Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007- Lidiane de Castro Soares.pdf: 1336181 bytes, checksum: 47680a74331a705e5ecd649c1639aa3f (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Funda??o Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Coagulasenegative staphylococci (SCN) take part of normal microbiota. Although it has been considered saprophytic, nowadays there is a concern about its pathogenic potential.Nevertheless, all advance in SCN identification assays, these microorganisms are continually neglected in laboratorial routine of infectious diseases, because of the wide range of species. In spite of the difficulties, it is necessary to make an appropriated species identification in order to differentiate the potential pathogenic agents and to determine its antimicrobial susceptibility pattern. Resistance in SCN is related to the presence of mecA gene, which expresses a heterogeneous pattern that can be detected through diverse phenotypics tests. In this study, 72 SCN isolates obtained from external ear conducts of dogs, bovine mastitis and human nosocomial infections were evaluated. Staphylococcus xylosus was the most prevalent microorganism in animal and S. cohnii subsp.urealyticus in human sample. The antimicrobial resistance patterns were evaluated through disc diffusion test, and a high level of resistance to penicillin and ampicillin were detected. The most efficient antibiotics evaluated were gentamicin, vancomicin and the association ampicillin+sulbactam. Oxacillin resistance was phenotypically detected by modified disc diffusion test, agar screen, broth microdilution and agar dilution. Presence of mecA gene where detected in 5,55% of the isolates by Polimerase Chain Reaction (PCR). Correlation with the detection of mecA gene was used as gold standard for evaluation of sensitivity and specificity of phenotypical assays. The low number of mecA positives isolates did not allowed the association between cefoxitin and oxacillin resistance as a test to detect the presence this gene. The broth microdilution and agar dilution tests presented the best accuracy in phenotypic detection of the oxacillin resistance. / Os estafilococos coagulasenegativos (ECN) fazem parte da microbiota normal da pele e apesar de terem sido considerados sapr?fitas por muito tempo, o seu significado cl?nico como agente etiol?gico tem aumentado com o passar dos anos. No entanto, apesar de todo avan?o nas t?cnicas de identifica??o dos ECN e do conhecimento destes como agentes etiol?gicos em diversos processos infecciosos, estes microrganismos muitas vezes s?o negligenciados na rotina laboratorial, devido a enorme diversidade de esp?cies encontradas. A identifica??o das esp?cies de ECN, embora de dif?cil realiza??o para a maioria dos laborat?rios cl?nicos, ? necess?ria para diferenciar o potencial patog?nico e o perfil de resist?ncia de cada isolado. A resist?ncia ? oxacilina em ECN ? mediada pelo gene mecA e usualmente heterog?nea, sendo detectada por v?rios m?todos fenot?picos. Neste estudo, foram avaliados 72 isolados de ECN provenientes de amostras do conduto auditivo de c?es da ra?a Beagles, de mastite bovina e de infec??es humanas. Staphylococcus xylosus foi o microrganismo mais isolado, nas amostras animais, e S. cohnii subsp.urealyticus em humanos, dentro de uma ampla gama de esp?cies identificadas. O perfil de resist?ncia aos antimicrobianos em isolados de animais e humanas foi avaliado atrav?s da t?cnica de difus?o em disco, na qual detectouse um elevado n?vel de resist?ncia ? penicilina e ampicilina. A gentamicina, vancomicina e associa??o ampicilina+sulbactam foram eficientes frente aos isolados testados. A avalia??o da resist?ncia ? oxacilina foi realizada atrav?s da difus?o em disco modificada, ?gar screen, microdilui??o em caldo e em ?gar. A presen?a do gene mecA foi determinada pelo m?todo da Rea??o em Cadeia de Polimerase (PCR), sendo 5,55% dos isolados mecA positivos. Os resultados fenot?picos de resist?ncia a cefoxitina e a oxacilina foram correlacionados com a detec??o do gene mecA, que foi utilizado como padr?o ouro para avalia??o da sensibilidade e especificidade das t?cnicas utilizadas. O reduzido n?mero de isolados mecA + n?o permitiu estabelecer o grau de correla??o entre a cefoxitina e a oxacilina como m?todo de predi??o do gene, embora ambas tenha apresentado o mesmo percentual de resist?ncia. O teste fenot?pico que apresentou melhor acur?cia na detec??o da resist?ncia ? oxacilina foi a microdilui??o em caldo.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-04-05T19:32:12Z No. of bitstreams: 1 2012 - Gabriela Viana da Silva.pdf: 1385561 bytes, checksum: ebedf6cb2382daee2a3bf246edc9848f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Gabriela Viana da Silva.pdf: 1385561 bytes, checksum: ebedf6cb2382daee2a3bf246edc9848f (MD5) Previous issue date: 2012-03-27 / CAPES / The sheep milk production in Brazil is a relatively new activity, whose production is directed towards the manufacture of cheeses, yogurts and other products. Therewith a deficit of scientific papers related to this activity. Considered an excellent substrate, many pathogens can be transmitted to humans through consumption of milk and its derivatives, including Staphylococcus spp., one of the main agents involved in outbreaks of food poisoning. Moreover, the increasing of antimicrobial resistance is becoming a global public health problem. Within this problematic, this study aimed to identify the species of Staphylococcus and its antimicrobial susceptibility profile of current use in human and veterinary medicine, isolated from milk of sheep origin from rural properties in the Meridional Agreste of Pernambuco. We identified 13 different species, three coagulase-positive and 10 coagulase-negative and two strains identified only as SCN, especially Staphylococcus aureus (29) followed by S. chromogenes (15) and S. intermedius (9) by its frequency. The determination of antimicrobial susceptibility by disk diffusion revealed high rates of resistance to penicillin (53.2%) and ampicillin (45.6%). The susceptibility to oxacillin was evaluated by the disk diffusion methods for oxacillin and cefoxitin, Screen Agar and determination of Minimum Inhibitory Concentration through tests of broth microdilution and agar, the latter two detected resistance in 24% and 6% of isolates, respectively. All isolates were negative for the presence of blaZ and mecA genes and was not observed a correlation between phenotypic and genotypic testing for resistance to beta-lactams. The results show that this species is a source of infection, through its products, Staphylococcus potentially pathogenic to humans. / A produ??o de leite ovino no Brasil ? uma atividade relativamente nova, cuja produ??o est? direcionada para a confec??o de queijos, iogurtes e outros derivados. Com isso h? uma defict de trabalhos cient?ficos ligados a esta atividade. Considerado um excelente substrato, muitos micro-organismos patog?nicos podem ser veiculados ao homem atrav?s do consumo de leite e seus derivados, entre eles Staphylococcus spp., um dos principais agentes envolvidos em surtos de intoxica??es alimentares. Al?m disso, o crescente aumento da resist?ncia aos antimicrobianos vem se constituindo um problema de sa?de p?blica global. Dentro desta problem?tica, o presente estudo objetivou identificar as esp?cies de Staphylococcus e seu perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos de uso corrente em medicina humana e veterin?ria, isoladas de leite de origem ovina provenientes de propriedades rurais no Agreste Meridional de Pernambuco. Foram identificadas 13 esp?cies diferentes, sendo tr?s do grupo Staphylococcus coagulase-positivo e 10 de Staphylococcus coagulase-negativo e duas cepas identificadas apenas como SCN, destacando-se por sua frequ?ncia Staphylococcus aureus (29) seguida pelo S. chromogenes (15) e S. intermedius (9). A determina??o da suscetibilidade aos antimicrobianos pelo teste disco difus?o revelou elevados percentuais de resist?ncia ? penicilina (53,2%) e ampicilina (45,6%). A suscetibilidade a oxacilina foi avaliada atrav?s dos m?todos de disco-difus?o para oxacilina e cefoxitina, Screen Agar e determina??o da Concentra??o Inibit?ria M?nima atrav?s dos testes de Microdilui??o em Caldo e em Agar, tendo estes dois ?ltimos detectado resist?ncia em 24% e 6% dos isolados, respectivamente. Todos os isolados foram negativos para a presen?a dos genes blaZ e mecA, n?o tendo sido observada uma correla??o entre os testes fenot?picos e genot?picos para a resist?ncia aos beta-lact?micos. Os resultados obtidos evidenciam que esta esp?cie animal ? mais uma fonte de infec??o e veiculadora, atrav?s de seus produtos, de Staphylococcus potencialmente patog?nicos para o homem.

Nas últimas décadas, os Staphylococcus coagulase-negativo, têm sido considerados como patógenos verdadeiros, sendo um dos principais grupos bacterianos responsáveis pelas infecções relacionadas a assistência a saúde (IRAS). O presente estudo teve como objetivo geral: avaliação da relação entre a resistência a oxacilina e a produção de biofilme de amostras Staphylococcus coagulase-negativo de origem comunitária e hospitalar. Neste sentido, foram desenvolvidos os seguintes objetivos específico: identificar ao nível de espécie os Staphylococcus coagulase-negativo; analisar por técnica fenotípica (Ágar vermelho do Congo) a produção de slime; avaliar quantitativamente, a produção de biofilme; correlacionar a produção de polissacarídeos extracelulares (slime) com a produção de biofilme; avaliar a relação da resistência a oxacilina como indicador da presença do gene mecA; avaliar a relação entre a concentração inibitória mínima e a concentração bactericida mínima para oxacilina; pesquisar a presença dos genes mecA, icaAD e atlE, pela técnica de PCR. Foi estudado um total de 150 amostras, sendo 50 isoladas de fômites, 50 isoladas de sangue e 50 isoladas de comunidade. Independente da origem, foram identificadas 14 espécies de Staphylococcus coagulase-negativo, sendo mais frequentes S. epidermidis 42,6%, S. haemolyticus 13,3% e S. cohnii cohnii 10,7%. A análise geral da expressão fenotípica de slime mostrou que 64% das amostras avaliadas eram produtoras de slime. Das 150 amostras testadas neste estudo, 95,3% foram produtoras de biofilme. Ao considerarmos a análise da quantificação do biofilme em relação às origens das amostras estudadas não encontramos diferenças significativas e a maioria das amostras foi considerada moderadamente produtora de biofilme. O gene mecA foi detectado em 6 amostras comunitárias, 34 amostras de fômites e 34 amostras de sangue. Não houve diferença significativa entre as amostras de fômites e sangue. Porém, houve diferença significativa entre as amostras de origem comunitária e as de origem hospitalar - fômites e sangue (p < 0,0001). Ao compararmos as três origens de isolamento quanto a presença do gene atlE observamos que houve diferença significativa (p = 0,0012) entre elas. Sendo, as amostras isoladas de sangue, as que apresentaram maior número de amostras que possuíam o gene atlE (n = 18). Das 150 amostras testadas observamos a presença do gene icaAD em 46% amostras comunitárias, 56% amostras de fômites e 60% amostras de sangue, não encontramos diferença significativa (p = 0,5750). Observamos uma correlação entre a resistência a oxacilina e a produção de slime, pois as amostras de origem hospitalar (fômites e sangue) apresentaram altos níveis de resistência a oxacilina e em sua grande maioria foram produtoras de slime. A espécie S. epidermidis foi a mais isolada e deve-se ressaltar que, quando comparada com as outras espécies, apresentou altos níveis de resistência a oxacilina, sendo a maioria produtora de slime e biofilme. / In recent decades, coagulase-negative Stapphylococci have been considered as true pathogen, one of the major bacterial groups responsible for hospital infection. The present study aimed to: assess the relationship between oxacillin resistance and biofilm production samples coagulase-negative Stapphylococci of community and hospital. In this sense, we have developed the following specific objectives: to identify to species level coagulase-negative Staphylococci; analyze by phenotypic test (Congo red Agar) slime production, evaluate quantitatively the biofilm production; correlate the production of extracellular polysaccharides (slime) with biofilm production; evaluate the relationship of resistance to oxacillin as an indicator of the presence of the mecA gene; evaluate the relationship between minimal inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration for oxacillin; investigate the presence of the mecA gene, atlE and icaAD, by PCR. We studied a total of 150 samples, 50 were isolated from fomites, 50 from community and 50 isolated from blood. Regardless of origin, 14 species of coagulase-negative Stapphylococci were identified , being more frequent 42.6% S.epidermidis, 13.3% S. haemolyticus and 10.7% S. cohnii cohnii. A general analysis of the phenotypic expression of slime showed that 64% of the samples were slime producers. Of the 150 samples tested in this study, 95.3% produced biofilm. When we consider the analysis of quantification of biofilm in relation to the origins of the samples studied we did not find significant differences and most of the samples were considered moderately biofilm producers. The mecA gene was detected in 6 community samples, 34 samples of fomites and 34 blood samples. There was no significant difference between the samples of blood and fomites. However, there was significant differences between the samples from the community and nosocomial - fomites and blood (p <0.0001). Comparing the three origins insulation as the presence of the gene atlE we observed a significant difference (p = 0.0012) between them. Being the isolated blood samples which showed the highest number of samples that had the gene atlE (n = 18). From the 150 tested samples we observed the presence of the gene icaAD 46% in community samples, 56% samples from fomites and 60% of blood samples, we found no significant difference (p = 0.5750). We observed a correlation between oxacillin resistance and slime production, because the nosocomial (fomites and blood) samples showed high levels of resistance to oxacillin and mostly were slime producers. The species S. epidermidis were the most isolated and it should be noted that, compared with other species, it showed high levels of resistance to oxacillin, mostly producing slime and biofilm.

Nas últimas décadas, os Staphylococcus coagulase-negativo, têm sido considerados como patógenos verdadeiros, sendo um dos principais grupos bacterianos responsáveis pelas infecções relacionadas a assistência a saúde (IRAS). O presente estudo teve como objetivo geral: avaliação da relação entre a resistência a oxacilina e a produção de biofilme de amostras Staphylococcus coagulase-negativo de origem comunitária e hospitalar. Neste sentido, foram desenvolvidos os seguintes objetivos específico: identificar ao nível de espécie os Staphylococcus coagulase-negativo; analisar por técnica fenotípica (Ágar vermelho do Congo) a produção de slime; avaliar quantitativamente, a produção de biofilme; correlacionar a produção de polissacarídeos extracelulares (slime) com a produção de biofilme; avaliar a relação da resistência a oxacilina como indicador da presença do gene mecA; avaliar a relação entre a concentração inibitória mínima e a concentração bactericida mínima para oxacilina; pesquisar a presença dos genes mecA, icaAD e atlE, pela técnica de PCR. Foi estudado um total de 150 amostras, sendo 50 isoladas de fômites, 50 isoladas de sangue e 50 isoladas de comunidade. Independente da origem, foram identificadas 14 espécies de Staphylococcus coagulase-negativo, sendo mais frequentes S. epidermidis 42,6%, S. haemolyticus 13,3% e S. cohnii cohnii 10,7%. A análise geral da expressão fenotípica de slime mostrou que 64% das amostras avaliadas eram produtoras de slime. Das 150 amostras testadas neste estudo, 95,3% foram produtoras de biofilme. Ao considerarmos a análise da quantificação do biofilme em relação às origens das amostras estudadas não encontramos diferenças significativas e a maioria das amostras foi considerada moderadamente produtora de biofilme. O gene mecA foi detectado em 6 amostras comunitárias, 34 amostras de fômites e 34 amostras de sangue. Não houve diferença significativa entre as amostras de fômites e sangue. Porém, houve diferença significativa entre as amostras de origem comunitária e as de origem hospitalar - fômites e sangue (p < 0,0001). Ao compararmos as três origens de isolamento quanto a presença do gene atlE observamos que houve diferença significativa (p = 0,0012) entre elas. Sendo, as amostras isoladas de sangue, as que apresentaram maior número de amostras que possuíam o gene atlE (n = 18). Das 150 amostras testadas observamos a presença do gene icaAD em 46% amostras comunitárias, 56% amostras de fômites e 60% amostras de sangue, não encontramos diferença significativa (p = 0,5750). Observamos uma correlação entre a resistência a oxacilina e a produção de slime, pois as amostras de origem hospitalar (fômites e sangue) apresentaram altos níveis de resistência a oxacilina e em sua grande maioria foram produtoras de slime. A espécie S. epidermidis foi a mais isolada e deve-se ressaltar que, quando comparada com as outras espécies, apresentou altos níveis de resistência a oxacilina, sendo a maioria produtora de slime e biofilme. / In recent decades, coagulase-negative Stapphylococci have been considered as true pathogen, one of the major bacterial groups responsible for hospital infection. The present study aimed to: assess the relationship between oxacillin resistance and biofilm production samples coagulase-negative Stapphylococci of community and hospital. In this sense, we have developed the following specific objectives: to identify to species level coagulase-negative Staphylococci; analyze by phenotypic test (Congo red Agar) slime production, evaluate quantitatively the biofilm production; correlate the production of extracellular polysaccharides (slime) with biofilm production; evaluate the relationship of resistance to oxacillin as an indicator of the presence of the mecA gene; evaluate the relationship between minimal inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration for oxacillin; investigate the presence of the mecA gene, atlE and icaAD, by PCR. We studied a total of 150 samples, 50 were isolated from fomites, 50 from community and 50 isolated from blood. Regardless of origin, 14 species of coagulase-negative Stapphylococci were identified , being more frequent 42.6% S.epidermidis, 13.3% S. haemolyticus and 10.7% S. cohnii cohnii. A general analysis of the phenotypic expression of slime showed that 64% of the samples were slime producers. Of the 150 samples tested in this study, 95.3% produced biofilm. When we consider the analysis of quantification of biofilm in relation to the origins of the samples studied we did not find significant differences and most of the samples were considered moderately biofilm producers. The mecA gene was detected in 6 community samples, 34 samples of fomites and 34 blood samples. There was no significant difference between the samples of blood and fomites. However, there was significant differences between the samples from the community and nosocomial - fomites and blood (p <0.0001). Comparing the three origins insulation as the presence of the gene atlE we observed a significant difference (p = 0.0012) between them. Being the isolated blood samples which showed the highest number of samples that had the gene atlE (n = 18). From the 150 tested samples we observed the presence of the gene icaAD 46% in community samples, 56% samples from fomites and 60% of blood samples, we found no significant difference (p = 0.5750). We observed a correlation between oxacillin resistance and slime production, because the nosocomial (fomites and blood) samples showed high levels of resistance to oxacillin and mostly were slime producers. The species S. epidermidis were the most isolated and it should be noted that, compared with other species, it showed high levels of resistance to oxacillin, mostly producing slime and biofilm.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao greyciele.pdf: 888336 bytes, checksum: 01c4c81ad67f9086695cf5933094cc38 (MD5) Previous issue date: 2011-03-01 / Muitas terapias antimicrobianas são usadas para o tratamento das piodermites, inflamação cutânea piogênica associada à infecção bacteriana, sendo o Staphylococcus pseudintermedius a principal espécie envolvida. As infecções estafilocócicas se tornam mais graves quando a cepa envolvida na doença é multirresistente, acarretando dificuldade adicional para o controle de infecções causadas por esse agente. O presente estudo pesquisou a presença de Staphylococcus spp. multirresistentes e verificou o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de isolados de cães sadios e com piodermite. As amostras foram colhidas com suabes estéreis da pele de 50 cães sadios e de 40 cães apresentando quadro clínico de piodermite (não importando a etiologia). Foram realizados cultura bacteriológica do material colhido e isolamento das cepas de Staphylococcus spp. para identificação das espécies de acordo com suas características fenotípicas. Posteriormente, os isolados foram testados quanto ao perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos por meio de antibiograma. Realizou-se ainda, teste fenotípico de resistência à oxacilina e técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de cepas de Staphylococcus spp. multirresistentes, portadoras do gene mecA. A resistência à oxacilina (prova fenotípica e identificação do gene mecA) foi apresentada por 23,6% (17/72) dos isolados e a multirresistência por 29,7% (21/72). As maiores suscetibilidades foram verificadas para os seguintes antimicrobianos: Cefalexina (84,7%); Amoxacilina (75%); Oxacilina (72,2%); Cefoxitina (79,2%). As maiores resistências: Tetraciclina (40,3%); Eritromicina (34,7%); Clindamicina (33,3%); Ciprofloxacina (26,4%); Oxacilina (23,6%); Sulfametazol-trimetoprim (22,2%). Apesar do isolamento de cepas multirresistentes, os resultados indicaram um alto nível de suscetibilidade das mesmas aos antimicrobianos normalmente utilizados no tratamento de infecções estafilocócicas. O isolamento de Staphylococcus spp. resistentes à meticilina (MRS), em espécimes clínicos e sadios, demonstrou que os cães podem atuar como reservatórios e posteriormente disseminarem esses patógenos na comunidade

For many years coagulase negative Staphylococcus (CoNS), skin commensals, were regarded as mere contaminants. However, in recent decades, they emerged as important agents of nosocomial infections, particularly in immunocompromised patients and patients with biomaterials. This is attributed to increasing antimicrobial resistance by these microorganisms, and oxacillin resistance was the main mechanism presented by CoNS. Thus, this study aimed to characterize this resistance, as well as the susceptibility of 160 isolates of CoNS obtained from patients admitted to HUSM, and also compare phenotypic tests used in laboratory detection of oxacillin resistance with genotypic detection of mecA gene, considered the gold standard. The antimicrobial susceptibility tests were performed by the qualitative technique of disk diffusion (CLSI 2009), as well as by semi-quantitative method (MicroScan ®). The phenotypic detection of resistance was performed by using cefoxitin and oxacillin disk. The genotypic identification of mecA gene was performed by PCR. Together with the molecular detection of mecA gene was performed the detection of gene icaD, responsible for biofilm formation. S. epidermidis (62%) was the main species identified among the samples selected for this study, and the prevalent clinical material was blood (38%). Due to the fact that they are skin commensals, an evaluation of clinical significance of the selected samples was performed. It presented that 48% of the isolates were considered more likely to be the etiologic agents of infections. The adult and neonatal ICUs represent prevalent clinical units in isolation of CoNS, with 33% and 29% of the isolates, respectively. Regarding the antimicrobial susceptibility, a high rate of resistance among the isolates was observed. These were grouped into seven prevalent susceptibility profiles, in which three were characterized by resistance to most of the antimicrobials tested. All strains were susceptible to linezolid, teicoplanin and tigecycline, in total 59 isolates (36.8%). All isolates were susceptible to vancomycin. Through the results of phenotypic tests, 89% and 94% of the isolates were characterized as oxacillin resistant by using cefoxitin and oxacillin disks, respectively. The molecular technique revealed that 79% of isolates carried mecA gene. A susceptibility of 96% to cefoxitin disk and 95% to oxacillin disk could be found from the statistical analysis when compared to the gold standard. Biofilm formation was observed in 45% of samples tested, in which S. epidermidis has been identified as prevalent in positive biofilm samples (74%). The phenotypic methods used in this study are equivalent for detecting oxacillin resistance when compared to the gold standard, and the use of oxacillin disk together with cefoxitin disk should be encouraged, since the oxacillin disk can identify other resistance mechanisms not mediated by mecA. In relation to susceptibility of the isolates, there was a high resistance to first-choice antimicrobial used for the treatment of CoNS. / Por muitos anos os Staphylococcus coagulase negativos (SCoN), comensais da pele, foram considerados como simples contaminantes. No entanto, nas últimas décadas, emergiram como importantes agentes de infecções nosocomiais, principalmente em imunocomprometidos e portadores de biomateriais. Isso é atribuído a crescente resistência antimicrobiana apresentada por estes microrganismos, sendo a resistência à oxacilina o principal mecanismos apresentado pelos SCoN. Desta forma, este estudo objetivou caracterizar esta resistência, bem como o perfil de sensibilidade de 160 isolados de SCoN obtidos de pacientes admitidos no HUSM. Além de comparar testes fenotípicos utilizados na detecção laboratorial da resistência à oxacilina com a detecção genotípica do gene mecA, considerado padrão ouro. Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram efetuados pela técnica qualitativa de difusão do disco (CLSI 2009), bem como pelo método semi-quantitativo (MicroScan®). A detecção fenotípica da resistência foi realizada com os discos de cefoxitina e oxacilina. A identificação genotípica do gene mecA foi realizada por PCR. Juntamente a detecção molecular do gene mecA foi realizado a detecção do gene icaD, responsável pela formação de biofilme. S. epidermidis (62%) foi à principal espécie identificada entre as amostras selecionadas para este estudo e sangue, o material clínico prevalente (38%). Devido a serem comensais da pele, foi realizada uma avaliação da significância clínica das amostras selecionadas, de onde evidenciamos que 48% dos isolados foram considerados os prováveis agentes etiológicos das infecções. As UTIs adulto e neonatal representam as unidades clínicas prevalentes no isolamento de SCoN, com 33% e 29% dos isolados, respectivamente. Em relação a sensibilidade aos antimicrobianos observou-se um elevado índice de resistência entre os isolados. Estes foram agrupados em 7 perfis de sensibilidade prevalentes, sendo que 3 caracterizaram-se pela resistência a maioria dos antimicrobianos testados. Todas as cepas foram sensíveis à linezolida, teicoplamina e tigeciclina, totalizando 59 (36,8%). Todos os isolados foram sensíveis à vancomicina. Através dos resultados dos testes fenotípicos, verificou-se que 89% e 94% dos isolados foram caracterizados como resistentes à oxacilina, utilizando os discos de cefoxitina e oxacilina, respectivamente. Pela técnica molecular, 79% dos isolados carreavam o gene mecA. A partir da análise estatística evidenciou-se sensibilidade de 96% para o disco de cefoxitina e de 95% para o disco de oxacilina, quando comparados ao padrão ouro. A formação de biofilme foi evidenciada em 45% das amostras testadas, onde o S. epidermidis foi identificado como prevalente nas amostras biofilme positivas (74%). Os métodos fenotípicos utilizados neste estudo mostrarm-se equivalentes na detecção da resistência à oxacilina quando comparados ao padrão ouro, sendo que o uso do disco de oxacilina em conjunto com o de cefoxitina deve ser encorajado, uma vez que, o disco de oxacilina pode identificar outros mecanismos de resistência não mediados pelo gene mecA. Em relação ao perfil de sensibilidade dos isolados houve grande resistência aos antimicrobianos de primeira escolha usados para o tratamento de SCoN. Palavras-chave: SCoN, resistência, oxacilina, cefoxitina, gene mecA.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaClaudiaOliveira.pdf: 1839747 bytes, checksum: 682694e3fdf66bf0d190f094c4aaa106 (MD5) Previous issue date: 2010-04-15 / Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) has been one of the most prevalent microorganisms that cause hospitals infections worldwide. Several studies show that this microorganism is often found colonizing health professionals. MRSA can cause skin infections from the severe pneumonia, with high resistance to different antimicrobial agents. This study aimed to evaluate morphometric changes in MRSA isolated from the saliva of health professionals, through the use of different concentrations of oxacillin and sodium chloride. The identification of morphological changes was assessed by growing the isolates in the following concentrations of Sodium Chloride and oxacillin: 2&#956;g, 4&#956;g and 6&#956;g and 2%, 4%, 6% and 7.5% and using the means of computerized morphometry. This technique was tested by microscopic computed by employing the software Image J 1.38 (HIH USA). Statistical analysis was performed using the Sigma Stat, version 2.03, and the differences between the groups were compared using the nonparametric Kruskal-Wallis (p <0.05). The 20 MRSA analyzed showed no alterations. The present study showed that Sodium Chloride and oxacilin at concentrations did not alter the development and morphology of MRSA. / Staphylococcus aureus meticilina resistentes (MRSA) têm sido um dos microorganismos causadores de infecções mais prevalentes nos hospitais em todo mundo. Vários estudos demonstram que estes germes são frequentêmente encontrados colonizando profissionais de saúde. MRSA podem causar desde infecções cutâneas a pneumonias graves, apresentando um perfil multirresistente frente aos antimicrobianos. Este estudo teve como objetivo avaliar alterações morfométricas em MRSA isolados da saliva de profissionais de saúde, mediante o emprego de diferentes concentrações de cloreto de sódio e oxacilina. A identificação de alterações morfológicas foi avaliada por meio do cultivo dos isolados nas seguintes concentrações de Cloreto de Sódio e oxacilina: 2&#956;g, 4&#956;g e 6&#956;g e 2%, 4%, 6% e 7,5% e da utilização da técnica de morfometria computadorizada, mediante o emprego do software Image J 1.38 (HIH USA). A análise estatística foi realizada empregando o programa Sigma Stat, versão 2.03, e as diferenças entre os grupos foram comparadas usando o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, (p<0,05). Os 20 MRSA analisados não apresentaram alterações morfológicas. O presente estudo observou que o Cloreto de Sódio e a oxacilina nas concentrações testadas não alteram o desenvolvimento e a morfologia dos MRSA.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lidiane de Castro Soares.pdf: 3621583 bytes, checksum: ed47c1ba184a35cfda362913c8e922a3 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Coagulase-negative staphylococci (SCN) take part of the normal microbiota. Although this bacteria has been considered saprophytic, nowadays there is a concern about its pathogenic potential. Nevertheless, the improvement in SCN identification assays, it continues to be neglected in laboratorial routine of infectious diseases because of the wide range of species. In spite of this, the appropriated identification of the species is necessary in order to differentiate the potential pathogenic agents and to determine its antimicrobial susceptibility pattern. The present study was performed to characterize phenotypically and genotypically the antibiotic resistance profile and virulence factors of coagulase-negative Staphylococcus spp. isolated from milk samples of cows with subclinical mastitis. Staphylococcus xylosus, S. haemolyicus, S. cohnii and S. hominis were the identified species. Antimicrobial susceptibility test yielded a high level of resistance to penicillin and ampicillin. A total of 100 isolates were studied, mecA gene was detected in 4% of isolates, also mecR1 positive. The mecI gene was detected in 47% of isolates. All mec genes (mecA-mecI-mecR1) were detected in only 2 isolates. The production of betalactamases and blaZ gene were detected in 16% of the isolates. From this, only 3 isolates showed all bla genes (blaZ, blaI e blaRI). All bla positive isolates were penicillin and ampicillin resistant and positive to nitrocefin test. The femA gene was not detected in any of the isolates. Concerning to the virulence factors, microplate technique and the congo red agar presented production of slime in 46% and 77% of the isolates, respectively. The icaA and icaD genes were detected in 9% and 10% of isolates, respectively. Hemolysis was detected in 13% of the isolates, 15,4% of total hemolysis and 84,6% partial hemolysis. The hla and hlb genes were not detected in any isolate. The hemolytic synergism was positive in 15 isolates, of these 14 showed no hemolysins. Unable to establish a correlation between phenotypic and genotypic resistance to beta-lactam antibiotics in isolates. / Os estafilococos coagulase-negativos (ECN) fazem parte da microbiota normal da pele e apesar de terem sido considerados sapr?fitas por muito tempo, o seu significado cl?nico como agente etiol?gico tem aumentado com o passar dos anos. No entanto, apesar de todo avan?o nas t?cnicas de identifica??o dos ECN e do conhecimento destes como agentes etiol?gicos em diversos processos infecciosos, estes microrganismos muitas vezes s?o negligenciados na rotina laboratorial. A identifica??o das esp?cies de ECN, embora de dif?cil realiza??o para a maioria dos laborat?rios cl?nicos, ? necess?ria para diferenciar o potencial patog?nico e o perfil de resist?ncia de cada isolado. O presente estudo foi conduzido para caracterizar fenot?pica e genotipicamente o perfil de resist?ncia aos antibi?ticos, especialmente ? oxacilina, e fatores de virul?ncia de isolados de Staphylococcus spp. coagulase-negativos provenientes de amostras de leite de vacas com mastite subcl?nica. Foram identificadas as esp?cies Staphylococcus xylosus, S. haemolyicus, S. cohnii e S. hominis. O teste de suscetibilidade antimicrobiana revelou elevada resist?ncia ? penicilina e ampicilina. Do total de 100 isolados estudados, o gene mecA foi detectado em apenas 4 (4%), os quais tamb?m foram mecR1 positivos. O gene mecI foi detectado em 47% dos isolados. Em 2 isolados foram detectados todos os genes do sistema mec (mecA-mecI-mecR1). A produ??o de beta-lactamases e do gene blaZ foi detectada em 16% dos isolados. Em 3 isolados foram detectados todos os genes do sistema bla (blaZ, blaI e blaRI). Todos os isolados bla positivos foram resistentes a penicilina e ampicilina e positivos no teste do nitrocefin. O gene femA n?o foi detectado em nenhum dos isolados avaliados. Em rela??o aos fatores de virul?ncia, a t?cnica da microplaca e o ?gar contendo vermelho congo revelaram 46% e 77% de isolados produtores de slime , respectivamente. Os genes icaA e icaD foram detectados em 9% e 10% dos isolados, respectivamente. A hem?lise foi detectada em 13% dos isolados, destes 15,4% apresentaram hem?lise total e 84,6% a hem?lise parcial. Os genes hla e hlb n?o foram detectados em nenhum isolado. O sinergismo hemol?tico foi positivo em 15 isolados sendo que destes, 14 n?o apresentaram hemolisinas. N?o foi poss?vel estabelecer uma correla??o entre os testes fenot?picos e genot?picos de resist?ncia aos antibi?ticos beta-lact?micos nos isolados avaliados.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaFC_DISSERT.pdf: 2465662 bytes, checksum: 2528260c5aedc6b5fb63748e3692e16a (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The drug targeting has been the subject of extensive studies in order to develop site-specific treatments that minimize side effects and become more effective anticancer therapy. Despite considerable interest in this class, drugs like antibiotics also have limitations, and have been neglected. Using new pharmaceutical technologies, the use of magnetic vectors appear as promising candidate for drug delivery systems in several studies. Small magnetic particles bound to the drug of interest can be modulated according to the orientation of a magnet outside the body, locating and holding in a specific site. In this work, we propose the use of High Energy Milling (HEM) for synthesis of a magnetic vector with characteristics suitable for biomedical applications by intravenous administration, and for the formation of an oxacillin-carrier complex to obtain a system for treating infections caused by Staphylococcus aureus. The results of the variation of milling time showed that the size and structural properties of the formed material change with increasing milling time, and in 60 hours we found the sample closest to the ideal conditions of the material. The vector-drug system was studied in terms of structural stability and antimicrobial activity after the milling process, which revealed the integrity of the oxacillin molecule and its bactericidal action on cultures of Staphylococcus aureus ATCC / A vetoriza??o de f?rmaco tem sido alvo de exaustivos trabalhos no intuito de desenvolver tratamentos s?tio-espec?ficos que minimizem efeitos adversos e torne mais efetiva a terapia antineopl?sica. Apesar do grande interesse nessa classe, f?rmacos como os antibi?ticos tamb?m apresentam limita??es, e t?m sido negligenciados. Utilizando novas tecnologias farmac?uticas, o emprego de vetores magn?ticos aparece como candidato promissor para sistemas de entrega de f?rmaco em in?meros estudos. As pequenas part?culas magn?ticas ligadas ao f?rmaco de interesse podem ser moduladas de acordo com a orienta??o de um ?m? externo ao corpo, localizado e retendo o ativo no local de interesse. Nesse trabalho n?s propomos a utiliza??o de Moagem de Alta Energia (MAE) para s?ntese do vetor magn?tico com caracter?sticas apropriadas para aplica??es biom?dicas por via de administra??o intravenosa, e para complexa??o do carreador ? Oxacilina para obten??o de um sistema para tratamento de infec??es por Staphylococcus aures. Os resultados da varia??o do tempo de moagem demonstraram que as propriedades estruturais e de tamanho do material formado se alteram com o aumento do tempo de moagem, e dentre os per?odos estudados, 60 horas foi escolhido como o mais pr?ximo das propriedades ideais do material. A complexa??o vetor-f?rmaco foi estudada em termos de estabilidade estrutural e de atividade antimicrobiana ap?s o processo de moagem, que revelaram a integridade da mol?cula de Oxacilina e de sua a??o bactericida sobre culturas de Staphylococcus aures ATCC

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO JULIANA ROSA.pdf: 303226 bytes, checksum: 9585889e11363ca2d5297656fdeae6e5 (MD5) Previous issue date: 2008-04-17 / Coagulase negative staphylococci (CNS) is in human and animal microbiota, but may cause with infections with significant morbidity and mortality rates. Healthy care workers may be carriers of many microorganisms and spread resistant ECN in the hospital. This study aimed to identify the CNS species isolated from healthy care workers saliva, establishe the oxacillin resistance pattern and detect the mecA gene in resistant isolates. We evaluated 100 ECN, isolated from the saliva of an institution of professional health of large Riberão Preto in Sao Paulo state. The ECN identification was based on biochemical tests, and 41 were identified as S. epidermidis, 25 S. saprophyticus, 18 S. haemolyticus, 8 S. cohnii, 4 S. lugdunenses, 3 S. capitis, and 1 S. simulans. Thirty-two percent were nonsusseptible to oxacillin, 84.4% to mupirocin, 43.7% to cefoxitin, but all were vancomycin susceptible. The oxacillin nonsusseptible ECN, detected by disk diffusion test were grown in agar screening oxacillin (6 &#956; g) supplemented with sodium chloride (4.0%) and submited to mecA detection by the PCR. Of the 32 nonsusseptible oxacillin CNS,, 93.7% developed in the oxacillin agar and the mecA gene was detected in 75.0%. This is the first report of mecA gene presence in CNS isolated from the saliva of healthy care workers. Attention must be given to CNS species identification, as well as the characterization of the nonsusceptible microorganisms, since healthy care workers may represent a reservoir of CNS / Estafilococos coagulase negativa (ECN) fazem parte da microbiota autóctone humana e animal, embora possam causar infecções. Profissionais da saúde podem ser portadores de inúmeros microrganismos virulentos entre eles os ECN resistentes a oxacilina que podem ser disseminados por esses profissionais. O estudo teve como objetivo identificar espécies de ECN isolados da saliva de profissionais da saúde, de uma instituição de saúde de grande porte em Riberão Preto no estado de São Paulo, determinar o perfil de resistência à oxacilina e detectar o gene mecA. Foram avaliados 100 ECN, e através de testes bioquímicos 41 estafilococos foram identificados como S. epidermidis, 25 S. saprophyticus, 18 S. haemolyticus, 8 S. cohnii, 4 S. lugdunenses, 3 S. capitis e um S. simulans. Trinta e dois por cento apresentaram resistência in vitro a oxacilina, 84,4% a mupirocina, 43,7% a cefoxitina, e todos suscetíveis a vancomicina. Os ECN resistentes a oxacilina, detectados pelo teste de disco difusão, foram cultivados no agar triagem oxacilina (6µg) suplementado com cloreto de sódio e a detecção do gene mecA foi realizada pela técnica de PCR. Dos 32 ECN resistentes a oxacilina, 93,7% desenvolveram no agar oxacilina e o gene mecA foi detectado em 75,0% das amostras analisadas. Vale ressaltar que este estudo é pioneiro em mostrar a presença do gene mecA em ECN isolados da saliva de profissionais da saúde saudáveis. Uma maior atenção deve ser dada na identificação das espécies de ECN, e na caracterização da resistência desse grupo de microrganismos, uma vez que os profissionais da saúde podem representar um reservatório de ECN resistentes