Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-17T13:13:44Z No. of bitstreams: 1 analuizafranco.pdf: 2074317 bytes, checksum: f53c6da1ce85b0e7bf9648770e24e7ae (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-08-24T11:26:25Z (GMT) / Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-24T15:15:16Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-30T14:30:48Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2017-08-30T14:30:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2017-02-16 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Stylosanthes (Fabaceae) possui aproximadamente 50 espécies e algumas apresentam grande importância econômica. Algumas espécies são amplamente utilizadas como forrageiras, em recuperação de áreas degradadas e adubação verde graças a sua alta adaptabilidade aos solos de baixa fertilidade e capacidade de fixar nitrogênio. O gênero está distribuído em áreas tropicais e subtropicais e o Brasil é considerado o maior centro de diversidade, com grande variação intra e interespecífica. Estudos de melhoramento genético relacionados ao gênero têm aumentado, porém a taxonomia permanece controversa. A ocorrência de poliploidia, híbridos e sinonímias reforçam a importância de adicionar novas informações sobre o gênero. Dados citogenéticos sobre o gênero são escassos mesmo constituindo uma importante ferramenta para contribuir com informações relevantes sobre o genoma. Neste trabalho, descreveu-se pela primeira vez, aspectos cariotípicos e quantidade de DNA em espécies diploides (S. grandifolia, S. gracilis, S. hipocampoides, S. acuminata e quatro variedades de S. guianensis) por meio de técnicas de citogenética molecular (bandeamento CMA/DAPI e hibridização fluorescente in situ- FISH) e citometria de fluxo. A germinação de sementes foi induzida em câmara de germinação variando-se a temperatura (18° a 40°C) e adicionando-se hormônio de crescimento (CEPA 0,1mM). Meristemas radiculares foram utilizados para a preparação das lâminas e os cromossomos foram corados com fluorocromos CMA/DAPI para análise de padrões de bandas. Os sítios de DNA ribossomais 5S e 45S foram mapeados por hibridização fluorescente in situ (FISH). Para estimar a quantidade de DNA, Pisum sativum foi utilizado como padrão de referência nas análises de citometria de fluxo. A morfometria cromossômica realizada evidenciou, de uma maneira geral, a presença de um cariótipo simétrico, com poucas variações entre as espécies. A localização de regiões ricas em CG foi similar (duas bandas em posição terminal) em S. gracilis, S. hipocampoides e em três das variedades de S. guianensis (1480, 1463 e 4171). Entretanto, uma variedade de S. guianensis (C.V mineirão) além de S. grandifolia e S. acuminata exibiram quatro marcas CMA positivas. Com relação ao DNAr 5S e 45S, dois sítios foram observados na maioria das espécies, com exceção de S. acuminata, que apresentou quatro marcas 45S. Algumas variações também foram observadas entre as variedades de S. guianensis. A variedade 4171 apresentou metáfases com três ou quatro sítios de DNAr 45S. O valor médio do conteúdo de DNA estimado foi de aproximadamente 2,50 pg em todas as espécies. Tomados em conjunto, os dados constituem uma importante contribuição para o estudo da história evolutiva do grupo, revelando a estabilidade do genoma quando avaliado do ponto de vista cromossômico e de quantidade de DNA. O estudo contribui ainda para programas de melhoramento genético de espécies com importância econômica. / Stylosanthes (Leguminosae) comprises about 50 species being some of them with great economic importance. Some species are widely used as forages and, to recover degraded areas and as a green fertilizer due to its adaptability to low fertility soils and nitrogen fixing capacity . The genus is distributed in tropical and subtropicals areas. Brazil is considered the larger diversity center, with great inter and intraspecific variation. Breeding studies have been increased although the taxonomic situation of the group remains controversial. The occurrence of polyploidy, hybrids and many additional synonyms reinforce the importance to add new information about the genus. Cytogenetics data about the genus are scarce, even considering as an important tool to give relevant information about the genome. Here we describe, for the first time, karyotipic aspects and the DNA content of diploid species (S. grandifolia, S. gracilis, S. hipocampoides, S. acuminata and four varieties of S. guianensis) by using molecular cytogenetic techniques (CMA/DAPI banding and in situ hybridization) and flow cytometry. Seeds germination was induced by temperature variation (18° to 40°C) and growth hormones (CEPA 0.1mM) in a germination chamber. Meristematic roots were used to slides preparation. Chromosomes were stained with CMA/DAPI for banding patterns analysis and ribosomal 5S, 45S rDNA sites were mapped by in situ hybridization. To estimate the DNA content, Pisum sativum were used as a reference standard in flow cytometry analysis. The chromosomal morphometry showed a symmetrical karyotype with few variations between species. The localization of the CG rich regions was similar (two bands at terminal position) in S. gracilis, S. hipocampoides, and in three of the S. guianensis varieties (1480,1463 and 4171). However, one variety of S. guianensis (C.V mineirão), S. grandifolia and S. acuminata exhibited four CMA+ marks. Regarding 5S and 45S rDNA, two sites were observed in most species, excepting for S. acuminata, with fours 45S marks. Some variations were also observed among S. guianensis accessions. In 4171, metaphases with three or four 45S rDNA sites were observed. DNA content estimation was about 2.50pg in all species. Nevertheless, for S. grandifolia, cells with two DNA C-values were observed suggesting a variation in the DNA content. Taking together, the data constitutes an important contribution in the study of evolutionary history of the group, revealing the genome stability when chromosome and DNA content information were considered. The study also contribute for breeding programs of species with economic importance.

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Passiflora (Passifloraceae) é um grande gênero de espécies vegetais encontradas, principalmente, na flora tropical. Algumas passifloras são cultivadas como plantas ornamentais, frutíferas ou exploradas pelas suas propriedades medicinais. A principal espécie comercial brasileira, o maracujá-azedo (Passiflora edulis f. flavicarpa, 2n = 18), ocupa 95% da área plantada. Os frutos são consumidos in natura ou processados pela indústria de suco. Estudos genéticos e cromossômicos têm sido gerados para esta espécie. Entretanto, devido ao pequeno tamanho e a similaridade morfológica dos seus cromossomos, as medições do cariótipo convencional do maracujá-azedo têm levado a resultados inconsistentes, sendo necessário o desenvolvimento de marcadores cromossomos-específicos. Estes marcadores são produzidos a partir da identificação de sequências de cópia-única em clones de bibliotecas de BACs (Bacterial Artificial Chromosome), que são utilizadas como sondas em ensaios de FISH (Hibridização in situ Fluorescente). Neste trabalho, foi construída uma biblioteca genômica de maracujá-azedo em BACs contendo 82.944 clones, com tamanho médio dos insertos de 108 kb, e provendo uma cobertura de seis vezes o genoma. A biblioteca apresentou baixa contaminação com cpDNA e mtDNA (~0,04% e 0%, respectivamente), e foi possível o isolamento de oito clones contendo genes putativos de P. edulis f. flavicarpa. Estes clones foram marcados e utilizados como sondas em ensaios de FISH. Destas sondas, quatro apresentaram sinal único de hibridização, e foram mapeadas nos cromossomos 1 (gene ERS), 3 (gene ACCO) e 4 (genes G3PD e CYCD1). As demais sondas (genes LOX, NDID e MIPS) apresentaram sinais de hibridização subteloméricos ou pericentroméricos, indicando a presença de DNA repetitivo nos clones; a sonda contendo o gene EMB não revelou sinal fluorescente. Com base em análises de FISH, definiu-se, no presente trabalho, um novo cariótipo para o maracujá-azedo, com marcadores específicos para os cromossomos 1, 3 e 4, localizando, também, sítios de DNAr 45S nos cromossomos 7 e 8, e um sítio de DNAr 5S no cromossomo 5. A exploração da biblioteca de BAC, bem como o mapa físico aqui estabelecido, representa importantes avanços para guiar pesquisas futuras sobre o gênero Passiflora. / Passiflora (Passifloraceae) is a large genus of plant species essentially found in the tropical flora. Some passiflora are grown as ornamentals, cultivated for their edible fruits, or exploited due to their medicinal properties. The main Brazilian commercial species, the yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa, 2n = 18) occupies 95% of all planted orchards. The fruits are eaten fresh or used for industrial juice production. Genetic and chromosomal studies have been carried out on the species. However, due to the small size and morphological similarity of their chromosomes, the conventional measures of the karyotype have produced some inconsistent results, being imperative the development of chromosome-specific markers. These markers are produced by identifying BAC (Bacterial Artificial Chromosome) library clones that harbor single copy sequences, which are used as probes in FISH (Fluorescent in situ Hybridization) assays. In the present work, a yellow passion fruit genomic BAC library of 82.944 clones was constructed, with average insert sizes of 108 kb, and covering six times the genome equivalent. The library has shown a low level of cpDNA and mtDNA contamination (~0.04% and 0%, respectively), and it was possible the isolation of eight clones harboring putative genes of P. edulis f. flavicarpa. These clones were labeled and used as probes in FISH assays. Of these probes, four have shown single hybridization signals, and they were mapped on chromosome 1 (ERS gene), 3 (ACCO gene), and 4 (G3PD and CYCD1 genes). The other probes (LOX, NDID and MIPS gene) revealed subtelomeric or pericentromeric signals, suggesting the presence of repetitive DNA sequences in the clones; the probe harboring the EMB gene did not reveal any hybridization signal. Based on FISH analyses, a new karyotype for the passion fruit was established in the present work, with specific markers in chromosomes 1, 3 and 4; we also mapped 45S rDNA sites in chromosomes 7 and 8, and one 5S rDNA site in chromosome 5. The exploitation of the BAC library, as well as the physical map here established, represents novel and essential advances to guide future researches on the Passilfora genus.

Passiflora (Passifloraceae) é um grande gênero de espécies vegetais encontradas, principalmente, na flora tropical. Algumas passifloras são cultivadas como plantas ornamentais, frutíferas ou exploradas pelas suas propriedades medicinais. A principal espécie comercial brasileira, o maracujá-azedo (Passiflora edulis f. flavicarpa, 2n = 18), ocupa 95% da área plantada. Os frutos são consumidos in natura ou processados pela indústria de suco. Estudos genéticos e cromossômicos têm sido gerados para esta espécie. Entretanto, devido ao pequeno tamanho e a similaridade morfológica dos seus cromossomos, as medições do cariótipo convencional do maracujá-azedo têm levado a resultados inconsistentes, sendo necessário o desenvolvimento de marcadores cromossomos-específicos. Estes marcadores são produzidos a partir da identificação de sequências de cópia-única em clones de bibliotecas de BACs (Bacterial Artificial Chromosome), que são utilizadas como sondas em ensaios de FISH (Hibridização in situ Fluorescente). Neste trabalho, foi construída uma biblioteca genômica de maracujá-azedo em BACs contendo 82.944 clones, com tamanho médio dos insertos de 108 kb, e provendo uma cobertura de seis vezes o genoma. A biblioteca apresentou baixa contaminação com cpDNA e mtDNA (~0,04% e 0%, respectivamente), e foi possível o isolamento de oito clones contendo genes putativos de P. edulis f. flavicarpa. Estes clones foram marcados e utilizados como sondas em ensaios de FISH. Destas sondas, quatro apresentaram sinal único de hibridização, e foram mapeadas nos cromossomos 1 (gene ERS), 3 (gene ACCO) e 4 (genes G3PD e CYCD1). As demais sondas (genes LOX, NDID e MIPS) apresentaram sinais de hibridização subteloméricos ou pericentroméricos, indicando a presença de DNA repetitivo nos clones; a sonda contendo o gene EMB não revelou sinal fluorescente. Com base em análises de FISH, definiu-se, no presente trabalho, um novo cariótipo para o maracujá-azedo, com marcadores específicos para os cromossomos 1, 3 e 4, localizando, também, sítios de DNAr 45S nos cromossomos 7 e 8, e um sítio de DNAr 5S no cromossomo 5. A exploração da biblioteca de BAC, bem como o mapa físico aqui estabelecido, representa importantes avanços para guiar pesquisas futuras sobre o gênero Passiflora. / Passiflora (Passifloraceae) is a large genus of plant species essentially found in the tropical flora. Some passiflora are grown as ornamentals, cultivated for their edible fruits, or exploited due to their medicinal properties. The main Brazilian commercial species, the yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa, 2n = 18) occupies 95% of all planted orchards. The fruits are eaten fresh or used for industrial juice production. Genetic and chromosomal studies have been carried out on the species. However, due to the small size and morphological similarity of their chromosomes, the conventional measures of the karyotype have produced some inconsistent results, being imperative the development of chromosome-specific markers. These markers are produced by identifying BAC (Bacterial Artificial Chromosome) library clones that harbor single copy sequences, which are used as probes in FISH (Fluorescent in situ Hybridization) assays. In the present work, a yellow passion fruit genomic BAC library of 82.944 clones was constructed, with average insert sizes of 108 kb, and covering six times the genome equivalent. The library has shown a low level of cpDNA and mtDNA contamination (~0.04% and 0%, respectively), and it was possible the isolation of eight clones harboring putative genes of P. edulis f. flavicarpa. These clones were labeled and used as probes in FISH assays. Of these probes, four have shown single hybridization signals, and they were mapped on chromosome 1 (ERS gene), 3 (ACCO gene), and 4 (G3PD and CYCD1 genes). The other probes (LOX, NDID and MIPS gene) revealed subtelomeric or pericentromeric signals, suggesting the presence of repetitive DNA sequences in the clones; the probe harboring the EMB gene did not reveal any hybridization signal. Based on FISH analyses, a new karyotype for the passion fruit was established in the present work, with specific markers in chromosomes 1, 3 and 4; we also mapped 45S rDNA sites in chromosomes 7 and 8, and one 5S rDNA site in chromosome 5. The exploitation of the BAC library, as well as the physical map here established, represents novel and essential advances to guide future researches on the Passilfora genus.

Eucalyptus trees are a significant source of fuelwood, timber and raw material for the paper and pulp industry. In South Africa, Eucalyptus grandis and its hybrids are in high demand due to their fast growth and suitability of their timber for a wide range of products. Breeding and selection for superior quality eucalypts could sustain this high demand through selection and subsequent multiplication of superior genotypes and their use in controlled crosses. However, for this to be successful, a wide genepool must be available and maintained. Germplasm conservation of both vegetative and sexual material is therefore an integral part of such activities. However, in the case of trees, in vivo conservation practices are expensive and hazardous. The aim of this project was therefore to establish alternative conservation strategies for short-to-medium and long-term use of Eucalyptus spp. to facilitate on-going breeding and clonal programmes. For short-to-medium term storage, shoot cultures were subjected to various minimal growth conditions. Of the investigated treatments, reducing nutrients was the best storage method and shoots were maintained for 10 months with multiplication rates of 13.75 ± 7.05 shoots/explant. Encapsulated axillary buds were stored in jars at 10 °C or 28 °C. Of these two treatments, viability was sustained for longer (6 months) at 4 °C. Before establishing pollen storage regimes, viability assessment methods were evaluated and these consisted of in vitro germination on a BK (Brewbaker and Kwack, 1963) medium for 24 hours (26 ± 3.0%) and staining with two tetrazolium salts. Medium-term storage of pollen was best achieved by maintenance in the fridge (4 °C) without any desiccating substance (8 months at 6.73 ± 1.21%). Cryopreservation protocols were investigated for axillary buds and pollen. Buds that were 2 mm long were pretreated with chemical cryoprotectants, and a mixture of DMSO (dimethylsulphoxide) and glycerol was found to induce high survival rates (63%) after washing with MS (Murashige and Skoog, 1962) and 4 g.l-1 sucrose solution. Explants precultured in 1M sucrose showed increased tolerance (explant retained high survival rates of 80%) when desiccated to 20% moisture content fresh weight basis (fwb). Although pretreatments were successfully established, explants did not survive storage in liquid nitrogen indicating the need for further optimization of protocols. Pollen was successfully cryopreserved for 12 months with 23% survival rates. Applications and future research strategies of the developed protocols to Eucalyptus breeding programmes are discussed. / Thesis (M.Sc.)-University of Natal, Durban, 1998.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 638342 bytes, checksum: 8e72262147ec2f82c5e75db8ecf80969 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Somatic embryogenesis is an alternative technique of clonal micropropagation in Carica papaya, taking into account the problems generated by the conventional seed propagation and the absence of an effective method for early sex determination of this trioecious species. Considering the interest in large-scale seedlings production of papaya, liquid system and the use of immature zygotic embryos as explant source have proved to be more efficient for the somatic embryos generation in quickly way and in relatively high amount. However, tissue culture techniques are frequently associated with somaclonal variation ocorrence. Therefore, detection and selection of somaclones become necessary, and different methodologies have been employed for this purpose. In this perspective, this study adapted a protocol for mass production of somatic embryos in liquid medium and adopted cytometry and cytogenetics strategies for monitoring somaclonal variation in papaya. Firstly, immature zygotic embryos, which show a high embryogenic potential, were cultured in semi-solid médium, in the presence of 2,4-D, for friable embryogenic callus induction. The transfering of these callus to a liquid system, under the 2,4-D and BAP regulators action, allowed the increase of the cell aggregates proliferation. This auxin and cytokinin ratio was ideal for allowing only cell proliferation rather than differentiation of the suspensions in somatic embryos. These were converted and matured after inoculation of aggregates in liquid medium supplemented with ABA. In this condition, somatic embryos suspensions were obtained, in the early heart, torpedo, pre-cotyledonary and cotyledonary stages. Direct somatic embryogenesis, without callus formation, was also observed from the primary somatic embryos. Cotyledonary embryos were extracted and germinated on semi-solid medium containing GA3. About 80% of plantlets were regenerated and subjected to in vitro acclimatization. The potential of the flow cytometry technique could be demonstrated by verifying the ploidy level of regenerants and, thus, the evaluation of somaclonal variation occurrence. In this screening, diploid (88%), tetraploid (6%) and aneuploid (6%) seedlings were detected. For cytogenetic methodology, known diploid seedlings had their karyograms assembled, in which it did not observe any numerical or structural change. The association of flow cytometry and cytogenetics methodologies has proven effective for somaclonal variants characterization and the interest diploid seedlings selection for clonal propagation. Mainly, flow cytometry can be considered a viable technique for commercial purposes. / A embriogênese somática é uma técnica alternativa de micropropagação clonal em Carica papaya, tendo em vista os problemas gerados pela propagação convencional, via seminífera, e a ausência de um método eficaz para determinação sexual precoce dessa espécie trióica. Considerando o interesse pela produção em larga escala de plântulas do mamoeiro, o sistema líquido e o uso de embriões zigóticos imaturos como fonte de explante têm se mostrado mais eficientes para a geração de embriões somáticos de forma rápida e em quantidade relativamente elevada. Entretanto, técnicas de cultura de tecidos estão, frequentemente, associadas com a ocorrência de variação somaclonal. Portanto, a detecção e a eliminação de somaclones tornam-se necessárias, e diferentes metodologias têm sido empregadas para tal fim. Nesta perspectiva, este estudo adaptou um protocolo para produção em massa de embriões somáticos em meio líquido e adotou estratégias citométricas e citogenéticas para o monitoramento de variação somaclonal, em mamoeiro. Inicialmente, embriões zigóticos imaturos, que apresentam alto potencial embriogênico, foram cultivados em meio semi-sólido, na presença de 2,4-D, para indução de calos embriogênicos friáveis. A transferência desses calos para um sistema líquido, sob a ação dos reguladores 2,4-D e BAP, possibilitou a ampliação da proliferação de agregados celulares. Esta combinação de auxina e citocinina foi ideal por possibilitar somente a proliferação celular e não a diferenciação das suspensões em embriões somáticos. A conversão e a maturação destes ocorreram após a inoculação dos agregados em meio líquido suplementado com ABA. Nesta condição, foram obtidas suspensões de embriões somáticos, nos estágios cordiforme, torpedo, pré-cotiledonar e cotiledonar. Embriogênese somática direta, sem a formação de calos, também foi observada a partir dos embriões somáticos primários. Embriões no estágio cotiledonar foram extraídos e germinados em meio semi-sólido contendo GA3. Cerca de 80% de plântulas foram regeneradas e submetidas à aclimatização in vitro. A potencialidade da técnica de citometria de fluxo pôde ser demonstrada pela verificação do nível de ploidia dos regenerantes e, consequentemente, pela avaliação da ocorrência de variação somaclonal. Neste escaneamento, foram detectadas plântulas diplóides (88%), tetraplóides (6%) e aneuplóides (6%). Pela metodologia citogenética, plântulas conhecidamente diplóides tiveram seus cariogramas montados, nos quais não foi observada nenhuma alteração numérica ou estrutural. A associação de metodologias citométricas de fluxo e citogenéticas se mostrou eficaz para a caracterização de variantes somaclonais e para a seleção das plântulas diplóides de interesse para a propagação clonal. Principalmente, a citometria de fluxo pode ser considerada uma técnica viável para fins comerciais.

Orientador: Eliana Regina Forni Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:44:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrari_Fernanda_M.pdf: 4024604 bytes, checksum: fadaeedca82d057b615fd5bfb85b4706 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A cana-de-açúcar assumiu grande importância no cenário econômico mundial, não só pela produção de açúcar, mas também de etanol. Variedades modernas de cana-de-açúcar são essencialmente derivadas de hibridações feitas no início do século XX entre duas spécies de Saccharum, S. officinarum (2n = 80) e S. spontaneum (2n = 40-128), seguidas de retrocruzamentos dos híbridos com S. officinarum. Devido à poliploidia natural do gênero e a aneuploidia das variedades híbridas o estudo citogenético em cana-de-açúcar é complexo. O advento da citogenética molecular, mediante a técnica de hibridização de DNA in situ (FISH e GISH), vem propiciando avanços no entendimento da organização genômica de Saccharum e de gêneros relacionados. O objetivo deste trabalho foi realizar análises cromossômicas, de número e sítios de rDNA, nas duas principais espécies do gênero, S. officinarum e S. spontaneum, e em mais três importantes variedades brasileiras, RB72454, RB835486 e RB867515. Foi possível confirmar as identidades das espécies S. officinarum (2n = 80) e S. spontaneum (2n = 64) mediante a contagem do número cromossômico. Foram caracterizados, pela primeira vez, os números cromossômicos das variedades RB72454 e RB835486 (2n = 112) e na RB867515 (2n = 110). Através de técnicas de hibridização in situ fluorescente foram quantificados os sítios de rDNA 45S e 5S. As espécies S. officinarum e S. spontaneum, conforme já descrito na literatura, apresentaram 8 sítios de cada locus. As variedades RB72454 e RB835486 apresentaram 12 sítios de cada locus e a variedade RB867515 apresentou 11 sítios do rDNA 45S e 9 sítios do rDNA 5S. Os loci de rDNA 45S e 5S encontram-se em grupos homó(eó)logos distintos e por isso, esses dois genes caracterizam-se dois marcadores cromossômicos em Saccharum spp. A localização do locus de rDNA 45S em posição distinta nos cromossomos de S. officinarum (terminais) e S. spontaneum (intersticiais), possibilitou a quantificação da contribuição dessas espécies, no respectivo grupo homeólogo, para as variedades RB72454 e RB867515 / Abstract: Sugarcane has assumed an eminent position in the world economical scenario, not only for sugar, but also for ethanol production. Current sugarcane varieties are hybrids from initial interspecific crosses involving mainly two species of Saccharum, S. officinarum (2n = 80) and S. spontaneum (2n = 40-128), followed by backcrossing with S. officinarum. Due to the polyploidy nature of the genus Saccharum and the aneuploidy occurring in the interspecific hybrids, the cytogenetic study of sugarcane is complex. Moreover, chromosomes are small and morphologically similar. The molecular cytogenetics, with technique of DNA in situ hybridization (GISH and FISH), has provided advances in the understanding of genomic organization of this crop. The goal of this study was to realize chromosomal analysis, including chromosome number and sites of rDNA of two species, S. officinarum and S. spontaneum, and of three Brazilian varieties, RB72454, RB835486 and RB867515. The identities of the species S. officinarum (2n = 80) and S. spontaneum (2n = 64) were confirmed counting their chromosome numbers. We also counted the chromosome numbers of the varieties RB72454 and RB835486 (2n = 112) and RB867515 (2n = 110). Using FISH techniques, we could quantify the rDNA 45S and 5S sites of all the accesses. S. officinarum and S. spontaneum, as described in the literature, had 8 sites at each locus. For the varieties RB72454 and RB835486, 12 sites at each locus were detected and for RB867515, 11 sites of rDNA 45S and 9 sites of rDNA 5S were detected. The loci rDNA 45S and 5S are in different homo(eo)logues groups being thus characterized as two chromosomal markers for Saccharum spp. Since the rDNA 45S is located in different positions in S. officinarum (terminals) and S. spontaneum (interstitial), this marker could be applied in the quantification, in this homeologue group, of the chromosome numbers inherited from S. officinarum and S. spontaneum by the varieties RB72454, RB867515 / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal