Este trabalho teve como objetivo sintetizar o palmitato de isopropila, éster emoliente, empregando como biocatalisador lipases microbianas imobilizadas em partículas de poli(estireno-co-divinilbenzeno) (STY-DVB-M) obtidas por meio da técnica de polimerização em suspensão e magnetizadas por co-precipitação de íons de Fe +2 e Fe +3 em meio básico. Inicialmente, a influência da concentração do agente de suspensão e da agitação na distribuição granulométrica do polímero sintetizado foi avaliada por planejamento experimental 2 2, com triplicata no ponto central. As polimerizações que resultaram nas maiores quantidades de partículas com tamanhos apropriados para utilização como suporte para imobilização (entre 80 e 24 mesh), foram obtidas empregando as seguintes condições experimentais: 1% de agente de suspensão (PVA) e 400 rpm de agitação. O suporte obtido foi utilizado para imobilizar a lipase de Candida rugosa (LCR) e lipase de Penicillium camemberti (LG) via adsorção física e os biocatalisadores resultantes aplicados em reações de esterificação do ácido palmítico com isopropanol em meio heptano. Para cada biocatalisador foi adotado um planejamento experimental estrela rotacional 22, com triplicata no ponto central para avaliar a influência da concentração de biocatalisador (% m/v) e da razão molar (ácido:álcool) no rendimento de esterificação. Nas condições otimizadas em 12 h de reação foram obtidos 75,60 e 88,53% de rendimento de esterificação, respectivamente, para a LCR e LG imobilizada em STY-DVB-M. A quantidade de água formada durante o bioprocesso não foi considerada fator relevante para interferir no progresso da síntese. O biocatalisador obtido pela LG imobilizada em STY-DVB-M foi empregado em biorreator de tanque agitado (280 mL), na condição ótima, em um experimento com ampliação de escala, atingindo 85,68% de rendimento em 12 horas de reação. No entanto, foi observado cisalhamento do suporte em função da agitação mecânica, optando-se pela realização do bioprocesso em biorreator de leito fixo (dimensões: 11 mm de diâmetro interno x 16,6 mm de comprimento) com recirculação do meio reacional (1,5 mL.min-1). A operação do sistema nesta configuração foi impossibilitada pela evaporação e/ou percolação do solvente. Assim, foram realizadas reações em reator de leito fixo em meio isento de solvente nas seguintes razões molares: 1:3, 1:4 e 1:6 (ácido:álcool), cujos melhores resultados foram obtidos na razão molar de 1:4, apresentando 56% de rendimento, 215,88 g.L-1 do palmitato de isopropila e produtividade de 26,87 g.L-1.h-1, decorridas 8h de reação com vazão de reciclo de 1,5 mLmin-1. O emprego de peneira molecular no reservatório do substrato proporcionou um acréscimo de aproximadamente 7% na formação do éster. Essa mesma condição experimental (1:4 em meio isento de solvente) foi testada em reator de tanque agitado, atingindo produtividade de 33,40 g.L-1.h-1 em 8h de reação. No entanto, em função da desvantagem do cisalhamento do suporte constatada neste tipo de biorreator, concluiu-se que o biorreator de leito fixo foi a configuração mais adequada, para a condução do bioprocesso estudado, apresentando viabilidade do processo enzimático empregando lipase imobilizada em suporte híbrido magnetizado para a síntese do palmitato de isopropila. / The aim of this study was to synthesize isopropyl palmitate, an emollient ester, using as biocatalyst microbial lipase immobilized on magnetic copolymer. The support was prepared by suspension polymerization technique using styrene and divinylbenzene monomers in the presence of magnetite particles synthesized by co-precipitation of Fe+2 and Fe+3. The influence of the suspending agent concentration and the mechanical agitation on the granulometric distribution of the synthesized polymer was assessed by a 22 factorial design with triplicate at central point. The statistical analysis indicated that the optimal experimental conditions to obtain the largest amount of particles with suitable size (between 80 and 24 mesh) to be used as immobilizing support were attained at 1% suspending agent (PVA) at 400 rpm stirring. The resulting support was used to immobilize Candida rugosa lipase (LCR) and Penicillium camemberti lipase (LG) by physical adsorption and applied in the esterification reaction of palmitic acid with isopropyl alcohol in presence of solvent (heptane). For each biocatalyst a central composite 22 experimental design with triplicate at central point was performed to determine the influence of biocatalyst concentration (% m/v) and molar ratio (acid: alcohol) on the reaction yield. Under the optimal conditions higher performance was achieved by LG immobilized on STY-DVB-M (88.53%) than LCR immobilized on STYDVB-M (75.60%) with shaking at 12 hours reaction. For both reactions the amount of water formed as byproduct was not found to be a relevant factor that interferes in the synthesis progress. The most activity immobilized biocatalyst (LG STY-DVB-M) was used in agitated tank bioreactor (280 mL), under optimized conditions, in an experiment with scale-up, reaching 85.68% yield in 12 hours. However, it has been observed that the support was low mechanical shear and therefore an attempted was made to run the reaction in a packed bed bioreactor (dimensions: 11 mm internal diameter x 16,6 mm length) with recirculation of the reaction medium (1,5 mL.min-1). The system could not be operated under this configuration because of solvent evaporation and/or percolation. Thereby, the reactions were carried out in packed bed reactor using solvent-free medium under the following molar ratios: 1:3, 1:4 and 1:6 (acid: alcohol). The best performance (56% yield, 215.88 g L-1 of isopropyl palmitate and 26.87 gL-1.h-1 of productivity) was attained running the reactor with substrate at molar ratio of acid to alcohol of 1:4 for 8 hours with recycle rate of 1,5 mL.min-1. The use of a molecular sieve in the substrate reservoir resulted in an increase of approximately 7% of ester formation. By comparison, esterification run under the same experimental condition (1:4 in solvent-free medium) was carried out in a stirred tank reactor and slight higher productivity (33.40 g.L-1.h-1) was achieved. However, due the shear limitation of the support, it was concluded that the most suitable configuration for this bioprocess is the packed bed bioreactor, thereby showing that the enzymatic process is feasible using lipase immobilized on a magnetized hybrid support for isopropyl palmitate synthesis.

Os retinóides têm sido amplamente utilizados na clínica dermatológica e nos produtos cosméticos com finalidades preventivas e reparadoras dos efeitos indesejáveis do envelhecimento cutâneo. Considerando que a concentração de retinóides, como por exemplo, o ácido retinóico ou o palmitato de retinila, pode influenciar na eficácia e segurança de uso dos mesmos em formulações tópicas, é de fundamental importância o desenvolvimento e avaliação dos efeitos benéficos e/ou colaterais de formulações dermocosméticas contendo diferentes concentrações de ácido retinóico (0,025%, 0,05% e 0,1%) e palmitato de retinila (0,25%, 0,5% e 1,0%), visando a obtenção de uma concentração que proporcione a máxima eficácia possível e risco mínimo à pele. Assim, o presente trabalho tem por objetivos avaliar a influência de diferentes concentrações de retinóides (ácido retinóico ou palmitato de retinila) em formulações dermocosméticas com finalidades antienvelhecimento, na pele de camundongos sem pêlo, por estudos histopatológicos, morfométricos, estereológicos e por Bioengenharia Cutânea. Para tal foram preparadas três formulações de géis creme à base de hidroxietilcelulose (HEC) e microemulsão de silicone e octanoato de octila (formulações de nos 1 e 3) e à base de complexo lipídico contendo álcool batílico e lecitina de soja, HEC e octanoato de octila (formulação de nº 2) as quais foram submetidas a testes preliminares de estabilidade. A formulação de nº 1 (F1) foi considerada a mais estável e, portanto, selecionada como veículo para a avaliação dos efeitos do ácido retinóico e do palmitato de retinila na pele de camundongos sem pêlo. Para a realização do ensaio biológico, amostras das formulações, acrescidas ou não (veículo) de 0,025; 0,05 ou 0,1% ácido retinóico ou 0,25; 0,5 ou 1,0% de palmitato de retinila foram aplicadas no dorso de camundongos sem pêlo. Após cinco dias da aplicação diária destas formulações, foram obtidas medidas de índice de eritema pelo equipamento Mexameter® MX16 e medidas do conteúdo aquoso do estrato córneo pelo equipamento Corneometer® CM825. Em seguida, os camundongos foram mortos e posteriormente foram colhidos fragmentos de pele das áreas que receberam aplicação das formulações, bem como da área que não foi aplicada nenhuma formulação (controle) e, a seguir, obtidos cortes histológicos para a realização dos estudos histopatológicos, morfométricos e estereológicos. De acordo com as metodologias empregadas, foi possível observar que, na avaliação do conteúdo aquoso do estrato córneo, somente as formulações que continham ácido retinóico em diferentes concentrações, provocaram mudanças significativas, reduzindo este conteúdo, ou seja, ocasionou um ressecamento na superfície da pele. Apenas as formulações contendo 0,025 e 0,1% de ácido retinóico e 1,0% de palmitato de retinila provocaram um aumento no índice de eritema. Além disso, tanto o ácido retinóico quanto o palmitato de retinila, atuaram na epiderme, porém de modo e intensidade diferentes, sendo que, o ácido retinóico teve um efeito mais pronunciado em relação às variáveis estudadas. As três diferentes concentrações de ácido retinóico e de palmitato de retinila ocasionaram aumento significante da espessura das camadas epiteliais, sem alteração da camada córnea. O ácido retinóico e o palmitato de retinila atuaram ainda aumentando os volumes nuclear, citoplasmático e celular, um dos fatores que ocasionou aumento da espessura do epitélio. Finalizando, ao analisar todas as variáveis histopatológicas, morfométricas e estereológicas, bem como o índice de eritema e o conteúdo aquoso do estrato córneo estudados, podemos sugerir que as formulações que continham as concentrações intermediárias, tanto do ácido retinóico (0,05%) quanto do palmitato de retinila (0,5 %), foram as que apresentaram melhores resultados, principalmente no que se refere a uma relação risco / benefício adequada e aceitável. / Retinoids has been widely used in dermatological clinic and in cosmetics products with preventive purposes as well as for the repairmen of the cutaneous aging undesirable effects. Considering that the concentration of retinoids, i.e., the retinoic acid or the retinyl palmitate, can influence their efficacy and safety in topical formulations, the development and evaluation of the beneficial and/or collateral effect of dermocosmetic formulations containing different concentrations of retinoic acid (0.025%, 0.05% e 0.1%) and retinyl palmitate (0.25%, 0.5% e 1.0%) is very important, aiming at the attainment of a concentration that provides to the maximum possible efficacy and minimum risk to the skin. Thus, the aim of this study was to evaluate the influence of different concentrations of retinoids (retinoic acid or retinyl palmitate) in dermocosmetics formulations with antiaging purposes, in hairless mice, using histopathological, morphometric and stereologic studies and Skin Bioengineering Techniques. For this purpose, three gel cream formulations were developed, containing hydroxyethylcellulose (HEC) and silicone microemulsion and octyl octanoate (formulations nº 1 and 3) and a complex lipidic based formulation containing batyl alcohol and lecithin, HEC and octyl octanoate (formulation nº 2), which were submitted to preliminary stability tests. The formulation nº1 (F1) was considered the most stable, therefore, it was selected as the vehicle for the evaluation of the effects of the retinoic acid and the retinyl palmitate in hairless mice skin. For the accomplishment of the biological assay, samples of the formulations, supplemented or not (vehicle) of 0.025, 0.05 or 0.1% retinoic acid or 0.25, 0.5 or 1.0% retinyl palmitate were applied in the dorsal skin of hairless mice. After five days of daily application of these formulations, the erythema index was measured by reflectance spectrophotometry using a Mexameter® MX16 as well as the water content of the stratum corneum using Corneometer® CM825. After that, the hairless mice were sacrificed and later skin fragments were obtained for each area that received application of the formulations, as well as of the area that was not applied any formulation (control) and, after that histologic sections were obtained and submitted to histopathological, morphometric and stereologic studies. In accordance with the used methodologies, it was possible to observe that in the evaluation of the water content of the stratum corneum, only the formulations that contained retinoic acid in different concentrations provided significant changes, enhancing skin surface dryness. Only the formulations containing 0.025 and 0.1% of retinoic acid and 1.0% of retinyl palmitate provided an increase in erythema index. Moreover, both retinoic acid and retinyl palmitate acted in the epidermis, however in different intensity and way, since retinoic acid had more pronounced effects in relation to the studied variables. The three different concentrations of retinoic acid and retinyl palmitate caused a significant increase of the epithelial layers thickness, without alteration of the horny layer. Retinoic acid and retinyl palmitate also increased the nucleus, cytoplasmic and cell volumes, which was one of the factors that influenced the increase of the epithelium thickness. Finishing, when analyzing all the histopathological, morphometric and stereologic variables, as well as the erythema index and the water content of the stratum corneum studied, we can suggest that the formulations that contained the intermediate concentrations (such as 0.05% of retinoic acid and 0.5% of retinyl palmitate) presented the best results, mainly when an adequate and acceptable risk/ benefit relationship is considered.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-15T14:23:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_KellyCristineZatta.pdf: 2655855 bytes, checksum: 40a81657cb3b6d7945a2bc834a0dacb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T14:23:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_KellyCristineZatta.pdf: 2655855 bytes, checksum: 40a81657cb3b6d7945a2bc834a0dacb6 (MD5) Previous issue date: 2011-03-21 / Keeping in mind the problematic that photoaging and hyperpigmentation represent, the development of a topical formulation containing vitamin C (ascorbyl palmitate) and açai oil associated to nanoparticules may represent a protection of the cellular membrane against oxidation, due to a better permeation and the synergic acting of both active. This study has as its objective the development and the characterization of cream-gel formulations containing ascorbyl palmitate associated to nanocarriers, in the presence or absence of the açai oil as the oily nucleus. Associated to that, the stability of the freeze-dried nanocoated active was tested after the incorporation in a silicon basis. Suspensions containing the AP associated t o the nanocapsules (NCAP), nanoemulsions (NEAP) and nanodispersions (NDAP) were developed, being the latter used as active protection comparative parameter without the active (NCBC). With the purpose of assessing the influence of the water on the stability of the active, AP was incorporated in a methanolic solution (SMAP), to which was put in an aging study during 30 days in environment temperature (22 ºC + 2 ºC), refrigeration (4 ºC + 2 ºC), greenhouse (40 ºC + 2 ºC) and chamber UVC (254 nm), along with the formulations cited previously. The sample characterizations was carried out soon after its obtaining and on days 7, 15, 21 and 30, as to the AP content quantification, average particle diameter, polydispersity index, zeta potential and pH. The NCAP, NEAP, NCBC suspensions were incorporated in semi-solid basis of Hostacerin SAF® cream-gel and later stored for the accelerated aging study (21 days) and alternated cycles of heating-cooling, which were analysed at the beginning and end of this period through the determination of the particle average diameter, polydispersity index, zeta potential, pH, active content quantification, organoleptic characteristic determination, spreadability determination and rheological behavior, and centrifugation test. NCAP and NCBC suspension samples were freeze-dried and incorporated to the silicon base (CSNCAPLIO and CSNBCLIO, respectively), and stored in heating-freezing cycles. In this same basis, the active in the free form (CSAP) was incorporated. Soon after its obtaining, the suspensions presented active content equal to 97,51%±0,93 to NCAP, 80,68% + 1,25 to NEAP and 83,10% + 3,10 to NDAP, and remaining desirable paramaters to nanometric systems. However, in the 30th day of storing, all the physical-chemical characteristics suffered significant alteration, being evident in the active loss, which was detected only in the NCAP and NEAP samples conditioned under refrigeration (24,42 % + 1,0 e 21,37 % + 1,27,, respectively). Contrasting with these results, the SMAP kept the active stable and in effective concentrations during 90 days of storing, revealing the fragility of the AP structure in the presence of an aqueous environment. As to the cream-gel formulations, all presented physical-chemical parameters appropriate for the nanoparticle formulations and slightly acid pH, satisfactory for the structure of the active in the non-dissociated form (smaller than the AP pKa value), homogeneous aspect of the sensorial optimum. For those, a proper spreadability was obtained, considering the function and action local, intended. The formulation rheogram demonstrated to have a non-Newtonian character and pseudoplastic flux, which is desired in pharmaceutical formulations, for the initial resistance for the semi-solid formulation to flow diminished, reflecting the application easiness. The greatest active concentration for the samples containing the nanocoated active was obtained, suggesting a greater initial protection of the active in the presence of polymer film and the açai oil. However, at the end of the 21-day period, it was verified the destabilization of the formulation containing the active by the total freeze-drying of those, not being possible to carry out the final tests. The cream in silicone basis samples were analyzed only according to the active content soon after the incorporation of the freeze-dried, which demonstrated an average initial loss of 30% under the previous to the freeze-drying quantification, while for the sample containing the free active, the initial content was superior. This result may be justified possibly by the prolonged exposition to humidity and light during the freeze-drying process. After the 7-day storing in ES, the essay was repeated, obtaining for the CSNAPLIO an average of 15 % + 2,03 of AP content, being that for the CSAP the quantification due to the active oxidation total was not possible. These data restate the destabilization of the active faced with the heat, even for the water free formulation. From the obtained results it was possible to verify the AP instability faced with the heat, light and water conditions. However, keeping in mind its therapy potentiality t is considered relevant to the continuity of this research with the purpose of searching for more ascorbyl palmitate stability keeping it viable for topical application. It is suggested the incorporation to the drying of the suspensions for nano-spry-drying and the incorporation of those in different semi-solid basis, with emulsions, silicones and non-ionic bases for the long-term stability study, searching for evidences which take to definite conclusions on the product stability. / Tendo-se em vista a problemática que o fotoenvelhecimento e a hiperpigmentação representam, o desenvolvimento de uma formulação tópica contendo vitamina C (palmitato de ascorbila) e óleo de açaí associada à nanopartículas pode representar a proteção das membranas celulares contra a oxidação, devido à melhor permeação e a atuação sinérgica de ambos os ativos. Este estudo teve por objetivo o desenvolvimento e caracterização de formulações de creme-gel contendo palmitato de ascorbila associado à nanocarreadores, na presença e ausência do óleo de açaí como núcleo oleoso. Associado a isso, foi testada a estabilidade de liofilizados do ativo nanoencapsulado após incorporação em base de silicone. Foram desenvolvidas suspensões contendo o AP associado à nanocapsulas (NCAP), nanoemulsões (NEAP) e nanodispersões (NDAP), tendo sido esta última utilizada como parâmetro comparativo de proteção do ativo pela total ausência de filme polimérico e núcleo oleoso. Como branco utilizou-se uma suspensão de nanocápsulas sem o ativo (NCBC). A fim de avaliar a influência da água sobre a estabilidade do ativo, incorporou-se AP em uma solução metanólica (SMAP), a qual foi colocada em estudo de envelhecimento durante 30 dias em temperatura ambiente (22 ºC + 2 ºC), refrigeração (4 ºC + 2 ºC), estufa (40 ºC + 2 ºC) e câmara climatizada UVC (254 nm), juntamente com as formulações citadas anteriormente. A caracterização das amostras foi realizada logo após sua obtenção e nos dias 7, 15, 21 e 30, quanto à quantificação do teor de AP, diâmetro médio de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta e pH. As suspensões de NCAP, NEAP, NCBC foram incorporadas em bases semissólidas de creme-gel Hostacerin SAF® e posteriormente armazenadas para estudo de envelhecimento acelerado (21 dias) em ciclos alternados de aquecimento – resfriamento, as quais foram analisadas ao início e final deste período através das determinações de diâmetro médio de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, pH, quantificação do teor de ativo, determinação das características organolépticas, determinação da espalhabilidade e comportamento reológico, e teste de centrifugação. Amostras de suspensões de NCAP e NCBC foram liofilizadas e incorporadas em base de silicone (CSNCAPLIO e CSNCBCLIO, respectivamente), e armazenadas em ciclos de aquecimento-resfriamento. Nesta mesma base, foi incorporado o ativo na forma livre (CSAP). Logo após sua obtenção, as suspensões apresentaram teor de ativo iguais a 97,51% + 0,93 para NCAP, 80,68% + 1,25 para NEAP e 83,10% + 3,10 para NDAP, e demais parâmetros desejáveis para sistemas nanométricos. Contudo, no 30o dia de armazenamento, todas as características físico-químicas sofreram significativa alteração, sendo evidente a perda de ativo, o qual foi detectado somente apenas nas amostras de NCAP e NEAP acondicionadas sob refrigeração (24,42 % + 1,0 e 21,37 % + 1,27, respectivamente). Contrastando com estes resultados, a SMAP manteve o ativo estável e em concentrações efetivas durante 90 dias de armazenamento, revelando a fragilidade da estrutura do AP em presença de meio aquoso. Quanto às formulações de creme-gel, todas apresentaram parâmetros físico-químicos adequados para formulações de nanopartículas e pH levemente ácido, satisfatório para a estrutura do ativo na forma não-dissociada (menor que o valor de pKa do AP), aspecto homogêneo de ótimo sensorial. Para as mesmas obteve-se espalhabilidade adequada, considerando a função e local de ação, pretendidos. O reograma das formulações demonstrou haver caráter não-newtoniano e fluxo pseudoplástico, o qual é desejado em formulações farmacêuticas, pois a resistência inicial para a formulação semissólida fluir diminui, refletindo a facilidade de aplicação. Obteve-se a maior concentração de ativo para as amostras contendo o ativo nanoencapsulado, sugerindo a maior proteção inicial do ativo em presença do filme polimérico e do óleo de açaí. Contudo, ao final do período de 21 dias, verificou-se desestabilização das formulações contendo o ativo pela total liquefação das mesmas, não sendo possível a realização dos testes finais. As amostras de creme em base de silicone foram analisadas somente segundo o teor de ativo logo após a incorporação do liofilizado, o qual demonstrou uma perda inicial média de 30 % sob a quantificação anterior à liofilização, enquanto que para a amostra contendo o ativo livre, o teor inicial foi superior. Este resultado pode ser justificado possivelmente pela exposição prolongada à umidade e luz durante o processo de liofilização. Após os primeiros 7 dias de armazenamento em ES, o ensaio foi repetido, obtendo-se para o CSNCAPLIO uma média de 15 % + 2,03 de teor de AP, sendo que para o CSAP não foi possível a quantificação devido a total oxidação do ativo. Estes dados reafirmam a desestabilização do ativo frente ao calor, mesmo para formulação isenta de água. A partir dos resultados obtidos foi possível verificar a instabilidade do AP frente a condições de calor, luz e água. Contudo, tendo em vista sua potencialidade terapêutica considera-se relevante a continuidade desta pesquisa de forma a buscar maior estabilidade do palmitato de ascorbila mantendo-o viável para aplicação tópica. Sugere-se a incorporação a secagem das suspensões por nano-spray-drying e incorporação das mesmas em diferentes bases semissólidas, como emulsões, silicones e bases não-iônicas para estudo de estabilidade de longo prazo, buscando indícios que levam a conclusões definitivas sobre a estabilidade do produto.

Os retinóides têm sido amplamente utilizados na clínica dermatológica e nos produtos cosméticos com finalidades preventivas e reparadoras dos efeitos indesejáveis do envelhecimento cutâneo. Considerando que a concentração de retinóides, como por exemplo, o ácido retinóico ou o palmitato de retinila, pode influenciar na eficácia e segurança de uso dos mesmos em formulações tópicas, é de fundamental importância o desenvolvimento e avaliação dos efeitos benéficos e/ou colaterais de formulações dermocosméticas contendo diferentes concentrações de ácido retinóico (0,025%, 0,05% e 0,1%) e palmitato de retinila (0,25%, 0,5% e 1,0%), visando a obtenção de uma concentração que proporcione a máxima eficácia possível e risco mínimo à pele. Assim, o presente trabalho tem por objetivos avaliar a influência de diferentes concentrações de retinóides (ácido retinóico ou palmitato de retinila) em formulações dermocosméticas com finalidades antienvelhecimento, na pele de camundongos sem pêlo, por estudos histopatológicos, morfométricos, estereológicos e por Bioengenharia Cutânea. Para tal foram preparadas três formulações de géis creme à base de hidroxietilcelulose (HEC) e microemulsão de silicone e octanoato de octila (formulações de nos 1 e 3) e à base de complexo lipídico contendo álcool batílico e lecitina de soja, HEC e octanoato de octila (formulação de nº 2) as quais foram submetidas a testes preliminares de estabilidade. A formulação de nº 1 (F1) foi considerada a mais estável e, portanto, selecionada como veículo para a avaliação dos efeitos do ácido retinóico e do palmitato de retinila na pele de camundongos sem pêlo. Para a realização do ensaio biológico, amostras das formulações, acrescidas ou não (veículo) de 0,025; 0,05 ou 0,1% ácido retinóico ou 0,25; 0,5 ou 1,0% de palmitato de retinila foram aplicadas no dorso de camundongos sem pêlo. Após cinco dias da aplicação diária destas formulações, foram obtidas medidas de índice de eritema pelo equipamento Mexameter® MX16 e medidas do conteúdo aquoso do estrato córneo pelo equipamento Corneometer® CM825. Em seguida, os camundongos foram mortos e posteriormente foram colhidos fragmentos de pele das áreas que receberam aplicação das formulações, bem como da área que não foi aplicada nenhuma formulação (controle) e, a seguir, obtidos cortes histológicos para a realização dos estudos histopatológicos, morfométricos e estereológicos. De acordo com as metodologias empregadas, foi possível observar que, na avaliação do conteúdo aquoso do estrato córneo, somente as formulações que continham ácido retinóico em diferentes concentrações, provocaram mudanças significativas, reduzindo este conteúdo, ou seja, ocasionou um ressecamento na superfície da pele. Apenas as formulações contendo 0,025 e 0,1% de ácido retinóico e 1,0% de palmitato de retinila provocaram um aumento no índice de eritema. Além disso, tanto o ácido retinóico quanto o palmitato de retinila, atuaram na epiderme, porém de modo e intensidade diferentes, sendo que, o ácido retinóico teve um efeito mais pronunciado em relação às variáveis estudadas. As três diferentes concentrações de ácido retinóico e de palmitato de retinila ocasionaram aumento significante da espessura das camadas epiteliais, sem alteração da camada córnea. O ácido retinóico e o palmitato de retinila atuaram ainda aumentando os volumes nuclear, citoplasmático e celular, um dos fatores que ocasionou aumento da espessura do epitélio. Finalizando, ao analisar todas as variáveis histopatológicas, morfométricas e estereológicas, bem como o índice de eritema e o conteúdo aquoso do estrato córneo estudados, podemos sugerir que as formulações que continham as concentrações intermediárias, tanto do ácido retinóico (0,05%) quanto do palmitato de retinila (0,5 %), foram as que apresentaram melhores resultados, principalmente no que se refere a uma relação risco / benefício adequada e aceitável. / Retinoids has been widely used in dermatological clinic and in cosmetics products with preventive purposes as well as for the repairmen of the cutaneous aging undesirable effects. Considering that the concentration of retinoids, i.e., the retinoic acid or the retinyl palmitate, can influence their efficacy and safety in topical formulations, the development and evaluation of the beneficial and/or collateral effect of dermocosmetic formulations containing different concentrations of retinoic acid (0.025%, 0.05% e 0.1%) and retinyl palmitate (0.25%, 0.5% e 1.0%) is very important, aiming at the attainment of a concentration that provides to the maximum possible efficacy and minimum risk to the skin. Thus, the aim of this study was to evaluate the influence of different concentrations of retinoids (retinoic acid or retinyl palmitate) in dermocosmetics formulations with antiaging purposes, in hairless mice, using histopathological, morphometric and stereologic studies and Skin Bioengineering Techniques. For this purpose, three gel cream formulations were developed, containing hydroxyethylcellulose (HEC) and silicone microemulsion and octyl octanoate (formulations nº 1 and 3) and a complex lipidic based formulation containing batyl alcohol and lecithin, HEC and octyl octanoate (formulation nº 2), which were submitted to preliminary stability tests. The formulation nº1 (F1) was considered the most stable, therefore, it was selected as the vehicle for the evaluation of the effects of the retinoic acid and the retinyl palmitate in hairless mice skin. For the accomplishment of the biological assay, samples of the formulations, supplemented or not (vehicle) of 0.025, 0.05 or 0.1% retinoic acid or 0.25, 0.5 or 1.0% retinyl palmitate were applied in the dorsal skin of hairless mice. After five days of daily application of these formulations, the erythema index was measured by reflectance spectrophotometry using a Mexameter® MX16 as well as the water content of the stratum corneum using Corneometer® CM825. After that, the hairless mice were sacrificed and later skin fragments were obtained for each area that received application of the formulations, as well as of the area that was not applied any formulation (control) and, after that histologic sections were obtained and submitted to histopathological, morphometric and stereologic studies. In accordance with the used methodologies, it was possible to observe that in the evaluation of the water content of the stratum corneum, only the formulations that contained retinoic acid in different concentrations provided significant changes, enhancing skin surface dryness. Only the formulations containing 0.025 and 0.1% of retinoic acid and 1.0% of retinyl palmitate provided an increase in erythema index. Moreover, both retinoic acid and retinyl palmitate acted in the epidermis, however in different intensity and way, since retinoic acid had more pronounced effects in relation to the studied variables. The three different concentrations of retinoic acid and retinyl palmitate caused a significant increase of the epithelial layers thickness, without alteration of the horny layer. Retinoic acid and retinyl palmitate also increased the nucleus, cytoplasmic and cell volumes, which was one of the factors that influenced the increase of the epithelium thickness. Finishing, when analyzing all the histopathological, morphometric and stereologic variables, as well as the erythema index and the water content of the stratum corneum studied, we can suggest that the formulations that contained the intermediate concentrations (such as 0.05% of retinoic acid and 0.5% of retinyl palmitate) presented the best results, mainly when an adequate and acceptable risk/ benefit relationship is considered.

Neste projeto, demonstramos a modulação da enzima NAD(P)H oxidase pela glicose, palmitato e interleucina - 1? através da análise da expressão protéica do componente p47PHOX e pela atividade dessa enzima via produção de superóxido e peróxido de hidrogênio. Demonstramos também a participação da enzima NAD(P)H oxidase no processo de secreção de insulina induzido pela glicose pois a inibição da enzima pelo DPI e oligonucleotídeo anti p47PHOX promoveu uma diminuição da secreção do hormônio. A partir desse dado passamos a avaliar o mecanismo de ação da enzima no processo secretório e demonstramos que a inibição dessa enzima promove uma inibição de genes essenciais no processo de secreção de insulina como GLUT-2 e glicocinase.Assim podemos concluir que a enzima NAD(P)H oxidase é modulada pela glicose, palmitato e interleucina 1? e que essa enzima participa do processo de secreção insulina modulando genes essenciais para o processo secretório como GLUT-2 e glicocinase. / The expression and activity of the componenents of NAD(P)H oxidase in pancreatic islets were described for the first time in our laboratory (OLIVEIRA, HR et ai, 2003). It was shown the gene and protein expression of the components of this enzyme in Seta cells and that enzyme activation is mediated by glucose. Glucose induced insulin secretion was followed by increase in EROS generation and this increase was in part mediated by NAD(P)H oxidase activation (the same mechanism observed in phagocytes). In this study, the modulation of NAD(P)H oxidase activity by glucose, palmitate and interleukin 1ß as investigated through protein expression of p47phox vity of this enzyme through superoxide and hydrogen peroxide production. To determinate the role of NAD(P)H oxidase in the process of glucoseinduced insulin secretion the enzyme was inhibited by DPI and oligonucleotide anti p47phox, in the both cases the enzyme inhibition produced a decrease on insulin secretion. In order to investigated NAD(P)H oxidase mechanism of action in insulin secretion, we shown that the inhibition enzyme by DPI reduced the GLUT-2 and glucokinase gene expression. We can concluded hat NAD(P)H oxidase was modulated by glucose, palmitate and interleukin 1ß and that enzyme participed in process of glucoseinduced insulin secretion through modulation of GLUT-2 and glucokinase gene expression.

Recientemente, la semilla de chía (Salvia hispanica L.) ha sido redescubierta como una importante fuente de ácidos grasos omega-3, proteínas, fibra dietética y antioxidantes, a partir de la cual puede obtenerse aceite con una elevada proporción de ácidos grasos esenciales. Su incorporación en la dieta permite disminuir la incidencia de enfermedades coronarias, refuerza el sistema nervioso; la fibra dietaria es una valiosa alternativa para regular el tránsito intestinal, lo cual ayuda a prevenir la obesidad, el cáncer de colon, así como los elevados niveles de colesterol y de glucosa en sangre. En nuestro país, la creciente expansión de su cultivo en las provincias del noroeste puede representar un aporte tendiente a la diversificación de la producción agrícola con el consecuente impacto socioeconómico en dicha región. Por otra parte, Argentina es uno de los principales productores y exportadores de aceite de girasol (Helianthus annuus L.) y la industria local se destaca por su avanzada tecnología y alta competitividad. Asimismo, el girasol es el segundo cultivo oleaginoso en importancia a escala nacional luego de la soja. El 92% del girasol producido en la Argentina es procesado, siendo exportado el 70% como aceite crudo a granel y harina proteica y el 30% restante como aceite refinado. Los aceites comestibles constituyen un componente importante en nuestra alimentación, cuya variedad y consumo depende de la disponibilidad de cada país y región. La composición de los aceites varía considerablemente en el aporte de ácidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados y particularmente, en el tenor de ácidos grasos omega-6 y omega-3. La nutrición en el mundo occidental se caracteriza por una elevada ingesta de ácidos grasos omega-6 y un bajo consumo de ácidos grasos omega-3, debido mayoritariamente al origen vegetal de los aceites que se producen y al bajo consumo de pescados grasos. De esta forma, la relación omega-6:omega-3 está alejada de la que recomienda la FAO/OMS. En virtud de ello, es posible preparar aceites con relaciones omega-6:omega-3 muy cercanas a las recomendadas, desarrollando productos que contengan mezclas de aceites con una adecuada composición de ácidos grasos. En nuestro país, debido a la gran producción de aceite de girasol, es interesante la revalorización de los subproductos generados en el proceso de extracción y/o refinación del mismo. Entre ellos se encuentran las gomas, constituidas por una mezcla de fosfolípidos, agua y restos de aceite. La posterior deshidratación de las mismas da lugar al subproducto denominado lecitina. Cada fosfolípido constituyente contribuye a la funcionalidad de la lecitina, por lo que la modificación de su estructura y/o de su concentración posibilita ampliar las propiedades funcionales de las mismas. En el Capítulo I se presenta una introducción sobre la chía y el girasol, describiendo el origen y los antecedentes históricos de estas especies, las principales características botánicas, así como la composición química de las semillas y sus respectivos aceites. Además, se describe el proceso de obtención de los aceites vegetales y de la lecitina, la cual es principalmente utilizada como agente emulsificante en la industria alimentaria. Por último, se describen los mecanismos de formación, estabilidad y desestabilización de las emulsiones. En el Capítulo II se detalla el proceso de fraccionamiento de lecitina nativa de girasol, mediante el empleo de diferentes soluciones etanol-agua y distintos niveles de pH del solvente de extracción. Además, se analizan las propiedades funcionales de las fracciones enriquecidas en fosfatidilcolina PC, como agentes emulsificantes de emulsiones O/W. En el Capítulo III se estudia la obtención, caracterización, estabilidad oxidativa y condiciones de almacenamiento más adecuadas de aceites mezcla girasol-chía, los cuales presentan relaciones omega-6:omega-3 acordes a las recomendadas por la FAO/OMS, evaluando la eficiencia de la adición de antioxidantes (extracto de romero, palmitato de ascorbilo y su mezcla) con respecto al deterioro oxidativo de los mismos. Además, se presentan los resultados del análisis sensorial. En el Capítulo IV se evalúa la estabilidad física de emulsiones O/W formuladas con aceites mezcla girasol-chía, lecitinas modificadas de girasol mediante “deoiling” y fraccionamiento (agente emulsificante) y mucílago de chía (agente estabilizante). Finalmente, se exponen las Conclusiones generales obtenidas a partir de este trabajo de Tesis y en base a ellas, las Perspectivas futuras.

Neste projeto, demonstramos a modulação da enzima NAD(P)H oxidase pela glicose, palmitato e interleucina - 1? através da análise da expressão protéica do componente p47PHOX e pela atividade dessa enzima via produção de superóxido e peróxido de hidrogênio. Demonstramos também a participação da enzima NAD(P)H oxidase no processo de secreção de insulina induzido pela glicose pois a inibição da enzima pelo DPI e oligonucleotídeo anti p47PHOX promoveu uma diminuição da secreção do hormônio. A partir desse dado passamos a avaliar o mecanismo de ação da enzima no processo secretório e demonstramos que a inibição dessa enzima promove uma inibição de genes essenciais no processo de secreção de insulina como GLUT-2 e glicocinase.Assim podemos concluir que a enzima NAD(P)H oxidase é modulada pela glicose, palmitato e interleucina 1? e que essa enzima participa do processo de secreção insulina modulando genes essenciais para o processo secretório como GLUT-2 e glicocinase. / The expression and activity of the componenents of NAD(P)H oxidase in pancreatic islets were described for the first time in our laboratory (OLIVEIRA, HR et ai, 2003). It was shown the gene and protein expression of the components of this enzyme in Seta cells and that enzyme activation is mediated by glucose. Glucose induced insulin secretion was followed by increase in EROS generation and this increase was in part mediated by NAD(P)H oxidase activation (the same mechanism observed in phagocytes). In this study, the modulation of NAD(P)H oxidase activity by glucose, palmitate and interleukin 1ß as investigated through protein expression of p47phox vity of this enzyme through superoxide and hydrogen peroxide production. To determinate the role of NAD(P)H oxidase in the process of glucoseinduced insulin secretion the enzyme was inhibited by DPI and oligonucleotide anti p47phox, in the both cases the enzyme inhibition produced a decrease on insulin secretion. In order to investigated NAD(P)H oxidase mechanism of action in insulin secretion, we shown that the inhibition enzyme by DPI reduced the GLUT-2 and glucokinase gene expression. We can concluded hat NAD(P)H oxidase was modulated by glucose, palmitate and interleukin 1ß and that enzyme participed in process of glucoseinduced insulin secretion through modulation of GLUT-2 and glucokinase gene expression.

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Sua ocorrência é devido ao acúmulo anormal ou excessivo de gordura, que pode resultar em risco de desenvolvimento de doenças graves e alterações lipídicas como dislipidemias e hipercolesterolemia. Vários tratamentos terapêuticos são utilizados para redução do peso corporal. Medicamentos com ação inibidora da lipase digetiva na região do lumen intestinal são utilizados para controlar o metabolismo lipídico, que propicia a redução da absorção de gordura. As plantas têm sido amplamente estudadas como recurso terapêutico, fundamentado no uso popular. Várias plantas apresentam ação antilipidêmica comprovada, devido à presença dos catecois. A Endopleura uchi, conhecida popularmente como uxi amarelo, apresenta em seus extratos, derivados fenólicos e flavonoídicos (catequinas). Este trabalho teve como objetivo, o estudo de avaliação da eficácia antilipidêmica da casca de Endopleura uchi, empregando método espectrofotométrico. A amostra de casca de E. uchi seca e triturada foi adquirida comercialmente. A metodologia envolveu a obtenção dos extratos; quantificação de derivados flavonoídicos e derivados fenólicos totais; avaliação da atividade antioxidante e determinação do efeito inibidor dos extratos na atividade enzimática da lipase pancreática. Foram preparados três extratos em solventes com polaridades diferentes, a partir de 200g de casca seca triturada de E. uchi. Para a determinação de derivados flavonídicos foi utilizado o método com cloreto de alumínio em meio ácido na presença de piridina e para derivados fenólicos totais o método com reagente de Folin-Ciocalteau. A atividade antioxidante foi realizada pelo ensaio de redução do radical DPPH. O efeito antilipidêmico dos extratos foi avaliado através da inibição enzimática da lipase pancreática utilizando como substrato o p-nitrofenolpalmitato. Os extratos obtidos apresentaram rendimento de 23,4 g (11,7%) para o extrato em água, 34,2g (17,1%) de extrato em etanol 80% e 26,6 g (13,3%) de extrato em acetona 80%. O conteúdo de derivados flavonoídicos equivalente em quercetina por grama de amostra foi de 1,35mg para extrato em água, 1,80mg para extrato em etanol 80% e 2,13 mg para extrato em acetona 80%. O conteúdo de derivados fenólicos expressos em equivalente em ácido tânico por grama de amostra foi de 0,639g para extrato em água, 0,950g para extrato em etanol 80% e 0,930g para extrato em acetona 80%. As concentrações efetivas 50% para o método de DPPH variaram de 12,4 μg/mL, 9,7 μg/mL e 7,9 μg/mL para os extratos em água, etanol 80% e em acetona 80% respectivamente. Foi encontrada forte correlação entre atividade antioxidante e o conteúdo de derivados fenólicos. O coeficiente de Pearson para os três extratos foi r > 0,9. Na avaliação dos extratos frente a inibição da lipase pancreática, o extrato aquoso mostrou atividade inibidora de 47,54% (106,90 UIL/g), em etanol 80% (1:1) 36,88% (96,06 UIL/g) e extrato em acetona 80% (1:1) 49,33% (112,14 UIL/g). Os resultados obtidos mostraram a presença das atividades antilipidêmica e antioxidante dos extratos de casca de E. uchi, importantes para o tratamento de redução de gordura corporal. / Obesity is the result of various individual characteristics, among which stand out the genetic, environmental and behavioral aspects. Its occurrence is due to abnormal or excessive fat accumulation that may result in the risk of developing serious diseases and lipid disorders such as dyslipidemia and hypercholesterolemia. Many therapeutic treatments are used for reducing body weight. Drugs that inhibits the digestive lipase in the intestinal lumen region are used to control lipid metabolism, which promotes the reduction of fat absorption. Plants have been widely studied as a treatment method based on the popular use. Several plants have proven, due to the presence of catechols antilipemic action. The Endopleura uchi, popularly known as yellow uxi presents in their extracts, phenolic derivatives and flavonoids (catechins). This work aimed to study the efficacy assessment antilipemic bark Endopleura uchi, employing spectrophotometric method. A sample of E. uchi bark was dried and crushed commercially acquired. The methodology involved obtaining the extracts; quantification of flavonoid compounds and phenolic derivatives; evaluation of antioxidant activity and determination of the inhibitory effect of the extract on the enzymatic activity of pancreatic lipase. Three extracts were prepared in solvents with different polarities from 200g dry shredded bark of E. uchi. For the determination of the method flavonoid derivative with aluminum chloride in an acid medium in the presence of pyridine and phenolic derivatives with the method of Folin-Ciocalteau reagent was used. The antioxidant activity assay was performed by reduction of DPPH. Antilipemic effect of the extracts was assessed by enzymatic inhibition of pancreatic lipase using a substrate of p-nitrofenylpalmitate. The extracts showed yield 23,4 g (11,7%) for the water extract, 34,2 g (17.1%) of 80% ethanol extract and 26,6 g (13,3%) of 80% acetone extract. The content of flavonoid compounds in quercetin equivalent of gram of sample was 1,35 mg to water extract, 1,80 mg extract in 80% ethanol and 2,13 mg 80% extract acetone. The contents of phenolic derivatives expressed in equivalent of gram of tannic acid was 0,639 g sample to extract in water to 0,950 g in 80% ethanol extract and 0,930 g in 80% acetone extract. The effective concentration for 50% DPPH assay ranged from 12,4 μg/mL, 9,7 μg/mL and 7,9 μg/mL for the extracts with water, 80% ethanol and 80% acetone, respectively. Strong correlation between antioxidant activity and content of phenolic derivatives was found. The Pearson coefficient for the three extracts was r > 0,9. In the evaluation of the extracts against pancreatic lipase inhibition of the aqueous extract showed inhibitory activity of 47.54% (106,90 ALI/g) in 80% ethanol (1:1) 36,88% (96,06 ALI/g) and extract with 80% acetone (1:1) 49,33% (112,14 ALI/g). The results showed the presence of antilipemic and antioxidant activities of the extracts of bark of E. uchi, important for the treatment of body fat reduction.