Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Fundação de Amparo ao docente e ao Aluno (FADA) / Os papilomavírus humanos (HPV) estão associados a diversas lesões do trato anogenital, tanto malignas quanto benignas. A imunodeficiência, como a encontrada em pessoas portadoras de HIV é um fator de risco para infecções genitais por HPV e sua progressão para neoplasias intra-epiteliais e cânceres genitais. O objetivo do presente estudo foi avaliar através de técnicas de biologia molecular, a prevalência da presença de DNA-HPV no sangue periférico entre as gestantes HIV-1 positivo. Um total de 60 gestantes HIV-1 positivo com infecção cervical positivo por HPV e 50 gestantes HIV-1 positivo sem infecção cervical por HPV apresentavam resultados de pesquisa de HPV cervical pelos métodos moleculares (Captura Híbrida-II e PCR/RFLP) e contagem de células CD4+ e carga viral do HIV-1 do plasma. As amostras disponíveis de sangue periférico das gestantes selecionadas foram submetidas à Nested-PCR seguido de sequenciamento para a pesquisa de DNA-HPV. A DNA-HPV foi detectado em 25,0% das gestantes HIV-1 positivo com infecção cervical por HPV e 4,0% das gestantes HIV-1 positivo sem infecção cervical por HPV (p=0,002). Nível de células CD4+ ≤ 200 células/mm3 , presença de infecção cervical por HPV com alta carga viral (> 200 RLU) são preditivo de uma maior probabilidade de presença de DNA-HPV no sangue periférico. Estes dados evidenciam a presença do DNA-HPV no sangue periférico. A presença do genoma de HPV em sangue periférico ainda é controversa e deve ser melhor estudada para que possa ser relacionada com o desenvolvimento de lesões malignas. / Papilomavírus human (HPV) are associated with several lesions of the anogenital tract and are present in a variety of both malignant and benign lesions. The imunodeficiency, as the found one in carrying people of HIV is a factor of risk for genital infections for genital HPV and its progression for intra-epithelial neoplasias and cancers. The objective of the present study was to evaluate through techniques of molecular biology, the prevalence of the presence of DNA-HPV in the peripheral blood between the pregnant positive HIV-1 .A total of 60 pregnant positive HIV-1 with positive cervical infection for HPV and 50 pregnant positive HIV-1 without cervical infection for HPV presented resulted of cervical research of HPV for the molecular methods (Hybrid Capture II and PCR/RFLP) and counting of cells CD4+ and viral load of the HIV-1 of the plasma. The available samples of peripheral blood of the selected pregnant had been submitted to the followed Nested-PCR of sequenciamento for the research of DNA-HPV. The DNA-HPV was detected in 25,0% of pregnant positive HIV-1 with cervical infection for HPV and 4.0% of the pregnant positive HIV-1 without cervical infection for HPV (p=0,002). Level of cells CD4+ ≤ 200 células/mm3 , presence of cervical infection for HPV with high viral load (>200 RLU) are predict of a bigger probability of presence of DNA-HPV in the peripheral blood. The role of HPV viremia is controversial and warrants further investigation to determine its relationship with genital infection and whether there is a correlation with development of malignancies in HIV-infected individuals / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-11T13:47:24Z No. of bitstreams: 2 Tese Danielly Ferreira.pdf: 18104050 bytes, checksum: d3cdc17b1aa66d984ed1e66717abf7f1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T13:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Danielly Ferreira.pdf: 18104050 bytes, checksum: d3cdc17b1aa66d984ed1e66717abf7f1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-07-28 / CAPES; FACEPE; CNPq / Infecções pelo papilomavírus humano (HPV) de alto risco, principalmente o HPV16, podem levar ao desenvolvimento de tumores, como o de câncer cervical. O diagnóstico rápido e preciso associado a uma baixo custo operacional das lesões pré-cancerígenas por HPV é extremamente importante para o sucesso do tratamento. Os tradicionais testes para o diagnóstico desse vírus não preenchem todos os requisitos necessários para um diagnóstico bem sucedido. Dispositivos analíticos, como os biossensores, podem detectar agentes infecciosos de uma maneira mais simples e barata, em comparação com os testes convencionais. Estas características tornam os biossensors uma alternativa promissora para o diagnóstico precoce do HPV. O objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento de genossensores (biossensores de DNA) para o diagnóstico do HPV. O primeiro biossensor foi composto de dois eletrodos, um eletrodo de trabalho (ET) feito de lápis grafite e um eletrodo de referência (ER) feito de Ag/AgCl. O outro modelo de biossensor foi formado por três eletrodos impressos: ET constituído de ouro; ER constituído de Ag/AgCl; e EA (eletrodo auxiliar) constituído de carbono. Nos dois biossensores propostos, um sonda de DNA específica para o gene E6 do HPV16 foi imobilizada sob o eletrodo de trabalho por adsorção e, em seguida, uma sequência alvo foi hibridizada com a sonda imobilizada. No primeiro biossensor, o alvo foi o gene E6 do HPV16 colonado no plasmíedo PGEM-T. Já no segundo biossensor, os alvos foram os oligonucleotídicos sintéticos e o DNA extraído (DE) de amostras de pacientes. Os sinais redox da hibridização, nos dois biossensores, foram analisados pela técnica de voltametria de pulso diferencial. Os resultados mostraram que os biossensores puderam diferenciar a hibridização da não-hibridização. Os dois biossensores propostos apresentaram elevada sensibilidade cujos limites de detecção foram para o primeiro biossensor de 16 pg/μL (7 nM) e o segundo biossensor de 18,13 nM. Além disso, ao contrário dos testes padrão, os dois genossensores foram capazes de detectar a presença do DNA viral sem a necessidade de amplificação do material genético. Isso os tornam mais rápidos e baratos em comparação aos testes convencionais. Os dados obtidos com os biossensores mostraram viabilidade para o diagnóstico de vários tipos de HPVs, permitindo com isso o desenvolvimento de um sistema pioneiro para detecção portátil desse vírus.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-12T19:05:14Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Biblioteca.pdf: 1309462 bytes, checksum: b4c445118f5bcfabe4bf07ca5de9ce8d (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T19:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Biblioteca.pdf: 1309462 bytes, checksum: b4c445118f5bcfabe4bf07ca5de9ce8d (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / Pequenos vírus de DNA, os Papilomavírus humano (HPV), são transmitidos por via sexual e infectam mucosas e epitélios levando ao desenvolvimento de tumores benignos, os quais podem evoluir para um processo carcinogênico. Este vírus apresenta seu genoma dividido em regiões de expressão precoce e tardia. Dentre as de expressão precoce, estão as regiões E6 e E7 as quais codificam para proteínas que interferem no ciclo celular do hospedeiro. A proteína viral E6 interage com a proteína celular p53 inibindo sua função supressora de tumor. Enquanto isso, a proteína E7 interage com a proteína pRb, também supressora de tumor, possibilitando a passagem do ciclo celular da fase G1 para a fase S. Dessa forma, o HPV é responsável pela transformação celular. Considerada o principal agente etiológico do câncer cervical, a infecção por HPV é necessária, porém não suficiente nesse processo. Fatores ambientais e genéticos têm sido apontados como co-fatores, sendo esse último responsável por 37% do risco total. Polimorfismos no gene TP53 bem como naqueles envolvidos na via da p53 têm sido relacionados com a susceptibilidade a lesões e câncer cervicais. Este trabalho teve como objetivo avaliar, em mulheres infectadas com HPV, a possível associação de polimorfismos em dois genes envolvidos na via da p53, MDM2 (SNPT309G) e WAF-1 (SNPC590T) com o aumento da susceptibilidade a lesões e câncer cervicais. Para tanto, foi utilizada a técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). Os dados foram analisados através de testes estatísticos qui-quadrado de Pearson, teste G de aderência, equilibro de Hardy-Weinberg e teste exato de Fisher. Não se observou diferenças significativas entre as freqüências alélicas e genotípicas entre grupos de casos e de controles nos dois genes analisados. Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que os polimorfismos MDM2 (SNPT309G) e WAF-1 (SNPC590T) não estão associados com lesões e câncer cervicais em pacientes da região nordeste do Brasil.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-28T18:01:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) AnaPavla_Tese.pdf: 2030041 bytes, checksum: d62d754a4e28b637ecec9ecbd30a1fb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T18:01:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) AnaPavla_Tese.pdf: 2030041 bytes, checksum: d62d754a4e28b637ecec9ecbd30a1fb2 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CAPES / Cerca de 265 mil mulheres morrem todos os anos vítimas de câncer cervical. Infecções persistentes causadas por Papilomavírus humano de alto risco oncogênico (HR HPVs) é uma condição necessária, porém não suficiente para o desenvolvimento de lesões cervicais e câncer cervical. Dessa forma, diversos fatores ambientais e genéticos estão envolvidos na carcinogênese cervical. Dentre os fatores genéticos, as variantes genéticas dos HR HPVs parecem estar relacionados com o risco de infecções persistentes e desenvolvimento de lesões e câncer cervical. Assim, o presente estudo investigou: 1) A variabilidade genética de um fragmento do gene L1 dos HPV16, 31, 53, 54, 56, 58, 61, 62, 66, 70 e 81 em amostras biológicas de pacientes oriundos dos Estados de Pernambuco, Alagoas e Sergipe, Nordeste do Brasil; 2) A variabilidade genética da LCR dos HR HPVs 16, 31 e 58 oriundas de pacientes dos Estados de Pernambuco, Alagoas e Sergipe, Nordeste do Brasil; 3) Uma possível associação entre os polimorfismos virais do gene L1 e o risco para desenvolver lesões cervicais nas pacientes do Nordeste do Brasil. Para tanto, a detecção do DNA viral foi realizada em amostras biológicas de 784 pacientes. Os fragmentos parciais do gene L1 e da LCR dos HPVs mencionados foram sequenciados. Análises in silico de possíveis epitopos de células B e de células T foram efetuadas nas regiões de mutação não-sinônima no gene L1. Além disso, análises in silico dos sítios de ligação dos fatores transcricionais foram realizadas em regiões de alteração nucleotídica da LCR. Foram detectados 23 tipos de HPVs: HPVs 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 54, 56, 58, 61, 62, 66, 70, 72, 81, 82, 83 e 84. Com relação ao gene L1 dos HPV analisados, foram detectadas 98 mutações, sendo 96/98 substituições de bases, 1/98 deleção e 1/98 inserção de nucleotídeo. Dentre estas alterações nucleotídicas no gene L1, 29,6% são mutações não sinônimas. Ademais, 18,36% das variações detectadas no gene L1 estavam inseridas em epitopos de células B, 25,5% inseridos em regiões de MHC Classe I e 18,36% inseridos em regiões de MHC Classe II. Um total de 8,1% das variações genéticas observadas no gene L1 dos HPV estudados foram descritos pela primeira vez na literatura. Em relação a LCR, foram detectadas 95 mutações, sendo 88/95 substituições de bases, 5/98 deleções e 2/95 inserções de nucleotídeos. Um total de 51,5% das mutações detectadas estão inseridas em sítios de ligação dos fatores transcricional celular e/ou viral. Além disso, 3,1% das variações genéticas encontradas na LCR foram descritas pela primeira vez na literatura. As análises filogenéticas mostraram a presença das variantes A e D do HPV16, A e C do HPV31 e A, B, C e D do HPV58 circulante no Nordeste do Brasil. Com relação a repercussão biológica das mutações do gene L1 do HPV16, não foram observadas associações significativas (p>0.05) entre os polimorfismos do gene L1 e o risco para desenvolver lesões cervicais. Entretanto, a combinação de determinados alelos destes polimorfismos virais está fortemente associada com o risco de desenvolver lesão cervical. Assim, a detecção das principais variantes e de alterações nucleotídicas com potencial impacto biológico circulantes no Nordeste Brasileiro é importante face as diferenças na patogenicidade dos HPVs. / Approximately 265 thousand women die every year from cervical cancer. Persistent infections caused by high oncogenic risk Human papillomavirus (HR HPV) are necessary but not sufficient condition for the development of cervical lesions and cervical cancer. Therefore, several environmental and genetic factors are involved in cervical carcinogenesis. Concerning the genetic factors, variants of HR HPV seem to be related to the risk of persistent infections and the development of lesions and cervical cancer. In this sense, the present study aimed to investigate: 1) The genetic variability of a L1 gene fragment from HPV16, 31, 53, 54, 56, 58, 61, 62, 66, 70 and 81 in biological samples of patients from Pernambuco, Alagoas and Sergipe states, Northeastern Brazil; 2) The genetic variability of the LCR of HR HPVs 16, 31 and 58 of patients from from Pernambuco, Alagoas and Sergipe states, Northeastern Brazil; 3) Possible association between the viral polymorphisms of the L1 gene and the risk to develop cervical lesions in patients from the Brazilian Northeast. To achieve that, viral DNA detection was performed in biological samples from 784 patients. Partial fragments of the L1 gene and the LCR of the abovementioned HPVs were sequenced. In silico predictions of possible B cells and T cells epitopes were performed in regions of non-synonymous mutation of the L1 gene. Moreover, in silico predictions of the binding sites of transcriptional factors were performed in nucleotide change regions within LCR. Twenty-three HPV types were detected: HPVs 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 54, 56, 58, 61, 62, 66, 70, 72, 81, 82, 83 e 84. Regarding the L1 gene from the analyzed HPVs, 98 mutations were detected, in which 96 are nucleotide substitutions, 1 is deletion and 1 is nucleotide insertion. Among these nucleotide changes in the L1 gene, 29.6% are non-synonymous mutations. Moreover, 18.36% of the nucleotide changes are located in B cell epitopes, 25.5% located in MHC Class I regions and 18.36% located in MHC Class II regions. Finally, 8.1% of the genetic variations in the L1 gene of the studied HPVs were observed for the first time. Concerning LCR, 95 mutations were detected, in which 88 are nucleotide substitutions, 5 are deletions and 2 are nucleotide insertions. A total of 51.5% of the detected mutations are located in binding sites of cellular and/or viral transcriptional factors. Additionally, 3.1% of the genetic variations found in LCR were described for the first time. Phylogenetic analisys showed the presence of A and D variants of the HPV16, A and C variants of the HPV31, and A, B, C and D variants of the HPV58 circulating in the Brazilian Northeast. In regard to the biological repercussion of the L1 gene mutations of the HPV16, no significant associations were observed (p>0.05) between L1 gene polymorphism and the risk to develop cervical lesions. However, the combination of certain alleles from these viral polymorphisms is firmly associated to the risk to develop cervical lesion. Thus, the detection of the main circulating variants with potential biological impact in the Brazilian Northeast is important in view of the differences in the pathogenicity of the HPV.

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-13T19:32:24Z No. of bitstreams: 2 Nunes,_MJG-_Dissertação_final_2012.pdf: 4070100 bytes, checksum: bc731749f56a74be967907ff824bd9a2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:32:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Nunes,_MJG-_Dissertação_final_2012.pdf: 4070100 bytes, checksum: bc731749f56a74be967907ff824bd9a2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / CAPES, FACEPE / A infecção pelo HPV (Papilomavírus humano) é o fator de risco mais comum para o desenvolvimento de Neoplasia Intraepitelial Anal (NIA). Além do fator viral deve-se considerar história de intercurso anal, infecção pelo HPV em outros sítios (vulvar, vaginal ou cervical) e tabagismo, bem como processos inflamatórios crônicos anorretais que, associados à imunodepressão, podem acelerar a divisão celular e dar origem à neoplasia. Objetivo: Identificar a presença do HPV e avaliar a expressão da proteína p16 em amostras anais de mulheres HIV negativas portadoras de lesões visíveis a anuscopia. Métodos: O estudo foi realizado com pacientes atendidas no Hospital de Câncer de Pernambuco, submetidas a anuscopia de magnificação. Diante da presença de lesões entre o canal anal e a zona de transição com o reto, realizava-se a coleta de células anais e biópsia. Foi extraído DNA para posterior análise da identificação do HPV através da Reação em Cadeia Polimerase (PCR), utilizando-se os primers GP5+/6+ e MY09/11 e genotipagem através do PapilloCheck®. Os fragmentos de tecido obtidos por biópsia foram submetidos a rotina histológica, corados pela Hematoxilina-Eosina e a reação imunohistoquímica para identificação da expressão da proteína p16. Resultados: Foram classificadas histologicamente 65 amostras e agrupadas como: I-Negativo para displasia: Ia-Normal, alterações benignas e/ou inflamatórias 52,31%, Ib-alterações proliferativas 41,54% e II-Neoplasias 6,15%. Entre os casos negativos para displasia 93.44% não apresentaram marcação para p16. Em 75% dos casos de neoplasias observou-se marcação nuclear e/ou citoplasmática, quanto ao padrão de marcação nesses casos verificou marcação em um terço e três terços do epitélio para NIA I e III, respectivamente. Todas as lesões com diagnóstico histológico de neoplasia apresentaram positividade para HPV para o método da PCR utilizando os primers GP5+/6+ e MY09/11. O primer GP5+/6+ mostrou-se mais eficiente para detecção do DNA-HPV em amostras anais do que o MY09/11. Foram genotipadas 82 amostras e destas 50% apresentaram positividade para 20 genótipos do HPV, sendo HPV6 (18.84%) o mais prevalente seguido por HPV16 (15.94%) e HPV53 (10.14%). Foi observada múltipla infecção em 24.64%, mostrando variação entre 2 – 8 tipos virais. Conclusões: O uso de ferramentas adicionais como método molecular (PCR e genotipagem) e imunohistoquímico associados ao exame histológico pode oferecer um diagnóstico do HPV mais preciso nas lesões intraepiteliais anais.

Submitted by Karem Dantas (karem.c.dantas@gmail.com) on 2018-10-08T15:18:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PREVALÊNCIA DA INFECÇÃO PELO PAPILOMAVÍRUS HUMANO EM GESTANTES NO MUNICÍPIO DE COARI%2c AMAZONAS%2c BRASIL.pdf: 3095519 bytes, checksum: a84bae2aead7b57e1b795e18a6f2a281 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Roberto Gomes (mrobertosg@gmail.com) on 2018-10-08T15:31:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PREVALÊNCIA DA INFECÇÃO PELO PAPILOMAVÍRUS HUMANO EM GESTANTES NO MUNICÍPIO DE COARI%2c AMAZONAS%2c BRASIL.pdf: 3095519 bytes, checksum: a84bae2aead7b57e1b795e18a6f2a281 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-09T15:41:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PREVALÊNCIA DA INFECÇÃO PELO PAPILOMAVÍRUS HUMANO EM GESTANTES NO MUNICÍPIO DE COARI%2c AMAZONAS%2c BRASIL.pdf: 3095519 bytes, checksum: a84bae2aead7b57e1b795e18a6f2a281 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-09T15:41:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PREVALÊNCIA DA INFECÇÃO PELO PAPILOMAVÍRUS HUMANO EM GESTANTES NO MUNICÍPIO DE COARI%2c AMAZONAS%2c BRASIL.pdf: 3095519 bytes, checksum: a84bae2aead7b57e1b795e18a6f2a281 (MD5) Previous issue date: 2017-12-07 / During pregnancy, pregnant women undergo deep and continuous anatomical and physiological changes so that they can cope with the increased physical and metabolic demands necessary to allow the development of the fetus and the demands of childbirth. These changes make the pregnant woman more susceptible to infections, such as Human Papillomavirus (HPV) infection, which may have consequences for both mother and her baby. The objective of this study was to evaluate the prevalence of HPV infection in pregnant women and to verify the agreement of HPV detection between urine and cervicovaginal samples. For this, pregnant women in the second trimester of gestation under prenatal care at the Basic Health Units (UBS) of the municipality of Coari were invited to participate in this study, having collected cervico-vaginal and urinary samples. Molecular detection of HPV was done through Polymerase Chain Reaction (PCR) using the primer set PGMY09/11. The results showed that 24.6% (27/110) of the pregnant women were infected by HPV. For each type of sample, HPV was found in 13 (11.8%) urine samples and 26 (23.6%) cervicovaginal samples. There was an observed agreement of 86.4% (95% CI, 78.7% - 91.6%) and moderate concordance index among biological samples (kappa = 0.543, 95% CI, 0.372-0.715). A statistically significant association was found between HPV infection and the variables: age of the pregnant women (p = 0.014), primigestation (p = 0.027) and nulliparity (p = 0.046). Therefore, the prevalence of HPV found in our study reinforces the need to obtain more information about HPV infection in the gestational phase of the woman, in view of the complications caused by HPV during pregnancy, such as giant condylomata in the mother and papillomatosis in the baby. / Durante a gravidez, as gestantes sofrem profundas e contínuas alterações anatômicas e fisiológicas para que possam lidar com o aumento das exigências físicas e metabólicas necessárias para permitir o desenvolvimento do feto e as demandas do parto. Estas alterações deixam a gestante mais suscetível às infecções, tais como a infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV), podendo trazer consequências tanto para mãe quanto para o seu concepto. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência da infecção pelo HPV em gestantes e verificar a concordância da detecção do HPV entre amostras de urina e cérvico-vaginal. Grávidas no segundo trimestre de gestação em acompanhamento pré-natal nas Unidades Básicas de Saúde (UBS) do município de Coari foram convidadas a participar desta pesquisa, tendo sido colhidas amostras cérvico-vaginal e urinária. A detecção molecular do HPV foi feita através de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando-se o conjunto de iniciadores PGMY09/11. Os resultados obtidos mostraram que 24,6% (27/110) das gestantes estavam infectadas pelo HPV. Em relação a cada tipo de amostra, foi encontrado HPV em 13 (11,8%) amostras de urina e em 26 (23,6%) amostras cérvico-vaginais. Houve uma concordância observada de 86,4% (IC de 95%, 78,7% - 91,6%) e índice de concordância moderado entre as amostras biológicas (kappa = 0,543, IC de 95%, 0,372 - 0,715). Foi encontrada associação estatisticamente significativa entre a infecção pelo HPV e as variáveis: idade das gestantes (p= 0,014), primigestação (p= 0,027) e nuliparidade (p= 0,046). Portanto, a prevalência do HPV encontrada em nosso estudo, reforça a necessidade de se obter mais informações sobre a infecção pelo HPV na fase gestacional da mulher, tendo em vista as complicações causadas pelo HPV na gestação, como os condilomas gigantes na mãe e a papilomatose respitarória recorrente no concepto.

Seres humanos dependem incessantemente de um sistema de reconhecimento efetivo contra infecções para sobreviver. Dentre as diversas proteínas que compõem a resposta imune inata estão os receptores do tipo Toll (TLR Toll-like Receptors), que possuem a função de reconhecer padrões moleculares associados a patógenos e dar início a uma resposta imune adequada. O carcinoma do colo uterino é uma das principais causas de morte de mulheres por câncer mundialmente, sendo o terceiro tipo de câncer mais comum entre mulheres. Este tipo de neoplasia é vinculada etiologicamente à infecção pelo Papilomavírus humano (HPV). Dentre as principais proteínas virais, E6 e E7 são responsáveis pela manipulação dos processos celulares para promover ciclo viral, sendo essenciais no processo de transformação celular. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi investigar a importância da via de sinalização de TLRs sobre a infecção por HPV. O polimorfismo rs5743836, na região promotora de TLR9, capaz de alterar a expressão deste receptor, foi estudado quanto à influência sobre a história natural da infecção por HPV em uma coorte de mulheres brasileiras; nenhuma associação relevante foi encontrada, indicando que este polimorfismo não interfere significativamente na resposta à infecção e risco de desenvolvimento de lesões no colo do útero causadas por HPV. Proteínas componentes da via de TLRs demonstraram serem alvos de interação com E6 de HPV16; dentre elas, o notável adaptador MyD88 e IKKε, enzima ativadora de importantes transfatores do sistema imune. Estas interações foram aqui estudadas. A interação de E6 com MyD88 resultou em estabilização da proteína viral, o que parece não depender do sítio LxxLL presente em MyD88, como ocorre com outros parceiros moleculares de E6. O sítio de interação de E6 com IKKε coincide com a região onde se localiza o sítio catalítico desta enzima, sugerindo a ação de E6 na ativação de proteínas alvo de IKKε. Esta interação foi observada em queratinócitos, células alvo das infecções por HPV. A produção de citocinas foi afetada por E6 de HPV16, resultando num aumento da quantidade de IL-8 e IL-6; a indução desta citocina poderia ser explicada pela ativação de IKKε. Estes resultados apontam para a capacidade do HPV16 de interferir com o sistema imune, contribuindo para o processo de carcinogênese. / Humans constantly rely on an effective recognition system against infections in order to survive. Among various proteins that compose the innate immune response, Toll-like Receptors (TLRs) have the role to recognize pathogen associated molecular patterns and initiate a proper immune response. The cervical cancer is one of the main causes of women death worldwide, being the third most common cancer type among women. This type of neoplasia is etiologically associated with the Human papillomavirus (HPV) infection. E6 and E7, two main viral proteins, are responsible for manipulating the cellular processes to promote the virus\' life-cycle, being essential to the cellular transformation process. In the context, the objective of this work was to investigate the relevance of the TLR signaling pathway on the HPV infection. The rs5743836 polymorphism, in the TLR9 promoter region, capable of altering this receptor\'s expression, was studied regarding its influence on the natural history of HPV infection in a Brazilian women cohort; no relevant association was found, indicating that this polymorphism does not interfere significantly in the infection response and risk of developing cervix lesions caused by HPV. Component proteins of TLR pathway were shown to be interaction targets of HPV16 E6; among them, the notable adaptor MyD88 and IKKε, enzyme that activates important immune system transfactors. These interactions were studied in this work. The interaction of E6 with MyD88 resulted in the stabilization of the viral protein, which seems independent of the LxxLL site present on MyD88, as in other E6 molecular partners. The interaction site on IKK with E6 matches with the region containing the enzyme\'s catalytic site, suggesting an influence of E6 in the activation of IKKε target proteins. This interaction was observed in keratinocytes, natural targets of HPV infections. The cytokines production was altered by HPV16 E6, resulting in an increase of IL-8 and IL-6 concentration; the induction of the latter could be explained by the activation of IKKε. These results point to the ability of HPV16 of interfering with the immune system, contributing to the carcinogenesis process.