Th.--Méd.--Reims, 1981. N°: 7.

L'augmentation rapide de l'apparition de résistances contre les antibiotiques utilisés chez l'humain dans le traitement des infections bactériennes est une menace grave pour la santé de la population. Ces résistances nuisent à l'efficacité des traitements ce qui a pour effet d'aggraver les symptômes et d'augmenter les risques de mortalité associés à ces infections. Seulement deux nouvelles classes d'antibiotiques ont vu le jour au cours des 50 dernières années laissant présager que cette situation problématique continuera d'évoluer dans les années à venir. Il est urgent d'explorer différentes stratégies potentielles qui pourraient mener à la découverte de nouvelles classes d'antibiotiques. En ce sens, l'étude des metabolites secondaires issus des plantes constitue une stratégie intéressante puisque cette source a jusqu'à maintenant été peu exploitée et ce, malgré l'intensive utilisation des plantes pour traiter les infections en médecine traditionnelle de nombreuses régions du monde. En Amérique, les peuples autochtones utilisaient les bourgeons de Populus bolsomifera pour préparer différents remèdes à appliquer sur les coupures, les brûlures ou d'autres blessures prédisposant aux infections. Cette utilisation traditionnelle a incité le Laboratoire d'Analyse et de Séparation des Essences Végétales (LASEVE) à évaluer le potentiel de cette matrice végétale à inhiber la croissance bactérienne. Dans le cadre de cette étude, l'extrait de bourgeons de P. bolsamifero a montré un excellent potentiel antibactérien avec une concentration minimale inhibitrice (CMI) face à Stophylococcus oureus de 12,5 jig/ml. Cette thèse présente le fractionnement bioguidé par l'activité antibactérienne ainsi que les travaux accomplis concernant l'isolement et la caractérisation des composés présents dans les fractions actives obtenues. De plus, l'activité antibactérienne in vitro des composés isolés a été évaluée contre S. oureus et plusieurs souches de S. oureus résistantes à la méticilline (SARM). Les travaux effectués sur une première fraction active ont d'abord mené à l'isolement et la caractérisation de trois dihydrochalcones substituées par un groupement hydroxycinnamyle. Ces trois nouveaux produits naturels ont été nommés balsacones A, B et C et l'évaluation de leur activité antibactérienne a permis de démontrer que ces trois composés inhibaient efficacement la croissance de 5. oureus avec des CMI variant entre 3,1 et 6,3 u.M après 6 h d'incubation. Les travaux d'isolement menés sur une seconde fraction active ayant mené à l'identification de 6 nouvelles balsacones (D-l) sont ensuite présentés. Ces nouvelles balsacones sont aussi constituées de dihydrochalcones substituées par une unité hydroxycinnamyle cyclisée avec un des groupements phénoliques des dihydrochalcones formant un hétérocycle pyrannique. L'absence d'activité chiroptique malgré la présence de stéréocentres sur l'hétérocycle pyrannique a conduit à la conclusion que les balsacones D-l étaient racémiques. Leur purification par HPLC en utilisant un support chiral a donc été entreprise ce qui a permis d'obtenir les paires d'énantiomères (-) et (+) pour chacun des mélanges racémiques. La configuration absolue des énantiomères a pu être déterminée grâce à des analyses de diffraction de rayon X sur la (-)-balsacone D ainsi que par la comparaison des spectres de dichrofeme circulaire expérimentaux à des spectres calculés à partir de fondements théoriques. L'activité antibactérienne des énantiomères purifiés a été évaluée contre S. oureus. La (-)-balsacone D et la (+)- balsacone D étaient les composés les plus actifs avec des CMI de 6.25 jaM dans les deux cas. Des travaux d'isolement plus approfondis ont ensuite conduit à l'identification des balsacones J et K. Ces deux nouveaux composés possèdent une structure inusitée hybride entre des dihydrochalcones et le cinnamate d'hydroxycinnamyle. Il s'est avéré que les balsacones J et K étaient aussi des composés racémiques et leur purification par HPLC en utilisant un support chiral a été effectuée. La configuration absolue des paires d'énantioméres obtenues n'a malheureusement pas pu être déterminée dans le cadre de cette thèse, mais des travaux sont toujours en cours afin d'y parvenir. Les mésanges racémiques des balsacones J et K ainsi que les paires d'énantioméres obtenues à partir de ces deux mélanges ont montré des activités antibactériennes modérées avec des CMI variant entre 25 et 50 uM. La poursuite des travaux d'isolement sur les fractions actives obtenues de l'extrait de P. balsamifera ont ensuite permis d'identifier les balsacones L, M, N et 0 ainsi que l'iryantherin-D. Ces cinq composés possédaient des structures similaires à celles des balsacones D-l sur lesquelles une unité hydroxycinnamyle supplémentaire était présente. La nature racémique de ces cinq composés a encore une fois rendu nécessaire la mise au point de méthodes de séparation par HPLC en utilisant un support chiral. La configuration absolue des paires d'énantioméres obtenues a été déterminée grâce à des analyses de diffraction de rayon X et en utilisant des spectres de dichroÉme circulaire calculés à partir de la théorie de la fonctionnelle de la densité. La (±)-balsacone N ainsi que les deux énantiomères (+) et (-) ont montré une activité antibactérienne marquée avec des CMI respectives de 3,13, 3,13 et 1,56 uM. L'isolement et la caractérisation des balsacones P-W complètent la description des travaux d'isolement effectués dans le cadre de cette thèse. La balsacone P était un isomère structural de la balsacone L dont l'hétérocycle pyrannique avait été formé par une fonction phénolique différente de l'unité dihydrochalcone. La balsacone Q s'est avérée être l'iryantherin-D sur laquelle un groupement hydroxycinnamyle supplémentaire était présent. La structure des balsacones R-W était pour leur part caractérisée par la présence de deux hétérocycles pyranniques fusionnés sur le même cycle aromatique d'une unité dihydrochalcone. Les balsacones P-W ont aussi été obtenues sous la forme de mélanges racémiques. La purification chirale des balsacones T-W a pu être effectuée, mais la détermination de la configuration absolue des énantiomères obtenus n'a pu être complétée dans le cadre de cette thèse. L'évaluation de l'activité antibactérienne des mélanges racémiques a permis de montrer que les balsacones Q et R étaient actives avec des CMI de 6.25 uM dans les deux cas. Cette thèse se conclut par la présentation des résultats d'activité antibactérienne in vitro sur dix souches de SARM isolées en clinique. Ces résultats ont permis de montrer le fort potentiel antibactérien des balsacones C, D, E, L, N, O, P, R et S, dont l'activité antibactérienne contre les souches de SARM était similaire à celle observée contre S. oureus sensible (CMI variant entre 0.78 uM et 6.25 uM). Ces résultats ont finalement permis d'émettre certaines hypothèses quant aux relations entre la structure des balsacones et leur activité antibactérienne.

Les plantes de la forêt boréale ont été longtemps utilisées par les Amérindiens pour traiter diverses infections virales et bactériennes. Cependant, peu d'études ont été réalisées dans le but d'évaluer leur activité biologique, notamment l'activité infectieuse. Le principal objectif de ce projet de recherche était de confirmer l'activité anti virale de plusieurs plantes utilisées par les Amérindiens. Pour atteindre cet objectif, nous avons : (i) développé une méthode pour évaluer l'activité anti virale contre les virus de 1'influenza de type A et l'herpès simplex de type 1, (ii) sélectionné des plantes utilisées en médecine traditionnelle amérindienne, (iii) évalué leur activité in vitro et (iv) déterminé l'effet des extraits à différents stades de l'infection. Nous avons sélectionné cinq plantes utilisées pour traiter des infections potentiellement virales comme le rhume ou la grippe : Achillea millefolium L., Cornus canadensis L., Trillium erectum L., Plantago major L., et Trifolium repens L.. Ces plantes ont été récoltées et extraites selon des méthodes similaires à celles utilisées par les Amérindiens, comme la décoction et l'infusion. L'activité antivirale a été évaluée à différents stades de l'infection soient 1'adsorption des virus par les cellules hôtes et la replication des virus. L'action directe des extraits sur les virus a également été testée. Finalement, la cytotoxicité des extraits a été déterminée sur des fibroblastes de peau humaine en culture. Les résultats ont montré que la plupart des extraits possédaient une activité modérée contre Y influenza. La plante ayant obtenue la meilleure activité est Cornus canadensis avec une inhibition de 16 à 96% (selon le moment de l'infection) à une concentration de 100|Lig/ml. D'autre part, cette plante a également été trouvée fortement active contre le virus de l'herpès simplex de type 1. Les extraits de feuilles ont non seulement une activité antivirale directe sur le virus (IC50 =11 |ig/ml) mais inhibent aussi sa replication (IC50 = 44 |ug/ml). L'ensemble des résultats obtenus in vitro confirme l'activité antivirale contre le virus de 1'influenza de plusieurs plantes utilisées en médecine traditionnelle amérindienne et montre pour la première fois une activité contre le virus de l'herpès simplex type 1.

Le Populus balsamifera est un feuillu commun d'Amérique du Nord. Cet arbre était utilisé par les amérindiens pour lutter contre différents types d'infections. L'identification du ou des composés responsables de l'activité antibactérienne des extraits de bourgeon constitue l'objectif principal de ce projet de recherche. Les extraits ont été obtenus par macération à reflux avec différents mélange d'éthanol/eau. Le fractionnement de ces extraits a été guidé par leurs activités biologiques. Plusieurs produits naturels ont été isolés en utilisant une succession de techniques de purification (séparation par partition dans différents solvants et approches chromatographiques). Certaines de ces molécules ont de fortes activités anticancéreuses et antibactériennes, notamment sur le SARM. Dix huit molécules ont été isolées et caractérisées. De ce nombre, quatre flavonoïdes (14 à 17), trois dérivés de flavonoïdes (7 à 9), deux acides phénoliques (1 et 10), six dihydrochalcones (2, 3, 11, 12, 13 et 18) ainsi que trois dérivés de chalcones (4 à 6). Les composés 4 à 6 constituent une nouvelle famille de composés phénoliques que nous avons nommée balsacone. Les propriétés cytotoxique et antibiotique des composés ont été évaluées sur des lignées de cellules cancéreuses ainsi que sur des bactéries sensibles et résistantes. Les résultats montrent que deux des trois dérivés de flavonoïdes (7 et 8) ont une forte activité cytotoxique (IC50 = 5,0 à 5,1 uM) envers les cellules cancéreuses du poumon (A549) avec un facteur de sélectivité supérieur à 2 par rapport aux cellules saines (WSl)(IC50 = 13 à l4 uM). Les composés 4 à 9 ont montré une activité antibactérienne (IC50 = 1,26 à 5,9 uM) élevée sur le Staphylococcus aureus. Des tests effectués sur différents types de Staphylococcus aureus résistants à la méthicilline (SARM) indiquent que ces composés sont fortement actifs envers ces souches bactériennes (IC50 = 0,60 à 10,8 uM).

La forêt boréale est l’une des plus importantes ressources naturelles présentes au Canada. L’exploitation de la biomasse forestière permet la production d’une vaste gamme de produits s’étendant au-delà du bois d’oeuvre et des pâtes et papiers, notamment les PFNL (produits forestiers non ligneux), parmi lesquels on compte les champignons forestiers. Principalement utilisés à des fins culinaires, plusieurs espèces de champignons restent méconnues en ce qui concerne leurs propriétés pharmacologiques et cosmétologiques. Le but de ce projet visait à évaluer le potentiel biologique de plusieurs champignons de la forêt boréale pour des applications pharmaceutiques et cosméceutiques. Pour réaliser ce projet, quinze espèces ont été récoltées, séchées et extraites à l’aide de divers solvants. Les extraits obtenus ont été soumis à une batterie d’essais biologiques pour en évaluer le potentiel. Un extrait hexane/éthanol de Pycnoporus cinnabarinus a présenté la meilleure activité anticancéreuse observée avec des IC50 de 4,1 ± 0,2 et 4,1 ± 0,3 μg/ml contre les lignées cancéreuses du poumon A549 et du colon DLD-1, respectivement. D’après les résultats, plusieurs espèces possèdent des activités anti-inflammatoire et antioxydante. Cet extrait a également inhibé la production de NO avec une IC50 de 1,9 ± 0,4 μg/ml. Les extraits de Boletus edulis, Craterellus fallax et Morchella conica ont stimulé significativement la croissance des fibroblastes. Une activité antibactérienne contre S. aureus a été détectée dans un extrait éthanolique d’Hypomyces lactifluorum avec des CMI de 12,5 et 50 μg/ml. En conclusion, plusieurs champignons possédant des propriétés biologiques intéressantes ont été identifiés. Ce projet a permis d’améliorer nos connaissances sur les propriétés biologiques de plusieurs espèces de champignons présentes au Québec jusqu’alors méconnus, contribuant ainsi à leur valorisation.

Les chimiokines sont des petites protéines qui régulent la migration et le "homing" des cellules leucocytaires. Elles jouent également un rôle clef dans le développement de certains cancers en régulant les phénomènes de prolifération, d'angiogenèse ou encore de migration des cellules métastatiques. À ce jour, environs 40 chimiokines et plus de 19 récepteurs appartenant à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs) ont été répertoriés. De nombreuses études ont montré que les récepteurs liant les chimiokines pouvaient s'associer sous forme de complexes homo et hétéromériques. Les conséquences fonctionnelles associées à l'hétéromérisation sont diverses et fonction de la nature des récepteurs étudiés, du type de cellules sur lesquelles ces récepteurs sont exprimés et de l'expression relative des récepteurs. Cependant, le rôle physiologique exact de l’hétéromérisation des récepteurs aux chimiokines, et des RCPGs de manière générale, resteencore peu connu. Nous avons tenté de répondre à cette question dans ce travail de doctorat en étudiant plus particulièrement l’hétéromérisation de CXCR4 et CCR7 au cours du développement des lymphocytes B. Nous avons montré que le récepteur CXCR4 est exprimé à la surface des lymphocytes B à tous les stades de leur développement et qu’une diminution de l’expression de CXCR4s’opère lors de la transition du stade Pré-B vers les stades B immatures et matures. Cette transition s’accompagne d’une «uprégulation » du récepteur CCR7 qui est le plus fortement exprimé à la surface des lymphocytes B matures. Nous avons par ailleurs montré que la transition du stade Pré-B vers les stades B immatures et matures s’accompagne d’une forte inhibition de CXCR4, les cellules B matures étant totalement réfractaires à la migration dans un gradient de CXCL12. Cette perte totale de fonctionnalité ne pouvant pas s’expliquer par la diminution partielle de l’expression de CXCR4, nous avons testé si l’expression du récepteur CCR7 pouvait contribuer à la perte de fonction de CXCR4 observée. Dans un premier temps, nous avons comparé la capacité de CXCR4 à induire la chimiotaxie des lymphocytes B matures provenant de souris sauvages ou de souris CCR7KO déficientes pour l’expression de CCR7. Nous avons montré que l’absence de CCR7 permet de récupérer une migration significative des lymphocytes B matures dans un gradient de CXCL12. De manière intéressante, l’absence de CCR7 affecte spécifiquement la fonction de CXCR4 mais pas celle des récepteurs CXCR5 et CCR6 également exprimés à la surface des lymphocytes B matures. De plus, l’inhibition de CCR7 des lymphocytes B matures sauvages par des anticorps bloquant ne permet pas de reproduire l’effet de l’absence de CCR7. Ce résultat suggère que la signalisation du récepteur CCR7 ne serait pas impliquée. Nous avons également montré que l’absence de CCR7 s’accompagne d’un nombre plus important de lymphocytes B matures dans la moelle osseuse des souris CCR7KO, en parfait accord avec le rôle connu de CXCR4 dans la rétention des progéniteurs hématopoïétiques au sein de la moelle osseuse. Nous avonségalement montré que l’expression du récepteur humain CCR7 dans la lignée lymphocytaire Pré-B humaine Nalm-6 ou dans des cellules CHO-K1 exprimant le récepteur CXCR4 suffit à induire une perte de fonctionnalité de CXCR4. Tout comme pour les lymphocytes B maturesmurins, cette inhibition s’exerce en absence de toute stimulation de CCR7. Nous avons aussi montré que l’expression de récepteurs CCR7 mutants incapables de lier les chimiokines CCL19 et CCL21 (mutant CCR7NT) ou d’induire une signalisation (mutants CCR7D(R/A)Y et CCR7(N/A)PXXY) sont toujours capables d’induire l’inhibition de CXCR4, ce qui confirme qu’une signalisation CCR7 n’est pas nécessaire pour induire le phénomène de la régulation de CXCR4. Ce résultat montre aussi que les fonctions de signalisation et de régulation de CCR7peuvent être découplées.Nous avons également tenté d’identifier le mécanisme moléculaire associé à l’inhibition de CXCR4 par CCR7. Grâce à l’utilisation de biosenseurs BRET mesurant l’activation des protéines G, nous avons montré que l’expression de CCR7 inhibe fortement l’activation de la protéine Gαi2 connue pour jouer un rôle important dans la migration des lymphocytes. Ce résultat permet donc d’expliquer la perte de migration détectée dans les lymphocytes B coexprimant CXCR4 et CCR7. Cependant, nous avons aussi montré que l’expression de CCR7 n’empêche pas l’interaction physique de la protéine Gαi2 avec le récepteur CXCR4. Nous avons alors émis l’hypothèse que CCR7 exercerait son effetinhibiteur sur CXCR4 en interagissant physiquement avec lui et en altérant sa capacité à activer la protéine Gαi2. Nous avons montré par différentes techniques que le récepteur CCR7 interagit avec CXCR4 et que la conformation du complexe formé par CXCR4 et la protéineGαi2 est différente suivant que cette interaction a lieu au sein d’un homomère CXCR4/CXCR4 ou d’un hétéromère CXCR4/CCR7. L’ensemble de ces données suggère donc que l’hétéromérisation de CXCR4 avec CCR7 change la conformation du complexe CXCR4/Gαi2 et la capacité de CXCR4 à activer la protéine Gαi2. De manière intéressante, l’hétéromérisation de CXCR4 avec CCR7 inhibe également l’activation de la protéine Gαi1 mais pas celle de la protéine Gαi3. Ce résultat très intéressant suggère que l’hétéromérisation CXCR4/CCR7 ne serait pas simplement associée à une inhibition de la fonction de CXCR4 mais plutôt à une modulation de son profil d’activation. Cette hypothèse suggère donc que le récepteur CCR7 jouerait le rôle de modulateur allostérique endogène de CXCR4 capable de moduler l’activation de certaines voies de signalisation tout en en laissant d'autres fonctionnelles. Cependant, le manque de temps ne nous a pas permis de confirmer le maintiend’un signal dépendant de Gαi3 dans les cellules coexprimant CXCR4 et CCR7.L’ensemble de ces résultats suggèrent que le récepteur aux chimiokines CCR7 exercerait le rôle de modulateur allostérique de CXCR4 au cours du développement des lymphocytes B et que cette fonction nécessiterait l’interaction physique de CXCR4 et CCR7.À notre connaissance, ces résultats constituent la première indication que l’hétéromérisation de récepteurs aux chimiokines peut jouer un rôle dans un processus physiologique. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Le neuroblastome pédiatrique est un des cancers extra-crâniens des plus fréquents chez les enfants. Malgré une amélioration du taux de survie avec les thérapies actuellement disponibles, les stades avancés de neuroblastome ou en rechute présentent un très mauvais pronostic. De nouvelles approches thérapeutiques doivent donc être développées afin d'augmenter la survie des patients. Une de ces approches est la thérapie épigénétique. Le neuroblastome, comme plusieurs autres cancers pédiatriques, contient plusieurs altérations épigénétiques au niveau de la méthylation de l'ADN et des modifications des histones. Lors d'un criblage de médicaments déjà approuvés par la FDA, nous avons découvert quelques molécules ayant des caractéristiques de médicaments épigénétiques jusqu’alors jamais découvertes. Notre étude cherche donc à démontrer l'efficacité de ces molécules dans le traitement de lignées cellulaires de neuroblastome. Suite à des tests préliminaires, une des molécules approuvées par la FDA s'est démarquée : le disulfirame, un médicament approuvé pour le traitement de l’alcoolisme chronique. Nous avons donc traité des lignées cellulaires de neuroblastomes (IMR-32, N91, SK-N-DZ, SK-N-SH et SK-N-AS ) pendant 48 heures avec du disulfirame à des concentrations pertinentes sur le plan clinique (10nM à 50 µM). Nos résultats démontrent une inhibition de croissance de 50 % (IC50) d'environ 80 nM pour les lignées cellulaires testées. De plus, après analyse par cytométrie de flux, on observe un blocage du cycle cellulaire en G2/M. Nous avons également observé une diminution du facteur de transcription MYCN ainsi qu’une baisse d’acétylation de plusieurs marques d’histones (H3K9ac, H3K14ac, H3K27ac). Une analyse par séquençage d'ARN a confirmé le bloc en G2/M par une baisse d'expression de gènes associés à cette phase ainsi que la diminution de MYCN par une baisse de gènes cible de MYC. Des travaux sont en cours afin de déterminer le mécanisme d’action du disulfirame. Cette recherche permettra d’évaluer l’efficacité du disulfirame dans le traitement du neuroblastome / Pediatric neuroblastoma is one of the most common extracranial cancer in children. Despite an improvement in survival with the currently available therapies, neuroblastoma with an amplification of the transcription factor MYCN has a very poor prognosis. New therapeutic approaches must be developed to increase the survival of patients. One such approach is epigenetic drug therapy. Neuroblastoma, like many other pediatric cancers, contains several epigenetic alterations at the level of DNA methylation and histone modifications. In a screening of FDA-approved drugs, we discovered some molecules having characteristics of epigenetic drugs that were unknown until now. Our study seeks to demonstrate the efficacy of these molecules in the treatment of neuroblastoma cell lines. Following preliminary tests, one of the molecules approved by the FDA stood out: disulfiram, a medication approved for the treatment of chronic alcoholism. We treated neuroblastoma cell lines (MYCN amplified: IMR-32, N91 and SK-N-DZ; MYCN non-amplified: SK-N-AS and SK-N-SH) for 48 hours with disulfiram at clinically relevant concentrations (from 10 nM to 20 µM). Our results demonstrate a 50% growth inhibition (IC50) of 80nM for the cell lines tested. In addition, after analysis by flow cytometry, we found a cell cycle block in G2/M. RNA sequencing also revealed that disulfiram affects a many genes (downregulated n=508, upregulated n=207). We also observed a decrease in the transcription factor MYCN and a reduction in acetylation of several histone marks by Western blot’s analysis. Further studies are underway to determine the mechanism of action of disulfiram. This study shows the potential of disulfiram in the treatment of neuroblastoma.

Au Canada, on estime que près du tiers de la population souffrira de douleur chronique au cours de sa vie. Présentement, les agonistes des récepteurs opioïdergiques mu, telle la morphine, sont parmi les médicaments les plus efficaces et les plus utilisés pour le traitement de la douleur d'intensité modérée à sévère. Cependant, l'effet analgésique de ces composés s'accompagne souvent d'effets secondaires importants (nausée, constipation, tolérance). Il est maintenant reconnu que l'activation des récepteurs opioïdergiques delta (DOPR) s'accompagne d'effets analgésiques importants. Des résultats récents de notre laboratoire indiquent en plus que l'activation de DOPR n'entraîne pas de tolérance analgésique. Puisque les enképhalines, ligands peptidiques endogènes, possèdent une bonne sélectivité envers DOPR (versus les autres récepteurs opioïdergiques), notre laboratoire, en collaboration avec celui du Pr Dory du département de chimie de l'Université de Sherbrooke, s'intéresse à la conception et à la synthèse de peptidomimétiques, analogues des enképhalines, afin d'en améliorer les propriétés pharmacologiques. Nous avons donc procédé au remplacement systématique de chacun des liens amides (CO-NH) de la leu-enképhaline (LE) par un alcène (double lien C=C), ce dernier étant plus lipophile et plus difficilement dégradé par les peptidases que ne l'est le lien amide. Cependant, contrairement aux liens amides, les groupements alcènes ne permettent pas la formation de liaisons faibles non covalentes de type pont hydrogène qui pourraient être essentielles à la liaison de la LE sur DOPR (liaisons intermoléculaires), ou encore, à l'adoption de la conformation biologiquement active de la LE (liaisons intramoléculaires). Le but de mon projet de maîtrise était de procéder à la caractérisation in vitro de ces nouveaux analogues enképhalinergiques et ainsi, de définir l'importance de chacun des liens amides de la LE pour sa liaison à DOPR et sa capacité d'activation du récepteur. Les mesures de leur affinité pour DOPR, ainsi que de leur capacité d'activation du récepteur au moyen de différents essais in vitro indiquent que les 2e, 3e et 4e liens amides semblent importants pour conserver la liaison et l'activité de la LE sur DOPR. En effet, seul l'analogue substitué au niveau du 1er lien amide présente une affinité et des activités similaires à celles de la LE. De plus, un essai in vivo dans un modèle animal de douleur inflammatoire avec ce ligand a confirmé son potentiel antihyperalgésique. En plus de nous informer sur la conformation biologiquement active des enképhalines, les données que nous avons recueillies jusqu'à présent pourraient mener au développement d'un ligand assez lipophile pour passer la barrière hématoencéphalique et suffisamment stable pour permettre un profil pharmacocinétique adéquat pour une utilisation clinique.

Le terme Foetal Alcohol Spectrum Disorder (FASD) définit l’ensemble des perturbations observées dans la descendance de femme consommant de l’alcool durant leur grossesse. La variabilité des phénotypes du FASD suppose des mécanismes complexes de l’effet tératogène de l’alcool, et leur compréhension nécessite l'emploi d'une multiplicité de modèles animaux. A la lumière de ces modèles, quatre grands effets de l’alcoolisation d’un cerveau immature sont observés au niveau comportemental, avec des modifications de : (i) l’attention et la locomotion ; (ii) l’apprentissage et la mémoire ; (iii) du niveau de stress, d’anxiété et de dépression ; (iv) la sensibilité aux drogues. Le travail de cette thèse a porté à la fois sur les conséquences psycho-comportementales de l’alcoolisation fœtale et sur la possibilité de modulation de ces effets par des approches pharmacologique et/ou comportementale. Nous avons pour cela travaillé à partir de deux modèles murins d’alcoolisation précoce, le premier issu d’un protocole d’alcoolisation pré- et post-natale et le second correspondant à un protocole d’alcoolisation néonatale. Ce travail nous a permis tout d'abord d’établir que les rats pubères, précédemment alcoolisés en période pré- et post-natale, développaient un trouble hyperactif combiné à un déficit attentionnel. Dans un deuxième temps, nous avons observé qu’un traitement par un agoniste des Peroxisome Proliferator-Activated Receptors contrecarrait l’apparition de ces troubles de l’activité locomotrice et des capacités attentionnelles. Enfin dans un troisième temps, nous avons tenté d’accentuer ces effets de l’alcoolisation d’un cerveau immature. Ainsi l’apparition d’un trouble mnésique n’a pu être observée que consécutivement à l’application successive, soit d’un protocole d’alcoolisation pré- et post-natale et d’un traitement amphétaminique à l’adolescence, soit d’un protocole d’alcoolisation néonatale et d’un protocole de perturbation de la rythmicité circadienne à l’âge adulte. Les deux principales conclusions de ce travail portent sur : (i) la modélisation, chez le rat, de certains symptômes décrits dans le FASD et (ii) la modulation des effets de l’alcoolisation précoce qui peuvent être contrecarrés ou aggravés. / The term Foetal Alcohol Spectrum Disorder (FASD) defines the set of foetal alcohol-induced alterations. The variability of FASD phenotypes may be due to the complex teratogenic effects of alcohol, and implies the use of multiple animal models to study them. In light of these models, the effects of alcohol on an immature brain have been shown to induce four major behavioural alterations: (i) attention and locomotion, (ii) learning and memory, (iii) Stress, anxiety and depression, (iv) drug sensitivity. Our work has focused on the consequences of foetal alcoholization to induce psycho-behavioural effects and their modulation. Using two rodent models of early alcohol exposure (by pre- and post-natal or neonatal alcoholization) we modulated the effects of alcohol by pharmacological or behavioural approaches. First, this work has allowed us to observe that early (pre-and post-natal) alcohol-exposed rats have a hyperactivity disorder combined with an attention deficit during puberty. Secondly we observed an improvement in those disorders treated by a peroxisome proliferator-activated receptors agonist. Thirdly, we tried to accentuate the effects of alcohol on an immature brain. We showed that the use of an amphetamine treatment during puberty on rats under a pre-and post-natal alcoholic treatment, as well as disruption of the circadian rhythm in adulthood on rats under a neonatal alcoholic treatment, induced a memory disorder. The two main conclusions of this work are: (i) the ability to model some FASD symptoms in the rat; (ii) the modulation of these early alcohol effects that can be reversed or aggravated.

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