un valor de kappa de 0.85, lo cual significa que la concordancia ofrecida por ambas pruebas es muy buena. / Tesis

Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório pertencente ao filo Apicomplexa, conhecido por ser uma das principais causas de aborto parasitário em bovinos e por apresentar transmissão transplacentária. Para locomoverem-se e acessarem o conteúdo intracelular de células hospedeiras, organismos apicomplexas fazem uso de um mecanismo não convencional que se utiliza de uma maquinaria celular cujo papel central é exercido pelo motor actina-miosina, auxiliado por proteínas intermediárias e de acoragem, que realiza a propulsão do parasita na direção do movimento. Para o funcionamento dessa maquinaria, é essencial que actina esteja em sua forma filamentosa (actina-F). Porém, actinas de apicomplexas são conhecidas por serem funcional e estruturalmente não convencionais, formando filamentos pequenos e instáveis in vitro, assim como pelo predomínio de grande maioria de actina monomérica (actin-G) nas células in vivo. Desse modo, para formar e manter actina-F a dinâmica de actina desses organismos requer uma regulação precisa, que, em apicomplexas, é conduzida por um arsenal conhecidamente pequeno de proteínas que se ligam a actina (ABPs). Nosso objetivo neste estudo foi identificar e caracterizar ABPs de N. caninum. Para isso, duas ABPs de N. caninum foram estudadas: fator de despolimerização de actina (NcADF) e proteína associada a ciclase (NcCAP); também, foi gerado e caracterizado soro contra região de actina de N. caninum entre aminoácidos 201 e 310 (anti-NcAct201-310). NcADF (correspondente ao acesso NCLIV_012510 em ToxoDB) foi submetida a caracterização molecular e bioquímica. A sua estrutura terciária foi gerada por modelagem molecular baseada em homologia, apresentando folding conservado, porém com F-loop de menor tamanho, quando comparada a ADF/cofilinas canônicas. A forma recombinante de NcADF foi expressa E. coli BL21 por plasmídeos pET32a(+) e pET28a(+) e solubilizada em tampão desnaturante e nativo, respectivamente. NcADF_pET32 foi purificada e utilizada para geração de soro anti-NcADF, que detectou ambas NcADF recombinantes, assim como proteínas endógenas em western blot 1-D e 2-D com peso molecular e pI próximos aos preditos. O soro anti-NcADF também localizou NcADF difusa no citoplasma, com menos intensidade nos polos de taquizoítas de N. caninum extracelulares. NcADF_pET28 foi purificado na forma nativa e utilizado para caracterização funcional para avaliação de seu papel na dinâmica de actina liofilizada de coelho. Ensaios de cossedimentação, cinética de polimerização e despolimerização, viscosimentria de baixo cisalhamento (queda de bola), estado estacionário e ligação entre actina-G e NcADF, em conjunto, mostraram que NcADF causa despolimerização de actina-F, realiza sequestro de monômeros de actina e quebra de filamentos. NcCAP foi submetida a caracterização molecular e foi identificada como produto de expressão do gene de acesso NCLIV_054140. NcCAP recombinante foi expressa em pET32a(+) e pET28a(+) predominantemente em corpos de inclusão e foi solubilizada em tampão desnaturante. A forma purificada de pET32_NcCAP, identificada por espectrometria de massas, foi utilizada para imunização e o soro resultante detectou NcCAP recombinante e endógena por western blot 1-D e 2-D, apresentando bandas e spots de peso molecular e pI próximos ao esperado. O soro anti-NcCAP também localizou NcCAP em taquizoítas ii extracelulares de N. caninum difusa no citoplasma e/ou com predomínio na região periplasmática da célula. Por fim, o soro anti-NcAct201-310 foi gerado, sendo capaz de detectar proteínas em sua forma nativa e realizar marcação na região periférica e, possivelmente, nuclear de taquizoítas de N. caninum extracelulares. A caracterização de ABPs de N. caninum feita neste trabalho amplia o conhecimento sobre a conservação dessas proteínas ao longo do filo Apicomplexa. Ademais, representa uma contribuição para o entendimento da dinâmica de actina e, por consequência, futuramente, pode colaborar para a elucidação de mecanismos-chave para a sobrevivência e disseminação dos parasitas pelo seu hospedeiro / Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that belongs to the phylum Apicomplexa. It is known as one of the main causes of infectious abortion in cows and for its efficient transplacentary transmission. Apicomplexan organisms use a phylum-specific mechanism of invasion and gliding motility, which use an unusual cellular machinery based on an actin myosin motor assisted by intermediary and anchoring proteins that creates the traction force to impulse the parasite forward. Filamentous actin (F-actin) is essential to the appropriate functioning of this machinery, although apicomplexan unconventional actin forms small and unstable filaments in vitro and is found preponderantly as monomer (G-actin) in cells. Thus, the parasites need actin-binding proteins (ABPs) to strictly regulate actin dynamics and to form and maintain F-actin when it is necessary to the cell. Here, we aimed at identifying and characterising ABPs from N. caninum. Two ABPs were characterised: actin-depolymerising factor (NcADF) and cyclase-associated protein (NcCAP) from N. caninum. In addition, a serum against the actin region between amino acids 201 and 310 (anti-NcAct201-310) was raised. NcADF, which corresponds to identification NCLIV_012510 on ToxoDB, was molecular and biochemically characterised. Firstly, the tertiary structure of NcADF was generated by molecular modelling based on homology. Comparing to canonical ADF/cofilins, NcADF presented a conserved folding, albeit its smaller F-loop. The recombinant form of NcADF was expressed in E. coli BL21 using pET32a(+) and pET28a(+) plasmids and solubilized in denaturing and native buffers, respectively. Polyclonal antibodies were raised in mice against purified NcADF_pET32, which was able to detect both forms of recombinant NcADF as well as proteins in 1-D and 2-D western blot with expected molecular weight and isoelectric point (pI). Additionally, NcADF was localised in extracellular N. caninum tachyzoites as a diffuse pattern on cytoplasm with less intensity in both poles. NcADF_pET28 was successfully purified in native form and used for functional characterisation to evaluate the role of recombinant NcADF on lyophilised rabbit actin dynamics. Together, co-sedimentation, polymerisation and depolymerisation kinetic, low shearing viscometry (falling ball), steady state, and G-actin and NcADF binding assays showed that NcADF was able to depolymerise actin-F, sequester actin monomers, and sever filaments. Moreover, NcCAP (identification NCLIV_054140) was also characterised. Recombinant NcCAP was expressed in pET32a(+) and pET28a(+) plasmids predominantly in inclusion bodies and was solubilised in denaturing buffer. NcCAP_pET32 was purified and identified by mass spectrometry. Then, the polyclonal antibodies against this recombinant protein was generated in mice. It was able to detect recombinant and endogenous NcCAP, presenting bands and spots in 1-D and 2-D western blot with molecular weight and pI quite near to the predicted ones. NcCAP was localised as a diffuse pattern on cytoplasm and/or predominantly on periplasmic regions of extracellular taclyzoites of N. caninum. Finally, the serum containing anti-NcAct201-310 polyclonal antibodies was raised in mice. It detected endogenous proteins mainly in native form and localised them on periplasmic and possibly nuclear region in extracellular N. caninum tachyzoites. The characterisation of N. caninum ABPs iv extends our understanding of these proteins conservation and their function throughout the Apicomplexa phylum. Furthrmore, it represents a contribution to the field towards the comprehention of actin dynamics and in the future might provide information for important mechanisms of dissemination and survival of the parasite at its host