A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial. O Toxoplasma gondii infecta o Homem e a maioria dos animais homeotérmicos. A ingestão de oocistos esporulados é uma das formas de transmissão desse protozoário. Oocistos de T. gondii podem esporular na água do mar e manter a infectividade por até seis meses. Moluscos bivalves podem filtrar e reter oocistos de T. gondii da água do mar em condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença de T. gondii em ostras (Crassostrea rhizophorae) e mariscos (Mytella guayanensis) em condições naturais. Um total de 300 ostras e 300 mariscos foram adquiridos no Mercado de Peixes do município de Santos no estado de São Paulo no período de 05/03/2008 a 29/08/08 e divididos em 60 grupos de cinco ostras e 20 grupos de 15 mariscos. Para o isolamento do parasita, cinco camundongos foram inoculados oralmente com homogenados dos tecidos de cada grupo de ostras ou mariscos. Para a detecção molecular, o DNA dos tecidos dos mariscos foi extraído pelo método de fenol-clorofórmio e o das ostras, pelo método de isotiocianato de guanidina, Em seguida, foi realizada a nested-PCR (Reação em Cadeia pela Polimerase) baseada na amplificação de um fragmento de 155pb do gene B1 de T. gondii. A genotipagem das amostras de T. gondii detectadas foi feita usando a PCR-RFLP (Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição) usando os marcadores SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, CS3 e Apico. Não houve isolamento do parasita pelo bioensaio em camundongos. Nos grupos de mariscos, o T. gondii não foi detectado pela n-PCR e, nos grupos de ostras, houve detecção do T. gondii em dois grupos (3,3%). Não foi possível a genotipagem das amostras de T. gondii detectadas. O presente estudo permitiu concluir que ostras da espécie Crassostrea rhizophorae podem filtrar e reter oocistos de T. gondii e que o ambiente marinho do litoral do estado de São Paulo encontra-se contaminado com oocistos desse parasita. Assim, o consumo de ostras cruas pode representar uma potencial via de transmissão de T. gondii para o Homem e para os animais marinhos. / Toxoplasmosis is a worldwide zoonosis. Toxoplasma gondii is widely prevalent in humans and other mammals. This protozoan parasite can be transmitted by ingestion of sporulated oocysts. T. gondiioocysts can sporulate in seawater and retain their infectivity for at least six months. Experimentally, bivalve mollusks can filter and retain T. gondii oocysts from the seawater. The aim of this study was to investigate the presence of T. gondii in oysters (Crassostrea rhizophorae) and mussels (Mytella guayanensis) in natural conditions. A total of 300 oysters and 300 mussels were acquired from the Fish Market in Santos city, São Paulo state, from March 2008 to August 2008, and divided in 60 groups of five oysters and 20 groups of 15 mussels. To isolate the parasite, five mice were orally inoculated with tissue homogenates from each group of oysters or mussels. For molecular detection of T. gondii, DNA from mussels was extracted using a standard phenol-chloroform method and DNA from oysters was extracted using the guanidine isothiocianate method. A nested-PCR (Polymerase Chain Reaction) based on the amplification of a 155bp fragment from B1 gene of T. gondii was then performed. Eleven PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) markers including SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, CS3 e Apico were used to genotype positive samples. There was no isolation of the parasite by bioassay in mice. T. gondii was not detected in the groups of mussels by n-PCR. There was detection of T. gondii by n-PCR in two groups of oysters (3.3%). Genotyping of these two positive samples was not successful. The results indicate that oysters of the species Crassostrea rhizophorae, the commonest species from the coast of São Paulo, can filter and retain T. gondii oocysts and that the marine environment of the coast of São Paulo state is contaminated with oocysts of this parasite. The ingestion of raw oysters can represent a potential transmission source of T. gondii to humans and marine mammals.

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T02:37:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_DiegoAveraldoGuiguet_D.pdf: 4157800 bytes, checksum: 6b17942eb61d5ff1784bbd719d71b15b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Surtos de doenças gastrointestinais associados com a ingestão de moluscos bivalves crus ou mal cozidos têm sido reportados em todo o mundo. O procedimento mais utilizado para purificar os tecidos dos bivalves, consiste na utilização de água desinfetada com radiação UV aplicada em tanques de depuração, previamente à introdução dos animais no mercado. Os riscos de aquisição de infecções mediante o consumo de bivalves são maximizados quando estes são cultivados em áreas inapropriadas, ou quando são comercializados sem serem submetidos ao procedimento de depuração. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a contaminação por cistos de Giardia duodenalis e oocistos de Cryptosporidium em ostras destinadas ao consumo humano, antes e após o procedimento de depuração com luz UV, e em águas salobras, nas etapas relacionadas com a cadeia produtiva de ostras no estuário de Cananéia, litoral sul de São Paulo; realizar a caracterização molecular de cistos de Giardia em diferentes etapas da produção de ostras para verificar os genótipos circulantes e aqueles relacionados com a infecção em humanos; enumerar a concentração de indicadores bacteriológicos de contaminação fecal, da área de cultivo até a etapa de depuração para verificar se atende à regulamentação do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Quatro pontos foram selecionados para coleta de água e ostras e pesquisa de protozoários: ponto 1: região de cultivo e engorda das ostras; ponto 2: captação de água; ponto 3: etapa de filtração de água e ponto 4: tanque de depuração. As amostras de água foram analisadas por filtração em membranas seguida de separação imunomagnética (IMS) e reação de imunofluorescência direta (RID). A contaminação das ostras foi verificada mediante análise de conteúdo líquido interno e lavado branquial por IMS e RID. A reação em cadeia da polimerase e o sequenciamento foram realizados para pesquisa de Giardia duodenalis e caracterização de seus genótipos. Giardia foi o patógeno mais prevalente em todos os pontos de água, sendo detectada em: 50,0%, 25,0%, 33,3% e 50,0% das amostras dos pontos 1, 2, 3 e 4, respectivamente. O subgenótipo AII foi detectado em algumas amostras hídricas dos pontos 1, 2 e 4 e o genótipo C em duas amostras (pontos 3 e 4). Oocistos de Cryptosporidium foram detectados em 16,6% das amostras de água após a depuração. As ostras da região de cultivo continham cistos de Giardia duodenalis em 41,6% das amostras; o subgenótipo AII foi evidenciado em uma amostra. As ostras depuradas apresentaram a maior contaminação: 58,3% das amostras albergavam cistos de Giardia e 3 delas pertenciam ao subgenótipo AII. As análises bacteriológicas revelaram que o ponto de engorda (P1) estava adequado para o cultivo das ostras. Estes resultados refletem a ineficiência do procedimento de depuração com UV aplicado nesta planta de tratamento e a contaminação do produto - na etapa final que precede sua comercialização - por Giardia duodenalis pertencente ao subgenótipo AII, potencialmente infectante para seres humanos. Os resultados evidenciam a necessidade de monitoramento contínuo de patógenos e adequação da legislação do cultivo de moluscos bivalves no Brasil, a fim de garantir a segurança alimentar / Abstract: Many shellfish-borne associated outbreaks have been reported worldwide especially related to its ingestion raw or lightly cooked. In the shellfish industry, the most commonly utilized procedure to purify shellfish tissues consists in the utilization of UV disinfected water employed at depuration tanks, before they are placed on the market. The risks of acquiring gastroenteric diseases, through its consumption, are maximized when they are cultured on inappropriate growing areas or whenever they are sold without depuration procedure. The purposes of this study were: evaluate the contamination by Giardia duodenalis cysts and Cryptosporidium oocysts in oysters destined to human consumption, before and after UV depuration procedure, and in brackish waters at stages related to the food chain of edible oysters, from Cananéia estuary located on the south coast of São Paulo; perform molecular characterization of Giardia cysts at different stages of the production of oysters to verify the main circulating genotypes and those associated with human infection; enumerate bacteriological indicators of fecal contamination from growing site up to depuration site, to check if it complies with the National Environmental Council (CONAMA). Four sampling sites were selected for water and oysters harvesting and protozoa search: site 1- oysters growing area; site 2: catchment water; site 3: filtration stage of water treatment and site 4: oyster's depuration tank. Water samples were analyzed through membrane filtration technique followed by immunomagnetic separation (IMS) and direct immunofluorescence assay (IFA). Oysters' contamination was verified through the analysis of innerwater and gill wash using IMS and IFA. The polymerase chain reaction and sequencing reactions were performed to search for Giardia duodenalis and characterization of its genotypes. Giardia was the most prevalent pathogens in all water sites, where it was detected: 50.0%, 25.0%, 33.3% and 50.0% of water from sites 1, 2, 3 and 4 respectively. The subgenotype AII was detected in several water samples from sites 1, 2 and 4 and the genotype C in two samples (sites 3 and 4). Cryptosporidium oocysts were found in 16.6% of depuration water tank. Oysters from growing area harbored Giardia duodenalis cysts in 41.6% of the samples and subgenotype AII was evidenced once. Depurated oysters were the most contaminated: 58.3% were harboring Giardia duodenalis cysts and 3 belonged to subgenotype AII. Bacteriological analysis demonstrated that site 1 was adequate to growing oysters. These results indicate the ineffectiveness of the UV depuration applied in this shellfish treatment plant, and the contamination of the product - in the final stage which precedes its commercialization - by Giardia duodenalis belonging to subgenotype AII, potentially infectious to humans. The results highlight the need for continued monitoring of pathogens and suit the legislation on the cultivation of bivalve molluscs in Brazil in order to ensure food safety / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Vibrio parahaemolyticus (Vp) é uma bactéria naturalmente presente em regiões estuarinas, sendo a principal causa de gastrenterite de origem bacteriana associada a pescados, principalmente ostras cruas. Nesta pesquisa, foi desenvolvida uma avaliação quantitativa de risco para avaliar a probabilidade de Vp causar doença após o consumo de ostra crua, produzida e comercializada no Estado de São Paulo. O estudo incluiu a identificação e caracterização do perigo, a avaliação da exposição e a caracterização do risco. Um modelo matemático foi desenvolvido. Este modelo leva em consideração o comportamento de Vp em ostras na cadeia produtiva, em cada estação do ano, além da relação entre a dose de Vp ingerida e a probabilidade de desenvolver a doença. A avaliação da exposição foi desenvolvida em três etapas: cultivo, pós-coleta e consumo. Na etapa de cultivo foram considerados os fatores que influenciam a prevalência e o número de Vp em ostras no momento da coleta. Na etapa pós-coleta, foram descritas as práticas da indústria e foram considerados os fatores associados ao processamento, transporte e manipulação. Já na etapa de consumo foram considerados os fatores como a quantidade de ostras consumidas por porção, o peso médio por ostra consumida e a população de Vp patogênico no momento do consumo. O resultado do modelo quantitativo da avaliação da exposição foi, então, integrado ao modelo dose-resposta, Beta-Poisson, para se obter uma estimativa do risco. Esta estimativa expressa o impacto da exposição humana a Vp, sobre a saúde pública, associada ao consumo de ostras. A simulação de Monte Carlo foi utilizada para avaliar o efeito da variabilidade e incerteza das variáveis do modelo sobre a estimativa do risco. O modelo prediz uma probabilidade de ocorrência de doença de 4,6x10-4, por porção de ostra, consumida ao longo do ano. As variáveis que possuem maior influência sobre o risco de ocorrência de doença são a população de Vp em ostras no cultivo, a temperatura de transporte das ostras até o varejo e a porcentagem de Vp patogênico em ostra, no momento do seu consumo. O modelo evidencia que uma das maneiras de reduzir o risco de ocorrência de doença seria intervir nas condições de transporte de ostras até o varejo por meio da sua refrigeração. Com o modelo é possível identificar fatores e simular cenários para avaliar o comportamento de V. parahaemolytícus como um perigo microbiológico, ao longo da cadeia produtiva de ostra até o momento do seu consumo. Também é possível avaliar o impacto de medidas de intervenção na cadeia produtiva. As suposições adotadas limitam a aplicabilidade do modelo. Portanto, é necessário que o modelo seja validado, particularmente com relação ao número de casos de doença causados por Vp, cujos dados de vigilância epidemiológica inexistem no Brasil. / Vibrio parahaemolyticus (Vp) is naturally present in estuarine regions and is the main cause of gastroenteritis associated with the consumption of bivalve molluscan shellfish, specially raw oysters. In this research, a quantitative risk assessment was developed to evaluate the probability of Vp causing disease after consumption of raw oyster, produced and commercialized in the state of Sao Paulo. The study included the identification and characterization of the hazard, exposure assessment and risk characterization. A mathematical model was developed. This model takes into account the behavior of Vp in oysters in the productive chain, for each season of the year, besides the relationship between the number of cells of Vp ingested and the probability of developing the disease. The exposure assessment was done in three steps: farming, after harvesting and consumption. At the farming step, the factors that influence the prevalence and the population of Vp at the time of harvesting were considered. At the after harvesting step, the factors associated with transportation, handling and processing were considered. At the consumption step, factors related to the amount of oysters and the average weight per oyster consumed and the density of pathogenic Vp at the time of consumption were considered. Then, the quantitative model of exposure assessment was integrated to the dose-response model, BetaPoisson, in order to obtain a risk estimate. This calculation expresses the impact of the human exposure to Vp associated with the consumption of oysters on public health. The Monte Carlo simulation was used to evaluate the effect of variability and uncertainty of variables of the model in the risk estimation. The model predicts a probability of occurrence of the disease of 4,6x10-4 per serving of oyster consumed during one year. The variables showing the greatest influence on the risk of occurrence of disease are the density of Vp in oyster in the farming step, the temperature during transportation of oysters to the retail market and the percentage of pathogenic Vp strains in oysters,\' at the moment of consumption. The model indicates that the use of refrigeration during transportation of oysters to retail could reduce the risk of disease. The model allows the identification of factors and the simulation of scenarios in order to evaluate the behavior of V. parahaemolyticus, as a microbiologícal hazard, in the productive chain of oyster to the consumption. It is also possible to evaluate the impact of intervention measures in the productive chain. The assumptions Iimit the application of the model. Therefore, it is necessary to validate the model, particularly in relation to the number of cases of dísease caused by V. parahaemolyticus of which the data on epidemiologic surveillance do not exist in Brazil.

A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial. O Toxoplasma gondii infecta o Homem e a maioria dos animais homeotérmicos. A ingestão de oocistos esporulados é uma das formas de transmissão desse protozoário. Oocistos de T. gondii podem esporular na água do mar e manter a infectividade por até seis meses. Moluscos bivalves podem filtrar e reter oocistos de T. gondii da água do mar em condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença de T. gondii em ostras (Crassostrea rhizophorae) e mariscos (Mytella guayanensis) em condições naturais. Um total de 300 ostras e 300 mariscos foram adquiridos no Mercado de Peixes do município de Santos no estado de São Paulo no período de 05/03/2008 a 29/08/08 e divididos em 60 grupos de cinco ostras e 20 grupos de 15 mariscos. Para o isolamento do parasita, cinco camundongos foram inoculados oralmente com homogenados dos tecidos de cada grupo de ostras ou mariscos. Para a detecção molecular, o DNA dos tecidos dos mariscos foi extraído pelo método de fenol-clorofórmio e o das ostras, pelo método de isotiocianato de guanidina, Em seguida, foi realizada a nested-PCR (Reação em Cadeia pela Polimerase) baseada na amplificação de um fragmento de 155pb do gene B1 de T. gondii. A genotipagem das amostras de T. gondii detectadas foi feita usando a PCR-RFLP (Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição) usando os marcadores SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, CS3 e Apico. Não houve isolamento do parasita pelo bioensaio em camundongos. Nos grupos de mariscos, o T. gondii não foi detectado pela n-PCR e, nos grupos de ostras, houve detecção do T. gondii em dois grupos (3,3%). Não foi possível a genotipagem das amostras de T. gondii detectadas. O presente estudo permitiu concluir que ostras da espécie Crassostrea rhizophorae podem filtrar e reter oocistos de T. gondii e que o ambiente marinho do litoral do estado de São Paulo encontra-se contaminado com oocistos desse parasita. Assim, o consumo de ostras cruas pode representar uma potencial via de transmissão de T. gondii para o Homem e para os animais marinhos. / Toxoplasmosis is a worldwide zoonosis. Toxoplasma gondii is widely prevalent in humans and other mammals. This protozoan parasite can be transmitted by ingestion of sporulated oocysts. T. gondiioocysts can sporulate in seawater and retain their infectivity for at least six months. Experimentally, bivalve mollusks can filter and retain T. gondii oocysts from the seawater. The aim of this study was to investigate the presence of T. gondii in oysters (Crassostrea rhizophorae) and mussels (Mytella guayanensis) in natural conditions. A total of 300 oysters and 300 mussels were acquired from the Fish Market in Santos city, São Paulo state, from March 2008 to August 2008, and divided in 60 groups of five oysters and 20 groups of 15 mussels. To isolate the parasite, five mice were orally inoculated with tissue homogenates from each group of oysters or mussels. For molecular detection of T. gondii, DNA from mussels was extracted using a standard phenol-chloroform method and DNA from oysters was extracted using the guanidine isothiocianate method. A nested-PCR (Polymerase Chain Reaction) based on the amplification of a 155bp fragment from B1 gene of T. gondii was then performed. Eleven PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) markers including SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, CS3 e Apico were used to genotype positive samples. There was no isolation of the parasite by bioassay in mice. T. gondii was not detected in the groups of mussels by n-PCR. There was detection of T. gondii by n-PCR in two groups of oysters (3.3%). Genotyping of these two positive samples was not successful. The results indicate that oysters of the species Crassostrea rhizophorae, the commonest species from the coast of São Paulo, can filter and retain T. gondii oocysts and that the marine environment of the coast of São Paulo state is contaminated with oocysts of this parasite. The ingestion of raw oysters can represent a potential transmission source of T. gondii to humans and marine mammals.

Orientadora: Léa Silvia Sant'Ana / Banca: Elisabete Maria Macedo Viegas / Banca: Marcelo Barbosa Henriques / Resumo: A ostreicultura surgiu da necessidade em: atender a crescente demanda de ostras, sem ameaçar o estoque natural através do extrativismo. Os métodos de cultivo foram aperfeiçoados ao longo dos anos em diversos países permitindo um crescente aumento na produção deste molusco. Em alguns lugares este aumento da produção está sendo superior ao volume consumido in natura como conseqüência, toma-se necessário o aperfeiçoamento da tecnologia pós-colheita. Para alcançar tal objetivo, foi realizado congelamento de ostras inteiras (vivas) em túnel de ar forçado. Amostras de ostras frescas e congeladas, com ° (recém congelada), 30 e 60 e 90 dias foram submetidas às análises de composição química, testes sensoriais e estudo dos índices de condição. A composição química da ostra fresca mostrou teores médios de umidade de 81,7 I ± 0,56% e 83,25 ± 0,12; de proteína de 9,96 ± 0,48 e 11,02 ± 0,59; lipídeo de 0,51 ± 0,11 e 0,27 ±0,14; carboidrato de 6,06 e 3,22, para o I e II experimento, respectivamente. Com relação ao processamento da ostra, foram detectadas alterações em sua composição química, tanto em função do congelamento quanto do armazenamento, em ambos experimentos. Os três índices de condição estudados mostraram diferenças entre as ostras frescas e as congeladas, e de modo geral estão de acordo com os valores descritos na literatura. Com a análise sensorial foi possível verificar que a ostra congelada foi satisfatoriamente aceita para o consumo humano, com índices de aceitabilidade acima de 70%. / Abstract: Oyster fanning appeared of the necessity in taking care of the increasing- demand of oysters, without threatening the natural supply through the extrativism. The farming had been improved to long of the years in diverse countries allowing a increase the production of this mollusc. Increase of the production is being incompatible to the consumed volume in natura, and as consequence, becomes necessary the perfectioning of the technology after¬ harvest. To reach such objective, the freezing of entire oysters (alive) in continuous air blast freezer was carried through. The changes of chemical composition, condition indices and sensorial tests were analyzed in response to different samples of oysters: fresh and frozen, with O (just frozen), 30 and 60 and 90 days. The chemical composition of the fresh oyster showed average texts of moisture of 81.71 ± 0.56 and 83.25 ± 0.12; of protein of 9.96 ± 0.48 and 11.02 ± 0.59; lipid of 0.51 ± 0.11 and 0.27 ± 0.14; carbohydrate of 6.06 and 3.22, for the I and II experiment, respective1y. Relating to the processing of the oyster, alterations in its chemical composition, as much in function of the freezing as of the storage had been detected, in both experiments. The studied indices of condition had shown to differences between the fresh oysters and the frozen ones, and in general way they are in accordance with the described va1ues in literature. With the sensorial analysis it was possible to verify that the frozen oyster was satisfactorily accepted for the human consumption, with situated indices of acceptability above of 70%. / Mestre

A disposição de esgoto em áreas costeiras pode causar impactos para a vida marinha, alterando a biodiversidade e o equilíbrio do ecossistema chegando a causar graves doenças nos seres humanos. Neste estudo, determinou-se a concentração de um conjunto de marcadores orgânicos moleculares de introdução de esgoto no ambiente marinho: alquilbenzeno lineares (LABs) em amostras de sedimento, ostras (Crassostrea brasiliana), mexilhões (Mytella charruana e Mytella guyanensis) e peixes (Mugil curema) (Valenciennes, 1836) nos Estuário de Cananéia - Iguape e Santos - São Vicente, SP, Brasil. As concentrações de LABs (peso seco) encontradas em amostras de sedimento de Cananéia variaram de <1,0 a 80,6 ng g-1 e em Santos variaram de 6,7 a 1234,0 ng g-1. Em moluscos bivalves as concentrações detectadas em Cananéia encontravam-se na faixa de 90 a 1849 ng g-1(peso seco) e em Santos as concentrações variaram de 110 a 50495 ng g-1(peso seco). Os estudos em peixes de Cananéia apresentaram os seguintes valores médios (ng g-1 em peso seco): músculo (64,7 ± 22,6), pele (124,0 ± 60,1), fígado (164,0 ± 79,2) e rim (9,1 ± 9,9). No estuário de Santos, os tecidos de peixes apresentaram os seguintes valores médios (ng g-1 em peso seco): músculo (95,0 ± 90,1), pele (438,0 ± 437,0), fígado (274,0 ±147,0) e rim (60,7 ± 35,6). Houve diferença significativa entre as amostras analisadas nos tecidos de peixes de Cananéia e Santos evidenciando diferenças de acúmulo de LABs de acordo com o nível de antropização. A detecção de LABs nestas matrizes evidenciou a sua capacidade de acúmulo e reflete a exposição ao esgoto e portanto pode ser utilizadas no monitoramento ambiental. / The sewage disposal in coastal areas can cause impacts to marine life, altering the balance of the ecosystem and biodiversity and causing serious diseases in humans. In this study, the concentration of a set of molecular markers for the introduction of organic sewage into the marine environment: linear alkylbenzene (LAB), in samples of sediment, oysters (Crassostrea brasiliana), mussels (Mytella charruana and Mytella guyanensis) and fish (Mugil curema) (Valenciennes, 1836) from Cananéia - Iguape and Santos - São Vicente estuaries, located in Sao Paulo State, Brazil. LABs concentrations (dry weight) found in sediment samples from Cananéia ranged from <1.0 to 80.6 ng g-1 and from Santos ranged from 6.7 to 1234.0 ng g-1. In bivalve molluscs of Cananéia, the concentrations were in the range 90 to 1849 ng g-1 (dry weight) and in Santos, the concentrations ranged from 110 to 50495 ng g-1 (dry weight). Studies in fish from Cananéia showed the following average values (ng g-1 - dry weight): muscle (64.7 ± 22.6), skin (124.0 ± 60.1), liver (164.0 ± 79.2) and kidney (9.1 ± 9.9). In the Santos estuary, the fish tissue showed the following average values (ng g-1 - dry weight): muscle (95,0 ± 90.1), skin (438 ± 437), liver (274 ± 147) and kidney (60.7 ± 35.6). There were significant differences between the samples of tissues of fish from Cananéia and Santos showing differences in accumulation of LABs according to the level of anthropogenic occupation. The LABs detection in these matrices demonstrated their ability to accumulate and reflects the exposure to sewage and therefore can be used in environmental monitoring.

IEAPM:Disponível em meio físico e digital. / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual do Norte Fluminense, Centro de Biociências e Biotecnologia, 2010. / Inclui bibliografia / Made available in DSpace on 2018-02-14T17:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010. Added 1 bitstream(s) on 2019-02-13T19:12:20Z : No. of bitstreams: 1 00000edf.pdf: 7645404 bytes, checksum: 593c5b4e38d2fe25fa5b3f35a1a8f4fc (MD5)

A disposição de esgoto em áreas costeiras pode causar impactos para a vida marinha, alterando a biodiversidade e o equilíbrio do ecossistema chegando a causar graves doenças nos seres humanos. Neste estudo, determinou-se a concentração de um conjunto de marcadores orgânicos moleculares de introdução de esgoto no ambiente marinho: alquilbenzeno lineares (LABs) em amostras de sedimento, ostras (Crassostrea brasiliana), mexilhões (Mytella charruana e Mytella guyanensis) e peixes (Mugil curema) (Valenciennes, 1836) nos Estuário de Cananéia - Iguape e Santos - São Vicente, SP, Brasil. As concentrações de LABs (peso seco) encontradas em amostras de sedimento de Cananéia variaram de <1,0 a 80,6 ng g-1 e em Santos variaram de 6,7 a 1234,0 ng g-1. Em moluscos bivalves as concentrações detectadas em Cananéia encontravam-se na faixa de 90 a 1849 ng g-1(peso seco) e em Santos as concentrações variaram de 110 a 50495 ng g-1(peso seco). Os estudos em peixes de Cananéia apresentaram os seguintes valores médios (ng g-1 em peso seco): músculo (64,7 ± 22,6), pele (124,0 ± 60,1), fígado (164,0 ± 79,2) e rim (9,1 ± 9,9). No estuário de Santos, os tecidos de peixes apresentaram os seguintes valores médios (ng g-1 em peso seco): músculo (95,0 ± 90,1), pele (438,0 ± 437,0), fígado (274,0 ±147,0) e rim (60,7 ± 35,6). Houve diferença significativa entre as amostras analisadas nos tecidos de peixes de Cananéia e Santos evidenciando diferenças de acúmulo de LABs de acordo com o nível de antropização. A detecção de LABs nestas matrizes evidenciou a sua capacidade de acúmulo e reflete a exposição ao esgoto e portanto pode ser utilizadas no monitoramento ambiental. / The sewage disposal in coastal areas can cause impacts to marine life, altering the balance of the ecosystem and biodiversity and causing serious diseases in humans. In this study, the concentration of a set of molecular markers for the introduction of organic sewage into the marine environment: linear alkylbenzene (LAB), in samples of sediment, oysters (Crassostrea brasiliana), mussels (Mytella charruana and Mytella guyanensis) and fish (Mugil curema) (Valenciennes, 1836) from Cananéia - Iguape and Santos - São Vicente estuaries, located in Sao Paulo State, Brazil. LABs concentrations (dry weight) found in sediment samples from Cananéia ranged from <1.0 to 80.6 ng g-1 and from Santos ranged from 6.7 to 1234.0 ng g-1. In bivalve molluscs of Cananéia, the concentrations were in the range 90 to 1849 ng g-1 (dry weight) and in Santos, the concentrations ranged from 110 to 50495 ng g-1 (dry weight). Studies in fish from Cananéia showed the following average values (ng g-1 - dry weight): muscle (64.7 ± 22.6), skin (124.0 ± 60.1), liver (164.0 ± 79.2) and kidney (9.1 ± 9.9). In the Santos estuary, the fish tissue showed the following average values (ng g-1 - dry weight): muscle (95,0 ± 90.1), skin (438 ± 437), liver (274 ± 147) and kidney (60.7 ± 35.6). There were significant differences between the samples of tissues of fish from Cananéia and Santos showing differences in accumulation of LABs according to the level of anthropogenic occupation. The LABs detection in these matrices demonstrated their ability to accumulate and reflects the exposure to sewage and therefore can be used in environmental monitoring.

Two experiments were carried out to determine the coefficients of apparent and true digestibility of calcium in different calcium sources and to evaluate the relative calcium bioavailability of these sources for quail. In the first experiment 240 quails housed in metabolism cages were used. For the determination of the digestibility coefficients, the method of total collection of feces from the 14th day to the 17th (initial phase) and from the 28th to the 31st (final phase) was adopted. The birds were distributed in a completely randomized design consisting of five diets, where a basal diet (RB) was formulated in which calcium sources were (calcitic limestone, calcium carbonate, flour of sururu shells, maçunim and oyster), with five replicates and eight birds per experimental unit. For the determination of the relative bioavailability of calcium, a growth assay was performed using 288 European quails, distributed in a DIC, with nine treatments, four replicates and eight birds per experimental unit housed from the eighth to the 21st day in cages. The treatments consisted of a basal diet with a low level of calcium (0.166%), being the same without calcium supplementation and the same with supplementation of two levels of calcium (0.342% and 0.684%) from calcium carbonate, shells of sururu, maçunim and oysters. The coefficients of apparent and true digestibility were similar among the evaluated sources, and it is possible to conclude that the flour shells of sururu, maçunim and oyster can be used as a source of calcium in formulations of feeds for European quails. The relative bioavailability of flour shells of sururu, maçunim and oyster obtained from the standard curve and Slope Ratio methods was greater than 100%, ie larger than the standard source. / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram realizados dois ensaios com o objetivo de determinar os coeficientes de digestibilidade aparente e verdadeiro do cálcio em diferentes fontes de cálcio, e avaliar a biodisponibilidade relativa do cálcio destas mesmas fontes para codornas de corte. No primeiro ensaio foram utilizadas 240 codornas alojadas em gaiolas de metabolismo. Para a determinação dos coeficientes de digestibilidade adotou-se o método de coleta total de fezes do 14º dia ao 17º (fase inicial) e do 28º ao 31º (fase final). As aves foram distribuídas em um delineamento inteiramente casualizado constituído de cinco dietas, onde foi formulada uma ração basal (RB) na qual foram adicionadas as fontes de cálcio (calcário calcítico, carbonato de cálcio, farinha de conchas de sururu, farinha de conchas de maçunim e farinha de conchas de ostras), com cinco repetições e oito aves por unidade experimental. Para a determinação da biodisponibilidade relativa do cálcio, foi realizado um ensaio de crescimento, utilizando-se 288 codornas europeias, distribuídas em um DIC, com nove tratamentos, quatro repetições e oito aves por unidade experimental, alojadas do oitavo ao 21º dia em gaiolas. Os tratamentos foram constituídos de uma dieta basal com baixo nível de cálcio (0,166%), sendo a mesma sem suplementação de cálcio e a mesma com suplementação de dois níveis de cálcio (0,342% e 0,684%) provenientes do carbonato de cálcio, farinha de conchas de sururu, de maçunim e de ostras. Os coeficientes de digestibilidade aparente e verdadeiro se assemelharam entre as fontes avaliadas, sendo possível concluir que as farinhas de concha de sururu, maçunim e ostra podem ser utilizadas como fonte de cálcio nas formulações de rações para codornas europeias. A biodisponibilidade relativa do cálcio da farinha de conchas de sururu, de maçunim e de ostras, obtidos a partir dos métodos da curva padrão e método do Slope Ratio, foram superiores a 100%, ou seja, maior que a da fonte padrão.

Vírus causadores de gastroenterite, descritos como pequenos vírus de estrutura arredondada (Small Round Structured Viruses-SRSV), foram detectados em extratos de ostras Crassostrea spp., coletadas em regiões distintas do litoral do Estado de São Paulo, utilizando a Reação em Cadeia por Polimerase com transcrição reversa (RT-PCR).Treze lotes de amostras, contendo 10 g de estômagos e divertículos, foram processados para extração e concentração das partículas virais, mediante adsorção-eluição e precipitação por polietilenoglicol (PEG 6000), e purificação com fluorocarbono (Freon, Dupont Co.) para eliminação prévia dos inibidores da reação de RT-PCR. A extração do ácido nucleico viral, foi realizada com uma mistura de isotiocianato de guanidina e fenol (TRIzol ®, Gibco) e clorofórmio, sendo completada com uma purificação em coluna spin, com membrana de polissulfona (Millipore,Corp.). A reação de RT-PCR foi realizada em uma única etapa, utilizando o kit \'\'Super Script ONE-STEP RT-PCR System\'\'® (Gibco). A reação de amplificação enzimática revelou, por eletroforese em gel de agarose (2%), corada com brometo de etídio, produtos de 123 bp, em 3 (23%) dos 13 lotes de amostras coletadas durante o verão de 1998, sendo verificadas em uma delas por imunomicroscopia eletrônica (IME),partículas de SRSV. Os produtos encontrados pertencem ao grupo genômico G2(Snow Mountain e outros vírus). A aplicação deste método possibilitou pela 1ª vez a detecção molecular de SRSVs no Brasil em ostras naturalmente contaminadas. / The Small Round Structured Viruses (SRSVs) have been associated with gastroenteritis in humans, and were detected in extracts of oysters Crassostrea spp., by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT - PCR). Thirteen lots of samples, originated from different regions of the State of São Paulo, were processed for viral particles extraction. The samples, containing 10 g of stomach and diverticula, were extracted by adsorption - elution and polyethylene glycol (PEG 6000) precipitation, and fluorocarbon (Freon, Dupont Co.) was used for purification and previous elimination of RT - PCR inhibitors. For the viral nucleic acid extraction, guanidine isothiocyanate - phenol mixture (TrizolÒ, Gibco ) and chloroform were used, followed by a polysulfone spin column (Millipore, Corp.) purification. The RT-PCR was done in one step, using the \'\'Super Script ONE-STEP RT-PCR System\'\'® (Gibco). The enzimatic amplification reaction run in 2% agarose gel electrophoresis stained with ethidium bromide, revealed 123 bp products in 3 (23%) of the 13 lots of samples collected during the summer of 1998. One of these three samples was positive for SRSV particles by Immune Electron Microscopy (IEM). These 3 products were classified in the Genogroup G2 (Snow Mountain and others viruses). The application of this methodology made it possible to detected, in a molecular basis, the first cases of SRSVs in environmentally contaminated oysters in Brazil.