Neste trabalho avaliamos se as Natterinas (NTR), proteínas majoritárias presentes no veneno do peixe peçonhento T. nattereri, são as responsáveis pela a ação inibitória do recrutamento de leucócitos durante a inflamação e os mecanismos moleculares envolvidos neste processo. Utilizando análises de microscopia intravital tratamos os animais com as NTR e 6 h depois induzimos o rolamento de leucócitos com KC, LPS ou agonista de PAR-4 sobre a microcirculação. Os dados mostraram que o tratamento com as NTR inibem o rolamento e a migração de leucócitos induzido pela KC e pelo LPS. Além disso, o efeito inibitório das NTR depende parcialmente da sua atividade proteásica e não está relacionado com a clivagem proteolítica da quimiocina KC ou com a indução de reguladores endógenos como IL-10, corticóides, a enzima HO-1 ou IL-1Ra. O efeito inibitório parece ser dependente da ativação da sinalização TLR/MyD88 e PI3K e das proteínas serina/treonina fosfatases, contribuindo de forma significativa na sobrevida de animais induzidos a endotoxemia por LPS. / In this work we evaluated whether Natterins (NTR) the majority proteins present in the venom of Thalassophryne nattereri venomous fish are responsible for the inhibitory action of leukocyte recruitment during inflammation and the molecular mechanisms involved in this process. Using intravital microscopy analysis we treated the animals with NTR and 6 h after we induced the leukocyte rolling by topical of KC, LPS or agonist of PAR-4 on the microcirculation. The data showed that treatment with NTR inhibited the leukocyte rolling and migration induced by LPS and KC. Moreover, the inhibitory effect of NTR depends partly on its proteinase activity and is not related to the proteolytic cleavage of the chemokine or KC nor with the induction of endogenous regulators such as IL-10, corticoids, the HO-1 or IL-1Ra. The inhibitory effect is dependent on the activation of PI3K and TLR/MyD88 signaling and protein serine/threonine phosphatases, contributing significantly to the survival of animals endotoxemia induced by LPS.

Dos peixes peçonhentos encontrados no Brasil os bagres destacam-se pelo número de acidentes provocados. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os componentes tóxicos presentes na peçonha e no muco. Obtivemos uma média protéica de 3,1 mg/mL (peçonha) e 1,4 mg/mL (muco). O perfil eletroforético da peçonha e do muco possui poucas bandas protéicas. O fracionamento isolou 11 frações para peçonha e 13 frações para o muco. Com relação às atividades biológicas avaliadas, as frações peptídicas induziram danos teciduais ao passo que as frações protéicas induziram processo inflamatório. Isolamos duas frações com atividade antimicrobiana para cada secreção. Isolamos uma toxina de 65,1 kDa que apresenta homologia com Wap65 e análise por microscopia intravital revelou que esta proteína causa aumento dos leucócitos rolantes assim como a presença de leucócitos aderidos ao endotélio. Nossos resultados indicam uma diferença entre os componentes protéicos e peptídicos do muco e da peçonha. Finalmente, conseguimos isolar e caracterizar a proteína Wap65 da peçonha deste peixe. / Of the venomous fish found in Brazil, catfish noteworthy for the number of accidents they cause. The objective of this study was to characterize the toxic compounds present in the venom and mucus. We obtained an average protein intake of 3,1 mg / mL (venom) and 1,4 mg / mL (mucus). The electrophoretic profile of venom and mucus has a few protein bands. Fractionation isolated 11 fractions to the venom and 13 fractions to the mucus. With respect to biological activities evaluated, the peptide fractions induced tissue damage while the protein fractions induced inflammation. We isolated two fractions with antimicrobial activity for each sample. We isolated a toxin of 65,1 kDa which shows homology with Wap65 and intravital microscopy analysis revealed that this protein causes an increase in leukocyte rolling as well as the presence of leukocytes adhered to the endothelium. Our results indicate a difference between the peptide and protein components of mucus and venom. Finally, we isolate and characterize the protein Wap65 from the venom of this fish.

Neste trabalho avaliamos se as Natterinas (NTR), proteínas majoritárias presentes no veneno do peixe peçonhento T. nattereri, são as responsáveis pela a ação inibitória do recrutamento de leucócitos durante a inflamação e os mecanismos moleculares envolvidos neste processo. Utilizando análises de microscopia intravital tratamos os animais com as NTR e 6 h depois induzimos o rolamento de leucócitos com KC, LPS ou agonista de PAR-4 sobre a microcirculação. Os dados mostraram que o tratamento com as NTR inibem o rolamento e a migração de leucócitos induzido pela KC e pelo LPS. Além disso, o efeito inibitório das NTR depende parcialmente da sua atividade proteásica e não está relacionado com a clivagem proteolítica da quimiocina KC ou com a indução de reguladores endógenos como IL-10, corticóides, a enzima HO-1 ou IL-1Ra. O efeito inibitório parece ser dependente da ativação da sinalização TLR/MyD88 e PI3K e das proteínas serina/treonina fosfatases, contribuindo de forma significativa na sobrevida de animais induzidos a endotoxemia por LPS. / In this work we evaluated whether Natterins (NTR) the majority proteins present in the venom of Thalassophryne nattereri venomous fish are responsible for the inhibitory action of leukocyte recruitment during inflammation and the molecular mechanisms involved in this process. Using intravital microscopy analysis we treated the animals with NTR and 6 h after we induced the leukocyte rolling by topical of KC, LPS or agonist of PAR-4 on the microcirculation. The data showed that treatment with NTR inhibited the leukocyte rolling and migration induced by LPS and KC. Moreover, the inhibitory effect of NTR depends partly on its proteinase activity and is not related to the proteolytic cleavage of the chemokine or KC nor with the induction of endogenous regulators such as IL-10, corticoids, the HO-1 or IL-1Ra. The inhibitory effect is dependent on the activation of PI3K and TLR/MyD88 signaling and protein serine/threonine phosphatases, contributing significantly to the survival of animals endotoxemia induced by LPS.

Dos peixes peçonhentos encontrados no Brasil os bagres destacam-se pelo número de acidentes provocados. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os componentes tóxicos presentes na peçonha e no muco. Obtivemos uma média protéica de 3,1 mg/mL (peçonha) e 1,4 mg/mL (muco). O perfil eletroforético da peçonha e do muco possui poucas bandas protéicas. O fracionamento isolou 11 frações para peçonha e 13 frações para o muco. Com relação às atividades biológicas avaliadas, as frações peptídicas induziram danos teciduais ao passo que as frações protéicas induziram processo inflamatório. Isolamos duas frações com atividade antimicrobiana para cada secreção. Isolamos uma toxina de 65,1 kDa que apresenta homologia com Wap65 e análise por microscopia intravital revelou que esta proteína causa aumento dos leucócitos rolantes assim como a presença de leucócitos aderidos ao endotélio. Nossos resultados indicam uma diferença entre os componentes protéicos e peptídicos do muco e da peçonha. Finalmente, conseguimos isolar e caracterizar a proteína Wap65 da peçonha deste peixe. / Of the venomous fish found in Brazil, catfish noteworthy for the number of accidents they cause. The objective of this study was to characterize the toxic compounds present in the venom and mucus. We obtained an average protein intake of 3,1 mg / mL (venom) and 1,4 mg / mL (mucus). The electrophoretic profile of venom and mucus has a few protein bands. Fractionation isolated 11 fractions to the venom and 13 fractions to the mucus. With respect to biological activities evaluated, the peptide fractions induced tissue damage while the protein fractions induced inflammation. We isolated two fractions with antimicrobial activity for each sample. We isolated a toxin of 65,1 kDa which shows homology with Wap65 and intravital microscopy analysis revealed that this protein causes an increase in leukocyte rolling as well as the presence of leukocytes adhered to the endothelium. Our results indicate a difference between the peptide and protein components of mucus and venom. Finally, we isolate and characterize the protein Wap65 from the venom of this fish.

A Nattectina é uma toxina isolada do veneno de Thalassophryne nattereri que possui homologia com lectinas tipo C. Este estudo consistiu em avaliar a ação da Nattectina sobre as funções de macrófagos e a influência de citocinas Th1/Th2 nessa ativação. Nossos resultados mostram que a Nattectina induziu o aumento da expressão de moléculas coestimuladoras dependente da sinalização MAPK p38 e PI3K em macrófagos derivados da medula óssea, e também um aumento na capacidade endocítica e expressão de MHC de classe II dependentes da sinalização ERK1/2 e da ligação da Nattectina ao carboidrato. Verificamos ainda que alterações induzida pela Nattectina nos macrófagos são consistentes com a ativação clássica M1 dependente de IL-12 e IFN-<font face=\"Symbol\">g, e regulada negativamente por IL-4, IL-10 e IL-13. Por fim, verificamos uma ação coadjuvante da IL-4 com IFN-<font face=\"Symbol\">g na mobilização de SPMs (Small Peritoneal Macrophages) para cavidade peritoneal e na ativação de macrófagos. Dessa forma, a Nattectina pode ser considerada um importante agente imunomodulador capaz de modular as funções de macrófagos. / Nattectin is a toxin isolated from Thalassophryne nattereri fish venom that has homology with C-type lectin. This study was carried out to evaluate the action of Nattectin on macrophage functions and the influence of Th1/Th2 cytokines in this activation. Our results show that Nattectin induced the increased expression of costimulatory molecules dependent on MAPK p38 and PI3K signaling in bone marrow-derived macrophages, and also an increase in endocytic capacity and MHC class II expression dependent on ERK1/2 signaling and binding of Nattectin to carbohydrate. We also found that modifications induced by Nattectin in macrophages are consistent with classical (M1) activation of macrophages dependent on IL-12 and IFN-<font face=\"Symbol\">g cytokines, and negatively regulated by IL-4, IL-10 and IL-13. Finally, it was demonstrated an adjuvant role of IL-4 with IFN-<font face=\"Symbol\">g in mobilization of SPMs (Small Peritoneal Macrophages) to peritoneal cavity and also in macrophage activation. Thus, Nattectin can be considered an important immunomodulatory agent able to modulate macrophage functions.

A Nattectina é uma toxina isolada do veneno de Thalassophryne nattereri que possui homologia com lectinas tipo C. Este estudo consistiu em avaliar a ação da Nattectina sobre as funções de macrófagos e a influência de citocinas Th1/Th2 nessa ativação. Nossos resultados mostram que a Nattectina induziu o aumento da expressão de moléculas coestimuladoras dependente da sinalização MAPK p38 e PI3K em macrófagos derivados da medula óssea, e também um aumento na capacidade endocítica e expressão de MHC de classe II dependentes da sinalização ERK1/2 e da ligação da Nattectina ao carboidrato. Verificamos ainda que alterações induzida pela Nattectina nos macrófagos são consistentes com a ativação clássica M1 dependente de IL-12 e IFN-<font face=\"Symbol\">g, e regulada negativamente por IL-4, IL-10 e IL-13. Por fim, verificamos uma ação coadjuvante da IL-4 com IFN-<font face=\"Symbol\">g na mobilização de SPMs (Small Peritoneal Macrophages) para cavidade peritoneal e na ativação de macrófagos. Dessa forma, a Nattectina pode ser considerada um importante agente imunomodulador capaz de modular as funções de macrófagos. / Nattectin is a toxin isolated from Thalassophryne nattereri fish venom that has homology with C-type lectin. This study was carried out to evaluate the action of Nattectin on macrophage functions and the influence of Th1/Th2 cytokines in this activation. Our results show that Nattectin induced the increased expression of costimulatory molecules dependent on MAPK p38 and PI3K signaling in bone marrow-derived macrophages, and also an increase in endocytic capacity and MHC class II expression dependent on ERK1/2 signaling and binding of Nattectin to carbohydrate. We also found that modifications induced by Nattectin in macrophages are consistent with classical (M1) activation of macrophages dependent on IL-12 and IFN-<font face=\"Symbol\">g cytokines, and negatively regulated by IL-4, IL-10 and IL-13. Finally, it was demonstrated an adjuvant role of IL-4 with IFN-<font face=\"Symbol\">g in mobilization of SPMs (Small Peritoneal Macrophages) to peritoneal cavity and also in macrophage activation. Thus, Nattectin can be considered an important immunomodulatory agent able to modulate macrophage functions.