A Escherichia coli foi considerada, por muito tempo, um microrganismo nãopatogênico, no entanto com o passar do tempo, alguns sorogrupos começaram a ser associados a diversas patologias no homem e em animais. E. coli é encontrada na microflora normal do trato intestinal das aves e também amplamente distribuída na natureza, necessitando por isso, fazer-se a diferenciação de amostras patogênicas de não-patogênicas e que venha desenvolver doenças. Em aves, amostras de E.coli com a presença de alguns fatores de virulência são denominadas APEC (E.coli patogênica para aves). APEC está associada com infecções extra-intestinais principalmente do trato respiratório ou infecções sistêmicas. Lesões por ela causadas, como agente primário e principalmente secundário, geram prejuízos econômicos decorrentes de menor desenvolvimento corpóreo, pior conversão alimentar, mortalidade embrionária, aumento da mortalidade e custos com medicamentos e condenação de carcaças. É um dos principais problemas da avicultura industrial moderna, devido a grandes prejuízos econômicos causados no mundo inteiro. A celulite aviária é uma forma de infecção também causada pela E.coli e tem extrema importância em função da condenação de aves nos abatedouros devido a lesões cutâneas. A patogenicidade das cepas de E.coli está relacionada com a cumulatividade dos mecanismos de virulência e que podem ser multifatoriais. Seguindo a linha de pesquisa no Programa de Isolamento e Identificação de cepas Patogênicas de Escherichia coli desenvolvida pelo CDPA, este trabalho tem como objetivo otimizar a detecção de genes associados à patogenicidade de amostras de E. coli a partir de isolamento bacteriano através da técnica de Multiplex-PCR (m-PCR), baseado em adaptações do protocolo de PCR para estabelecer o perfil genético de E. coli, associados à classificação de patogenicidade, isoladas de frangos de corte com a utilização de Inteligência Artificial (Redes Neurais Artificiais) desenvolvido por (ROCHA, 2006). As amostras de E.coli oriundas de empresas avícolas do Rio Grande do Sul foram isoladas de quadros respiratórios, camas aviárias e de lesões de celulite. Os fatores de virulência e os genes responsáveis, identificados nesse trabalho foram: capacidade de adesão pela fímbria P (pap C) e fímbria F11 (fel A), a produção de colicinas (cva C), a presença de aerobactina (iut A), presença dos antígenos capsulares K1 e K5 (kpsll), a resistência sérica (iss), hemaglutinina sensível à temperatura (tsh). A detecção de fatores de virulência de amostras de E.coli através do m-PCR produziu a amplificação simultânea dos fragmentos de DNA dos genes propostos em tamanho de pares de base esperado para cada multiplex, através de adequações dos protocolos em 100% dos testes. Os iniciadores foram específicos para amostras que continham os genes elencados já que não houve amplificação nas amostras que serviram como controles negativos. Os resultados obtidos pelo m-PCR desenvolvido nesse experimento, reproduziram os resultados gerados pelos protocolos de PCR de Rocha em 2006, com avantagem de obter o mesmo resultado em menor tempo e com a utilização de menor volume de reagentes determinando uma economia nos insumos do ensaio. Os acréscimos obtidos tornam o método disponível para a avaliação dos atributos de virulência que determinam o potencial de patogenicidade de isolados de E. coli. / The Escherichia coli, was considerate for a long time a non pathogenic microorganism however. As time went by some serogroup started to be associated with several pathologies in humans and animals. E.coli, it is found in the normal bacterial flora of the avian intestinal tract and it is also widely spread in the environment, therefore it is necessary to differentiate the nonpathogenic samples from the pathogenic ones and the ones that can cause diseases. In fowls, E.coli samples with the presence of some virulence factors are called APEC (avian pathogenic Escherichia coli). APEC is associated with extra intestinal infections, mainly in the respiratory tract or systemic infections. Lesions it causes, either as primary or secondary agent, result in economic losses which occur as a consequence of the bird’s poorer growth rate and feed conversion, as well as increased mortality, medication costs and condemnation at the processing plant. It is one of the major problems in the modern aviculture industry, due to the big economic losses in the whole world. The avian cellulitis is a kind of infection also caused by E. coli and has extreme importance in terms of the avian condemnations in the slaughter houses due to the cutaneous lesions. The pathogenicity of the strains of E. coli is related to the cumulativity of the virulence mechanisms and that can be multifactorials. Following the line of research in Isolation Program and Identification of the Pathogenics Strains of the Escherichia coli developed by the CDPA, this work had as aim achieve faster the detection of genes associated with the pathogenicity of the samples of E. coli from on bacterial isolation through the technique of Multiplex – PCR ( m – PCR ), based on the adaptations of the protocol of PCR to restore the genetic profile of the E. coli associated with the classification of the isolated pathogenicity of the chicken flocks with the utilization of Artificial Inteligence (Artificial Neural Nets ) developed by Rocha, (2006). The samples derived from the avian enterprise from the state of RGS were isolated from the respiratory cases, avian beds and from the cellulitis lesions, and the virulence factors and the responsible genes identificated in isolated E. coli samples of the fowls in this work were: adhesion capacity by the fimbriae P (pap C) and fimbriae F 11 (fel A), the colicin production (cva C), the aerobactin presence ( iut A) capsular antigens presence K1 and K5 (kpsll ), the serum resistence (iss), temperature-sensitive hemmaglutin ( tsh ). The detection of the virulence factors of the E. coli samples through the m–PCR produced the simultaneous amplification of the DNA fragments of the genes proposed in the size of the based pairs expected for each multiplex, through protocols adaptations by 100%. The initiators were specified for the samples that contained the chosen genes whereas there was not amplification in the samples that served as negative controllers. The results obtained by the m-PCR developed in that experiment, reproduced the results generated by the PCR protocols developed by Rocha 2006, with the advantage to obtain the same result in less time and with the utilization of lower volume of the reagents determining a saving in the costs of the test. The increases obtained become the method available for the assessment of the virulence attributes that determined the potential of the pathogenecity of the E. coli isolated.

No controle da infecção por Salmonella, a correção de fatores de risco tem sido associada a medidas alternativas como a adição de prebióticos às dietas. O mananoligossacarídeo (MOS) é um carboidrato capaz de adsorver bactérias Gram-negativas que possuem fímbria tipo 1, essencial para a colonização do intestino. O presente estudo teve como objetivo: i. avaliar isolados de Salmonella enterica quanto à presença e expressão de fímbria tipo 1 e adsorção ao MOS; ii. avaliar em suínos o efeito do MOS no índice de infecção e excreção de Salmonella; na microbiota entérica e no título de IgA. Um total de 108 isolados de Salmonella, foi avaliado quanto à amplificação dos genes fimA e fimH, hemaglutinação manose-sensível e adsorção ao MOS. Em todos os isolados ambos os genes foram amplificados, 31 expressaram fímbria tipo 1 e, desses, 74,2% adsorveram fortemente ao MOS. Após, 23 suínos desmamados, alocados em grupo tratamento (com MOS) e controle, foram inoculados, com um isolado de S. Typhimurium capaz de adsorver ao MOS, e acompanhados por 28 dias. A quantidade de Salmonella excretada pelos suínos foi baixa, apresentando tendência de menores medianas no grupo tratamento. Não houve diferença significativa no número de infectados nem nas densidades óticas do ELISA IgG e IgA. As amostras de tonsila apresentaram o maior número de isolamentos. Contagens similares de lactobacilos, enterococos e coliformes foram encontradas nos dois grupos. Concluiu-se que a adição de MOS não impediu a infecção dos suínos por Salmonella, porém houve uma tendência de menor excreção no grupo tratado. / In the control of Salmonella infection, correction of risk factors has been associated with alternative measures such as the addition of prebiotics to diets. Mannanoligosaccharide (MOS) is a complex carbohydrate, able to adsorb Gram-negative bacteria that possess type-1 fimbriae, essential for colonization of the intestine. This study aimed to: i, evaluate isolates of Salmonella enterica, the presence and expression of type-1 fimbriae, and agglutination with MOS; and ii, evaluate in pigs the effect of MOS on the rate of infection and excretion of Salmonella, and enteric microbiota and Salmonella IgA titers. A total of 108 strains of Salmonella sp. isolated from carrier pigs were evaluated for the amplification of fimA and fimH genes, agglutination with MOS and hemagglutination. In all strains tested, amplicons of the expected size were detected, 31 expressing type-1 fimbriae; and of these, 74.2% showed a strong agglutination to MOS. A total of 23 weaned pigs were allotted to a treatment group (with MOS) and a control group, were inoculated with a strain of S. Typhimurium able to adsorb to the MOS, and were evaluated for 28 days. The amount of Salmonella excreted by the pigs was low, showing a trend toward a lower median in the treated group. The ELISA IgG and IgA optical density of both groups showed no significant difference. In our study, the tonsils contributed to the highest rate of Salmonella isolation. The medians of coliforms, enterococci and lactobacilli were similar throughout the experiment in both groups. It was concluded that the addition of MOS did not affect the infection of pigs by Salmonella, although the excretion rate was lower in the treated group.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6499_1.pdf: 2052434 bytes, checksum: 0d0ed4c819168b93a4f1be887b9da045 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Metarhizium anisopliae é um patógeno de insetos economicamente importante usado em todo o mundo no controle biológico de insetos-praga. Porém, sua utlização é limitada devido ao tempo de mortalidade ser relativamente alto quando comparado aos inseticidas químicos. A análise das expressões de genes envolvidos na virulência é um passo importante na identificação de métodos para aumentar a sua eficácia. Neste trabalho foi investigado pela técnica de RT-qPCR o nível de expressão relativa do gene cag8 (regulador da sinalização da proteína G) e do nrr1 (regulador da resposta ao nitrogênio) durante a germinação, conidiogenese e em diferentes fases de patogênese de M. anisopliae var. anisopliae e de M. anisopliae var. acridum. A expressão relativa do gene pr1A (codificador da protease subtilisina) foi analisado em M. anisopliae var. anisopliae e em M. anisopliae var. acrdum durante o crescimento em diferentes meios de cultura e durante a patogênese. Em ambas as variedades, o gene cag8 foi reprimido durante a germinação e induzido durante a conidiogenese e patogênese, o gene nrr1 apresentou-se constitutivamente expresso durante a germinação, conidiogenese e patogênese e o gene pr1A foi induzido nos diferentes meios de cultura e induzido e reprimido durante as fases de patogênese. Considerando as diferenças entre as duas variedades, M. anisopliae var. anisopliae apresentou maior expressão em todos os genes analisados durante a patogênese, isso pode justificar o fato dessa linhagem ter apresentado maior potencial para o controle de Diatraea saccharalis no teste de patogenicidade demonstrando que M. anisopliae pode apresentar variações na ativação de genes ligados à virulência para determinados ambientes e hospedeiros

Orientador: Anete Pereira de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T01:20:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schneider_DilaineRoseSilva_D.pdf: 11263694 bytes, checksum: 808a3a965f6f47fb9c2108a4c971b122 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A brusone do arroz (rice blast disease) causada pelo ascomiceto fitopatógeno Magnaporthe grisea continua a ter um enorme impacto nas culturas de arroz (Oryza sativa) no Brasil e no mundo. PWL2, uma proteína efetora, é um conhecido produto de um gene AVR (avirulência). O gene PWL2 impede que o fungo infecte weeping lovegrass (Eragrostis curvula). Neste trabalho nós identificamos em uma linhagem de M. grisea um gene que produz uma proteína diferente de PWL2, denominada PWL2D. A seqüência do gene PWL2D tem duas bases que diferem do gene PWL2, as quais produzem alterações nos resíduos de 90 e 142 da proteína. A alteração do resíduo 90 (de D90 para N90) é fundamental para a avirulência. Neste trabalho foram efetuadas a clonagem do gene PWL2D no vetor pET32-Xa/LIC, a expressão em Escherichia coli e a avaliação da estrutura de PWL2D por técnicas espectroscópicas. A proteína PWL2D fusionada à cauda TRX é propensa a agregação, e sua solubilidade é melhorada quando super-expressa sem o seu peptídeo-sinal original. Os resultados estruturais obtidos indicam que a proteína PWL2D possivelmente é intrinsecamente desordenada. Foi elaborado um modelo para a resistência/susceptibilidade do hospedeiro à M. grisea considerando a atuação de PWL2D como uma proteína intrinsecamente desordenada. Os resultados obtidos deverão facilitar a análise estrutural de PWL2D e podem contribuir para a compreensão da função do gene nas interações fungo / planta. Oito diferentes genes de M. grisea, além de PWL2D, foram também estudados neste trabalho. Dentre estes, destacam-se o gene que produz a xilanase XYL5 e seu domínio catalítico, o gene que codifica a chaperona ABC1 e seus dois domínios funcionais, e o gene que codifica a trealase PTH9, sendo todos estes relacionados à patogenicidade do fungo M. grisea. A xilanase XYL5 (EC 3.2.1.8) e seu domínio catalítico conservado (XYL5/DOM) foram fusionados à Maltose Binding Protein (MBP) ou à tiorredoxina (TRX) e expressas em E. coli. A produção de proteína solúvel e ativa foi influenciada pelo tipo de fusão. Os extratos solúveis contendo as proteínas de fusão MBP-XYL5 e MBP-XYL5/DOM apresentaram atividade xilanolítica em relação ao controle. Entretanto, durante o processo de purificação, a atividade foi perdida. Assim, obteve-se pela primeira vez o gene de patogenicidade XYL5 de M. grisea expresso com sucesso em E. coli e sua atividade enzimática xilanolítica foi demonstrada. Não foi possível expressar a chaperona ABC1 na forma solúvel nos sistemas de expressão utilizados, e a sequência gênica referente à trealase PTH9 - por mostrar a presença de introns após o seqüenciamento do gene amplificado na linhagem de M. grisea em estudo, mostrou-se inadequado para a sua expressão protéica no sistema de expressão procariótico utilizado durante a realização deste trabalho / Abstract: The rice blast disease caused by the ascomycete phytopathogen Magnaporthe grisea continues to have a huge impact on crops of rice (Oryza sativa) in Brazil and worldwide. PWL2, an effector protein, is a product of an AVR (avirulence) gene . The gene PWL2 prevents fungus from infecting weeping lovegrass (Eragrostis curvula). In this work we identified in a strain of M. grisea a gene that produces a protein different from PWL2, called PWL2D. The gene sequence PWL2D has two bases that differ from PWL2 gene, which produce changes in residues 90 and 142 of the protein. The change of residue 90 (from D90 to N90) is critical to avirulence. In this work it was realized the cloning of the gene in the vector PWL2D pET32-Xa/LIC, the expression in Escherichia coli and the assessment of PWL2D structure by spectroscopic techniques. The protein fused to the tag PWL2D TRX is prone to aggregation, and its solubility is improved when overexpressed without its original signal peptide. The structural results obtained indicate that possibly the protein PWL2D is intrinsically disordered. A model for the resistance/susceptibility of the host to M. grisea was developed considering the performance of PWL2D as an intrinsically disordered protein. The results should facilitate structural analysis of PWL2D and may contribute to the understanding of gene function in the interactions fungus/plant. Eight different genes of M. grisea, besides PWL2D, were also studied in this work. Among these, stands out the gene that produces xylanase XYL5 and its catalytic domain, the gene that codify the chaperone ABC1 and its two functional domains, and the gene that codify the trehalase PTH9, all them being related to the pathogenicity of the fungus M. grisea. The xylanase XYL5 (EC 3.2.1.8) and its retained catalytic domain (XYL5/DOM) were fused to the solubilizing proteins (MBP) or thioredoxin (TRX) and expressed into E. coli. The production of soluble and active protein was influenced by the type of fusion. The soluble extracts containing the fusion proteins MBP- XYL5 and MBP-XYL5/DOM showed xylanolytic activity compared to the control. However, during the purification process, the activity was lost. Thus, we obtained for the first time the gene pathogenicity XYL5 M. grisea expressed successfully in E. coli and its enzymatic xylanolytic activity was demonstrated. It was not possible to express the chaperone ABC1 in soluble form in the expression systems used, and the gene sequence related to trehalase PTH9 - by showing the presence of introns after the sequencing of the gene amplified in the strain of M. grisea under study, rendered inadequate for its protein expression in the prokaryotic system used during the realization of this work / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Urara Kawazoe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:56:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinola_TalineBueno_M.pdf: 812699 bytes, checksum: 060ac3635a386505de2cf212ec4c9a59 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Este estudo teve como objetivos obter o isolado precoce de Eimeria maxima "Ca" e posterior estudo comparativo da patogenicidade entre as aves (Gallus gallus) inoculadas com isolados: parental e precoce, com os seguintes critérios de avaliação: ganho de peso corporal, escore de lesão da mucosa intestinal e contagem de oocistos produzidos pelas aves infectadas. Para a obtenção do isolado precoce foram inoculados sucessivamente em aves sadias, os primeiros oocistos eliminados, a partir da geração parental. Os oocistos contidos nas fezes foram isolados e cultivados em solução de dicromato de potássio 2% para a esporulação. Através deste processo foram realizadas 25 passagens dos primeiros oocistos nas aves até a estabilização do período prépatente. Foi obtida uma redução de 36 horas na eliminação dos primeiros oocistos, de 124h30min para 88h30min. Os isolados parental e precoce foram comparados quanto a patogenicidade, através da inoculação de doses específicas em aves sadias. Nesse estudo foram utilizadas 75 aves distribuídas em cinco grupos: I e II para a produção de oocistos, III e IV para ganho de peso e escore de lesão e grupo V como controle negativo (aves sadias). Houve uma diminuição significativa da patogenicidade em aves infectadas com o isolado precoce quando comparadas a aves inoculadas com a geração parental. As aves infectadas com o isolado precoce obtiveram uma média de escore de lesão da mucosa do intestino estatisticamente inferior à parental. O valor médio do escore de lesão obtido pelo isolado precoce foi de 0,77 enquanto que a geração parental 1,67. As aves infectadas com o isolado precoce apresentaram uma redução significativa na produção de oocistos, quando comparadas à respectiva geração parental. Apresentaram, também, ganho de peso estatisticamente superior em relação à geração parental. Este isolado precoce é um excelente candidato à produção e comercialização de uma vacina viva atenuada. No entanto, testes em bateria e no campo sobre imunidade protetora desse isolado precoce devem ser realizados no futuro que poderá caracterizá-lo confiável para o uso comercial como vacina viva atenuada no controle da coccidiose aviária. / Abstract: The aim of this study was to obtain a precocious line of Eimeria maxima, "Ca" strain and the comparative pathogenicity study between precocious line and parental strain. The criteria used for this evaluation was: body weight gain, lesion score of intestinal mucosa and oocyst counting dropped by infected chickens. The precocious line was obtained by successive oral inoculation of parental E. maxima oocysts in chickens. First oocysts eliminated after inoculation were collected, isolated and cultivated in 2% dichromate potassium solution for their sporulation. The pre-patent period of first oocysts elimination diminished and stabilized after 25 passages in chickens. It was obtained a time reduction of 36 hours between precocious line and parental strain: 124h30' for parental strain and 88h30' for precocious line. The comparative evaluation of pathogenicity between precocious line and parental strain were performed using body weight gain, lesion score and oocyst production compared to non - infected chickens in groups of five chickens per cage with three replications. Parental strain infected in chickens showed loss of body weight while in chickens inoculated with precocious line showed weight gain of 75% when compared to non-infected control birds. The lesion score of intestine mucosa was 0.8 for chickens with precocious line and 1.7 for parental strain showing statistically significant difference. The precocious line showed also significant less oocyst production than parental strain in infected chickens. The precocious line of E. maxima obtained in the present study seems a good candidate for live attenuated vaccine against avian coccidiosis although there is a need for complementary study about protective immunity in battery and field tests. / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Trezentos pacientes portadores de colonização intracavitária pulmonar (pelos exames soro lógico e/ou tecidual) foram investigados num período de 10 anos. Os casos foram classificados como: Aspergillus fumigatus (246 casos); Ao niger (21 casos); A. flavus (7 casos); Pseudallescheria boydii (1 caso); colonização fúngica não especificada (21 casos) e colonização actinomicética (4 casos). os grupos A. niger (çasos)e A. fumigatus (controles) foram comparados a respeito de variáveis clínicas e laboratoriais, por serem os mais freqUentes e pela pobreza da literatura sobre A. niger. Esta análise mostrou associações estatisticamente significativas com o A. niger para;sexo masculino (Razão de Chances = 3,28; p <0,05); infecção nosocomial, ocorrendo em hospitais de conservação precária (RC = 150,8; p< 0,001); tuberculose ativa (RC = 8,03; P <0,001); diabete mélito tipo 11 (RC = 10,67; p<O,OOl); e êxito letal (RC = 3,1; p<0,02). Por outro lado, cristais de oxalato de cálcio no escarro e oxalose sitêmica só ocorreram no grupo A.niger. As implicações etiológicas e diagnósticas destes achados sao discutidas, enfatizando o papel do ambiente externo, da oxalose, do acúmulo de ácidos e da tuberculose ativa na etiopatogenia do A. niger. / Three hundred patients with intracavitary pulmonary colonization (by serologic and/or tissue examinations) were analysed during a ten years period. The cases were classified as: Aspergillus fumigatus (246 cases); A. niger (21 cases); A. flavus (7cases); Pseudallescheria boydii (1 case); fungal colonization not especified (21 cases) and actinomycetic colonization (4 cases). Due to their frequency and the scarcity of literature about A. niger, the groups A. niger (cases) and A. fumigatus (controls) were compared with respect to clinical and laboratorial variables. This analysis showed statistically significant associations with A. niger for: male sex (Odds Ratio = 3,28; p< 0,05); nosocomial infection, which occurred.in hospitaIs in poor state of repair (aR = 150.8; p<O,ooU; active tuberculosis (aR = 8,03; p<O,OOl); type 11 diabete mellitus (aR = 10,67; p<O,ooU; and lethal outcome (aR = 3, 1; p < o, 02). On the other hand, calcium oxalate crystals in the sputum and sistemic oxalosis occured only in A. niger group. The etiologic and diagnostic implications of these findings are discussed, with emphasis on the role of the externa 1 environernent, oxalosis, acid acurnulation and ative tuberculosis in the etiopathogenesis of A. niger.

Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T03:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_MarcosHenriquede_M.pdf: 1961086 bytes, checksum: 56f96f9d1cad5160a5c9417fc809b09e (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Salmonella enterica é uma bactéria Gram-negativa classificada em diferentes sorovariedades que podem causar desde gastroenterites a infecções sistêmicas. A sorovariedade Enteritidis é predominante nos casos de salmonelose em humanos, tendo produtos derivados do frango como principal fonte de infecção. Uma forma de se controlar infecções por Enteritidis é através da vacinação de frangos, uma estratégia já utilizada, porém com limitações, pois estas vacinas muitas vezes são inativadas ou possuem origem de atenuação desconhecida. Outra limitação é a falta de estudos específicos para Enteritidis, pois maior parte dos estudos feitos com S. enterica se baseiam na sorovariedade Typhimurium. Um alvo para a construção de linhagens vacinais são os genes codificadores de Nucleoid Associated Proteins que são proteínas que se ligam ao DNA alterando sua topologia, afetando a transcrição global dos genes. Neste projeto realizamos a construção de mutantes nulos de S. enterica Enteritidis para alguns destes genes com a finalidade de avaliar seu potencial vacinal e papel na patogênese. As linhagens foram testadas no modelo de infecção sistêmica e de inflamação do ceco. No modelo de infecção sistêmica, a linhagem selvagem e ?fis se apresentaram virulentas ou pouco atenuadas enquanto as linhagens ?ihfA e ?ihfB foram atenuadas. Os testes de proteção foram feitos com os dois mutantes atenuados que induziram 100% de proteção. A linhagem selvagem e o mutante pouco atenuado induziram inflamação neste modelo, mas o mutante induziu de forma mais amena. Analises morfométricas futuras irão elucidar com mais clareza o papel deste gene na inflamação. Este projeto teve como principais realizações: (i) a construção de duas linhagens atenuadas, com alto potencial para uso vacinal e (ii) abriu novas possibilidades para o estudo nas NAP's durante a patogênese de diferentes sorovariedades / Abstract: enterica is a Gram-negative bacterium classified in different sorovars which may causes gastroenteritis and systemic infections. The serovar Enteritidis is responsible for most of the cases of salmonellosis in humans and have poultry based products as its main source of infection. Poultry vaccination has been and effective strategy to control Enteritidis infections and it's already applied, but with limitations, because the vaccines sometimes are inactivated or are attenuated by unknown mechanisms. Another limitation is the lack of studies especific to Enteritidis, most of the research related to S. enterica is based on serovar Typhimurium. A target to vaccine strains development are the genes members of the group called Nucleoid Associeted Proteins, which are proteins that bind to DNA changing its topology and affecting global gene transcription. In this project, we constructed S. enterica null mutants to some of these genes aiming the evaluation of their vaccine potential and and role in pathogenesis. The strains were tested with the systemic infection model and cecum inflamation. In the systemic infection model, the wild and ?fis strain were virulent while the ?ihfA and ?ihfB were attenuated. The protection essays were made with attenuated mutants and provided 100% of protection. The wild and ?fis strains lead to inflammation in this model, but the mutant induced a mild inflammation, morfometrics analysis will clarify the role of this gene in inflammation. This project have as main outcomes: (i) the construction of strains, ?ihfA and ?ihfB, with good potential to be used as vaccines; (ii) New possibilities to the role of fis gene during inflammation / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

MARTINELLI, Valeria Ferreira. Perfil clínico-epidemiológico e ocorrência de infecção pelo citomegalovírus em pacientes com doença inflamatória intestinal em hospital de referência no Nordeste do Brasil. Recife, 2013. 126 f. Dissertação (mestrado) - UFPE, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde , 2013 / Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-04T13:28:43Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO VALERIA MARTINELLI.pdf: 7098612 bytes, checksum: d8e628a72de08aaff8b086aefbf076b2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T13:28:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO VALERIA MARTINELLI.pdf: 7098612 bytes, checksum: d8e628a72de08aaff8b086aefbf076b2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / A Doença Inflamatória Intestinal (DII) compreende a Retocolite Ulcerativa e a Doença de Crohn. Portadores de DII são considerados de risco para reativação do citomegalovírus (CMV). A relação entre CMV e a DII é complexa e ainda está para ser determinada. Pacientes com doença intensa e/ou refratários ao tratamento com imunossupressores devem ser investigados quanto a infecção pelo CMV. A colite pelo CMV mimetiza o quadro clínico da atividade da DII e o diagnóstico diferencial se faz necessário devido a diferentes abordagens de tratamento. A frequência do CMV como causa de colite nos pacientes com DII varia em função do método utilizado para o diagnóstico e de acordo com o grupo de paciente estudado. O objetivo do presente estudo foi estabelecer a frequência do CMV na DII em hospital de referência no Nordeste do Brasil (artigo original 1), descrever o perfil clínico e epidemiológico destes pacientes (artigo original 2) e realizar uma revisão da literatura sobre a infecção do CMV nos pacientes com DII (artigo de revisão). Para a pesquisa da infecção pelo CMV foi realizado sorologia para CMV, histologia pela hematoxilina-eosina (HE) e imunohistoquímica (IHQ) nos fragmentos da biópsia intestinal. O diagnóstico do CMV foi correlacionado com as diferentes fases de atividade, com a refratariedade ao tratamento e com o uso de medicamentos. Resultados: Infecção por CMV foi diagnosticada pela IHQ em 21,4% de 117 pacientes submetidos à colonoscopia, com positividade em 19% (16/84) para os casos de RCU e de 27% (9/33) para DC. A sorologia e a coloração por HE apresentaram baixa sensibilidade de 12% e 16% respectivamente. O CMV foi encontrado nos portadores de DII em suas diferentes formas clínicas, com predomínio nas formas moderada e intensa, não sendo encontrado na mucosa histologicamente normal. Sorologia positiva para anti-CMV IgG em 106 (90,6%) portadores de DII e em 85(86,8%) casos do grupo controle de doadores de sangue. Na análise do perfil clínico e epidemiológico 220 pacientes com DII foram estudados, 65% apresentavam RCU, 32,7% apresentavam DC e 2,3% colite não classificada (CNC). Predominou na RCU (51,8%) acometimento pancolônico e para os casos de DC acometido do íleo terminal (54,2%), com padrão de doença estenosante e/ou penetrante atingindo 69,5% destes pacientes. Conclusões: Embora o CMV seja considerado marcador de doença grave e causa de refratariedade ao tratamento, também pode ser encontrado nos pacientes com formas leve e inativa da DII. O diagnóstico realizado através da sorologia anti-CMV e histologia apresenta baixa positividade, fazendo necessário uso de técnicas com maior sensibilidade e especificidade. No perfil clínico dos pacientes no ambulatório do hospital estudado, houve uma preponderância das formas mais extensas na RCU e complicadas na DC. Foi observado intervalo diagnóstico demasiadamente longo, o que pode ter contribuído para maior agressividade da doença.

Acompanha memorial / Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T08:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Habib_MohamedEzzEl-DinMostafa_LD.pdf: 6621704 bytes, checksum: f55463be23eb86b925f2eacb9517e66e (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: A patogenicidade de duas variedades de Bacillus tnuringiensis Berliner foi investigada em larvas de Lepi-doptera e Diptera. Através do enfoque patológico no estudo, tentou-se esclarecer alguns aspectos importantes nas áreas de pesquisa, industrialização de patógenos e aplicação de produtos à base de B. thuringiensis no campo. Os sintomas externos pré-mortais foram descritos em larvas de Lepidoptera infectadas por B. thuringiensis var. kurstaki e em larvas de Diptera infectadas por B. thuringien-sis var. israelensis. Algumas alterações histológicas foram detectadas em alguns tecidos de tais larvas, principalmente , no intestino médio, sistema nervoso e musculatura. As alterações observadas nesses tecidos foram relacionadas com o desencadeamento dos sintomas externos da bacteriose. A variedade kurstaki teve ação fatal lenta (2 a 3 dias) nas larvas de Lepidoptera, quando comparada com a ação da variedade israelensis nas larvas aquáticas de Diptera,onde a morte ocorre em poucas horas após a infecção. Nenhum dos lepidópteros estudados pertence o tipo I da classicificação de Heimpel & Angus (1959); pois não ocorreu paralisia geral ou aumento no pH da hemolinfa nas larvas doentes. Entre as larvas dessas espécies, as de Brasso-lis sophorae revelaram-se mais susceptiveis em relação às demais. Por outro lado, as larvas de Spodoptera latifascia e-ram as mais resistentes à mesma variedade kurstaki ( sorotipo H-3a:3b). A origem do patógeno, o hospedeiro do qual este foi isolado e o processamento da produção comercial, além da variedade do bacilo e da espécie do inseto infectado, eram fatores responsáveis pela variação nas respostas das larvas infectadas. A expressão da quantidade do patógeno em termos de Unidades Internacionais de virulência / unidade de peso do inseto tratado revelou-se altamente precisa para comparações de susceptibilidade de insetos e virulência de produtos. 0 uso de critérios de DL50 e CL50 _ mostrou-se muito adequado, e até pode ser recomendado, para estudos com populações de insetos geneticamente menos variáveis. A resposta dos indivíduos, no caso, seria diretamente relacionada com e em função da dose ou a concentração aplicada. 0 uso de TL50 , por outro lado, revelou-se mais funcional e, também, pode ser recomendado para investigações com populações de maior variabilidade genética. Os níveis de susceptibilidade revelados para cada uma das espécies estudadas, indicaram a alta possibilidade de obter resultados satisfatórios no campo, quando produtos comerciais à base da variedade kurstaki forem aplicados contra larvas de B. sophorae , Alabama argillacea e Plodia inter-punctella em jardins e áreas urbanas, lavoura e armazéns respectivamente. A morte iniciou-se, nas larvas aquáticas dos dípteros estudados, apenas poucas horas após a infecção pela variedade israelensis. As larvas de Culex declarator (Culicidae) mostraram-se mais susceptíveis a essa variedade do que as lar vas de simulídeos, quando infectadas com este patógeno. Entre as duas espécies de simulídeos, as larvas de Simulium goeldii eram 4 vezes mais susceptíveis do que as de S. rorotaense. As larvas do último estádio de C. declarator revelaram-se mais susceptíveis ao patógeno do que as dos estádios iniciais. No mesmo tempo, as larvas no início do último estádio (42) eram mais susceptíveis do que no final do mesmo estádio. Este último aspecto, juntamente com a morte rápida causada pelo patógeno ( 2 a 3 horas), devem ser considerados nas recomendações de alguns órgãos oficiais no exterior. Tais órgãos, exigem que o 42 estádio larval de Aedes aegypti seja usado nos bioensaios de padronização de produtos à base da variedade israelensis ; porém, sem estabelecer uma fase desse estádio. A especificidade e a alta virulência da variedade israelensis para larvas aquáticas de Diptera, revelam o seu grande valor como agente promissor no controle microbiano de larvas de Culicidae e Simuliidae. Os sintomas externos observados nas larvas de. C. declarator, as alterações nistológicas e a morte rápida foram suficientemente convenientes para mostrar a ação da S-endo toxina produzida pelo patógeno. Tal toxina deve ter afetado drasticamente o sistema nervoso e a musculatura da larva, dificultando assim a manutenção desta na superfície da água e conseqüentemente a sua respiração do ar atmosférico. Assim , a larva afundada morreu por asfixia. Esses estudos revelaram a presença de um novo campo para investigações de patologia de insetos e controle microbiano para os dípteros aquáticos neotropicais e subtropicais . Tais investigações terão o seu alto valor do ponto de vista humano, desde que várias dessas espécies tem a sua importância como insetos vetores de doenças humanas / Abstract: The pathogenicity of two varieties of Bacillus thuringiensis Berliner was investigated using some lepi-dopterous and dipterous larvae. The aim of the present study was to clarify certain aspects related to the application of insect pathology, such as susceptibility and virulence évalua tions, standardisation criteria, and field applications of microbial products to the control of some harmful insects. The sequence of external symptoms was described in lepidopterous larvae infected with the B. thuringiensis var. kurstaki (syrotype K-3a:3b) and in dipterous larvae infected with the variety israelensis (syrotype H-14)-The histological alterations, in these infected larvae, were described, principally those in the mid-gut, nervous system, and musculature These alterations were found to be directly associated with the different external symptoms of the disease. The progress of the disease up to the death in the lepidopterous larvae lasted longer time (2-3 days) than in dipterous ones (2-3 hours). Type I of Heimpel & Angus (1959) classification did not occur among the lepidopterous species studied, since nei_ ther general paralysis nor pH alterations in the hemolymph were detected. Brassolis sophorae larvae were found to "be the most susceptible to syrotype H-3a:3b, when compared with the other lepidopterous species. On the other hand, Spodoptera lati-fascia larvae were the most resistant. Origin, natural host, and mass production criteria of the pathogen, in addition to its variety and the tested insect species, were the most important factors responsible for the variation in responses of the infected larvae. Therefore, these aspects should be considered to choice the more adequate product for each insect species to be combatted. The quantity of the pathogen expressed in International Units of toxicity per unit of body weight, showed to be highly precise for the comparison of insect susceptibility and pathogen virulence. The LD^Q and LC^0 criteria were found to be suitable and, therefore, can be recommended for investigations where the populations of insects are of low genetic variability. On the other hand, for genetically variable populations, the LT^q was found to be more adequate. B. sophorae, Alabama argillacea and Flodia inter-punctella were found to be highly susceptible to the syrotype H-3a:3b. Therefore, this pathogen can be recommended for their control. The aquatic dipteran larvae, studied in the present work, died some hours after infection with syrotype H-14.Culex declarator (Culicidae) larvae were more susceptible than those .132 . of the simulid species. Within Simuliidae, Simulium goeldii larvae were 4 times more susceptible than the S_. rorotaense ones. The last instar (4th.) larvae of C. declarator were more susceptible than those of the first instars. Moreover, within the same instar, these larvae showed different levels of susceptibility. In the initial phase of the last instar they were more susceptible than in the final phase. These informations, in addition to the rapid fatal action of the toxin in dipteran aquatic larvae, should be considered by the governamental agencies, in establishing standardization criteria for future commercial products based on this variety.At the present, these agencies establish the 4th instar larvae of Aedes aegypti as a test insect for stadardization bio-assays, ignoring the difference in susceptibility within the same instar. Because of the high specificity and virulence of B. thuringiensis var. israelensis for dipteran aquatic larvae, it can be considered as a promissing agent for microbial control of mosquitos and black flies larvae. Considering the mode of action of syrotype H-14 in mosquito larvae, the results led us to beleive that the £-endotoxin liberated in the high alkaline mid-gut affected the ventral nervous system and consequently the musculature , provoking disfunction of the latter.The effect on the muscles made the larva lose its capacity to maintain itself at the water surface. Consequently, the larva submerged and died by asphixiation. The observed sequence of the external symptoms, as well as the histological alterations sustained this hypothesis. The results obtained in the present study reveal the possibility to utilize the syrotype H-14 in the control of vectors of some human diseases, such as malaria and filaria This application, however, requires additional extensive research work to complete urgently needed informations / Tese (livre-docencia) - Univer / Livre-Docente em Ciencias Biologicas

INTRODUÇÃO: Onicomicose, infecção das unhas por fungo é a mais freqüente das doenças ungueais, constituindo aproximadamente metade de todas as alterações ungueais. Pode ser causada por dermatófitos, leveduras ou fungos filamentosos não dermatófitos. OBJETIVO: Caracterizar as onicomicoses causadas por fungos filamentosos não dermatófitos. (1) Verificar, dentre as suspeitas clínicas de onicomicose, qual a freqüência da recuperação de fungos,(2) Verificar, dentre as suspeitas clínicas de onicomicose, quais as espécies de fungos recuperadas, (3) Verificar, dentre o total das espécies identificadas, qual a freqüência das espécies de fungos filamentosos não dermatófitos. MÉTODOS: Duzentos e cinco indivíduos com suspeita clínica de onicomicose foram estudados no período de dezembro de 2003 a novembro de 2004, por meio de exames micológicos diretos e cultura para fungos. RESULTADOS: O diagnóstico de onicomicose foi estabelecido, pelo exame micológico direto, em 170 indivíduos. O diagnóstico etiológico foi estabelecido pela cultura para fungos. Dentre os 107 agentes identificados, os dermatófitos foram identificados em 78,52% (N=84), as leveduras em 13,08% (N=14) e os FFND em 8,40% (N=9) das vezes. CONCLUSÃO: É necessário que se estabeleça o diagnóstico etiológico dos casos de onicomicoses, já que os fungos filamentosos não dermatófitos ocorrem com freqüência considerável e são indistinguíveis daquelas por dermatófitos. / INTRODUCTION: Onychomycosis, a nail fungus infection is the most frequent nail disease, constituting about half of all nail disorder. It can be caused by dermatophytes, yeasts and non- dermatophytes filamentous fungi. OBJECTIVE: Characterize the onychomycosis caused by filamentous fungi non- dermatophytes. (1) Verify after a clinical suspicion of onychomycosis, which are the frequency of fungi recovery, (2) examine, after a clinical suspicion of onychomycosis, which species of fungi are recovered, (3) Checking, among the total of identified species , which are the frequency of the species of filamentous fungi not dermatophytes. METHODS: Two hundred and five patients with clinical suspicion of onychomycosis were studied in the period from December 2003 to November 2004, through direct mycological examination and culture for fungus. RESULTS: The diagnosis of onychomycosis has been established by direct mycological examination, in 170 individuals. The etiological diagnosis was established by the culture for fungus. Among the 107 persons identified, the dermatophytes were recovered in 78.52% (N = 84), the yeast in 13.08% (N = 14) and filamentous fungi non- dermatophytes in 8,40% (N = 9). CONCLUSION: It is necessary to establish the etiological diagnosis of the cases of onychomycosis, as filamentous fungi non- dermatophytes occur often than ever considered and are its clinic features are indistinguishable from those of the dermatophytes.