Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-04-05T19:32:12Z No. of bitstreams: 1 2012 - Gabriela Viana da Silva.pdf: 1385561 bytes, checksum: ebedf6cb2382daee2a3bf246edc9848f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Gabriela Viana da Silva.pdf: 1385561 bytes, checksum: ebedf6cb2382daee2a3bf246edc9848f (MD5) Previous issue date: 2012-03-27 / CAPES / The sheep milk production in Brazil is a relatively new activity, whose production is directed towards the manufacture of cheeses, yogurts and other products. Therewith a deficit of scientific papers related to this activity. Considered an excellent substrate, many pathogens can be transmitted to humans through consumption of milk and its derivatives, including Staphylococcus spp., one of the main agents involved in outbreaks of food poisoning. Moreover, the increasing of antimicrobial resistance is becoming a global public health problem. Within this problematic, this study aimed to identify the species of Staphylococcus and its antimicrobial susceptibility profile of current use in human and veterinary medicine, isolated from milk of sheep origin from rural properties in the Meridional Agreste of Pernambuco. We identified 13 different species, three coagulase-positive and 10 coagulase-negative and two strains identified only as SCN, especially Staphylococcus aureus (29) followed by S. chromogenes (15) and S. intermedius (9) by its frequency. The determination of antimicrobial susceptibility by disk diffusion revealed high rates of resistance to penicillin (53.2%) and ampicillin (45.6%). The susceptibility to oxacillin was evaluated by the disk diffusion methods for oxacillin and cefoxitin, Screen Agar and determination of Minimum Inhibitory Concentration through tests of broth microdilution and agar, the latter two detected resistance in 24% and 6% of isolates, respectively. All isolates were negative for the presence of blaZ and mecA genes and was not observed a correlation between phenotypic and genotypic testing for resistance to beta-lactams. The results show that this species is a source of infection, through its products, Staphylococcus potentially pathogenic to humans. / A produ??o de leite ovino no Brasil ? uma atividade relativamente nova, cuja produ??o est? direcionada para a confec??o de queijos, iogurtes e outros derivados. Com isso h? uma defict de trabalhos cient?ficos ligados a esta atividade. Considerado um excelente substrato, muitos micro-organismos patog?nicos podem ser veiculados ao homem atrav?s do consumo de leite e seus derivados, entre eles Staphylococcus spp., um dos principais agentes envolvidos em surtos de intoxica??es alimentares. Al?m disso, o crescente aumento da resist?ncia aos antimicrobianos vem se constituindo um problema de sa?de p?blica global. Dentro desta problem?tica, o presente estudo objetivou identificar as esp?cies de Staphylococcus e seu perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos de uso corrente em medicina humana e veterin?ria, isoladas de leite de origem ovina provenientes de propriedades rurais no Agreste Meridional de Pernambuco. Foram identificadas 13 esp?cies diferentes, sendo tr?s do grupo Staphylococcus coagulase-positivo e 10 de Staphylococcus coagulase-negativo e duas cepas identificadas apenas como SCN, destacando-se por sua frequ?ncia Staphylococcus aureus (29) seguida pelo S. chromogenes (15) e S. intermedius (9). A determina??o da suscetibilidade aos antimicrobianos pelo teste disco difus?o revelou elevados percentuais de resist?ncia ? penicilina (53,2%) e ampicilina (45,6%). A suscetibilidade a oxacilina foi avaliada atrav?s dos m?todos de disco-difus?o para oxacilina e cefoxitina, Screen Agar e determina??o da Concentra??o Inibit?ria M?nima atrav?s dos testes de Microdilui??o em Caldo e em Agar, tendo estes dois ?ltimos detectado resist?ncia em 24% e 6% dos isolados, respectivamente. Todos os isolados foram negativos para a presen?a dos genes blaZ e mecA, n?o tendo sido observada uma correla??o entre os testes fenot?picos e genot?picos para a resist?ncia aos beta-lact?micos. Os resultados obtidos evidenciam que esta esp?cie animal ? mais uma fonte de infec??o e veiculadora, atrav?s de seus produtos, de Staphylococcus potencialmente patog?nicos para o homem.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-22T13:39:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Mestrado fase final defendido 3 versão digital.pdf: 1373305 bytes, checksum: 2ed41bad53b29893bffe574008593b64 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:39:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Mestrado fase final defendido 3 versão digital.pdf: 1373305 bytes, checksum: 2ed41bad53b29893bffe574008593b64 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPEs / Staphylococcus aureus é um dos microrganismos mais comuns em infecções patogênicas no mundo, tornando-se de grande importância hospitalar e comunitária. Pessoas vivendo com HIV/aids (PVHA) são mais susceptíveis de serem colonizados por Staphylococcus aureus resistente á meticilina (MRSA). S. aureus pode adquirir resistência a antimicrobianos, devido à presença de genes de vários tipos contidos no cassete cromossômico estafilocócico - mec (SCCmec) conferindo resistência a diversos antibióticos. A investigação da colonização por MRSA foi realizada através do isolamento de amostras oriundas de secreção nasal e posteriormente screening de oxacilina combinado a reação de PCR convencional para investigação do gene mecA. Foram entrevistados no estudo 500 PVHA ambulatoriais do hospital terciário. Aproximadamente 95% fazia uso de terapia antirretroviral, sendo que 89,3% destes apresentavam contagem de células CD4 >200 e 73,4% com carga viral ≤100 cópias. A maioria foi do sexo masculino (64,4%), com média etária de 41,5 anos e se declararam de cor parda (54,7%). Exposição a antimicrobianos nos últimos 12 meses foi encontrado em 27,4% dos indivíduos e 25,1% relataram uso de drogas ilícitas ao menos uma vez na vida. Colonização nasal por S. aureus foi encontrada em 31,4% (157/500) da totalidade dos indivíduos estudados, nos quais, 14% (22/157) foram MRSA. A colonização foi maior nos indivíduos acima de 40 anos, entre os que relataram uso de drogas ilícitas ao menos uma vez na vida, nos que não havia registro de exposição prévia a antimicrobianos nos últimos 12 meses, porém, não foi encontrada nenhuma associação de MRSA com as variáveis estudadas. A colonização de MRSA, embora alta, não foi associado com as variáveis estudadas para fator de risco em PVHA. O perfil antimicrobiano mostra alta resistência aos antibióticos mais utilizados para profilaxia e tratamento por infecções bacterianas. Esse estudo pode contribuir para orientar na vigilância e conduta terapêutica entre as PVHA. / Staphylococcus aureus is one of the most common pathogenic microorganisms in infections in the world, making it of great importance hospital and community. People living with HIV/aids (PVHA) are more likely to be colonized with Staphylococcus aureus resistant to methicillin (MRSA). S. aureus may acquire resistance to antibiotics due to the presence of various types of genes contained in the chromosomal staphylococcal cassette - mec (SCCmec) conferring resistance to various antibiotics. The investigation of MRSA colonization was carried out by isolating samples from nasal discharge and subsequently screening oxacillin combined with conventional PCR to investigate the mecA gene. They were interviewed in the study 500 outpatient PVHA tertiary hospital. Approximately 95% made use of antiretroviral therapy, and 89.3% of them had CD4 cell counts> 200 and 73.4% with viral load ≤100 copies. Most were male (64.4%) with a mean age of 41.5 years and declared mulatto (54.7%). antimicrobial exposure in the last 12 months was found in 27.4% of patients and 25.1% reported using illicit drugs at least once in life. nasal colonization by S. aureus was found in 31.4% (157/500) of all subjects studied, in which, 14% (22/157) were MRSA. The colonization was higher in individuals over 40 years among those who reported using illicit drugs at least once in life, in which there was no antimicrobial previous exposure record in the last 12 months, however, it found no MRSA association with the variables studied. Colonization of MRSA, although high, was not associated with the variables for risk factor for PVHA. The antimicrobial profile shows high resistance to antibiotics most commonly used for treatment and prevention of bacterial infections. This study may help guide surveillance and therapeutic management among PVHA.

For many years coagulase negative Staphylococcus (CoNS), skin commensals, were regarded as mere contaminants. However, in recent decades, they emerged as important agents of nosocomial infections, particularly in immunocompromised patients and patients with biomaterials. This is attributed to increasing antimicrobial resistance by these microorganisms, and oxacillin resistance was the main mechanism presented by CoNS. Thus, this study aimed to characterize this resistance, as well as the susceptibility of 160 isolates of CoNS obtained from patients admitted to HUSM, and also compare phenotypic tests used in laboratory detection of oxacillin resistance with genotypic detection of mecA gene, considered the gold standard. The antimicrobial susceptibility tests were performed by the qualitative technique of disk diffusion (CLSI 2009), as well as by semi-quantitative method (MicroScan ®). The phenotypic detection of resistance was performed by using cefoxitin and oxacillin disk. The genotypic identification of mecA gene was performed by PCR. Together with the molecular detection of mecA gene was performed the detection of gene icaD, responsible for biofilm formation. S. epidermidis (62%) was the main species identified among the samples selected for this study, and the prevalent clinical material was blood (38%). Due to the fact that they are skin commensals, an evaluation of clinical significance of the selected samples was performed. It presented that 48% of the isolates were considered more likely to be the etiologic agents of infections. The adult and neonatal ICUs represent prevalent clinical units in isolation of CoNS, with 33% and 29% of the isolates, respectively. Regarding the antimicrobial susceptibility, a high rate of resistance among the isolates was observed. These were grouped into seven prevalent susceptibility profiles, in which three were characterized by resistance to most of the antimicrobials tested. All strains were susceptible to linezolid, teicoplanin and tigecycline, in total 59 isolates (36.8%). All isolates were susceptible to vancomycin. Through the results of phenotypic tests, 89% and 94% of the isolates were characterized as oxacillin resistant by using cefoxitin and oxacillin disks, respectively. The molecular technique revealed that 79% of isolates carried mecA gene. A susceptibility of 96% to cefoxitin disk and 95% to oxacillin disk could be found from the statistical analysis when compared to the gold standard. Biofilm formation was observed in 45% of samples tested, in which S. epidermidis has been identified as prevalent in positive biofilm samples (74%). The phenotypic methods used in this study are equivalent for detecting oxacillin resistance when compared to the gold standard, and the use of oxacillin disk together with cefoxitin disk should be encouraged, since the oxacillin disk can identify other resistance mechanisms not mediated by mecA. In relation to susceptibility of the isolates, there was a high resistance to first-choice antimicrobial used for the treatment of CoNS. / Por muitos anos os Staphylococcus coagulase negativos (SCoN), comensais da pele, foram considerados como simples contaminantes. No entanto, nas últimas décadas, emergiram como importantes agentes de infecções nosocomiais, principalmente em imunocomprometidos e portadores de biomateriais. Isso é atribuído a crescente resistência antimicrobiana apresentada por estes microrganismos, sendo a resistência à oxacilina o principal mecanismos apresentado pelos SCoN. Desta forma, este estudo objetivou caracterizar esta resistência, bem como o perfil de sensibilidade de 160 isolados de SCoN obtidos de pacientes admitidos no HUSM. Além de comparar testes fenotípicos utilizados na detecção laboratorial da resistência à oxacilina com a detecção genotípica do gene mecA, considerado padrão ouro. Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram efetuados pela técnica qualitativa de difusão do disco (CLSI 2009), bem como pelo método semi-quantitativo (MicroScan®). A detecção fenotípica da resistência foi realizada com os discos de cefoxitina e oxacilina. A identificação genotípica do gene mecA foi realizada por PCR. Juntamente a detecção molecular do gene mecA foi realizado a detecção do gene icaD, responsável pela formação de biofilme. S. epidermidis (62%) foi à principal espécie identificada entre as amostras selecionadas para este estudo e sangue, o material clínico prevalente (38%). Devido a serem comensais da pele, foi realizada uma avaliação da significância clínica das amostras selecionadas, de onde evidenciamos que 48% dos isolados foram considerados os prováveis agentes etiológicos das infecções. As UTIs adulto e neonatal representam as unidades clínicas prevalentes no isolamento de SCoN, com 33% e 29% dos isolados, respectivamente. Em relação a sensibilidade aos antimicrobianos observou-se um elevado índice de resistência entre os isolados. Estes foram agrupados em 7 perfis de sensibilidade prevalentes, sendo que 3 caracterizaram-se pela resistência a maioria dos antimicrobianos testados. Todas as cepas foram sensíveis à linezolida, teicoplamina e tigeciclina, totalizando 59 (36,8%). Todos os isolados foram sensíveis à vancomicina. Através dos resultados dos testes fenotípicos, verificou-se que 89% e 94% dos isolados foram caracterizados como resistentes à oxacilina, utilizando os discos de cefoxitina e oxacilina, respectivamente. Pela técnica molecular, 79% dos isolados carreavam o gene mecA. A partir da análise estatística evidenciou-se sensibilidade de 96% para o disco de cefoxitina e de 95% para o disco de oxacilina, quando comparados ao padrão ouro. A formação de biofilme foi evidenciada em 45% das amostras testadas, onde o S. epidermidis foi identificado como prevalente nas amostras biofilme positivas (74%). Os métodos fenotípicos utilizados neste estudo mostrarm-se equivalentes na detecção da resistência à oxacilina quando comparados ao padrão ouro, sendo que o uso do disco de oxacilina em conjunto com o de cefoxitina deve ser encorajado, uma vez que, o disco de oxacilina pode identificar outros mecanismos de resistência não mediados pelo gene mecA. Em relação ao perfil de sensibilidade dos isolados houve grande resistência aos antimicrobianos de primeira escolha usados para o tratamento de SCoN. Palavras-chave: SCoN, resistência, oxacilina, cefoxitina, gene mecA.

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Resumo: Introdução: o isolamento de estafilococos coagulase negativos (ECN) de pacientes em Unidades de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) pode representar, muitas vezes, uma contaminação ao invés de bacteremia. O padrão ouro para o diagnóstico de sepse neonatal é a positividade de duas hemoculturas coletadas num intervalo de 48 horas associada às manifestações clínicas sugestivas de sepse. A resistência aos antimicrobianos e a formação de biofilme são fatores seletivos na persistência de cepas de S. epidermidis e S. haemolyticus. A técnica de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE), altamente discriminatória, é frequentemente usada para a investigação de surtos. A tipagem por Multilocus Sequence Typing (MLST) se tornou o método de escolha no estudo epidemiológico em longo prazo. Objetivos: esse estudo teve como objetivos caracterizar o perfil das infecções de corrente sanguínea por Staphylococcus spp. em RNs internados na UTIN, os fatores de risco para infecção, perfil de virulência e resistência antimicrobiana dos estafilococos isolados, bem como a presença de clones prevalentes na unidade. Resultados: foram isolados 72 Staphylococcus spp. de hemoculturas de 54 recém-nascidos de Março de 2014 a Agosto de 2015. Foram confirmados 37 episódios de Infecção da Corrente Sanguínea (ICS) causados por Staphylococcus spp., sendo 27 associados a espécie S. epidemidis, 3 S. haemolyticus, 2 S. capitis e 5 S. aureus. A maioria dos Recém-nascidos (RNs) possuía extremo baixo peso, nasceu com me... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Abstract Introduction: The isolation of coagulase negative staphylococci (CoNS) of Neonatal Intensive Care Unit (NICU) patients can often represent contamination instead of bacteremia. The golden standard for the diagnosis of sepsis is the positivity of two blood cultures, collected within a 48-hour gap, associated to clinic manifestations suggestive of sepsis. Resistance to antimicrobials and biofilm formation are selective factors to S. epidermidis and S. haemoyticus strains to persist. Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), a highly discriminatory technique, is often used in investigating outbreaks. Multilocus Sequence Typing (MLST) has become the preferred method when it comes long-term epidemiologic studies. Objectives: this research aimed to characterize the profile of infections caused by Staphylococcus spp. at NICU, the virulence profile and antimicrobial resistance of isolated staphylococci, as well as the presence of clusters prevalent in the unit. Results: 72 Staphyloccocus spp. have been isolated from blood cultures taken from 54 newborns from March 2014 to August 2015. Thirty-seven bloodstream infection (BSI) episodes caused by Staphylococcus spp. were confirmed, 27 of which are associated to S. epidemidis, 3 to S. haemolyticus, 2 to S. capitis and 5 to S. aureus. Most newborns presented extremely low weight, were born before the 31st week of pregnancy (72.2%), used catheter and mechanical ventilation. From the 72 samples of Staphylococcus spp. under analysis, ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-02T21:32:55Z No. of bitstreams: 1 RafindradeGanilsonFerreiraDjalo_DISSERT.pdf: 1734967 bytes, checksum: 355949c038a136de532d9f3302a68ed8 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-09T11:31:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RafindradeGanilsonFerreiraDjalo_DISSERT.pdf: 1734967 bytes, checksum: 355949c038a136de532d9f3302a68ed8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-09T11:31:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RafindradeGanilsonFerreiraDjalo_DISSERT.pdf: 1734967 bytes, checksum: 355949c038a136de532d9f3302a68ed8 (MD5) Previous issue date: 2018-04-25 / A espécie bacteriana Staphylococcus aureus é considerada um dos mais importantes patógenos humanos. Uma característica notável dessa espécie é a capacidade de adquirir resistência aos antibióticos, sendo a resistência à meticilina uma das mais significativas. Estudos recentes têm mostrado a presença de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) em certos grupos da população, tais como os pacientes HIV positivos, nos quais foi observado maiores riscos de infecções por esta linhagem. O objetivo deste estudo é determinar a prevalência de MRSA colonizando pacientes HIV positivos atendidos em um hospital de referência em doença infecciosas, na cidade do Natal-RN, Brasil. Para tanto, todos os pacientes HIV positivos em tratamento, no hospital selecionado para o estudo, foram convidados a participar da pesquisa e solicitado à assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE). Realizou-se um estudo transversal e descritivo, em que as amostras biológicas dos participantes foram obtidas através de swabs nasais. Os espécimes obtidos foram semeados no meio de cultivo ágar manitol salgado para o isolamento de S. aureus. As colônias sugestivas dessa espécie foram submetidas a testes laboratoriais de identificação como coloração de Gram, susceptibilidade à bacitracina e as provas da catalase e coagulase livre. A identificação de MRSA foi realizada através da técnica de disco-difusão, utilizando como marcador, o disco de cefoxitina, conforme recomendado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 2017. A mesma técnica foi utilizada para avaliar a susceptibilidade a outros antimicrobianos. Foi realizada ainda a detecção dos genes mecA e lukF através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As informações relativas à condição clínica dos participantes foram obtidas mediante entrevista, realizada por meio de um questionário contendo 16 perguntas. Dos 400 pacientes que participaram do estudo, 129 (32,2%) estavam colonizados por S. aureus. Destes, nove (2,2%) eram MRSA, confirmados pela presença do gene mecA. Quanto ao gene lukF, apenas cinco abrigavam esse gene. A maioria dos MRSA apresentou sensibilidade à maioria dos antibióticos testados. No entanto, três amostras apresentaram resistência a mais de duas classes dos antimicrobianos. Não foi encontrada nenhuma associação entre a colonização por S. aureus, incluindo a linhagem MRSA e os fatores relacionados aos indivíduos estudados. Contudo, a presença da linhagem MRSA, reconhecida pela sua virulência e facilidade em adquirir mecanismos de resistência aos antimicrobianos, colonizando pacientes que apresenta maior vulnerabilidade a infecções pode representar um fator de risco para esse segmento da população. / The bacterial species Staphylococcus aureus is considered one of the most important human pathogens. And, a notable feature of this species is the ability to acquire resistance to antibiotics, with methicillin resistance being one of the most significant. Recent studies have shown the presence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in certain population groups, such as HIV-positive patients, in whom increased risk of infection by this strain has been observed. The objective of the study is to determine the prevalence of MRSA colonizing HIV positive patients treated at a referral hospital in the city of Natal-RN and to relate the presence of MRSA with factors associated with the clinical condition of the individuals. To that end, all HIV-positive patients being treated at the hospital selected for the study were invited to participate in the study and asked to be enrolled in the ICF. A crosssectional and descriptive study was carried out, in which the biological samples of the participants were obtained through nasal swabs. These were seeded in the salted mannitol agar medium for the isolation of S. aureus. The colonies suggestive of this species were submitted to laboratory tests of identification as Gram staining, susceptibility to bacitracin and the tests of catalase and free coagulase. The identification of the S. aureus strain resistant to methicillin (MRSA) was performed using the disk-diffusion technique, using as a marker the cefoxitin disc as recommended by the CLSI 2017. The same technique was used to evaluate the susceptibility to other antimicrobials. Detection of mecA and lukF genes through Polymerase Chain Reaction (PCR) was also performed. The information regarding the clinical condition of the participants was obtained through an interview, consisting of 16 questions. Of the 400 patients who participated in the study, 129 (32.2%) were colonized by S. aureus. Of these, nine (2.2%) were MRSA, confirmed by the presence of the mecA gene. As for the lukF gene, only five harbored this gene. Most MRSA showed sensitivity to most of the antibiotics tested. However, three samples showed resistance to more than two classes of antimicrobials. No association was found between S. aureus colonization, including the MRSA lineage and the factors related to the individuals studied. However, the presence of MRSA lineage, recognized for its virulence and ease in acquiring mechanisms of antimicrobial resistance, colonizing patients that presents greater vulnerability to infections may represent a risk factor for this segment of the population.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-22T12:04:28Z No. of bitstreams: 1 fernandafernandesdossantos.pdf: 1359737 bytes, checksum: adaeb451590b863f3a59b02724e66c15 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T13:59:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandafernandesdossantos.pdf: 1359737 bytes, checksum: adaeb451590b863f3a59b02724e66c15 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T13:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandafernandesdossantos.pdf: 1359737 bytes, checksum: adaeb451590b863f3a59b02724e66c15 (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Entre os principais patógenos causadores da mastite bovina estão as bactérias do gênero Staphylococcus. Nas últimas décadas, a resistência à oxacilina (meticilina) neste gênero tem sido motivo de preocupação, pela possibilidade de redução da efetividade dos tratamentos da mastite, e pela possibilidade de transferência de determinantes de resistência de uma bactéria para outra. A resistência à oxacilina é mediada pela proteína PBP 2a, codificada pelo gene mecA, que confere resistência a todos os antibióticos β-lactâmicos, inclusive às cefalosporinas e carbapenemas. O gene mecA faz parte de uma ilha genômica chamada staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec), que pode incluir também outros genes de resistência. Neste trabalho, a resistência à oxacilina foi avaliada em 170 bactérias do gênero Staphylococcus isoladas de mastite subclínica, sendo 79 S. aureus e 91 Staphylococcus spp. coagulase-negativos (STACN). As bactérias foram provenientes de seis estados brasileiros, sendo quatro de Minas Gerais, 27 do Paraná, três de Pernambuco, onze do Rio Grande do Sul, 56 de Santa Catarina e 69 de São Paulo. O perfil de susceptibilidade a dez antimicrobianos utilizados na prática veterinária foi determinado pelo método E-TEST®. A caracterização fenotípica da resistência à oxacilina foi realizada através do teste de difusão com discos de oxacilina e cefoxetina, teste de diluição em ágar com oxacilina e E-TEST® com oxacilina. Em todas as amostras foi pesquisado, por PCR, o gene mecA, empregando dois pares de oligonucleotídeos iniciadores que amplificam regiões diferentes do gene. As bactérias com fenótipo de resistência à oxacilina foram identificadas através do sequenciamento de um fragmento de 536 pb do rRNA 16S. Neste grupo foi pesquisado ainda o gene mecC e o gene blaZ, que codifica para a enzima β-lactamase. Os produtos de PCR foram sequenciados para confirmação dos resultados. Foi feita a análise molecular dos genes mecA por meio da tipagem do cassete cromossômico estafilocócico mec (SCCmec) e das amostras mecA positivas através da macrorrestrição do DNA cromossômico seguida de eletroforese em campo pulsado (PFGE). Com exceção da penicilina e da oxacilina, mais de 86% das estirpes de estafilococos apresentaram susceptibilidade à cefalotina, gentamicina, clindamicina, eritromicina, enrofloxacina, sulfonamida, sulfametoxazol + trimetoprima e tetraciclina. Todas as estirpes de S. aureus foram susceptíveis à oxacilina, enquanto 29,7% das estirpes de STACN foram resistentes. STACN foram mais resistentes do que S. aureus à cefalotina e à eritromicina (p ≤ 0,01) e à gentamicina, clindamicina, e tetraciclina (p ≤ 0,05). A susceptibilidade das amostras S. aureus e de STACN foi semelhante para penicilina, enrofloxacina, sulfonamida e sulfametoxazol + trimetoprima. O teste de difusão em ágar com disco de cefoxetina apresentou maior sensibilidade e especificidade quanto à presença do gene mecA. Do total de amostras estudadas, 31 STACN foram fenotipicamente resistentes à oxacilina em pelo menos um dos testes realizados, e somente em dez foi detectado o gene mecA. As bactérias mecA positivas foram identificadas como S. epidermidis e classificadas em três pulsotipos (A, B e C) e quatro subtipos (A1, B1, B2 e B3). Entre as amostras com fenótipo de resistência à oxacilina 16 foram positivas para o gene blaZ, sendo sete mecA negativas e nove mecA positivas. Nenhuma das amostras analisadas amplificou o gene mecC e duas amplificaram o gene mecA-like de S. sciuri. Foram encontrados três tipos de SCCmec, os tipos I, IV e V. Os resultados sugerem que S. epidermidis pode ser um reservatório da resistência à oxacilina para outras espécies de estafilococos, tanto do homem quanto de animais. Estudos que gerem informações sobre o perfil fenotípico e molecular da resistência aos antimicrobianos em espécies de estafilococos devem ser realizados para o controle da disseminação da resistência e para que medidas terapêuticas sejam escolhidas adequadamente. / Among the major pathogens of bovine mastitis are bacteria of the genus Staphylococcus. In recent decades, resistance to oxacillin (methicillin) in this genus has been a matter of concern for the possibility of reducing the effectiveness of mastitis treatments, and transferring of resistance determinants. The oxacillin resistance is mediated by PBP 2a protein, encoded by the mecA gene, which confers resistance to all β-lactam antibiotics, including cephalosporins and carbapenems. The mecA gene is part of a genomic island called staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec), which may also include other resistance genes. Oxacillin resistance was studied in 170 Staphylococcus isolated from subclinical mastitis, 79 S. aureus and 91 coagulase-negative staphylococci (CNS). The bacterial strains were isolated from six Brazilian states; four from Minas Gerais, 27 from Paraná, three from Pernambuco, eleven from Rio Grande do Sul, 56 from Santa Catarina and 69 from São Paulo. The susceptibility profile to ten antimicrobial agents used in the veterinary practice was determined by E-TEST® method. Phenotypic characterization of oxacillin resistance was performed by disk diffusion test with oxacillin and cefoxitin, agar dilution test with oxacillin and E-TEST® with oxacillin. All strains were screened by PCR to detect mecA gene using two pairs of primers amplifying different regions of the gene. The strains with oxacillin resistance phenotype were identified by sequencing a 536 bp fragment of 16S rRNA gene. This group was also evaluated for the presence of the gene mecC and blaZ, which encodes for the enzyme β-lactamase. The PCR products were sequenced to confirm the results. Molecular analysis of mecA gene was carried out by the typing of staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) and the mecA-positive strains by macrorestriction of chromosomal DNA followed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). With the exception of penicillin and oxacillin, more than 86% of the strains presented susceptibility to cephalothin, gentamicin, clindamycin, erythromycin, enrofloxacin, sulfonamide, trimethoprim-sulfamethoxazole and tetracycline. All S. aureus strains were sensitive to oxacillin, while 29.7% of the CNS strains were resistant. The CNS were more resistant than S. aureus to cephalothin and erythromycin (p ≤ 0.01) and gentamicin, clindamycin, and tetracycline (p ≤ 0.05). The agar diffusion test with cefoxitin disc showed higher sensitivity and specificity for the presence of the mecA gene. Considering the total strains studied, 31 CNS were phenotypically resistant to oxacillin in at least one of the tests, and only in ten CNS was detected the mecA gene. mecA-positives bacteria were identified as Staphylococcus epidermidis and classified into three pulsotypes (A, B and C) and four subtypes (A1, B1, B2 and B3). Among strains with oxacillin resistance phenotype, 16 were positive for blaZ gene, seven mecA-negatives and nine mecA-positive strains. Two of the oxacillin resistant strains amplified mecA-like gene of S. sciuri and none amplified mecC. Three SCCmec types were found, types I, IV and V. The results suggest that S. epidermidis can be a reservoir of oxacillin resistance to other species of staphylococci, both of human and animals. Studies that generate information about the molecular and phenotypic profile of antimicrobial resistance in staphylococcal species should be performed for controlling the spread of resistance and selection of appropriate therapeutic measures.

The usage of welding in the process of manufacturing has become very widespread, mainly due to its low cost, versatility and the possibility of its automation. With its expansion comes higher demand for the possibilities of weld evaluation during the phase of design. Nowadays its possible to use tools based on finite element method for such evaluation. But the most commonly used tools are often very expensive. Therefore, the possibility of using Open-Source tool such as Salome-Meca to simulate the welding process as an alternative to commercial software was investigated. The first part of the work deals with the welding process and a description of the formation of residual stresses and deformations. It also deals with the description of the Salome-Meca software environment and the Code-Aster solver. In the next part the capabilities of the software in relation to problem of welding simulation are discussed. Furthermore, the goemetry of solved weldment, welding conditions, material properties and boundary conditions of the calculation are described. And finally, the individual solutions, their results and disadvantages of used approaches.

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Multiple antibiotic resistant Staphylococcus aureus represent a big problem in the control of hospital infections. Resistance pattern of isolated S. aureus presented in central vascular catheter of patients interned in the Intensive Therapy Center of the School Hospital of the Universidade Federal do Triângulo Mineiro was evaluated by antimicrobial tests, in which it was possible to detect high level of resistance to penicillin (94.7%) and ampicillin (86.8%), only considering the samples that presented resistance, beyond one strain that presented resistance to vancomycin. The oxacillin resistance evaluation was confirmed by PCR with the presence of the gene mecA. The association of the results obtained in the phenotypic test with the presence of the gene mecA, considered the reference method, was confirmed through the Table of Contingency and the Test of Χ2 with Yates correction. In 49 isolates evaluated, 23 were resistant to oxacillin, being possible to detect the mecA gene in 21 samples. The test of molecular screening by RAPD allowed the separation of the phenotypic groups in two different grouping patterns, the ones that presented resistance to antimicrobials and the sensible ones, with a dissimilarity of 73,3%. There is a higher genetic similarity between groups that present the same type of resistance, thus confirming the phenotypic analyses. Molecular markers for detection of resistance to oxacillin, like the gene mecA, were more sensitive than the phenotypic markers. / Staphylococcus aureus resistentes a múltiplos antibióticos representam um grande problema no controle das infecções hospitalares. O perfil de resistência a antimicrobianos de isolados de S. aureus presentes em cateteres vasculares central de pacientes internados em leitos do centro de terapia intensiva do Hospital Escola da Universidade Federal do Triângulo Mineiro foi avaliado por meio de testes antimicrobianos, pelos quais foi possível detectar um elevado nível de resistência à penicilina (94,7%) e ampicilina (86,8%), considerando-se somente as amostras que possuíam resistência, além de uma cepa resistente à vancomicina. A avaliação da resistência à oxacilina foi confirmada por PCR através da presença do gene mecA. A associação dos resultados obtidos no teste fenotípico com a presença do gene mecA, considerado um método de referência, foi confirmada através da Tabela de Contingência e do Teste de Χ2 com correção de Yates. Em 49 amostras avaliadas, 23 apresentaram resistência à oxacilina, sendo possível detectar a presença do gene de resistência mecA em 21 amostras. O teste de tipagem molecular por RAPD permitiu a separação dos grupos fenotípicos em dois padrões diferentes de agrupamento, os que possuíam resistência e os sensíveis aos antimicrobianos, com uma dissimilaridade de 73,3%. Há maior similaridade genética entre grupos que apresentam o mesmo tipo de resistência, confirmando assim as análises fenotípicas. Marcadores moleculares para detecção de resistência à oxacilina, como o gene mecA, foram mais sensíveis que os marcadores fenotípicos. / Mestre em Genética e Bioquímica

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO JULIANA ROSA.pdf: 303226 bytes, checksum: 9585889e11363ca2d5297656fdeae6e5 (MD5) Previous issue date: 2008-04-17 / Coagulase negative staphylococci (CNS) is in human and animal microbiota, but may cause with infections with significant morbidity and mortality rates. Healthy care workers may be carriers of many microorganisms and spread resistant ECN in the hospital. This study aimed to identify the CNS species isolated from healthy care workers saliva, establishe the oxacillin resistance pattern and detect the mecA gene in resistant isolates. We evaluated 100 ECN, isolated from the saliva of an institution of professional health of large Riberão Preto in Sao Paulo state. The ECN identification was based on biochemical tests, and 41 were identified as S. epidermidis, 25 S. saprophyticus, 18 S. haemolyticus, 8 S. cohnii, 4 S. lugdunenses, 3 S. capitis, and 1 S. simulans. Thirty-two percent were nonsusseptible to oxacillin, 84.4% to mupirocin, 43.7% to cefoxitin, but all were vancomycin susceptible. The oxacillin nonsusseptible ECN, detected by disk diffusion test were grown in agar screening oxacillin (6 μ g) supplemented with sodium chloride (4.0%) and submited to mecA detection by the PCR. Of the 32 nonsusseptible oxacillin CNS,, 93.7% developed in the oxacillin agar and the mecA gene was detected in 75.0%. This is the first report of mecA gene presence in CNS isolated from the saliva of healthy care workers. Attention must be given to CNS species identification, as well as the characterization of the nonsusceptible microorganisms, since healthy care workers may represent a reservoir of CNS / Estafilococos coagulase negativa (ECN) fazem parte da microbiota autóctone humana e animal, embora possam causar infecções. Profissionais da saúde podem ser portadores de inúmeros microrganismos virulentos entre eles os ECN resistentes a oxacilina que podem ser disseminados por esses profissionais. O estudo teve como objetivo identificar espécies de ECN isolados da saliva de profissionais da saúde, de uma instituição de saúde de grande porte em Riberão Preto no estado de São Paulo, determinar o perfil de resistência à oxacilina e detectar o gene mecA. Foram avaliados 100 ECN, e através de testes bioquímicos 41 estafilococos foram identificados como S. epidermidis, 25 S. saprophyticus, 18 S. haemolyticus, 8 S. cohnii, 4 S. lugdunenses, 3 S. capitis e um S. simulans. Trinta e dois por cento apresentaram resistência in vitro a oxacilina, 84,4% a mupirocina, 43,7% a cefoxitina, e todos suscetíveis a vancomicina. Os ECN resistentes a oxacilina, detectados pelo teste de disco difusão, foram cultivados no agar triagem oxacilina (6µg) suplementado com cloreto de sódio e a detecção do gene mecA foi realizada pela técnica de PCR. Dos 32 ECN resistentes a oxacilina, 93,7% desenvolveram no agar oxacilina e o gene mecA foi detectado em 75,0% das amostras analisadas. Vale ressaltar que este estudo é pioneiro em mostrar a presença do gene mecA em ECN isolados da saliva de profissionais da saúde saudáveis. Uma maior atenção deve ser dada na identificação das espécies de ECN, e na caracterização da resistência desse grupo de microrganismos, uma vez que os profissionais da saúde podem representar um reservatório de ECN resistentes