Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pos-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:56:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224148.pdf: 1726405 bytes, checksum: d6a5b7ef9ed96496d06c8caad5393db1 (MD5) / Entre os fungos pertencentes à classe dos basideomicetos, os do gênero Pleurotus são reconhecidos por apresentar b-glicanos com importantes propriedades medicinais como constituintes da parede celular tanto do basidioma como do micélio. Este trabalho propôs a busca de um meio de cultivo que maximizasse tanto a produção de biomassa como a de polissacarídeos produzidos por Pleurotus ostreatus DSM 1833. A avaliação do meio de cultivo selecionado em escala ampliada, utilizando dois diferentes valores de KLa inicial e a avaliação do potencial antimicrobiano de extratos da biomassa e do caldo de cultivo de P. ostreatus cultivado no meio selecionado, também foram realizadas. Os experimentos para a seleção do meio de cultivo foram realizados em frascos de Erlenmeyer de 500 mL, contendo 100 mL do meio de cultivo a ser estudado, incubados a 30ºC, sob agitação recíproca de 120 min-1. Inicialmente, três meios de cultivo foram avaliados: meio POL (20 g.L-1 de glicose, peptona, extrato de levedura, sulfato de amônio, sulfato de magnésio e fosfato de potássio), meio TD (extrato de trigo e 20 g.L-1 de glicose) e meio POL-MIL (meio POL modificado pela substituição do extrato de levedura e peptona por água de maceração de milho). A produtividade máxima em biomassa (PXmáx) alcançada nestas condições foi de 0,63, 1,48 e 1,16 g.L-1.dia-1, respectivamente para os meios POL, TD e POL-MIL. Por apresentar maior produtividade em biomassa o meio TD foi considerado mais propício para dar continuidade aos experimentos para a escolha da concentração da fonte de carbono. Quando 5, 10, 15 e 20 g.L-1 de glicose foram adicionadas ao extrato de trigo, verificou-se uma produtividade máxima em biomassa (PXmáx) de aproximadamente 0,39, 0,64, 0,59 e 1,48 g.L-1.dia-1, respectivamente. Os fatores de conversão de substrato em biomassa (Yx/s) foram de 0,40, 0,63 e 0,88 g.g -1 para os meios POL, TD e POL-MIL, respectivamente. Para as concentrações de glicose de 5, 10, 15 e 20 g.L-1 os fatores de conversão de substrato em biomassa (Yx/s) foram de 0,55, 0,54, 0,58 e 0,63 g.g-1 respectivamente. Os resultados de produtividade apontaram o extrato de trigo, adicionado de 20 g.L-1 de glicose, como sendo o mais propício para produção de biomassa de Pleurotus ostreatus dentre as condições avaliadas. O bom desempenho alcançado por um meio composto de extrato de trigo e glicose levaram a um experimento subseqüente no qual construiu-se um planejamento fatorial 24 para avaliar a suplementação do extrato de trigo com água de maceração de milho (10 e 20 g.L-1), extrato de levedura (2 ou 5 g.L-1) e/ou sulfato de amônio (0 e 5 g.L-1). A concentração de glicose também foi variada em 20 e 40 g.L-1. Em termos de produtividade máxima em biomassa e de fator de conversão de substrato em biomassa, os melhores valores foram obtidos quando utilizou-se 5 g.L-1 de extrato de levedura e 40 g.L-1 de glicose. Em termos de concentração máxima de biomassa e de produtividade global em polissacarídeos, o melhor resultado foi obtido quando utilizou-se 20 g.L-1 de água de maceração de milho e 40 g.L-1 de glicose. Esta condição foi utilizada para avaliar a influência de dois níveis de kLa inicial (10,2 e 19,3 h-1) na produção de biomassa e polissacarídeos, em experimentos em escala ampliada (4 L), conduzidos em biorreator. O melhor resultado foi encontrado quando o kLa inicial de 10,2 h-1 foi utilizado. A atividade antimicrobiana de dois diferentes extratos (infusão do micélio fresco em água fervente - EI e solução de polissacarídeos obtidos da biomassa micelial - EP) e do caldo de cultivo de P. ostreatus cultivado no meio selecionado - CC foi avaliada contra os microrganismos Escherichia coli, Bacillus subtilis e Candida albicans. O caldo de cultivo e a infusão aquosa do micélio de P. ostreatus mostraram-se os mais indicados para inibir o crescimento de E. coli e C. albicans, respectivamente. Among the basidiomycetes, fungi of the Pleurotus genus are recognized for presenting b-glucans with important medicinal properties as a constituent of the cellular wall of the fruit body or of the mycelium. The aims of this work were to select a culture medium that maximized the production of biomass and polysaccharides produced by Pleurotus ostreatus DSM 1833 and to evaluate the antimicrobial effects of the biomass extracts and the culture broth of P. ostreatus cultivated in the selected medium. The scale up of the process using the selected medium in two different values of initial KLa was also done. The experiments for the selection of the culture medium were carried out in Erlenmeyer flasks of 250 mL, containing 100 mL of the medium to be evaluated, maintained at 30ºC, under reciprocal agitation (120 min-1). Initially, three culture media were evaluated: POL (20 g.L-1 of glucose, peptone, yeast extract, ammonium sulfate, magnesium sulfate and potassium phosphate), TD (wheat extract and 20 g.L-1 of glucose) and POL-MIL (POL medium modified for the substitution of the yeast extract and peptone for corn steep liquor). The maximum productivity in cell (PXmáx) was 0.63, 1.48 and 1.16 g.L-1.day-1, respectively for POL, TD and POL-MIL. By presenting the best results in terms of productivity in cells, TD was selected to give continuity to the experiments for the choice of the concentration of the carbon source. When 5, 10, 15 and 20 g.L-1 of glucose were added to the wheat extract, a maximum productivity in biomass (PXmáx) of 0.39, 0.64, 0.59 and 1.48 g.L-1.day-1, respectively, was verified. The yields in cell (Yx/s) were 0.40, 0.63 and 0.88 g.g -1 for POL, TD and POL-MIL, respectively. For glucose concentrations of 5, 10, 15 and 20 g.L-1 the yield in cell (Yx/s) were 0.56, 0.54, 0.58 and 0.63 g.g-1 respectively. The productivity results showed that wheat extract, added of 20 g.L-1 of glucose is the most propitious medium for production Pleurotus ostreatus, among the evaluated conditions. The good performance achieved with a medium composed by wheat extract and glucose led to a subsequent experiment in which a 24 factorial design was constructed to evaluate the supplementation of the wheat extract with corn steep liquor (10 and 20 g.L-1), yeast extract (2 or 5 g.L-1) and/or ammonium sulfate (0 and 5 g.L-1). The glucose concentration was also varied in 20 and 40 g.L-1. In terms of maximum productivity in biomass and global productivity in polysaccharides, the best values were obtained when 5 g.L-1 of yeast extract and 40 g.L-1 of glucose were used. In terms of maximum concentration of biomass, the best results were obtained when 20 g.L-1 of corn steep liquor and 40 g.L-1 of glucose were used. This condition was used to evaluate the influence of two initial levels of kLa (10,2 and 19,3 h-1) in the production of biomass and polysaccharides in experiments carried out in a bioreactor of 4 L. The best results were found when initial kLa of 10,2 h-1 was used. The antimicrobian effects of two different extracts (infusion of fresh mycelium in boiling water - EI and a solution of the polysaccharides extracted of the micelial biomass - EP) and the culture broth of P. ostreatus cultivated in the screened medium - CC were evaluated against the microorganisms Escherichia coli, Bacillus subtilis and Candida albicans. The culture broth and the aqueous infusion of the mycelium of P. ostreatus were able to inhibit the growth of E. coli and C. albicans, respectively.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 320188.pdf: 2496881 bytes, checksum: 7488ff51c661c55cc54d00c58ed43f87 (MD5) Previous issue date: 2013 / O presente trabalho teve como objetivo extrair e caracterizar as gomas de seis espécies vegetais, a saber C. pulcherrima, A. pavonina, D. regia, T. indica, M. sloanei , H.courbaril e avaliar suas características estruturais e propriedades físico-químicas para futuras aplicações. O teor de umidade e cinzas das gomas das seis espécies estudadas variaram de 9,7-12,6% e 0,45-2,5%, respectivamente, sendo que as gomas de H. courbaril, T. indica e M. sloanei foram as gomas que apresentaram o maior rendimento 37 - 43,5%. O teor de proteína também foi avaliado, e as gomas extraídas das sementes de C. pulcherrima, A. pavonina e D. regia apresentaram menor conteúdo de proteína 0,6-0,9% em relação as gomas extraídas de T. indica, M. sloanei e H. courbaril cujos os valores foram entre 6,3 -7,4%. Análise em cromatografia gasosa revelou que manose (Man) e galactose (Gal) foram os principais monossacarídeos presentes nas gomas extraídas de semente de C. pulcherrima (63,4% e 29,1%), A. pavonina (54,0% e 41,1%), D. regia (64,5 % e 27,0%) e glucose como componente majoritário, para as espécies de T. indica, M. sloanei e H. courbaril confirmando a presença de galactomananas e galactoxiloglucanas. Os resultados de CG foram confirmados pelos ensaios de FTIR apresentando bandas características entre 820 cm 1 e 870 cm-1 referentes ao estiramento das conformações anoméricas dos polissacarídeos. A análise termogravimétrica revelou boa estabilidade térmica (285ºC a 350ºC) para as seis amostras, com perda de massa de 49,82-61,26%. A C. pulcherrima foi a espécie que apresentou a maior viscosidade intrínseca (9,20+0,22), seguida pela D. regia (8,11+0,04), M. sloanei (7,28+0,11), H. Courbaril (6,74+0,08), A. pavonina (6,58+0,03) e T. indica (5,32+0,07). Valores negativos de Potenciais Zeta (Zp entre -1 a -12 mV) foram encontrados para todas as espécies, confirmando o caráter neutro dos polissacarídeos estudados. A análise de tensão superficial mostrou que, tanto as soluções de galactomananas (0,6 mg.L-1) como as galactoxiloglucanas (0,7 mg.L-1), são capazes de diminuir a tensão superficial da água de 72 mN/m a valores em torno de 35 mN/m a 25ºC, sendo similares às gomas comerciais. Dessa forma, as gomas extraídas de sementes podem ser utilizadas para diversas aplicações industriais, ampliando o leque de matérias primas passíveis de serem exploradas comercialmente <br> / Abstract: The present study aimed to extract and characterize the gums of six plant species, C. pulcherrima, A. pavonina, D. Regia, T. indica, M. sloanei, H.courbaril and evaluate their structural characteristics and physicochemical properties for future applications. The moisture content and ash content of the gums of the six species studied ranged from 9.7 to 12.6% and from 0.45 to 2.5%, respectively, and gums H. courbaril, T. indica and M. sloanei gums were presented a higher yield 37 - 43.5%. The protein content was also evaluated, and gums extracted from the seeds of C. pulcherrima, A. pavonina and D. regia showed lower protein content 0.6-0.9% compared with gums extracted from T. indicates, M. sloanei and H. courbaril whose values were between 6.3 -7.4%. Gas chromatography analysis showed that mannose (Man) and galactose (Gal) were the main monosaccharides present in the gum extracted from seeds of C. pulcherrima (63.4% and 29.1%), A. pavonina (54.0% and 41.1%), D. regia (64.5% and 27.0%) and glucose as the major component for the species T. indica, M. sloanei and H. courbaril confirming the presence of galactomannans and galactoxiloglucanas. The results were confirmed by GC assays FTIR showing characteristic bands between 820 cm -1 and 870 cm -1 related to stretching of the anomeric conformations of polysaccharides. Thermogravimetric analysis revealed good thermal stability (285 º C to 350 º C) for six samples, with mass loss of 49.82 to 61.26%. The C. pulcherrima was the species with the highest intrinsic viscosity (9.20 +0.22), followed by D. regia (8.11 +0.04), M. sloanei (7.28 +0.11), H. courbaril (6.74 +0.08), A. pavonina (6.58 +0.03) and T. indica (5.32 +0.07). Negative values of Zeta Potential (Zp between -1 to -12 mV) were found for all species, confirming the character of neutral polysaccharides studied. The stress analysis showed that both solutions galactomannans (0.6 mg.L-1) as galactoxiloglucanas (0.7 mg.L-1), are able of reducing the surface tension of water from 72 mN / m values to around 35 mN/m at 25ºC, being similar to commercial gums. Thus, the gums extracted from seeds can be used for various industrial applications, extending the range of raw materials that can be commercially exploited.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química / Made available in DSpace on 2012-10-19T13:55:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 230918.pdf: 340870 bytes, checksum: 146df8d49730f878f49fbe583ef6e323 (MD5) / Quitosana ditiocarbamato de potássio (ChitDTCK) foi sintetizado e caracterizado por análise elementar e 13C RMN em estado sólido. O grau de substituição GS (numero de substituíntes por 100 unidades de 2-amino-2-deoxyglucopiranose) e molalidades dos grupos foram calculados para os substituíntes acetilamino, amino e ditiocarbamato na quitina, quitosana e ChitDTCK. Um estudo comparativo da retenção e recuperação de íons Cu(II), Co(II) e Ni(II) foi realizado com a quitina, quitosana e ChitDTCK a 30 oC, pH 6,0 (0,1M succinato). Para tal efeito foram calculadas as constantes de estabilidade (KX), para o equilíbrio heterogêneo, ChitX + M(II) ChitXM(II) onde X representa os ligantes acetilamino, amino e ditiocarbamato e M(II) = Cu(II), Co(II) e Ni(II). Também foram calculadas as constantes de instabilidade ( ), pelo equilíbrio inverso. Assumiu-se que os complexos apresentam a razão 1:1 metal-ligante com respeito a cada grupo. Para Cu(II) os valores das constantes de estabilidade KX foram 44,5 (acetilamino), 9,4x103 (amino), e 3,5x103 (ditiocarbamato). As constantes de instabilidade foram 5,0 x10-3 (acetilamino) e 1,90x10-5 (amino).Para Co(II) as constantes foram KX 0,69 (acetilamino) e 1,5x103 (amino); 1,80x10-2 (acetilamino) e 2,5x10-5 (amino). Para Ni(II) os valores foram KX 0,7 (acetilamino) e 1,1x104 (amino); 1,2x102 (acetilamino) e 4,1x10-6 (amino). É proposto que na presença de succinato a principal espécie presente em solução de ions aqua Cu(II) deve ser o complexo sem carga Cu(II)-succinato, que impede que os grupos ligantes (acetilamino, amino, DTC) formem complexos maiores que 1:1 e pode também explicar que a constante de estabilidade para o DTC fosse menor que o do grupo amino. O método permite a caracterização da habilidade quelante de cada grupo na matriz da quitosana com respeito a íons metálicos.

Orientadora : Profª. Drª. Maria Rita Sierakowski / Orientadora : Profª Drª Izabel Cristina Riegel Vidotti / Autor não autorizou a inclusão na Biblioteca Digital / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química. Defesa: Curitiba, 22/04/2013 / Inclui referências / Resumo: O desenvolvimento de filmes de celulose bacteriana (CB) a partir de uma polpa desfibrilada mecanicamente foi efetuado neste trabalho, visando obter biocompósitos com a inclusão de aditivos como suportes para o cultivo de células e possível aplicação como biomaterial. Na polpa produzida foram incorporados hidrocolóides (HC): uma xiloglucana extraída das sementes da Tamarindus indica, XGT, outra de sementes de Hymenaea courbaril, XGJ, e a goma gelana (GL) de origem bacteriana. Dispersões foram preparadas com a inclusão (m/m) dos HC isolados ou em blendas com grau de substituição (GS) de 10, 20 e 30% da massa (~10mg) de uma membrana de CB comercial (MC). Os filmes obtidos, após secagem (48h, 40oC), foram caracterizados por difração de Raios X, DRX, microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de força atômica (MFA), termogravimetria (TG), ensaios de tensão, citotoxicidade, biocompatibilidade, e de adesão celular, de acordo com o grau de substituição (GS) dos HC. Por MEV e MFA, após a inclusão da XGT (MCT), XGJ (MCJ), GL (MCG) e das blendas (MCGT e MCGJ), assim como na membrana somente reconstituída (MCR), verificou-se que as superfícies dos filmes apresentaram-se mais heterogêneas e rugosas, na ordem MCT>MCJ>MCR>MCG>MC, também confirmadas por medidas de ângulo de contato (AC). Por AC, observou-se um aumento da heterogeneidade em relação ao GS (10%>20%>30%), influenciando na energia livre de superfície (ELS). Pelas componentes da ELS, obtidas pelos métodos de Wu e van Oss (LW-AB), as superfícies dos filmes mudam de dispersiva (apolar) para polar em relação a MC, apresentando espécies doadoras de elétrons (base de Lewis). Tais características geraram variações na adesão de células L929 sobre os biocompósitos, quando comparadas a MC e MCR, onde as formulações de MCG com 10 e 30% de GS mostraram melhores resultados entre os biocompósitos e similares aos controles. Tais resultados são oriundos da provável presença das carboxilas presente na estrutura da GL e que se encontram na superfície dos filmes, conforme observado em uma banda em 1608 cm-1 nos espectros de infravermelho com reflectância atenuada (ATR-FTIR). E, por espectroscopia de fotoelétrons de raios X (XPS), um pico com 289 eV no espectro de C1s, referente a energia da de ligação C-O de ácido foi observado, indicando uma adsorção dos HC na superfície da CB, sem alterar a estrutura cristalina da CB. Porém, pelas medidas de DRX, os biocompósitos apresentaram índices de cristalinidade inferiores aos controles (MC e MCR) devido à contribuição amorfa dos HC. Além disso, a incorporação dos HC não gerou filmes com baixa estabilidade térmica e não alterou as propriedades mecânicas da matriz celulósica. Em complemento, a inclusão (10%) do fluconazol em biocompósitos contendo 10% de gelana (MCGFZL) não apresentou potencial antifúngico frente à Candida albicans em meio ágar. Porém, em testes de adesão celular utilizando células-tronco mesenquimais humanas, os biocompósitos MCG e MCGFZL apresentaram maior adesão (MCG10%<MCG20%<MCG30%~MCGFZL) que os controles (MC, MCR e a superfície de poliestireno). Dessa forma, a mudança das características na superfície da CB com a inclusão dos HC mostrou ser uma ferramenta útil no desenvolvimento de materiais com aplicações biológicas. Palavras chave: Celulose bacteriana. Hidrocolóides. Biocompósitos. Filmes. adesão celular. Xiloglucana. Gelana. Propriedades de superfície. / Abstract: The development of bacterial cellulose films (BC) from a mechanically defibrillated pulp was efectued in this work, with the inclusion of addictives, in order to obtain biocomposites such as a media for growing cells and possible application as biomaterial. To the BC pulp was added the hydrocolloids (HC): a xyloglucan extracted from Tamarindus indica seeds (XGT), another from Hymenaea courbaril seeds (XGJ) and a gellan gum (GL) from bacterial source. Dispersions of BC pulp were prepared with an inclusion (wt%) of isolate HC or in mixtures with substitution of 10, 20 and 30 wt% of HD, based on comercial BC mass (~10 mg). The films wer obtained after drying process (48h at 40oC) and characterised by x-ray diffraction (DRX), scanning electron microscopy (MEV), atomic force microscopy (AFM), contact angle (AC), termogravimetric (TG) analysis, tensile tests, citotoxicity, biocompatibility and cell adhesion, evaluated according to substitution degree (SD) of HC. By MEV and AFM, after inclusion of XGT (MCT), XGJ (MCJ), GL (MCG) and in blends (MCGT and MCGJ), as well in reconstituted BC (MCR), was observed that the surface of the films showed more heterogeneous and rougher in order MCG>MCJ>MCR>MCG>MC, being confirmed by AC results, that shown the increase of heterogeneity in relation to SD (10wt%>20wt%>30wt%), influencing in the surface free energy (SFE). The evaluation of SFE components, obtained by Wu and van Oss (LW-AB) methods, the surfaces of the films changed from dispersive (apolar) to polar in relation to MC, indicating more electron donor species (Lewis base) in the surface. These characteristics have generated different ways in the adhesion of L929 cells over the films compared with MC and MCR, where the formulations of MCG with 10%wt and 30%wt of GS shown the best results between the formulations and similarities with the controls (MC and MCR). Such results are probably by presence of carboxyl groups in the GL structure, confirmed by attenuated total reflectance infrared spectroscopy (ATR-FTIR) with a characteristic band at 1608 cm-1 and a peak with 289 eV related to acid C-O bonds in the C1s spectrum of X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), indicating only the adsorption of HC on surface without change the structure of BC after regeneration. Still, the DRX results showed the increase of amorphous contribution in the formulations with HC, decreasing the crystallinity index in the BC matrix. Furthermore, the HC adsorptions not generate films with thermal instability and not change the mechanical properties of BC matrix. In addition, the inclusion of 10wt% of fluconazole in the films of 10wt% of gellan (MCGFZL) was performed; however, there was no antifungal activity against Candida albicans in the agar medium. On the other hand, the human mesenchymal stem cells adhesion tests was performed with MCG and MCGFZL, and the films showed more cell adhesion (MCG10%>MCG20%>MCG30%~MCGFZL) than controls (MC, MCR and polystyrene surface). Thus, the change of surface characteristic of BC with the HC inclusion showed a useful tool to development of material with biological applications. Key words: Bacterial cellulose. Hydrocolloids. Biocomposites. Films. Cell adhesion. Xyloglucan. Gellan. Surface properties.

Orientador : Prof. Dr. Thales Ricardo Cipriani / Coorientador : Prof. Dr. Marcello Iacomini / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 23/02/2017 / Inclui referências: f. 81-86;112-119;146-150;162-173 / Resumo: Nesta tese são apresentados resultados de sulfatação e fosforilação química de polissacarídeos, e de avaliação de atividades anticoagulante e antitrombótica de algumas das moléculas obtidas. Um protocolo otimizado de sulfatação química foi desenvolvido e aplicado em diferentes polissacarídeos, e testes de APTT e PT foram utilizados para monitorar o processo de sulfatação. Os polissacarídeos nativos e sulfatados foram caracterizados por análises de composição monossacarídica, metilação, grau de sulfatação (DS), homogeneidade e massa molecular, além de técnicas de RMN. Primeiramente, o protocolo de sulfatação foi desenvolvido com uma fucogalactana extraída do cogumelo Agaricus bisporus, purificada e caracterizada. O método de sulfatação foi otimizado usando ácido clorosulfônico como agente sulfatante, modificando o tempo de reação, volume total da reação por massa da amostra (VT/w), e relação molar de agente sulfatante por grupo hidroxila no polissacarídeo (?ClSO3H/OH). A fucogalactana sulfatada (E100) com melhor atividade anticoagulante foi obtida com uma relação ?ClSO3H/OH de 18, VT/w de 100, em 6 horas de reação. O incremento linear entre 15 e 45 ?g mL-1 no APTT, e entre 20 e 400 ?g mL-1 no PT mostrou que a fucogalactana sulfatada tem maior atividade anticoagulante inibindo a via de contato da cascata de coagulação. Os parâmetros otimizados de sulfatação química foram implementados em um protocolo que usa sulfato de piridina como agente sulfatante, resultando em outra fucogalactana sulfatada (ESL). E100 e ESL foram avaliados quanto à capacidade de inibir os principais fatores de coagulação alvos da ação da heparina. Ambas inibiram a ?-trombina na presença dos inibidores naturais antitrombina e cofator II da heparina. ESL não inibiu o FXa na presença da antitrombina, porém teve maior inibição sobre o FXIIa comparado com E100. No entanto, ESL teve maior atividade anticoagulante nos testes de APTT, PT e TT. ESL mostrou um baixo DS (1,0) comparado com E100 (2,8) e as análises de RMN mostraram que ele teve um padrão de sulfatação mais homogêneo. Uma maior biodisponibilidade de ESL comparado com E100 pode ser a justificativa para a sua maior atividade anticoagulante. Posteriormente, uma ?-glucana extraída de A. bisporus e pectina cítrica também foram sulfatadas pelo método de sulfato de piridina, seguindo os parâmetros previamente otimizados. Análises de APTT e PT mostraram que a fucogalactana sulfatada ESL teve maior atividade anticoagulante in vitro comparada com a pectina cítrica sulfatada, enquanto a ?-glucana sulfatada apresentou menor atividade. No entanto, a pectina cítrica sulfatada teve maior atividade antitrombótica in vivo comparada com a fucogalactana sulfatada. Esses resultados indicaram que o modo de ação dos polissacarídeos sulfatados in vivo não necessariamente reflete a atividade anticoagulante in vitro. Finalmente, dois protocolos de fosforilação de polissacarídeos foram desenvolvidos, usando as condições otimizadas de sulfatação. Encontrou-se atividade anticoagulante somente para a fucogalactana fosforilada pelo método que usa H3PO4 como reagente de fosforilação e formamida-trietilamina como solvente de reação. Os resultados mostraram que a atividade anticoagulante da fucogalactana fosforilada, determinada por teste de APTT, foi cerca de 1000 vezes menor que aquelas da fucogalactana sulfatada (ESL e E100). Assim, a presença de grupos sulfato no polissacarídeo é mais importante para a atividade anticoagulante em comparação com grupos fosfato. Palavras-chave: Polissacarídeo sulfatado, polissacarídeo fosforilado, fucogalactana, sulfatação química, fosforilação química, otimização, atividades anticoagulante e antitrombótica, fatores de coagulação. / Abstract: In this thesis, results of chemical sulfation and phosphorilation of polysaccharides are presented, as well as the evaluation of anticoagulant and antithrombotic activities of the obtained molecules. A chemical sulfation optimized method was developed and applied in different polysaccharides, and APTT and PT assays were used to evaluate the sulfation process. Native and sulfated polysaccharides were characterized through analyses of monosaccharide composition, methylation, degree of substitution (DS), homogeneity and molecular weight, and RMN techniques. First, the sulfation protocol was developed with a purified and characterized fucogalactan, extracted from Agaricus bisporus mushroom. The sulfation method was optimized using chlorosulfonic acid as sulfation agent, modifying the reaction time, ratio of total reaction volume to weight of sample (VT/w), and molar ratio of sulfation agent to hydroxyl group on the polysaccharide (?ClSO3H/OH). A sulfated fucogalactan (E100) with better anticoagulant activity was obtained with a ?ClSO3H/OH ratio of 18, VT/w of 100, in 6 h of reaction. The linear increment between 15 and 45 ?g mL-1 on APTT, and 20 and 400 ?g mL-1 on PT showed that its sulfated fucogalactan has better anticoagulant activity inhibiting the contact pathway of blood coagulation. The optimized parameters of chemical sulfation were implemented in a protocol that used pyridine sulfate as sulfation agent, resulting in another sulfated fucogalactan (ESL). E100 and ESL were evaluated for the ability to inhibit the major coagulation factors targeting heparin action. Both E100 and ESL inhibited the ?-thrombin in the presence of natural inhibitors antithrombin and heparin cofactor II. ESL did not inhibit FXa in the presence of antithrombin, however, it had better inhibition over FXIIa compared to E100. Nevertheless, ESL had better anticoagulant activity on APTT, PT and TT assays. ESL showed lower DS (1.0) compared to E100 (2.8) and the NMR analyses showed that ESL had a more homogenous sulfation pattern. A greater bioavailability of ESL compared to E100 could be the reason of its grater anticoagulant activity. Posteriorly, a ?-glucan extracted from A. bisporus and citrus pectin was also sulfated by the pyridine sulfate method, following the previously optimized parameters. APTT and PT analyses showed that the sulfated fucogalactan ESL had greater anticoagulant activity in vitro compared to sulfated citrus pectin, while the sulfated ?- glucan presented lower activity. However, sulfated citrus pectin had greater antithrombotic activity in vivo compared to the sulfated fucogalactan. These results indicated that the mode of action of polysaccharides in vivo does not necessarily reflect their in vitro anticoagulant activity. Finally, two phosphorylation protocols of polysaccharides were developed, using the optimized sulfation conditions. Anticoagulant activity was found only for the phosphorylated fucogalactan obtained with the method that uses H3PO4 as phosphorylated reagent and formamidetrietylamine as reaction solvents. The results showed that the anticoagulant activity of phosphorylated fucogalactan, determined by APTT assay, was about 1000-fold lower than sulfated fucogalactans (ESL and E100). Thus, the presence of sulfate groups in the polysaccharide is more important for the anticoagulant activity than that of phosphate groups. Keywords: Sulfated polysaccharide, phosphorylated polysaccharide, fucogalactan, chemical sulfation, chemical fosforilation, optimization, anticoagulant and antithrombotic activities, coagulation factors.

Orientador : Profª. Drª. Alexandra Acco / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 26/09/2016 / Inclui referências : f. 60-67 / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antitumoral in vivo da fração solúvel de polissacarídeos extraídos de vinho tinto (SFP) contra o carcinossarcoma Walker-256. Para isso foram utilizados ratos Wistar machos, que receberam 30 ou 60 mg/kg de SFP ou veículo por via oral durante 14 dias, ou metotrexato (MTX, controle positivo) na dose de 5 mg/kg, via intraperitoneal, a cada 5 dias, após a inoculação subcutânea de 107 células tumorais no membro pélvico direito. Grupos de ratos sem tumor receberam as mesmas doses da SFP, para avaliar seus efeitos adversos. O desenvolvimento do tumor foi acompanhado e, posteriormente, foram realizados hemograma e bioquímica plasmática, avaliação no tecido tumoral de parâmetros inflamatórios e expressão gênica. A SFP nas doses de 30 e 60 mg/kg reduziu de modo significativo tanto o peso quanto o volume tumoral. O tratamento interferiu de modo direto nos parâmetros leucocitários e inflamatórios, sendo possível observar uma imunomodulação importante, com redução da contagem relativa de monócitos e neutrófilos no sangue, e redução da atividade tumoral de NAG e MPO, provenientes destas células, respectivamente, associada à diminuição dos níveis de NO tumoral. Contudo, a contagem relativa de linfócitos sanguíneos e a dosagem de TNF-? tumoral apresentaram-se aumentadas. A expressão de genes relacionados à via apoptótica (Bax, Bcl-2, caspase-3 e p53) e à angiogênese (Vegf) no tecido tumoral não apresentou diferenças pelo tratamento, enquanto a expressão de genes da via de necroptose, como Rip1 e Rip3, elevou-se nos animais tratados com a SFP. Não foram observados efeitos adversos durante o tratamento com SFP. Sendo assim, a SFP demonstrou atividade antitumoral contra o carcinossarcoma Walker-256, com atuação direta sobre o sistema imunológico, controlando o microambiente inflamatório do tumor e estimulando a produção de TNF-?, ativando assim a via de necroptose, que induz à morte celular. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the in vivo antitumor activity of the soluble fraction of polysaccharides (SFP) from red wine against the Walker-256 carcinosarcoma. After the subcutaneous inoculation of 107 tumor cells in the right hind limb of male Wistar rats, the animals daily received 30 or 60 mg/kg SFP or vehicle, by gavage, or 5 mg/kg methotrexate (MTX, positive control) intraperitoneally, every 3 days, during 14 days. Other group of rats, without tumor, received the same doses of SFP for evaluating its adverse effects. The tumor development was accompanied and further analysis of hematology, plasma biochemistry, and tumor inflammation, histology and gene expression was performed. SFP in both doses reduced significantly the tumor volume and weight. The treatment directly interfered in blood leucocytes and inflammatory parameters. Thus a possible SFP immunomodulation was observed, evidenced by reduction in relative count of blood monocytes and neutrophils, and reduction of tumor activity of NAG and MPO, enzymes prevenient of these cells, respectively, associated with a decreased tumor NO levels. However, the blood count of relative lymphocytes and the tumor TNF-á level were increased. The expression of genes related with apoptosis (Bax, Bcl-2, caspase-3 e p53) and angiogenesis (Vegf) in tumor tissue was not different among the groups. However, the expression of Rip1 and Rip3, both genes related with necroptosis, was increased by the SFP treatment. Thus, the SFP demonstrate antitumor activity against the Walker-256 carcinosarcoma and act directly in the immune system, controlling the inflammation and stimulating the TNF-á production in the tumor microenvironment, inducing necroptosis, which cause tumor cell death.

Orientador : Prof. Dr. Guilherme Lanzi Sassaki / Co-orientador : Dr. Lauro Mera dos Santos / Co-orientadora : Profª Drª Yanna Dantas Rattmann / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/10/2014 / Inclui referências / Resumo: Ilex paraguariensis (Aquifoliaceae), conhecida popularmente como erva-mate, é uma espécie nativa da América do Sul, da qual são obtidas diversas bebidas. Esta planta tem ganhado rápida introdução no mercado internacional, na obtenção de chás ou como ingrediente de alimentos e suplementos dietéticos, devido às suas várias propriedades (antioxidante, estimulante do sistema nervoso central, hepatoprotetora, etc). No presente trabalho, foram avaliadas as atividades anti-inflamatória e antiúlcera de polissacarídeos extraídos de folhas de erva-mate. Inicialmente foi obtido um polissacarídeo por meio da extração aquosa à quente de folhas processadas, conforme o processo de beneficiamento para o chimarrão (SPI). Análises de metilação e RMN-HSQC permitiram caracterizar SPI como uma ramnogalacturonana, com uma cadeia principal formada por unidades de -D-GalpA (14)-ligadas, intercaladas por unidades de -L-Rhap, e substituída por cadeias laterais de arabinogalactanas do tipo I. SPI foi testado quanto à sua ação farmacológica contra septicemia, utilizando o modelo de ligadura e perfuração de ceco em camundongos (CLP). O tratamento com SPI nas doses de 3, 7, e 10 mg/kg reduziu significativamente a letalidade dos camundongos, em vários pontos no decorrer do período de observação, especialmente entre o período de 24 a 108 horas. Ao final da curva de letalidade (168 h), os camundongos apresentaram taxa de sobrevivência de 20%, 40% e 60% com as respectivas doses, em comparação ao grupo tratado com o veículo. SPI também afetou a infiltração de neutrófilos, diminuindo seu acumulo nos pulmões e o consequente dano causado por eles. Além disso, diminuiu significativamente os níveis teciduais de iNOS e COX-2, duas importantes enzimas relacionadas ao processo inflamatório. Sabe-se que as condições de crescimento dos vegetais (luz solar, estações, chuvas, etc), assim como o estágio de maturação das folhas podem promover alterações nos constituintes químicos das plantas. Processos realizados pós-colheita como o sapeco e torrefação realizados na erva-mate também levam a modificações estruturais destes constituintes. Assim, o potencial gastoprotetor de polissacarídeos isolados de folhas de erva-mate em diferentes estágios de crescimento, sob diferentes condições de luz solar e submetidas a diferentes processamentos também foi avaliado. Os polissacarídeos isolados por meio de extração aquosa à quente apresentaram como componentes monossacarídicos majoritários Ara, Gal, GalA, Rha e Glc e foram caracterizados como arabinogalactanas do tipo I, ligadas a ramnogalacturonas do tipo I. Análises de HSQC/PCA mostraram haver diferenças na intensidade de sinais nos espectros dos polissacarídeos, evidenciando que a porção neutra (arabinogalactana) é maior nos polissacarídeos obtidos das folhas submetidas aos processos oxidativos. Ao serem testados quanto sua atividade antiúlcera gástrica, todos os polissacarídeos inibiram significativamente lesões gástricas induzidas por etanol em ratas. No entanto, os polissacarídeos obtidos das folhas oxidadas mostraram-se mais eficientes, sendo SP12 (polissacarídeo extraído das folhas maduras cultivadas a sombra) o mais eficaz. O mecanismo de ação destes polissacarídeos ainda não foi elucidado, uma vez que estes não alteram a quantidade de muco gástrico e níveis de glutationa reduzida, dois importantes mecanismos citoprotetores contra lesões gástricas. Em paralelo aos estudos realizados com os polissacarídeos realizou-se uma análise comparativa de metabólitos secundários em diferentes espécies de Ilex. Palavras-chaves: Ilex paraguariensis, polissacarídeos, ramnogalacturonanas, arabinogalactanas, sepse, anti-inflamatória, efeito gastoprotetor. / Abstract: Ilex paraguariensis (Aquifoliaceae), popularly known as erva-mate, is a species native to South America, from which various beverages are obtained. This plant has gained rapid introduction in the international market, for tea manufacturing or as ingredient for foods and supplements, because it has many properties (e. g. antioxidant, stimulant of the central system, hepatoprotective, etc). In this study, were evaluated the anti-inflammatory and gastric protection activities of polysaccharides extracted from leaves of erva-mate. A polysaccharide was obtained by the hot aqueous extraction from chimarrão-type leaves (named SPI). Methylation analysis and NMR-HSQC allowed to characterize SPI, as a rhamnogalacturonana with a main chain of units -D-GalpA (14)-linked, intercalated by units -L-Rhap, branched by side chains of arabinogalactan type I. SPI was assayed for pharmacological action on septicemia in mice model, induced by cecal ligation and puncture (CLP). The treatment with SPI at doses of 3, 7, and 10 mg/kg significantly reduced the lethality of mice, at various points of curve during the observation period, particularly between from 24 to 108 hours. At the end of lethality curve (168 h), the mice survival rates was 20%, 40% or 60% accordingly to the doses of SPI, in comparison with the group treated with the vehicle. SPI also affected neutrophil infiltration, avoiding its accumulation in the lungs and the subsequent tissue damage. In addition, SPI significantly reduced the tissue levels of iNOS and COX-2, two important enzymes related to the inflammatory process. It is known that the cultivation conditions (i. e. sunlight, seasons, rain, etc), the maturation level of the leaves and post-harvest processes, such as blanching and roasting in mate can lead to structural modifications of the chemical constituents of plants. Thus, the potential gastroprotection of polysaccharides from I. paraguariensis, obtained from leaves at different stages of growth, under different conditions of sunlight or subjected to different manufacturing process was evaluated. The polysaccharides isolated by the hot aqueous extract showed as major components monossacarídicos Ara, Gal, GalA, Rha and Glc and were characterized as arabinogalactan type I linked to rhamnogalacturonan type I. Analysis by HSQC/PCA showed some differences in the intensity signals in the spectra of the polysaccharides, evidencing that neutral portion (arabinogalactan) is greater in the polysaccharides obtained from the leaves submitted the oxidative processes. When they were tested for their gastric antiulcer activity, all polysaccharides significantly inhibited ethanol-induced gastric lesions in rats. However polysaccharides obtained from the oxidized leaves were more efficient, and SP12 (polysaccharide extracted from cultured mature leaf shade) the more effective. The mechanism of action of these polysaccharides have not yet been elucidated, since they do not alter the amount of gastric mucus and levels of reduced glutathione, two cytoprotective mechanisms important against gastric lesions. In parallel to the studies of the polysaccharides was carried out a comparative analysis of different secondary metabolites Ilex species. Keywords: I. paraguariensis, polysaccharides, rhamnogalacturonan, arabinogalactan, sepsis, anti-inflammatory, potential gastroprotection.

Orientadora: Dra. Guilhermina Rodrigues Noleto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 26/02/2010 / Bibliografia: fls.71-79 / Resumo: O tratamento atual para Leishmanioses é feito principalmente com antimoniais pentavalentes há mais de 60 anos. Além de resistência do parasita, estes medicamentos apresentam alta toxicidade. Frente à capacidade de polissacarideos de ativar macrófagos para executar atividade microbicida, o que inclui a atividade leishmanicida, esta foi avaliada in vitro para a arabinogalactana neutra ARAGAL, obtido de Anandethera columbrina, e para polissacarídeos sulfatados obtidos de macroalgas marinhas, Go3 (heteroraminana sulfatada), Iota-Gy (galactana kappa-iota-nu-carragenana) e EHW-I (galactana iota-nu-carragenana). Os compostos Go3, Iota-Gy e EHW-I inibiram a produção de ânion superóxido na ausência e presença de PMA 1 g/mL e apresentaram atividade captadora da mesma espécie reativa de forma dose dependente, chegando, na concentração 10 g/mL a 33% de captação com o Go3, 44% com o Iota-Gy e 55% com o EHW-I. Apresentaram ainda aumento da produção de óxido nítrico alcançando a 10 g/mL aproximadamente 110% de ativação em relação ao controle negativo para Go3, 71% para Iota-Gy e 81% para EHW-I. Houve diminuição da atividade fagocítica para Go3 e EHW-I, Iota Gy não exibiu efeito para esta atividade. A morfologia foi bastante alterada por estes compostos. ARAGAL, Go3, Iota-Gy e EHWI foram então avaliados quanto a atividade leishmanicida em macrófagos peritoneais de camundongos infectados com Leishmania (Leishmania) amazonensis. O polissacarídeo ARAGAL apresentou atividade leishmanicida nas concentrações 10, 25 e 50 g/mL, inibindo 88% do crescimento da Leishmania (Leishmania) amazonensis na concentração mais baixa. O polissacarídeo Go3 apresentou atividade a partir da concentração 5 g/mL chegando a 55% de inibição em 10 g/mL. Iota-Gy iniciou sua atividade já em 2,5 g/mL e atingiu 50% de inibição em 10 g/mL. EHW-I exibiu o efeito leishmanicida mais intenso em todas as concentrações, atingindo 98% de inibição em 10 g/mL. Os resultados obtidos neste trabalho colocam as moléculas testadas em evidência para investigações futuras visando o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos contra leishmanioses. / Abstract: The current treatment against Leishmaniasis is mainly done using pentavalent antimonials for over 60 years. Beyond parasits resistance, this medications are highly toxic. Faced with the capacity of olysaccharides activating macrophages to stimulate the microbicidal activity, that includes the leishmanicidal activity, it was evaluated in vitro to the neutral arabinogalactan ARAGAL, obtained from Anandethera columbrina, and to sulfated polysaccharides obtainded from seaweeds, Go3 (sulfated heterorhamnan), Iota-Gy (galactan kappa-iota-nu-carrageenan) and EHW-I (galactan iotanu- carrageenan). The compounds Go3, Iota-Gy and EHW-I inhibited the superoxide anion production in the absence or presence of PMA 1 g/mL and presented a dose dependent scavenging activity to this reactive oxigen species, reaching 33% of scavenging activity to Go3, 44% to Iota-Gy and 55% to EHW-I at the higher concentration, 10 g/mL. They have also increased production of nitric oxide reaching 110% of activation compared to control to Go3, 71% to Iota-Gy and 71% to EHW-I. There was reduction in phagocytic activity for Go3 and EHW-I, Iota-Gy didn't show any effect in this activity. The morphology was considerably changed to these compouds. ARAGAL, Go3, Iota-Gy and EHW-I were than tested for leishmanicidal activity in murine peritoneal macrophages infected with Leishmania (Leishmania) amazonensis. ARAGAL showed leishmanicidal activity at concentrations 10, 25 and 50 g/mL, reaching 88% inhibition of Leishmania (Leishmania) amazonensis growth at the lower concentration. Go3 presented activity at 5 and 10 g/mL up to 55% inhibition. Iota-Gy started its activity in 2.5 g/mL and reached 50% inhibition at 10 g/mL. EHW-I presented the most intense leishmanicidal effect in all concentrations, reaching 98% inhibition at 10 g/mL. The results of this study puts the tested molecules in evidence for future investigations in order to develop new therapeutic agents against leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-30Bitstream added on 2014-06-13T18:09:35Z : No. of bitstreams: 1 bofo_dcs_me_sjrp_parcial.pdf: 195943 bytes, checksum: 142deef9c00408a7101024538035f426 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-02T12:36:10Z: bofo_dcs_me_sjrp_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-02T12:37:32Z : No. of bitstreams: 1 000590138_20200302.pdf: 175657 bytes, checksum: f24550c1459a68880746f63873615fb6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A levana é um polissacarídeo formado basicamente de unidades de frutose ligadas em (2 6). Este biopolímero possui diversas aplicações tanto na indústria alimentícia quanto na área da saúde. A levana é produzida pela bactéria Gram-negativa Zymomonas mobilis. Por fermentação de um meio contendo sacarose, esse microrganismo lança ao meio de cultura duas enzimas extracelulares: a sacarase extracelular e a levanasacarase. A enzima sacarase extracelular (SacC) tem uma alta atividade específica de hidrólise de sacarose e a enzima levanasacarase (SacB) é responsável tanto pela hidrólise do dissacarídeo quanto pela formação de levana. Dentre os fatores que regulam as atividades enzimáticas podemos citar o tampão utilizado (pH), a temperatura, a concentração de sacarose e a presença de íons metálicos. O presente projeto teve por objetivos determinar os melhores parâmetros para a produção do biopolímero levana e seu extrato enzimático, após fermentação do meio de cultura por Zymomonas mobilis CCT 4494. Além disso, foi caracterizado o extrato enzimático quanto à atividade de hidrólise de sacarose e de formação de levana. Os resultados obtidos mostraram que a maior produção de levana ocorreu em 96horas de fermentação, num meio contendo 200g/L de sacarose, incubado a 30°C, 200rpm e pH inicial de 6,0. Entretanto, o extrato enzimático bruto com maior atividade de sacarase foi obtido num meio com 200g/L de sacarose, 200rpm, 30°C, pH inicial de 7,0 e 6 horas de incubação. Para a caracterização deste extrato enzimático bruto, quanto a sua atividade de hidrólise de sacarose, inicialmente determinou-se o período ideal de reação com o substrato, sendo o mesmo definido como 10 minutos. Posteriormente foram determinados o pH, a temperatura e a concentração de sacarose ótimos, sendo de 4,0, 40°C e 0,15M, respectivamente. O sistema enzimático teve a maior... / The levan is a polysaccharide formed basically of units of fructose connected in (2 6). This biopolymer has many applications in both the food industry as in health. The levan is produced by Gram-negative bacteria Zymomonas mobilis. By fermentation of a medium containing sucrose, this microorganism launches to the middle of culture two enzymes extracellular: the extracellular sucrase and levansucrase. The enzyme extracellular sucrase (SacC) has a high specific activity of hydrolysis of sucrose and the enzyme levansucrase (SacB) is responsible for hydrolysis of both disaccharides as the formation of levan. Among the factors that regulate the enzymatic activities can cite the buffer used (pH), the temperature, concentration of sucrose and the presence of metal ions. This project aimed at determining the best parameters for the production of the biopolymer levan and its enzymatic extract, after fermentation of the mean of culture by Zymomonas mobilis CCT 4494. Moreover, was characterized the enzymatic extract as the activity of hydrolysis of sucrose and training of levan. The results showed that the majority production of levan occurred on 96hours of fermentation, in a medium containing 200g/L of sucrose, incubated at 30°C, 200rpm and initial pH of 6.0. Meanwhile, the crude enzymatic extract with higher activity of sucrase was achieved in a medium with 200g/L of sucrose, 200rpm, 30°C, initial pH of 7.0 and 6 hours of incubation. For the characterization of this crude enzymatic extract, as its activity in hydrolysis of sucrose, initially it was determined the ideal period of reaction with the substrate, being the period defined as 10 minutes. Later were determined the pH, the temperature and the concentration of sucrose great, being 4.0, 40°C and 0,15M respectively. The enzymatic system was more stable at pH 4.0, keeping 100% of your activity of sucrase, and pH values of 5,5 and 6,5... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-18Bitstream added on 2014-06-13T18:58:30Z : No. of bitstreams: 1 souza_rhfv_me_sjrp_parcial.pdf: 227052 bytes, checksum: 346b8df229c15977aeecc49e607866c6 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-23T17:35:44Z: souza_rhfv_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-23T17:36:19Z : No. of bitstreams: 1 000713805.pdf: 736844 bytes, checksum: 5c3db864c655673a0978e9ecb86de411 (MD5) / A quitosana e seus derivados têm se mostrado muito atrativos para a indústria de alimentos, visando principalmente a sua conservação. No presente trabalho foram sintetizados e caracterizados derivados de quitosana contendo grupos quaternários de amônio com proporções crescentes de grupos hidrofóbicos com o objetivo de investigar a atividade fungicida desses derivados contra os fungos Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus que são um problema na contaminação do amendoim e outros grãos. Os derivados foram sintetizados usando quitosana desacetilada e a reação foi realizada em duas etapas, sendo a primeira a quaternização do polímero com brometo de propiltrimetilamônio seguido da reação de aminação redutiva com dodecilaldeído. Os derivados foram caracterizados por RMN 1 H e os graus de substituição pelo grupo dodecil foram variados para melhorar a atividade antifúngica dos derivados. A atividade antifúngica da quitosana desacetilada e seus derivados foi testada variando-se a concentração dos polímeros de 0,1 a 1,0 g/L. Os resultados mostraram que a quitosana substituída com grupos propil exibiu uma baixa inibição contra o fungo Aspergillus flavus, resultado similar àquele obtido com quitosana desacetilada. Quanto aos derivados anfifílicos com conteúdo crescente de grupos dodecil, observou-se um aumento no índice de inibição com o aumento da concentração e do conteúdo hidrofóbico. A partir de 0,5 g/L os derivados anfifílicos contendo de 10% a 30% de grupos dodecil e 83% de grupos quaternários inibiram completamente o crescimento do fungo. Resultados similares foram obtidos no estudo de inibição do fungo Aspergillus parasiticus / Chitosan and its derivatives have been shown very attractive for the food industry, mainly targeting its conservation. In this study were synthesized and characterized chitosan derivatives containing quaternary ammonium groups with increasing proportions of hydrophobic groups in order to investigate the antifungal activity of these derivatives against the fungi Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus that are a problem in the contamination of peanuts and other grains. The derivatives were synthesized using deacetylated chitosan and the reaction was carried out in two steps, first the quaternization of the polymer with propyltrimethylammonium bromide followed by reductive amination reaction with dodecylaldehyde. The derivatives were characterized by 1 HNMR and the degree of substitution by the group dodecyl was varied to enhance the antifungal activity of the derivatives. The antifungal activity of deacetylated chitosan and their derivatives was tested by varying the concentration of the polymers 0.1 to 1.0 g/L. The results showed that chitosan substituted with propyl groups exhibited a low inhibition against the fungus Aspergillus flavus, a result similar to that obtained with chitosan deacetylated. Regarding the amphiphilic derivatives with increasing content of dodecyl groups, we observed an increase in the rate of inhibition with increased concentration and hydrophobic content. Since 0.5 g/L amphiphilic derivatives containing from 10% to 30% dodecyl groups and 83% of quaternary groups inhibited completely growth of the fungus. Similar results were obtained in the study of inhibition of Aspergillus parasiticus