Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T18:32:16Z : No. of bitstreams: 1 franco_emg_me_botfm.pdf: 1141908 bytes, checksum: 5c0af3cff17baf1fc15b5658534eb386 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi analisar plaquetas de pacientes do sexo masculino, portadores de aterosclerose obliterante periférica (GAOP) no estágio de claudicação intermitente, comparando-as com grupo controle de indivíduos normais (GC2) do mesmo sexo e faixa etária. As plaquetas foram estudadas do ponto de vista funcional, através da agregação plaquetária espontânea, e morfológico, através da ultra-estrutura e da morfometria plaquetária. Também foram analisadas plaquetas de indivíduos normais, de faixa etária inferior a 50 anos (GC1), para verificar eventual influência do fator idade na função plaquetária. Para a análise morfológica e morfométrica, sedimentos plaquetários foram processados para microscopia eletrônica de transmissão (MET) e varredura (MEV), segundo técnicas convencionais. Para a prova funcional, o plasma rico em plaquetas foi agitado em agregômetro de plaquetas, sem a adição de agonistas. Todos os indivíduos foram avaliados clínica e laboratorialmente. Com relação à função plaquetária, não houve diferença significativa na agregação plaquetária espontânea, entre os grupos analisados (p>0,05). A morfometria das plaquetas também não acusou diferença na forma das plaquetas, entre os grupos estudados (p>0,05). À MEV, as plaquetas dos indivíduos do grupo GC1 apresentaram freqüência de alterações na forma significativamente maior (42,70±4,54), quando comparadas às dos outros grupos, GC2 (32,31±6,22) e GAOP (37,76±8,91), p>0,05. A dosagem de fibrinogênio do grupo GAOP (262,90±47,86) revelou-se significativamente maior que do grupo GC1 (209,80±47,02), p>0,05; a dosagem de HDL colesterol do grupo GAOP (30,00±5,33) foi significativamente menor que do grupo GC2 (42,70±12,58), p>0,05. Nossos resultados mostram que as plaquetas circulantes dos pacientes portadores de AOP não... / This study aims to analyze the platelets of patients with peripheral obliterative atherosclerosis (POAG), at the intermittent claudication stage and comparing this platelets with the control group of healthy age and sex-matched subjects (CG2). The platelets were studied in relation to: their function, by the spontaneous platelet aggregation, and their morphology, by the platelet ultrastructure and morphometry. We also analyzed the platelets of younger healthy subjects aged less than 50 years (CG1) to find out a probable influence of age factor on platelet function. Morphological and morphometric analyses were performed using platelet pellets processed by transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM), according to conventional procedures. The functional test was performed using the platelet-rich plasma, mixed in platelet aggregometer without the addition of stimulating agents. All the healthy subjects and patients submitted to clinical and laboratory evaluations. Platelet function did not show significant difference in the studied groups (p>0.05). Platelet morphometry did not show difference in the analysed groups (p.>0.05). The CG1 platelets showed major alteractions in shape (42.70±4.54) than the other groups: CG2 (32.31±6.22) and POAG (37.76±8.91), p>0.05. The POAG fibrinogen determination (262.90±47.86) was significantly higher than CG1 group (209.80±47.02), p>0.05. The POAG HDL determination (30.00±5.33) was significantly higher than CG2 (42.70±12.58), p>0.05. Our results reveal: the POAG circulating platelets do not show functional or morphological alteractions when compared to the age-matched healthy subjects; and the freqüency of circulating platelet with alteractions in shape using SEM preparations were greater in CG1. This suggests an influence of the age factor on function platelet.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-08Bitstream added on 2014-06-13T20:29:38Z : No. of bitstreams: 1 padovani_jl_me_botfm.pdf: 451979 bytes, checksum: 3efa92ac18ae071ea9b4fd67de660268 (MD5) / Ministério da Saúde / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / Secretaria do Estado da Saúde de São Paulo / A hepatite C é uma doença crônica resultante da infecção por um vírus, o VHC, que infecta hepatócitos pela interação com um receptor de superfície celular, o CD81. No entanto, algumas proteínas de adesão já foram associadas com a entrada do vírus em hepatócitos e, têm sido relacionadas com a entrada de outros vírus em suas células alvo. O RNA do VHC já foi encontrado em plaquetas, as quais não expressam CD81, embora esta proteína esteja presente em megacariócitos. As plaquetas expressam determinantes antigênicos polimórficos em sua superfície denominados HPA. Alguns HPA residem em integrinas. Já foi demonstrada uma associação entre HPA-5b e a infecção pelo VHC. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de RNA do VHC em plaquetas coletadas de sangue periférico de 50 doadores de sangue com RT-PCR negativa para o vírus. Estas plaquetas foram infectadas com VHC in vitro e incubadas a 37ºC por 8-48 horas. RNA extraído foi utilizado para detectar a presença do vírus por RT-PCR e, avaliar as diferenças quantitativas na carga viral de acordo com o perfil HPA por qRT-PCR. Todas as plaquetas foram positivas para o RNA do VHC após a incubação com o vírus, o que demonstra que o vírus interage com as plaquetas in vitro. Foi observado um desvio no equilíbrio de Hardy-Weinberg no sistema HPA-1. A freqüência do alelo HPA-1b foi significativamente inferior (p <0,05) em plaquetas com carga viral acima de 18,4 UI/mL, sugerindo que o alelo b pode estar relacionado com menores níveis de carga viral / Hepatitis C is a chronic disease caused by a virus, the HCV, which usually infects hepatic cells by interaction with a cell surface receptor, a tetraspanin (CD81). However, adhesion proteins already were associated with the virus entry in hepatocytes and have been related with the entry of the others virus in their host cell, too. The HCV RNA already found in platelet but it doesn’t express CD81, although this protein is present in megakaryocytes. Platelets express polymorphic antigenic determinants on their surface, named HPA. Some HPA resides in transmembrane glycoprotein of integrin family. Preview study demonstrated an association between HPA -5b and HCV infection. The goal of this study was to determine the presence of HCV RNA in platelets collected from peripheral blood from 50 blood donors with RT-PCR negative for the virus. These platelets were infected in vitro with HCV and incubated at 37oC for 8-48 hours. RNA was then extracted and used for RTPCR and qRT-PCR to detect the presence of the virus and evaluate quantitative differences in viral load according with the HPA profile. All platelets were positive for HCV RNA after incubation with the virus, demonstrating that the virus interacts with the platelets in vitro. There was deviation from Hardy–Weinberg equilibrium in the HPA-1 system. The allele frequency of HPA-1b was found to be significantly lower (p<0.05) in platelet with viral load upper 18.4 UI/mL, suggesting that allele b could be related with lower viral load levels

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Landi_EvaldoPasquini_M.pdf: 7173102 bytes, checksum: d1e09c6e1cc9c87e2ca89c418ae6b1fd (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Introdução. A criopreservação dos concentrados de plaquetas pode ser de grande importância para a manutenção dos estoques de concentrados de plaquetas. No entanto, a criopreservação exige a adição e remoção do crioprotetor, o que toma a técnica trabalhosa e de custo elevado. Os concentrados de plaquetas "secas" se caracterizam por apresentarem pequeno conteúdo plasmático. A criopreservação destes concentrados eliminaria a necessidade de centrifugação para remoção do plasma excedente antes da adição do crioprotetor. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da coleta por aférese e da criopreservação dos concentrados de plaquetas "secas" e a atividade do dimetilsulfóxido (DMSO) 5% e 2% com inibidores da segunda resposta celular (ThromboSol@)como substâncias crioprotetoras para os concentrados de plaquetas "secas". Material e Métodos. Foram coletadas 28 unidades de concentrados de plaquetas convencionais e "secas", utilizando o mesmo procedimento de aférese para cada coleta. Amostras dos respectivos concentrados foram obtidas para análise microbiológica, contagem de leucócitos, contagem plaquetária, detenninação do volume plaquetário médio, do pH e dos níveis de glicose e DHL. Para avaliar a ocorrência de ativação plaquetária, foram estudados por citometria de fluxo, o complexo GPlb (CD42b), a integrina allbf33 (CD41), a p-selectina (CD62p) e a ligação da anexina V. A avaliação funcional foi realizada por meio da agregação plaquetária com difosfato de adenosina (ADP), epinefrina, colágeno e ácido aracdônico. Após o descongelamento, foram colhidas amostras para realização dos mesmos testes acima descritos. Os concentrados de plaquetas "secas" foram comparados aos concentrados de plaquetas convencionais por aférese e aos concentrados de plaquetas "secas" criopreservados, assim como o grupo de concentrados de plaquetas "secas" criopreservado com DMSO 5% foi comparado ao grupo criopreservado com ThromboSol@. Para análise estatística foi utilizado o teste de Wilcoxon pareado na comparação de bolsas do mesmo indivíduo,e não pareado, quando se tratava de indivíduos diferentes.Os resultados foram consideradossignificativos se p< 0,05. Resultados. Os concentrados de plaquetas "secas" apresentaram menor pH (p<0,001) e conteúdo de glicose (p<0,001), maiores níveis de DHL (p<0,001), maior porcentagem de plaquetas pselectina positivas (p<0,001) e menor resposta agregatória com ADP (p<0,001) e epinefrina (p<0,001). A criopreservação ocasionou alterações morfológicas nas plaquetas e foi associada à maior ocorrência de lise, ativação e diminuição da resposta funcional. A criopreservação com ThromboSol@foi associada a maiores níveis de DHL (p<0,001) e à maior ligação da anexina V (p=0,005), além de menor porcentagem de plaquetas CD42 positivas (p=0,01) e menor resposta agregatória ao colágeno (p=0,005). Conclusão. Este estudo sugere que os concentrados de plaquetas "secas" devem ser prontamente criopreservados após a coleta para evitar a redução do pH e a ocorrência de ativação plaquetária. A utilização de DMSO 5% ofereceu um efeito crioprotetor melhor ao do ThromboSol@ / Abstract: Introduction. Longterm cryopreservationand banking of platelet concentrates (PCs) would provide a better storage management. Howeve r, cryopreservation requires the addition and posterior removal of a cryoprotective, making the procedure cumbersome and expensive. Ory PCs would provide a plasma reduced component and fresh dry PCs could be cryopreserved in a dry condition, avoiding the centrifugation required to remove excess plasma before adding the cryoprotective. The purpose of this study was to evaluate the effects of collecting and cryopreserving dry PCs and the activityof dymethyl sulfoxide (OMSO)5% and of OMSO2% plus second-messenger effector (ThromboSofTM)as cryopreserving solution for dry PCs. Material and Methods. 80th standard and dry PCs were collected in the same apheresis procedure and samples were obtained for microbiologic control, leukocyte and platelet counts and mean platelet volume (MPV),pH, glucose and LOHlevels determination.Activationwas examined by flow cytometry using monoclonal antibodies directed against GPlb complex (CO42), allb~3 integrin (CO41) and pselectin (CO62p),alongwith annexin binding assay. Plateletfunction was assessed by aggregation using adenosine diphosphate (AOP), collagen and arachidonic acid as agonists. Ory PCs were compared to apheresis standard PCs and to cryopreserved dry PCs. The cryoprotective effect of OMSO 5% was also compared to ThromboSolTM.Statistical analysis was performed by using a Wilcoxon signed rank test to test for significant differences between samplesfrom the same donor and a . Wilcoxon ranksum test between samples from distinct donors. A p value < 0.05 was considered significant. Results. Ory PCs presented a significantly reduced>pH (p<O.OO1) and glucose (p<O.OO1), increased LDH levels (p<O.OO1) and CD62p expression (p<O.OO1),and diminished aggregation response to ADP (p<O.OO1)and epinephrine (p<O.OO1).Platelet cryopreservation was associated to platelet Iyses, activation and loss of function. Dry PCs cryopreserved with ThramboSolTM were associated to higher LDH levels (p<O.OO1)and annexin biding (p=O,OO5),and to lower CD42 positive platelets (p=O.O1)and aggregation response to collagen as agonist (p=O.OO5).Conclusion. This study suggest that dry PCs should be rapidly frazen after collection to avoid pH fali and platelet activation. In addition, it was observed that DMSO 5% demonstrated better performance than ThromboSolTM cryopreserving dry PCs / Mestrado / Clinica Medica / Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-26Bitstream added on 2014-08-13T18:01:14Z : No. of bitstreams: 1 000734413.pdf: 1931480 bytes, checksum: 03ac87da72efc421641409ff157d3184 (MD5) / As plaquetas são um reservatório natural de diversos mediadores biológicos e, uma vez ativadas, expressam fatores de crescimento pró e anti-angiogênicos, quimiocinas e monoaminas, modulando a ativação e manutenção dos processos inflamatório e de reparo. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o impacto do tratamento com drogas antiplaquetárias, aspirina (Asp) e clopidogrel (Clop), sobre a doença periodontal e o processo de reparação dos tecidos periodontais após indução de periodontite experimental em ratos. Para a avaliação do processo inflamatório foram realizadas análise microscópica, análise da expressão das quimiocinas CXCL4 e CCL5 por ELISA e da atividade de mieloperoxidase (MPO). Para avaliação do reparo dos tecidos periodontais, foram realizadas análise microscópica, análise da expressão de CXCL12, CXCL4, CCL5 e PDGF por ELISA, contagem de osteoclastos e vasos sanguíneos através de reações de imunohistoquímica e caracterização das células mesenquimais indiferenciadas por imunohistoquímica para CD 271 e imunofluorescência de dupla marcação utilizando CD 271 associado ao CD45, KI67 e TUNEL. Células mesenquimais indiferenciadas derivadas da medula óssea de humanos foram utilizadas in vitro para avaliação da proliferação celular por imunocitofluorescência. Três dias após a instalação da ligadura, verificou-se que o tratamento com as drogas antiplaquetárias abreviou o processo inflamatório, observado através dos aspectos microscópicos, da redução da atividade da enzima mieloperoxidase (p<0.001), e queda da expressão de CXCL4 (p<0.05), entretanto o tratamento com Clop de forma mais acentuada que o da Asp. Após retirada da ligadura, o tratamento com Clop acelerou o processo de reparo através da redução significativa da expressão de CXCL12, CXCL4, PDGF, número de vasos sanguíneos e osteoclastos; por outro lado, o tratamento com Asp... / Platelets are a natural reservoir of several biological mediators and once activated, express growth factors, pro- and anti-angiogenic factors, chemokines and monoamines modulating the activation and maintenance of the inflammatory and repair process. The aim of this study was to evaluate the impact of antiplatelet drugs, aspirin (Asp) and clopidogrel (Clop) on periodontal disease and the repair of periodontal tissues after induction of experimental periodontitis in rats. For the evaluation of the inflammatory process, microscopic evaluation, analysis of the expression of the chemokines CXCL4 and CCL5 by ELISA and myeloperoxidase activity (MPO) were realized. To evaluate periodontal tissue repair we performed microscopic examination, analysis of the expression of CXCL12, CXCL4, CCL5 and PDGF by ELISA, and blood vessels and osteoclast count by immunohistochemistry. Also, characterization of undifferentiated mesenchymal stem cells by immunohistochemical staining for CD 271 (stem cell marker) and immunofluorescence double labeling using CD 271 associated with CD45, Ki67 and TUNEL were realized. Undifferentiated mesenchymal stem cells derived from human bone marrow were used for in vitro evaluation of cell proliferation by immunocitofluorescence. Three days after ligature placement, we found that treatment with antiplatelet drugs abbreviated the inflammatory process observed by the microscopic analysis, reduction of myeloperoxidase activity (p <0.001) and decreased the expression of CXCL4 (p <0.05), but treatment with Clop more pronounced than Asp. After removal of the ligature, Clop treatment accelerated the repair process by significantly reducing the expression of CXCL12, CXCL4, PDGF number of blood vessels and osteoclasts, on the other hand, treatment with Asp only showed significant effects in reducing the expression of CXCL12 and CXCL4. In turn, Clop treatment increased the number of osteoblasts...

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-03-04T19:19:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305017.pdf: 1234167 bytes, checksum: 2818a0c83b8dc9366e881cc4f0adaab6 (MD5) / A agregação plaquetária ocorre fisiologicamente para ocluir lesões em vasos ou em condições anormais como na disfunção endotelial ou na sepse. Diversos estímulos fisiológicos podem ativar as plaquetas tanto in vivo quanto in vitro. Alguns destes agentes agregantes são colágeno, ADP, 5-HT, trombina, TxA2 entre outros. O óxido nítrico, assim como a prostaglandina I2 (prostaciclina), atua como inibidor fisiológico da agregação plaquetária. O NO atua de diversas maneiras sobre a agregação plaquetária, desde a mobilização de cálcio até a inibição de receptores plaquetários. Um dos mecanismos de ação do NO na inibição da agregação plaquetária é através da ativação da enzima guanilato ciclase solúvel, e conseqüente formação do GMPc. O aumento de GMPc intracelular diminui as concentrações de cálcio intracelular, contribuindo para a inibição plaquetária. Neste estudo, foi avaliado se o NO apresentaria efeito inibitório na agregação plaquetária em ratos mesmo após a sua remoção e se esta inibição seria duradoura. A agregação plaquetária foi induzida por ADP ou colágeno em plasma rico em plaquetas de ratos, e como ferramentas farmacológicas para estudar o efeito do NO, foram usados o GTN (trinitrato de glicerila) e o GSNO (S-nitrosoglutationa), ambos doadores de NO. O inibidor da enzima guanilato ciclase solúvel ODQ foi utilizado para verificar a participação desta enzima na inibição da agregação plaquetária. O presente estudo mostrou que distintos doadores de NO causam perfis diferentes de inibição da agregação plaquetária e que este efeito agudo parece envolver ativação da guanilato ciclase. Outro achado importante e inédito foi que este efeito anti-agregante do NO é duradouro e que, talvez, possa ser explicado por S-nitrosilação de proteínas presentes em plaquetas. Por fim, um choque endotoxêmico induzido por endotoxina bacteriana (LPS) diminuiu o número de plaquetas circulantes e a agregação plaquetária. / Platelet aggregation occurs physiologically to occlude vessels lesions or abnormal conditions as endothelial dysfunction or sepsis. Several physiological stimuli can activate platelets in vivo and in vitro. Some of these aggregating agents are collagen, ADP, 5-HT, thrombin, TxA2 and others. Nitric oxide (NO) and prostaglandin I2 (prostacyclin) work as physiological platelet aggregation inhibitors. NO acts on platelet aggregation in several manners from mobilization of calcium to platelet receptors inhibition. One NO mechanism of action in inhibiting platelet aggregation is through the soluble guanylate cyclase enzyme activation and subsequent cGMP formation. Increased cGMP reduces intracellular calcium concentrations contributing to platelet inhibition. In this study, it was evaluated whether NO would present inhibitory effect in platelet aggregation even after its removal and whether that effect would last. Platelet aggregation was induced by ADP or collagen in platelet rich plasma from rats and as pharmacological tools to study the NO effect, we used the GTN (glyceryl trinitrate) and GSNO (S-nitrosoglutathione), both NO donors. The inhibitor of soluble guanylate cyclase enzyme (ODQ) was used to verify the involvement of this enzyme in the platelet aggregation inhibition. The present study showed that NO donors cause different profiles of platelet aggregation inhibition and this effect seems to involve acute activation of guanylate cyclase. Another important finding was that this unprecedented and anti-aggregating effect of NO is sustained and perhaps can be explained by S-nitrosylation of proteins present in platelets. Finally, the endotoxemic shock induced by bacterial endotoxin (LPS) decreased the number of circulating platelets and platelet aggregation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T00:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 204203.pdf: 259703 bytes, checksum: b99946da0b60552661630267cbaa1f75 (MD5) / Este trabalho avalia a ação de diferentes concentrações de PRP aplicadas em cultura celular da linhagem de osteoblasto humanos hFOB1.19 (American Tissue Culture Collection). A metodologia envolveu o teste proliferativo do ensaio do brometo de 3-[4,4-dimetiltiazol-2-4l]-2,5-difeniltetrazolio (MTT). O plasma rico em plaquetas (PRP) obtido foi processado e diluído em meio de cultura a 50%, 25%, 12,5% e 6,125%. As concentrações de soro fetal bovino (SFB) foram de 0% e 10% em meio de cultura. A proliferação foi lida por densidade óptica após um intervalo de tempo de 96 h em leitor de Elisa. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que 50% de PRP adicionado ao meio de cultura para osteoblastos humanos da linhagem hFOB1.19, induziu a melhor resposta proliferativa. As concentrações de 12,5% e 6,125% de PRP não mostraram diferença estatisticamente significativa. Verificou-se que a proliferação celular obtida pelo PRP a 50% foi mais significativa, em cultura com e sem SFB, comparada com as outras diluições realizadas. Conclui-se que o PRP promove proliferação de osteoblastos e indica que não é necessário soro para indução da proliferação de osteoblastos mediada pelo PRP, sugerindo o seu uso clinicamente para otimizar procedimentos de enxertia óssea na implantodontia.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T16:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T02:01:47Z : No. of bitstreams: 1 188702.pdf: 2472049 bytes, checksum: a7b577ad2fbf872ceb60b007507037c3 (MD5) / Pesquisa que objetiva analisar a formação de uma rede de fibrina do plasma rico em plaquetas (PRP) usando-se para a sua ativação apenas uma solução estéril de cloreto de cálcio a 10% e verificar se a temperatura constante de 37°C pode fornecer à técnica uma maior previsibilidade quanto ao tempo necessário para a coagulação. Os resultados mostraram que o tempo necessário para se promover a formação do coágulo variou aproximadamente de 2 a 10 min nos pacientes estudados após a mistura do (PRP) ao cloreto de cálcio a 10%, quanto se utiliza um aquecimento em banho-maria a 37°C. Concluiu-se que apesar de se obter um tempo maior para a formação da rede de fibrina com a mistura do cloreto de cálcio em relação à trombina, este tempo pode ser administrado pelo cirurgião.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T02:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 188845.pdf: 1608971 bytes, checksum: 13b2314a8641601163a13b498b027ac1 (MD5) / Este trabalho avalia a ação de três tipos de Plasma rico em plaquetas (PRP): o puro que se encontra dentro da bolsa do concentrado plaquetário; o ativado que corresponde ao puro misturado com cloreto de cálcio a 10%; e o geleificado que corresponde a mistura ativada incorporada de osso particulado após a espera do tempo de geleificação. Estes tipos de PRP foram aplicados sobre a proliferação de células "in vitro" de linhagem fibroblástica NIH/3T3. Para o desenvolvimento desta metodologia foi realizado a partir de uma garrafa de cultura de células o plaqueamento, sobre estas subculturas foi realizado o teste de citotoxicidade que estabeleceu a concentração de 10 ng, e por fim o teste de proliferação, nesta concentração, comparado com SFB a 2% e 5% foi significativo para o grupo do PRP ativado.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-17Bitstream added on 2014-06-13T20:17:37Z : No. of bitstreams: 1 costa_ccmr_me_botfmvz.pdf: 292935 bytes, checksum: 632cc3655cad59e9e602b2040d94e522 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O concentrado de plaquetas é um hemocomponente importante para a transfusão de grandes quantidades de plaquetas. Durante a estocagem, as plaquetas sofrem lesões que devem ser analisadas por meio de testes laboratoriais. O objetivo do presente estudo foi avaliar as qualidades físicas, químicas, microbiológicas, estruturais e funcionais plaquetárias em concentrados de plaquetas caninos estocados durante 5 e 7 dias. Foram realizadas contagem de plaquetas, leucócitos e hemácias por unidade, mensuração do pH, glicose, avaliação do swirling, análise microbiológica, avaliação da agregação plaquetária e da expressão da GPIIbIIIa pela citometria de fluxo. As análises foram realizadas logo após a centrifugação, e no quinto (grupo I) e sétimo (grupo II) dias de estocagem dos concentrados de plaquetas obtidos de 22 cães hígidos. Todas as bolsas foram negativas para o isolamento de microorganismos. Houve diminuição significativa nas contagens de plaquetas e leucócitos, pH, glicose e swirling nos dois grupos. Ocorreu diminuição na resposta agregatória nos dois grupos, com o uso isolado e associado de ADP e epinefrina. Os anticorpos CD41 e CD61 apresentaram alta porcentagem de fluorescência em todos os momentos, e não houve variação significativa na média de intensidade de fluorescência das plaquetas durante a estocagem. Conclui-se que, mantida a esterilidade microbiológica, os concentrados de plaquetas caninas podem ser estocados por até 7 dias, no entanto, há uma maior perda da viabilidade plaquetária e qualidade dos concentrados quando comparados ao grupo armazenado durante 5 dias. Houve perda funcional das plaquetas durante a estocagem pela redução da agregação plaquetária. Os anticorpos CD41 e CD61 podem ser utilizados na avaliação da GPIIbIIIa de plaquetas caninas estocadas durante os períodos avaliados / Platelet concentrate is an important blood component for platelet transfusion. During storage, platelets undergo lesions that should be evaluated by laboratory assays. The aim of this study was to evaluate the physical, chemical, microbiological, structural and functional platelet qualities in canine platelet concentrate stored for 5 and 7 days. Platelet, leukocytes and erythrocytes concentrations per unit, pH and glucose measurements, swirling observation, microbiological analysis, assessment of platelet agregation and expression of GPIIbIIIa by flow cytometry were performed. Analyses were performed after centrifugation, and the fifth (group I) and seventh (group II) days of platelet concentrate storage obtained from 22 healthy dogs. All platelet concentrate bags were negative for microorganisms isolation. Platelet and leukocytes concentrations, pH, glucose, and swirling decreased significantly during storage, in both groups. A significant reduction in aggregatory response was detected in both groups, in the presence of ADP, epinephrine or both simultaneously. CD41 and CD61 antibodies showed high fluorescence at all times, and no significant variation in mean fluorescence intensity during storage. In conclusion, canine platelet concentrates should be stored for 5 days, however, can be stored for up to 7 days with greater loss of viability and quality of bags during this period. There was functional loss observed by the reduction of platelet aggregation during storage in both groups. CD41 and CD61 antibodies can be used to assess GPIIbIIIa in canine platelets stored during the evaluated period

Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T20:19:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morganti_RafaelPrada_D.pdf: 740260 bytes, checksum: c6b0779cd2f8af7471aefb0da921a0a6 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A sepsis é a segunda causa de morte em pacientes internados em unidades de tratamento intensivo não coronariano. Pacientes com sepsis apresentam anormalidades plaquetárias como trombocitopenia, prolongamento do tempo de coagulação, coagulação intravascular disseminada, trombose microvascular maciça e sangramentos. Entretanto, os mecanismos envolvidos nestas alterações plaquetárias ainda são mal compreendidos. O objetivo deste trabalho foi investigar as ações do lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, e de enterotoxinas de Staphylococcus aureus (SEA e SEB), na adesão e na agregação de plaquetas humanas, bem como os mecanismos envolvidos nesses fenômenos. As plaquetas foram expostas ao LPS, SEA ou SEB em diferentes concentrações e tempos de incubação para avaliação in vitro da adesão ou agregação. Além disso, realizou-se experimentos para verificar o papel do óxido nítrico (NO) e de espécies reativas de oxigênio nas ações induzidas pelo LPS, SEA e SEB, assim como a sinalização intracelular (mobilização de Ca+2) e ativação do receptor do fibrinogênio glicoproteína IIb/IIIa (GPIIb/IIIa). A incubação de plaquetas com LPS, SEA e SEB por períodos 5 a 120 min inibiu a adesão espontânea das plaquetas ao fibrinogênio, sendo esta inibição dependente da concentração e do tempo de incubação. A adesão de plaquetas ativadas com trombina também foi inibida após incubação com LPS, SEA ou SEB por 5 a 120 min. Porém, a inibição em plaquetas ativadas foi menor quando comparada à inibição da adesão espontânea. Esta inibição ocorreu de forma independente de aumentos intraplaquetários de GMPc e AMPc. Com o objetivo de se entender o mecanismo de ação envolvido na inibição da adesão plaquetária pelo LPS, SEA e SEB as plaquetas foram pré-tratadas com os seguintes agentes farmacológicos: superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido), polietilino glicol superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido intracelular), polietileno glicol catalase (degrada peróxido de hidrogênio), puromicina e ciclohexamida (inibidores de síntese protéica). Em conjunto, nossos dados mostraram que o efeito inibitório do LPS não envolve aumento de anion superóxido (O2 -) e de peróxido de hidrogênio (H2O2), nem a formação de proteínas neo-sintetizadas, e alterações na ativação da GPIIb/IIIa. Por outro lado, o LPS reduziu significativamente o influxo externo de cálcio, sem afetar a mobilização intracelular deste cátion. Em relação às enterotoxinas estafilocócicas, a síntese de neo-proteínas e aumento de O2 - não tem papel direto sobre a inibição plaquetária, embora um aumento nas concentrações de H2O2 intracelulares esteja ligado a esta resposta. Em conclusão, a exposição ao LPS inibiu a adesão a agregação plaquetária, dosee tempo-dependente, inibindo a influxo de cálcio; da mesma forma, a incubação com SEA ou SEB inibiu a adesão de plaquetas ao fibrinogênio, por um mecanismo que envolveria a formação de H2O2 / Abstract: Sepsis is the second major cause of death in intensive care unit. Septic patients show abnormalities in platelet like thrombocytopenia, prolongation in coagulation time, disseminated intravascular coagulation, deep venous thrombosis and bleedings. However, the mechanisms involved in these platelet alterations are not totally clear. The objective of this work was investigate the actions of lipopolysaccharide (LPS) from E. coli and enterotoxins from Staphylococcus aureus (SEA and SEB), in human platelet adhesion and aggregation, likewise the mechanism involved in these phenomenon. The platelets were exposed to LPS, SEA or SEB in different concentrations and times of incubation in vitro evaluations of adhesion and aggregation. Moreover, experiments to elucidate the participation of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species in the actions of LPS, SEA and SEB, likewise the intracellular sinalization (calcium mobilization) and activation of fibrinogen receptor glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa) were carry out. The platelets incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min, inhibited the spontaneous adhesion to fibrinogen and this inhibition was dependent of concentration and time of incubation. The thrombin activated adhesion of platelets was concentration and time dependently also inhibited after incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min. However, the activated platelets inhibition was lower when compared to spontaneous adhesion inhibition. This inhibition was not dependent of intracellular levels increase of cGMP and cAMP. To understand the mechanism of action involved in the platelet adhesion inhibition by LPS, SEA and SEB, the platelets were previously treated with pharmacological agents like: superoxide dismutase (superoxide anion scavenger), superoxide dismutase-polyethylene glycol (superoxide anion intracellular scavenger), catalase-polyethylene glycol (Hydrogen peroxide intracellular scavenger), puromycin and cyclohexamide (protein synthesis inhibitors). Our data suggests that the inhibitory effect of LPS neither involve superoxide anion (O2 -) and hydrogen peroxide (H2O2) increase, nor the formation of neo-proteins, and alterations on activation of glycoprotein IIb/IIIa. In contrast, LPS significantly reduce the external calcium influx, without effecting calcium internal mobilization. With regard to staphylococcal enterotoxin, the protein synthesis and rise in O2 - do not play a role in the platelet inhibition; however the increase of H2O2 intracellular concentration was involved in this response. In conclusion, platelet aggregation and adhesion was inhibited after addition of LPS, concentration and time-dependently, inhibiting calcium influx; similary, incubation with SEA or SEB inhibited platelets adhesion to fibrinogen, by a mechanism involving H2O2 formation / Doutorado / Doutor em Farmacologia