Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-28Bitstream added on 2014-06-13T19:22:59Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cf_dr_arafo.pdf: 5096479 bytes, checksum: c93553f9fa019b1a3784c9a4402e4a1a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido amplamente utilizado no tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo demonstraram que o LBI pode promover um aumento na síntese de matriz de dentina e menor grau de inflamação pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar o metabolismo de células odontoblastóides em cultura quando submetidas à irradiação direta ou transdentinária (indireta) com LBI e seus efeitos sobre o complexo dentino-pulpar. Células odontoblastóides MDPC-23 foram cultivadas em placas de acrílico de 24 compartimentos ou sobre a superfície pulpar de discos de dentina, com 0,4 mm de espessura e obtidos de terceiros molares, adaptados em câmaras pulpares artificiais. As células foram irradiadas diretamente por 3 vezes (a cada 24 horas) com 2, 4, 10, 15 ou 25 J/cm2 e submetidas a avaliação de metabolismo (MTT), síntese de proteína total e de fosfatase alcalina. Os dois melhores parâmetros de irradiação direta foram utilizados para o ensaio de irradiação transdentinária (indireta) das células. Como resultado da etapa direta de irradiação, foi demonstrado que tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total e fosfatase alcalina apresentaram valores estatisticamente superiores nas doses de 15 e 25 J/cm2 (Mann-Whitney p<0.05). Assim, estas doses foram usadas no teste de irradiação indireta, obtendo-se aumento do metabolismo, síntese de proteína e fosfatase alcalina estatisticamente superior apenas para a dose de 25 J/cm2 (Mann-Whitney p<0.05). Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os maiores valores de bio-estimulação das células MDPC-23 ocorreram quando estas foram irradiadas com 25 J/cm2. Para avaliação dos efeitos do LBI sobre o complexo dentinopulpar, foram confeccionadas cavidades... / Low level laser (LLL) has been widely used for treatment of dentin hypersensitivity. In vivo studies have shown increased synthesis of dentin matrix and less severe pulpal inflammation in teeth irradiated with LLL. However, the mechanisms that guide this process remain unknown. This study evaluated the metabolism of cultured odontoblastlike cells submitted to direct or transdentinal LLL irradiation as well as its effects on pulp tissue of first molars of rats. The odontoblast-like cells MDPC-23 were cultured (12,500 cells/cm2) on either 24-well acrylic plates or the pulpal surface of dentin discs adapted to artificial pulp chambers. In the first experiment, the cells received direct irradiation for 3 times (every 24 hours) with the following energy doses: 2 J/cm2, 4 J/cm2, 10 J/cm2, 15 J/cm2, and 25J/cm2. Then, the irradiated cells were evaluated concerning their metabolism, synthesis of total protein (TP) and alkaline phosphatase (ALP). The two best direct irradiation parameters obtained in this first protocol were selected to be used in the second experiment, in which the MDPC-23 cells were irradiated through 0.4mm dentin discs obtained from human teeth (indirect irradiation). For the direct assay, the MTT values as well as the TP and ALP levels were significantly higher at the doses of 15 and 25 J/cm2 (Mann-Whitney; p<0.05). When both of these energy doses were used for the indirect irradiation assay, it was observed a statistically significant increase in cell metabolism and synthesis of TP and ALP only for 25 J/cm2 (Mann-Whitney; p <0.05). Under the experimental conditions, it may be concluded that the highest biostimulation values were obtained when the MDPC-23 cells were irradiated with 25 J/cm2. For evaluation of the effects of LLL on the pulp dentin complex, class I cavities were prepared in the first superior molars of rats. After this, the cavities were immediately irradiated... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:12:00Z : No. of bitstreams: 1 mendonca_aam_me_arafo.pdf: 391168 bytes, checksum: 5b48b4c877101be48a53fececa7c6066 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A presente pesquisa avaliou o efeito citotóxico de diferentes materiais dentários sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23 em cultura. Para isto, corpos-de-prova com dimensões de 4mm de diâmetro e 2 mm de profundidade foram confeccionados com os seguintes materiais: hidróxido de cálcio (Hydro C - Grupo HCa); RelyX Luting (Grupo RL); Vitrebond (Grupo VB); e RelyX Unicem (Grupo RU). Cada espécime foi imerso em meio de cultura não suplementado com soro fetal bovino (MC-SFB) e incubado pelos períodos de 24 horas ou 7 dias. Células odontoblastóides MDPC-23 foram semeadas (3x104 células/cm2) em pratos de acrílico com 24 compartimentos e incubados por 72 horas, sendo que após este período, o meio de cultura completo (DMEM) foi substituído pelos extratos obtidos de cada material experimental. Após incubação adicional de 24 horas, a atividade da enzima desidrogenase succíninca das células foi avaliada através do teste de MTT. No grupo controle, o meio de cultura foi substituído pelo MC-SFB fresco (sem tratamento). Para os períodos de 24 horas, os grupos HCa, RL, VB e RU apresentaram valores de redução no metabolismo celular de 91,52%; 78,17%; 89,14%; e 2,64%, respectivamente, quando comparados com o grupo controle (DMEM), o qual não reduziu o metabolismo celular. Com relação ao período experimental de 7 dias, os valores de redução na atividade metabólica para os grupos HCa, RL, VB e RU foram de 91,13%, 79,04%, 87,27% e 10,51%, respectivamente. Segundo a análise estatística de Kruskall-Wallis complementada pelo teste de Mann-Whitney não houve diferença entre os grupos HCa e VB, os quais foram os materiais mais citotóxicos em ambos os períodos avaliados. RU foi o cimento menos tóxico, sendo que não houve diferença estatisticamente significante com o grupo controle no período de 24 horas... / The present in vitro study evaluated the cytotoxic effects of different dental materials on the odontoblast-like cells MDPC-23. For this purpose, round samples (2-mm thick and 4-mm in diameter) were prepared with the following experimental materials: calcium hydroxide (Hydro C - Group HCa); RelyXTM Luting Cement (Group RL); Vitrebond (Group VB); and RelyXTM Unicem (Group RU). The samples were placed in fresh culture medium with no fetal bovine serum (DMEM-FBS) and incubated for 24 hours or 7 days at 37°C with 5% CO2, and 95% air. The odontoblast cells were plated (3x104 cells/cm2) in wells of five 24-wells dishes and incubated for 72 hours. After this period, the complete culture medium (DMEM) was replaced by the extracts obtained from every sample. The cells in contact with the extracts were incubated for additional 24 hours. The MTT Assay was carried out to evaluate the cell metabolism. In control group (DMEM) the nontreated fresh culture medium (DMEM-FBS) was applied on the cultured cells. At 24 hours period, the experimental materials HCa, RL, VB and RU decreased the mitochondrial respiration by: 91,52%; 78,17%; 89,14%; and 2,64%, respectively. At 7 days, the reduction of the cell metabolism for groups HCa, RL, VB and RU was: 91,13%; 79,04%; 87,27%; and 10,51%, respectively. The statistical analysis of Kruskal-Wallis complemented by the Mann-Whitney test demonstrated there was no statistical difference between the groups HCa and VB which presented the highest cytotoxic effects on the MDPC-23 cells. On the other hand, no difference statistically significant was observed between RU and DMEM, at 24 hours period. The ranking of cytotoxicity observed at 24 hours and 7 days was: HCa=VB>RL>RU=DMEM and HCa=VB>RL>RU>DMEM, respectively. Based upon the scientific data presented in this in vitro study, it was concluded... (Complete abstract, click electronic address below).

O laser de baixa intensidade ou terapêutico promove a biomodulação das respostas reparadoras naturais de células pulpares como os odontoblastos, sendo uma estratégia de tratamento a ser utilizada na terapia pulpar. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o efeito da irradiação do laser terapêutico de arseniato de gálio e alumínio (GaAlAs) no comportamento da linhagem odontoblástica (MDPC-23) de camundongos. Células odontoblásticas foram plaqueadas na concentração de 104 células/poço (n=5) e submetidas às irradiações nos dias 0, 1, 2 e 3 após o plaqueamento. Foram avaliadas as doses de 0,2 e 1,0 J/cm2 e comparadas ao grupo controle não irradiado. Os parâmetros analisados foram proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina após 3, 7, 10 e 14 dias; detecção e quantificação de matriz mineralizada após 14 dias e quantificação do fator de crescimento VEGF no sobrenadante das culturas após 7 e 10 dias. Imunofluorescência para proteínas colágenas e não-colágenas após 3, 7 e 10 dias foi realizada para verificar sua expressão qualitativa nos grupos propostos. Os resultados mostraram que o laser não afetou a viabilidade celular que ficou acima dos 90% em todos os grupos e períodos experimentais. De modo geral, os grupos irradiados apresentaram redução na proliferação, maior conteúdo de proteína total e maior atividade de ALP em relação ao observado no grupo controle. A marcação com vermelho de alizarina mostrou maior quantidade de áreas nodulares de matriz calcificada no grupo irradiado com 0,2 J/cm2, dados comprovados pela análise quantitativa. Uma maior concentração de VEGF no sobrenadante da cultura foi observada no grupo irradiado com a menor dose. A imunofluorescência revelou que a menor dose favoreceu a secreção de proteínas colágenas e não colágenas Portanto, o laser de baixa potência, dentro dos parâmetros empregados, favoreceu a expressão do fenótipo odontoblástico. / Low-level laser therapy (LLLT) has been studied as a strategy to be used in pulp therapy through biomodulation of its cells, like odontoblasts. The purpose of this investigation was to evaluate the effect of biomodulation on odontoblastic cells using low-level GaAlAs laser. Odontoblastic cells were cultured in a concentration of 104 cells/well (n=5) and submitted to the energy fluencies of 0,2 and 1,0 J/cm2 and compared to control group. There were evaluated cell proliferation and viability, total protein content and alkaline phosphatase activity ( 3, 7, 10 and 14 days), as well as detection and quantification of mineralized nodules after 14 days and VEGF quantification after 7 and 10 days. Immunofluorescence for collagen and non-collagen proteins was performed to verify their qualitative expression in the proposed groups after 3, 7 and 10 days. The results showed that LLLT did not affect cell viability in all the experimental groups. The irradiated cultures presented reduction in the proliferation, higher total protein content and ALP activity compared to the control group. Staining with red alizarin showed greater amount of nodular areas of calcified matrix in the group irradiated with 0,2 J/cm2, data confirmed by quantitative analysis. It was also observed a higher concentration of VEGF in the culture of the cells irradiated with the lowest energy fluence as well as an enhancement of the secretion of collagen and non-collagen proteins revealed through immunofluorescence. It was concluded that therapy with LLLT favors the expression of odontoblastic phenotype.

O laser de baixa intensidade ou terapêutico promove a biomodulação das respostas reparadoras naturais de células pulpares como os odontoblastos, sendo uma estratégia de tratamento a ser utilizada na terapia pulpar. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o efeito da irradiação do laser terapêutico de arseniato de gálio e alumínio (GaAlAs) no comportamento da linhagem odontoblástica (MDPC-23) de camundongos. Células odontoblásticas foram plaqueadas na concentração de 104 células/poço (n=5) e submetidas às irradiações nos dias 0, 1, 2 e 3 após o plaqueamento. Foram avaliadas as doses de 0,2 e 1,0 J/cm2 e comparadas ao grupo controle não irradiado. Os parâmetros analisados foram proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina após 3, 7, 10 e 14 dias; detecção e quantificação de matriz mineralizada após 14 dias e quantificação do fator de crescimento VEGF no sobrenadante das culturas após 7 e 10 dias. Imunofluorescência para proteínas colágenas e não-colágenas após 3, 7 e 10 dias foi realizada para verificar sua expressão qualitativa nos grupos propostos. Os resultados mostraram que o laser não afetou a viabilidade celular que ficou acima dos 90% em todos os grupos e períodos experimentais. De modo geral, os grupos irradiados apresentaram redução na proliferação, maior conteúdo de proteína total e maior atividade de ALP em relação ao observado no grupo controle. A marcação com vermelho de alizarina mostrou maior quantidade de áreas nodulares de matriz calcificada no grupo irradiado com 0,2 J/cm2, dados comprovados pela análise quantitativa. Uma maior concentração de VEGF no sobrenadante da cultura foi observada no grupo irradiado com a menor dose. A imunofluorescência revelou que a menor dose favoreceu a secreção de proteínas colágenas e não colágenas Portanto, o laser de baixa potência, dentro dos parâmetros empregados, favoreceu a expressão do fenótipo odontoblástico. / Low-level laser therapy (LLLT) has been studied as a strategy to be used in pulp therapy through biomodulation of its cells, like odontoblasts. The purpose of this investigation was to evaluate the effect of biomodulation on odontoblastic cells using low-level GaAlAs laser. Odontoblastic cells were cultured in a concentration of 104 cells/well (n=5) and submitted to the energy fluencies of 0,2 and 1,0 J/cm2 and compared to control group. There were evaluated cell proliferation and viability, total protein content and alkaline phosphatase activity ( 3, 7, 10 and 14 days), as well as detection and quantification of mineralized nodules after 14 days and VEGF quantification after 7 and 10 days. Immunofluorescence for collagen and non-collagen proteins was performed to verify their qualitative expression in the proposed groups after 3, 7 and 10 days. The results showed that LLLT did not affect cell viability in all the experimental groups. The irradiated cultures presented reduction in the proliferation, higher total protein content and ALP activity compared to the control group. Staining with red alizarin showed greater amount of nodular areas of calcified matrix in the group irradiated with 0,2 J/cm2, data confirmed by quantitative analysis. It was also observed a higher concentration of VEGF in the culture of the cells irradiated with the lowest energy fluence as well as an enhancement of the secretion of collagen and non-collagen proteins revealed through immunofluorescence. It was concluded that therapy with LLLT favors the expression of odontoblastic phenotype.

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: José Mauro Granjeiro / Banca: Welington Dinelli / Resumo: A presente pesquisa avaliou o efeito citotóxico de diferentes materiais dentários sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23 em cultura. Para isto, corpos-de-prova com dimensões de 4mm de diâmetro e 2 mm de profundidade foram confeccionados com os seguintes materiais: hidróxido de cálcio (Hydro C - Grupo HCa); RelyX Luting (Grupo RL); Vitrebond (Grupo VB); e RelyX Unicem (Grupo RU). Cada espécime foi imerso em meio de cultura não suplementado com soro fetal bovino (MC-SFB) e incubado pelos períodos de 24 horas ou 7 dias. Células odontoblastóides MDPC-23 foram semeadas (3x104 células/cm2) em pratos de acrílico com 24 compartimentos e incubados por 72 horas, sendo que após este período, o meio de cultura completo (DMEM) foi substituído pelos extratos obtidos de cada material experimental. Após incubação adicional de 24 horas, a atividade da enzima desidrogenase succíninca das células foi avaliada através do teste de MTT. No grupo controle, o meio de cultura foi substituído pelo MC-SFB fresco (sem tratamento). Para os períodos de 24 horas, os grupos HCa, RL, VB e RU apresentaram valores de redução no metabolismo celular de 91,52%; 78,17%; 89,14%; e 2,64%, respectivamente, quando comparados com o grupo controle (DMEM), o qual não reduziu o metabolismo celular. Com relação ao período experimental de 7 dias, os valores de redução na atividade metabólica para os grupos HCa, RL, VB e RU foram de 91,13%, 79,04%, 87,27% e 10,51%, respectivamente. Segundo a análise estatística de Kruskall-Wallis complementada pelo teste de Mann-Whitney não houve diferença entre os grupos HCa e VB, os quais foram os materiais mais citotóxicos em ambos os períodos avaliados. RU foi o cimento menos tóxico, sendo que não houve diferença estatisticamente significante com o grupo controle no período de 24 horas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present in vitro study evaluated the cytotoxic effects of different dental materials on the odontoblast-like cells MDPC-23. For this purpose, round samples (2-mm thick and 4-mm in diameter) were prepared with the following experimental materials: calcium hydroxide (Hydro C - Group HCa); RelyXTM Luting Cement (Group RL); Vitrebond (Group VB); and RelyXTM Unicem (Group RU). The samples were placed in fresh culture medium with no fetal bovine serum (DMEM-FBS) and incubated for 24 hours or 7 days at 37°C with 5% CO2, and 95% air. The odontoblast cells were plated (3x104 cells/cm2) in wells of five 24-wells dishes and incubated for 72 hours. After this period, the complete culture medium (DMEM) was replaced by the extracts obtained from every sample. The cells in contact with the extracts were incubated for additional 24 hours. The MTT Assay was carried out to evaluate the cell metabolism. In control group (DMEM) the nontreated fresh culture medium (DMEM-FBS) was applied on the cultured cells. At 24 hours period, the experimental materials HCa, RL, VB and RU decreased the mitochondrial respiration by: 91,52%; 78,17%; 89,14%; and 2,64%, respectively. At 7 days, the reduction of the cell metabolism for groups HCa, RL, VB and RU was: 91,13%; 79,04%; 87,27%; and 10,51%, respectively. The statistical analysis of Kruskal-Wallis complemented by the Mann-Whitney test demonstrated there was no statistical difference between the groups HCa and VB which presented the highest cytotoxic effects on the MDPC-23 cells. On the other hand, no difference statistically significant was observed between RU and DMEM, at 24 hours period. The ranking of cytotoxicity observed at 24 hours and 7 days was: HCa=VB>RL>RU=DMEM and HCa=VB>RL>RU>DMEM, respectively. Based upon the scientific data presented in this in vitro study, it was concluded... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: Nivaldo Antonio Parizotto / Banca: Cristina Kurachi / Banca: Edson Alves de Campos / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Resumo: O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido amplamente utilizado no tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo demonstraram que o LBI pode promover um aumento na síntese de matriz de dentina e menor grau de inflamação pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar o metabolismo de células odontoblastóides em cultura quando submetidas à irradiação direta ou transdentinária (indireta) com LBI e seus efeitos sobre o complexo dentino-pulpar. Células odontoblastóides MDPC-23 foram cultivadas em placas de acrílico de 24 compartimentos ou sobre a superfície pulpar de discos de dentina, com 0,4 mm de espessura e obtidos de terceiros molares, adaptados em câmaras pulpares artificiais. As células foram irradiadas diretamente por 3 vezes (a cada 24 horas) com 2, 4, 10, 15 ou 25 J/cm2 e submetidas a avaliação de metabolismo (MTT), síntese de proteína total e de fosfatase alcalina. Os dois melhores parâmetros de irradiação direta foram utilizados para o ensaio de irradiação transdentinária (indireta) das células. Como resultado da etapa direta de irradiação, foi demonstrado que tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total e fosfatase alcalina apresentaram valores estatisticamente superiores nas doses de 15 e 25 J/cm2 (Mann-Whitney p<0.05). Assim, estas doses foram usadas no teste de irradiação indireta, obtendo-se aumento do metabolismo, síntese de proteína e fosfatase alcalina estatisticamente superior apenas para a dose de 25 J/cm2 (Mann-Whitney p<0.05). Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os maiores valores de bio-estimulação das células MDPC-23 ocorreram quando estas foram irradiadas com 25 J/cm2. Para avaliação dos efeitos do LBI sobre o complexo dentinopulpar, foram confeccionadas cavidades... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Low level laser (LLL) has been widely used for treatment of dentin hypersensitivity. In vivo studies have shown increased synthesis of dentin matrix and less severe pulpal inflammation in teeth irradiated with LLL. However, the mechanisms that guide this process remain unknown. This study evaluated the metabolism of cultured odontoblastlike cells submitted to direct or transdentinal LLL irradiation as well as its effects on pulp tissue of first molars of rats. The odontoblast-like cells MDPC-23 were cultured (12,500 cells/cm2) on either 24-well acrylic plates or the pulpal surface of dentin discs adapted to artificial pulp chambers. In the first experiment, the cells received direct irradiation for 3 times (every 24 hours) with the following energy doses: 2 J/cm2, 4 J/cm2, 10 J/cm2, 15 J/cm2, and 25J/cm2. Then, the irradiated cells were evaluated concerning their metabolism, synthesis of total protein (TP) and alkaline phosphatase (ALP). The two best direct irradiation parameters obtained in this first protocol were selected to be used in the second experiment, in which the MDPC-23 cells were irradiated through 0.4mm dentin discs obtained from human teeth (indirect irradiation). For the direct assay, the MTT values as well as the TP and ALP levels were significantly higher at the doses of 15 and 25 J/cm2 (Mann-Whitney; p<0.05). When both of these energy doses were used for the indirect irradiation assay, it was observed a statistically significant increase in cell metabolism and synthesis of TP and ALP only for 25 J/cm2 (Mann-Whitney; p <0.05). Under the experimental conditions, it may be concluded that the highest biostimulation values were obtained when the MDPC-23 cells were irradiated with 25 J/cm2. For evaluation of the effects of LLL on the pulp dentin complex, class I cavities were prepared in the first superior molars of rats. After this, the cavities were immediately irradiated... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-01Bitstream added on 2014-06-13T20:17:13Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cf_me_arafo.pdf: 444703 bytes, checksum: 9ede9f0590ee9d328107f7e49cda8549 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O laser de baixa intensidade, também conhecido como laser terapêutico, tem sido recomendado para uma variedade de procedimentos clínicos, dentre eles o tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo, onde dentes foram tratados com laser, demonstraram aumento na síntese de matriz de dentina e menor intensidade na reação inflamatória pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Mediante ao exposto, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar, in vitro, o metabolismo (MTT assay), expressão de fosfatase alcalina e síntese de proteínas quando células de linhagem odontoblástica MDPC-23 foram submetidas à irradiação com laser de baixa intensidade. A expressão dos genes que codificam para colágeno tipo-1 (Col-I) e fibronectina (FN) foi analisada por meio de RT-PCR. Para isto, células foram previamente cultivadas em placas de Petri (15.000 células/cm2) e submetidas a condições de estresse pelo período de 12 horas. Subseqüentemente, 6 aplicações do laser em parâmetros específicos foram realizadas em intervalos de 12 horas. Como grupo controle foi utilizado células não irradiadas. Tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total não apresentaram valores estatisticamente diferentes daqueles observados para o grupo controle. Em contrapartida, as células irradiadas reduziram sua atividade de fosfatase alcalina. Os resultados de RT-PCR demonstraram haver uma tendência à redução específica, porém não estatística, na expressão dos genes avaliados após irradiação das células. Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os parâmetros do laser de baixa intensidade utilizados na presente pesquisa não influenciaram o metabolismo celular, porém reduziram discretamente a expressão de algumas proteínas específicas. / Low-level laser therapy (LLLT), also referred to as therapeutic laser, has been recommended for a wide array of clinical procedures, among which the treatment of dentinal hypersensitivity. In vivo studies in which teeth were treated with LLLT have demonstrated an increase in dentin matrix synthesis and lower intensity of pulp inflammatory reaction. However, the mechanism that guides this process remains unknown. Therefore, the objective of this study was to evaluate in vitro the effects of LLL irradiation on cell metabolism (MTT assay), alkaline phosphatase (ALP) expression and total protein synthesis. The expression of genes that encode for collagen type-1 (Col-I) and fibronectin (FN) was analyzed by RT-PCR. For such purposes, odontoblast-like cell line (MDPC-23) was previously cultured in Petri dishes (15,000 cells/cm2) and submitted to stress conditions during 12 h. Thereafter, 6 applications with a monochromatic near infrared radiation (GaAlAs) set at predetermined parameters were performed at 12-h intervals. Non-irradiated cells served as a control group. Neither the MTT values nor the total protein levels of the irradiated group differed significantly from those of the control group (Mann-Whitney test; p>0.05). On the other hand, the irradiated cells showed a decrease in ALP activity (Mann-Whitney test; p<0.05). RT-PCR results demonstrated a trend to a specific reduction in gene expression after cell irradiation, though not significant statistically (Mann- Whitney test; p>0.05). It may be concluded that, under the tested conditions, the LLLT parameters used in the present study did not influence cell metabolism, but reduced slightly the expression of some specific proteins.

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: Rosane Lizarelli / Banca: Cláudio Miguel da Costa Neto / Resumo: O laser de baixa intensidade, também conhecido como laser terapêutico, tem sido recomendado para uma variedade de procedimentos clínicos, dentre eles o tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo, onde dentes foram tratados com laser, demonstraram aumento na síntese de matriz de dentina e menor intensidade na reação inflamatória pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Mediante ao exposto, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar, in vitro, o metabolismo (MTT assay), expressão de fosfatase alcalina e síntese de proteínas quando células de linhagem odontoblástica MDPC-23 foram submetidas à irradiação com laser de baixa intensidade. A expressão dos genes que codificam para colágeno tipo-1 (Col-I) e fibronectina (FN) foi analisada por meio de RT-PCR. Para isto, células foram previamente cultivadas em placas de Petri (15.000 células/cm2) e submetidas a condições de estresse pelo período de 12 horas. Subseqüentemente, 6 aplicações do laser em parâmetros específicos foram realizadas em intervalos de 12 horas. Como grupo controle foi utilizado células não irradiadas. Tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total não apresentaram valores estatisticamente diferentes daqueles observados para o grupo controle. Em contrapartida, as células irradiadas reduziram sua atividade de fosfatase alcalina. Os resultados de RT-PCR demonstraram haver uma tendência à redução específica, porém não estatística, na expressão dos genes avaliados após irradiação das células. Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os parâmetros do laser de baixa intensidade utilizados na presente pesquisa não influenciaram o metabolismo celular, porém reduziram discretamente a expressão de algumas proteínas específicas. / Abstract: Low-level laser therapy (LLLT), also referred to as therapeutic laser, has been recommended for a wide array of clinical procedures, among which the treatment of dentinal hypersensitivity. In vivo studies in which teeth were treated with LLLT have demonstrated an increase in dentin matrix synthesis and lower intensity of pulp inflammatory reaction. However, the mechanism that guides this process remains unknown. Therefore, the objective of this study was to evaluate in vitro the effects of LLL irradiation on cell metabolism (MTT assay), alkaline phosphatase (ALP) expression and total protein synthesis. The expression of genes that encode for collagen type-1 (Col-I) and fibronectin (FN) was analyzed by RT-PCR. For such purposes, odontoblast-like cell line (MDPC-23) was previously cultured in Petri dishes (15,000 cells/cm2) and submitted to stress conditions during 12 h. Thereafter, 6 applications with a monochromatic near infrared radiation (GaAlAs) set at predetermined parameters were performed at 12-h intervals. Non-irradiated cells served as a control group. Neither the MTT values nor the total protein levels of the irradiated group differed significantly from those of the control group (Mann-Whitney test; p>0.05). On the other hand, the irradiated cells showed a decrease in ALP activity (Mann-Whitney test; p<0.05). RT-PCR results demonstrated a trend to a specific reduction in gene expression after cell irradiation, though not significant statistically (Mann- Whitney test; p>0.05). It may be concluded that, under the tested conditions, the LLLT parameters used in the present study did not influence cell metabolism, but reduced slightly the expression of some specific proteins. / Mestre

Magister Chirurgiae Dentium (MChD) / Pulp therapy in the primary dentition has always been a source of much controversy. Different pulpotomy techniques and medicaments have been covered extensively in the literature but due to the increasing awareness of the potential deleterious effects of some of these medicaments, a need has arisen in the dental profession to fmd safer, alternative pulpotomy agents. Ferric sulfate and calcium hydroxide have been suggested as possible, more biologically acceptable alternatives to formocresol, which is known for its toxic side effects. Ferric sulfate is one of the most recent agents used in vital pulp therapy and has enjoyed reasonable success. Further controversy also exists in terms of the type of base which is placed over the amputated pulp. The choice of the base seems to determine the pulpal response. Two bases, calcium hydroxide (Dycal) and zinc oxide-eugenol (Kalzinol) have both been used in separate studies but have never been compared. The aim of this study is to compare the success rate obtained when applying one or the other of these two bases following a ferric sulfate pulpotomy. Presently it is unknown which base is best. In this study, after haemostasis was achieved with damp cotton pellets, ferric sulfate was applied to the pulpal stumps. Half of the cases then received a Dycal base followed by a cured layer of Vitrebond and a permanent amalgam restoration. The other half of the cases received a base of zinc oxide-eugenol (Kalzinol) followed by an amalgam restoration. Overall, teeth treated with Dycal demonstrated a higher failure rate when compared with those that received the Kalzinol base. Abscess formation and internal resorption were the most common causes of failure. Even though the Kalzinol base demonstrated greater success, there were still quite a few failures. This study demonstrates, that even with the use of a haemostatic agent, calcium hydroxide cannot be recommended as a medicament in primary tooth pulpotomies. It also highlights the need for alternative pulpotomy medicaments that are not irritating or harmful to the pulp.

Acetylsalicylic acid (ASA), aspirin, is a renowned NSAID that its role in the process of bone metabolism has recently come to light. However, the influence of ASA on the odontogenesis of human dental pulp cells (HDPCs) remains elusive. In search of materials that would synergize the healing potential of the dental pulp, this study aimed to investigate the role of ASA on the odontogenesis of HDPCs in vitro and the influence of ASA on TGF-ß1 liberation from dentin. HDPCs were cultured in a culture medium with different concentrations of ASA: 25, 50, 75, 100, 200 μg/mL and 0 μg/mL as a control. The mitochondria activity of HDPCs was assessed using an MTT assay. Crystal violet staining and triton were used to evaluate cell proliferation rates. ALP activity was measured with the fluorometric assay. Expressions of DSP and RUNX2 were determined with ELISA. DSP and RUNX2 mRNA levels were measured with RT‐qPCR. Alizarin red staining was conducted to evaluate the mineralized nodule formation. Dentin slices were submerged in PBS (negative control), 17% EDTA (positive control), and ASA before collecting the solution for TGF-ß1quantification by ELISA. The data were analyzed by t tests and ANOVA followed by the Tukey post hoc tests. P values < 0.05 were considered statistically significant. The results showed that 25-50 μg/mL ASA promoted mitochondria activity of HDPCs at 72h (P<0.05) and yielded significantly higher proliferation rates of HDPCs than the control at 14d and 21d (P<0.001). All concentrations of ASA promoted odontogenic differentiation of HDPCs by enhancing the mineralization and the levels of DSP, RUNX2, and their mRNA expression in a dose-dependent manner (P<0.05). Also, ASA yielded significantly higher TGF-ß1 liberation after conditioning dentin for 5min (P<0.001) and 10min (P<0.05). In conclusion, the data suggest that ASA promotes the odontogenic potential of HDPCs and TGF-ß1 liberation from dentin in vitro and might be incorporated into the novel pulp capping materials for dental tissue regeneration.