Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Danilo Pedro Streit Junior / Resumo: A criopreservação é uma ferramenta biotecnológica que permite congelar e estocar, por longos períodos células, tecidos, órgãos e embriões; contudo, o sucesso desta tecnologia, para peixes, é bem estabelecida apenas para as células germinativas masculinas, conservando assim, parcialmente material genético de uma população. Desta forma objetivou-se estabelecer um eficaz protocolo de crioconservação para embriões de peixes neotropicais, visando à preservação total da bagagem genética da espécie. Utilizou-se como modelo biológico embriões de Prochilodus lineatus, que foram avaliados quanto a sua sensibilidade ao frio, à toxicidade dos crioprotetores dimetil formamida, dimetil sulfóxido, propileno glicol e glicerol, aos protocolos de resfriamento nos estágios de gastrulação e organogênese com seis e vinte somitos e a vitrificação nos estágios de organogênese com seis e vinte somitos. As amostras foram fixadas em solução de paraformaldeído a 4% e glutaraldeído a 2% em tampão fosfato Sorensen 0,2 M pH 7,2, incluídos em metacrilato glicol, seccionados a 3 e 5 µm de espessura e corados com hematoxilina-eosina, azul de toluidína, P.A.S. e metanil yellow. A fase embrionária de organogênese com 20 somitos foi a mais resistente ao frio e a toxicidade dos crioprotetores. Apesar das altas taxas de larvas vivas nos tratamento de resfriamento, em nenhum dos protocolos propostos obteve-se êxito na preservação das estruturas embrionárias, sendo verificado graves danos morfológicos como corpo reduzido e com sinuosidades, nadadeiras com crescimento desordenado das células, alta concentração de células necróticas na região do encéfalo, má-formação das vesículas ópticas e óticas, má-formação das narinas, fusão desordenada dos mioblastos, retração do vitelo, espaços entre as células provocadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation is a biotechnological tool that allows you to freeze and store cells, tissues, organs and embryos for long periods; however, the success of this technology, to the fish, it is established only from the male germ cells, preserving, partly the material of a population. Therefore the purpose was to establish an effective protocol of cryopreservation to embryos of neotropical fish, in order to preserv all the genetic load of the species. As biological model of this research it was used Prochilodus lineatus type of embryos, which were evaluated regarding to their sensibility to cold temperatures, the toxicity of cryoprotectants dimethyl formamide, dimethyl sulfoxide, propylene glycol and glycerol, also the protocols of cooling down on the gastrulation and organogenesis stages with six and twenty somites, and the vitrification on the organogenesis stages with six and twenty somites. The samples were fixed in solutions with 4% of paraformaldehyde and 2% of glutaraldehyde, Sorensen phosphate with 0.2 M pH 7.2, included in glycol methacrylate, sectioned at 3 and 5 µm of thickness and stained with hematoxylin-eosin, Blue toluidine, PAS and Metanil Yellow. The embryonic phase of organogenesis with 20 somites was the most resistant to cold and toxicity of cryoprotectants. Despite of the high rates of alived larvae founded in the cooling treatment, none of the proposed protocols succedded in the preservation of the embryonic structures, it could be seen severe morphological damages as reduction in the body and sinuous in the forms, with fins disorderly cell growth, high concentration of necrotic cells on region of the brain, malformation of the ear and eyes vesicle, malformation of the nostrils, disorderly fusion of the myoblasts, retraction of the yolk, spaces between cells caused by the formation of ice crystals... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Geraldo Moretto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências Tecnológicas, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-12Bitstream added on 2014-06-13T18:47:08Z : No. of bitstreams: 1 carmassi_al_dr_rcla.pdf: 654610 bytes, checksum: 300ab16c625429a91d8a645b19d6bd5c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A microbacia do Piracuama é uma das inúmeras redes hidrográficas que descem das encostas da serra da Mantiqueira oriental e vão desembocar na margem esquerda do rio Paraíba do Sul na sua porção média-superior. Os principais riachos integrantes dessa microbacia são o rio Piracuama e o ribeirão dos Oliveiras, que nascem em diferentes altitudes, correm paralelamente à serra da Mantiqueira e ao rio Paraíba do Sul, confluem na região do pediplano e seguem em direção ao vale até sua foz. O objetivo do presente trabalho foi definir como as comunidades de peixes dessa microbacia estão estruturadas e como variam suas composições no tempo e no espaço, bem como analisar os aspectos populacionais das principais espécies existentes em seus corpos d’água. De modo a contemplar regiões de encosta, pediplano e vale, doze pontos de coleta foram selecionados, sendo oito pertencentes à rede de drenagem do rio Piracuama e quatro à rede de drenagem do ribeirão dos Oliveiras. As coletas aconteceram ao longo de um ano, sendo a pesca elétrica e as redes-de espera os apetrechos de pesca utilizados. Variáveis de estrutura de habitat e físicas e químicas da água também foram coletadas. Foram capturados 1979 indivíduos, pertencentes a 30 espécies, 22 gêneros, 12 famílias e 6 ordens. A espécie mais abundante foi Trichomycterus itatiayae e o ponto amostral com a maior captura localizou-se no rio Piracuama, no pediplano da serra da Mantiqueira oriental. Um gradiente crescente da diversidade, riqueza e equabilidade foi observado da encosta em direção ao vale, visto que o aumento da complexidade do habitat ocorreu ao longo do canal e propiciou a adição de novas espécies no sentido montante-jusante. Na dimensão espacial, variações significativas foram encontradas para os índices de diversidade e riqueza, sendo os maiores... / The Piracuama watershed is one of many hydrografic systems that descend from the slopes of the eastern Serra da Mantiqueira mountains and end up on the left bank of the Paraiba do Sul River in its upper-middle portion. The main streams of this watershed are the Piracuama and Oliveiras Rivers, which headwaters are at different altitudes and run parallely to the Serra da Mantiqueira and Paraiba do Sul River converging to the region of piedmont and following into the valley til its mouth. The aim of this work was determining how the Piracuama watershed fish communities are structured and how their composition varies in space and time, as well as analyze the population aspects of the main species found in their waters. In order to include regions of the slope, piedmont and the valley, twelve sites were marked, eight belonging to the drainage system of the Piracuama river and four to the drainage system of the Oliveiras river. Sampling took place over a year, and the electrofishing and gill nets were the most used equipments. Variables of habitats structures and physicochemical properties of water were also collected. A total of 1979 individuals were captured of 30 species, 22 genera, 12 families and 6 orders. The most abundant species was Trichomycterus itatiayae and the biggest sample point was located on the Piracuama river, in the piedmont of the eastern Serra da Mantiqueira. An increasing gradient of diversity, richness and evenness was observed from the slope to the valley, since the increased complexity of the habitat occurred along the canal and allowed the addition of new species in the upstream-downstream. In the spatial dimension, significant variations were found for the indices of diversity and richness, and the highest values were found in piedmont. In the temporal dimension, no significant variation in diversity, richness and... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Fausto Foresti / Coorientador: Sergio Ricardo Batlouni / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Luiz Renato de França / Banca: Maria Inês Borella / Banca: Rafael Henrique Nobrega / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a possibilidade de induzir a sincronização da maturação ovariana em um plantel de matrizes de pacu (Piaractus mesopotamicus) por meio de uso de implantes com análogo do hormônio liberador de gonadotrofinas do salmão (sGnRHa). Além disso, complementarmente ao estudo com as fêmeas, avaliamos as características seminais dos reprodutores ao longo do ciclo reprodutivo e a possibilidade de reespermiação. Para tal, implantes de sGnRHa foram utilizados em fêmeas, reprodutores foram espermiados ao longo da estação reprodutiva e a reespermiação foi realizada em machos espermiados no inicio e novamente no meio da estação. Variações temporais e entre grupos experimentais na expressão gênica do hormônio do crescimento (gh) e subunidade beta do hormônio luteinizante (lhb) e do folículo estimulante (fshb), bem como as concentrações plasmáticas de esteroides gonadais foram determinadas em machos e fêmeas e utilizadas como ferramentas auxiliares na interpretação dos resultados. Nas fêmeas, aos 35 dias após a introdução do implante (durante o período de desova) as expressões gênicas da lhb e do fshb estavam aumentadas nas tratadas e inibidas nas controles, respectivamente, sugerindo um efeito indutor do lhb pelo implante. Nos machos, o volume de sêmen liberado aumentou ao longo do período reprodutivo, no entanto, os índices relacionados com a qualidade dos espermatozoides, principalmente a qualidade do DNA, que decresceu do começo para o término da estação. A expressão do lhb e gh estavam aumentadas no grupo do final da estação em relação ao grupo reespermiado, sugerindo uma associação entre a expressão gênica e o estádio de maturação dos testículos. Além disso, elevações substanciais de 11-cetotestosterona durante a indução hormonal, no início da estação reprodutiva e nos animais reespermiados... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the possibility of ovarian maturation synchronization in a breeding herd of pacu (Piaractus mesopotamicus) by using slow-release implants with salmon gonadotropin releasing hormone analogue (sGnRHa). Furthermore, in addition of female's study, we evaluated the seminal characteristics throughout of the breeding season and the possibility of restripping. In this regard, females were implanted with sGnRHa pellets, and males were spermiated during of the breeding season and restripping were performed in males spermiated at the beginning and spermiated again at the middle of the season. To help in understanding the results, temporal variations between experimental groups of growth hormone (gh), luteinizing hormone beta subunit (lhb) and follicle-stimulating hormone beta subunit (fshb) gene expressions, and gonadal steroids concentrations were determined in males and females. In females, 35 days after pellets implantation (during the spawning period) the gene expression of lhb and fshb were increased in the treated and inhibited in the controls group, respectively, suggesting an lhb inducing effect by implant. In males, released milt volume increased throughout the breeding season, however, the indices related to sperm quality, especially to the DNA quality, were lower in the end than beginning of the season. The expressions of lhb, and gh were increased for the end season group against the reespermiado group, suggesting an association between gene expression and the maturation stage of the testes. Furthermore, the substantial increases of 11-ketotestosterone after hormonal induction in the beginning and restriping group correlated with good semen quality. We conclude that the using of implants may increases the frequency of the apt females in the spawning season. The using of semen at the end of the breeding season should be avoided and restripping is an alternative ... / Doutor

Orientador : José Marcelo Rocha Aranha / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia. Defesa: Curitiba, 12/02/2008 / Inclui bibliografia / Area de concentração: Zoologia / Na Floresta Atlântica encontram-se inúmeros corpos d’água que estão entre os primeiros ambientes a sofrer com as degradações antropogênicas. Este ecossistema é tido, atualmente, como um dos mais ricos do planeta em biodiversidade, entretanto, é também considerado um dos mais ameaçados. Um grande problema ocasionado pelas atividades antrópicas na Floresta Atlântica é a introdução de peixes exóticos que pode causar vários danos à comunidade nativa. O presente estudo foi desenvolvido na bacia do rio Guaraguaçu (25º45’W e 48º35’S) que se encontra no domínio da Floresta Atlântica. Com a finalidade de detectar a presença de espécies exóticas na bacia do rio Guaraguaçu foram desenvolvidos estudos preliminares pelo Laboratório de Ecologia de Rios da UFPR (EcoRios), nos quais foi constatada a presença do Bagre Africano Clarias gariepinus (Burchell, 1822) (Clariidae, Siluriformes), tanto por meio de entrevistas com a comunidade local, como pela captura de exemplares de vários tamanhos. Uma vez que esta é uma espécie introduzida, foram desenvolvidos estudos sobre sua biologia neste local. Foram capturados ao todo 63 (sessenta e três) indivíduos de Clarias gariepinus, 30 machos e 33 fêmeas, com comprimento e massa totais variando de 334-885 mm e 262,88-4550,00 g, respectivamente, em diferentes trechos da bacia. O conteúdo estomacal de 62 indivíduos foi analisado, apresentando um total de 54 itens. A espécie foi considerada onívora, pois os itens alimentares variaram desde restos vegetais até vertebrados, como peixes e anfíbios. A atividade alimentar da espécie foi considerada intensa. Ocorreram diferenças temporais na dieta e em relação aos tamanhos dos indivíduos. O período reprodutivo da espécie provavelmente ocorre entre setembro e janeiro, pois uma maior freqüência de fêmeas e machos reprodutivos foi encontrada nesta época, assim como as relações gonadossomática e hepatossomática para ambos os sexos apresentaram um pico neste período. O período reprodutivo da espécie possivelmente está associado ao aumento da temperatura da água e da pluviosidade no local. A presença da gramínea invasora Echinochloa polystachya nas margens do rio possivelmente é um fator facilitador de seu provável estabelecimento neste local. Características como rusticidade, tolerância a variações ambientais, grande porte, voracidade, plasticidade na dieta, presentes no bagre africano são consideradas como fundamentais para que uma espécie introduzida se estabeleça em um novo ambiente. Por fim, os estudos sobre a biologia do bagre africano são necessários para que futuras propostas de manejo sejam realizadas no rio Guaraguaçu, porém em conjunto com a pesquisa científica é fundamental a conscientização da população que está associada ao local para que sejam evitadas novas introduções, assim como a legislação e fiscalização devem ser realizadas de forma eficiente para que o problema de introduções de espécies seja amenizado e a biodiversidade dos ambientes naturais como da Floresta Atlântica seja conservada. / In the Atlantic Forest there are countless water bodies which, among others, are the first sorts of environments to undergo anthropic degradations. This ecosystem is presently considered one of richest in the world concerning biodiversity, nevertheless, is extremely threatened. One serious problem induced by anthropic activities in the Atlantic Forest is the introduction of exotic fish species that possibly injures native communities. The present study was developed in Guaraguaçu River Basin (25º45’W; 48º35’S) in the Atlantic Forest domains. Preliminary investigations aiming to detect the presence of exotic species in Guaraguaçu River Basin were done by Laboratório de Ecologia de Rios, UFPR (EcoRios) through interviews with the local human community and also collecting specimens of different sizes. The African catfish Clarias gariepinus (Burchell, 1822) (Clariidae, Siluriformes) was recorded in this area and efforts were concentrated on the study of this introduced species’ biology. The amount of 63 individuals were captured (30 males and 33 females) with length and total weight ranging from 334-885 mm and 262.88- 4550.00 g, respectively, in different stretches of the basin. The stomach content of 62 specimens was analyzed and 54 items were encountered. This species was considered omnivorous, as its alimentary items varied from plant fragments to vertebrates, such as fishes and amphibians. Feeding activity of C. gariepinus was considered intense. There were temporal discrepancies in feeding habits and also in regards to the size of specimens. The breeding season probably occurs from September to January, because a higher frequency of reproductive males and females was observed along this period when the gonadosomatic and hepatosomatic indices for both genders were also higher. This species breeding period is possibly associated to the increase of water temperature and rain precipitation. The presence of the invasive grass Echinochloa polystachya on the river margins is perhaps a factor that eases its probable establishment in that place. Features like rusticity, tolerance to environmental variations, large size, voracity and plasticity in diet observed in the African catfish are taken as fundamental for an introduced species to remain in the new place. At last, the studies regarding the African catfish biology are essential for future management proposals to be undertaken in Guaraguaçu River. However, together with the scientific approach, the understanding of the local human communities is crucial to avoid new insertions of exotic species. Likewise, legislation and legal inspection must be effectively executed so that the issue of introducing species is softened and the biodiversity of natural environments, such as the Atlantic Forest, can be preserved.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-11Bitstream added on 2014-06-13T21:01:14Z : No. of bitstreams: 1 sanches_ea_dr_jabo.pdf: 2259186 bytes, checksum: 4918c5b558ff28f27002661990f850b9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do trabalho foi de adaptar metodologias de análises espermáticas e aprimorar o processo de fertilização artificial e condições de estocagem de gametas de surubim-do-paraiba, Steindachneridion parahybae: espécie de peixe criticamente ameaçada de extinção. Para tanto, foram realizados quatro ensaios experimentais: (1) validação de método e avaliação dos parâmetros espermáticos por meio de software livre. (2) determinação da dose inseminante e volume de água empregados na fertilização artificial; (3) estocagem de ovócitos in natura em quatro temperaturas ao longo de 355 minutos; (4) estocagem do sêmen in natura em quatro temperaturas ao longo 112h. Observou-se que o método de análise espermática utilizando o software de código aberto ImageJ/plugin CASA é uma ferramenta eficiente, exata, objetiva e barata, além de possibilitar uma nova perspectiva de análises em peixes nativos. As configurações estabelecidas no presente trabalho poderão servir de base para novos trabalhos relacionados às análises espermáticas do surubim-do-paraíba, bem como de outras espécies. Verificou-se que a quantidade de espermatozóides e o volume de água interferem diretamente no procedimento de fertilização artificial, com melhores resultados na utilização de 5,5×106 espermatozóides ovócito-1 e 1,0mL de água g-1 de ovócitos. Foi observado que a estocagem de ovócitos e sêmen de forma in natura não é recomendada em ambientes com temperaturas superiores a 25ºC e inferiores a 15ºC. Temperaturas intermediárias (15-25ºC) possibilitam melhores condições e prolongam a qualidade dos gametas, entretanto, recomenda-se em procedimentos de fertilização artificial da espécie, a coleta do sêmen antes que os ovócitos. Os resultados obtidos no presente trabalho além de proporcionarem aumento das... / The aim was to adapt methodologies of sperm analysis and to improve the artificial fertilization process and gamete storage conditions of surubim-of-paraiba, Steindachneridion parahybae: critically endangered fish species. So that, four experimental tests were performed: (1) validation of method and evaluation of sperm parameters using free software. (2) determination of the inseminating dose and water volume used in artificial fertilization, (3) storage of fresh oocytes into four temperatures over 355 minutes, (4) storage of fresh semen into four temperatures over 112h. It was observed that the sperm analysis method using open source software ImageJ/plugin CASA is an effective tool, accurate, objective and inexpensive, besides enables a new perspective of the analysis on the native fish. The settings established in this study could serve as a basis for further work related at sperm analysis of surubim-do-paraiba and other species. It was found that sperm quantity and water volume interfere directly in the procedure of artificial fertilization, with improved results on usage of 5.5×106 spermatozoa oocyte-1 and 1.0 ml of water g-1 of oocyte. It was observed that the fresh oocytes and sperm storage is not recommended in environments with temperatures above 25ºC and below 15ºC. Intermediate temperatures (15-25ºC) enable better results and prolong the gametes quality, however, it is recommended in the artificial fertilization procedures the semen collection before the oocytes. The results obtained in this study providing increased rates of fertilization and hatching, besides to allow gametes optimization through of the utilization of controlled manner, and with satisfactory quality for more time after collection. Besides, these results provide a basis for future research, contributing to the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-12Bitstream added on 2014-06-13T18:40:41Z : No. of bitstreams: 1 000738084.pdf: 1485351 bytes, checksum: 44c3fe5b1a2d1c123e48af427ea7f8ce (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes indutores hormonais na evolução do processo de maturação final e ovulação em Leporinus macrocephalus. Os animais (n = 42) foram submetidos à reprodução induzida através de injeções intramusculares dos seguintes hormônios: extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC) aplicado em duas doses (0,5 e 5,0 mg kg-1 com intervalo de 12 h entre as aplicações); hormônio liberador de gonadotrofina na forma líquida (mGnRHa – L) aplicado em dose única (0,5 mg kg-1); hormônio liberador de gonadotrofina na forma sólida (mGnRHa – S) aplicado em dose única (0,5 mg kg-1) e gonadotrofina coriônica humana (hCG) aplicado em duas doses (5 e 10 UI g-1 com intervalo de 12 h entre as aplicações). A administração de EBHC promoveu altas taxas de fertilização (63,57%) e eclosão (59,07%), porém apenas 71,4% das fêmeas ovularam. Por outro lado, o mGnRHa – S promoveu elevado percentual de desova (100%), taxas de fertilização (93,75%) e eclosão (89,15%). O mGnRHa – L apesar de ter causado 100% de ovulação, proporcionou baixas taxas de fertilização (6,25%) e eclosão (0%). Já o animais induzidos com hCG não ovularam (0%). A indução a desova com mGnRHa – L e hCG causou uma rápida elevação na concentração plasmática dos esteroides gonadais (E2 e 17α – OHP) após a primeira dose. Por outro lado, nos tratamentos EBHC e mGnRH – S observamos um aumento progressivo e regular nos níveis dos esteroides. O EBHC, permaneceu com um percentual elevado de ovócitos maduros com quebra da vesícula germinativa (GVBD) remanescente nos ovários (22,01%) e que não atingiram a ovulação. Por outro lado, a frequência de folículos pós – ovulatórios (FPO) nos tratamentos mGnRHa – L (26,69%) e mGnRHa – S (52,89%) aumentou após uma única dose hormonal. Assim, concluímos que a primeira dose de EBHC é responsável pela maturação.... / The aim of this study was to evaluate the effect of different hormonal inductors in the progress of final maturation and ovulation in Leporinus macrocephalus. The animal ( n = 42) were subjected to induced reproduction through intramuscular injections of following hormones: carp pituitary extract (CPE) injected in two doses (0,5 and 5,0 mg kg-1 with a 12 h interval between the doses); gonadotropin releasing hormone in liquid form (mGnRHa - L) injected with a single dose; gonadotropin releasing hormone in solid form (mGnRHa - S) injected with a single dose and human chorionic gonadotropin (hCG) injected in two doses (5 and 10 UI g-1 with a 12 h interval between the doses). The administration of CPE promoted high fertilization (63.57%) and hatching rate (59.07%), but only 71.4% of the females ovulated. On the other hand, mGnRHa - S promoted high spawning percentage (100%), fertilization (93.75%), and hatching (89.15%). The mGnRHa - L although it caused a 100% ovulation, resulted low fertilization (6.25%), and hatching rates (0%). The induced with hCG cannot cause the ovulation (0%). Induction spawning with mGnRHa - L and hCG caused a rapid increase in plasma concentrations of gonadal steroids (E2 and 17α - OHP) after the first dose. However, in animals induced with CPE and mGnRH - S observed a progressive increase and steady in steroid levels. The treatment CPE, despite have promoted high rates of fertilization and hatching, remained with a high percentage of mature oocytes with germinal vesicle breakdown (GVBD) remaining in the ovaries (22.01%) and who did not achieve ovulation. On the other hand, there was an increase in the frequency of follicles post - ovulatory (FPO) in the treatment mGnRHa - L (26.69%) and mGnRHa - S (52.89%) after administration of a single dose hormonal. Thus, we conclude that the first dose CPE is responsible for the final maturation and second dose by the ovulation ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:40:28Z : No. of bitstreams: 1 paes_mcf_dr_jabo.pdf: 652606 bytes, checksum: 36fc9416b423c16aa4b65e4486ef48e2 (MD5) / O gênero Brycon tem despertado grande interesse nas instituições de pesquisa, não só pela excelente qualidade e sabor da carne, mas também por características adequadas à pesca esportiva, rápido crescimento e ganho de peso. A piracanjuba tem sofrido drástica redução dos estoques em decorrência da ação antrópica estando na lista do IBAMA de espécies ameaçadas de extinção. A criopreservação de gametas e embriões de espécies migradoras e espécies raras surge como uma alternativa para a reprodução, repovoamento, criação de banco genético, transporte e possível obtenção de larvas ao longo do ano. Assim, este trabalho teve por objetivo ampliar os conhecimentos de criogenia utilizando embriões de piracanjuba (Brycon orbignyanus), com o intuito de estabelecer um protocolo de resfriamento para ser utilizado em projetos de reprodução e conservação desta espécie. Após a obtenção dos embriões por meio de reprodução induzida, estes, quando na fase de fechamento do blastóporo, foram contados e subdivididos em parcelas, considerando como unidade experimental um tubo (vacutainer) contendo 100 embriões. Cada tratamento teve oito repetições. Com exceção dos grupos controles, os demais tratamentos foram submetidos a diferentes combinações e concentrações de crioprotetores (sacarose, metanol, etilenoglicol e DMSO), diferentes temperaturas (0,0±2,0°C e 8,0±2,0ºC) e tempos de estocagem em refrigerador (6h, 10h, 24h, 72h, 168h). Transcorridos os tempos de estocagem, os embriões foram aclimatados, rehidratados e transferidos para incubadoras para monitoramento do desenvolvimento e aferições das taxas de eclosão, sobrevivência e deformidade. Para avaliar o desenvolvimento de tecidos e células após a realização do experimento, amostras foram fixadas, observadas em estereomicroscópio e... / The genus Brycon have aroused great interest of research institutions, not only for the excellent quality and flavor of the meat, but also for characteristics suited to sport fishing, quick growth and weight gain. Piracanjuba suffers drastic reduction in natural environment as a result of human action and is in the list of endangered species of IBAMA. The cryopreservation of gametes and embryos of migratory and rare species is an alternative to reproduction, repopulation, creating genetic database, transport of larvae and obtainment of larvae throughout the year. The aim of this study is expand the knowledge of cryogenics using embryos of piracanjuba (Brycon orbignyanus) and establishing a cooling protocol to be used in projects of reproduction and conservation of this species. After obtaining embryos from induced reproduction, those ones that were in this phase of blastopore closuring, were colected, counted and divided into groups, considering as experimental unit each tube (vacutainer) containing 100 embryos. Each treatment had eight replications. Except for the control groups, the other treatments were subjected to different combinations and concentrations of cryoprotectants (sucrose, methanol, ethylene glycol and DMSO), different temperatures (0,0 ± 2,0ºC and 8,0 ± 2,0°C) and storage time on refrigerator (6h, 10h, 24h, 72h, 168h). Elapsed times of storage, the embryos were acclimated, washed and transferred to incubators for monitoring the development of measurements and hatching rates, survival and deformity. To evaluate the development of tissues and structures after the experiment, samples were put on fixative solution and observed under stereomicroscope, and after that were processed and analyzed by light microscopy and transmission electron microscopy. It was observed that... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-01Bitstream added on 2015-03-03T12:06:19Z : No. of bitstreams: 1 000805035.pdf: 2411576 bytes, checksum: 9f0726883ead4b9a53b80eccde5a3661 (MD5) / Neste estudo, caracterizamos o nicho espermatogonial em carpa avaliando a expressão do amh em testículos com alta ou baixa expressão. Para tanto, vinte carpas comum adultas receberam pulsos de BrdU (5-bromo-2'-deoxiuridina), durante 3 dias consecutivos (2 injeções intraperitoneal/dia), e os testículo foram amostrados 4 horas, 1, 2 e 3 semanas após o último pulso. As espermatogônias do tipo A indiferenciada foram as únicas células germinativas capazes de reter BrdU após 3 semanas. Curiosamente, o BrdU diluiu mais rapidamente entre as espermatogônias troncoativa enquanto que nas espermatogônias troncoreserva, manteve-se estável. As espermatogônias tronco -reserva? foram localizados próximas do interstício, enquanto as espermatogônias tronco -ativa? foram encontrados na região intertubular. Algumas células de Sertoli foram BrdU-positivas depois de 3 semanas de pulso. Entre as células de Sertoli BrdU-positivas, ~ 30-40% estão livres, enquanto que ~ 60-70% estão associadas com células germinativas. Isto sugere a existência de células de Sertoli tronco, que estão localizados no nicho espermatogonial. O gene amh foi clonado e caracterizado em carpa comum e sua expressão ocorre nas células de Sertoli que envolvem espermatogônias indiferenciadas. Os hormônios folículo-estimulante e estrógeno diminuem a expressão do amh. Em animais que possuem alta expressão de amh, possuem pouca atividade proliferativa, já com elevada proliferação, os níveis de amh diminuem significativamente. Desta forma, sugere-se que a dimunuição do amh, cria uma condição permissiva para proliferação e diferenciação das espermatogônias em carpa. Tais resultados servirão de base para aplicar este conhecimento para mediar a puberdade precoce em espécies nativas/exóticas de importância econômica na aquicultura / In this study, we start characterizing the spermatogonial niche in carp by evaluating amh expression in testes with high or low proliferative activity. 20 adult carp received pulses of BrdU (5-Bromo-2’-deoxyuridine), during 3 consecutive days (2 intraperitoneal injections/day), and testis was sample dafter 4 hours, and 1, 2 and 3 weeks after the last pulse. Type Aund were the only germ cells able to retain BrdU after a long period of chase (3 weeks). Interestingly, BrdU disappeared more quickly from -active? stem cell while in -reserve? stem cell, it remained stable. The -reserve? stem cell label-retaining cells were located near the interstitium, while -active? stem cell were found in the intertubular area. Some Sertoli cells were BrdU-positive after 3 weeks of pulse. Among the slow-dividing, BrdU-positive Sertoli cells, ~30-40% are -free?, and ~60-70% associated with germ cells. This suggests the existence of Sertoli stem cells which are located in the spermatogonial niche. The amh gene was cloned and characterized in common carp, and the amh is expressed in Sertoli cells involving undifferentiated spermatogonia. The follicle stimulating hormone and estrogen decrease amh expression. It was also shown that animals with high expression of amh, have low proliferative activity. When the testes with high proliferation, amh levels decrease significantly. Thus, it is suggested that counts down the amh creates a permissive condition for proliferation and differentiation of spermatogonial in carp. These results provide a basis for applying this knowledge to mediate early puberty in exotic/native species economically important in aquaculture

Orientadora: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Erico Luis Hoshiba Takahashi / Banca: George Shigueki Yasui / Resumo: O presente estudo teve como objetivo analisar os índices reprodutivos e definir os aspectos reprodutivos da espécie Astyanax fasciatus no Córrego Rico, São Paulo, Brasil e confirmar duas hipóteses - Esta espécie possui desova do tipo parcelada neste ambiente especificamente e uma amostra da população colocada em cativeiro pode desenvolver a maturação gonadal. Foram capturados 40 exemplares da espécie, por meio de coletas mensais padronizadas realizadas no período de outubro de 2012 a janeiro de 2013 por meio de rede espera. Além disso, mais 120 exemplares de A. fasciatus foram coletados e transferidos para um tanque no Centro de Aquicultura da UNESP, Jaboticabal, SP e mantidos em cativeiro. Coletas mensais também foram realizadas no mesmo período das coletas in situ para biometria e análise histológica das gônadas. A hipótese de desova parcelada foi corroborada pela análise concomitante da variação dos índices gonadossomático, hepatossomático, fator de condição e volume gonadal além da análise histológica observando fêmeas parcialmente desovadas em mais de uma coleta. A hipótese de maturação gonadal em ambiente de cativeiro também foi corroborada por meio de análise histológica associada à análise dos índices reprodutivos. Nesse contexto, os resultados obtidos geram subsídios para estudos no tocante à biologia reprodutiva e sua aplicação na reprodução em ambiente de aquicultura / Abstract: This study aim to study the reproductive biology of redtail tetra Astyanax fasciatus from a stream in Jaboticabal,SP and confirm two hypothesis - this specie have a fractional spawning in this place specifically and A. fasciatus can maturate gonads in capitivity environment. Adult males and females (n=40) were sampled monthly during the rainy season from October 2012 to January 2013 by gillnets. Besides, more 120 adult males and females were sampled and transferred to a pond in UNESP Aquaculture Center, Jaboticabal,SP. Monthly samples were realized in the same period that in situ samples for biometrics and histological analysis. The hypothesis of fractional spawning was corroborated by concurrent analysis of gonadosomatic index, hepatosomatic index, condition factor and gonadal volume in addition to histological analysis watching females partially spawned in more than one sample. The hypothesis of gonadal maturation in captivity environment also be corroborated by histological analysis in addition to reproductive indexes analyslis. In this context, the results generate data for studies regarding the reproductive biology and its application in breeding aquacultural environment / Mestre