Cold shock Y-box binding protein-1 (YB-1) coordinates several molecular processes between the nucleus and the cytoplasm and plays a crucial role in cell function. Moreover, it is involved in cancer progression, invasion, and metastasis. As trophoblast cells share similar characteristics with cancer cells, we hypothesized that YB-1 might also be necessary for trophoblast functionality. In samples of patients with intrauterine growth restriction, YB-1 mRNA levels were decreased, while they were increased in preeclampsia and unchanged in spontaneous abortions when compared to normal pregnant controls. Studies with overexpression and downregulation of YB-1 were performed to assess the key trophoblast processes in two trophoblast cell lines HTR8/SVneo and JEG3. Overexpression of YB-1 or exposure of trophoblast cells to recombinant YB-1 caused enhanced proliferation, while knockdown of YB-1 lead to proliferative disadvantage in JEG3 or HTR8/SVneo cells. The invasion and migration properties were affected at different degrees among the trophoblast cell lines. Trophoblast expression of genes mediating migration, invasion, apoptosis, and inflammation was altered upon YB-1 downregulation. Moreover, IL-6 secretion was excessively increased in HTR8/SVneo. Ultimately, YB-1 directly binds to NF-κB enhancer mark in HTR8/SVneo cells. Our data show that YB-1 protein is important for trophoblast cell functioning and, when downregulated, leads to trophoblast disadvantage that at least in part is mediated by NF-κB.

Este estudo analisou a expressão gênica e o conteúdo protéico do fator Cripto 1 (Cr1) na interface materno-placentária ao longo da gestação através de RT-PCR e Western blotting. Nossos resultados mostraram que a proteína Cr1 está presente ao longo do desenvolvimento placentário nos dois compartimentos da interface materno-placentária. Houve aumento progressivo da proteína no compartimento fetal e, na decídua um decréscimo após o dia 13,5 de gestação, mas ainda com valores mais altos do que os da porção fetal da placenta. As avaliações semi-quantitativas de Cr1 por PCR indicaram uma baixa expressão nas fases de pós-implantação e final da gestação nos dois compartimentos estudados, com um aumento significativo nos dias 10,5 e principalmente no dia 13,5 de gestação. A presença de Cr1 na interface materno-placentária indica um papel relevante para este fator, possivelmente no desenvolvimento placentário ou ainda nos muitos processos que se desenvolvem neste sítio e que são essenciais para sua manutenção e sucesso gestacional. / This study analyzed the gene expression and protein content of Cripto 1 (Cr1) at the maternal-placental interface during gestation, through RT-PCR and Western Blotting. Our results showed that the protein Cr1 is present during placental development in both compartments of the maternal-placental interface. The content gradually increased at the fetal compartment, decreased at the decidua after day 13.5 of gestation, but nevertheless, as high values in comparison with those at the fetal compartment. The semi-quantitative evaluations of Cr1 through PCR indicated low expression at the post-implantation and final gestational periods in both compartments, showing a significant increase on day 10.5 and mainly 13.5 of gestation (p<0,05). The presence of Cr1 at the maternal-placental interface indicates a relevant role played by this factor, possibly during placental development or, yet, in the processes developed in this particular site and that are essential for gestational maintenance and success.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-05-03T13:11:41Z No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:04:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-04T16:04:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T16:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreMV_TESE.pdf: 15675614 bytes, checksum: fe55971bec8a35c1310c8ede4fbbf2f5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The gestation period, the characteristics of the reproductive cycle, including the selection of the influence of the male effect, the description of the female reproductive system, placentation, embryonic and fetal development – added of the morphometric analysis - and the expression of sulfated glycosaminoglycans (GAGs) in the reproductive and placental organs were the ways to contribute with the conservation of the species. For this, 45 non-pregnant females were used in the following experiments: 15 females were distributed in three experimental groups, followed by the addition of one male in each group, so that after the copulation and fertilization the females were separeted in accordance with the compatible dates of begining (days 5, 10 and 15), middle (days 20, 25, 30 and 35) and end (days 40, 45, 50 and 55) of gestation. This condition was obtained to obtain fragments of gestational sacs, placentas and organs of the female reproductive system, which were fixed in 4% paraformaldehyde and submitted to light microscopy techniques. The samples fixed in glutaraldehyde were performed in scanning and transmission electron microscopy techniques. In addition, prozima was used for GAG extraction, followed by agarose gel electrophoresis and subsequent quantification by densitometry. The second experiment consisted of the use of five females, housed in a room that contained a male to monitor the duration of gestation. The third experiment aimed to characterize the estrous cycle in a group containing five females plus one male, which was found trapped in a cage and another five, in a box exempt from the latter. The fourth experiment was performed by means of the morphometric analysis of embryos with 20, 25, 30 and 35 days plus fetuses on days 40, 45, 50, 55, 60 and newborns. The results revealed the presence of an incomplete double uterus, formed by two horns, a septate body and a cervix. The organs of the reproductive system presented macroscopic and histological characteristics similar to those reported for other rodents. The duration of gestation showed an average of 59 ± 2,7487 days and the sexual cycle was classified as continuous polystyric, with a mean period of 14.8 ± 0.73 days for females submitted to the male effect and 14.6 ± 0.75 days for those of the other group. In addition, the male presence significantly influenced (D <0.05) the duration of the diestrus, making it longer. The yolk sac inversion occurred on the 14th day of gestation and the visceral endoderm was placed in apposition to the uterine tissues. The chorioallantoic placenta presented a discoidal shape and had well defined regions of spongiotrophoblast, labyrinth and subplacenta from the intermediate gestation. Embryonic development was similar to that observed in histricognatis rodents, being the transition to the fetal phase, occurring at 40 days of gestation. Morphometric data allowed the establishment of correlations with gestational age. Dermatan sulfate was the predominant GAG in samples of uterine tubes, vaginas and placentas, whereas heparam expressed more in the body of the uterus at the beginning of gestation. There were also high concentrations of GAGs in the pregnant uterus and still in the reproductive system in the estrogenic phase when compared to the diestrus. It is concluded that the reproductive events presented characteristics of the species correlated with others of the order Rodentia, fact that indicates a set of evolutionary strategies related to its maintenance / O período de gestação, características do ciclo reprodutivo, incluindo verificação da influência do efeito macho, descrição do sistema reprodutor feminino, placentação, desenvolvimento embrionário e fetal – acrescido de análises morfométricas - e expressão dos glicosaminoglicanos (GAGs) sulfatados nos órgãos reprodutivos e placentários foram caracterizados em fêmeas de preás como forma de contribuir para a conservação da espécie. Para tanto, utilizaram-se 45 fêmeas não gestantes nos seguintes experimentos: 15 fêmeas foram distribuídas em três grupos experimentais, seguido da adição de um macho em cada grupo de modo que após a cópula e fecundação, as fêmeas eram separadas segundo datas compatíveis com início (dias cinco, 10 e 15), meio (dias 20, 25, 30 e 35) e fim (dias 40, 45, 50 e 55) da gestação. Tal condição visou à obtenção de fragmentos dos sacos gestacionais, placentas e órgãos do sistema reprodutor feminino, os quais foram fixados em paraformaldeído 4% e submetidos às técnicas de microscopia de luz. As amostras fixadas em glutaraldeído foram destinadas à realização de técnicas de microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Além disto, usou-se a prozima para extração dos GAGs, seguida da eletroforese em gel de agarose e posterior quantificação por densitometria. O segundo experimento consistiu na utilização de cinco fêmeas, alocadas em recinto que continha um macho para o acompanhamento da duração da gestação. O terceiro experimento objetivou a caracterização do ciclo estral em um grupo contendo cinco fêmeas mais um macho, o qual encontrou-se preso em gaiola e outras cinco, em box isento deste último. O quarto experimento foi realizado por meio da análise morfométrica de embriões com 20, 25, 30 e 35 dias além de fetos nos dias 40, 45, 50, 55, 60 e recém-nascidos. Os resultados revelaram a presença de um útero duplo incompleto, formado por dois cornos, um corpo septado e uma cérvice. Os órgãos do sistema reprodutor apresentaram características macroscópicas e histológicas semelhantes as relatadas para outros roedores. A duração da gestação demonstrou média de 59 ± 2,7487 dias e o ciclo sexual foi classificado como poliéstrico contínuo, com período médio de 14,8 ± 0,73 dias para as fêmeas submetidas ao efeito macho e 14,6 ± 0,75 dias para aquelas do outro grupo. Além disto, a presença do macho influenciou significativamente (P<0,05) a duração do diestro, tornando-o mais longo. A inversão do saco vitelino ocorreu no décimo quarto dia de gestação e o endoderma visceral situou-se em aposição aos tecidos uterinos. A placenta corioalantoide apresentou forma discoidal e possuiu regiões bem definidas de espongiotrofoblasto, labirinto e subplacenta a partir da gestação intermediária. O desenvolvimento embrionário foi semelhante ao observado em roedores histricognatis, sendo a transição para a fase fetal, ocorrida aos 40 dias de gestação. Os dados morfométricos possibilitaram o estabelecimento de correlações com a idade gestacional. O dermatam sulfato foi o GAG predominante em amostras de tubas uterinas, vaginas e placentas, ao passo que o heparam expressou-se mais no corpo do útero, no início da gestação. Houve ainda elevadas concentrações de GAGs no útero gestante e no sistema reprodutor na fase estrogênica quando comparada ao diestro. Conclui-se que os eventos reprodutivos apresentaram características da espécie correlacionáveis com outras da ordem Rodentia, fato este que indica um conjunto de estratégias evolutivas relacionadas com a sua manutenção / 2017-05-03

Este estudo analisou a expressão gênica e o conteúdo protéico do fator Cripto 1 (Cr1) na interface materno-placentária ao longo da gestação através de RT-PCR e Western blotting. Nossos resultados mostraram que a proteína Cr1 está presente ao longo do desenvolvimento placentário nos dois compartimentos da interface materno-placentária. Houve aumento progressivo da proteína no compartimento fetal e, na decídua um decréscimo após o dia 13,5 de gestação, mas ainda com valores mais altos do que os da porção fetal da placenta. As avaliações semi-quantitativas de Cr1 por PCR indicaram uma baixa expressão nas fases de pós-implantação e final da gestação nos dois compartimentos estudados, com um aumento significativo nos dias 10,5 e principalmente no dia 13,5 de gestação. A presença de Cr1 na interface materno-placentária indica um papel relevante para este fator, possivelmente no desenvolvimento placentário ou ainda nos muitos processos que se desenvolvem neste sítio e que são essenciais para sua manutenção e sucesso gestacional. / This study analyzed the gene expression and protein content of Cripto 1 (Cr1) at the maternal-placental interface during gestation, through RT-PCR and Western Blotting. Our results showed that the protein Cr1 is present during placental development in both compartments of the maternal-placental interface. The content gradually increased at the fetal compartment, decreased at the decidua after day 13.5 of gestation, but nevertheless, as high values in comparison with those at the fetal compartment. The semi-quantitative evaluations of Cr1 through PCR indicated low expression at the post-implantation and final gestational periods in both compartments, showing a significant increase on day 10.5 and mainly 13.5 of gestation (p<0,05). The presence of Cr1 at the maternal-placental interface indicates a relevant role played by this factor, possibly during placental development or, yet, in the processes developed in this particular site and that are essential for gestational maintenance and success.

Abstract The first aim of this randomized, placebo-controlled and double-blind study was to investigate whether low-dose aspirin therapy, started prior to controlled ovarian hyperstimulation, improves ovarian stimulation response, uterine haemodynamics and clinical pregnancy rates in unselected patients who underwent in vitro fertilization (IVF) or intracytoplasmic sperm injection (ICSI). The second aim was to examine if the maternal serum placental proteome is different in IVF/ICSI pregnancies compared with spontaneous pregnancies, and whether low-dose aspirin modifies maternal serum placental protein expression and uteroplacental haemodynamics during the first half of pregnancy. Finally, the effect of low-dose aspirin therapy on the incidence of hypertensive pregnancy complications among women who became pregnant after IVF/ICSI was investigated. Low-dose aspirin therapy did not increase the number of oocytes retrieved, the total number of embryos or number of top-quality embryos, endometrial thickness or uterine haemodynamics on the day of embryo transfer (ET) or clinical pregnancy rates compared with placebo-treated IVF/ICSI women. On the day of ET, low-dose aspirin did not affect UtA vascular impedance, but the incidence of non-optimal uterine artery haemodynamics (UtA PI&#8805;3.0) was statistically significantly lower (p&#60;0.05) in the aspirin group compared with the placebo group. In the placebo-treated IVF/ICSI patients, maternal serum proteome analysis showed altered protein expression compared with women with spontaneous pregnancies. Between aspirin- and placebo-treated IVF/ICSI patients, proteome analysis showed a unique and distinct pattern of differentially expressed proteins including extra-cellular matrix, complement and transport proteins. At 6 weeks’ gestation, arcuate artery PI and at 18 weeks’ gestation, UtA PI values were lower (p&#60;0.05) in the aspirin group than in the placebo group. In conclusion, low-dose aspirin therapy, when started concomitantly with controlled ovarian hyperstimulation, did not improve ovarian responsiveness, uterine receptivity, pregnancy outcome in unselected IVF/ICSI women or affect UtA vascular impedance on the day of ET. Low-dose aspirin modified the early placentation process and reduced uteroplacental vascular impedance in mid-pregnancy, but did not decrease the incidence of hypertensive pregnancy complications. / Tiivistelmä Keinoalkuisten hedelmöityshoitojen seurauksena keskimäärin reilu kolmannes naisista tulee raskaaksi hoitokertaa kohti. Näissä raskauksissa äidin seerumista määritettyjen istukkaperäisten merkkiaineiden pitoisuuksissa on eroavaisuuksia verrattuna spontaanisti raskaaksi tulleiden naisten seerumipitoisuuksiin ensimmäisen ja toisen raskauskolmanneksen aikana. Pre-eklampsian eli raskausmyrkytyksen riski on myös lisääntynyt. Syyksi arvellaan istukan verisuonipuuston poikkeavaa kehitystä. Pre-eklampsiaan liitetään intravaskulaarisen prostasykliinin ja tromboksaanin epätasapaino, joka johtaa verihiutaleiden aggregaation lisääntymiseen ja verisuonten supistumiseen. Matala-annoksinen asetyylisalisyylihappo (ASA) vähentää tromboksaanituotantoa ja korjaa tromboksaani- ja prostasykliinituotannon epätasapainoa, mutta sen ei ole todettu merkittävästi vähentävän näiden raskauskomplikaatioiden esiintyvyyttä edes riskiryhmillä, kun lääkitys on aloitettu toisen raskauskolmanneksen aikana. Tämän satunnaistetun ja plasebo-kontrolloidun kaksoissokkotutkimuksen tavoitteena oli tutkia keinoalkuisia hedelmöityshoitoja saavilla naisilla matala-annoksisen ASA-hoidon (100 mg/vrk) merkitystä munasarjojen stimulaatiovasteeseen, alkion kiinnittymiseen, istukan muodostumiseen ja kehittymiseen sekä lääkehoidon vaikutusta kohdun, istukan ja sikiön verenkiertoon, kun lääkitys aloitettiin munasarjojen stimulaatiohoidon alkaessa. Lisätavoitteena oli selvittää, onko lapsettomuushoitoja saavien naisten raskauksissa todettavissa spesifinen istukkaproteomiikkalöydös (istukan tuottamat valkuaisaineet) verrattuna spontaanisti raskaaksi tulleisiin naisiin ja voidaanko siihen vaikuttaa matala-annoksisella ASA-hoidolla. Toisena lisätavoitteena oli selvittää matala-annoksisen ASA-hoidon vaikutus pre-eklampsian esiintyvyyteen loppuraskaudessa. Matala-annoksinen asetyylisalisyylihappo (ASA) ei paranna keinoalkuisten hedelmöityshoitojen hoitotuloksia eikä vaikuta kohdun verenkiertoon tai kohdun limakalvon paksuuteen ultraäänellä arvioituna alkion siirtopäivänä. Matala-annoksista ASA-hoitoa käyttäneiden potilaiden ryhmässä todettiin kuitenkin merkitsevästi vähemmän naisia, joilla oli huonoa hoitotulosta keinoalkuisissa hedelmöityshoidoissa ennakoiva korkea molemminpuolinen kohtuvaltimoiden verenvirtausvastus alkion siirtopäivänä verrattuna plasebo-ryhmään. Raskaaksi tulleilla naisilla, jotka käyttivät matala-annoksista ASA-hoitoa, todettiin kohdun verenvirtausvastus matalammaksi alku- ja keskiraskaudessa verrattuna plasebo-ryhmän naisiin. Istukkaproteomiikkatutkimusten mukaan varhaisistukan proteiinituotanto on erilainen keinoalkuisissa raskauksissa verrattuna spontaanisti alkaneisiin raskauksiin ja siihen voidaan vaikuttaa matala-annoksisella ASA-hoidolla. Pre-eklampsian ja sikiön kasvunhidastuman esiintyvyydessä ei ryhmien välillä todettu eroa. Matala-annoksinen ASA-hoito aloitettuna ennen raskautta munasarjojen stimulaatiohoidon alkaessa ei paranna munasarjojen vastetta lapsettomuushoidoissa käytettäville hormonihoidoille, raskauslukuja eikä kohdun verenkiertoa alkion siirtopäivänä. Hoidon todettiin kuitenkin vaikuttavan varhaisistukan kehittymiseen sekä parantavan kohdun verenkierto alku- ja keskiraskaudessa viitaten istukan verisuonipuuston parempaan kehittymiseen. Matala-annoksinen ASA-hoito ei vähentänyt istukkaperäisten raskauskomplikaatioiden esiintymistä.

Estudo longitudinal, prospectivo, comparativo de avaliação dopplervelocimétrica das artérias uterinas direita e esquerda em 37 gestantes normais em três períodos da gestação, acompanhadas na Clínica Obstétrica do HCFMUSP. Análise da relação S/D, índice de pulsatilidade e índice de resistência, relação com o número de incisuras e com posição da placenta. Foi observada redução nos valores dos índices durante a gestação. A relação S/D AUTE com placenta a direita apresentou média superior. A incidência de incisura foi maior no período entre a 16ª e a 24ª semana de gestação. A análise da relação entre os índices dopplervelocimétricos e a presença de incisura não teve resultados significativos / Prospective, longitudinal, comparative study of Doppler evaluation of the right and left uterine arteries of 37 healthy women with singleton pregnancies, performed in three periods of pregnancy, at the Pre-Natal Care Unit HCFMUSP. S/D ratio, pulsatility index and resistance index, number of notches and placental position were analysed. A decrease in the indices was observed with advancing gestation. When placenta was on the right side, the left uterine artery S/D ratio showed increased mean values. The incidence of uterine notch was higher between the 16th and 24th week of gestation in both arteries. No correlation was found between the presence of uterine notch and the placental position

Estudo longitudinal, prospectivo, comparativo de avaliação dopplervelocimétrica das artérias uterinas direita e esquerda em 37 gestantes normais em três períodos da gestação, acompanhadas na Clínica Obstétrica do HCFMUSP. Análise da relação S/D, índice de pulsatilidade e índice de resistência, relação com o número de incisuras e com posição da placenta. Foi observada redução nos valores dos índices durante a gestação. A relação S/D AUTE com placenta a direita apresentou média superior. A incidência de incisura foi maior no período entre a 16ª e a 24ª semana de gestação. A análise da relação entre os índices dopplervelocimétricos e a presença de incisura não teve resultados significativos / Prospective, longitudinal, comparative study of Doppler evaluation of the right and left uterine arteries of 37 healthy women with singleton pregnancies, performed in three periods of pregnancy, at the Pre-Natal Care Unit HCFMUSP. S/D ratio, pulsatility index and resistance index, number of notches and placental position were analysed. A decrease in the indices was observed with advancing gestation. When placenta was on the right side, the left uterine artery S/D ratio showed increased mean values. The incidence of uterine notch was higher between the 16th and 24th week of gestation in both arteries. No correlation was found between the presence of uterine notch and the placental position