Orientador : Jose Luiz Donato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:28:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Couto_LeygeElviraThomazdo_M.pdf: 3970846 bytes, checksum: c08788a74d0575295c7c7d5cc7a11a49 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A estreptoquinase é uma proteína de 47 kDa secretada pelas bactérias Streptococcus do grupo ß-hemolítico. A estreptoquinase ativa o plasminogênio do soro humano formando um complexo capaz de converter moléculas de plasminogênio em plasmina. O nosso objetivo foi avaliar cinco formulações comerciais de estreptoquinase disponíveis no Brasil, comparando as suas capacidades in vitro de induzir a formação do coágulo de euglobulina e de ativar o plasminogênio in vitro. O tempo de lise da euglobulina foi analisado em microplaca na presença de: trombina humana e estreptoquinase. A formação do coágulo foi iniciada com a adição da euglobulina plasmática. A turbidez foi medida a 340 nm durante 30 s. No teste de lise da euglobulina a StreptaseTMapresentou uma maior atividade fibrinolítica, sendo usada como formulação de referência. As formulações UnitinaseTM e SolustrepTM foram as menos ativas, com cerca de 50% da atividade observada na formulação de referência. A ativação do plasminogênio foi analisadausando o substratoS-2251TM específicopara plasmina.Todas as estreptoquinases testadas ativaram o plasminogênio, observando diferenças significantes. StreptaseTM(15,13 kU/L; M ± D.P., n=14) e StreptonaseTM (18,94 ± 0,92 kU/L, n=16) foram as formulações mais ativas, enquanto UnitinaseTM (6,19 ± 0,48 kU/L, n=12) e StrekTM(6,57 ± 0,65 kU/L, n=14) foram as menos ativas. SolustrepTM (10,66 ± 0,54 kU/L, n=15) apresentou uma atividade intermediária. As variações entre as diferentes formulações, em ambos os testes citados acima, apresentaram correlação com os resultados densitométricos após separação das proteínas através da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDSPAGE). Nós concluímos que as formulações testadas apresentaram uma variação significativa na atividade in vitro. A relevância clínica destas diferenças ainda precisa ser estabelecida / Abstract: Streptokinase, a 47 kDa protein secreted by most group A, C and G ß-hemolytic streptococci, activates human plasminogen to form an active complex capable of converting other plasminogen molecules to plasmin. The aim of this study by was to evaluate five commercially available streptokinase formulations in Brazil by comparing their activity in euglobulin clot formation and plasminogen activation. The euglobulin Iysis time was evaluated in 96-well microtiter plates. Initially, human thrombin and streptokinase were placed in individual wells and clot formation was initiated by the addition of plasma euglobulin. The increase in turbidity was measured at 340 nm every 30 s. Plasminogen activation was assayed using the plasmin specific substrate S-2251TM.StreptaseTMwas used as the reference formulation and showed the strongest fibrinolytic activity in the euglobulin Iysis test. The formulations UnitinaseTM and SolustrepTM were the least active, with about 50% of the activity of the reference formulation. Ali streptokinases tested activated plasminogen but there were significant differences in their activities. StreptaseTM(15.13 ±1.00 kU/L; mean ± S.E.M., n=14) and StreptonaseTM(18.94 ± 0.92 kU/L,n=16)werethe mostactiveformulationswhile UnitinaseTM(6.19 ± 0.48. kU/L, n=12) and StrekTM(6.57 ± 0.65 kU/L, n=14) were the weakest; SolustrepTM (10.66 ± 0.54 kU/L, n=15) showed intermediate activity. The variations in the activites of the different formulations in the euglobulin Iysis test and in the hydrolysis of the chromogenic substrate were closely correlated with their electrophoretic (SDS-PAGE) profiles. We conclude that the streptokinase formulations examined varied significantly in their activity ín vítro. The clinical implications of these differences remain to be established / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Luiz Francisco Prata / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T06:42:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_MariaIsabelFranchiVasconcelos_D.pdf: 4473200 bytes, checksum: 688f2de3ab14fc8ca5e1fc6ca43530e4 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O leite esterilizado UHT pode sofrer alterações importantes durante o armazenamento, limitando seu período de conservação. Essas alterações são atribuídas à ação de proteases produzidas por bactérias psicrotróficas ou à plasmina. Poucas pesquisas tem sido realizadas, no Brasil, dificultando a identificação correta do problema. Foram verificadas as condições proteolíticas e as alterações nas frações da caseína do leite UHT adquirido no comércio. Foram realizados, também, experimentos com adição de 7 tratamentos diferentes durante 180 dias de manutenção a temperatura ambiente, empregando metodologia padronizada, com densitogramas obtidos através de eletroforese (PAGE) da caseína total. Os resultados mostraram que a diálise não foi eficaz como método alternativo de fracionamento, na avaliação da atividade proteolítica. No entanto, o método da ninidrina ácida mostrou-se eficiente para monitorar alterações na K¬caseína. A adição de citrato de sódio 0,025% protegeu o leite de geleificação pela ação da plasmina, embora os densitogramas tenham mostrado alterações nas frações de caseína. Não foi observado geleificação em todos os outros tratamentos, apesar de se observar evolução da proteólise sobre a caseína evidenciada pelas variações de absorbância e pelos respectivos densitogramas. O leite cru refrigerado apresentou qualidade microbiológica adequada, com contagens menores nas análises efetuadas durante o período de junho e, contagens maiores para as amostras analisadas em dezembro, possibilitando um reconhecimento das condições microbiológicas das regiões de Campinas e Botucatu / Abstract: Alterations occurred during the storage of UHT sterilised milk limit its shelf-life. These alterations are probable due to proteinases coming from psychrotrofic bacteria or to plasmin. The lack of research on this subject, in Brazil, difficult the correct identification of the problem. In the present work it was determined the proteolitic conditions and casein alterations of UHT milk usually found in the market. In addition, it were also performed experiments during 180 days of storage, with 7 different treatments, at room temperature employing standardised methodology through whole casein electrophoresis (PAGE). The results showed that the dialysis did not work as an alternative method for the fractionation to evaluate the proteolytic activity. However, the acid nihydrin method was shown to be a efficient way to control the K-casein alterations. The addition of sodium citrate (0.025%) avoided the occurrence of milk gelation due to the plasmin action, although the densitograms showed alterations in the casein fractions. It was not observed gelation with all other treatments, in spite of the evolution of the proteolitic activity on the casein, evidenced by absorbance variation and respective densitograms. The raw milk showed adequate microbiological quality. The bacterial counts were lower in June and higher in December allowing the determination of the microbiological conditions in Campinas and Botucatu areas / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Luciano Puzer / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2013

Hipotesis: La penetración del fibrinógeno en pared podría ser la causa desencadenante de una activación del sistema fibrinolítico con incremento de la capacidad generadora de plasmina y consecuentemente de la activación y/o estimulación del sistema de las metaloproteasas. Objetivos: Estudiar la influencia del fibrinógeno en el funcionalismo enzimático de la pared arterial. Comprobar si la capacidad generadora de plasmina de la pared arterial regula la activación de las MMPs. Determinar si hay diferencias funcionales de estos sistemas enzimáticos en el desarrollo de la lesión arteriosclerótica en carótida, aorta y femoral y la existencia de posibles marcadores plasmáticos. Relación de factores de riesgo con la patología de los sectores arteriales estudiados.Material y Métodos: El grupo de estudio está formado por 127 pacientes Las piezas proceden de : Sector de bifurcación carotídea. Sector aorto-ilíaco. Sector femoro-poplíteo. Se realizo extracción de sangre para determinar: células blancas; fibrinógeno von-clauss y antigénico, t-PA, u-PA y PAI. Del tejido: inmunohistoquímica del fibrinógeno; estudio bioquímico: actividad fibrinolítica de intima y adventicia, capacidad generadora de plasmina de la pared arterial, t-PA, u-PA, PAI, MMPs 2 y 9 por zimografía y "Western blot". Resultados y Discusión: Nuestros datos sugieren una participación importante del sistema fibrinolítico en la evolución de la lesión, con una máxima actividad en las lesiones moderadas. Hay diferencias del sistema fibrinolítico de los tres sectores, lo que contrasta con trabajos que los incluyen sin distinción entre ellos, o utilizan muestras control de diferente sector del que estudian la patología. La CGP difiere según el sector: en carótida disminuye, en aorta no se modifica y en femoral se incrementa. La MMP-9 estaría implicada en la patología a nivel de aorta y carótida favoreciendo la degradación de la matriz extracelular y al menos la forma activa de este enzima no parecería estarlo en la arteriosclerosis periférica. La MMP-2 parece influir en la evolución de la lesión arteriosclerótica en todos los sectores estudiados, favoreciendo la degradación de la matriz extracelular y la migración y proliferación de células musculares lisas. Desde las lesiones iniciales hay una capa de fibrina que recubre el endotelio arterial, los tres sectores muestran una disminución del área y la penetración al aumentar la lesión. En arterias femorales hay una disminución significativa de la concentración plasmática de PAI-1 al aumentar la lesión. Hay un incremento significativo de los niveles de dímero D en carótida .En pacientes de femoral los niveles plasmáticos no se modifican pero desde las lesiones iniciales estas concentraciones están en valores patológicos. Proponemos el estudio de un índice DD/PAI como marcador de posible utilidad clínica y de la existencia y gravedad de la arteriosclerosis periférica. Conclusiones: Las carótidas aorta y femoral presentan patrones diferentes del comportamiento del sistema fibrinolítico, del sistema de las MMPs y de la penetración del fibrinógeno en la evolución del ateroma, que marcan un perfil patológico característico para cada sector. No hemos encontrado una correlación generalizada entre fibrinógeno plasmático y fibrinógeno de pared, ni de ninguno de ellos con la fibrinolísis y las MMPs de pared, datos que apoyan el concepto del que el fibrinógeno es más bien "marcador" de riesgo y gravedad de la lesión ateromatosa que no un elemento patogénico. El comportamiento de las MMPs es independiente de la capacidad generadora de plasmina, pero la u-PA y el PAI presentan algunas correlaciones con ellas en lesiones avanzadas. Proponemos un índice DD/PAI como marcador plasmático de la arteriosclerosis femoral y de su gravedad. La incidencia de los factores de riesgo es diferente en los pacientes de los tres sectores arteriales. Globalmente la presencia mayor fue de la hiperglicemia (63 %) y la menor de la hipercolesterolemia (28 %).

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T20:58:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sant'Ana_ChristinaMariade_M.pdf: 302187 bytes, checksum: 422061925f0c5378a445c566afe71b75 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O envenenamento botrópico leva ao desenvolvimento de eventos como necrose, hemorragia e distúrbios da coagulação, gerando um quadro fisiopatológico de grande complexicidade. O trabalho de Lôbo de Araújo et al. de 1998 descreveu uma proteína de cadeia polipeptídica simples (PII1A), a qual apresentou atividade enzimática tipo esterolítica, proteína esta, proveniente do veneno da Bothrops lanceolatus, uma serpente habitante da ilha da Martinica, no Caribe. A imunodifusão e a imunoeletroforese apresentaram uma linha simples de imunoprecipitado. A fração em questão ainda hidrolisou as cadeias a e b do fibrinogênio, o que levou a classificar esta proteína como uma enzima fibrino(geno)lítica. No presente trabalho, nos propusemos a dar continuidade ao estudo desta proteína parcialmente purificada e caracterizada e investigar sua atividade como ativadora de plasminogênio ou portadora de atividade fibrinolítica, assim a atividade plasmina símile foi determinada pela ação da proteína diretamente sobre substrato cromogênico específico (S-2251ä), estando de acordo com achados publicados por Lôbo de Araújo et al (1998) e que revelou também discreta atividade ativadora de plasminogênio, quando compara-se incubação na presença e ausência deste. Determinamos 71% da seqüência de aminoácidos da PII1A por espectrometria de massa ¿ Q-tof, este método revelou um peso molecular de 28.360 kDa. A análise da seqüência em base de dados mostrou homologia com outras proteínas se serpentes e com enzimas como tripsina e fatores da cascata de coagulação / Abstract: The main symptoms following bothropic envenoming are necroses, hemorrhage and coagulopathies, originating a characteristic and complex phisiopathology. The work of Lôbo de Araújo et al. (1998) described a single polipeptide chain protein (PII-1A) purified from Bothrops lanceolatus venom, a snake inhabitant of the Martinica island. The immunodiffusion and immunoeletrophoresis analysis showed a single immunoprecipitin line. This protein was characterized as a fibrino(geno)lytic enzyme since was able to hydrolyze the a and b chains of fibrinogen. Using synthetic substrates, the authors demonstrated a strong sterolytic activity against p-TAME. In the present work we continue to study this protein (PII-1A) investigating its activity to activate plasminogen or to present a direct fibrinolytic activity using S-2251ä substrate. The determination of its partial sequence, including N-terminal, was carried through by mass spectrometry - Q-tof that showed molecular weight 28.369 kDa / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

El objetivo de este trabajo consistió en describir el papel del sistema plasminógeno/plasmina (PLG/PLA) en la fecundación bovina y porcina. Mediante fecundación in vitro, demostramos que la presencia de PLG ó PLA en el medio de coincubación de los gametos disminuía la penetración de los espermatozoides en los ovocitos y su unión a la zona pelúcida (ZP). Esta disminución no se debía a alteraciones de la funcionalidad espermática ni a cambios en la resistencia de la ZP a la proteolisis, sino a que la PLA provocaba la liberación de los espermatozoides adheridos a la ZP. Mediante inmunofluorescencia indirecta detectamos la presencia de PLG y sus activadores en la ZP y en el oolema de los ovocitos antes de la fecundación. Tras la fecundación, dicha presencia disminuyó o desapareció por completo, por lo que proponemos que el sistema PLG/PLA se activa durante la interacción espermatozoide-ovocito y contribuye a regular la polispermia. / The aim of this study was to describe the role of the plasminogen/plasmin system (PLG/PLA) in bovine and porcine fertilization. Through in vitro fertilization, we demonstrated that the presence of PLG or PLA in the incubation medium of gametes decreased penetration of oocytes and sperm binding to the zona pellucida (ZP). This decrease was not due to alterations in sperm function or changes in the ZP resistance to proteolysis, but the PLA caused the release of sperm previously bound to the ZP. By indirect immunofluorescence we detected the presence of PLG and its activators in the ZP and oolema of the oocytes before fertilization. After fertilization, this presence diminished or disappeared completely, so we propose that the PLG/PLA system is activated during sperm-oocyte interaction and contributes to the regulation of polyspermy.