Les analogues de choline constituent une nouvelle classe d'antipaludiques qui inhibent la biosynthèse de la phosphatidylcholine (PC) de Plasmodium, parasite responsable du paludisme. Les études conduites ont mis en relief des particularités uniques de ces composés. Nous avons élucidé le mécanisme d'action biochimique de l'albitiazolium, actuel candidat clinique, caractérisant chacune des 5 étapes conduisant à la biosynthèse de PC. L'albitiazolium affecte en premier lieu l'entrée de choline dans le parasite intraerythrocytaire, choline et albitiazolium utilisant le même transporteur et affecte de façon différentielle les autres étapes de synthèse. L'activité antipaludique est fortement antagonisée par la choline indiquant que le mécanisme d'action primaire est bien l'inhibition de la synthèse de PC. L'accumulation des analogues de choline dans le parasite intracellulaire leur permet de restreindre leur toxicité aux seuls érythrocytes infectés. Des études comparatives réalisées chez Plasmodium et Babesia montrent une double compartimentation de l'albitiazolium uniquement chez Plasmodium, l'une d'elles correspondant à la vacuole digestive. L'accumulation chez Plasmodium est glucose-dépendante et exige aussi le maintien des gradients ioniques dans la cellule. Bien que les analogues de choline exercent leur effet antiparasitaire dès les premières heures de contact, l'effet dit « cheval de Troie » exige des conditions particulières pour les mesures d'activités pharmacologiques, nous amenant à comparer différents tests d'activité. Seuls les tests isotopiques basés sur l'incorporation d'hypoxanthine ou d'éthanolamine après un cycle parasitaire entier et le test fluorescent au SYBR green appliqué après 72h obtiennent des résultats fiables quel que soit le mécanisme d'action des antipaludiques. Enfin, des études de pharmacocinétique / pharmacodynamie montrent une exposition plasmatique supérieure chez les souris infectées par Plasmodium, due au recyclage de l'albitiazolium après son accumulation dans l'érythrocyte infecté. / Choline analogues form a new class of antimalarial drugs that inhibit the biosynthesis of phosphatidylcholine (PC) in Plasmodium, the malaria-causing parasite. The studies presented here highlighted the unique features of these compounds. We elucidated the biochemical mechanism of action of albitiazolium, the current clinical candidate, characterizing each of the 5 steps leading to the biosynthesis of PC. Albitiazolium primarily affects the entry of choline into the intraerythrocytic parasite and choline and albitiazolium use the same carrier. The other steps of synthesis are differentially affected. Antimalarial activity is strongly antagonized by choline indicating that the primary mechanism of action is the inhibition of PC synthesis Accumulation of choline analogs in the intracellular parasite allows them to restrict their toxicity to infected erythrocytes. Comparative studies in Plasmodium and Babesia show a double compartmentalization of albitiazolium only in Plasmodium, one of them corresponding to the food vacuole. Accumulation in Plasmodium is glucose-dependent and requires maintaining ionic gradients in the cell.Although choline analogues exert their antiparasitic effect in the first hours of contact, the “Trojan horse effect” requires specific conditions for the determination of pharmacological activity, leading us to evaluate various tests of activity. Only the isotopic tests based on hypoxanthine or ethanolamine incorporation after one parasite cycle and the fluorescent SYBR green assay applied after 72 hours give reliable results regardless of the mode of action of the tested antimalarials. Finally, pharmacokinetics/pharmacodynamics studies in Plasmodium-infected mice revealed that albitiazolium is recycled after its accumulation in the infected erythrocyte leading to increased plasma levels.

Le paludisme est responsable de la mort de près d'un million de personnes chaque année. Cette maladie est causée par le Plasmodium, parasite protozoaire appartenant à la famille des Apicomplexes. Dans cette thèse, nous avons développé des approches de biologie de systèmes pour l'étude du métabolisme des phospholipides (PL) métabolisme et de sa régulation chez Plasmodium. Ces voies métaboliques sont d'une importance primordiale pour la survie du parasite. À l'étape intra-érythrocytaire du développement, les espèces de Plasmodium exploitent un nombre important de voies de synthèse phospholipidique, qui sont rarement trouvées ensemble dans un seul organisme : (i) la voie dépendante ancestrale CDP-diacylglycerol des procaryotes ( ii) les voies eucaryotes de novo CDP- choline et CDP-éthanolamine (Kennedy) ( iii ) de plus P.falciparum et P. knowlesi emploient des réactions supplémentaires qui relient une à l'autre certaines de ces routes. Une voie de synthèse caractéristique aux plantes, qui utilise la sérine en tant que source supplémentaire de phosphatidyl-choline (PC) et de phosphatidyl-éthanolamine (PE), est nommée la voie méthyltransférase décarboxylase - phosphoéthanolamine sérine (SDPM). Pour comprendre la dynamique d'acquisition et le métabolisme des phospholipides chez Plasmodium, nous avons construit un modèle cinétique quantitatif basé sur des données fluxomiques. La dynamique in vitro d'incorporation de phospholipides révèle plusieurs voies de synthèse. Nous avons construit un réseau métabolique détaillé et nous avons identifié les valeurs de ses paramètres cinétiques (taux maximaux et constantes Michaelis). Afin d'obtenir une recherche globale dans l'espace de paramètres, nous avons conçu une méthode d'optimisation hybride, discrète et continue. Des paramètres discrets ont été utilisés pour échantillonner le cône des flux admissibles, alors que les constantes des Michaelis et les taux maximaux ont été obtenus par la minimisation locale d'une fonction objective. Cette méthode nous a également permis de prédire la répartition des flux au sein du réseau pour différents précurseurs métaboliques. Cette analyse quantitative a également été utilisée pour comprendre les liens éventuels entre les différentes voies. La principale source de PC est la voie Kennedy CDP-choline. Des expériences de knock-out in silico ont montré l'importance comparable des voies phosphoéthanolamine-N-méthyltransférase (PMT) et de la phosphatidyléthanolamine-N-méthyltransférase (PEMT) pour la synthèse de PC. Les valeurs des flux indiquent que plus grande partie de la PE dérivée de la sérine est formée par décarboxylation, alors que la synthèse de PS est majoritairement effectuée par des réactions d'échange de base. L'analyse de sensitivité de la voie CDP- choline montre que l'entrée de choline dans le parasite et la réaction cytidylyltransferase de la phosphocholine ont les plus grands co-efficients de contrôle sur cette voie, mais ne permet pas de distinguer une réaction comme l'unique étape limitante. Ayant comme objectif la compréhension de la régulation de l'expression génique chez Plasmodium falciparum et son influence sur le fonctionnement métabolique, nous avons effectué une étude bioinformatique intégrative des données du transcriptome et du métabolome pour les principales enzymes impliquées dans le métabolisme PL. L'étude de la dépendance temporelle des variables métaboliques et transcriptomiques au cours du cycle intra-érythrocytaire, a mis en évidence deux modes d'activation des voies PL. Les voies Kennedy sont activées pendant la phase schizogonique et au début de la phase anneau, alors que les voies SDPM et d'échange de bases sont activées lors de la fin de la phase anneau cycle et lors de la phase tropozoïte. / Malaria is responsible of the death of up to one million people each year. This disease is caused by Plasmodium, a protozoan parasite. In this thesis we have developed systems biology approaches to the study of phospholipid (PL) metabolism and its regulation in Plasmodium. These pathways are of primary importance for the survival of the parasite. At the blood stage, Plasmodium species display a bewildering number of PL synthetic pathways that are rarely found together in a single organism (i) the ancestral prokaryotic CDPdiacylglycerol dependent pathway (ii) the eukaryotic type de novo CDP-choline and CDPethanolamine (Kennedy) pathways (iii) P. falciparum and P. knowlesi exhibits additional reactions that bridge some of these routes. A plant-like pathway that relies on serine to provide additional PC and PE, is named the serine decarboxylase-phosphoethanolamine methyltransferase (SDPM) pathway. To understand the dynamics of PL acquisition and metabolism in Plasmodium we have used fluxomic data to build a quantitative kinetic model. In vitro incorporation dynamics of phospholipids unravels multiple synthetic pathways. A detailed metabolic network with values of the kinetic parameters (maximum rates and Michaelis constants) has been built. In order to obtain a global search in the parameter space, we have designed a hybrid, discrete and continuous, optimisation method. Discrete parameters were used to sample the cone of admissible fluxes, whereas the continuous Michaelis and maximum rates constants were obtained by local minimization of an objective function.The model was used to predict the distribution of fluxes within the network of various metabolic precursors. The quantitative analysis was used to understand eventual links between different pathways. The major source of phosphatidylcholine (PC) is the CDP-choline Kennedy pathway. In silico knock-out experiments showed comparable importance of phosphoethanolamine-N-methyltransferase (PMT) and phosphatidylethanolamine-N-methyltransferase (PEMT) for PC synthesis. The flux values indicate that, major part of serine derived phosphatidylethanolamine (PE) is formed via serine decarboxylation, whereas the phosphatidylserine (PS) is mainly predominated by base-exchange reactions. Metabolic control analysis of CDP-choline pathway shows that the carrier-mediated choline entry into the parasite and the phosphocholine cytidylyltransferase reaction have the largest control coefficients in this pathway, but does not distinguish a reaction as an unique rate-limiting step.With a vision to understand regulation of gene expression in Plasmodium falciparum and its influence on the metabolite expression, we have performed an integrative bioinformatic studies. The study integrates transcriptome and metabolome data for the main enzymes involved in PL metabolism. The study of the correlated time dependence of metabolic and transcriptomic variables during the intraerythrocytic cycle showed that there are two modes of activation of PL pathways. Kennedy pathways are activated during schizogony and early ring stages, whereas SDPM and base exchange pathways are activated during late ring and tropozoite stages.

Les parasites Leishmania sont les agents responsables de la leishmaniose viscérale (LV), mucocutanée (LM) ou cutanée (LC) chez l'homme et de la leishmaniose canine (CanL). Ces parasites sont phagocytés par les macrophages humains et animaux où ils vont se transformer de promastigote en amastigote. Nous avons identifié et analysé les lipides impliqués dans le processus de transformation dans le complexe de Leishmania donovani et infantum. Quatre classes de lipides, les phospholipides, les acides gras libres, les triglycérides et les stérols ont été étudiés. De même, nous avons analysé la composition en acides gras des lipides totaux chez neuf espèces de Leishmania isolées en Tunisie, dont quatre souches de L. infantum, deux souches de L. major et deux souches de L. tropica et une souche de L. infantum de chien. Durant nos premiers travaux, la composition en acides gras des lipides totaux a été analysée et nos résultats montrent une augmentation des acides gras et du cholestérol et une diminution des triglycérides et de l'ergostérol durant la transition entre les promastigotes et les amastigotes. En ce qui concerne les classes de phospholipides, nous avons trouvé une proportion accrue de sphingomyéline et de phosphatidylsérine et une proportion réduite de phosphatidylinositol et de lysophosphatidyléthanolamine. Pour la composition en acides gras, une augmentation significative des acides gras n-7 a été observée chez les amastigotes, quant aux acides gras n-6 totaux, ils ont diminué chez les PL. Plusieurs changements ont également été observés au niveau des TG et des acides gras libres, en particulier, les acides gras n-7 et 20: 4n-6 ont été fortement augmentés, alors que les acides gras n-9 et les précurseurs n-6 ont diminué. Pour la deuxième étude, les résultats trouvés dans nos premiers travaux qui concernent la présence de proportions très élevés de 18 : 2n-6 contre de faible proportion de l’AA (20 :4n-6) ainsi que l’absence ou la très faible proportion de 18 :3n-3 ont été confirmés. De plus, L. major présentait une proportion plus élevée de 14 : 0 (acide myristique), 18: 3n-6 (acide gamma-linoléique) et une plus faible proportion de n-3, y compris 18: 3n-3 (acide alphalinoléique) et 22: 6n-3 (acide docosahexaénoïque) comparé à L. infantum et L. tropica. Après la supplémentation de l'acide oléique (AO), l'acide arachidonique (AA) et l’acide docosahexaénoïque (DHA) sur deux souches de L. infantum utilisées pour infecter les macrophages : un isotype MON-24 responsable de la leishmaniose cutanée et un MON-1 causant la leishmaniose viscérale ; nous avons constatés que les AA et DHA augmentaient la virulence du parasite, tandis que L’AO diminuait leur virulence / Leishmania parasites are the causative agents of visceral (LV), mucocutaneous (LM) or cutaneous (LC) leishmaniasis in humans, canine leishmaniasis in dogs (CanL), and leishmaniases in other mammals .The parasites are phagocytosed by human and animal macrophages where they will transform from promastigote to amastigote. We identified and analyzed the lipids involved in the transformation process in the Leishmania donovani complex. Four classes of lipids, phospholipids (PL), free fatty acids (FA), triglycerides (TG) and sterols were studied.Similarly, we analyzed the fatty acid composition of total lipids in nine Tunisian Leishmania isolates, including five strains of L. infantum (four human and one canine), two strains of L. major and two strains of L. tropica.In our early work, the fatty acid composition of total lipids was analyzed and our results show an increase in fatty acids and cholesterol and a decrease in triglycerides and ergosterol during the transformation of promastigotes into amastigotes. For phospholipid classes, we found an increase in sphingomyelin and phosphatidylserines and a decrease in phosphatidylinositols and lysophosphatidylethanolamines during processing. For the fatty acid composition, a significant increase of n-7 fatty acids was observed in amastigotes, as for n-6 total fatty acids, they decreased in PLs. Several changes have also been observed in TG and free fatty acids, in particular, n-7 and 20: 4n-6 fatty acids have been greatly increased, whereas n-9 fatty acids and n-6 ??precursors have been significantly increased. decreased.The study of the fatty acid composition of the 9 Tunisian strains of Leishmania confirmed, in the first place, our results found in our first works concerning the presencevery high proportions of 18: 2n-6 against low proportion of AA (20: 4n-6) as well as the absence or very low proportion of 18: 3n-3.In addition, the comparison of the fatty acid compositions of the three species studied: L. infantum, L. major and L. tropica showed that L. major had a higher proportion of 14: 0 (myristic acid), 18: 3n- 6 (gamma-linoleic acid) and a lower proportion of n-3, including18: 3n-3 (alpha-linoleic acid) and 22: 6n-3 (docosahexaenoic acid) compared to L. infantum and L. tropica. After supplementation of oleic acid (AO), arachidonic acid (AA) and docosahexaenoic acid (DHA) on two L. infantum strains used to infect macrophages: a MON-24 isotype responsible for cutaneous and a MON-1

Les études épidémiologiques récentes montrent une consommation insuffisante d’acides gras polyinsaturés (AGPI) dans les pays occidentaux. Cependant, la sensibilité des AGPI à l’oxydation est l’une des premières causes de détérioration des qualités organoleptique et nutritionnelle dans les produits alimentaires. Parallèlement, les lipides présents dans les produits alimentaires se trouvent le plus souvent sous forme émulsionnée. Ainsi, les entreprises désirant formuler des produits alimentaires enrichis en AGPI adoptent des stratégies technologiques pour les stabiliser chimiquement et physiquement, tout en assurant leur biodisponibilité. Une de ces stratégie consiste à rechercher, dans la nature, des systèmes émulsifiés stables afin d’en extraire des molécules tensioactives d’intérêt et de mimer l’organisation des lipides. C’est dans ce contexte que des études portent, depuis quelques années, sur les corps lipidiques (Oil Bodies, OB), structures végétales naturelles de stockage des lipides des plantes oléagineuses, composées de phospholipides (PL) et de protéines (OBP).L’objectif général de ce projet de thèse vise à maitriser la formulation d’émulsions préparées uniquement à base de colza (huile, PL et OBP) par une meilleure connaissance des interactions PL : OBP, d’étudier la stabilité des émulsions d’un point de vue physicochimique en conditions de stockage et dans des conditions mimant les conditions gastro-intestinales et, enfin, d’évaluer l’influence de la composition de l’interface des émulsions sur la bioaccessibilité des acides gras insaturés in vivo chez le rat.Les études spectroscopiques des interactions PL modèles : OBP ont mis en évidence des interactions favorables à la stabilisation des émulsions entre les PL anioniques, les PL insaturés et les OBP. Ces résultats ont orienté le choix vers une lécithine de colza spécifique. Les interactions PL : OBP, modulées par le pH et le rapport PL : OBP, influencent la réalisation des émulsions, la quantité d’OBP adsorbées à l’interface et la stabilité physique des émulsions, avec un crémage prononcé pour les émulsions riches en protéines. La synergie PL : OBP à l’interface semble être un facteur décisif pour ralentir l’oxydation de l’huile de colza émulsifiée. Le comportement des émulsions, dans des conditions mimant celles du milieu gastro-intestinal, montre que la présence d’OBP à l’interface favorise la floculation des émulsions à pH acide (mimant celui de l’estomac), mais que cette floculation est réversible lorsque le pH est ramené à des valeurs proches de celle de l’intestin. La présence des OBP favorise l’activité de la lipase pancréatique in vitro. Finalement, l’interface composée de PL et d’OBP améliore la bioaccessibilité lymphatique des AGPI in vivo chez le rat.En conclusion, nous avons montré qu’il est possible de formuler des émulsions uniquement à base de colza. Elles pourraient présenter une alternative intéressante aux émulsions stabilisées par des émulsifiants d’origine synthétique (politique clean label) ou d’origine animale (alimentation végane). / Recent epidemiologic studies show an insufficient intake of polyunsaturated fatty acids (PUFA) in occidental countries. Besides, the sensibility of PUFA to oxidation is one of the major causes of organoleptic and nutritional quality deterioration in food products. Moreover, lipids in food products are often in an emulsified stage. Therefore, industrials that care to formulate PUFA enriched food products adopt technological strategies to protect and stabilize the lipids while improving their bioavailability. One of those strategies consists in looking for stable emulsified systems that already exist in nature, extract tensioactive molecules of interest and mimic the lipid state. In this context, several studies deal with oil bodies (OB), that are natural occurring structures for lipid storage in oleaginous plants, composed of proteins (OBP) and phospholipids (PL).Therefore, the main objective of this PhD work is to manage emulsion formulation only based on canola (oil, PL and OBP). This goes through: 1) an understanding of the interactions between PL and OBP; 2) a study of the stability of the emulsions under storage and gastrointestinal conditions, and finally, 3) an investigation of the influence of the emulsion interfacial composition on the bioavailability of PUFA in rats.The spectroscopic studies of the model PL:OBP interactions showed favorable interactions for stabilizing the emulsions based on anionic PL, unsaturated PL and OBP. These results allowed choosing an adequate canola lecithin. The PL:OBP interactions, modulated by the pH and the PL:OB ratio, influences the formation of the emulsions, the quantity of OBP adsorbed at the interface and the physical stability of emulsions with a pronounced creaming in emulsions rich in proteins. The PL:OBP synergy at the interface seems to be a decisive factor to slow down the oxidation of the emulsified canola oil. The emulsion behavior in conditions that mimic that of the gastrointestinal track, shows that the presence of OBP at the interface favored the emulsion flocculation at acid pH (mimicking that of the stomach). However, the flocculation was reversible when the pH was adjusted to a value close to that of the intestine. OBP also increased the activity of the pancreatic lipase in vitro. Finally, the presence of PL and OBP at the interface increased the lymphatic bioaccessibility of the PUFA in rats.On the whole, we showed that it is possible to manage emulsion formulation only based on canola products. This could be of peculiar interest for clean labeling or vegan nutrition by subtracting synthetic emulsifiers or emulsifiers from animal origin, respectively.

Les bases fondamentales de la biologie suggèrent que tous les organismes actuels partagent un dernier ancêtre commun, le cenancêtre. Dès que la comparaison moléculaire des organismes des trois domaines du vivant (archées, bactéries et eucaryotes) est devenue possible, d'importants débats ont émergé sur l'habitat du cenancêtre, son rapprochement des origines de la vie, sa nature unique ou communautaire et ses relations avec les trois domaines du vivant. Cependant, jusqu'à il y a peu les informations disponibles sur les organismes modernes n'étaient pas suffisantes pour décrire précisément sa biologie. Notamment, la découverte chez les archées de membranes dont les composants principaux, les phospholipides, sont synthétisés par des mécanismes très différents de ceux des bactéries et les eucaryotes a conduit à proposer que chaque mécanisme de synthèse des phospholipides soit apparu indépendamment dans les lignées modernes. Dans ces hypothèses le cenancêtre aurait été dépourvu de phospholipides et, donc, de membranes. Cela met en cause la nature cellulaire du cenancêtre, qui semblait pourtant soutenue par d'autres indices indirects. Ces contradictions posent la question de l'existence de traces dans les organismes modernes d'une synthèse des phospholipides chez le cenancêtre. Dans cette thèse j'ai profité de l'explosion récente des données génomiques pour répondre à cette question. Il avait déjà montré que des membres de deux superfamilles protéiques universelles pouvaient avoir synthétisé de façon non spécifique chez le cenancêtre les énantiomères de glycérol phosphate servant d'ossature aux phospholipides. Les phospholipides archéens sont composés d'isoprénoïdes et les bactériens et eucaryotes d'acides gras. J'ai donc étudié l'évolution des voies de synthèse de ces molécules ainsi que celle de l'assemblage de tous les composants dans des phospholipides. Mes résultats montrent que la voie de synthèse des isoprénoïdes des eucaryotes et une voie hypothétique de synthèse des acides gras chez les archées avaient probablement des ancêtres moins spécifiques chez le cenancêtre. Une partie au moins de la machinerie d'assemblage des phospholipides semble aussi avoir été présente chez le cenancêtre.Ceci suggère que le cenancêtre avait probablement des mécanismes peu spécifiques de synthèse des phospholipides et que les différences entre les membranes actuelles sont dues à la spécialisation de la machinerie ancestrale dans chaque lignée. Mes observations soulignent aussi l'importance d'étudier le cenancêtre à partir des informations issues des organismes actuels pour éviter toute confusion avec les origines de la vie.

Après le génome, le nouveau défi est celui du protéome. Nous avons progressé vers la mise au point de la séparation électrophorétique des protéines membranaires dans un milieu qui leur conviendrait, type bicouche lipidique supportée. La grandeur principale, mesurée par FRAPP, a été le coefficient de diffusion des objets d'un système biomimétique modèle (lipides, protéines). L'étude du comportement de la bicouche supportée a permis de mettre en évidence, pour certains supports et dans certaines conditions de température, la formation d'une phase ondulée (ou ripple) malgré la proximité du support. La diminution de la portée des interactions coulombiennes par adjonction de sel se traduit par une augmentation de plusieurs ordres de grandeur du coefficient de diffusion, approchant au final le comportement d'une bicouche libre, tout en conservant les étapes caractéristiques de la transition gel/fluide. L'ordre de grandeur de ces énergies d'interactions a été estimé à partir des courbes D= f(T) et validé par une étude préliminaire originale de DSC sur des bicouches lipidiques supportées. L'α-Hémolysine s'insère spontanément sous forme d'un pore heptamérique dans nos bicouches supportées et diffuse librement. En l'incubant en phase mixte (zones gel+ zones fluide), nous observons la formation de complexes de protéines. La dépendance du coefficient de diffusion avec la taille de l'objet est en 1/R2, R étant le rayon équivalent de la partie insérée de l'objet. L'application d'un champ électrique montre un transport électrophorétique dont la direction et l'importance sont modulées par la charge de l'objet. La mobilité électrophorétique varie également en 1/R2. La dépendance en taille, les valeurs obtenues et le mode opératoire simple permettent d'espérer la réalisation prochaine d'une véritable séparation électrophorétique pour un mélange de protéines.

La microscopie à force atomique est utilisée dans de nombreuses applications. Ce travail a ici pour but d'étudier, à l'échelle du nanomètre, les propriétés mécaniques de monocouches et de multicouches de phospholipides avec un microscope à force atomique en mode dynamique. Le comportement non linéaire du système pointe-levier, proche des couches de phospholipides, est étudié avec un modèle de granulation. Le MFA est aussi utilisé pour étudier l'influence d'un peptide membranaire, la syntaxine, et la structure des couches de phospholipides autoassemblées sur du mica. Dans un second temps, nous étudions l'oscillation d'un microlevier de MFA clampé en milieu liquide. Les résultats sont comparés aux prédictions théoriques des simulations numériques de la résolution des équations de Navier-Stokes à trois dimensions, pour mesurer l'influence du mouvement du fluide sur le comportement d'un levier oscillant de MFA. Nous montrons aussi comment la force hydrodynamique peut être réduite d'au moins un ordre de grandeur en usinant, à l'aide d'un faisceau d'ions focalisés (FIB), la largeur du levier. Enfin, nous présentons une description analytique qui détermine le mouvement d'un levier excité acoustiquement en milieu liquide. La troisième partie est une étude du comportement dynamique d'un nanoménisque avec une nanopointe oscillante. La nanoaiguille, découpée avec un<br />faisceau d'ions focalisés, est approchée d'une interface air-liquide et seule son extrémité oscille dans le liquide (Eau-Glycérol-PDMS). Il est montré qu'il est possible d'imager une interface de liquide avec une résolution à l'échelle du nanomètre.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2008. / Bibliogr.: f. 108-112. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

L'objet de ce travail est de déterminer si des variations de la composition lipidique de la membrane plasmique des hépatocytes participent à expliquer la relation causale entre les facteurs zootechniques et le rendement technologique des foies gras de palmipèdes. Nous étudions successivement l'incidence du gavage du canard mulard (Cairina moschata x Anas platyrhynchos) sur l'évolution de la composition lipidique des membranes hépatocytaires, la variabilité de cette dernière et sa relation avec la variabilité du rendement technologique des foies gras et l'incidence du délai post-prandial avant abattage sur la composition membranaire et le rendement technologique de foies gras d'oie (Anser anser). Nous montrons que le gavage induit chez le canard mulard une modification de la composition lipidique des membranes hépatocytaires avec une augmentation de la teneur en phospholipides et en cholestérol, sans modifier le rapport du cholestérol aux phospholipides. Les profils des phospholipides et de leurs acides gras constitutifs sont modifiés. Par ailleurs, si l'état d'engraissement des foies est fortement corrélé à leur rendement technologique, seul le profil des acides gras des lipides membranaires fait apparaître des liaisons faibles mais significatives avec ce dernier. Enfin, au cours de la période post-prandiale l'accrétion lipidique hépatique est en relation avec une modification du rapport du cholestérol aux phospholipides membranaires et une diminution du rendement technologique. Ces évolutions sont discutées en prenant en compte les données du métabolisme lipidique chez les oiseaux et l'incidence possible des modifications de composition des membranes plasmiques des hépatocytes sur la fluidité membranaire et audelà le rendement technologique.

Les particules superparamagnétiques constituent un outil puissant pour de nombreuses applications biomédicales, ce potentiel est souvent restreint à cause de leur stabilité limitée dans les milieux biologiques ou du piégeage orientationnel sous champ magnétique. Dans cette thèse, ces problèmes ont été résolus en créant une nouvelle génération de particules à interfaces liquides fonctionnalisées. Ces particules sont formulées en utilisant des émulsions de ferrofluides qui incorporent des phospholipides fonctionnalisés, notamment biotinylés pour permettre la capture de streptavidine. La taille est contrôlée grâce à la microfluidique, permettant la production d'émulsions uniformes. L'utilisation de streptavidine fluorescente révèle que la capture est influencée par les propriétés du cosurfactant et du ligand ainsi que par le nombre de ligands disponibles. La mobilité des ligands est démontrée par l'adhésion observée entre les gouttelettes liées par de la streptavidine et le mouvement des billes couvertes de streptavidine capturées à l'interface. Enfin, le potentiel de ces particules est exploré en créant un dosage pour le diagnostic. La présence d'analytes en solution est indiquée par l’agglutination. Dans ce travail l'agglutination est provoquée par la complexation entre des émulsions biotinylés et  la streptavidine (ou des billes couvertes de streptavidine). L’utilisation de gouttelettes de taille calibrée permet de compter avec précision des agrégats spécifiques par cytométrie de flux, la limite de détection étant dans la gamme femtomolaire. Cela surpasse la gamme picomolaire atteint généralement par des billes solides. / Colloidal superparamagnetic particles are a powerful tool in biotechnology, yet their applications are often hindered by limited stability in biological media or by orientation trapping under applied magnetic fields. In this thesis, these problems are addressed by developing novel magnetic particles bearing ligands at a liquid interface. Magnetic particle analogues are formulated using ferrofluidic emulsions, which incorporate functionalised phospholipids. Droplet size is controlled using microfluidic membrane emulsification to produce highly uniform populations. Ligands are modelled using biotinylated lipids, permitting the capture of streptavidin at the droplet interface. Fluorescently labelled proteins reveal that capture efficiency is influenced by the cosurfactant interfacial activity and the polymer spacer length of the ligand. Overall, capture saturation is found to be related to the number of ligands available at the interface. Ligand mobility is demonstrated by the formation of adhesion plaques between streptavidin cross-linked droplets and the motion of streptavidin coated beads caught at the interface. Finally, an application is explored by creating a new immunoassay. Polyvalent proteins or beads crosslink ligand functionalised droplets forming aggregates. Using size calibrated droplets specific aggregates can be accurately counted using flow cytometry and the limit of detection is found to be in the femtomolar range, this surpasses the picomolar range typically achieved using solid beads.