Pneumocystis é um importante patógeno oportunista que pode causar um quadro de pneumonia intersticial fatal em animais infectados por alguma doença imunodepressora. Pneumocystis sp. tem sido identificado em suínos domésticos e selvagens coinfectados com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2) que desenvolvem a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O presente trabalho analisou 78 javalis (Sus scrofa) com histórico de SMDS procedentes de 6 diferentes propriedades com sistema de confinamento intensivo no Rio Grande do Sul no período de março de 2006 a junho de 2008. Amostras de tecido pulmonar de seis javalis que não desenvolveram clinicamente a SMDS, assim como, amostras de suínos procedentes de abatedouros dos Estados do Rio Grande do Sul e Mato Grosso foram incluídas nas análises molecular e filogenética do trabalho. O teste de imunohistoquímica (IHQ) para a detecção de Pneumocystis sp. foi positivo em 50% dos pulmões analisados. A IHQ para a detecção de PCV2 foi positiva em 37% dos animais, sendo que o linfonodo mesentérico foi o órgão que apresentou maior grau de marcação positiva. Coinfecção entre Pneumocystis sp. e PCV2 foi confirmada pela IHQ em 20,5% dos javalis. O teste de nested-PCR dos genes mtLSU rRNA e mtSSU rRNA identificou a presença de material genético de Pneumocystis sp. em pulmões de javalis que desenvolveram a SMDS e em pulmões de javalis que não apresentaram clinicamente a doença, sugerindo que somente a presença de Pneumocystis sp. não se caracteriza como causa suficiente para o desenvolvimento de pneumonia intersticial. Identificou-se pela análise filogenética que javalis e suínos no Brasil são afetados pela mesma espécie de Pneumocystis sp. e que esta subdividese em dois grupos distintos. / Pneumocystis is an important opportunistic pathogen that may cause lethal interstitial pneumonia in infected animals due to some immunosuppressive disease. Pneumocystis sp. has been found in domestic and feral swine co infected with porcine circovirus type 2 (PCV2) that developed the postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). This study analyzed 78 wild boars (Sus scrofa) with PMWS background from 6 different farms with intensive confinement system in Rio Grande do Sul from March 2006 to June 2008. The lung tissue samples of six wild boars that did not develop PMWS, as well as the swine samples from slaughterhouses in Rio Grande do Sul and Mato Grosso were included in the molecular and phylogenetic analyses of this study. The immunohistochemistry test (IHC) for detection of Pneumocystis sp. was positive in 50% of the analyzed lungs. The IHC for PCV2 detection was positive in 37% of the animals and the mesenteric lymph node was the organ with the highest degree of positive staining. Co infection in Pneumocystis sp. and PCV2 was confirmed by IHC in 20.5% of wild boars. The nested-PCR test of the mtLSU rRNA and mtSSU rRNA genes identified the presence of genetic material of Pneumocystis sp. in lungs of wild boars that developed the PWMS and in wild boars that did not presented clinical disease, which may mean that only the presence of Pneumocystis sp. was not characterized as sufficient cause to interstitial pneumonia development. Through phylogenetic analysis it has been identified that wild boars and swine in Brazil are affected by the same specie of Pneumocystis sp. and its subdivision in two different groups.

Introdução. A colonização pelo Pneumocystis jirovecii foi demonstrada em diversos grupos, como pacientes imunossuprimidos pela infecção do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), pacientes com doenças pulmonares crônicas e gestantes. Alguns estudos têm sugerido que os profissionais de saúde podem tornar-se colonizados após contato com pacientes com a pneumonia por Pneumocystis (PcP). Objetivos. Identificar a colonização pelo P. jirovecii, através de técnicas moleculares, em profissionais de saúde que apresentam contato ocupacional com pacientes com PcP no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Verificar a duração desta colonização. Analisar as variáveis clínico-demográficas dos pacientes com PcP que podem estar relacionadas à transmissão do P. jirovecii ao profissional de saúde. Métodos. Foi realizada uma nested-PCR para a detecção do P. jirovecii no lavado de orofaringe de 27 profissionais expostos a pacientes com PcP (médico; enfermeiro; técnico/auxiliar de enfermagem) e de 36 profissionais administrativos, no período de janeiro a agosto de 2008. As amostras de lavado da orofaringe foram obtidas na primeira, segunda e oitava semana após o contato com um paciente para avaliar o início e a duração da colonização pelo P. jirovecii. A nested-PCR utilizou os primers pAZ-102-A e pAZ-H no primeiro round e pAZ 102-X e pAZ 102-Y no segundo, para a amplificação da grande subunidade do RNA ribossômico mitocondrial (mtLSUrRNA) do microorganismo. Foram coletados os dados clínicos e demográficos dos pacientes com PcP através da revisão dos prontuários médicos. Resultados. A colonização pelo P. jirovecii foi observada em 33,3% (9/27) dos profissionais expostos, com uma duração que variou entre uma a duas semanas após o contato inicial com o paciente. Entre os profissionais não-expostos, foram identificados somente dois colonizados entre 36 indivíduos (p <0,05). Não foi identificada associação entre as características clínicas e demográficas dos pacientes com PcP e a colonização dos profissionais de saúde. Conclusões: Os profissionais de saúde em contato com os pacientes com PcP apresentaram uma taxa de colonização superior aos indivíduos não expostos. Este achado é sugestivo de uma transmissão nosocomial do microorganismo. Os profissionais de saúde podem constituir importante reservatório e fonte de infecção do fungo a outros pacientes.

Introdução. A colonização pelo Pneumocystis jirovecii foi demonstrada em diversos grupos, como pacientes imunossuprimidos pela infecção do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), pacientes com doenças pulmonares crônicas e gestantes. Alguns estudos têm sugerido que os profissionais de saúde podem tornar-se colonizados após contato com pacientes com a pneumonia por Pneumocystis (PcP). Objetivos. Identificar a colonização pelo P. jirovecii, através de técnicas moleculares, em profissionais de saúde que apresentam contato ocupacional com pacientes com PcP no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Verificar a duração desta colonização. Analisar as variáveis clínico-demográficas dos pacientes com PcP que podem estar relacionadas à transmissão do P. jirovecii ao profissional de saúde. Métodos. Foi realizada uma nested-PCR para a detecção do P. jirovecii no lavado de orofaringe de 27 profissionais expostos a pacientes com PcP (médico; enfermeiro; técnico/auxiliar de enfermagem) e de 36 profissionais administrativos, no período de janeiro a agosto de 2008. As amostras de lavado da orofaringe foram obtidas na primeira, segunda e oitava semana após o contato com um paciente para avaliar o início e a duração da colonização pelo P. jirovecii. A nested-PCR utilizou os primers pAZ-102-A e pAZ-H no primeiro round e pAZ 102-X e pAZ 102-Y no segundo, para a amplificação da grande subunidade do RNA ribossômico mitocondrial (mtLSUrRNA) do microorganismo. Foram coletados os dados clínicos e demográficos dos pacientes com PcP através da revisão dos prontuários médicos. Resultados. A colonização pelo P. jirovecii foi observada em 33,3% (9/27) dos profissionais expostos, com uma duração que variou entre uma a duas semanas após o contato inicial com o paciente. Entre os profissionais não-expostos, foram identificados somente dois colonizados entre 36 indivíduos (p <0,05). Não foi identificada associação entre as características clínicas e demográficas dos pacientes com PcP e a colonização dos profissionais de saúde. Conclusões: Os profissionais de saúde em contato com os pacientes com PcP apresentaram uma taxa de colonização superior aos indivíduos não expostos. Este achado é sugestivo de uma transmissão nosocomial do microorganismo. Os profissionais de saúde podem constituir importante reservatório e fonte de infecção do fungo a outros pacientes.

Pneumocystis é um importante patógeno oportunista que pode causar um quadro de pneumonia intersticial fatal em animais infectados por alguma doença imunodepressora. Pneumocystis sp. tem sido identificado em suínos domésticos e selvagens coinfectados com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2) que desenvolvem a síndrome multissistêmica do definhamento dos suínos (SMDS). O presente trabalho analisou 78 javalis (Sus scrofa) com histórico de SMDS procedentes de 6 diferentes propriedades com sistema de confinamento intensivo no Rio Grande do Sul no período de março de 2006 a junho de 2008. Amostras de tecido pulmonar de seis javalis que não desenvolveram clinicamente a SMDS, assim como, amostras de suínos procedentes de abatedouros dos Estados do Rio Grande do Sul e Mato Grosso foram incluídas nas análises molecular e filogenética do trabalho. O teste de imunohistoquímica (IHQ) para a detecção de Pneumocystis sp. foi positivo em 50% dos pulmões analisados. A IHQ para a detecção de PCV2 foi positiva em 37% dos animais, sendo que o linfonodo mesentérico foi o órgão que apresentou maior grau de marcação positiva. Coinfecção entre Pneumocystis sp. e PCV2 foi confirmada pela IHQ em 20,5% dos javalis. O teste de nested-PCR dos genes mtLSU rRNA e mtSSU rRNA identificou a presença de material genético de Pneumocystis sp. em pulmões de javalis que desenvolveram a SMDS e em pulmões de javalis que não apresentaram clinicamente a doença, sugerindo que somente a presença de Pneumocystis sp. não se caracteriza como causa suficiente para o desenvolvimento de pneumonia intersticial. Identificou-se pela análise filogenética que javalis e suínos no Brasil são afetados pela mesma espécie de Pneumocystis sp. e que esta subdividese em dois grupos distintos. / Pneumocystis is an important opportunistic pathogen that may cause lethal interstitial pneumonia in infected animals due to some immunosuppressive disease. Pneumocystis sp. has been found in domestic and feral swine co infected with porcine circovirus type 2 (PCV2) that developed the postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). This study analyzed 78 wild boars (Sus scrofa) with PMWS background from 6 different farms with intensive confinement system in Rio Grande do Sul from March 2006 to June 2008. The lung tissue samples of six wild boars that did not develop PMWS, as well as the swine samples from slaughterhouses in Rio Grande do Sul and Mato Grosso were included in the molecular and phylogenetic analyses of this study. The immunohistochemistry test (IHC) for detection of Pneumocystis sp. was positive in 50% of the analyzed lungs. The IHC for PCV2 detection was positive in 37% of the animals and the mesenteric lymph node was the organ with the highest degree of positive staining. Co infection in Pneumocystis sp. and PCV2 was confirmed by IHC in 20.5% of wild boars. The nested-PCR test of the mtLSU rRNA and mtSSU rRNA genes identified the presence of genetic material of Pneumocystis sp. in lungs of wild boars that developed the PWMS and in wild boars that did not presented clinical disease, which may mean that only the presence of Pneumocystis sp. was not characterized as sufficient cause to interstitial pneumonia development. Through phylogenetic analysis it has been identified that wild boars and swine in Brazil are affected by the same specie of Pneumocystis sp. and its subdivision in two different groups.

Orientadores: Francisco Hideo Aoki, Ângela Maria de Assis / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-28T00:12:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_CristinaRodrigues_M.pdf: 1833064 bytes, checksum: 4087a171a36bf726cff1abdcd0bd4cf8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O Pneumocystis jirovecii é um fungo ascomiceto que pode causar pneumonia (PPC) em indivíduos imunossuprimidos e eventualmente em imunocompetentes. Os métodos laboratoriais de baixo custo para detecção ainda é a coloração em lâmina. Os métodos moleculares são considerados mais eficientes e tem oferecido alternativas para o entendimento da biologia e da doença causada por esse microrganismo. O objetivo desse estudo foi detectar a presença de Pneumocystis jirovecii em pacientes com doença pulmonar. O método adotado foi a técnica de coloração de lâmina com azul de toluidina para detecção de cistos, PCR para detecção do fragmento mitocondrial pAZ102-H/E, Nested PCR com primers internos pAZ102-X/Y e sequenciamento pelo método de Sanger para detecção de alterações moleculares na região genômica estudada. Foram coletadas 139 amostras, sendo 102 de lavado broncoalveolar (LBA), 7 de escarro, 10 amostras de sangue periférico (fracionadas em hemácias/leucócitos e plasma) e 10 amostras de soro. Nos resultados da coloração pela técnica de azul de toluidina, 2 amostras de escarro e 1 de LBA foram positivas. Através dos métodos moleculares, 6 amostras foram positivas na primeira PCR e 91 amostras foram positivas pela Nested PCR. Os fragmentos pAZ102-X de 51 amostras foram sequenciadas, 18 amostras apresentaram mutação nos seguintes códon/posição 4406/13217, 4419/13257, 4431/13294, 4439/13316, 4440/13321, 4446/13338, 4452/13357, 4456/13367 e 4457/13371. Os pacientes que apresentaram essas alterações tinham um perfil com doenças pulmonares ou fatores de risco associados à infecção por P. jirovecii. Como a detecção de P. jirovecii, diagnóstico e prevenção de PPC são ligadas a história clínica do paciente, os avanços moleculares podem ser um caminho para diagnóstico de PPC, diferenciando essa pneumonia dos casos de colonização por esse fungo / Abstract: Pneumocystis jirovecii is an ascomycete fungus that can cause pneumonia (PCP) in immunocompromised individuals and possibly in immunocompetent. The low cost of laboratory methods for detection is with conventional staining methods. Molecular methods are considered more efficient and have offered alternatives to the understanding of biology and disease caused by this organism. The aim of this study was to detect the target DNA fragment (mtLSUrRNA) of P. jirovecii in patients with lung disease. We compared the staining technique with molecular methods using toluidine blue for microscopy and "in house" DNA extraction, PCR and Nested PCR for molecular detection and sequencing by the Sanger method to detect molecular alterations in the genomic region studied. It was analyzed 139 samples, such as, 102 bronchoalveolar lavage (BAL), 7 sputum, 10 samples of peripheral blood (fractionated in red blood cells / leukocytes and plasma) and 10 serum samples. The results of the toluidine blue staining technique, two sputum samples and 1 BAL were positive. Through molecular methods, 6 samples were positive in the first PCR and 91 samples were positive by Nested PCR. The pAZ102-X fragments of 51 samples were sequenced, 18 samples had mutations in codon/position 4406/13217, 4419/13257, 4431/13294, 4439/13316, 4440/13321, 4446/13338, 4452/13357, 4456 / 13367 and 4457/13371. Patients who presented these alterations had a profile with lung diseases or risk factors associated with infection by P. jirovecii. As the detection of P. jirovecii, diagnosis and prevention of PCP are linked to clinical history, molecular advances can be a way for diagnosis of PCP, differentiating this pneumonia cases of colonization by the fungus. OBSERVAÇÃOPor favor manter essa palavra em itálico: Pneumocystis jirovecii / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Ciências

Pentamidine is used to treat Pneumocystis carinii pneumonia. The incidence of this infection in pregnancy has paralleled the increasing incidence of acquired immunodeficiency syndrome in pregnancy. Using the in vitro bidirectionally perfused human placenta, we studied the transfer of pentamidine across the placenta. Pentamidine was added to the maternal circulation at therapeutic concentrations (2 wg/ml). No transfer of pentamidine was detectable with a newly devised high-performance liquid chromatography method sensitive to 0.05 wg/ml of pentamidine. Increasing the pentamidine concentration tenfold produced a low level of transfer to the fetal circuit. Fetal concentrations were far below maternal perfusate concentrations. Placental tissue levels were higher than media levels. These data are suggestive of minimal drug transfer to the fetus and significant concentration of the drug in placental tissue. (Am J Obstet Gynecol 1989;160:759-61.)

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Pneumocystis pneumonia (PCP) is the leading opportunistic disease in immunocompromised individuals, particularly in AIDS patients. The alveolar macrophage (AM) is the major type of cell responsible for the clearance of Pneumocystis organisms; however, they undergo a high rate of apoptosis during PCP due to increased intracellular polyamine levels. This study examined the mechanism of this polyamine mediated apoptosis and investigated an alternative therapy for PCP by targeting this mechanism. The elevated polyamine levels were determined to be caused by increased polyamine synthesis and uptake. Increased polyamine uptake was found to be AM-specific, and recruited inflammatory cells including monocytes, B cells, and CD8+ T cells were found to be a potential source of polyamines. The expression of the antizyme inhibitor (AZI), which regulates both polyamine synthesis and uptake, was found to be greatly up-regulated in AMs during PCP. AZI overexpression was confirmed to be the cause of increased polyamine synthesis and uptake and apoptosis of AMs during PCP by gene knockdown assays. Pneumocystis organisms and zymosan were found to induce AZI overexpression in AMs, suggesting that the β-glucan of the Pneumocystis cell wall is responsible for this AZI up-regulation. In addition, levels of mRNA, protein, and activity of polyamine oxidase (PAO) were also found to be increased in AMs during PCP, and its substrates N1-acetylspermidine and N1-acetylspermine were found to induce its up-regulation. These results indicate that the H2O2 generated during PAO-mediated polyamine catabolism caused AMs to undergo apoptosis. Since increased polyamine uptake was demonstrated to be a pathogenic mechanism of PCP in this study, the potential therapeutic activity of five putative polyamine transport inhibitors against PCP was tested. Results showed that compound 44-Ant-44 significantly decreased pulmonary inflammation, organism burden, and macrophage apoptosis, and prolonged the survival of rats with PCP. In summary, this study demonstrated that Pneumocystis organisms induce AZI overexpression, leading to increased polyamine synthesis, uptake, and apoptosis rate in AMs and that targeting polyamine transport is a viable therapeutic approach against PCP.

Pneumocystis carinii is an opportunistic fungal pathogen that causes lifethreatening pneumonia in immunocompromised individuals. Infants appear to be particularly susceptible to Pneumocystis (PC) pulmonary infections. The higher incidence of PC as well as other pulmonary infections among infants is likely due to an immature immune system. The neonatal lung environment is deficient immunologically in preterm as well as term infants (1, 2). Decreased phagocytic capacity of macrophages in newborns may increase the risk of infection from inhaled pathogens (1, 2). We have previously demonstrated that there is approximately a 3-week delay in the clearance of PC organisms from pup mouse lungs compared to adults. Herein, we demonstrate that there is also a 1-week delay in the infiltration of AMs in pup compared to adult PC-infected mice. We go on to show that there is a delay in pup versus adult lung macrophage phenotypic expression and cytokine production in response to PC organisms. We demonstrated that pup AMs are competent to produce cytokine in response to LPS and that stimulation with zymosan generates cytokine production in pup AMs that is comparable to adult cytokine production. These data indicate that pup lung macrophages are specifically poorly responsive to PC organisms and likely require exogenous stimulation to mount a significant immune response and expedite clearance of the organism. We go on to show that heat-killed Escheriae coli improves cytokine response, cellular infiltration and reduces organism burden in PC-infected pup mice. The clinically relevant cytokine, GM-CSF, has been used to improve the clearance of several pulmonary infections, including PC in adult animal models. We show that monotherapy with GM-CSF is insufficient to improve PC clearance in pup mice; however, when combined with TMP/SMX it improves PC clearance and maintains a reduced PC burden following discontinuation of therapy. Furthermore, we have shown that GM-CSF improves the ability of human infant lung macrophages to phagocytose PC organsms without generating an increased inflammatory response. These data suggest that combination therapy with TMP/SMX and GM-CSF may be a viable treatment option for infants failing or intolerant to standard therapy.

Thesis (PhD)--University of Stellenbosch, 2005. / Bibliography. Also available via the Internet.

Resumo não disponível