Orientador: Daisy Maria Fávero Salvadori / Resumo: A radioterapia loco-regional é uma forma alternativa ou coadjuvante à cirurgia e quimioterapia para o câncer. Apesar de sua finalidade ser liberar uma dose de radiação que diminua o volume do tumor com dano mínimo aos tecidos vizinhos, pode, também, ser indutora de alterações no DNA que levam a novo processo carcinogênico. Assim, este estudo objetivou avaliar o efeito mutagênico e citopatológico da radioterapia em linfócitos e em células da mucosa bucal de portadores de neoplasia maligna de cabeça e pescoço. Para isso, foi avaliada a freqüência de células micronucleadas em 32 pacientes, antes, durante e após o tratamento e em 17 indivíduos "saudáveis" (sem neoplasia) pareados por sexo, idade e hábito de fumar. Os resultados obtidos foram: 1) antes do tratamento não houve diferença estatisticamente significativa na freqüência de células micronucleadas entre pacientes e indivíduos controles; 2) a radioterapia induziu aumento na freqüência de danos genéticos tanto no sangue como na mucosa bucal. Esses danos persistiram nos linfócitos, mas não nas células bucais, por 9 semanas após o término do tratamento; 3) não houve diferença na indução de micronúcleo em relação ao sexo, número de cigarros/dia, dose de radiação, tamanho do tumor e presença ou não de metástase à distância. Os pacientes com tumor estádio III, no entanto apresentaram freqüência aumentada de linfócitos micronucleados durante o tratamento; 4) a análise citopatológica das células da mucosa oral mostraram apenas processo inflamatório decorrente do tratamento. Acredita-se que esses resultados poderão contribuir para o conhecimento dos efeitos secundários da radioterapia e para a busca de novas formas de tratamento que visem menor risco para o paciente. / Abstract: Not availabe. / Mestre

Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: Daniel Galera Bernabé / Coorientadora: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Eder Ricardo Biasoli / Banca: Laura Cristina Sichero Vetorazzo / Resumo: Evidências sugerem que o papilomavírus humano (HPV) está associado com um subgrupo de carcinomas de células escamosas da cabeça e pescoço (HNSCC). No entanto, a prevalência do HPV varia substancialmente dependendo do local anatômico e da região geográfica estudada. Aqui, nosso objetivo foi investigar a prevalência do HPV em amostras de tecido fresco de pacientes brasileiros com carcinoma de células escamosas (CEC) de boca e orofaringe combinando dois métodos confiáveis para a detecção do HPV. Foram recrutadas trinta e seis amostras de tecido fresco provenientes de CEC de boca (n= 27) e orofaringe (n= 9) para análises. As características sociodemográficas, estilo de vida e clinicopatológicas foram coletadas através dos prontuários. O DNA do HPV foi detectado por dois métodos: reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real através de ensaio qualitativo de presença ou ausência do HPV-16, e testado para 37 genótipos usando Linear Array. A amplificação do gene β -globina funcionou como controle interno positivo para a análise do DNA em todas as amostras. O DNA do HPV não foi detectado em nenhum dos casos de amostras de tecido de pacientes com CEC em ambos os métodos utilizados. A ausência do HPV observada em nosso estudo pode sugerir que este não é um fator de risco prevalente nos CECs de boca e orofaringe nesta região geográfica. Os fatores de risco clássicos para o desenvolvimento desses tumores parecem ser ainda a principal causa nessa população brasileira. Investigações de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Evidence suggests that human papillomavirus (HPV) is associated with a subgroup of squamous cell carcinomas of the head and neck (HNSCC). However, the prevalence of HPV varies substantially depending on the anatomical site and geographic region studied. Here, our goal was to investigate the prevalence of HPV in fresh tissue samples from Brazilian patients with squamous cell carcinoma (SCC) of the oral cavity and oropharynx by combining two reliable methods for the detection of the HPV DNA. We recruited thirty-six fresh tissue samples from SCC of the oral cavity (n= 27) and oropharynx (n= 9) for analysis. The sociodemographic, lifestyle and clinicopathological characteristics were obtained from individual medical records. HPV DNA was detected by two methods: real-time polymerase chain reaction (PCR) through the qualitative assay of presence or absence for HPV-16, and tested for 37 genotypes by the Roche Linear Array. Amplification of the β-globin gene functioned as a positive internal control for DNA analysis in all samples. HPV DNA was detected in none of the tissue samples from patients with SCC in both methods. The absence of HPV observed in our study may suggest that this is not a prevalent risk factor in SCC of the oral cavity and oropharynx in this geographical region. The classic risk factors for the development of these tumors seem to be still the main cause in this Brazilian population. Detailed investigations of lifestyle with larger sample needs to be better explored to understand the low prevalence found / Mestre

Orientador: Daniel Galera Bernabé / Coorientador: Glauco Issamu Miyahara / Banca: Dulce Elena Casarini / Banca: Eder Ricardo Biasoli / Resumo: Objetivos: As catecolaminas podem regular diversos efeitos biológicos resultantes do estresse crônico. Estudos demonstram que as catecolaminas podem influenciar a progressão do câncer. No entanto, pouco se sabe sobre o perfil de secreção das catecolaminas em pacientes com câncer de cabeça e pescoço (CCP) e sua associação com as variáveis clinicopatológicas e psicológicas. O presente estudo investigou os níveis plasmáticos pré-tratamento das catecolaminas norepinefrina (NE) e epinefrina (E) em pacientes com câncer de boca e orofaringe e em pacientes com leucoplasia bucal, bem como sua associação com as variáveis clinicopatológicas, biocomportamentais e os sintomas de ansiedade. Pacientes e métodos: Um total de 71 pacientes com carcinoma espinocelular (CEC) de boca, 22 pacientes com CEC de orofaringe e 32 portadores de leucoplasia bucal foram submetidos à coleta de amostras de sangue. Os níveis plasmáticos das catecolaminas NE e E foram mensurados por meio de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detecção eletroquímica (CLAE-ED) e os níveis psicológicos de ansiedade foram mensurados pelo Inventário de Ansiedade de Beck (IAB). As diferenças nos níveis hormonais entre os grupos foram avaliadas pelo teste ANOVA e análises univariadas e regressões múltiplas foram realizadas para avaliar as associações dos níveis hormonais com as variáveis clinicopatológicas, biocomportamentais e psicológicas. Resultados: As concentrações plasmáticas de NE e E foram significativamente maiores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: Catecholamines may regulate several biological effects resulting from chronic stress. Studies have shown that stress-related catecholamines may affect cancer progression. However, little is known about catecholamines secretion profile in head and neck cancer squamous cell carcinoma (HNSCC) patients and its association with clinicopathological and psychological variables. The present study investigated the pre-treatment plasma levels of catecholamines norepinephrine (NE) and epinephrine (E) in patients with oral and oropharyngeal SCC and patients with oral leukoplakia, as well as their associations with clinicopathological and biobehavior variables and anxiety symptoms. Patients and methods: A total of 71 patients with oral SCC, 22 patients with oropharyngeal SCC and 32 patients with oral leukoplakia were submitted to blood samples. Plasma levels of NE and E were measured by High Performance Liquid Chromatography with electrochemical detection (HPLC-ED) and psychological anxiety levels were measured by the Beck Anxiety Inventory (BAI). Differences in hormone levels among the groups were analyzed by ANOVA test. Univariate and multiple regression analyzes were performed to evaluate the associations of hormonal levels with clinicopathological, biobehavior and psychological variables. Results: Plasma NE and E concentrations were significantly higher in patients with oral and oropharyngeal cancer than oral leukoplakia patients (p<0.05). Oral SCC patients showed NE levels (462.03±47.53 pg/mL) about six times and nine times higher than patients with oropharyngeal SCC (74.46±12.52 pg/mL) and oral leukoplakia (51.69±6.28 pg/mL), respectively. Plasma NE and E levels were positively correlated in patients with oral SCC (p=0.0011), but not in the oropharyngeal SCC and oral leukoplakia groups. Multiple... / Mestre

A presente dissertação de mestrado teve como foco a avaliação dos aspectos biomecânicos, da coluna cervical e de exercícios do pescoço, associados à diminuição da ação dos flexores profundos e aumento da ação dos flexores superficiais. Estas mudanças nas ações musculares estão associadas a indivíduos com cervicalgia crônica e a investigação deste trabalho pode levar a uma melhor compreensão desta lesão e consequente melhor tratamento. Na busca desta meta foram desenvolvidos quatro estudos apresentados ao longo desta dissertação. Estudo 1: Uma revisão sistemática com metanálise comparando a capacidade de produção de força entre indivíduos com cervicalgia e indivíduos saudáveis. Para este estudo foram incluídos 20 artigos que compararam capacidade de produção de força entre os grupos, onde foi identificado que indivíduos com cervicalgia crônica apresentam menor capacidade de produção de força para flexão, extensão e flexão lateral direita e esquerda. Estudo 2: A partir do estudo 1 surgiu o estudo observacional desta dissertação o qual comparou a força dos flexores profundos e superficiais da coluna cervical e a força articular cervical durante exercícios de fortalecimento do pescoço através de um modelo biomecânico. Para este estudo 20 participantes foram avaliados durante exercícios dinâmicos e isométricos de flexão, extensão e flexão lateral direita. A carga do exercício foi definida em 15-25% da capacidade de produção de força pescoço e foram feitas 5 repetições para o exercício dinâmico e mantida por 10 segundos para o exercício isométrico. As forças musculares e articulares foram estimadas pelo modelo biomecânico Biomechanics of Bodies e as variáveis cinéticas e cinemáticas foram coletadas com o BTS Smart-DX. O exercício de flexão dinâmica apresentou os maiores valores de força para os flexores profundos ao mesmo tempo que os flexores superficiais não apresentaram diferenças entre a flexão isométrica e dinâmica. Estudo 3: Este estudo foi realizado visando dar maior segurança e robustez às respostas do modelo biomecânico do Estudo 2, correlacionando as respostas de força muscular, estimada com o modelo biomecânico, e a atividade muscular com eletromiógrafo, dos músculos esternocleidomastóides direito e esquerdo. As correlações se apresentaram em média excelentes tanto para o esternocleidomastoide direito (r=0.69±0.20) e esquerdo (r=0.71±0.22), estimulando a confiança nos resultados obtidos pelo modelo biomecânico para os músculos flexores profundos da cervical. Estudo 4: Este estudo avaliou diferentes métodos de contração voluntária isométrica máxima para normalizar o sinal eletromiográfico do esternocleidomastoide e escaleno anterior. Com base nos resultados deste estudo, o método proposto em flexão lateral com a cabeça rotada foi o que apresentou a maior ativação para o esternocleidomastoide e o método convencional a que apresentou a maior ativação para o escaleno anterior. Portanto é sugerido uma adaptação ao método apresentado na literatura para contração voluntária isométrica máxima do esternocleidomastoide. Com base nestes quatro estudos, podemos afirmar que indivíduos com cervicalgia apresentam menor capacidade de produção de força, mostrando a necessidade de exercícios de fortalecimento, além da função de hipoalgesia normal do exercício. Levando em conta a diminuição da força dos flexores profundos cervical e aumento da ativação dos flexores superficiais em indivíduos com cervicalgia crônica, o exercício de flexão cervical dinâmica parece ser o mais indicapado para o fortalecimento dos flexores profundos, ao mesmo tempo que reduz a ativação dos flexores superficiais. / The present dissertation focused on the evaluation of the biomechanical aspects of the cervical spine and neck exercises, associated to the decrease of the action of the deep flexors and increase of the action of the superficial flexors. These changes in muscular actions are associated with individuals with chronic neck pain and the investigation of this work can lead to a better understanding of this lesion and consequent better treatment. In the pursuit of this aim, four studies were developed through this dissertation. Study 1: A systematic review with metanalysis comparing neck strength between individuals with neck pain and healthy controls. For this study, 20 articles comparing neck strength between groups and it was found that individuals with chronic neck pain have lower neck strength in flexion, extension, right and left lateral flexion. Study 2: From the development of study 1 came the observational study which compared the superficial, deep neck flexor muscle force and joint force during neck strengthening exercises using a biomechanical model. For this study, 20 participants were evaluated during dynamic and isometric exercises of flexion, extension and right lateral flexion. The exercise load was defined as 15-25% of the neck strength and 5 repetitions were made for the dynamic exercise and maintained for 10 seconds for the isometric exercise. Muscle and joint forces were estimated with the biomechanical model the Biomechanics of Bodies, and the kinetic and kinematic variables were collected using BTS Smart-DX. The dynamic neck flexion exercise showed the highest deep neck flexors muscle force values at the same time that the superficial neck flexors did not present differences between the isometric and dynamic flexion. Study 3: This study was carried out aiming at giving greater safety and robustness to the responses of the biomechanical model of Study 2, correlating the muscular force responses, estimated with the biomechanical model, and the muscular activity with electromyograph, of the right and left sternocleidomastoid muscles. Correlations were on average high for both right sternocleidomastoid (r = 0.69 ± 0.20) and left (r = 0.71 ± 0.22), ensuring the results obtained by the biomechanical model for the deep neck flexor muscles. Study 4: This study evaluated different methods of maximal isometric voluntary contraction to normalize the electromyographic signal of the sternocleidomastoid and anterior scalene. Based on the results of this study, the method proposed performing a lateral flexion with a rotated head was the one that presented the highest activation for the sternocleidomastoid however the conventional method was the one that presented the highest activation for the anterior scalene. Therefore, we suggest an adaptation to the method presented in the literature for the maximum voluntary isometric contraction of the sternocleidomastoid. Based on these four studies, we can affirm that individuals with neck pain have a lower neck strength, showing the need for strengthening exercises, in addition to the normal hypoalgesia function of the exercise. Regarding the decreased deep neck flexors force and increased superficial neck flexors force in individuals with chronic neck pain, the dynamic neck flexion exercise it seems to be the most suitable for the strengthening of deep flexors, while reducing the activation of the superficial flexors.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-05-08T20:00:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Carolina Goés.pdf: 827470 bytes, checksum: 177362c2e942c0371b6f11dd630ba5b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-17T17:24:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Carolina Goés.pdf: 827470 bytes, checksum: 177362c2e942c0371b6f11dd630ba5b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-17T17:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Carolina Goés.pdf: 827470 bytes, checksum: 177362c2e942c0371b6f11dd630ba5b7 (MD5) / FAPESB / O câncer é um problema de saúde pública mundial e apresenta altas taxas de morbimortalidade. Estudos epidemiológicos regionais são importantes na caracterização das peculiaridades da população em cada região do Brasil. O presente trabalho teve como objetivo determinar o perfil do paciente com câncer de cabeça e pescoço atendido no setor de Odontologia do Hospital Aristides Maltez (Salvador, BA) no ano de 2006. Foram 94 pacientes, sendo a maioria do sexo masculino (72,34%), cor/raça parda (58,51%), com média de idade de 57,52 anos; 74,47% nasceram na zona rural/interior e 52,13% residem no interior. Observou-se uma predominância de indivíduos analfabetos ou com baixa escolaridade (79,79%) e casados ou que moravam com companheiro (51,06%). A cavidade bucal, com 50% dos casos, foi o local mais acometido e, nesta localização, a língua e o assoalho bucal foram predominantes. O carcinoma espinocelular foi o tipo histológico mais encontrado (80,85%). No momento do diagnóstico, as lesões apresentavam dimensões maiores (T3 e T4) em 59,58% dos casos, ausência de metástase regional em 60,64% e presença de metástase à distância em apenas um caso (1,06%). O estadiamento clínico foi composto principalmente pelos estádios III e IV (68,09%) e, histologicamente, constatou-se mais lesões do tipo moderadamente (38,30%) e bem diferenciado (29,79%). Na história odontológica, a escovação diária era realizada por 88,30% dos pacientes, entretanto o uso de fio dental e anti-sépticos era infreqüente. O tratamento odontológico mais realizado foi a exodontia (93,62%) e a necessidade de tratamento mais comum foi prótese dentária (73,40%). Quanto aos hábitos do tabagismo e do etilismo, 87,24% realizavam algum tipo prevalecendo o uso de ambos associados (62,77%). Predominou o tempo de utilização do fumo ou álcool por mais de 30 anos e a idade de início do fumo, igual ou inferior a 15 anos (56,25%). Lesões com estádio clínico III e IV tiveram uma maior tendência a ocorrer em pacientes do sexo masculino, cor/raça preta, etilistas, residentes em áreas urbanas e que começaram a fumar com idade maior do que 15 anos (p<0,20). / Salvador

SITOE, F. B. Fatores de risco para lesões cervicais e câncer cervical em mulheres com diagnóstico citológico de células escamosas atípicas, Maputo-Moçambique, 2013-2015. 2017. 90 f. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Saúde Pública (msp@ufc.br) on 2017-08-22T20:14:37Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_fbsitoe.pdf: 1769829 bytes, checksum: ec7a8a40ba4c96fdbf421e5b6d5f7b38 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-23T11:53:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_fbsitoe.pdf: 1769829 bytes, checksum: ec7a8a40ba4c96fdbf421e5b6d5f7b38 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-23T11:53:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_fbsitoe.pdf: 1769829 bytes, checksum: ec7a8a40ba4c96fdbf421e5b6d5f7b38 (MD5) Previous issue date: 2017-07-31 / Introduction: The diagnosis and screening of cervical lesions are of paramount importance. The standard screening method for cervical cancer and its precursor lesions is cytological examination using the Papanicolaou method. Objectives: To estimate the prevalence of low and high grade cervical lesions and cervical cancer in women with cytologic diagnosis of atypical squamous cells, to verify the influence of the etiological agents of diseases with the presence of cervical lesions and cervical cancer. Method: a cross-sectional study with a quantitative approach, retrospective data collection performed at the Department of Gynecology and Obstetrics, and at the Pathology Department of the Central Hospital of Maputo, Mozambique. We studied 358 medical records from January 2013 to December 2015 of women with atypical cytologic squamous cell diagnosis. The variables p <0.05 were considered statistically significant, and the frequency of diagnoses with their respective confidence intervals (95% CI) was calculated. The presence of the lesions and the degree of association between the dependent and independent variables were verified through the Pearson correlation coefficient and prevalence ratio (PR). Results: mean age was 38.1 years, median 36.6 and standard deviation 12.3. Age ranged from 17 to 71 years. The prevalence of cervical lesions was 153 cases (63%), 50 (32.7%) for <NIC2 + and 103 (67.3%) for CIN 2+. The risk factors associated with cervical lesions and cervical cancer were: age (40-49) (P = 0.001), profession (domestic) (P = 0.016), parity (+5) (P = 0.001), menopause = 0.001), HPV (P = 0.001) and Tricomonas vaginalis (P=0,001). Conclusion: The prevalence of high-grade cervical lesions in women with atypical squamous cell cytologic diagnosis was high. The risk factors associated with the most severe cervical lesions in patients with atypical squamous cell cytology were: parity age, occupation, menopause. The etiological agents of diseases that influenced the development of cervical lesions and cervical cancer were HPV and Tricomonas vaginalis. / Introdução: O diagnóstico e o rastreamento das lesões cervicais são de suma importância. O método padrão de rastreamento do câncer do colo do útero e de suas lesões precursoras é o exame citológico pelo método de Papanicolaou. Objetivos: Estimar a prevalência das lesões cervicais de baixo e alto grau e câncer cervical em mulheres com diagnóstico citológico de células escamosas atípicas, verificar a influência dos agentes etiológicos de doenças com a presença das lesões cervicais e câncer cervical. Método: estudo transversal com abordagem quantitativa, coleta de dados retrospectiva, realizado no Departamento de ginecologia e obstetrícia, e no serviço de anatomia patológica do Hospital Central de Maputo, em Moçambique. Foram estudados 358 prontuários de janeiro de 2013 a dezembro de 2015 de mulheres com diagnóstico citológico de células escamosas atípicas. Considerou-se como estatisticamente significante as variáveis p<0,05, calculou se a frequência de diagnósticos com seus respectivos intervalos de confiança (IC95%). A presença das lesões e o grau de associação entre as variáveis dependentes e independentes foi verificada através do cálculo do coeficiente de correlação de Pearson e razão de prevalência (RP). Resultados: a média da idade foi de 38,1 anos, mediana 36,6 e o desvio padrão de 12,3. A idade variou entre 17 a 71 anos. A prevalência das lesões cervicais foi de 153 casos (63%), sendo lesão de baixo grau (NIC I) 50 (32,7%) e lesão de alto grau /carcinoma invasor (NIC 2+) 103 (67,3%). Os fatores de risco associados às lesões cervicais e câncer cervical foram: idade (40-49) (P=0,001), profissão (doméstica) (P=0,016), Paridade (+de 5) (P=0,001), menopausa (P=0,001), HPV (P=0,001), e Tricomonas vaginalis (P=0,001). Conclusão: A prevalência das lesões cervicais de alto grau em mulheres com diagnóstico citológico de células escamosas atípicas foi alta. Os fatores de risco associados às lesões cervicais mais severas em pacientes com citologia de células escamosas atípicas foram: idade paridade, profissão, menopausa. Os agentes etiológicos de doenças que influenciaram no desenvolvimento das lesões cervicais e câncer cervical foram o HPV e Tricomonas vaginalis.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T18:01:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T18:02:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T18:02:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:02:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O Carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço acomete mucosas do trato aerodigestivo superior, incluindo cavidade oral, laringe e faringe e é caracterizado por elevada agressividade e radioresistência, apresentando, muitas vezes, recidivas após o tratamento. Em trabalho anterior, foi demonstrado pelo nosso grupo que o tamponamento do Ca2+ nuclear é capaz de reduzir a taxa proliferação do carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (células A431), bem como a sobrevida após a irradiação. Neste trabalho, investigamos quais genes estariam envolvidos na radiosensibilização observada mediante tamponamento do Ca2+nuclear, utilizando o protocolo RaSH (rapid subtraction hybridization), que permitiu a identificação de genes diferencialmente expressos nas células apenas irradiadas (RX) e nas células irradiadas em que o Ca2+ nuclear fora tamponado (RX/Ca2+ T). Foram sequenciados 91 clones, dos quais 8 mostraram elevada similaridade (93-100%) com sequências conhecidas depositadas no genebank (NCBI). Entre os clones selecionados, 3 foram escolhidos, sendo a Calpaína e a NLK selecionadas como mais expressas na condição RX/Ca2+T e a Kinesina, selecionada na condição RX. Estas proteínas são envolvidas em vias de sinalização críticas ao desenvolvimento tumoral, com base na análise por Blastn. Como a Kinesina foi identificada como superexpressa na condição RX, nós investigamos se seu silenciamento era capaz de produzir efeitos similares aos induzidos pelo tamponamento do Ca2+ nuclear. O silenciamento da Kinesina com siRNA promoveu a redução da formação de colônias e da sobrevida, em associação (90±2%) ou não (60±2%) com RX. Estes dados mostram que a Kinesina é um potencial alvo molecular a ser utilizado na radiosensibilização de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço. / Head and neck squamous cell carcinoma affects mucosal of the upper aerodigestive tract, comprising oral cavity, pharynx and larynx and is characterized by aggressiveness and radioresistance, showing high frequency of post-treatment recurrent tumors. Our group had previously demonstrated that nuclear Ca2+ buffering promote decreased head and neck squamous cell carcinoma (A431 cells) proliferation rate and colony formation after irradiation. Here, to investigate which genes are involved on radiosensitization observed upon nuclear Ca2+ buffering, we applied RaSH (rapid subtraction hybridization) protocol that allows identification of genes differentially expressed on irradiated cells alone (RX) or combined with nuclear Ca2+ buffering (RX/Ca2+T). 91 clones were sequenced and 8 had shown high similarity (93-100%) with known sequences deposited on genebank (NCBI). Among the selected clones, 3 were choose, Calpain and NLK, that showed increased expression on RX/Ca2+T and Kinesin, that showed increased expression on RX. These clones are involved in tumor development-related signaling pathways according to BLASTn analysis. Because Kinesin was overexpressed on RX, we investigated if its silencing was capable to promote similar effect to nuclear Ca2+ buffering. Kinesin knockdown by siRNA promoted decreased colony formation, and survival either alone (60±2%) or in association (90±2%) with RX. These data show that Kinesin is a potential molecular target to radiosensitize head and neck squamous cell carcinoma.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:23Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T17:33:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T17:33:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_LídiaMariadeAndrade.pdf: 11453373 bytes, checksum: 44afceab2d00fc571d9eff405707ed38 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A radioterapia é uma modalidade importante para tratar o câncer de Cabeça e Pescoço, no entanto falhas do tratamento já foram observadas e recorrência da doença é comum. Novas abordagens para melhorar os efeitos benéficos de radioterapia têm sido desenvolvidas e terapia gênica surge como uma ferramenta importante para atingir esse objetivo. Apesar de modelos in vitro serem úteis para entender os efeitos da radiação em níveis celulares um modelo mais próximo ao esquema de irradiação clínica, que permita reproduzir irradiação diária, é necessário. Sinais de cálcio no núcleo têm demonstrado desempenhar um papel crucial em células de mamíferos por regularem a expressão de genes envolvidos na proliferação celular, e ja foi também demonstrado que o tamponamento de Ca2+ nuclear prejudica o crescimento das células cancerosas in vitro, bem como in vivo. O objetivo deste estudo foi desenvolver um protocolo in vitro que simulava radioterapia de cabeça e pescoço de acordo com parâmetros clínicos e investigar o papel do tamponamento de Ca2+ nuclear para aumentar o efeito antitumoral de raios-X em carcinoma de células escamosas humano. Para estes fins, células da linhagem celular A431 foram submetidas a dose acumulada de 10Gy de raios- X, em esquema de fracionamento diário de doses, (XRCd10Gy) ou em associação com o tamponamento de Ca2+ nuclear (Ca2+n). Análise do ciclo celular, ensaio de proliferação, a quantificação de lesões de DNA nuclear /mitocondriail, expressão de ADAM-17, a expressão de EGFR e fração de sobrevivência foram investigadas. Nosso modelo forneceu irradiações uniformes à monocamada de células, minimizando as incertezas, independente da posição dos frascos dentro de campo de irradiação, Todos os frascos receberam 100 ± 2% da dose calculada total. Descobrimos que XRCd10Gy induziu apenas 4,3 ± 0,3% de morte celular (SubG1), indicando radiorresistência. Após o tamponamento de Ca2+n a proliferação de células A431 diminuiu significativamente (p < 0,001) em comparação com o controle. Análise do ciclo celular mostraram que a associação do tamponamento Ca2+ n com XRCd10Gy aumentou a percentagem de células A431 em G2/M (35,7 ± 2,5 %), sem danos de DNA nucleares/mitocondrial aparentes. No entanto, o tamponamento de Ca2+n preveniu significativamente (p < 0,05) o aumento da expressão de ADAM -17 e a ativação do EGFR, induzidas por irradiação. Além disso, a terapia de associação diminui significativamente a formação de colônias das celulas A431 (91 ± 0,4 %), mesmo com cerca de metade da dose cumulativa. Os efeitos dos bloqueadores de integrina 4B4 e cRGD sobre a migração de células do melanoma humano da linhagem MV3 foram investigados, em cultivo celular 3D, mostrando que além de alterar a morfologia celular, o bloqueio das subunidades de integrina β1 e αvβ3 reduziram o índice de alongamento celular (3.8 ± 0.6 AU) quando comparado com o controle não tratado (8.5 ± 1.7 AU, p<0,001), bem como a velocidade média de migração 0.1 ± 0.06μm/minuto comparado ao controle não tratado 0.5 ± 0.1μm/minuto (p<0,001). Juntos, estes resultados contribuem para o desenvolvimento de nova estratégia de radioterapia para o tumor da cabeça e pescoço, com a combinação da terapia gênica e radiação ionizante, permitindo reduzir a exposição celular aos raios-X. / Radiotherapy is one important modality to treat Head and Neck cancer, however treatment failure has been observed and recurrence disease is common. New approaches to improve beneficial radiotherapy effects have been developed and gene therapy arises as an important tool to achieve this aim. Although in vitro models are useful to understand radiation effects at cellular levels one model more close to clinical irradiation schedule that allows reproduce daily irradiation is needed. Calcium signals in the nucleus have been demonstrated to play a crucial role in mammalian cells regulating the expression of genes involved in cell proliferation, and it also was demonstrated that the buffering of nuclear Ca2+ impairs the growth of cancer cells in vitro as well as in vivo. The aim of this study was to develop an in vitro protocol that simulated head and neck radiotherapy according to clinical parameters and investigate the role of nuclear Ca2+ buffering to enhance the antitumor effect of X-rays on Human Squamous Cell Carcinoma. For these purposes A431 cell line was submitted to 10Gy cumulative X-rays therapy alone (XRCd10Gy) or in association with nuclear Ca2+ buffering protocol (Ca2+n). Cell cycle analysis, proliferation assay, quantification of nuclear/mitochondrial DNA lesions, ADAM- 17, EGFR expression and survival fraction were investigated. Our model provided uniform irradiations to monolayer cells, minimizing uncertainties since independent of the flasks position inside irradiation field, all flasks received 100±2% of the total calculated dose. We found that XRCd10Gy induced only 4.3±0.3% of cell death (SubG1), indicating radioresistance. Upon Ca2+n buffering, A431 cell proliferation decreased significantly (p<0.001) as compared to control. Cell cycle analysis showed that association of Ca2+n buffering with XRCd10Gy increased the percentage of A431 cells at G2/M (35.7±2.5%) with no apparent nuclear/mitochondrial DNA damages. Nonetheless, Ca2+ n buffering significantly (p<0.05) prevented the increase in ADAM-17 expression and EGFR activation induced by irradiation. Furthermore, the association therapy significantly decreases the A431colony formation (91±0.4%), even using approximately half of the cumulative dose. The effects of Integrins blockage on human melanoma cell MV3 were investigated using 3D cell culture. There were phenotype alterations after blockage of β1 e αvβ3 integrins subunits using 4B4 and cRGD even reduction of elongation index (3.8 ± 0.6 AU) compared to untreated cells (8.5 ± 1.7 AU, p<0.001) as well as migration average speed was decreased 0.1 ± 0.06μm/minute after integrins blockage compared to untreated cells 0.5 ± 0.1μm/minute (p<0.001).Together, these findings contribute to the development of novel radiotherapy strategy to head and neck tumor, combining gene therapy with ionizing radiation, allowing reducing X-rays irradiation exposure

Made available in DSpace on 2016-03-08T14:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 michelle_silva_ioc_dout_2012.pdf: 7931324 bytes, checksum: 70b78e7f6485074455de8780d640e2a3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A associação do HPV ao câncer de orofaringe tem sido sugerida, apesar da variável prevalência viral nos diferentes estudos. Por outro lado, a relação etiológica do HPV em casos de câncer oral ou de hipofaringe/laringe é ainda controversa. No entanto, estudos recentes tem sugerido que a presença do DNA do HPV nos tumores não é evidência suficiente para a associação causal, sendo fortemente indicado análises de expressão das oncoproteínas virais e do status do genoma do HPV. N presente estudo caso-controle, a prevalência do HPV foi analisada utilizando PCR-nested para detecção viral em 228 casos de câncer de cabeça e pescoço e 227 controles. A análise multivariada dos diferentes tipos de HPV e outros fatores de risco epidemiológicos, ambientais, clínicos e moleculares suportou a associação etológica do HPV no câncer de orofaringe corroborando a hipótese de duas diferentes vias na carcinogênese, uma desencadeada por fatores ambientais, como o consumo de tabaco e álcool e outra direcionada pelo HPV, cujo efeito é evidenciado na ausência desses outros fatores de risco. Entretanto , os dados aqui apresentados sugerem uma relação limitada do HPV aos tumores da cavidade oral e hipofaringe/laringe Apesar da similaridade da prevalência do HPV em casos e controles, os dados deste estudo sugerem fortemente que a distribuição dos tipos de HPV quanto ao potencial carcinogênico é diferenciado, sendo HPV de baixo risco mais frequente em controles e de alto-risco nos casos de câncer de orofaringe. O estudo de casos para presença de DNA e transcritos de RNA de E6 e E7 do HPV por ISH em dois TMAs construídos para o presente estudo mostrou atividade transcricional apenas para os casos de câncer de orofaringe. A superexpressão de p16INK4a foi coincidente na identificação de atividade do HPV por IHQ em caso de câncer de orofaringe, mostrando a eficiência deste marcador A presença de DNA do HPV integrado ao genoma foi detectada na maioria dos casos de câncer de orofaringe, diferente do encontrado para casos de câncer da cavidade oral ou hipofaringe/laringe. Este cenário mostra claramente a distinta associação etiológica do HPV nos diferentes sítios anatômicos de câncer de cabeça e pescoço, principalmente nos pacientes com câncer de orofaringe sem exposição aos principais fatores de risco, o tabaco e álcool / Human Papillomaviruses (HPV) have been associated with oropharynx cancer, even though previous studies show a wide variation o f viral prevalence. On the other hand, the etiological relation of HPV on oral or hypopharynx/ larynx cancers is still controve rsial. However, recent studies have been suggesting that the presence of HPV DNA in tumors is not sufficient evidence for the causal association, for which analyses of viral oncoproteins expression and genome status are strongly indicated. In this case - con trol study, the prevalence of HPV was analyzed using nested - PCR for viral detection in 228 cases of head and neck cancer and 227 controls. Multivariate analyses of different types of HPV and other risk factors epidemiological, environmental, clinical and m olecular supported the etiological association of HPV in oropharyngeal cancer, corroborating the hypothesis of two different pathways in carcinogenesis : O ne related to environmental factors such as tobacco and alcohol consumption , and the second linked to HPV, effect of which is evident in the absence of these other risk factors. However, the data presented here suggest a limited relationship of HPV in tumors of the oral cavity and hypopharynx/ larynx. Despite the similarity of HPV prevalence in cases and c ontrols, data from this study strongly suggest that the distribution of HPV types regarding the carcinogenic potential is differentiated, with low - risk HPV been frequent in controls and high - risk ones in cancer cases of oropharynx. The cases study for the presence of DNA and RNA transcripts of E6 and E7 HPV by ISH in two TMAs constructed for the present study showed transcriptional activity only for cases of oropharyngeal cancer. The overexpression of p16INK4a was coincident in identifying HPV activity by I HC in cases of oropharyngeal cancer, showing the efficiency of this marker. The presence of HPV DNA integrated into the genome was detected in the majority of cases of oropharyngeal cancer, unlike observed for cancers of the oral cavity or hypopharynx/ lar ynx. This scenario clearly show s the distinct etiological association of HPV in different anatomical sites of cancer of the head and neck, especially in patients with oropharyngeal cancer without exposure to the main risk factors, tobacco and alcohol

A presente dissertação de mestrado teve como foco a avaliação dos aspectos biomecânicos, da coluna cervical e de exercícios do pescoço, associados à diminuição da ação dos flexores profundos e aumento da ação dos flexores superficiais. Estas mudanças nas ações musculares estão associadas a indivíduos com cervicalgia crônica e a investigação deste trabalho pode levar a uma melhor compreensão desta lesão e consequente melhor tratamento. Na busca desta meta foram desenvolvidos quatro estudos apresentados ao longo desta dissertação. Estudo 1: Uma revisão sistemática com metanálise comparando a capacidade de produção de força entre indivíduos com cervicalgia e indivíduos saudáveis. Para este estudo foram incluídos 20 artigos que compararam capacidade de produção de força entre os grupos, onde foi identificado que indivíduos com cervicalgia crônica apresentam menor capacidade de produção de força para flexão, extensão e flexão lateral direita e esquerda. Estudo 2: A partir do estudo 1 surgiu o estudo observacional desta dissertação o qual comparou a força dos flexores profundos e superficiais da coluna cervical e a força articular cervical durante exercícios de fortalecimento do pescoço através de um modelo biomecânico. Para este estudo 20 participantes foram avaliados durante exercícios dinâmicos e isométricos de flexão, extensão e flexão lateral direita. A carga do exercício foi definida em 15-25% da capacidade de produção de força pescoço e foram feitas 5 repetições para o exercício dinâmico e mantida por 10 segundos para o exercício isométrico. As forças musculares e articulares foram estimadas pelo modelo biomecânico Biomechanics of Bodies e as variáveis cinéticas e cinemáticas foram coletadas com o BTS Smart-DX. O exercício de flexão dinâmica apresentou os maiores valores de força para os flexores profundos ao mesmo tempo que os flexores superficiais não apresentaram diferenças entre a flexão isométrica e dinâmica. Estudo 3: Este estudo foi realizado visando dar maior segurança e robustez às respostas do modelo biomecânico do Estudo 2, correlacionando as respostas de força muscular, estimada com o modelo biomecânico, e a atividade muscular com eletromiógrafo, dos músculos esternocleidomastóides direito e esquerdo. As correlações se apresentaram em média excelentes tanto para o esternocleidomastoide direito (r=0.69±0.20) e esquerdo (r=0.71±0.22), estimulando a confiança nos resultados obtidos pelo modelo biomecânico para os músculos flexores profundos da cervical. Estudo 4: Este estudo avaliou diferentes métodos de contração voluntária isométrica máxima para normalizar o sinal eletromiográfico do esternocleidomastoide e escaleno anterior. Com base nos resultados deste estudo, o método proposto em flexão lateral com a cabeça rotada foi o que apresentou a maior ativação para o esternocleidomastoide e o método convencional a que apresentou a maior ativação para o escaleno anterior. Portanto é sugerido uma adaptação ao método apresentado na literatura para contração voluntária isométrica máxima do esternocleidomastoide. Com base nestes quatro estudos, podemos afirmar que indivíduos com cervicalgia apresentam menor capacidade de produção de força, mostrando a necessidade de exercícios de fortalecimento, além da função de hipoalgesia normal do exercício. Levando em conta a diminuição da força dos flexores profundos cervical e aumento da ativação dos flexores superficiais em indivíduos com cervicalgia crônica, o exercício de flexão cervical dinâmica parece ser o mais indicapado para o fortalecimento dos flexores profundos, ao mesmo tempo que reduz a ativação dos flexores superficiais. / The present dissertation focused on the evaluation of the biomechanical aspects of the cervical spine and neck exercises, associated to the decrease of the action of the deep flexors and increase of the action of the superficial flexors. These changes in muscular actions are associated with individuals with chronic neck pain and the investigation of this work can lead to a better understanding of this lesion and consequent better treatment. In the pursuit of this aim, four studies were developed through this dissertation. Study 1: A systematic review with metanalysis comparing neck strength between individuals with neck pain and healthy controls. For this study, 20 articles comparing neck strength between groups and it was found that individuals with chronic neck pain have lower neck strength in flexion, extension, right and left lateral flexion. Study 2: From the development of study 1 came the observational study which compared the superficial, deep neck flexor muscle force and joint force during neck strengthening exercises using a biomechanical model. For this study, 20 participants were evaluated during dynamic and isometric exercises of flexion, extension and right lateral flexion. The exercise load was defined as 15-25% of the neck strength and 5 repetitions were made for the dynamic exercise and maintained for 10 seconds for the isometric exercise. Muscle and joint forces were estimated with the biomechanical model the Biomechanics of Bodies, and the kinetic and kinematic variables were collected using BTS Smart-DX. The dynamic neck flexion exercise showed the highest deep neck flexors muscle force values at the same time that the superficial neck flexors did not present differences between the isometric and dynamic flexion. Study 3: This study was carried out aiming at giving greater safety and robustness to the responses of the biomechanical model of Study 2, correlating the muscular force responses, estimated with the biomechanical model, and the muscular activity with electromyograph, of the right and left sternocleidomastoid muscles. Correlations were on average high for both right sternocleidomastoid (r = 0.69 ± 0.20) and left (r = 0.71 ± 0.22), ensuring the results obtained by the biomechanical model for the deep neck flexor muscles. Study 4: This study evaluated different methods of maximal isometric voluntary contraction to normalize the electromyographic signal of the sternocleidomastoid and anterior scalene. Based on the results of this study, the method proposed performing a lateral flexion with a rotated head was the one that presented the highest activation for the sternocleidomastoid however the conventional method was the one that presented the highest activation for the anterior scalene. Therefore, we suggest an adaptation to the method presented in the literature for the maximum voluntary isometric contraction of the sternocleidomastoid. Based on these four studies, we can affirm that individuals with neck pain have a lower neck strength, showing the need for strengthening exercises, in addition to the normal hypoalgesia function of the exercise. Regarding the decreased deep neck flexors force and increased superficial neck flexors force in individuals with chronic neck pain, the dynamic neck flexion exercise it seems to be the most suitable for the strengthening of deep flexors, while reducing the activation of the superficial flexors.