Orientador: Marcos José Salvador / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T06:36:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correa_WallaceRibeiro_D.pdf: 6338643 bytes, checksum: a9316650e99827e8384a1a7bacfa1c04 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Pfaffias são plantas da família Amaranthaceae, tribo Gomphreneae, conhecidas como ginseng brasileiro e "Paratudo". São plantas com importância na medicina popular, sendo empregadas no tratamento de várias patologias e algumas espécies de Pfaffia apresentam estudos farmacológicos reportando atividade analgésica, antinociceptiva, anti-inflamatória, antimicrobiana e antitumoral, sugerindo potencial para a busca de agentes biologicamente ativos nestas matrizes vegetais. Assim, este estudo teve por objetivo a prospecção de extratos, frações e substâncias bioativas em Pfaffia townsendii Pedersen e Pfaffia tuberosa (Spreng.) Hicken que apresentam poucos estudos documentados na literatura e são espécies praticamente intocadas sob o ponto de vista fitoquímico e de avaliação de atividades biológicas. O estudo foi monitorado pela avaliação da atividade antioxidante (ensaios Folin-Ciocalteu, redução do radical DPPH e ORACFL); antiproliferativa (frente a linhagens de células tumorais e não tumorais); antimicrobiana (frente a bactérias, leveduras e protozoários); anti-inflamatória (in vitro pelo ensaio da desnaturação da albumina bovina (BSA) e in vivo empregando o modelo de edema de pata e pleurisia em camundongos induzida por carragenina). No estudo fitoquímico, primeiramente, obteve-se o perfil químico dos extratos bioativos (CCDC, CG, CLAE e ESI-MS), sendo possível identificar algumas substâncias conhecidas diretamente nos extratos brutos (desreplicação). Os extratos bioativos com substâncias que não puderam ser identificadas na etapa de desreplicação foram submetidos ao fracionamento biomonitorado e as substâncias isoladas foram identificadas utilizando-se métodos espectroscópicos de análise (UV, RMN 1H e RMN 13C) e espectrometria de massas e as substâncias isoladas foram submetidas à avaliação das atividades biológicas. Os extratos brutos e fases de partição dos extratos etanólicos apresentaram considerável atividade antioxidante nos três ensaios realizados, observando correlação positiva da capacidade antioxidante com o conteúdo de fenólicos totais solúveis. Estas amostras mostraram atividade antiproliferativa frente a linhagens de células tumorais, com valores de concentração mínima necessária para inibição total do crescimento celular, TGI, variando entre 0,42 e 250 ?g/mL para as amostras bioativas e não se mostraram citotóxicas para linhagem de células controle, não tumoral, VERO (TGI ? 250 ?g/mL). Ainda, exibiram atividade antimicrobiana frente a bactérias (com valores de concentração biocida mínima, CBM, entre 0,5 e 2,0 mg/mL), frente a fungos (CBM de 1,0 mg/mL) e frente a protozoários com atividade tripanocida moderada para formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi (com % de tripomastigotas viáveis variando de 4,70 a 69,40% para os extratos brutos a 4,0 mg/mL e para as fases de partição a 2,0 mg/mL) e com atividade leishmanicida para formas amastigotas-like de Leishmania (L.) amazonensis (com % de amastigotas viáveis variando de 0 a 8,10% para os extratos brutos a 1,0 mg/mL e para as fases de partição a 0,5 mg/mL). Os flavonoides isolados patuletina 3-O-B-D-glucopiranosídeo e tilirosídeo apresentaram promissora atividade antiprotozoário com efeito na viabilidade celular tanto para tripomastigotas de T. cruzi, quanto frente à amstigotas de L. (L.) amazonensis. Os extratos apresentaram atividade anti-inflamatória in vitro com inibição da desnaturação da proteína BSA (IC50 entre 41,1 e 400 µg/mL) e em modelo in vivo onde as fases etanólicas da partição do extrato etanólico das duas plantas estudadas e os flavonoides isolados patuletina 3-O-B-D-glucopiranosídeo e tilirosídeo inibiram o edema de pata induzido por carragenina e a migração de leucócitos na cavidade intrapleural induzido por carragenina, sendo também mensurado o extravasamento de proteínas pela reação de Bradford. O estudo fitoquímico monitorado pelas atividades biológicas e antioxidantes mostrou-se efetivo, sendo possível identificar cinco esteroides, três triterpenoides, três acetatos de triterpenoides, quatro ácidos orgânicos e três flavonoides nas amostras bioativas. Pode-se também isolar dois flavonoides (Patuletina 3-O-B-D-glucopiranosídeo e Tilirosídeo). Os resultados obtidos justificam, pelo menos em parte, a utilização popular de espécies do gênero Pfaffia e confirma o potencial da família Amaranthaceae como fontes de moléculas bioativas e insumos para a saúde, sendo importante a continuidade dos estudos com as amostras bioativas mais promissoras com vistas a aplicações farmacológicas, biotecnológicas e clínicas / Abstract: Pfaffias are plants of the Amaranthaceae family, Gomphreneae tribe, known as Brazilian ginseng and "paratudo". Plants have great importance in folk medicine, being used in the treatment of various diseases. Some species of Pfaffia exhibit pharmacological studies reporting anti-nociceptive, anti-inflammatory, antimicrobial, analgesic and antitumor activities and suggesting a potential for biologically active agents in these vegetable matrices. Thus, this study aimed to explore for extracts, fractions and bioactive compounds in Pfaffia townsendii Pedersen and Pfaffia tuberosa (Spreng.) Hicken, which show little documented data in the literature studies and are species virtually untouched from the point of view of phytochemical evaluation of biological activities. The study was monitored by the evaluation of the activities: antioxidant (Folin-Ciocalteu assays, reducing the DPPH and ORAC-FL); antiproliferative (against strains of tumor and non-tumor cells); antimicrobial (against bacteria, yeasts and protozoa); anti-inflammatory (in vitro assay for denaturation of bovine serum albumin (BSA) and in vivo study using the model of paw edema and carrageenan-induced pleurisy in mice). In the first step, the phytochemical, it was obtained the chemical profile of the bioactive extracts (TLC, GC, HPLC and ESI-MS), and it was possible to identify some known substances directly from crude extracts (dereplication). The bioactive extracts with substances that could not be identified in the dereplication step were subjected to bioassay-guided fractionation and isolated substances were identified using spectroscopic analysis methods (UV, 1H and 13C NMR) and mass spectrometry and isolated compounds were subjected to evaluation of bioactivity. Extracts and phases of partition of ethanol extracts showed significant antioxidant activity in the three trials, observing positive correlation between antioxidant capacities with the phenolic content. These samples showed antiproliferative activity against tumor cell lines with minimum concentration values required for complete inhibition of cell growth, TGI, ranging between 0.42 and 250 ug/mL for bioactive samples and were not cytotoxic to the cell line control, non-tumor VERO (TGI ? 250 ug/mL). They also showed antimicrobial activity against bacteria (with values of Minimum Biocidal Concentration, MBC, between 0.5 and 2.0 mg / ml), against fungi (MBC 1.0 mg mL) and trypanocidal moderate activity against protozoans such as trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi (% viable with trypomastigotes ranging from 4.70 to 69.40% for the gross 4.0 mg/mL and extract phases partition to 2.0mg/mL), leishmanicidal activity for axenic amastigotes of Leishmania (L.) amazonensis (% viable with amastigotes ranging from 0 to 8.10% for the crude at 1,0 and 0.5 mg/mL extracts). The flavonoids isolated patuletin 3-O-B-D-glucopyranoside and tiliroside showed promising antiprotozoal activity and effect on cell viability for both T. cruzi tipomastigotas, and amastigotas of L. (L.) amazonensis. The extracts exhibited anti-inflammatory activity in vitro with inhibition of denaturation of BSA protein (IC50 between 41.1 and 400 ug/mL), where the ethanolic phases for the ethanol extract partition and flavonoids isolated patuletin 3-O-B-D-glucopyranoside and tiliroside inhibited in vivo the paw edema induced by carrageenan and the migration of leukocytes in the pleural cavity induced by carrageenan. The extravasation of proteins were also measured by Bradford reaction. The phytochemical study was monitored by biological and antioxidants activities, and was possible to identify five steroids, three triterpenoids, three acetates triterpenoids, four phenolic acids and three flavonoids in bioactive samples. It is as well possible to isolate two flavonoids (patuletin 3-O-B-D-glucopyranoside and tiliroside). The results obtained in this study justify, at least in part, the popular use of the genus Pfaffia and confirm the potential of the Amaranthaceae family as a source of bioactive molecules and its inputs to health. It is important to continue on the studies with the most promising bioactive samples, with goals on the pharmaceutical, biotechnological and clinical applications / Doutorado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Doutor em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12002_Dissertação_Francine Alves Nogueira de Almeida.pdf: 2009835 bytes, checksum: d864a01c75bbc516074e2befb4c57c5c (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / À medida que a indústria de plantas medicinais cresce, a autenticidade de seus produtos é uma questão de segurança do consumidor e não pode ser negligenciada. O Ginseng brasileiro, por exemplo, se refere a duas espécies distintas, Pfaffia glomerata e Hebanthe eriantha. Apesar da similaridade entre essas duas espécies, o que dificulta a identificação morfológica, elas possuem propriedades químicas e farmacológicas distintas. Foi proposto que a técnica de High Resolution Melting (HRM) como uma ferramenta para discriminar e identificar as espécies P. glomerata e H. eriantha utilizando uma região do gene matK e rbcL. Para tal, foram adquiridas seis amostras referência, três de cada uma das espécies citadas, e 60 amostras comerciais, vendidas como Ginseng brasileiro, por meio de compra física ou online. O DNA foi extraído pelos métodos CTAB e por Kit. Os primers desenhados foram testados através da amplificação por PCR convencional e confirmado em gel de poliacrilamida antes da padronização da amplificação por PCR-HRM e por fim os resultados foram comparados aos de sequenciamento. Foram desenvolvidos três primers dois para o gene matK, HRM-matKD e HRM-matK, e um para o gene rbcL, HRM-rbcL. Durante a padronização notou-se a influência da temperatura de anelamento e concentração do primer no resultado da corrida, entretanto o método de extração não alterou os resultados. A análise de HRM mostrou que o primer HRM-matKD foi o que atendeu ao objetivo proposto apresentando alta sensibilidade (92-93%) e especificidade (100%) comparado ao método de sequenciamento. Foi possível validar a técnica de HRM utilizando amostras comerciais previamente sequenciadas, o que nos permite afirmar que a técnica de HRM pode ser utilizada para discriminar H. eriantha e P. glomerata. HRM é um método rápido e de baixo custo, sendo uma ferramenta confiável para identificação de espécies de Ginseng brasileiro.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-29T13:15:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1146273 bytes, checksum: 4c59d7889b107c9a870070465d40075b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T13:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1146273 bytes, checksum: 4c59d7889b107c9a870070465d40075b (MD5) Previous issue date: 2013-01-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Pfaffia glomerata (Amaranthaceae), conhecida como ginseng brasileiro, é uma importante espécie medicinal nativa do Brasil. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da ploidia das plantas e das condições de cultivo in vitro e ex vitro no crescimento e produção de metabólitos secundários em P. glomerata. Nesse trabalho foram utilizados explantes diploides e tetraploides induzidos artificialmente por uso de colchicina. Nas condições in vitro foram avaliados os efeitos da poliploidização, da adição de sacarose ao meio de cultura e da concentração atmosférica de CO2 nos parâmetros de crescimento e acúmulo de 20E em P. glomerata. Enquanto nas condições ex vitro analisou- se o crescimento, acúmulo de pigmentos, densidade estomática, teores de 20E e saponinas triterpênicas em função da ploidia da planta, volume de vaso e tratamento com paclobutrazol (PBZ). Todos os parâmetros de crescimento avaliados e o acúmulo de metabólitos secundários foram reprimidos em plantas tetraploides comparadas às diploides em condições de cultivo in vitro e ex vitro. Foram observadas nos indivíduos tetraploides características específicas de poliploidia, como redução da densidade estomática e aumento da relação largura/comprimento foliar. Em condições in vitro, a presença de sacarose no meio de cultura promoveu melhor crescimento, porém inibiu o acúmulo de 20E. Assim, a fotoautotrofia mostra-se mais favorável por apresentar potencial na produção comercial massal de mudas dessa espécie com altos teores de 20E. O enriquecimento de CO2 (1.000 μmol/mol de CO2) também induziu a produção de plantas com maiores biomassa e acúmulo de 20E, favoráveis ao interesse comercial. Após aclimatização, plantas de P. glomerata apresentaram forte indução nos parâmetros de crescimento quando crescidas em vasos de maior volume, enquanto a aplicação de PBZ não interferiu na produção de biomassa e metabólitos secundários. Dessa forma, a utilização de vasos de maior volume é um importante fator na produção em escala comercial de ginseng brasileiro. / Pfaffia glomerata (Amaranthaceae), known as Brazilian ginseng, is an important medicinal species native to Brazil. The objective of this study was to evaluate the influence of the ploidy level and in vitro and ex vitro culture conditions on the growth and secondary metabolite production in P. glomerata. Explants of diploids and tetraploids artificially induced by colchicine explants were used. Under in vitro conditions, we evaluated the effects of polyploidization, supplementation of sucrose to the culture medium and atmospheric CO 2 concentration on growth parameters and 20-hydroxyecdysone (20E) accumulation of P. glomerata nodal explants. Following transfer to ex vitro conditions, growth, pigment content, stomatal density, levels of 20E and saponins were analyzed according to the plant ploidy, vessel volume and treatment with paclobutrazol (PBZ). All growth characteristics and accumulation of secondary metabolites were inhibited in tetraploid background compared with diploids, both under in vitro and ex vitro conditions. Specific characteristics of polyploidy, such as reduced stomatal density and increased width/length ratio of leaves were found in tetraploid individuals. Under in vitro conditions, the presence of sucrose in the culture medium promoted better growth, but inhibited 20E accumulation. Thus, the photoautotrophy seems to be more favorable because shows potencial commercial mass production of seedlings of this species with high levels of 20E. CO2 enrichment also induced plant production with higher biomass and 20E accumulation, favorable for commercial purposes. After acclimatization, P. glomerata showed significant increase in growth parameters when it was grown in higher-volume pots, while the PBZ application did not affect the biomass and secondary metabolite production. Thereby, the use of larger pots is an important factor in commercial-scale production of Brazilian ginseng. / Não foi localizado o cpf do autor. Tese enviada pela secretaria do curso por e-mail, em 28-03-17.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-26T11:34:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2190067 bytes, checksum: 2cfae1ae5bfb26b4edf94d4d1c1d8085 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T11:34:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2190067 bytes, checksum: 2cfae1ae5bfb26b4edf94d4d1c1d8085 (MD5) Previous issue date: 2014-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Conhecida popularmente como ginseng brasileiro , Pfaffia glomerata (Amaranthaceae) é uma espécie medicinal nativa do Brasil, e produz o phytoecdysteroid 20 hydroxyecdisone (20E) como seu principal ingrediente ativo. Este estudo teve como objetivo investigar se o potencial fotoautotrófico in vitro e a produção de 20E de 6 acessos de P. glomerata estão relacionados com o desempenho fotossintético e acúmulo de biomassa sob condições de cultivo ex vitro e estudar como estes parâmetros são afetados pela poliploidização artificial. Acessos de P. glomerata demonstraram capacidades fotossintéticas significativamente diferentes, resultando em variações no acúmulo de biomassa tanto in vitro quanto ex vitro. Conforme hipotetizado, os acessos com maior potencial fotoautotrófico in vitro também apresentaram maiores desempenhos fotossintéticos e acúmulo de biomassa ex vitro. Esses mesmos acessos também apresentaram a maior massa de 20E por planta ex vitro. A produção de 20E in vitro também variou entre os acessos, com a maior massa total observada nos acessos 4 e 43, que também estão entre os melhores produtores ex vitro. A poliploidização sintética mostrou-se eficiente na produção de indivíduos tetraplóides com maior potencial fotoautotrófico in vitro e acúmulo de biomassa ex vitro, embora as taxas de fotossíntese por área foliar não variaram entre diplóides e tetraplóides. Entre os 5 tetraploides gerados independentemente (P28 , P60, P68 , P75 e P75), apenas P28 apresentou um aumento efetivo no crescimento, com maior acúmulo de biomassa em relação às plantas diplóides, tanto in vitro quanto ex vitro. A poliploidização não aumentou as taxas de fotossíntese por área foliar, mas aumentou a área foliar em P28, o que pode ter resultado em um aumento da fotossíntese líquida por planta. O acúmulo de 20E in vitro foi maior em plantas diplóides que em tetraplóides. A concentração de 20E ex vitro no P28 tetraploid foi 31% maior do que em diplóides. Em comparação com diplóides, P28 apresentou o dobro da massa total 20E produzidos por planta. Em relação ao potencial fotoautotrófico in vitro, acúmulo de biomassa e produção 20E ex vitro, a indução de poliploidia e seleção de genótipos mostraram-se estratégias eficazes para alcançar uma melhor produção de P. glomerata. / Popularly known as Brazilian ginseng, Pfaffia glomerata (Amaranthaceae) is a medicinal species native to Brazil that produces the phytoecdysteroid 20- hydroxyecdisone (20E) as its main active ingredient. This study aimed to shed light if the in vitro photoautotrophic potential and 20E production of 6 P. glomerata accessions could be related to photosynthetic performance and biomass accumulation under ex vitro conditions and study how these parameters are affected by induced polyploidy. P. glomerata accessions have significantly different photosynthetic capacities, resulting in differential biomass accumulation both in vitro and ex vitro. As hypothesized, the accessions with the highest photoautotrophic potential also showed greater photosynthetic performances and biomass accumulation ex vitro. The same accessions also showed the highest 20E mass per plant ex vitro. 20E production in vitro also varied among accessions, with the highest total mass achieved by accessions 4 and 43, which are also among the best producers ex vitro. Synthetic polyploidization was efficient in producing tetraploid individuals with increased in vitro photoautotrophic potential and ex vitro biomass accumulation, although photosynthetic rates per leaf area did not vary between diploids and tetraploids. Among the 5 independently generated tetraploids tested (P28, P60, P68, P75 and P75), only P28 showed effectively increased growth performance, with higher biomass accumulation in vitro and ex vitro in comparison to diploid plants. Polyploidization did not increase the photosynthetic rates per leaf area, but increased leaf area in P28, what may have resulted in an increased net photosynthesis per plant. 20E accumulation in vitro was higher in diploid plants than in tetraploids. The 20E content ex vitro in the tetraploid P28 was 31% greater than in diploids. In comparison to diploids, P28 showed the double of the total 20E mass produced per plant. The induction of polyploidy and selection of genotypes showed to be effective strategies to achieve an improved P. glomerata production in terms of higher in vitro photoautotrophic potential, biomass accumulation and 20E production ex vitro.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-18T16:45:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1608119 bytes, checksum: 4bfe7cf50a62d7c65e4e1a64b88c1ac7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T16:45:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1608119 bytes, checksum: 4bfe7cf50a62d7c65e4e1a64b88c1ac7 (MD5) Previous issue date: 2012-03-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Plantas do gênero Pfaffia estão entre as principais espécies medicinais comercializadas no Brasil, sendo suas propriedades medicinais atribuídas a substâncias presentes nas raízes. É grande a necessidade o desenvolvimento de protocolos que viabilizem a propagação em larga escala dessa espécie para garantia de suprimento de material propagativo, em qualidade e quantidade. Sendo assim, esse trabalho objetivou o desenvolvimento de protocolos para a produção rápida e em larga escala da espécie e promover a tuberização das raízes de plantas cultivadas in vitro, uma vez que esse é o principal órgão comercializado. Para a promoção de multibrotações axilares in vitro, segmentos nodais dos acessos 04 e 13 foram inoculados em frascos com meio MS acrescido com 0,5 mg L -1 de BA + ANA, em diferentes fontes de carbono (0,1M, 0,2 M ou 0,3 M de glicose ou sacarose), por 30 dias de cultivo. Foi avaliado o número de brotos produzidos, sendo observado a formação e coloração dos calos. Para viabilização da produção in vitro de 20-E, segmentos nodais dos acessos 4 e 13 foram inoculados em recipientes tipo Magentas ® contendo meio MS com diferentes fontes de carbono (glicose a 0,1 M e 0,2 M; sacarose a 0,1 M ou 0,2 M; a combinação de sacarose + glicose 0,1 M ou 0,2 M) e sem fonte de carbono (controle), e ensacados em saco plástico com filtro bacteriológico, por 30 dias de cultivo. Foram avaliados o comprimento médio das plantas, a massa seca da parte aérea e raízes, verificando-se a porcentagem de 20-E na massa seca de folhas e raízes nos diferentes tratamentos e realizou-se analise mocromorfometrica das folhas. Para promoção da tuberização in vitro, segmentos nodais dos acessos 22 e 43 foram inoculados em frascos de vidro contendo meio MS acrescido com diferentes combinação de regulador de crescimento (0,5 mg.L -1 de BA; 0,5 BA + AIB; 0,5 BA + 1,0 DE AIB; 0,5 AIB) e sem regulador de crescimento (controle) por 10 dias. Após, os explantes foram transferidos para frascos contendo 0,2 M de sacarose por 30 dias de cultivo. Foram avaliados a porcentagem de cobertura do fundo do frasco por raízes, massa seca da parte aérea e raízes. No experimento de multibrotações, foi observada a formação de calos na base dos explantes em todos os tratamentos, sendo a coloração dos calos do acesso 13 variando de branco a verde claro e dos brotos de verde claro a róseo. No acesso 4, a coloração dos calos variou de branco a verde escuro arroxeado. A característica de formação de multibrotações se mostrou genótipo-dependente, sendo o acesso 04 superior ao acesso 13 quando cultivado em glicose ou sacarose a 0,1 M (35 e 43 brotos/explantes). Para o teor de 20-E também foram observados efeitos significativos entre os acessos e as fontes de carbono, sendo do acesso 13 as maiores médias tanto para raízes quanto folhas (1,02 e 1,07%). As maiores médias para o comprimento da planta, massa seca das raízes e parte aérea foi observada para o acesso 13. Na análise micromorfométrica das folhas em ambas as faces, o número de células epidérmicas, estômatos, e densidade estomática foram superiores no acesso 13 em relação ao acesso 04. O protocolo proposto para indução de raízes tuberiformes foi ineficaz, entretanto, plantas do acesso 43 apresentaram maior massa seca da parte aérea em relação ao acesso 22 e sendo dos tratamentos com 0,5 mg.L -1 de BA as maiores médias para massa seca da parte aérea e raízes. Não houve efeito significativo nos acessos e reguladores de crescimento para porcentagem de enraizamento e dos acessos para massa seca das raízes. Em conformidade com os resultados, esses servirão para auxilio de pesquisas futuras sobre Pfaffia glomerata. / Plants of the genus Pfaffia are among the most traded medicinal species in Brazil whose medicinal properties are attributed to substances present in the roots. There is a great need for developing protocols to enable the large-scale propagation of this species and assure supply of large amounts of high quality propagation material. Thus, this study aimed to develop protocols for the rapid and large scale production of Pfaffia species and promote root tuberization of plants grown in vitro, since this is the main traded part. For in vitro axillary bud proliferation, nodal segments of the accessions 4 and 13 were inoculated in Magenta ® boxes containing MS medium supplemented with 0.5 mg L -1 BA + NAA, in different carbon sources (0.1 M, 0.2 M or 0.3 M of glucose or sucrose), for 30 days in culture. The number of shoots produced was recorded and the formation and color of calli were evaluated. To promote in vitro production of 20-E, nodal segments of accessions 4 and 13 were inoculated into Magenta ® boxes containing MS medium with different carbon sources (0.1 M and 0.2 M glucose; 0.1 M or 0.2 M sucrose; and the combination of sucrose + 0.1 M or 0.2 M glucose) and a control without carbon source, and bagged in plastic bags with bacteriological filter, for 30 days of culture. The mean length of plants, dry mass of shoots and roots, the percentage of 20-E in the dry mass of leaves and roots of the different treatments were evaluated and the micro-morphometric analysis of leaves was performed. To promote the tuberization in vitro of roots, nodal segments of accessions 22 and 43 access were inoculated in glass jars containing MS medium supplemented with different combinations of growth regulators (0.5 mg l -1 BA; 0.5 BA + AIB; 0.5 BA + 1.0 AIB; 0.5 AIB) and without growth regulators (control), for 10 days. The explants were then transferred to jars containing 0.2 M sucrose for 30 days of culture. The percentage of the bottom of the jar that was covered by roots, the dry mass of shoots and dry mass of roots were evaluated. In the experiment of axillary bud proliferation, there was formation of callus at the base of the explants in all treatments, and the color of the calli of accession 13 ranged from white to light green and the color of shoots from light green to pinkish. For accession 4, the color of the calli varied from white to dark green and purple. The characteristic axillary bud proliferation proved genotype-dependent: accession 4 was superior to accession 13 when grown on glucose or sucrose 0.1 M (35 and 43 shoots/explant). The content of E-20 also showed significant effects between the accessions and the carbon sources: accession 13 showed the highest means for both roots and leaves (1.02 and 1.07%). The highest means for plant height, dry mass of roots and shoots were recorded for accession 13. In the micromorphometric analysis of both sides of the leaves, the number of epidermal cells, stomata, and stomatal density were higher in the accession 13 compared with the accession 04. The protocol proposed for tuber induction was ineffective, however, plants of accession 43 had higher shoot dry mass in relation to accession 22. The treatments with 0.5 mg.L -1 BA provided the highest means for dry mass of shoots and roots. There was neither significant effect of accession and growth regulator on percentage of rooting nor effect of accession on root dry mass. The results of this study will serve to guide future research on Pfaffia glomerata. / Dissertação antiga

Made available in DSpace on 2018-08-01T20:28:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11108_Dissertação_Verônica Luiza S. Fialho.pdf: 825449 bytes, checksum: 700df7d34ebe1579f26a45eb08933658 (MD5) Previous issue date: 2017-03-09 / Plantas das espécies Pfaffia spp. são amplamente utilizadas em território nacional e são popularmente conhecidas como Ginseng-brasileiro. As espécies mais conhecidas são a Pfaffia glomeratae a Pfaffia paniculata. Há indicações de uso como tônico e revigorante geral, no tratamento de fadiga física, esgotamento mental, falta de memória, como auxiliar no tratamento de distúrbios circulatórios, dentre outros. Embora as duas espécies sejam utilizadas com os mesmos propósitos, deve-se considerar que a diferença química entre elas pode interferir nos espectros de ações farmacológicas e toxicológicas. A identificação morfológica das raízes é tarefa difícil sobretudo devido a sua forma de comercialização. Por isso, faz-se necessário o desenvolvimento de novas metodologias de identificação das espécies comercializadas. O objetivo principal deste trabalho foi identificar, em nível de espécie, amostras de Ginseng-brasileiro vendidos no mercado brasileiro, utilizando, para isso, o código de barras de DNA (DNA barcode). O DNA de 60 amostras comerciais foi extraído e os genes matK e rbcL foram amplificados por PCR e sequenciados. Além disso, amostras referência, morfologicamente identificadas, das duas espécies foram utilizadas para comparação e submetidas ao mesmo protocolo. Posteriormente, as amostras foram confrontadas com amostras referências e com o banco de dados BOLD (Barcode of Life Data Systems). Dentre as amostras referências, 90% amplificaram, tanto para matK quanto para rbcL. As amostras comerciais obtiveram taxa de amplificação de 95% para ambos os genes. Todas amostras foram sequenciadas. Encontrou-se uma diferença interespecífica entre P. glomerata e P. paniculata de 1,92% para matK e 1,90% para rbcL. Não foi encontrada variação intraespecífica. Das 58 amostras avaliadas, 67,24% foram identificadas, sendo 61,54% P. glomerata e 38,46% P. paniculata. O restante, 32,76% não foram identificadas conforme o rótulo, caracterizando adulteração. Desses, 22,41% não foram identificadas e 10,34% apresentaram substituição de espécies. O método de identificação por DNA bacode possibilitou a identificação, em nível de espécie, das amostras comercializadas como Ginseng brasileiro obtidas do mercado brasileiro, como P. glomerata e P. paniculata.

As raízes de Pfaffia paniculata têm sido popularmente utilizadas com vários propósitos, assim como adjuvante na terapia contra o câncer. Recentemente demonstramos que as raízes pulverizadas de Pfaffia paniculata causam uma atenuação do crescimento do tumor de Ehrlich em sua forma ascítica. Os objetivos do presente estudo foram caracterizar os efeitos do extrato etanólico, resíduos aquoso ou butanólico de Pfaffia paniculata sobre o desenvolvimento do tumor de Ehrlich, assim como investigar seus possíveis mecanismos. Em um primeiro experimento, foi demonstrado que camundongos machos Swiss, portadores do tumor de Ehrlich ascítico, tratados com resíduo aquoso ou butanólico, apresentaram uma maior sobrevida em relação aos animais controle. Nos experimentos com o tumor na forma sólida ou ascítica, os animais receberam, diariamente, o resíduo butanólico por 16 dias (experimento com o tumor sólido) ou 15 dias (experimento com o tumor ascítico). No 8º dia de tratamento, foram inoculados com 2,5 x 106 células tumorais, no coxim plantar esquerdo, ou com 5,0 x 106 células tumorais, Intraperitonealmente. O tumor ascítico foi avaliado, 7 dias após a inoculação do tumor, pela quantificação do volume de fluído ascítico, concentração de células tumorais e número total de células tumorais. O tumor sólido foi avaliado pela mensuração diária das patas e pela morfometria da área de necrose em meio à massa tumoral em cortes corados por HE, e proliferação celular, por imunoistoquímica, 8 dias após a inoculação do tumor. Nesses experimentos, nenhum destes parâmetros avaliados apresentaram alterações nos camundongos tratados com este resíduo. A fim de se avaliar a toxicidade do resíduo butanólico, os animais foram tratados com este resíduo por 14 dias. Os animais tratados com este resíduo apresentaram uma discreta diminuição de ganho de peso. Não houve evidências de toxicidade hepática e renal, pela mensuração das atividades de enzimas indicativas de necrose e pelo exame histopatológico de figado e rim, onde não se observou necrose. Em outro experimento, alguns parâmetros da atividade macrofágica, 24 após a inoculação do tumor, foram avaliados, por citometria de fluxo. Os animais receberam o resíduo butanólico por 7 dias, e foram inoculados com 5 x 106 células tumorais, intraperitonealmente. O burst oxidativo ativado por Staphylococcus aureus foi menor em animais tratados com o resíduo, porém não foram observadas diferenças ma fagocitose e burst oxidativo espontâneo ou ativado por PMA. Por fim, estudos in vitro foram realizados. Os efeitos deste resíduo sobre a viabilidade, medido pelo ensaio do MTT, e sobre o ciclo celular, utilizando citometria de fluxo, de células do tumor de Ehrlich foram avaliados. As maiores concentrações do resíduo levaram a uma diminuição da viabilidade e um aumento de morte celular. Assim, o tratamento com este resíduo, in vivo, causou uma atenuação do desenvolvimento tumoral, provavelmente devido a uma diminuição na formação do fluído ascítico ou a morte celular. Os efeitos deste resíduo foram mais pronunciados em cultura celular. / The roots of Pfaffia paniculata have been popularly used for various purposes, as well as an adjuvant for cancer therapy. Recently we have shown that the powdered roots of Pfaffia paniculata promote an attenuation of the Ehrlich tumor growth in its ascitic form. The aims of the present study were to characterize the effects of the ethanolic extract, aqueous or butanolic residues of Pfaffia paniculata on Ehrlich tumor development in mice, as well as investigate its possible mechanisms. In a first experiment, it was shown that aqueous or butanolic residues-treated Swiss mice bearing Ehrlich ascites tumor presented a higher survival time than control animal. In the experiments with the tumor in its solid or ascitic forms, the animals were given, daily, the butanolic residue for 16 days (experiment with solid tumor) or 15 days (experiment with ascitic tumor). On the 8o day of treatment, they were inoculated with 2,5 x 106 tumor cells, on the left footpad, or with 5 x 106 tumor cells, intraperitoneally. The ascitic tumor was evaluated, 7 days after the inoculation of the tumor, by the quantification of the volume of the ascitic fluid, concentration of tumor cells and total number of tumor cells. The solid tumor was evaluated by the daily measurement of the footpads and morphometry of the necrosis within the tumor area on HE stained slices, and cell proliferation by immunohistochemistry, 8 days after the inoculation of the tumor. In these experiments, none of these parameters showed any alterations in mice treated with the residue. In order to evaluate the toxicity of butanolic residue, the animals were treated with this residue (200mg/Kg) for 14 days. The animals treated with the residue showed a discrete decrease on weight gain. There were no evidences of hepatic and renal toxicity, by measurement of enzymes activities of necrosis, and also lack of necrosis by histopathological analysis of liver and kidney. In another experiment, some parameters of macrofagic activity, 24 hours after the inoculation of tumor, were evalueted, by flow citometry. The animals received the butanolic residue for 7 days and then were inoculated with 5 x 106 tumor cells, intraperitoneally. The oxidative burst activated by Staphylococcus aureus was reduced on animals treated with the residue, but no differences on fagocytosis and spontaneous or oxidative burst esimulated by PMA were found. Finally, in vitro studies were performed. The effects of this residue on the cell viability, measured by the MTT assay, and on the cell cycle, by flow cytometry, in Ehrlich tumor cells were evaluated. The highest concentrations of the residue caused a decrease of the cell viability and an increase of death cell. Thus, the treatment with this residue, in vivo, caused an attenuation of the tumor development, likely due to a decrease in the ascitic fluid formation or cell death. The effects of this residue on cell death were more pronounced in cultured cells. These results point to a novel agent for the cancer therapy, but further studies must be performed to elucidate the mechanisms responsible for these effects.

As raízes de Pfaffia paniculata têm sido popularmente utilizadas com vários propósitos, assim como adjuvante na terapia contra o câncer. Recentemente demonstramos que as raízes pulverizadas de Pfaffia paniculata causam uma atenuação do crescimento do tumor de Ehrlich em sua forma ascítica. Os objetivos do presente estudo foram caracterizar os efeitos do extrato etanólico, resíduos aquoso ou butanólico de Pfaffia paniculata sobre o desenvolvimento do tumor de Ehrlich, assim como investigar seus possíveis mecanismos. Em um primeiro experimento, foi demonstrado que camundongos machos Swiss, portadores do tumor de Ehrlich ascítico, tratados com resíduo aquoso ou butanólico, apresentaram uma maior sobrevida em relação aos animais controle. Nos experimentos com o tumor na forma sólida ou ascítica, os animais receberam, diariamente, o resíduo butanólico por 16 dias (experimento com o tumor sólido) ou 15 dias (experimento com o tumor ascítico). No 8º dia de tratamento, foram inoculados com 2,5 x 106 células tumorais, no coxim plantar esquerdo, ou com 5,0 x 106 células tumorais, Intraperitonealmente. O tumor ascítico foi avaliado, 7 dias após a inoculação do tumor, pela quantificação do volume de fluído ascítico, concentração de células tumorais e número total de células tumorais. O tumor sólido foi avaliado pela mensuração diária das patas e pela morfometria da área de necrose em meio à massa tumoral em cortes corados por HE, e proliferação celular, por imunoistoquímica, 8 dias após a inoculação do tumor. Nesses experimentos, nenhum destes parâmetros avaliados apresentaram alterações nos camundongos tratados com este resíduo. A fim de se avaliar a toxicidade do resíduo butanólico, os animais foram tratados com este resíduo por 14 dias. Os animais tratados com este resíduo apresentaram uma discreta diminuição de ganho de peso. Não houve evidências de toxicidade hepática e renal, pela mensuração das atividades de enzimas indicativas de necrose e pelo exame histopatológico de figado e rim, onde não se observou necrose. Em outro experimento, alguns parâmetros da atividade macrofágica, 24 após a inoculação do tumor, foram avaliados, por citometria de fluxo. Os animais receberam o resíduo butanólico por 7 dias, e foram inoculados com 5 x 106 células tumorais, intraperitonealmente. O burst oxidativo ativado por Staphylococcus aureus foi menor em animais tratados com o resíduo, porém não foram observadas diferenças ma fagocitose e burst oxidativo espontâneo ou ativado por PMA. Por fim, estudos in vitro foram realizados. Os efeitos deste resíduo sobre a viabilidade, medido pelo ensaio do MTT, e sobre o ciclo celular, utilizando citometria de fluxo, de células do tumor de Ehrlich foram avaliados. As maiores concentrações do resíduo levaram a uma diminuição da viabilidade e um aumento de morte celular. Assim, o tratamento com este resíduo, in vivo, causou uma atenuação do desenvolvimento tumoral, provavelmente devido a uma diminuição na formação do fluído ascítico ou a morte celular. Os efeitos deste resíduo foram mais pronunciados em cultura celular. / The roots of Pfaffia paniculata have been popularly used for various purposes, as well as an adjuvant for cancer therapy. Recently we have shown that the powdered roots of Pfaffia paniculata promote an attenuation of the Ehrlich tumor growth in its ascitic form. The aims of the present study were to characterize the effects of the ethanolic extract, aqueous or butanolic residues of Pfaffia paniculata on Ehrlich tumor development in mice, as well as investigate its possible mechanisms. In a first experiment, it was shown that aqueous or butanolic residues-treated Swiss mice bearing Ehrlich ascites tumor presented a higher survival time than control animal. In the experiments with the tumor in its solid or ascitic forms, the animals were given, daily, the butanolic residue for 16 days (experiment with solid tumor) or 15 days (experiment with ascitic tumor). On the 8o day of treatment, they were inoculated with 2,5 x 106 tumor cells, on the left footpad, or with 5 x 106 tumor cells, intraperitoneally. The ascitic tumor was evaluated, 7 days after the inoculation of the tumor, by the quantification of the volume of the ascitic fluid, concentration of tumor cells and total number of tumor cells. The solid tumor was evaluated by the daily measurement of the footpads and morphometry of the necrosis within the tumor area on HE stained slices, and cell proliferation by immunohistochemistry, 8 days after the inoculation of the tumor. In these experiments, none of these parameters showed any alterations in mice treated with the residue. In order to evaluate the toxicity of butanolic residue, the animals were treated with this residue (200mg/Kg) for 14 days. The animals treated with the residue showed a discrete decrease on weight gain. There were no evidences of hepatic and renal toxicity, by measurement of enzymes activities of necrosis, and also lack of necrosis by histopathological analysis of liver and kidney. In another experiment, some parameters of macrofagic activity, 24 hours after the inoculation of tumor, were evalueted, by flow citometry. The animals received the butanolic residue for 7 days and then were inoculated with 5 x 106 tumor cells, intraperitoneally. The oxidative burst activated by Staphylococcus aureus was reduced on animals treated with the residue, but no differences on fagocytosis and spontaneous or oxidative burst esimulated by PMA were found. Finally, in vitro studies were performed. The effects of this residue on the cell viability, measured by the MTT assay, and on the cell cycle, by flow cytometry, in Ehrlich tumor cells were evaluated. The highest concentrations of the residue caused a decrease of the cell viability and an increase of death cell. Thus, the treatment with this residue, in vivo, caused an attenuation of the tumor development, likely due to a decrease in the ascitic fluid formation or cell death. The effects of this residue on cell death were more pronounced in cultured cells. These results point to a novel agent for the cancer therapy, but further studies must be performed to elucidate the mechanisms responsible for these effects.

Orientadores: Fernando Antonio Cabral, Carmen Lucia Queiroga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-24T20:47:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bitencourt_RaphaelaGabri_M.pdf: 3804854 bytes, checksum: 637f4c96c752119c1bf3fe68678e9bbb (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Saponinas são compostos que se destacam por apresentarem ações farmacológicas, e também por serem empregadas nas indústrias de alimentos e de cosméticos devido às suas propriedades físico-químicas, tais como agentes de superfície. Processos de extração com dióxido de carbono supercrítico (scCO2), como substituto de solventes orgânicos tóxicos representam uma boa opção para extração de compostos bioativos, pois produzem extratos e resíduos isentos de solventes indesejáveis sendo, portanto, tecnologias limpas. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo extrair e fracionar saponinas a partir de três fontes vegetais, sendo elas raízes de Pfaffia glomerata e de Hebanthe eriantha, conhecidas como ginseng brasileiro, e frutos de Melia azedarach, utilizando um processo sequencial em leito fixo usando scCO2, etanol e água como solventes. As extrações foram realizadas a 50 oC e 300 bar e em quatro etapas sequenciais. Na primeira etapa utilizou-se como solvente scCO2, na segunda escoou-se pelo leito fixo uma mistura scCO2 + etanol na proporção 70:30 (m/m) e, etanol puro e uma mistura etanol/água (70:30 v/v) foram usados nas terceira e quarta etapas, respectivamente. A eficiência do processo de extração e fracionamento foi avaliada com base: 1) nos valores de rendimento de extração, 2) na presença de saponinas, as quais foram monitoradas por cromatografia em camada delgada (CCD) e 3) pela capacidade de redução da tensão superficial de soluções aquosas. Os extratos de M. azedarach ainda foram avaliados quanto ao teor de fenóis e flavonoides totais, perfil químico de compostos voláteis por CG- EM e por espectrometria de massas (ESI-EM). As raízes estudadas apresentaram curvas de extração (cinética) e rendimento semelhantes entre si nas três primeiras etapas. Os rendimentos de extração para as quatro etapas de extração foram 0,16; 0,55; 1,00 e 6,9 % para raízes de P. glomerata e 0,17; 0,58; 0,89 e 28 % para raízes de H. eriantha, respectivamente, indicando presença majoritária de compostos de maior polaridade nestas espécies. Os rendimentos de extração a partir de frutos de M. azedarach apresentaram-se maiores (7,6; 6,4; 19 e 12,3 %) que os de raízes de ginseng brasileiro. As análises por CCD mostraram que o processo de extração foi seletivo de acordo com a polaridade do solvente utilizado, fornecendo frações enriquecidas em diferentes compostos. Os extratos das três matrizes vegetais obtidos pela mistura de dióxido de carbono e etanol (SCEE) apresentaram a maior redução da tensão superficial, apresentando valores de 25,0; 25,0 e 26,9 mN.m-1 para P. glomerata, H. eriantha e M. azedarach, respectivamente, contra 36,3 mN.m-1 para solução de surfactante sintético (dodecil sulfato de sódio). Este resultado sugere que esta capacidade está associada a presença de saponinas de menor polaridade. E, ainda, verificou-se que as saponinas de ginseng brasileiro apresentam concentração micelar crítica (CMC) ? 20 g.L-1. Os maiores teores de compostos fenólicos dos extratos de M. azedarach foram obtidos nos extratos hidroalcoólico (21,6 mg de EAG/g de extrato) e SCEE (20,6 mg de EAG/g de extrato). Não foi verificada presença significativa de compostos voláteis em frutos de M. azedarach por CG-EM. Análises de EM identificaram ácidos graxos (linoleico, palmítico e mirístico) e azedaraquina C (limonoide) no extrato supercrítico e compostos fenólicos (ácido cafeico e ácido málico) nos demais extratos. Por fim, o dióxido de carbono supercrítico mostrou-se seletivo às saponinas com maior capacidade de reduzir a tensão superficial de soluções aquosas, quando utilizado com etanol como cossolvente e, no geral, o processo de extração sequencial em leito fixo utilizando o solventes "verdes" apresentou-se como uma boa alternativa ao uso de solventes orgânicos para extrair e fracionar saponinas presentes em diferentes fontes vegetais / Abstract: Saponins are compounds that stand out due to their pharmacological actions, and also because they are employed by food and cosmetics industry due to its physicochemical properties, such as surfactants. Extraction processes with supercritical carbon dioxide (scCO2) as a substitute of toxic organic solvents represent a good option for extracting biocompounds since they obtain free of undesirable solvents extracts and residues thus being a green technology. Therefore, this study aimed to extract and fractionate saponins of three plant sources: roots of Pfaffia glomerata and Hebanthe eriantha (Brazilian ginseng) and fruits of Melia azedarach, by a sequential process in fixed bed using scCO2, ethanol and water as solvents. The extractions were performed at 50 °C and 300 bar in four sequential steps. In the first step scCO2 was used as solvent; in the second scCO2/ethanol mixture, mass ratio 70:30 (w/w); pure ethanol and ethanol/water mixture 70:30 (v/v) were used in the third and fourth stages, respectively. The efficiency of extraction and fractionation process was evaluated based on: 1) the extraction yield, 2) presence of saponins, which were monitored by thin layer chromatography (TLC) and 3) the potential of extracts to reduce the surface tension of aqueous solutions. The extracts of Melia azedarach also were evaluated for their content of total phenols and flavonoids, chemical profile by GC-MS and mass spectrometry (ESI-MS). The roots studied presented similar overall extraction curves (kinetic) and yields in the first three steps. The extraction yields for the four stages of extraction were 0.16, 0.55, 1.00 and 6.9 % for roots of P. glomerata and 0.17, 0.58, 0.89 and 28 % for H. eriantha roots, respectively, showing predominant presence of polar compounds in these species. The extraction yields from fruits of M. azedarach were higher (7.6, 6.4, 19 and 12.3 %) than roots of Brazilian ginseng. Analyses by TLC indicated that process was selective in accordance with the polarity of the solvent used providing fractions enriched in different compounds. The extracts of three plant matrices obtained by carbon dioxide and ethanol mixture (SCEE) presented highest ability to reduce surface tension, with values of 25.0, 25.0 and 26.9 mN.m- 1 for P. glomerata, H. eriantha and M. azedarach, respectively, against 36.3 mN.m-1 for a synthetic surfactant solution (sodium dodecyl sulphate). This result suggests that ability is associated with the presence of less polar saponins. And further, Brazilian ginseng saponins have critical micelle concentration (CMC) ? 20 g.L-1. The highest levels of phenolic compounds of M. azedarach were obtained in hydroalcoholic extract (21.6 mg EAG/g extract) and SCEE (20.6 mg EAG/g extract). It was not observed a significant presence of volatile compounds in fruits of M. azedarach by GC-MS. ESI-MS analyses identified fatty acids (linoleic, palmitic and myristic acid) and azedarachin C (limonoid) in supercritical extract (SCE) and the presence of phenolic compounds (caffeic and malic acid) in the other extracts. Finally, the supercritical carbon dioxide has shown to be selective for saponins with the highest capacity to reduce the surface tension of water when used with ethanol as cosolvent. In general, process of sequential fixed bed extraction with green solvents represents a great alternative instead of using organic solvents to extract and fractionate saponins present in different plant sources / Mestrado / Engenharia de Alimentos / Mestra em Engenharia de Alimentos

Orientador: Maria Angela de Almeida Meireles / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-25T04:15:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Debien_IsabelCristinadoNascimento_D.pdf: 14354516 bytes, checksum: 30a73e64c77ed62ec9c96b7c5a8067b0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O presente projeto de doutorado foi desenvolvido em duas etapas: (1) Estudo da extração com fluido supercrítico e com líquido pressurizado dos ecdisteróides do Ginseng brasileiro (Pfaffia glomerata) e (2) Estudo do equilíbrio de fases de sistemas complexos. Etapa 1: Espécies do gênero Pfaffia são popularmente conhecidas como substituto do gênero Panax devido a sua morfologia e propriedades bioativas semelhantes. Dentre as espécies do gênero Pfaffia, a Pfaffia glomerata, popularmente conhecida como Ginseng brasileiro, se destaca devido à presença de ecdisteróides. Comercialmente, esse composto é obtido através de métodos convencionais de extração sólido-líquido, onde uma grande quantidade de solvente é utilizada. Atualmente, há um crescente interesse por métodos de extração que agridam menos o meio ambiente, como é o caso da extração com fluido supercrítico (SFE) e com líquido pressurizado (PLE) que possibilitam a extração de compostos bioativos utilizando altas temperaturas e pressões com menor consumo de solvente. Nessa etapa do trabalho os objetivos foram: (a) realizar um estudo preliminar da extração com fluido supercrítico da beta-ecdisona das raízes de Ginseng brasileiro (Pfaffia glomerata). Foram avaliados os efeitos da pressão (20 e 30 MPa) e quantidade de cossolvente utilizada (15, 75 e 90 % de etanol) no comportamento da curva global de extração (OEC) e no teor de beta-ecdisona no extrato. Usando dióxido de carbono (CO2): etanol (EtOH) (85:15, v/v) como solvente a 20 MPa, maiores quantidade de beta-ecdisona foram obtidas em um menor tempo de processo. O aumento da proporção de etanol na mistura (cossolvente) resultou no aumento do rendimento da extração e do teor de beta-ecdisona em relação a quantidade de matéria-prima; (b) realizar um estudo da extração com líquido pressurizado da beta-ecdisona das raízes de Ginseng brasileiro. Foram avaliados os efeitos da temperatura (333 ¿ 393 K), pressão (8 ¿ 30 MPa) e do solvente (EtOH e EtOH : H2O (80:20 v/v)) no rendimento global, atividade antioxidante e teor de beta-ecdisona dos extratos. O aumento da temperatura ocasionou o aumento do rendimento global, chegando a 25 % (base seca). Assim, pode-se concluir que aumentando a temperatura a seletividade do solvente diminui, uma vez que ocorre a coextração de outros compostos além dos ecdisteróides. Extratos com maior atividade antioxidante foram obtidos quando o solvente de extração é a mistura EtOH: H2O (80:20, v/v). Quando o EtOH puro foi usado como solvente uma maior recuperação de beta-ecdisona foi obtida. Cerca de 5 % de beta-ecdisona nos extratos foi obtida usando etanol a 393 K, enquanto a pressão não afetou significativamente. Assim a melhor condição de extração em termos do teor de beta-ecdisona (393 K, 8 MPa e etanol como solvente) foi selecionada para a realização do estudo cinético. Na OEC foi possível observar que na primeira hora de extração aproximadamente 70 % do total do rendimento e 74 % do total de massa de beta-ecdisona foi obtido. O custo de manufatura foi avaliado na condição da cinética, onde foram obtidos maiores teores de beta-ecdisona quanto maior a capacidade do extrator. Os custos de manufatura, tanto em relação a quantidade de extrato quanto em relação a quantidade de beta-ecdisona recuperada no processo de PLE, foram 14 e 8 vezes maiores do que os obtidos no processo de SFE, respectivamente. Etapa 2: Polímeros biodegradáveis tem recebido maior atenção devido ao seu potencial para aplicações na área médica e na indústria de alimentos, dentre eles o poli (L-lactídeo) (PLA) principalmente por causa da sua biocompatibilidade e características sustentáveis. Ao longo dos últimos anos, a síntese de tais biopolímeros pela reação de polimerização utilizando a técnica de abertura do anel aromático catalisada enzimaticamente em fluidos comprimidos tem se mostrado bastante promissora. O objetivo nessa etapa do trabalho foi medir os dados de equilíbrio de fases dos sitemas L-ácido láctico + (propano + etanol) e L-ácido láctico + (CO2 + etanol). Os experimentos foram realizados numa célula de equilíbrio de fases com visualização utilizando o método estático sintético, em temperaturas de 323,15 a 353,15 K e pressões até 25 MPa, mantendo constante a fração mássica de etanol:CO2 (ou propano) de 1:9. Para o sistema L-ácido láctico + (propano + etanol) foram observadas as transições líquido-vapor, líquido-líquido e líquido-líquido-vapor, enquanto que para o sistema L-ácido láctico + (CO2 + etanol) foram observadas somente as transições líquido-líquido. Os resultados mostraram que o sistema L-ácido láctico + (propano + etanol) apresenta transições do tipo UCST (Upper Critical Solution Temperature) e um UCEP (Upper Critical End Point), enquanto o sistema L-ácido láctico + (CO2 + etanol) apresenta um comportamento do tipo LCST (Lower Critical Solution Temperature). Foi realizada a modelagem termodinâmica dos dados experimentais obtidos utilizando a equação de estado de Peng-Robinson com regra de mistura quadrática de van der Waals (PR-vdW2) e com regra de mistura de Wong-Sandler (PR-WS). Os resultados mostraram que os modelos PR-vdW2 e PR-WS foram capazes de representar satisfatoriamente o comportamento de fases do sistema L-ácido láctico + (dióxido de carbono + etanol). Entretanto, para o sistema L-ácido láctico + (propano + etanol), o modelo PR-vdW2 não foi capaz de descrever apropriadamente o seu comportamento / Abstract: The doctoral project is being developed in two steps: (1) Supercritical fluid and pressurized liquid extraction study of Brazilian ginseng (Pfaffia glomerata) ecdysteroids and (2) Phase equilibrium data of complex systems. Step 1: Species of the genus Pfaffia are popularly known as substitute for Panax due their similar morphology and bioactive properties. Among them, Pfaffia glomerata has received special attention due the presence of ecdysteroids. Commercially, this compound is obtained by conventional solid-liquid extraction methods, that is, using large quantities of solvents. Nowadays, more environmentally friend methods are preferred, like supercritical fluid (SFE) and pressurized liquid extraction (PLE) that enables extraction of bioactive compounds under high temperatures and pressures. The aim of this step of work is: (a) preliminary study the supercritical fluid extraction of Brazilian ginseng (Pfaffia glomerata) ecdysteroids. The effects of pressure (20 and 30 MPa) and cosolvent amount (10, 15, 75 and 90 % of Ethanol) on the behavior of overall extraction curve (OEC) and content of beta-ecdysone were studied. The larger amounts of beta-ecdysone were obtained in shorter processing time using CO2: EtOH (85:15, v/v) as extracting solvent at 20 MPa. The higher proportion of EtOH in the mixture leads an increase an extraction yield and an increase a beta-ecdysone content relative a raw material amount. (b) study the pressurized liquid extraction of Brazilian ginseng (Pfaffia glomerata) ecdysteroids. The effects of temperature (333 ¿ 393 K), pressure (8 ¿ 30 MPa) and solvent [ethanol and ethanol:water (80:20 v/v)] on the global yield extraction, antioxidant activity and beta-ecdysone content of the extracts from Brazilian ginseng (Pfaffia glomerata) roots were studied. The extraction global yield increased with the increase in temperature (333 ¿ 393 K) reaching up to 25 % (dry basis). As the temperature increased the selectivity of the extracting solvent decreased promoting the co-extraction of other compounds besides the ecdysteroids. The use of EtOH:H2O (80:20 v/v) as extracting solvent produced extracts with the highest antioxidant activity. The recovery of beta-ecdysone was maximized when EtOH was used, besides fractions containing up to 5 % of beta-ecdysone were obtained using this solvent at 393 K, while pressure did not affect it. Thus the better extraction condition in terms of beta-ecdysone was selected (393 K, 8 MPa and ethanol as extracting solvent) and the kinetic extraction study was realized. From the overall extraction curve obtained it was possible to verify that in the first hour of extraction approximately 70 % of the total yield and 74 % of the total beta-ecdysone mass are obtained. The cost of manufacturing (COM) was evaluated in the kinetic condition in which was obtained the highest beta-ecdysone content; the increase of the extractor capacity significantly decreased the COM. The COMs for the crude extract and beta-ecdysone obtained by this novel process were 14-fold and 8-fold lower than that for the SFE process, respectively. Step 2: Biodegradable polymers has received increased attention due to their potential applications in medicine and food industry, with highlights to poly (L-lactic acid) (PLA) mainly because of its biocompatibility and resorbable features. Over the last years, synthesis of such biopolymer by enzyme-catalyzed ring-opening polymerization of L-lactic acid in compressed fluids has been considered a promising route over. The aim of this step of work is to report phase equilibrium data (cloud points) of L-lactic acid + (propane + ethanol) and L-lactic acid + (carbon dioxide + ethanol). Phase equilibrium experiments were conducted in a variable-volume view cell employing the static synthetic method, from 323.15 K to 353.15 K and pressures up to 25 MPa, keeping constant the mass ratio of ethanol to CO2 or propane at 1:9. For the (propane + ethanol) + L-lactic acid it was observed vapor-liquid, liquid-liquid and vapor-liquid-liquid, while for (carbon dioxide + ethanol) + L-lactic acid only liquid-liquid type transitions were recorded. Results show that the system (propane + ethanol) + L-lactic acid present UCST (Upper Critical Solution Temperature) transition type and an UCEP (Upper Critical End Point), whereas the system (carbon dioxide + ethanol) + L-lactic acid exhibit LCST (Lower Critical Solution Temperature) behavior. The experimental data were modeled using the Peng-Robinson equation of state with the classical van der Waals quadratic mixing rule (PR-vdW2) and with the Wong-Sandler mixing rule (PR-WS). It is shown that the PR-vdW2 and PR-WS models were both able to satisfactorily represent the phase behavior of the system L-lactic acid + (carbon dioxide + ethanol). However, for the system L-lactic acid + (propane + ethanol), the PR-vdW2 model was not able to appropriately describe its phase behavior / Doutorado / Engenharia de Alimentos / Doutora em Engenharia de Alimentos